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SOP: Estudio Citoqumico de Lquido Cfalorraqudeo (LCR)
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SOP: Estudio Citoqumico de Lquido Cfalorraqudeo (LCR)
PRINCIPIO:
El Estudio Citoqumico del Lquido Cfalorraqudeo, se realiza cumpliendo de forma estricta
una serie de pasos, los que sern detallados en el presente manual.
El propsito del presente SOP, es que exista un manual de procedimientos para que
cualquier personal del laboratorio, pueda realizar este anlisis con los conocimientos y
criterios necesarios.
OBJETIVO:
Establecer procedimientos bsicos en el manejo y anlisis del Lquido Cfalorraqudeo, por
todo el personal de laboratorio, luego del cual podr sugerir al mdico, cuando sea
necesario, el anlisis de otros exmenes complementarios.
AUTORIDAD Y RESPONSABILIDAD:
1.- El director del laboratorio, los Supervisores de Laboratorio y Control de Calidad, tienen la
autoridad para establecer este procedimiento.
2.- El director del laboratorio, los Supervisores de Laboratorio y Control de Calidad, son
responsables para la implementacin de este procedimiento y de asegurar que todo el
personal este apropiadamente entrenado.
3.- Todos los Tecnlogos Mdicos, Tcnicos de Laboratorio y Bilogos que trabajan en el
laboratorio, son responsables de leer este SOP antes de la ejecucin del procedimiento.
MUESTRA:
Los lquidos biolgicos que son referidos al laboratorio para su estudio son:
- Lquido Cfalorraqudeo (LCR)
- Lquidos Serosos: Liquido Pleural, Lquido Peritoneal y Lquido Pericrdico
- Lquido Sinovial (articular)
1) LQUIDO CEFALORRAQUDEO
El LCR es un lquido producido en los ventrculos, que son los espacios que hay dentro del
SNC. En los ventrculos hay una estructura especializada que son los Plexos Coroideos
donde se produce el LCR. Se produce y se reabsorbe continuamente a una velocidad de
500 mL / da. Su volumen permanece constante en situaciones fisiolgicas.
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Localizacin:
El cerebro y la mdula espinal se encuentran recubiertos por unas membranas
denominadas meninges que son la Piamadre (ntimamente unida al cerebro), la Aracnoides
(localizada inmediatamente por fuera de la anterior) y la Duramadre (La ms externa).
Entre la Piamadre y la Aracnoides hay un espacio llamado espacio subaracnoideo que se
comunica con los ventrculos.
Volumen:
En un adulto es un total de 150 mL que se distribuyen 120 mL en el espacio subaracnoideo
y 30 mL en los ventrculos.
Composicin:
Glucosa
Protenas: el LCR es un ultrafiltrado del plasma y, por lo tanto, predominan las
protenas de bajo peso molecular (Ej. Prealbmina, transferrina y albmina).
Agua
cido lctico
Funciones:
o
o
o
Actuar como soporte mecnico del cerebro para que ste flote.
Eliminacin de productos de desecho del metabolismo cerebral.
Transportar sustancias biolgicamente activas que se comportan como mensajeros
qumicos.
Toma de Muestra:
La puncin lumbar no se debe realizar de forma rutinaria, ya sea por carencia de un
diagnstico presuntivo o por falta de opinin neurolgica. Aporta informacin en algunos
pacientes con accidentes cerebrovascular (ACV) o coma.
Ser realizado por el mdico responsable, la puncin se realiza comnmente a nivel
lumbar. Se recibir la muestra bien rotulada: nombres y apellidos, edad, hora de extraccin
y hora de recepcin.
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Cada vez que se recepcione una muestra de LCR, Sin mantener las condiciones de toma
de muestra (tubo o frasco sin Anticoagulante), INDICAR EN OBSERVACIONES DEL
REPORTE DE RESULTADOS PARA ESTUDIO CITOLGICO:
Muestra Inadecuada para el Recuento Celular, en lo sucesivo enviar muestras en 2
tubos o frascos: 1 con EDTA o Heparina para el recuento celular, y 1 sin aditivo para
el estudio fsico-bioqumico.
