MANEJO Y CONSERVACIN DE MUESTRAS

//////// RECOMENDACIONES GENERALES ////////

ESTUDIOS DE HEMATOLOGA ///
De cara un estudio hematolgico resulta conveniente extraer la sangre por puncin venosa evitando, si es
posible, las extracciones de venas de pequeo calibre, ya que las extracciones dificultosas y traumticas estimulan los mecanismos de coagulacin. Es recomendable emplear siempre de tubos de un solo uso y estriles.
El estudio de las clulas sanguneas, o hematologa propiamente dicha, requiere siempre el empleo de
sangre sin coagular, es decir, sangre total o entera.
El anticoagulante de eleccin en hematologa debe reunir las siguientes caractersticas bsicas: no alterar el
tamao de los eritrocitos, no producir hemlisis, evitar la agregacin plaquetaria y no alterar la morfologa de
los leucocitos. El ms indicado en este tipo de estudios es la sal potsica del cido etilendiaminotetraactico
(EDTA), bien la dipotsica (EDTA-K2) a concentracin de 3.7 a 5.4 M, o la tripotsica (EDTA-K3) a concentracin 3.3 a 4.0 M.
El uso de heparina est totalmente desaconsejado para este tipo de anlisis hematolgico, ya que favorece la
agregacin de plaquetas y conserva peor la morfologa celular. Otra importante premisa a tener en cuenta en
los estudios de hematologa es tratar de mantener siempre una correcta proporcin sangre/anticoagulante en
la muestra para obtener un correcto anlisis.
La muestra se ha de homogeneizar delicadamente, moviendo el tubo con movimientos oscilatorios suaves,
para evitar la hemlisis e impregnar bien la sangre con el anticoagulante para evitar la aparicin de pequeos
cogulos.
Las muestras de sangre para estudios hematolgicos deben analizadas tan pronto como sea posible tras su
recoleccin. Si se prev el retraso en su anlisis se deben refrigerar a 4 C durante un perodo mximo de
24 h. No se deben realizar contajes celulares en muestras sanguneas con ms de 3 das de antigedad. Las
muestras sanguneas para anlisis hematolgico no deben ser nunca congeladas, ni tampoco situadas en
contacto directo con los acumuladores trmicos empleados para el envo en refrigeracin.
La prolongacin excesiva del contacto entre la sangre y el anticoagulante altera la morfologa de los elementos celulares sanguneos, por lo que es muy recomendable realizar al menos dos frotis sanguneos, despus
de la extraccin de la muestra, para dejarlos secar al aire y ser remitidos junto con la muestra.

ESTUDIOS DE BIOQUMICA ///

De forma rutinaria, los laboratorios clnicos pueden utilizar suero o plasma para las determinaciones bioqumicas. El uso del suero es el ms difundido para este tipo de determinaciones, aunque tambin se puede usar
el plasma empleando heparina de litio o de sodio como anticoagulante, teniendo siempre en cuenta que ste
anticoagulante puede alterar algunas determinaciones.
En los estudios bioqumicos en los que se emplea suero para la realizacin de los anlisis, es necesario dejar
la sangre en reposo a temperatura ambiente durante 15-20 minutos para la adecuada formacin del cogulo.
Posteriormente, y al igual que se realizara con un muestra extrada con anticoagulante, la sangre se centrifuga durante 10-15 minutos a aproximadamente 1300-1800 G. Las rpm de centrifugacin difieren en funcin del
tamao del rotor centrfugo, sin embargo se suelen establecer entre 2500 3000 rpm.

