Determinacin de 2,3,7,8 - Substitituted dibenzo-p -dioxinas y

dibenzofuranos - dioxina -como los bifenilos policlorados en muestras

ambientales por Cromatografa de Gases / Espectrometra de Masas de Alta
Resolucin
Abstract: Se evalu un mtodo para la determinacin de los 17 tipos de dibenzo-pdioxinas y dibenzofuranos policlorados 2,3,7,8-substitituted (PCDD / F) y 12 bifenilos
policlorados similares a las dioxinas (DL-PCB) en muestras ambientales: resumen
espectrometra de masas con cromatografa de gases-dilucin isotpica / alta resolucin
(GC / HRMS). Los extractos de muestras se limpiaron sucesivamente con lotes de gel de
slice acidificado, columna de gel de slice de mltiples capas y cromatografa en columna
de exclusin molecular. columna de Florisil se utiliza para separar los PCB de PCDD / F.
La precisin y la recuperacin de todo el procedimiento se evaluaron mediante anlisis
repetidos (n = 4) de las soluciones patrn de PCDD / PCDF y PCB, con una desviacin
estndar relativa (RSD) por debajo de 8.9% y 11% para PCDD / PCDF y PCB,
respectivamente, y con las recuperaciones en el intervalo de 60% -105%. Los lmites de
deteccin de PCDD / PCDF y PCB similares a las dioxinas eran 0,1-0,8
pg g-1 y 0,05-0,6 pg g-1, respectivamente. PCDD / Fs y DL-PCB se analizaron con xito
en muestras ambientales tales como
sedimentos, lodo, tierra y ceniza volante, y luego se calcul sus equivalentes txicos.
Palabras clave: 2,3,7,8-Substitituted dibenzo-p-dioxinas y dibenzofuranos policlorados
(PCDD / F); bifenilos policlorados similares a las dioxinas (PCB); La cromatografa de
gases / espectrometra de masas de alta resolucin (GC / HRMS); columna de Florisil;
muestra ambiental

Introduccin
PCDD / PCDF y PCB son contaminantes orgnicos persistentes ubicuos. PCDD /
Fs. se genera principalmente por los procesos de incineracin y subproductos de
los productos qumicos. Los PCB son productos industriales y se han tomado
medidas reglamentarias sustanciales para prohibir su produccin y uso de lmite
en los pases desarrollados del este desde los aos 1970. Las principales fuentes
de contaminacin de PCB en el medio ambiente se ha sugerido que los PCB
comerciales, las fugas de residuos que contengan PCB, y las emisiones de los
incineradores. PCDD / PCDF y PCB con el tiempo pueden acumularse en la
cadena alimentaria a travs del transporte atmosfrico, la deposicin seca /
hmeda, el transporte de agua o sedimentacin, etc., lo que supone un serio
riesgo en el ecosistema y la salud humana.
Entre los PCB, 12 congneres son arbitrados como los PCB similares a las
dioxinas (DL -PCB, OMS -12 PCB), incluyendo 4 nonortho PCB (77, 81, 126 y 169)
y 8 PCB mono - orto (105,
114, 118, 123, 156, 157, 167 y 189). Sus propiedades qumicas y los niveles de
toxicidad son similares a los de PCDD / F, y la Organizacin Mundial de la Salud

