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B005-212 / B005-204

AutoDELFIA
Neonatal IRT kit
Fluoroimunoensaio tempo-resolvido

Instrues de uso. Reagentes para 1152 (384) ensaios

Produto fabricado pela:

Wallac Oy,
Mustionkatu 6, FI-20750 Turku, Finlndia

PARA USO DIAGNSTICO IN VITRO

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SMBOLOS
In vitro diagnostic medical device / Dispositif mdical de diagnostic in vitro /
In-Vitro-Diagnostikum / Producto sanitario para diagnstico in vitro /
Dispositivo medico-diagnostico in vitro / Para uso diagnstico in vitro /
Medicinteknisk produkt fr in vitro-diagnostik / Medicinsk udstyr til in vitrodiagnostik
Batch code / Code du lot / Chargenbezeichnung / Cdigo de lote / Codice
del lotto / Nmero do lote / Lot nummer / Lotnummer
Packing number / Numro demballage / Packnummer / Nmero de envase
/ Numero confezioni / Nmero de embalagem / Frpackningsnummer /
Emballagenummer
Catalog number / Rfrence du catalogue / Bestellnummer / Nmero de
catlogo / Numero di catalogo / Cdigo / Katalognummer / Katalognummer
Use by / Utiliser jusquau / Verwendbar bis / Fecha de caducidad / Utilizzare
entro / Data limite de utilizao / Anvnd fre / Holdbar til
Temperature limitation / Limites de temprature / Temperaturbegrenzung /
Limite de temperatura / Limiti di temperatura / Limite de temperatura /
Temperaturbegrnsning / Temperaturbegrnsning
Contains sufficient for <n> tests / Contenu suffisant pour n tests / Inhalt
ausreichend fr <n> Prfungen / Contenido suficiente para <n> ensayos /
Contenuto sufficiente per n saggi / Contedo suficiente para <n> testes /
Rcker till n antal tester / Indeholder tilstrkkeligt til n test
Consult instructions for use / Consulter les instructions d'utilisation /
Gebrauchsanweisung beachten / Consulte las instrucciones de uso /
Consultare le istruzioni per l'uso / Consultar Instrues de uso / Se
bruksanvisningen / Se brugsanvisning
Manufacturer / Fabricant / Hersteller / Fabricante / Fabbricante / Fabricado
por / Tillverkare / Producent
This way up / Haut / Diese Seite oben / Este lado arriba / Questo lato
in alto / Este lado para cima / Denna sida upp / Denne side op
Recyclable / Recyclable / Recyclebar / Reciclable / Riciclabile / Reciclvel /
tervinningsbart / Genanvendeligt

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AutoDELFIA Neonatal IRT kit

FINALIDADE
Este kit destina-se determinao quantitativa de tripsina(ognio) imunorreativa(o) (IRT)
humana(o) em amostras de sangue secas em papel filtro, como um auxiliar na triagem de
fibrose cstica em recm-nascidos utilizando o sistema automtico de imunoensaio 1235
AutoDELFIA.

RESUMO E EXPLICAO DO ENSAIO

A fibrose cstica (FC) a disfuno gentica recessiva mais comum encontrada em
caucasianos com uma incidncia de 1 em 2500 nascimentos. Os principais sintomas
clnicos caracterizam-se por anomalias funcionais no epitlio das vias areas, no
pncreas excrino, no trato gastrintestinal e no canal secretor da glndula sudorpara,
levando insuficincia pancretica e pulmonar. Em 1989, o gene responsvel pela FC foi
identificado por meio da clonagem posicional. O produto desse gene imperfeito foi
chamado de CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator, Regulador
transmembrana da fibrose cstica) (1,2). O gene CFTR composto de 27 xons,
ocupando 250 kb do brao longo do cromossomo 7, e codifica uma protena de 1480
aminocidos associada membrana. O CFTR funciona como um canal seletivo de Cl- ion, que ativado pela fosforilao mediada em A de quinase de protena e pela ligao
da ATP. A mutao mais comum que causa a FC uma excluso dos trs pares de
bases resultando na perda de um resduo de fenilalanina na posio 508 (F508) (2,3).
H uma diferena na freqncia de F508 dependendo da populao. A freqncia de
cerca de 50% no sul da Europa, cerca de 90% em grande parte do norte da Europa
Ocidental e cerca de 70% na Amrica do Norte (4). H mais de 1000 mutaes
identificadas no gene CFTR. O diagnstico da FC sugerido pelas manifestaes de
infeco sinopulmonar crnica e insuficincia pancretica excrina. O diagnstico deve
ser sempre confirmado por um teste do suor (5).
Nem sempre a FC imediatamente identificada em bebs e crianas e foram
documentados atrasos considerveis no diagnstico aps o surgimento dos sintomas.
A identificao do aumento nos nveis de IRT no sangue dos bebs com FC tem tornado
possvel a triagem da FC neonatal em larga escala (6,7,8,9,10,11). O tripsinognio um
dos principais componentes dos produtos secretores do pncreas humano, o que torna
seu nvel no sangue um indicador especfico da funo pancretica. Das enzimas
pancreticas, a tripsina a nica produzida exclusivamente pelo pncreas. As clulas
acinares pancreticas produzem as duas principais isoenzimas do tripsinognio
enzimaticamente inativo (MW ~ 24000), que so ativadas para tripsina na clivagem de um
hexapeptdeo do N-terminal. A forma predominante no sangue o tripsinognio (apenas
formas predominantes so medidas pelo kit AutoDELFIA Neonatal IRT). A tripsina ativa
est ligada aos inibidores 1-antitripsina, 2-macroglobulina e inter--tripsina (12).
O aumento de IRT e de outras enzimas pancreticas no sangue de recm-nascidos com
FC deve-se provavelmente ao bloqueio das secrees canalculas no pncreas, pois as
clulas acinares parecem produzir uma quantidade normal de zimognio. H tambm um
declnio relacionado idade nos nveis de IRT em crianas com FC. Supostamente, isso

DELFIA e AutoDELFIA so marcas registradas da PerkinElmer, Inc.

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ocorre devido atrofia do cino e sua substituio por tecido fibroso resultando em
disfuno pancretica (13).
Lecoq e outros (14) sugeriram que as concentraes neonatais de IRT so, em parte,
determinadas geneticamente. H uma grande variao nos nveis de IRT no nascimento
em pacientes com FC que parece estar relacionada ao gentipo e ao fentipo clnico.
Castellani e outros (15) demonstraram que portadores identificados por meio da triagem
de recm-nascidos tm de fato um heterozigoto composto, o qual pode predispor esses
bebs aos sintomas mais amenos da FC.
J h evidncias de que o tratamento precoce pode ser importante na determinao de
resultados clnicos posteriores em crianas com fibrose cstica. Estudos recentes
provaram que um diagnstico precoce por meio de triagem neonatal tem benefcios
nutricionais demonstrados pelo melhor crescimento e, portanto, oferece a oportunidade de
evitar a desnutrio em bebs com FC (8,16,17,18,19,20). A deteco precoce da FC
pode reduzir o risco de problemas no crescimento (21), deficincia de zinco (22),
deficincia de vitamina E relacionada grave anemia hemoltica (23), desnutrio
causada pela m-absoro do cido linoleico (24) e infeces respiratrias (25,26).