EQUIPOS:
o
o
o
o
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o
PRECAUCIONES:
Seguir las precauciones de bioseguridad adecuadas (Ver SOP Bioseguridad)
MATERIALES:
o
o
o
o
o
REACTIVOS:
o
o
o
o
CALIBRACIN:
Aplica cuando sea necesario, para los reactivos de los Analizadores Bioqumicos Cobas C-111
y Microlab 200.
CONTROL DE CALIDAD:
o
o
PROCEDIMIENTO:
Cualquier lquido biolgico que llega al laboratorio debe procesarse antes de la media hora de
su extraccin, realizando primero: el examen macroscpico, examen microscpico (examen
directo y citolgico) y examen bioqumico.
TOMA DE MUESTRA:
Todo lquido biolgico debe ser tomado por el mdico en 3 4 tubos (o frascos).
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a) TUBO LIMPIO: Para el estudio de presencia de coagulo de fibrina, valoracin de la
viscosidad y la Mucina (en liquido sinovial). Tambin se puede usar para el estudio
qumico o serolgico.
b) TUBO CON HEPARINA O EDTA: Para el recuento citolgico y diferenciacin.
c) TUBO ESTERILIZADO
microbiolgico
DE
PREFERENCIA HEPARINIZADO:
Para
el
estudio
ASPECTO
* Transparente (Incoloro): No forma sedimento
* Ligeramente Turbio
* Turbio: Se debe al aumento de contenido celular, presencia de bacterias, etc.
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* Otros: Purulento, Lig.Purulento.
Transparente
Turbio
COAGULO DE FIBRINA
* Ausente: Normal, tambin est ausente en la Hemorragia Sub-aracnoidea.
* Presente: Formado por protenas, especialmente por fibringeno y factores de
coagulacin, introducidos por puncin. Puede interferir en el recuento celular (falsas
lecturas disminuidas), por lo que No se debera procesar si es que no est recolectado
en un tubo con anticoagulante.
AL CENTRIFUGADO
- SEDIMENTO:
* No hay presencia de sedimento
* Halo blanquecino
* Pequeo, escaso halo blanquecino
* Botn blanquecino
* Blanquecino mas halo hemtico
* Pequeo botn hemtico
* Botn hemtico
- SOBRENADANTE:
* Incoloro
* Rojo
* Amarillo
2) EXAMEN MICROSCPICO:
EXAMEN DIRECTO
En todo lquido biolgico debe realizarse un examen directo. Informar hemates y
leucocitos por campo, bacterias y cristales. En caso de ser un Lquido Hemtico
(ligeramente turbio y turbio), SIEMPRE e INMEDIATAMENTE, se evaluar la morfologa
de los hemates: Crenados o no, y su %.
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Cristales de Hematoidina: En algunas ocasiones se pueden encontrar este tipo de
cristal, como producto de la degradacin de la hemoglobina, por ejemplo en casos de un
proceso hemorrgico. Un indicativo de su presencia sera el color Xantocrmico del
sobrenadante del lquido.
EXAMEN CITOLGICO
Este examen debe efectuarse en forma rutinaria dentro de la primera media hora de
extraccin, donde las clulas permanecen en suspensin y los leucocitos presentan sus
caractersticas normales, por este motivo es muy importante homogenizar bien la muestra
antes de realizar el examen citolgico. El recuento debe hacerse con toda exactitud,
especialmente cuando el nmero de clulas no est aumentado, como sucede con los
lquidos transparentes o ligeramente turbios.
