UNIVERSIDAD NACIONAL

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES

ESCUELA DE QUIMICA
CATEDRA DE QUMICA ORGANICA

LABORATORIO PROCESOS QUMICOS-BIOLGICOS

AISLAMIENTO Y OBSERVACIN DE BACTERIAS

ESTUDIANTES:
BRENDA MORA SANCHO
JOS D. HERRERA GONZLEZ

PROFESORA:
SANDRA VALDS DAZ

17 DE MAYO, 2013

Objetivos:
Observar en el microscopio las diferentes estructuras que poseen las bacterias.
Estudiar las diferentes funciones que estas puedan tener.
Analizar las distintas caractersticas en cada una de ellas.
Resumen
En esta prctica de laboratorio se estudi el aislamiento de microorganismos en cultivo puro y se
observ diferentes bacterias, mediante la fijacin de bacterias en porta objetos y la utilizacin de
diferentes reactivos. La estructura de una bacteria puede cambiar dependiendo de la sustancia en la
que se encuentre, as como de las funciones que esta pueda llegar a presentar. Al ser observadas al
microscopio se pueden conocer experimentalmente la estructura de algunas de ellas, para su
reconocimiento (bacilos, cocos, levadura, entre otras).
Introduccin
Qu son las bacterias?
Las bacterias son clulas procariotas muy abundantes que pueden encontrarse en cualquier medio
debido a la gran variedad de metabolismo que puedan presentar.1 Se han encontrado especies que
viven a temperaturas comprendidas entre el punto de congelacin y el punto de ebullicin del agua,
en agua salada y en aguadulce, en presencia y en ausencia de aire.2
Las paredes celulares de muchos, poseen un componente qumico comn, el peptidoglicano
(murena), que es el responsable de la forma y consistencia de la pared.2
Estas tienen una estructura celular conformada por:

Pared bacteriana: Es una estructura rgida que rodea la membrana plasmtica, da forma a la
bacteria y soporta fuertes presiones osmticas. Segn la pared hay dos tipos de bacterias
Gram (+) y Gram (-).

Membrana citoplasmtica: Se encuentran protenas integrales. Sus funciones son:

fotosntesis, respiracin celular, crecimiento y regeneracin de membrana plasmtica,
participa, acta en la replicacin del ADN.

Cpsulas: Son una estructura que aparece en algunas bacterias, Cumple las siguientes
funciones: resistencia a la desecacin, resistencia al ataque de clulas fagocticas y
anticuerpos del sistema inmune, fijacin alas de clulas hospedadoras.

Cromosoma bacteriano: Est formado por una sola molecular circular sper enrollada
asociado a pocas protenas. Se encuentran en una zona llamada nucleoide.

Flagelos: Son prolongaciones que sirven parar el movimiento de la clula bacteriana. Est
formado por un tallo que sale de la bacteria, est compuesto por flagelina (composicin
proteica).

Pilis: Son filamentos muy abundantes de naturaleza proteica. Cumple las siguientes
funciones: fijacin de sustratos, intercambio de molculas, intercambio de informacin
gentica.

Mesosomas: Prolongaciones internas de la membrana plasmtica que contienen enzimas

respiratorios y colaboran en el proceso de la divisin celular. Ribosomas: visibles
nicamente al microscopio electrnico, pueden estar libres o asociados. Intervienen en la
sntesis proteica.

Plsmido: Cromosoma accesorio de pequeo tamao que replica de manera independiente al

ADN bacteriano. Inclusiones: Son grnulos de reserva, en poca de abundancia, o bien son
residuos de su metabolismo. Estn formadas de polisacridos o gotitas de grasa.

Inclusiones: Son grnulos de reserva, en poca de abundancia, o bien son residuos de su