PRINCPIOS DO ENSAIO
O ensaio AutoDELFIA Neonatal IRT um fluoroimunoensaio de dois stios em fase slida
com base na tcnica direta de sanduche, na qual dois anticorpos monoclonais (derivados
de camundongos) so dirigidos contra dois determinantes antignicos separados na
molcula de IRT. Calibradores, controles e amostras do teste contendo IRT reagem
simultaneamente com anticorpos monoclonais imobilizados dirigidos a um stio especfico
antignico na molcula de IRT e anticorpos monoclonais marcados com eurpio (dirigidos
com uma posio antignica diferente) em soluo tampo do ensaio. A soluo tampo
do ensaio elui IRT das manchas de sangue seco nos discos de papel filtro. O ensaio
completo exige apenas uma etapa de incubao.
A soluo intensificadora dissocia os ons de eurpio do anticorpo marcado e em seguida
formam quelatos altamente fluorescentes com componentes da soluo intensificadora.
A fluorescncia em cada poo medida. A fluorescncia de cada amostra proporcional
concentrao de IRT na amostra (27,28).

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Molcula
de IRT
Incubao

IgG anti-IRT
em fase slida

IgG anti-IRT
marcado
com eurpio

Soluo
intensificadora
Medio da
fluorescncia

CONTEDO DO KIT
Os valores entre colchetes [ ] referem-se ao kit de ensaio 384.
Cada kit AutoDELFIA Neonatal IRT contm reagentes para 1152 ensaios [384 ensaios].
A data de validade do kit fechado est especificada na etiqueta externa. Conserve a uma
temperatura entre +2 e +8 C.
Uma vez aberto o kit, seus componentes permanecero estveis por at duas semanas
se forem usados conforme descrito na seo "PROCEDIMENTO DE ENSAIO".

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Reagentes
Componente

Quantidade

Prazo de estocagem e
conservao

Neonatal IRT Calibrators

(Calibradores de Neonatal IRT)
(valores aprox.)

8 [4] cartes de papel

filtro (Whatman,
n 903) contendo 1
conjunto de manchas de
sangue seco cada

Conserve na embalagem
original, em ambiente
refrigerado e protegido
contra umidade e
luminosidade. Estvel a
uma temperatura entre +2 e
+8 C at a data de validade
especificada na etiqueta.

A
B
C
D
E
F

0
25
50
100
250
500

ng/mL sangue
ng/mL sangue
ng/mL sangue
ng/mL sangue
ng/mL sangue
ng/mL sangue

Neonatal IRT Controls

(Controles de Neonatal IRT)
(valores aprox.)
C1
C2
C3

30 ng/mL sangue
70 ng/mL sangue
110 ng/mL sangue

As concentraes exatas de IRT esto especificadas

no certificado de controle de qualidade do lote
especfico incluso no kit.
6 [3] cartes de papel
filtro (Whatman,
n 903) contendo 2
conjuntos de manchas
de sangue seco cada

Conserve na embalagem
original, em ambiente
refrigerado e protegido
contra umidade e
luminosidade. Estvel a
uma temperatura entre +2 e
+8 C at a data de validade
especificada na etiqueta.

Os valores dos controles do kit dosasos pelo

fabricante esto especificados no certificado de
qualidade do lote especfico incluso no kit. Cada
laboratrio deve estabelecer sua prpria mdia e faixa
aceitvel.

Os calibradores e controles foram preparados a partir de derivado de sangue humano

com um valor de hematcrito de 50 % e calibrados usando mtodos gravimtricos.

Anti-IRT-Eu tracer
stock solution
(Soluo estoque de traador
anti-IRT-Eu) (~50 g/mL)
(monoclonal de camundongo)

6 frascos, 2.4 mL cada

[4 frascos, 2.4 mL cada]

Temperatura entre +2 e
+8 C at a data de validade
especificada na etiqueta do
frasco.

O traador est em soluo salina tamponada (pH 7.8) de Tris-HCl, contendo albumina
de soro bovina, lgG de camundongo, e < 0.1% de azida de sdio como conservante.

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IRT Assay Buffer

(Tampo de ensaio de IRT)

3 frascos, 120 mL cada

[2 frascos,
120 mL cada]

Temperatura entre +2 e
+8 C at a data de validade
especificada na etiqueta do
frasco.

Soluo salina tamponada (pH 7.8) de Tris-HCl, pronta para uso, contendo albumina de
soro bovina, globulina bovina, Tween 40, polietilenoglicol 6000, um corante vermelho
inerte, e < 0.1% de azida de sdio como conservante.

Anti-IRT Microtitration Strips.

(Tiras de microtitulao de antiIRT.)
8 x 12 poos revestidos com
anticorpos em reao com um
stio especfico na molcula de
IRT (monoclonal de
camundongo).

12 placas
[4 placas]

+2+8 C at a data de
validade especificada na
etiqueta.

Barcode labels for

the reagent cassette
(Etiquetas de cdigo de barras
para o cassete de reagente)

6 peas

Observao: os cdigos de
barras so especficos para
o lote.

Extra barcode labels

for the plate
(Etiquetas de cdigo de barras
adicionais para a placa)

3 peas

Observao: os cdigos de
barras so especficos para
o lote.

Lot specific
quality control certificate
(Certificado de controle de
qualidade especfico do lote)

1 pea

MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS COM O KIT

Este kit AutoDELFIA Neonatal IRT deve ser utilizado com o sistema automtico de
imunoensaio AutoDELFIA 1235. Esse sistema requer os seguintes itens, disponveis na
Wallac Oy, na PerkinElmer, Inc. ou em seus distribuidores.
1.
2.
3.
4.

Wash Concentrate (Concentrado para lavagem) (n de prod. B117-100)

Enhancement Solution (Soluo intensificadora) (n de prod. B118-100)
Vasos de diluio para diluir o reagente (n de prod. 1235-411)
Ponteiras (n de prod. 1235-402)

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5. Perfurador automtico - Wallac DBS Puncher (n de prod. 1296-071), Wallac