(OMS) sugiere la consideracin de sus equivalentes de toxicidad (EQT). La

pesadez de PCDD / PCDF y PCB al EQT total es diferente, y los PCB puede
contribuir al 3 % y el 80 % [2]. En general, los PCDD / PCDF y PCB se analizaron
por separado. PCDD / F , PCB de alto nivel ( ng g -1) y DL -PCB a bajo nivel ( pg g
- 1 ) se determinaron , respectivamente, con isotpica GC dilution- / HRMS [ 3 ] ,
GC / MS o GC / ECD [ 4 , 5] y con GC / HRMS .
Al parecer, su anlisis por separado en el pretratamiento dar lugar a desperdicio
de disolvente, el tiempo, y la muestra [6], y debe ser realizado esfuerzos para
establecer un mtodo de anlisis simultneo. Se aplic un procedimiento para
hacerlo, lo que incluye la columna de varias capas de gel de slice, almina y la
columna de carbn activo [7]. Este mtodo es adecuado para las muestras
limpias, sin embargo, es mucho tiempo, y que el uso de tolueno tiene un efecto
adverso sobre la salud humana. Equipos de limpieza automatizada puede evitar
estas desventajas, sin embargo, es caro para la mayora de los laboratorios.
Haciendo referencia a la EPA1613 para el anlisis de PCDD / Fs. [3] y
EPA1668 para el anlisis de DL-PCB [8], y modificando el mtodo de anlisis de
laboratorio de PCDD / Fs. [9], se desarroll un mtodo para el anlisis simultneo
de estos compuestos. Lote acidificado de slice gel, columna de gel de slice de
mltiples capas y la columna de cromatografa de permeacin en gel (GPC) se
aplicaron para limpiar las muestras, y la columna de Florisil se utilizan para
separar PCDD / F a partir de los PCB. 17 tipos de 2, 3, 7,8-sustituidos PCDD / Fs.
y 12 tipos de DL-PCB en el medio ambiente
Muestras se determinaron con isotpica dilucin-GC / HRMS, y luego se calcul
su EQT. Se espera que sea til para la evaluacin cientfica de la contaminacin
del medio ambiente y para la investigacin sobre las fuentes de contaminacin y
su destino.
2. Experimental
2.1 de instrumentos y reactivos
Traza GC 2000 (Thermo. Electron. EE.UU.), HRMS (Thermo Finnigan MAT 95 XP,
Alemania), CP-Sil 8cb-MS columna de slice capilar (Varian, EE.UU.), extractor
Soxhlet, concentrador de N2 y el evaporador rotatorio fusionado (Heidolph,
Alemania ) fueron los instrumentos utilizados en los experimentos.
Diclorometano, hexano, tolueno y n-tetra decano fueron todos adquiridos de Merck
(Alemania). Gel de slice y lana de vidrio fueron de Merck (Alemania), mientras
que los granos Bio-SX-3 fueron de Bio-Rad Laboratorios (Richmond, CA, EE.UU.),
y Florisil era de Fluka (EE.UU.).
Todas las soluciones patrn de dioxinas fueron adquiridos de Cambridge istopos
Laboratorio Inc. (EE.UU.), como 13C12-etiquetados PCDD / Fs. (EDF-8999), las
normas de reciclaje (EDF-5999), estndares de calibracin CS1-CS5 (EDF-9999),
ventana de retencin de GC tiempo de solucin de definir, ismero estndar de
prueba de especificidad, y la norma precisa y recuperacin (EDF-7999).
Todas las soluciones patrn de PCB fueron adquiridos de Wellington Laboratorios
Inc. (Canad), incluyendo la solucin patrn de DL-PCB (WP-STK), etiquetados