No se deben emplear contadores electrnicos de clulas porque pueden dar
recuentos falsamente elevados
A. RECUENTO DE LEUCOCITOS
Para el recuento de leucocitos en cmara de neubauer, puede realizarse de forma directa
sin dilucin (contando los 9 cuadrantes del retculo) o con dilucin 1/20 (contando 4
cuadrantes del retculo). Esto depender de la cantidad de leucocitos promedio por
campo encontrados luego de hacer un examen directo. Se recomienda realizar la dilucin
1/20, cuando la cantidad sea mayor de 100 leucocitos/campo.
La Cmara de Neubauer consta de 2 Retculos, en el cual se puede hacer por duplicado
el recuento celular. Cada Retculo contiene 9 cuadrantes, que servirn para realizar el
recuento:
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Debido al ingreso de sangre al LCR, Se Requiere hacer una Correccin del Recuento
de Leucocitos, por lo que la sangre NORMAL aadir 1 Leucocito por cada 700
Hemates.
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El clculo ser:
Recuento de Leucocitos
Nmero de
leucocitos en
lquido
Corregidos
Nmero de
leucocitos
adicionales
Donde:
Leucocitos adicionales = N Leucocitos (sangre perifrica) x N Hemates (Lquido)
N Hemates (sangre perifrica)
Ejemplo:
Hemates en sangre perifrica
: 5000,000
Hemates en Lquido
: 15,000
: 10,000
Leucocitos en Lquido
: 70
Entonces:
Leucocitos adicionales = (10,000) (15,000) = 30
5000,000
:::Leucocitos Corregidos = 70 30 = 40 Leu/mm3
Este tipo de correlacin es VLIDO cuando el paciente tiene cifras normales de hemates
y leucocitos en sangre; no es vlido para pacientes anmicos ni leucmicos
RECUENTO DIFERENCIAL
El mtodo de eleccin es la citocentrifugacin que es una centrifugacin especial que muy
pocos laboratorios tienen; sin embargo, la manera ms usual de concentrar el LCR es por
centrifugacin convencional:
I.
Centrifugar la muestra 1500 rpm x 8 minutos, para evitar deformar o romper las
clulas.
II.
III.
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IV.
Lectura: Consiste en clasificar los leucocitos en PMN y MN, para ello hay que tener
en cuenta lo siguiente:
a. Si existe un total de 100 leucocitos, indicar el porcentaje de cada uno de ellos.
b. Si existen ms de 50 y menos de 100 leucocitos, se realiza la diferenciacin y
se calcula el porcentaje.
c. Si hay menos de 50 leucocitos, indicar en el reporte el predominio de PMN o
MN.
d. En el caso de encontrar Clulas que No se diferencian en PMN y MN, la
muestra debe ser enviada a Anatoma Patolgica para su identificacin. En el
reporte se debe describir detalladamente las caractersticas de las clulas.
B. RECUENTO DE HEMATES
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En caso que el lquido sea Hemtico (ligeramente turbio o turbio) diluir con Solucin
Salina y se realiza el recuento usando la cuadrcula correspondiente a hemates, los
hemates contados se multiplicar por 10,000 (dilucin 1/200).
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:::Factor de dilucin = Inversa de la dilucin = 200
* Rcto de Hemates/mm3 sera: X = (N) (factor de dilucin) (1mm3)
0.02mm3
=> X = (N) (200) (1mm3)
0.02mm3
=> X = (N) (10,000)
3) EXAMEN BIOQUIMICO:
PROTEINAS
La determinacin de Protenas Totales se realizar en el equipo de MICROLAB 200,
utilizando como reactivo Proti U/LCR (tambin empleado en muestras de orina)
Su concentracin es menor que en el suero. Corresponden a un 80% proveniente del
plasma y a un 20% por sntesis intratecal. Los valores normales estn comprendidos
entre 20 y 45 mg/dl, pero depender segn la edad. El proteinograma normal en el LCR
es muy similar al plasmtico:
-
Prealbmina (2,3-6,9%)
Albmina
(52,8-73%)
Alfa-1
(3,7-8,1%)
Alfa-2
(4,2-8,8%)
Beta
(7,3-14,5%)
Gamma
(3,0-9,0%)
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El aumento de protenas en LCR es un dato poco especfico, ya que aparece en
numerosos procesos inflamatorios, infecciosos, neoplsicos, etc.