metabolismo. Estn formadas de polisacridos o gotitas de grasa.1,3

Se pueden encuentran en diferentes formas: esfrica o elipsoidal: cocos, son ms resistentes a los
cambios adversos del ambiente como la desecacin, cilndrica: bacilos, pueden tomar ms
fcilmente los nutrientes en solucin diluida, espiral: espirilos o espiroquetas, se propagan
rpidamente.4 Las bacterias se clasifican en dos grupos de Procariotas, el Dominio Archaea
(arqueobactereas), que engloba a los organismos ms antiguos del Planeta, y el Dominio Bacteria,
en el que se encuentran la gran mayora de los organismos bacterianos actuales, tambin conocidos
con el nombre de Eubacterias.3
Su forma de conseguir materia orgnica puede ser por diferentes medios:
Los auttrofos producen materia orgnica a partir de materia inorgnica ingerida y la energa
captada del ambiente, por ello tambin se denominan littrofas. Por otro lado los hetertrofos
ingieren materia orgnica extrayendo de ella la energa.3
Un medio de cultivo se denomina al procedimiento de cmo los microorganismos son desarrollados
en los laboratorios, los cultivos puros son aquellos microorganismos que provienen de una misma
clula.
Hay diferentes mtodos para aislar cultivos puros, puede se por la tcnica de siembra por estras que
lo que se hace es que se toma una muestra con un asa y se pasa a la superficie del medio de cultivo,
la tcnica por placa invertida que se agrega el microorganismo a tubos de agar fundido y enfriado, y
la tcnica de enriquecimiento de cultivo que mejora las posibilidades de crecer para algunos tipos
de bacterias.

Metodologa
Para la observacin de bacterias se aplicaron diferentes tcnicas con el objetivo de lograr una
prctica exitosa. Para la realizacin del frotis se tom una muestra de un cultivo con E. coli en
medio slido con el asa de siembra previamente flameado hasta obtener una coloracin roja, esto
para garantizar la toma de la pequea cantidad del cultivo en condiciones aspticas, luego
homogenizando con una gota de agua sobre el portaobjetos se realiz el frotis sobre ste porta
colocando otro haciendo un ngulo de 45 y haciendo un poco de presin se desliz rpidamente el
segundo porta sobre la preparacin para pasar a la tcnica de fijacin.
Fijacin por calor: Se realiz una fina extensin de una gota de muestra lquida sobre un
portaobjetos y se dej secar al aire; a continuacin, se pas la preparacin de forma rpida sobre la
llama de un mechero. El calor de la llama mata las clulas microbianas por desnaturalizacin de sus
protenas. Las protenas coaguladas unen las clulas al porta. Cuando se desea fijar especmenes
delicados se utiliza la fijacin qumica, va que es menos lesiva que el calor. Para ello se aade una
gota del fijador, por ejemplo, cido smico, formaldehdo, o glutaraldehdo, sobre la muestra
lquida con los microorganismos.
Despus de la fijacin, se aadi el colorante cristal violeta, que debe permanecer el tiempo
suficiente en contacto con el espcimen, en este caso fue de cinco minutos, para que pueda ser
absorbido. A continuacin, se retir el exceso de colorante, normalmente lavando con agua desde la
parte superior del porta ya que si se aplica directamente a ste es posible que pueda arrastrar parte
del frotis consigo. Por ltimo se sec el portaobjetos con papel filtro y se procedi a mirar la
preparacin en el microscopio.
Despus se realiz el montaje definitivo de la preparacin. En esta tcnica se vertieron las
siguientes soluciones mantenindolas como mnimo cinco minutos sobre la preparacin cada una,
en el siguiente orden: Alcohol 70, Alcohol 95, Acetona pura, Acetona-xilol y Xilol. Esto con el
objetivo de que la preparacin quede totalmente deshidratada.
Por ltimo se monta la preparacin empleando Blsamo de Canad, el cual una resina fluida
obtenida del abeto abies balsamica. El uso ms frecuente es como medio de montaje para
preparados histolgicos o citolgicos. Es usado, porque su ndice de refraccin es idntico al del
vidrio, conserva la calidad y coloracin de las preparaciones microscpicas y dura muchos aos. Sin
embargo no se realiz.
Hoy en da se utilizan ms los medios de montaje sintticos por la ventaja que da el secado ms
rpido, pero prcticamente ninguno de ellos iguala la calidad del Blsamo de Canad natural.
El olor peculiar del Blsamo de Canad natural es muy agradable para quienes trabajan en
laboratorios y produce cierto placer como el de la tinta de un libro, o el de la madera de un buen
lpiz.

Bacteria del yogurt

Se disolvi una gota de yogurt con una gota en agua, se fij con calor para eliminar la grasa, se tio
con cristal violeta al 1% por dos minutos y por ltimo se observ en el microscopio.
Bacteria del vinagre
No se realiz
Bacterias del sarro dental
Se tom una pequea porcin de sarro dental al rozar papel filtro sobre los dientes, enseguida este
se frot en el portaobjetos, luego se ti con cristal violeta al 1% por dos minutos y finalmente se
observ en el microscopio.
Bacterias en el agua sucia
Se tom una pequea porcin de agua, se fij con calor se le agreg cristal de violeta al 1% y se
dej reposar, al final se observ en el microscopio.