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La separacin del cogulo suele ser perfecta si se emplean tubos de vidrio o de poliestireno tratados. Los tubos de plstico o de poliestireno sin tratar no son aconsejables, debido a que la retraccin del cogulo obtenido
es menor, ya que se adhiere a las paredes, e incluso se puede alojar en la parte superior del tubo, haciendo
que la separacin del cogulo sea ms dificultosa, pudiendo provocar hemlisis al intentar separar el cogulo.
Nunca se debe centrifugar la sangre antes de que se forme completamente el cogulo, en estas situaciones
se formarn cadenas de fibrina que retendrn en su arquitectura, enzimas (ALT, AST, lipasa...), substratos
(calcio, fsforo, colesterol...), iones (sodio, potasio, cloro...), protenas (anticuerpos, globulinas...), hormonas y
metabolitos, por lo que los resultados obtenidos a partir de estos sueros siempre sern menores -y por consiguiente inexactos- a los obtenidos de sueros adecuadamente procesados.
Es recomendable enviar la muestra de suero al laboratorio separada del cogulo, ya que los golpes sufridos
por las clulas en el cogulo durante el trasnporte, pueden provocar su rotura y la consecuente hemlisis.
Algunas pruebas bioqumicas (glucosa, K, Cl, P, bicarbonato, actividad enzimtica) requieren que el suero o
plasma se separen de las clulas lo ms rpido posible, dentro de un periodo no superior a una hora despus
de la toma de la muestra, debido a que si el tiempo transcurrido es mayor, los parmetros a medir variarn
como consecuencia de un intercambio entre las fases celular y lquida de la sangre, disminuyendo significativamente las concentraciones de dichos parmetros.
Una vez separado el suero o plasma, es conveniente remitirlo para su anlisis de inmediato, de no ser as, se
recomienda mantener las muestras de suero en refrigeracin (2-8C). Si se prev un retraso prolongado hasta
el anlisis, se pueden congelar las muestras de suero o plasma entre -8 y -20 C, ya que en trminos generales, a estas temperaturas la mayora de parmetros son estables al menos durante una semana.

ESTUDIOS DE HEMOSTASIA O PRUEBAS DE COAGULACIN ///

Dentro de los anlisis de rutina, los exmenes de coagulacin son los ms sensibles a las condiciones de extraccin de la muestra, la preparacin del paciente y el transporte. Estas muestras se alteran fcilmente si no
se realizan los procesos preanalticos de forma adecuada.
Los resultados de coagulacin se ven fuertemente afectados por una mala relacin sangre/anticoagulante,
por lo que se debe tener especial cuidado al momento de llenar estos tubos. Es importante homogenizar completamente la muestra con el anticoagulante a fin de evitar la formacin de pequeos cogulos que daaran
la calidad de la muestra, realizando siempre esta homogenizacin de forma delicada, moviendo el tubo con
movimientos oscilatorios suaves, para evitar la hemlisis.
El anticoagulante de eleccin para las pruebas de coagulacin es el Citrato Sdico al 3.8%, un anticoagulante
que acta a travs de la precipitacin del calcio. Para estas pruebas se emplea en proporcin de 1:9 (0,5 mL
de anticoagulante para 4,5 mL de sangre total). Es totalmente necesario e imprescindible mantener la relacin anticoagulante/ sangre para realizar las pruebas de coagulacin, los valores obtenidos sin mantener esta
relacin pierden el valor diagnstico.
Una vez obtenida la muestra, se debe homogenizar la dilucin y centrifugar inmediatamente a 2.500-3.000
rpm durante 10-15 minutos. A continuacin se debe separar el plasma otro tubo de plstico dentro de los 30
primeros minutos post-extraccin.
El plasma citratado debe conservarse refrigerado y el envo ha de ser rpido. Si no es as, en caso de envo
retardado, se puede congelar a -20 C (> de 4 horas hasta 15 das como mximo). Debemos tener en cuenta
que la congelacin / descongelacin puede producir la crioprecipitacin de algunos factores de coagulacin.

ESTUDIOS DE ORINA O URIANLISIS ///

Sea cual sea el mtodo de recogida (sondaje, cistocentesis), el objetivo debe ser mantener la flora normal, y
no contaminar la muestra con flora ambiental. La orina se debe depositar en un envase estril sellado y ha de
ser enviada al laboratorio lo antes posible.
El transporte debe hacerse en refrigeracin (2-8C), ya que el nmero de bacterias presente en la muestra en
el momento de la toma puede ser indicativo de infeccin urinaria, por lo que es sumamente importante que
no se multipliquen dentro de la orina entre su recoleccin y anlisis; se recomienda que la muestra no supere
un tiempo mximo de almacenamiento de 12 horas. Es imprescindible que en el formulario de anlisis figure
el mtodo de obtencin de la muestra de orina.

ESTUDIOS DE OTROS LIQUIDOS ORGNICOS ///

Una vez obtenido el lquido orgnico por las tcnicas habituales ste deber enviarse, a ser posible, en dos
alcuotas: una en tubo de EDTA para el recuento celular (GR, GB), y la otra en tubo sin anticoagulante para
estudio de diferentes parmetros bioqumicos (protenas, glucosa, bilirribina).
Tambin es recomendable realizar varias extensiones y secarlas al aire sin teir, para la posterior evaluacin
ptica de los tipos celulares.
El manejo y conservacin de estas muestras se har de acuerdo a lo expuesto para los anlisis sanguneos. Es
recomendable enviar las muestras refrigeradas (2-8C).
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