La disociacin albmino-citolgica consiste en un aumento desproporcionado de las
protenas en relacin con las clulas. Es propio de situaciones de bloqueo del flujo del
LCR a lo largo del conducto espinal por tumores, procesos inflamatorios, etc. Se da
tambin en el sndrome de Guillain-Barre. Su grado mximo es el denominado sndrome
de Froin en el que la elevada concentracin de protenas da al lquido un color
amarillento.
Por el contrario, en procesos inflamatorios menngeos sin bloqueo de LCR suele
predominar el aumento de clulas sobre el de protenas. En la actualidad es posible medir
fracciones y subfracciones proteicas en LCR, lo que tiene gran valor diagnostico en
diversas enfermedades.
Otros Mtodos son:
o
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REACCIN DE PANDY:
En numerosas afecciones del sistema nervioso central las globulinas pueden sufrir
aumento considerable que interesa conocer. Los mtodos turbidimtricos que determinan
protenas totales, se pueden ver afectados por variaciones del cociente
albmina/globulinas (normal = 8:1), por ejemplo en caso de meningitis (cociente = 2:1).
Se han descrito varias reacciones cualitativas, pero la ms comnmente utilizada es la de
PANDY.
Fundamento: Las Globulinas precipitan en presencia de una Solucin saturada de Fenol,
cuya positividad se describe en cruces: Opalinidad (1+), enturbiamiento leve (2+),
enturbiamiento fuerte (3+) y enturbiamiento lechoso (4+).
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GLUCOSA
Su cifra normal en LCR depende de la edad y de los niveles glicemia, ya que la
glucorraquia normal es del 60 al 70% de la glicemia medida simultaneamente y en
ayunas. La glicemia y glucorraquia se equilibran en un perodo de 4 horas, as la
glucorraquia en un momento determinado refleja la glicemia durante las 4 horas
anteriores.
o
o
o
DHL
Sus niveles normales son un 10% de la concentracin srica. Valor de la DHL en el
diagnstico diferencial de la meningitis viral, bacteriana y en la infiltracin del SNC en la
leucemia linfoctica aguda (LLA).
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CPK
Se realiza igual que en sangre. Elevada por encima de 4 U/L indica lesin cerebral
Isqumica y su extensin, segn la rapidez y grado de aumento en pacientes que han
superado un paro cardaco mediante resucitacin.
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CIDO LCTICO
Se realiza igual que en sangre. Puede variar en el LCR de forma independiente a los
valores plasmticos. Se piensa que es por la existencia de un metabolismo anaerbico en
el SNC. El cido lctico aumenta en cualquier alteracin asociada con disminucin del
flujo cerebral (Ej. En una lesin cerebral traumtica). Tambin contribuye el cido lctico
al diagnstico diferencial de las meningitis bacterianas y vricas, ya que se ha
comprobado que el 90% de las meningitis bacterianas cursan con un aumento del cido
lctico y que slo el 10% de las vricas cursan con aumento del cido lctico. Aumentada
en: Prematuros, meningoencefalitis bacteriana o fngica, tumores, hipoglucorraquia.
ADA (Adenosina Deaminasa)
Se encuentra en gran concentracin en los linfocitos T, aumenta en fase de maduracin y
activacin, sobretodo en enfermedades infecciosas, como respuesta inmune mediada por
clulas. Aumentada en meningitis tuberculosa, CMV.
CLORO
El valor normal es de 122 132 mmol/L. Se dosa igual que en sangre.
o
o
VDRL, FTA-ABS
Empleados para la deteccin de Neurosfilis.
