1. Definir una enzima de restriccin.

Las enzimas de restriccin, tambin conocidas como endonucleasas, son enzimas

que cortan los enlaces fosfodister del material gentico a partir de una secuencia
que reconocen. Las mismas permiten cortar ADN de hebra doble, donde
reconocen secuencias palindrmicas (secuencias que se leen igual en ambas
direcciones).
Las enzimas de restriccin son endonucleasas que reconocen una secuencia de
ADN entre 4-8 bp. El sitio de reconocimiento se llama sitio de restriccin, y la
enzima rompe un enlace fosfodiester en la hebra de arriba (sens) y otro enlace
fosfodiester en la hebra complementaria (antisens).
2. Qu hace una enzima de restriccin?
Reconocen una secuencia de nucletidos para hacer un corte y destruir el ADN
extrao. Permiten destruir bacterifagos (virus que invaden a la bacteria). Se
podra decir que son tijeras moleculares que cortan ADN. Lo hacen en forma
especfica. Esto significa que cada enzima reconoce un sitio particular del ADN, es
decir que reconoce una secuencia particular de nucletidos. Esa secuencia
especfica para cada enzima se denomina sitio de restriccin. Una vez que la
enzima reconoce estos sitios, se posiciona sobre la molcula de ADN y corta
dentro o en torno de esa secuencia.
3. Describa las enzimas de restriccin de tipo II.
La restriccin ocurre en el sitio de reconocimiento. Estas enzimas tipo II son las
utilizadas en gentica molecular puesto que permiten romper el ADN en sitios
especficos, y as, recuperar secuencias conocidas. Se han identificado ms de
2300 endonucleasas de restriccin de tipo II. Se denominan Isoschizomeros a
aquellas enzimas que han sido obtenidas de diferentes especies de bacterias,
pero que reconocen la misma secuencia de DNA. Las enzimas tipo II,
dependiendo de su especificidad, al romper el ADN provocan 2 tipos de cortes:
A. Cortes pegajosos, dejando productos con extremos complementarios
(cohesivos) Ej: Eco RI y Pst I
B.

Cortes
Ej: Pvu II

simtricos,

dejando

productos

con

extremos

romos

Las secuencias de reconocimiento de las enzimas tipo II son de tipo palndrome

(se leen igual de izquierda a derecha que de derecha a izquierda)
4. Describa las enzimas de restriccin de tipo III.
Es similar al sistema tipo I, utilizan una enzima oligomrica que realiza todas las
actividades enzimticas, y rompen el DNA 25-27 bp, ms all del sitio de
reconocimiento. Realizan cortes en las dos hebras de ADN a distancias variables
y no especficas.
5. A partir de cules organismos se aslan enzimas de restriccin?
A partir de organismos procariticos (bacterias), donde actan como un
mecanismo de defensa, para degradar material gentico extrao que entre en la
clula. Las bacterias tienen la capacidad de metilar su DNA, lo cual sirve para
distinguir entre el DNA extrao y el DNA propio. Las enzimas de restriccin no
pueden cortar DNA metilado, de este modo solo afectan el DNA extranjero y no el
DNA bacterial.
6. Qu significa la palabra metiltransferasa?
Enzima (una protena que acelera las reacciones qumicas en el cuerpo) que une
grupos metlicos al ADN. Un grupo metlico es un grupo qumico que contiene una
tomo de carbono y tres tomos de hidrgeno. Tambin se llama metilasa de ADN.
7. Definir " una unidad " para las enzimas de restriccin.
Una unidad de enzima se define como la cantidad de la misma que se necesita
para cortar 1g (microgramo) de DNA en 1 hora.
8. Definir un isoschizomeros para una enzima de restriccin.
Los isoschizomeros son enzimas que reconocen un mismo sitio, pero que no lo
cortan en el mismo lugar. Las familias de enzimas comprenden enzimas que no
reconocen necesariamente los mismos sitios, sino que producen extremos
adhesivos iguales.
9. Definir cortes pegajosos, salientes o cohesivos.