MultiPuncher 1 (n de prod. 1296-081) ou Wallac AutoPuncher 2 (n de prod.
1296-091), ou um instrumento perfurante manual para picotar discos de papel filtro
com um dimetro de aproximadamente 3.2 mm (1/8 polegada)
Alm do sistema automtico de imunoensaio AutoDELFIA, so necessrios os seguintes
materiais:
-

gua deionizada
cartes de amostra com uso de um papel filtro aprovado pelo FDA

COLETA E MANUSEIO DE AMOSTRAS

As amostras de sangue devem ser obtidas diretamente do calcanhar para o papel filtro.
Amostras lipmicas (triglicerdeos 5000 mg/L) e ictricas (bilirrubina 30 mg/dL) no
interferem no ensaio.
Se a amostra no for aplicada diretamente no papel filtro (que no o mtodo escolhido),
no use tubos ou vasos capilares com citrato ou EDTA para coletar o sangue, pois esses
reagentes de anticoagulao afetam o ensaio quelando o eurpio.
Os programas de triagem neonatal diferem entre si quanto ao tipo de amostra necessrio.
Nos Estados Unidos, a recomendao uma mancha de sangue, com aproximadamente
12.7 mm ( polegada) de dimetro, coletada no calcanhar e aplicada em papel filtro. O
sangue do calcanhar de um recm-nascido normalmente coletado entre 2 a 6 dias aps
o nascimento, mas em alguns programas de triagem o tempo e o nmero de amostras
pode ser diferente. Consulte as normas locais para obter o tempo e a triagem de coleta de
amostras. necessrio que o dispositivo de coleta da amostra esteja de acordo com os
padres nacionais. Um mtodo baseado em amostras de sangue seco requer que a
coleta, o manuseio e o transporte das amostras sejam feitos de forma cuidadosa. A
tcnica de coleta est descrita em detalhes no documento LA4-A5 do CLSI (29). Estes
so seus pontos principais:
-

Limpe a pele com algodo embebido em lcool e deixe secar.

Puncione o calcanhar da criana utilizando uma lanceta esterilizada ou algum

instrumento perfurante que colete sangue a uma profundidade de 1.0 a 2.0 mm. Em
crianas pequenas, uma perfurao que ultrapasse 2.0 mm poder resultar em danos
nos ossos.

Descarte a primeira gota de sangue. Encoste o papel filtro cuidadosamente sobre

uma gota grande de sangue e, de uma s vez, faa com que uma quantidade
suficiente de sangue molhe e preencha completamente o crculo desenhado no papelfiltro. Examine os dois lados do papel filtro para certificar-se de que o sangue
penetrou e saturou o papel. Pressionar ou comprimir demais o local perfurado pode
causar hemlise da amostra ou mistur-la com os fluidos dos tecidos. No deixe cair
gotas sucessivas de sangue no crculo de coleta (isto causa saturao).

1
2

MultiPuncher uma marca comercial da PerkinElmer, Inc.

AutoPuncher uma marca comercial da PerkinElmer, Inc.

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Deixe a amostra de sangue secar em posio horizontal por pelo menos 3 horas
temperatura ambiente (+18 C a +25 C), sem luz solar direta. No aquea nem
empilhe as amostras durante o processo de secagem.

Verifique se as informaes necessrias no carto de coleta da amostra esto

completas. O mnimo de informaes prvias necessrias sobre o dispositivo de
coleta incluem:
-

sobrenome (e nome, se disponvel), sexo, data de nascimento (opcional: hora do

nascimento), idade e peso da criana ao nascer; (indicar se < 24 h) e nmero de
identificao do paciente
nome e sobrenome da me
data de coleta da amostra (opcional: hora da coleta)
nome e endereo de quem enviou (opcional: local de nascimento)
nome e telefone do mdico (plano de sade)
nome e endereo do programa de triagem neonatal
cada carto deve ter um nmero de srie e uma data de validade

Antes que as amostras sejam colocadas em um recipiente para o transporte, as

manchas de sangue seco nos cartes de coleta devem ser separadas por uma
barreira fsica ou giradas em 180, para no encostar as manchas de sangue seco
acima e abaixo. As manchas de sangue tambm podem ser protegidas por uma
cobertura dobrvel ou pela colocao de papel transparente entre as amostras.

Siga as regulamentaes locais de postagem e transporte para embalar e transportar

a amostra. As amostras no devem ser colocadas em recipientes hermeticamente
fechados (por exemplo, embalagens plsticas ou metlicas). Se necessrio, inclua
embalagens dessecantes em nmero suficiente. A umidade prejudicial amostra de
sangue seco.

Transporte ou envie a amostra pelo correio para o laboratrio at 24 horas aps a

coleta.

Alguns laboratrios de anlises clnicas podem solicitar mais informaes no carto. Por
exemplo, se a criana nasceu prematura ou atrasada e, neste caso, em que grau isso
ocorreu; se ela era gmea ou no; informaes sobre alimentao e possveis antibiticos
caso tenha sido realizada uma transfuso de sangue. Consulte as regulamentaes locais
e as polticas institucionais sobre falhas no fornecimento das informaes mnimas
necessrias no dispositivo de coleta de amostras.
Amostras armazenadas em temperatura ambiente devem ser analisadas em relao a
IRT no mximo duas semanas aps a coleta, pois os nveis de IRT tm uma reduo de 6
a 9% por semana. Para armazenamento prolongado, coloque as amostras em sacos
plsticos e guarde-as congeladas. (30,31) Foram relatadas variaes sazonais nos nveis
de IRT (32). A causa pode ser, em parte, devido instabilidade do IRT durante o
transporte e o armazenamento. preciso considerar o estabelecimento e a modificao
das concentraes de corte com base na variao sazonal. Tambm possvel escolher
valores de corte baixos o suficiente para evitar falsos negativos nos meses de vero,
embora isso possa levar a um aumento dos falsos positivos durante os meses de inverno.
Procedimentos adequados de transporte e teste aps a coleta serviro para diminuir essa
variao.

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CUIDADOS E PRECAUES
Para uso diagnstico in vitro.
Este kit deve ser usado somente por pessoas treinadas.
Este kit contm reagentes, controles e calibradores do kit fabricados com componentes de
sangue humano. O sangue humano foi testado mediante a utilizao de mtodos
aprovados pelo FDA ou equivalentes e apresentou resultado negativo para antgeno de
superfcie da hepatite B, anticorpos anti-hepatite C e anti-HIV 1 e 2. Mesmo assim, todas
as precaues recomendadas para o manuseio dos derivados de sangue devem ser
observadas. Consulte a publicao "Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories" (Biossegurana em Laboratrios Biomdicos e de Microbiologia), do
Departamento de Sade e Servio Social dos Estados Unidos, ou outras
regulamentaes locais ou nacionais.
Manuseie todas as amostras dos pacientes como potencialmente infecciosas.
Os reagentes contm azida de sdio (NaN3) como conservante. A azida de sdio pode
reagir com canos de chumbo e de cobre, formando azidas de metal altamente explosivas.
Ao descartar, utilize grande quantidade de gua para evitar o acmulo de azida.
O descarte de resduos tambm deve estar de acordo com as regulamentaes locais.

PREPARAO DOS REAGENTES

Reagente

Estabilidade reconstituda

Soluo de lavagem para processador da placa

2 semanas a uma temperatura entre

+2 e +25 C, em recipiente lacrado.

Despeje os 250 mL de concentrado para lavagem em um recipiente limpo e dilua

adicionando 6000 mL de gua desionizada (1 : 25) para obter uma soluo de lavagem
tamponada (pH 7.8).