DETECCIN DE ANTGENOS CAPSULARES
Las prueba de ltex pueden detectar: Antgenos de neisserias tipo a, b y c, Streptococcus
pneumoniae y Haemophylus influenzae tipo b. Algunas marcas incluyen la N. Meningitidis.
CEA
Para la deteccin de carcinoma metastsico.
CLULAS LE
Las clulas LE son Polimorfonucleares que fagocitaron restos nucleares alterados,
provenientes de la destruccin de los ncleos de otros leucocitos, por el llamado Factor
LE (factor nuclear). El Factor LE es un IgG-anti ADN que se fija a la superficie del ncleo
y determina alteraciones en la cromatina, convirtindolo en masa tumefacta y algo
homognea de color prpura o pardo rojizo y entonces al ser recubierto por anticuerpos,
es fagocitado por los neutrfilos. Cuando el ncleo alterado no es fagocitado sino slo
rodeado por varios neutrfilos se denomina roseta. La prueba no es totalmente
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especifica, debido a que enfermedades autoinmunes tambin generan clulas LE, y no
tiene gran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus.
REPORTE DE RESULTADOS:
Interpretacin de resultados:
Los resultados deben reportarse de inmediato, indicando si es necesario, las observaciones
del caso (muestra sin anticoagulante, etc).
Formato de reporte:
En el reporte de resultados deber incluir:
o
o
o
Examen Macroscpico
Examen Microscpico (directo y citolgico)
Examen Bioqumico
PARAMETRO
ASPECTO
HEMATIES
VALORES DE
REFERENCIA
Incoloro - Transparente
UNIDADES
-Cel/mm3
0 - 5
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LEUCOCITOS
DIFERENCIAL
Adultos
: 0 - 5
5 aos - pubertad : 0 - 10
1 a 4 aos
: 0 - 20
< 1 ao
: 0 - 30
Adultos : MN (97 99%)
PMN ( 1 3%)
- R. Nacido : MN (> 50%)
pH
GLUCOSA
PROTEINAS
7.30 - 7.40
Adultos : 45 - 80
Nios
: 70 - 90
R. Nacido : 30 - 70
Adultos (>60 a) : 30 - 65
(40 - 60 aos) : 20 - 55
(< 40 aos)
: 15 - 45
(6m 10a)
: 10 - 30
(3m 6m)
: 15 - 50
(1m 3m)
: 20 - 100
R. Nacido
: 20 - 150
Prematuros
: 20 - 400
ALBUMINA
COCIENTE:
Alb(lcr)/Alb(suero)
DHL
PCR
ELECTROLITOS
Cel/mm3
%
-mg/dL
mg/dL
10 - 30
mg/dL
9.0
mg/dL
U/L
mg/dL
mmol/L
MARCA
Roche
Wiener
Valtek
RANGO MEDICIN
2 - 750
0.5 - 150
4.0 - 1000
UNIDAD
mg/dL
mg/dL
U/L
Valores crticos:
Valores que se encuentran fuera del rango de referencia.
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REFERENCIAS:
Lquido Cfalorraqudeo y otros lquidos biolgicos. Marcelo Castillo Navarrete.
Departamento de especialidades mdicas. 2005.
Estudio de Lquidos Biolgicos. Lic.TM David G. Quispe Aranda. 2008.
Actualizacin en Lquidos Biolgicos. Dr. Enrique Ricart lvarez. Hospital Verge Dels
Lliris ALCOY. Nov.2008
ANEXOS
N/A
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Cualitativo
No analiticos
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---
Principio
---
---
Seccin
Politica
N/A
Autoridad y Responsabilidad
---
---
Muestra
---
---
Precauciones
---
---
Equipos
---
---
Materiales
---
---
Reactivos
---
---
Calibracin
---
---
Control de Calidad
---
---
Procedimiento
---
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Reporte de Resultados
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Notas de procedimiento
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Limitaciones
N/A
N/A
N/A
Referencias
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Anexos
N/A
N/A
N/A
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