Son los que cortan a las dos cadenas de ADN de manera escalonada. Dejando
productos con extremos complementarios (cohesivos) Ej: Eco RI
10. Definir palndromo.
Una palabra o frase que se lee igual de izquierda a derecha que de derecha a
izquierda. Las enzimas de restriccin cortan o digieren el material gentico a partir
de una secuencia que reconocen. La mayora de estas secuencias son
palindrmicas (secuencias que se leen igual en ambas direcciones)
11. Qu significa Eco RI?
E = gnero Escherichia co = especie coli R = cepa RV 13 I = primera
endonucleasa aislada de esta cepa. La enzima EcoRI es una protena formada
por dos cadenas polipeptdicas idnticas, que realizan un corte secuencial del
ADN. La endonucleasa de restriccin EcoRI es muy utilizada. Esta enzima
reconoce y corta el ADN siempre que localiza la secuencia de bases 5-GAATTC3, una secuencia palndroma (como es caracterstico de las enzimas del tipo II).
Las secuencias de este tipo tienen la propiedad de que leyendo cualquiera de las
dos cadenas en el sentido 5-3, se lee la misma de bases nitrogenadas. La
enzima EcoRI hidroliza los enlaces fosfodister que unen las bases G y A de cada
hebra, de este modo los cortes que crea son escalonados y dan lugar a la
formacin de fragmentos de ADN cuyos extremos tienen una corta regin
monocatenaria que resultar complementaria a las de los otros fragmentos. Los
extremos

pueden

permanecer

asociados

por

puentes

de

hidrgeno

desnaturalizarse (segn sean las condiciones de salinidad, temperatura, etc.),

produciendo entonces segmentos independientes, que se re asocian muy
fcilmente, por lo que tales extremos reciben el nombre de extremos cohesivos o
extremos pegajosos.
12. Qu es un corte de restriccin?
Las enzimas de restriccin cortan dejando extremos cohesivos o romos. Los
extremos cohesivos son generados cuando la enzima corta las dos hebras
asimtricamente, dejando los extremos de cada hebra de simple cadena
complementarios entre s. Por otro lado, los extremos romos son generados
cuando la enzima corta las dos hebras por el mismo lugar, generando dos

extremos

doble

cadena.

13. Describir una hidrlisis de restriccin en prctica.

Las enzimas de restriccin son endonucleasas que reconocen, con una alta
especificidad, una secuencia, normalmente palindrmica corta (4-8 pb) de DNA de
doble hebra, produciendo la rotura hidroltica de cada hebra en secuencias
concretas del DNA denominados sitios de restriccin. En las enzimas de
restriccin no naturales se trata de aumentar la secuencia de reconocimiento
hasta 15 pares de bases.
14. Cmo se determina la talla media de fragmentos de restriccin?
Si los sitios de restriccin fueran distribuidos al azar en la longitud de una molcula
de ADN, una enzima que reconocera una secuencia de 4 nucletidos, cortara
1/256 nucletidos, mientras que una enzima que reconocera 6 nucletidos
cortara en promedio 1/4.096 nucletidos. La digestin por EcoRI (secuencia de
reconocimiento de 6 nucletidos) de una molcula de ADN bacteriano de 4
millones de pares de bases donar alrededor 10 +3 fragmentos diferentes,
mientras que la digestin total de ADN de un mamfero va a producir alrededor de
10

+6

fragmentos.

15. Definir un RFLP

El trmino RFLP (del ingls Restriction Fragment Length Polymorphism) se refiere
a secuencias especficas de nucletidos en el ADN que son reconocidas y
cortadas por las enzimas de restriccin y que varan entre individuos. En un
cromosoma humano, una enzima de restriccin puede producir un gran nmero de
cortes en los lugares donde reconozca la secuencia especfica para hacerlo. Los
RFLP son marcadores gnicos del ADN y se pueden encontrar en regiones que
codifican protenas o exones, en los intrones o en el ADN que separa un gen de
otro.