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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRO PRETO


DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA

RCG - 213
FISIOLOGIA DE MEMBRANAS

Coordenao: Prof. Dr. Wamberto A. Varanda


Departamento de Fisiologia

2013

FISIOLOGIA DE MEMBRANAS - 2013


1- Objetivos: Este curso tem como objetivo central fornecer ao estudante os aspectos bsicos do
funcionamento da membrana celular, enquanto responsvel por trocas entre intra e
extracelular, pelo fenmeno da excitabilidade eltrica e como unidade receptora de hormnios,
transmissores ou frmacos.
2- Enfoque de Ensino: Embora procurar-se- enfocar os vrios tpicos a partir de exemplos
macroscpicos, o curso dar nfase a aspectos fsico-qumicos e moleculares. Por isto mesmo,
pode-se classificar o enfoque como mecanicista.
3- Pr-requisitos: Os seguintes pontos devero ter sido abordados em outras unidades:
1) Lipdios e sua estruturao numa bicamada. Tipos; cargas; fluidez; etc..
2) Viso morfolgica da membrana celular: freeze fracture: modelos, etc..
3) Protenas: estruturao; mudanas conformacionais, etc..

4- Divises: Este curso est divido em duas partes:


4.1 Biofsica e Eletrofisiologia de Clulas onde sero abordados aspectos relativos a
gnese e transmisso de informaes eltricas entre as clulas. Com carter essencialmente
fsico-qumico, analisar-se- desde aspectos termodinmicos do transporte de substncias
atravs de membrana at suas conseqncias em termos eltricos.
Responsvel: Prof. Dr. Wamberto A. Varanda Depto. de Fisiologia
4.2 Bioqumica de Sistemas Transportadores aqui a viso dever centrar-se nos aspectos
moleculares e bioqumicos dos vrios sistemas de transporte, presentes nas clulas, que
permitem seu funcionamento como um sistema termodinmicamente aberto.
Responsvel: Prof. Dr. Joquim Coutinho Neto Depto. de Bioqumica

PARTE I BIOFSICA E ELETROFISIOLOGIA DE CLULAS


PROGRAMA TERICO
O programa que segue refere-se somente a parte 4.1, as demais devero ser publicadas pelos
respectivos docentes. Os tpicos listados abaixo tem o propsito de ressaltar ao estudante os
pontos essenciais que sero abordados durante o curso e que dele sero exigidos.

1- Introduo ao curso: estruturao; justificao; pensamento filosfico.


2- Transporte de substncias em meio homogneo

2
2.1. Bases Fsico-Qumicas
Movimentao de partculas em soluo
Foras e fluxos
Fora fenomenolgica (qumica) e de campo
Interconverso de energia: gradiente-qumico/eltrico
Conceito de energia livre: equilbrio e estado estacionrio. Potencial
qumico e eletroqumico.
Difuso: mobilidade e coeficiente de difuso.
3- Fluxos atravs de membranas
3.1. Conceito de fluxo: unidirecional e resultante
3.2. Equao de Nernst-Planck
3.3. Coeficiente de partio
3.4. Casos particulares da Equao de Nernst-Planck
Difuso: Lei de Fick, Permeabilidade
Migrao Inica - eletroforese
3.5. Vias de permeao atravs de Membranas Biolgicas: Canais, Carregadores e Bombas
3.6. Patologias associadas a canais inicos
4- Transporte de gua
4.1. Osmose e presso osmtica
4.2. Osmolaridade
4.3. Coeficiente de reflexo
5 -Ions e Potencial de Membrana
5.1. Mecanismo bsico: Separao e reunificao de cargas (mobilidade inica).
5.2. Lei de Ohm central: definio de corrente eltrica, potencial eltrico e condutncia
(resistncia).
5.3. Introduzindo o nmero de Faraday: ions em soluo carregam corrente.
5.4. Gradientes inicos e diferena de potencial eltrico (interconverso de energia) Potenciais eltricos de juno - papel da mobilidade inica.
5.5. Eletroneutralidade de solues inicas: o nmero de cations igual ao nmero de
anions.
5.6. Diferena de Potencial eltrico atravs de uma membrana.
a) situao de equilbrio: A equao de Nernst.
b) situao de fluxo: A equao de Goldman, Hodgkin e Katz.
5.7.
5.8.

Metodologia Eletrofisiolgica
Introduo a circuitos equivalentes: foras eletromotrizes, D.P. de membrana e
condutncia. Curvas I-V: Potencial de reverso e seletividade.
6. Origem e manuteno do potencial de repouso em clulas (clula muscular esqueltica como
exemplo)
a) Observaes Experimentais: propriedades eltricas passivas da membrana:
resistncia e capacitncia. - Passando corrente atravs da membrana celular:
polarizao; despolarizao; hiperpolarizao; repolarizao- circuitos
equivalentes.