PROCEDIMENTO DE ENSAIO
Consulte o Manual do Usurio do AutoDELFIA para obter detalhes. Em
Configuraes/Sistema/Triagem neonatal (Settings/System/Neoscreening) no software
da estao de trabalho do AutoDELFIA, selecione Triagem neonatal (Neoscreening). Os
reagentes e as amostras devem retornar temperatura ambiente (+19 a +25 C) antes de
serem utilizados.
Observe que esse kit de 12-placas [4-placas] contm os componentes necessrios aos
3 conjuntos [1 conjunto] de 4 placas. Um conjunto exige um frasco do tampo em um
frasco do traador.

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O software AutoDELFIA (verso 1.5, reviso 6 e posteriores) contm um recurso

chamado 'PreScan'. O objetivo do 'PreScan' detectar ausncia de papel filtro com
sangue nos poos antes da remoo do disco. Uma etapa de medio adicional
realizada e, no caso de suspeita de ausncia de papel filtro, uma mensagem de erro
Mancha de sangue possivelmente ausente reportada, e a amostra/as amostras
deve(m) ser testada(s) novamente. Consulte o manual Instrumentao do AutoDELFIA
para obter mais detalhes.

Calibrao
H duas opes diferentes para calibrao do ensaio:
a) uma curva de calibrao completa em duplicata na primeira placa em uma corrida de
no mximo 4 placas (mesmo ID da corrida)
b) uma curva completa de calibrao em duplicata para cada placa
A opo de calibrao deve estar selecionada no editor do protocolo de ensaio utilizado.
Verifique se as configuraes a seguir so usadas no protocolo de clculo do ensaio:
curve fitting:
(mtodo de
ajuste de curva)

SPLINE (SMOOTHED)

x-axis:
(eixo x)

LOG

y-axis:
(eixo y)

LOG_B

calibrators:
(calibradores)

BLANK (A)
CALIBRATORS (B-F) IN DUPLICATE

(Obs.: O cal. A deve ser

codificado como branco,
no como 0)

Procedimento para um kit completo:

Observe que os kits com 12 placas permitem realizar no mximo 6 execues
separadas, enquanto os kits de 4 placas podem ser utilizados em no mximo
4 execues separadas
Lembre-se tambm de que as amostras de sangue seco devem ser picotadas nas
placas separadamente, por um picotador automtico ou manual.
O processo inteiro do ensaio pode ser programado no boto AutoMate (consulte o Manual
do Usurio do AutoDELFIA). O mesmo processo tambm pode ser acessado atravs de
comandos individuais do software da estao de trabalho. Veja abaixo ou consulte o
Manual do Usurio do AutoDELFIA. O texto em negrito se refere a instrues fornecidas
no software da estao de trabalho do AutoDELFIA.
1. Picote os calibradores, os controles e as amostras nos poos (discos de papel-filtro
com aproximadamente 3.2 mm (1/8 polegada) de dimetro). Para minimizar a

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variao nos calibradores e nos controles, recomendado evitar as bordas externas
das manchas de sangue secas, isto , picotar no mximo 4 discos de cada mancha
de sangue seca nos cassetes do calibrador e do controle.

2. Insira informaes sobre amostras e controles em Carregar lista (Load List) ou Criar
lista (Create List) no software da estao de trabalho do AutoDELFIA.
3. Crie a Programao (Schedule).
4. Coloque o adesivo do cdigo de barras no cassete de reagente, conforme mostrado
no ponto 5 abaixo. Observao: a extremidade direita deve se estender alm do
cassete de reagente para facilitar a remoo do adesivo.
5. Remova as tampas dos frascos do reagente e coloque os reagentes no cassete,
conforme mostrado na figura a seguir. Coloque a tampa preta no frasco do traador.
Ao analisar menos de quatro placas, no misture nem jogue fora as tampas do frasco
do tampo.
6. Carregar reagentes (Load reagents). Coloque os cassetes no suporte do reagente,
na ordem exibida na tela.

O adesivo do cdigo
de barras se estende
alm do cassete

2. Tampo de ensaio de
IRT
3. Traador
4. Vazio

1.
Tampo
3.
-

Analyte name, kit lot and plate lot nos.

2.
Tr

Nvel do adesivo do
cdigo de barras
com o cassete

Nome do analisado e n de lote do kit e

de lote da placa

7. Carregar placas, com os discos de papel filtro (Load plates with the filter paper
disks). A placa deve ser carregada com o lado do cdigo de barras voltado para o
processador da placa e depois colocada delicadamente no suporte da placa. Verifique
se todos os poos tm um disco de papel filtro colocado corretamente no fundo.

8. Iniciar ensaio (Start run). Certifique-se de que h ponteiras e recipiente de diluio

suficientes no suporte do reagente, conforme exibido na tela.

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9. Unload (Descarregar). Descarregue as placas, os reagentes e os consumveis no

final da execuo.
10. Descarte o traador usado. NO O UTILIZE NOVAMENTE. Remova os recipientes de
diluio usados do suporte do reagente e as ponteiras usadas da bandeja de
resduos. Ao analisar menos de quatro placas, pegue o frasco do tampo no cassete
de reagente e coloque-o novamente em +2+8 C. A estabilidade do tampo na placa
de 24 horas.

Procedimento para execues com placas parciais:

Antes do ensaio:
-

Se for utilizada menos que uma placa inteira, remova a quantidade necessria de tiras
e coloque-as em um suporte, identificando-a com o cdigo de barras da placa incluso
no kit, conforme mostrado na figura a seguir. Se for utilizado um nmero de tiras
mpar, adicione uma tira extra. Esta dever ser a tira de simulao. Observao: Abra
apenas trs lados da folha metlica e dobre-a para o lado, mantendo as informaes
especficas da placa na embalagem. Coloque as tiras restantes de volta na
embalagem e pressione a folha metlica no lugar de origem o mais firme que
conseguir. Deixe o dessecante na embalagem. Outra opo guardar as tiras
restantes em um saco plstico relacrvel com o dessecante.

no misture nem jogue fora as tampas do frasco do tampo

H
G
F
E
D
C
B
A
12 11 10 9

Analyte name, plate lot no.

Nome do analito e n
de lote da placa

Nvel do adesivo do
cdigo de barras
nesta extremidade

Aps o ensaio:
-

tampar o frasco do tampo e retorne-o temperatura entre +2+8 C

descarte o traador usado, NO O UTILIZE NOVAMENTE

A estabilidade do tampo na placa de 24 horas.

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OBSERVAES SOBRE O PROCEDIMENTO

1. necessria uma compreenso perfeita deste suplemento, do manual do instrumento
1235 AutoDELFIA e do software da estao de trabalho do AutoDELFIA para que se
faa um bom uso deste kit. Os reagentes fornecidos com este kit devem ser usados
como uma unidade integral. No misture reagentes idnticos de kits que possuam
nmeros de lote diferentes. No use reagentes de kits aps a data de validade
impressa no rtulo. No use os frascos do traador mais de uma vez.
2. Qualquer falha no procedimento de ensaio pode afetar os resultados.
3. importante evitar a contaminao com o eurpio que pode resultar a excessiva
fluorescncia de fundo. A troca do frasco da soluo intensificadora deve ser feita
com cuidado, evitando tocar nos tubos.