13C12-DL-PCB (WP-LCS), incluyendo los estndares de recuperacin PCB70,

111, 138 y 170 (WP-ISS), estndares de calibracin CS1-CS5 (WP-CVS).
2.2 Mtodos
2.2.1 Pretratamiento
Las muestras se secaron en un desecador, y despus se extrajo usando un
aparato de Soxhlet con tolueno durante 24 horas despus de haber sido disparado
con una mezcla de estndares internos marcados con 13C12 de PCDD / Fs. y DLPCB. Los extractos se concentraron casi hasta sequedad con un evaporador
rotatorio.
Extracto de limpieza se llev a cabo sucesivamente con los siguientes pasos: (1)
el extracto de la muestra fue de pre-limpiado con 20 g de gel de H2SO4 / slice
40% en 120 ml de hexano, con de ser agitada durante 2 horas. Todo el contenido
del matraz se filtr a travs de un embudo con lana de vidrio cubierto con
Na2SO4. Cien mililitros de hexano se utiliz para enjuagar el matraz y la
suspensin, y luego se evapor. (2) El filtrado se limpi adicionalmente en una
columna de gel de slice de mltiples capas, y se eluy sucesivamente con 20 ml
de hexano (a ser desechados) y 100 ml 3% de diclorometano / hexano. (3) El
extracto se carga entonces en una columna de GPC que contiene 30 g de Bioperlas SX-3, y se eluy sucesivamente con 70 ml 1: 1 de diclorometano / hexano
(a ser desechados), y 50 ml 1: 1 de diclorometano / hexano. (4) Finalmente, el
extracto se carg en una columna de Florisil (1 g), y se eluy sucesivamente con
15 ml 5:95 diclorometano / hexano (DL-PCB fraccin), y 50 ml 1: 1 de
diclorometano / hexano (PCDD / fraccin fs).
PCBs fraccin y la fraccin de PCDD / Fs se concentraron, respectivamente, con
evaporador rotatorio, que se transfiri a un vial de lgrima 1,5-ml, despus se
concentr an ms con N2, y finalmente se aadieron los estndares de
recuperacin correspondientes. Antes de la determinacin utilizando HRMS, los
extractos se analizaron mediante GC / ECD para afirmar si las impurezas fondo se
eliminaron de manera eficiente con el procedimiento anterior. PCB y PCDD / F se
determinaron con GC / HRMS, respectivamente.
2.2.2 Condiciones de operacin
Las siguientes son las condiciones de funcionamiento de GC: columna de
cromatografa, CP-sil 8cb-MS (60 mx 0,25 mm de dimetro interno, 0,25 m);
temperatura de inyeccin, 250 ; lnea de transferencia
Temperatura, 250 ; modo de inyeccin, el modo sin divisin; portador
Gas, helio; un caudal de 0,8 ml min-1. Programa de temperatura del horno del GC
para el anlisis de PCDD / F fue inicialmente a 90 (se mantuvo durante 1 min),
y luego aument a 76 min-1 hasta 220 (celebrada durante 7 minutos), y
luego aument a 1,2 min-1 hasta 275 , y finalmente aument a 1,7 min-1
hasta 301 . Programa de temperatura para el anlisis DL-PCB fue: inicialmente
a 90 (que tuvo lugar durante 2 min), luego aument a 76,5 min-1 hasta 220

 (que tuvo lugar durante 10 minutos), y, finalmente, se increment en un 1,2

min-1 hasta 263 .
Las siguientes son las condiciones de funcionamiento MS: fuente de iones, de
ionizacin de impacto elctrica, positivas; la energa elctrica, 55 eV; temperatura
de la fuente, 250 ; modo de deteccin, de iones mltiples
Detector; voltaje de aceleracin, 5000 V; una resolucin de masa de 10000,
puesto a punto por FC43.
3. Resultados y discusin
3.1 Extraccin de interferencias de alto peso molecular con GPC
Interferencias de alto peso molecular estn presentes en el suelo, lodos y
sedimentos, y contaminarn serio instrumentos si no se eliminan antes. GPC se
aplican generalmente para eliminar estas interferencias. Cuando extracto de la
muestra se carg en la columna de GPC (que contiene 30 g de Bio- perlas SX- 3) ,
se encontr que las interferencias de alto peso molecular se pueden eliminar
eficazmente mediante la elucin con 70 ml 1: 1 de diclorometano / hexano, y los
PCB y PCDD / Fs se pueden recuperar a fondo en la fraccin ms tarde de 50 ml
1: 1 de diclorometano / hexano. GPC limpieza No es necesario para las cenizas
volantes y muestras atmosfricas debido al bajo nivel de inferencias de alto peso
molecular.
3.2 La separacin de PCB de PCDD / F con una columna de Florisil
El comportamiento de retencin de los PCB en la columna de cromatografa es
similar a la de PCDD / PCDF y algunos de estos compuestos se mutuamente
interferir con el mismo tiempo de retencin y la masa, a pesar de que se
determinan con GC / HRMS. Por ejemplo, PCB 169 se coeluyen con 1, 2, 3, 7,8PeCDD. Por lo tanto, es importante para separar los PCB de PCDD / F durante el
pretratamiento. Columna de almina no es muy eficaz para trabajar segn se
requiera, ya que gran porcentaje de los PCB mono-orto se encuentran para ser en
su primera fraccin de 2:98 diclorometano / hexano, y mucho porcentaje de PCBs
nonortho y todo PCDD / Fs se recuperan en el segunda fraccin de 1: 1 de
diclorometano / hexano [7]. Aunque los PCB nonortho y todos los PCDD / F
pueden ser separados usando una columna de carbn activo, es mucho tiempo y
adversa a la salud humana debido al uso de tolueno [7]. En este estudio, se
encontr una pequea columna que contiene 1 g de Florisil para ser eficaz a los
PCB completamente separadas de PCDD / F. Se encontraron DL-PCB que se
eluy con 15 ml de 5:95 diclorometano / hexano, mientras que PCDD / F se
eluyeron con
50 ml de 1: 1 de diclorometano / hexano. De la prueba de elucin con 5:95
diclorometano / hexano (mostrado en la Tabla 1), se puede concluir que los
compuestos clorados bajas eluyen antes que los compuestos clorados alta, es
decir, los PCB eluyen antes de PCDD / F con el mismo grado de cloracin, y que
mono-PCB eluyen antes que nonPCBs. En comparacin con el mtodo de
columna de almina seguido de columna de carbn activo, la columna Florisil