Resultados
La observacin de las estructuras de hongos y bacterias en diferentes sustancias (vinagre, pan,
yogurt, sarro dental, entre otras) se realiz mediante procesos que llevan al reconocimiento de las
mismas por medio del microscopio.

Fig1. Bacterias del Yogurt

Lactobacillus bulgaricus (acidificante)

Streptococcus termophilus (aromtico)

Fig.2 Bacterias E. coli

Fig.3 Bacteria Staphylococcus

Fig. 4 Bacterias del agua sucia

alga cianofita

alga parda

radiolario

Fig5. Bacterias sarro dental

Discusin
Para lograr una prctica exitosa se debi seguir el procedimiento indicado, adems de tener algunos
cuidados extra, pero no menos importantes. En la realizacin del frotis se debi calentar el asa de
siembre sobre la llama del mechero antes de tomar la porcin de cultivo de las bacterias hasta que
tomar un color rojo intenso, esto para evitar contaminar el cultivo y matar cualquier organismo que
este en ella y garantizar la preservacin del cultivo en condiciones aspticas. Result importante
presionar sobre las regiones ms externas del cultivo con el asa de siembra, para saber en qu
momento se poda tomar la bacteria sin ser quemada, esto se saba si al presionar, no se derreta ni
cambiaba el medio de cultivo.
En la parte de la fijacin hay que tener cuidado al fijar las bacterias con calor ya que la fijacin por
calor posee algunos inconvenientes. Por ejemplo, a menudo distorsiona la apariencia real de las
clulas, lo cual dificulta la identificacin; adems, no permite la observacin del movimiento de los
microorganismos. Por lo que es preferiblemente hacer la fijacin con metanol ya que sta preserva
la morfologa de las clulas husped as como de las bacterias y es especialmente til para examinar
muestras de sangre.

Dentro de los posibles errores que se pudieron cometer fueron no respetar exactamente los tiempos
de cinco minutos en los diferentes tipos de disoluciones, ya que la deshidratacin de las clulas no
es ptima pues no se deshidratarn lo suficiente. Debido al error anterior no se realiz el montaje
con el Blsamo de Canad ya que al no dejar los cinco minutos la preparacin en cada disolucin y
no escurrir el porta entre cada adicin, el proceso de deshidratacin de las clulas fue ineficiente,
por lo que se opt por no utilizarlo, adems que es un sistema de montaje muy caro. Otro posible
error pudo ser que a pesar de esperar el tiempo necesario con el colorante este no se fijara del todo
bien. Por ltimo se le aplic un colorante previamente establecido cristal violeta y se dej actuar,
esto fue para, al observar las muestras al microscopio, poder diferenciar las bacterias del resto de
organismos existentes en el producto observado. Por ultimo quito el exceso de colorante y se
observ las muestras en el microscopio y se clasific cada una de las bacterias vistas. Por ejemplo:
en el yogurt se observaron bacilos, en el limn cocos, en el pan se apreci el hongo de la levadura, y
en el sarro dental y el agua de charca se observaron diferentes tipos organismos como una alga
cianofila, una alga parda y un radiolario.

Conclusiones

Se conocieron las diferentes formas de una bacteria.

Se estudiaron las distintas caractersticas que estas puedan presentar, dependiendo de la
sustancia en que se encontraran.
Se estudiaron las funciones de estas, as como los beneficios que pueden brindarnos, como
los daos que nos pueden causar si no se tratan con sumo cuidado.

Bibliografa
Hernndez A., MICROBIOLOGA INDUSTRIAL, Editorial EUNED, 1 Edicin, Costa Rica,
pgs.: 16-19.
Prieto, J., Navarro, J., (2011). MICROBIOLOGA EN CIENCIAS DE LA SALUD:
CONCEPTOS Y APLICACIONES, Editorial Elsevier, 3 Edicin, Espaa, pgs.: 18-19.
Forbes, Sahm, Weissfeld. DIAGNSTICO
Panamericana, 12 Ed, Espaa, pgs..: 80-81

MICROBIOLGICO,

Editorial

Mdica

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni_02/56/cap304.htm
. Se obtuvo el 21/05/2013
www.selectividad.net/cem/apuntesexamenes/apuntes/biologia/bacterias.pdf. Se obtuvo el 17/05/13

www.unsa.edu.ar/matbib/micragri/micagricap1.pdf. Se obtuvo el 17/05/13

www.iesbanaderos.org/html/departamentos/biogeo/Apuntes/Bio/T
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www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf. Se obtuvo el 17/05/13