CLCULO DOS RESULTADOS

O sistema AutoDELFIA possue programas para gerenciamento de dados, gerando
resultados tais como de curvas de calibrao, concentraes de amostras, etc.

Controle de qualidade
Amostras de controle sempre devem ser usadas para garantir a validade dos resultados
no dia-a-dia. Pelo menos um controle deve estar prximo do limite de deciso clnica. Os
controles devem ser executados da mesma maneira que as amostras. Controles em trs
nveis diferentes esto includos no kit. Esses controles devem ser executados em cada
ensaio. Se o ensaio incluir mais de uma placa, os controles devero ser executados em
cada placa. Cada laboratrio deve estabelecer sua prpria mdia e faixa aceitvel. que
dever ficar em cerca de 20% dos valores especificados no certificado do controle de
qualidade. recomendvel que os laboratrios estabeleam seus prprios controles em
diferentes nveis, alm dos controles includos no kit. Os resultados das amostras s
devem ser relatados se os resultados dos controles para o ensaio estiverem em
conformidade com os critrios estabelecidos pelo laboratrio (33). Certifique-se da
compatibilidade com os requisitos locais e nacionais adequados.
Tambm recomendamos a participao em avaliaes de controle de qualidade externos.

LIMITAES DO PROCEDIMENTO
Como qualquer teste de triagem in vitro, os dados obtidos com o imunoensaio
AutoDELFIA Neonatal IRT devem ser utilizados como recurso auxiliar de procedimentos
mdicos comprovados e os resultados interpretados em conjunto com outros dados
clnicos que o mdico tenha disposio.
Estas so condies que, sabidamente, causam resultados analticos anmalos:
- amostras de sangue que no estejam uniformemente preenchida com sangue
- amostras de sangue picotada muito perto da borda da mancha de sangue
- amostras coletadas e secas de forma insatisfatria

13905908-3 (br)
-

15

mancha de sangue no-eluente devido deteriorao da amostra causada por

exposio a calor e umidade
contaminao da mancha de sangue com material da me
contaminao do papel filtro da mancha de sangue com material fecal

A amostra no deve ser aplicada ao papel filtro como EDTA ou sangue citrato devido ao
efeito de quelao sobre o eurpio.
Consulte tambm a seo OBSERVAES SOBRE O PROCEDIMENTO.
VALORES ESPERADOS 3 E INTERPRETAES DOS RESULTADOS
A medio de IRT a partir de manchas de sangue seco usada como um meio para
identificar uma populao de recm-nascidos que tenha maior predisposio FC e que
deve ser selecionada para o teste de segundo nvel. A identificao se baseia no uso de
um valor de corte ou percentil da populao. Os nveis de corte de IRT devem ser
determinados por cada laboratrio de triagem de recm-nascidos, satisfazendo a
sensibilidade e a especificidade desejadas pela triagem, alm de serem avaliados
periodicamente (34).
H vrios protocolos de triagem que usam IRT como principal teste de triagem neonatal
da FC. O fluxograma abaixo ilustra os diferentes algoritmos alternativos para triagem de
FC descritos pelo American College of Medical Genetics (35). As aes so exibidas nas
caixas brancas e os resultados, nas sombreadas.

Estudo realizado para Wallac Oy, Turku, Finlndia.

16

13905908-3 (br)

Triagem de
IRT
ALTERNATIVA 2

ALTERNATIVA 1

IRT
moderadamente
elevada

IRT
muito
elevada

Repetir IRT

Painel de
mutao do
CFTR

2 IRT
elevada

Mutao
nica

Duas
mutaes

Teste do painel
de mutao
estendida

Uma ou
duas
mutaes

Teste de cloreto
no suor

> 60 mEq/L
positivo
para FC

Figura 1. Algoritmos alternativos para triagem de FC em recm-nascidos. Modificado a

partir de um documento de orientao do American College of Medical Genetics (35).

13905908-3 (br)

17

Alternativa 1
O protocolo mais comum nos EUA a estratgia de triagem IRT/DNA de segundo nvel. A
triagem inicial mede o IRT nas manchas de sangue seco de coletas de rotina. Nas
amostras nas quais a IRT est acima de um valor de corte fixo ou percentil selecionado,
realizada uma anlise da mutao do gene CFTR. O corte de triagem de IRT usado varia
conforme a populao especfica em que est sendo testado.

Alternativa 2
Em uma estratgia alternativa de triagem de IRT/IRT, solicitada uma segunda amostra
daqueles neonatos que originalmente apresentaram nveis elevados de IRT. Outra
determinao de IRT feita na segunda amostra e, se o nvel estiver elevado, essa
criana ser submetida ao teste de suor. Em ambos os casos, os bebs identificados
como predispostos FC exigiro maior acompanhamento para excluir ou confirmar a
doena (7,36). Os nveis de IRT diminuem com a idade de coleta da amostra. Um valor de
corte diferente (menor) deve ser usado em amostras coletadas aps 30 dias de vida
(7,37).
Nas duas alternativas, o programa de triagem pode optar por enviar resultados muito altos
de IRT diretamente para diagnstico do teste de cloreto no suor.
Os protocolos e os valores de triagem apresentados so apenas ilustrativos. Cada
laboratrio deve estabelecer seu prprio protocolo de teste e de acompanhamento,
levando em considerao as normas nacionais e regionais e os recursos disponveis.
preciso lembrar que os valores de IRT e a freqncia da FC variam conforme a rea
geogrfica e a demografia local. Portanto, importante que cada laboratrio estabelea
seu prprio intervalo e valor de corte de referncia a partir de uma amostra representativa
da populao. Alguns laboratrios optam por definir o valor de corte nos percentis 1% a
5% superiores (38). A seleo do percentil de corte depender dos objetivos de
sensibilidade e especificidade do programa de triagem. A opo de um corte de 5% dos
resultados dirios de IRT aumenta a sensibilidade da triagem, enquanto a seleo de um
corte de 1% minimiza o nmero de amostras encaminhadas para o teste de segundo
nvel. Para obter mais informaes sobre os algoritmos de triagem de fibrose cstica,
consulte os relatrios da Cystic Fibrosis Foundation (34) e dos Centers for Disease
Control and Prevention (CDC) (43).
Observao! Em funo das possveis diferenas entre os kits disponveis no
mercado, os valores de corte devem ser estabelecidos com o kit a ser usado
rotineiramente.
O fenmeno da hipertripsinemia neonatal transitria (no-FC), ocorre predominantemente
nos primeiros dias de vida, a principal causa dos falsos positivos. Os falsos positivos
tambm podem ocorrer em recm-nascidos com baixos ndices de APGAR e em bebs
afroamericanos. O uso de um segundo nvel de teste, DNA ou repetio do IRT em uma
segunda amostra, tem sido feito para reduzir o nmero dos falsos positivos. (39,40)
Portadores saudveis das mutaes da FC podem produzir um resultado falso positivo do
IRT em uma proporo cerca de trs vezes maior que a populao em geral (15). Os
valores falsos negativos do IRT costumam ocorrer em alguns recm-nascidos com FC
que apresentam o meconium ileus (12,41). Recomenda-se que todos os recm-nascidos

18

13905908-3 (br)

com leo meconial (meconium ileus) faam o teste do suor, independentemente do

resultado da triagem (34).
A triagem de IRT em combinao com a anlise de mutao com um segundo nvel de
teste resultar na identificao dos portadores da fibrose cstica. Alguns consideram isso
uma vantagem, pois permite o aconselhamento gentico (8). Outros encaram a deteco
do portador como uma desvantagem devido ansiedade dos pais causada por um
aconselhamento gentico precoce (42) e dos recursos necessrios para fornecer esse
aconselhamento (40). No entanto, segundo as diretrizes, o aconselhamento gentico para
portadores deve ser disponibilizado como parte do programa de triagem para FC (34).