ofrece algunas ventajas notables incluyendo procedimiento ms simple, ms

pequea cantidad de disolventes y mayores recuperaciones, etc.

3.3 precisa y recuperacin

El funcionamiento del mtodo se evalu mediante el anlisis de cuatro veces de la
solucin patrn mixto, incluidos los PCB nativas y 13C12 -etiquetados y PCDD / F.
Todo el procedimiento de procesamiento de muestras se llev a cabo incluyendo
la extraccin y limpieza. Los resultados mostraron que se encontraron las
recuperaciones de PCDD / PCDF y PCB para estar en el rango de 60 % -104 % y
81 % -105 %, respectivamente, y la desviacin estndar relativa (RSD) estaban en
el rango de 1,7 % - 8,4 % y el 5,2 % -19 %, respectivamente. Las concentraciones
de los nativos de PCDD / PCDF y PCB que fueron observados podran ser
consistentes con las concentraciones aadidas con DSR en el intervalo de 2,0 %
-8,9% y 1,9 % -11 %, respectivamente (muestran en la Tabla 1).
3.4 Mtodo lmite en blanco y deteccin
Mtodo en blanco y detectar lmite se evaluaron mediante anlisis por triplicado de
los PCB 13C12-etiquetados y PCDD / F, se llev a cabo todo el procedimiento de
procesamiento de muestras. Se podra concluir que no haba PCDD / Fs., sin
embargo, una pequea cantidad detectable de PCB77, 105 y 118 con la pieza en
bruto promedio de 0,10,
0,13 y 0,60 pg l-1 podra ser detectada, respectivamente (Final
Volumen = 20 l). Se encontr que los lmites de deteccin de 0,08 pg g-1 para
PCB77, 0,1 pg g-1 para PCB105, 0,6 pg g-1 para PCB118,
0,05 pg g-1 para otros PCB, y 0,1-0,8 pg g-1 para PCDD / F, basado en una
muestra de 10 g. La pieza en bruto procedimiento se sugiri a ser de la
contaminacin de gel de slice y florisil de la atmsfera de laboratorio, debido a su
alta capacidad de adsorcin. Como era de esperar, la pieza en bruto se reducira
pre-extraccin de estos sorbentes y por pre-lavado de la columna de
cromatografa de empaquetado.
3.5 PCDD / Fs y DL-PCB anlisis en muestras ambientales
La figura 1 cromatograma de iones totales de PCB similares a las dioxinas en las
cenizas volantes
PCDD / PCDF y DL -PCB se analizaron en el sedimento, lodo, suelo y vuelan
muestras de cenizas que aplican el mtodo anterior, con las recuperaciones en el
intervalo de 73 % -120 % y 76 % -126 %, respectivamente. Como se muestra en la

Figura 1, el aparato de cromatografa inica total de DL -PCB obtenidos con GC /

HRMS era excelente, incluyendo la lnea de base, los picos y la selectividad, que
era muy til para la cuantificacin exacta. Las concentraciones y EQT fueron ms
altos, lo que indica que las muestras se contaminaron en cierto grado (que se
muestra en la Tabla 1). Se encontr que la contribucin de DL -PCB a EQT total de
estar en el intervalo de 4 % -28 % , con la mayor contribucin de la muestra de
suspensin y la contribucin ms pequea de la muestra de ceniza volante , que
est de acuerdo con la funcin de las fuentes de compuestos diana . En resumen,
se estableci un procedimiento general para determinar cuantitativamente PCDD /
Fs. y DL -PCB en muestras ambientales con medidas de limpieza eficaces,
mayores recuperaciones y procedimientos ms sencillos.