Desempenho da triagem
Na tabela a seguir, so apresentados os dados clnicos de 141.745 amostras de triagem
de recm-nascidos de um laboratrio estatal dos EUA. Os nmeros relatados nesta seo
so apenas de triagens iniciais, caso de indicao em contrrio. Todas as triagens iniciais
foram realizadas em uma nica amostra no kit B005-112 AutoDELFIA Neonatal IRT.
A estratgia de triagem foi a seguinte: 4% dos resultados mais altos de IRT dirios foram
encaminhados para a anlise de DNA. Os indivduos com gentipo relacionado FC na
anlise do DNA foram encaminhados para o teste de diagnstico por suor. Alm disso,
neonatos cujos valores de IRT excediam 170 ng/mL e que no apresentavam mutaes
relacionadas FC foram encaminhados ao teste do suor caso houvesse sintomas clnicos
de FC, ou histrico familiar.
Indivduos (n = 7) com resultados positivos na triagem de IRT e DNA, mas com resultados
normais no teste do suor e ausncia de sintomas clnicos, foram encaminhados como FC
no clssica. Esses resultados so considerados positivos para triagem e negativos para
FC nos clculos de sensibilidade e especificidade da triagem. Deve-se observar que,
embora no tenham sido relatados falso-negativos at agora, possvel que o fentipo da
FC ainda no tenha se desenvolvido ou que o mdico ainda no tenha relatado essa
informao para o laboratrio de testes.

Fibrose cstica
Positivo
Resultado de
triagem

Total

Positivo

28

Negativo
5906

Negativo

135811

135811

Total

28

141717

141745

Sensibilidade da triagem: 100%

Especificidade da triagem: 95.8%
Valor do prognstico positivo: 0.48%
Prevalncia : 1 : 5062

5934

Intervalo de confiana de 95%: 85% 100%

Intervalo de confiana de 95%: 95.7% 95.9%

13905908-3 (br)

19

Comparao da distribuio dos kits B005-212 e B005-112 AutoDELFIA Neonatal

IRT
Um laboratrio de triagem neonatal testou 1.923 amostras de triagem de mancha de
sangue de rotina com o kit B005-212 AutoDELFIA Neonatal IRT e com o kit B005-112
AutoDELFIA Neonatal IRT. As distribuies de IRT so mostradas no grfico a seguir:
800
B005-112
B005-212

Nmero de resultados

700

600
500

400

300

200
100

0
0

10 20

30 40

50 60

70 80

90 100

110 120

130 140

150 160

170 180

190

Concentrao de IRT (ng/mL sangue)

Os dados dos kits individuais so apresentados na tabela a seguir. Os valores dos 95,
96, 97, 98 e 99 percentis esto includos como exemplos.
Kit
B005-112
B005-212

Mdia

1923
1923

26.8
25.3

Intermedirio
22.0
21.1

95
55.9
52.4

Valores dos percentis

96
97
98
59.0
65.3
74.6
55.8
61.6
69.9

99
91.8
85.5

CARACTERSTICAS DO DESEMPENHO ANALTICO

O intervalo de medio do ensaio de 16 ng/mL a 480 ng/mL.
Uma curva de calibrao tpica obtida com o ensaio B005-212 AutoDELFIA Neonatal IRT
mostrada abaixo.

20

13905908-3 (br)

Preciso 4 : A variao do ensaio com o B005-212 AutoDELFIA Neonatal IRT foi

determinada usando-se amostras de mancha de sangue seco no inoculadas (amostra 1)
e inoculadas (amostras 2 e 3) ao longo de 20 dias em 27 execues com 8 replicatas
(4 replicatas por placa). Foram usados 3 lotes de kits diferentes e 3 sistemas
AutoDELFIA. A anlise da abordagem da varincia foi usada para calcular as seguintes
variaes:
Resultados usando uma curva de calibrao completa em cada placa:

Amostra
1
2
3

Valor mdio total

(ng/mL sangue)
24.8
62.4
99.2

n
216
216
216

Variao
dentro da
placa
DP
CV%
2.2
3.7
5.7

8.7
6.0
5.8

Variao de
lote

Variao total

DP

CV%

DP

CV%

2.6
4.9
8.1

10.6
7.9
8.1

2.8
4.9
8.1

11.1
7.9
8.1

Resultados usando uma curva de calibrao completa para cada lote de 4 placas:

Amostra
1
2
3
4

Valor mdio total

(ng/mL sangue)
24.7
61.8
97.8

n
216
216
216

Variao
dentro da
placa
DP
CV%
2.2
3.9
5.6

Estudo realizado na Wallac Oy, Turku, Finlndia.

9.0
6.4
5.8

Variao de
lote

Variao total

DP

CV%

DP

CV%

2.6
5.3
7.6

10.4
8.6
7.8

2.7
5.3
8.0

10.8
8.6
8.2

13905908-3 (br)

21

Limite de branco 5 : Descobriu-se que o limite de branco com o ensaio AutoDELFIA

Neonatal IRT era de 0.53 ng/mL no sangue, caso o limite de branco fosse definido como o
95 percentil da distribuio de valores de branco (n = 144).
Reao cruzada 6 : A reao cruzada do ensaio AutoDELFIA Neonatal IRT apresentada
na seguinte tabela:
Antgeno

Concentrao adicionada

2 -macroglobulina
1 -antitripsina
Fosfolipase PLA2
Quimotripsina
IgG humano
Uropepsinognio

5 mg/mL
2 mg/mL
500 ng/mL
800 ng/mL
15 mg/mL
150 ng/mL

sangue
sangue
sangue
sangue
sangue
sangue

Medida aparente da
concentrao de IRT
< 4 ng/mL sangue
< 4 ng/mL sangue
< 4 ng/mL sangue
< 4 ng/mL sangue
< 4 ng/mL sangue
< 4 ng/mL sangue

Comparao de mtodos 7 : O kit B005-212 AutoDELFIA Neonatal IRT (y) foi comparado
ao kit B005-112 AutoDELFIA Neonatal IRT (x) utilizando amostras de manchas de sangue
para triagem de rotina no intervalo de 16 a 330 ng/mL em sangue. A correlao
encontrada foi:
y = 0.93x + 0.43; r = 0.97 (n = 1370)
Linearidade 8 : Para o ensaio com o B005-212 AutoDELFIA Neonatal IRT, o mtodo
mostrou ser linear de 16 ng/mL a 480 ng/mL.
Efeito gancho 9 : Nenhum efeito gancho foi encontrado em concentraes de IRT acima
de 40000 ng/mL.

GARANTIA
Os dados de desempenho aqui apresentados foram obtidos atravs do procedimento de
ensaio indicado. Qualquer mudana ou alterao no procedimento no recomendado pelo
fabricante pode afetar os resultados, nesse caso, a Wallac Oy e suas afiliadas no
oferecem nenhuma garantia expressa, implcita ou estatutria, inclusive a garantia
implcita de negociabilidade e adequao de uso.
Nesse caso, a Wallac Oy, suas afiliadas e seus distribuidores autorizados no devem ser
responsabilizados por danos indiretos ou conseqentes.

Estudo realizado na Wallac Oy, Turku, Finlndia.

como acima
7
Estudo realizado para Wallac Oy, Turku, Finlndia.
8
Estudo realizado na Wallac Oy, Turku, Finlndia.
9
como acima
6

22

13905908-3 (br)

REFERNCIAS
1. Riordan, J.R., Rommens, J.M., Kerem, B.-S., Alon, N., Rozmahel, R., Grzelczak, Z.,
Zielenski, J., Lok, S., Plavsic, N., Chou, J.-L., Dgumm, M.L., Iannuzzi, M.C., Collins,
F.S. and Tsui, L.-C. (1989): Identification of the cystic fibrosis gene: cloning and
characterization of complementary DNA. Science 245, 10661073.
2. Kerem, B.-S., Rommens, J.M., Buchanan, J.A., Markiewich, D., Cox, T.K.,
Chakravarti, A., Buchwald, M. and Tsui, L.-C. (1989): Identification of cystic fibrosis
gene: genetic analysis. Science 245, 10731080.
3. Rommens, J.M., Iannuzzi, M.C., Kerem, B.-S. et al. (1989): Identification of the cystic
fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) gene: chromosome walking
and jumping. Science 245 10591065.
4. The cystic fibrosis Genetic Analysis Consortium (1994): Population variation of
common cystic fibrosis mutations. Hum. Mutat. 4, 167177.
5. NCCLS (2000): Sweat Testing: Sample Collection and Quantitative Analysis;
Approved Guideline Second Edition. NCCLS document C34-A2. NCCLS, Wayne,
Pennsylvania 19087-1898, USA.
6. Crossley, J.R., Elliot, R.P. and Smith, P.A. (1979): Dried blood-spot screening for
cystic fibrosis in the newborn. Lancet 1, 472474.
7. Hammond, K.B., Abman, S.H., Sokol, R.J. and Accurso, F.J. (1991): Efficacy of
statewide neonatal screening for cystic fibrosis by assay of trypsinogen
concentrations. NEJM 325, 769774.
8. Farrell, P.M., Kosorok, M.R., Laxova, A., Shen, G., Koscik, R.E., Bruns, W.T.,
Splaingard, M. and Mischler, E.H. (1997): Nutritional benefits of neonatal screening for
cystic fibrosis. NEJM 337, 963999.
9. Ranieri, E., Ryall, R.G., Morris, C.P., Nelson, P.V., Carey, W.F., Pollard, A.C. and
Robertson, E.F. (1991): Neonatal screening strategy for cystic fibrosis using
immunoreactive trypsinogen and direct gene analysis. BMJ 302, 12371240.
10. Wilcken, B., Wiley, V., Sherry, G. and Bayliss, U. (1995): Neonatal screening for cystic
fibrosis: A comparison of two strategies for case detection in 1.2 million babies. J.
Pediatr. 127, 965970.
11. Ferec, C., Verlingue, C., Parent, P., Morin, J.F., et al. (1995): Neonatal screening for
cystic fibrosis: Result of a pilot study using both immunoreactive trypsinogen and
cystic fibrosis gene mutation analysis. Hum. Genet. 96, 542548.
12. Heeley, A.F. and Bangert, S.K. (1992): The neonatal detection of cystic fibrosis by
measurement of immunoreactive trypsin in blood. Ann. Clin. Biochem. 29, 361376.
13. Figarella, C. and Carrere, J. (1994): The evolution of pancreatic disease in cystic
fibrosis. In Cystic Fibrosis - Current topics, Vol 2. Eds. J.A. Dodge, D.J.H. Brock and
J.H. Widdicombe. John Wiley, Chichester, UK. pp. 255275.

13905908-3 (br)

23

14. Lecoq, I., Brouard, J., Laroche, D., Ferec, C. and Travert, G. (1999): Blood
immunoreactive trypsinogen concentrations are genetically determined in healthy and
cystic fibrosis newborns. Acta Pediatr. 88, 338341.
15. Castellani, C., Benetazzo, M.G., Bonizzato, A., Pignatti, P.F. and Mastella, G. (1999):
Cystic fibrosis mutations in heterozygous newborns with hypertrypsinemia and low
sweat chloride. Am. J. Hum. Genet. 64, 303304.
16. Waters, D.L., Wilcken, B., Irwig, L., Van Asperen, P., Mellis, C., Simpson, J.M., Brown,
J. and Gaskin, K.J. (1999): Clinical outcomes of newborn screening for cystic fibrosis.
Archives of Disease in Childhood. 80, F1F7.
17. Dankert-Roelse, J.E. and J Te Meerman, G. (1995): Long term prognosis of patients
with cystic fibrosis in relation to early detection by neonatal screening and treatment in
a cystic fibrosis centre. Thorax 50, 712718.
18. Shwachman, H., Redmond, A. and Kon-Taik, K. (1970): Studies in cystic fibrosis:
Report of 130 patients diagnosed under 3 months of age over a 20-year period.
Pediatrics 46, 335343.
19. Orenstein, D.M., Boat, T.F., Stern, R.C., Tucker, A.S., Charnock, E.L., Matthews, L.W.
and Doershuk, C.F. (1977): The effect of early diagnosis and treatment in cystic
fibrosis. Am. J. Dis. Child. 131, 973975.
20. Green, M.R. and Weaver, L.T. (1994): Early and late outcome of cystic fibrosis
screening. J. Royal Soc. Med. 87 (Suppl. 21), 510.
21. Giglio, L., Candusso, M., DOrazio, C., Mastella, G. and Faraguna, D. (1997): Failure
to thrive: The earliest feature of cystic fibrosis in infants diagnosed by neonatal
screening. Acta Pediatr. 86, 11621165.
22. Krebs, N.F., Sontag, M., Accurso, F.J. and Hambidge, K.M. (1998): Low plasma zinc
concentrations in young infants with cystic fibrosis. J. Pediatr. 133, 761764.
23. Wilfond, B.S., Farrell, P.M., Laxova, A. and Mischler, E. (1994): Severe hemolytic
anemia associated with vitamin E deficiency in infants with cystic fibrosis. Implications
for neonatal screening. Clin. Pediatr. 33, 27.
24. Van Egmond, A.W.A., Kosorok, M.R., Koscik, R., Laxova, A. and Farrell, P.M. (1996):
Effect of linoleic acid intake on growth of infants with cystic fibrosis. Am. J. Clin. Nutr.
63, 746752.
25. Bowling, F., Cleghorn, G., Chester, A., Curran, J., Griffin, B., et al. (1998): Neonatal
screening for cystic fibrosis. Arch. Dis. Child. 63, 196198.
26. Farrell, P.M., Shen, G., Splaingard, M., Colby, C.E., Laxova, A., Kosorok, M.R., Rock,
M.J. and Mischler, E.H. (1997): Acquisition of Pseudomonas aeruginosa in children
with cystic fibrosis. Pediatrics 100 (5): E2.
27. Soini, E. and Kojola, H. (1983): Time-resolved fluorometer for lanthanide chelates a new generation of nonisotopic immunoassays. Clin. Chem. 29, 6568.

24

13905908-3 (br)

28. Hemmil, I., Dakubu, S., Mukkala, V-M., Siitari, H. and Lvgren, T. (1984): Europium
as a label in time-resolved immunofluorometric assays. Anal. Biochem. 137, 335343.
29. Clinical and Laboratory Standards Institute (2007): Blood Collection on Filter Paper for
Newborn Screening Programs; Approved Standard Fifth Edition; CLSI Document
LA4-A5. CLSI, Wayne, Pennsylvania 19087-1898, USA.
30. Kirby, L.T., Applegarth, D.A, Davidson, A.G.F., Wong, L.T.K. and Hardwick, D.F.
(1981): Use of a dried blood spot in immunoreactive trypsin assay for detection of
cystic fibrosis in infants. Clin. Chem. 27, 678680.
31. Borgstrm, A. Sveger, T., Lindberg, T., Kollberg and H. Larsson, A. (1982):
Immunoreactive trypsin screening for cystic fibrosis. Acta Pediatr. Scand. 71, 621
624.
32. Nadeau F.L., Makowshi, G.S., Hopfer S.M., Naylor E.W., Polana, P.A. (1995):
Neonatal cystic fibrosis screening: Implications of apparent seasonal variations in
immunoreactive trypsinogen (IRT) concentration. Proc 11th National Neonatal
Screening Symp., 200201.
33. Westgard, J.O., Barry, P.L., Hunt, M.R., and Groth T. (1981): A multi-rule Shewhart
chart for quality control. Clin. Chem. 27, 493501.
34. Comeau, A.M., Accurso, F.J., White, T.B., Campbell, P.W.,III, Hoffman, G., Parad,
R.B., Wilfond, B.S., Rosenfeld, M., Sontag, M.K., Massie, J., Farrell, P.M. and
O'Sullivan, B.P. (2007): Guidelines for Implementation of Cystic Fibrosis Newborn
Screening Programs: Cystic Fibrosis Foundation Workshop Report. Pediatrics 119,
495518.
35. Newborn Screening Act Sheets And Confirmatory Algorithms. 06.09.2007 American
College of Medical Genetics http://www.acmg.net/resources/policies/ACT/Visio-IRT(417-06).pdf.
36. Ranieri, E., Lewis, B.D., Morris, C.P. and Wilcken, B. (1996): Neonatal screening using
combined biochemical and DNA-based techniques. In Cystic Fibrosis - Current Topics,
Vol 3. Eds. J.A. Dodge, D.J.H. Brock and J.H. Widdicombe. John Wiley, Chichester,
UK. pp. 181206.
37. Rock, M.J., Mischler, E.H., Farrell, P.M., Bruns, W.T., Hassemer, D.J., Laessig, R.H.
and Wei, L.J. (1990): Newborn screening for cystic fibrosis is complicated by the agerelated decline in immunoreactive trypsinogen levels. Pediatrics 85, 10011007.
38. Kaye, C.I. and and the Committee on Genetics (2006): Pediatrics 118, 934963
http://www.pediatrics.org/cgi/content/full/118/3/e934.
39. Rock, M.J., Mischler, E.H., Farrell, P.M., Bruns, W.T., Hassemer, D.J., and Laessig,
R.H. (1989): Immunoreactive trypsinogen screening for cystic fibrosis: characterization
of infants with a false positive screening test. Pediatr. Pulmonol., 6, 4248.

13905908-3 (br)

25

40. Gregg, R.G., Simantel, A., Farrell, P.M., Koscik, R.E., Kosorok, M.R., Laxova, A.,
Laessig, R.H., Hoffman, G.L., Hassemer, D.J., Mischler, E.H., Splaingard, M. (1997):
Newborn screening for cystic fibrosis in Wisconsin: comparison of biochemical and
molecular methods. Pediatrics, 99 (6), 819824.
41. Rusakow, L.S., Abman, S.H., Sokol, R.J. et al. (1993): Immunoreactive trypsinogen
levels in infants with cystic fibrosis complicated by meconium ileus. Screening 2, 13
18.
42. Wilcken, B. (1993): Newborn screening for cystic fibrosis: Its evolution and a review of
the current situation. Screening 2, 4362.
43. Grosse, S.D., Boyle, C.A., Botkin, J.R., Comeau, A.M., Kharrazi, M., Rosenfeld, M.,
and Wilfond, B.S. (2004): Newborn Screening for Cystic Fibrosis. Evaluation of
Benefits and Risks and Recommendations for State Newborn Screening Programs.
http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/rr5313a1.htm.

Ultima reviso junho de 2010

26

13905908-3 (br)

AutoDELFIA Neonatal IRT kit

Resumo do protocolo do ensaio AutoDELFIA
As funes do AutoDELFIA foram executadas automaticamente de acordo com um protocolo prprogramado

USURIO

AutoDELFIA

Verificar a concentrao do calibrador

no certificado de CQ
Verificar/completar os consumveis
Picotar os calibradores, os controles e as
amostras nos poos
Carregar lista de trabalho
- escolher o modo de calibrao
Criar programao
Carregar reagentes
Carregar placas (verificar se todos os poos
tm um disco)
Iniciar o ensaio
Diluir traador (1 : 50)
Dispensar diluio do traador (200 L/poo)
Incubar (2 h)
Medir (PreScan)
Remover discos
Lavar (x 6)
Dispensar a soluo intensificadora
(200 L/poo)
Agitar/Incubar (11 min.)
Medir
Descarregar placas
Descarregar reagentes

LEMBRETES:
Certifique-se de que os reagentes esto nas posies corretas no cassete de reagente
As placas e os cassetes de reagente devem ser identificados com os cdigos de barra
correspondentes
Selecione Settings/System/Neoscreening (Configuraes/Sistema/Triagem neonatal)
Uma curva de calibrao completa deve ser executada para cada lote de 4 placas