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b) Atividades inicas intra e extracelular - anlise das diferenas de composio
entre os dois meios, quantificao das concentraes, manuteno dos
gradientes inicos, manuteno do volume celular.
c) O meio interno e a importncia de sua manuteno para a sobrevida celular
d) Ions equilibrados e desequilibrados - A ATPase Na/K
e) Diferenas de permeabilidade como condio para existncia da DP de
repouso.
6.1. Equilbrio de Donnan - uma situao terminal para as clulas.
6.2. Vias de permeao inica nas membranas celulares: canais inicos e sua evidenciao
eletrofisiolgica.
7. Propriedades Eltricas Passivas da Membrana Celular
7.1. observaes bsicas condutncia e capacitncia da membrana
7.2. o axnio como cabo propriedades dependentes de tempo e espao.
7.3. transmisso passiva da informao eltrica.
8. Bases Inicas do Potencial de Ao
8.1. Potenciais de nervo (extracelulares)
8.2. Potencial de ao numa clula medida intracelular (microeletrodos)
8.3. Excitabilidade dependendente de voltagem
8.4. Limiar de disparo e tudo ou nada.
8.5. Perodos refratrios
8.6. Correntes inicas envolvidas no potencial de ao disseco farmacolgica
8.7. Condutncias dependentes de voltagem- a tcnica de voltage clamp.
8.8. Canais inicos dependentes de voltagem ativao e inativao
8.9. Conduo do impulso nervoso axnios mielinizados e amielnicos.
8.10. Tipos de potenciais de ao
9. Comunicao entre Clulas
9.1. Transmisso Sinptica a juno neuromuscular como exemplo
9.2. Eventos eltricos no processo de transmisso PIPS e PEPS
9.3. Correntes de Placa Motora tipos
9.4. Ativao Sinptica
9.5. Somao.

9.6. Transmisso clula a clula gap junctions


. evidenciao
. tipos e ocorrncia
. caractersticas eltricas bsicas
. conexinas

10. Acoplamento Excitao-Contrao


10.1. Aspectos estruturais bsicos

4
10.2. Tbulos T e potencial de membrana
10.3. A triade transmisso do impulso eltrico ao retculo sarcoplasmtico
10.4. O receptor de rianodina
10.5. A liberao de clcio do retculo sarcoplasmtico

11 - Bibliografia Bsica
Os livros aqui citados possuem captulos de interesse para essa parte do curso
-

Fisiologia ed. Berne and Levy Elsevier Editora LTDA 2004 Texto bsico traduzido de
edio americana.

Fisiologia ed. Mello Aires, M. - 3a edio Guanabara Koogan 2008 Livro de autores
nacionais compreendendo toda fisiologia. Parte referente a esta disciplina est bem tratada
aqui.

12 - Sites que contm material relacionado ao curso: Os stios aqui relacionados podem ser utilizados para estudo. Se voce quizer achar outros, faa
uma procura na internet e utilize como palavras chave o seguinte: electrophysiology; membrane
potential; action potential; patch clamp; cell excitability; etc.
http://ifcsun1.ifisiol.unam.mx/Brain/ionchan.htm
http://human.physiol.arizona.edu/SCHED/CV/Wright/14membra.htm
http://hyperphysics.phy-astr.gsu.edu/hbase/biology/mempot.html
http://pb010.anes.ucla.edu
http://sky.bsd.uchicago.edu/lcy_ref/synap/resting.htm

13 Algumas constantes que podero ser utilizadas para resoluo de problemas:


- constante dos gases (R) 8,31 j.oK-1.mole-1
- Nmero de Avogadro (N) 6,02 x 1023
- Constante de Faraday (F) 96500 coulomb/equivalente
-

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Questes para o seminrio sobre Transporte e Bioeletrognese
1) As concentraes de cloreto dentro e fora de uma clula muscular esqueltica so 3,5 e 110
mM, respectivamente.
a) Calcule qual deve ser a energia necessria para transportar 1 mol desse ion de dentro para
fora da clula e de fora para dentro. Comente seus clculos.
b) Assuma, agora, que exista atravs da membrana celular uma diferena de potencial eltrico
igual a -88 mV, lado interno negativo. Recalcule a energia envolvida no transporte desse ion de
dentro para fora e de fora para dentro da clula. Comente seus achados.
Utilize temperatura igual a 22 oC em ambos os casos.
2) Na figura abaixo tem-se a permeabilidade da membrana de hemcias a uma srie de amidas
em funo do coeficiente de partio ter/gua. Foram analisadas hemcias de co (linha
contnua) e hemceas humanas (linha tracejada).

P=propionamida; B=butiramida; V=valeramida; IB=isobutiramida; IV=isovaleramida


a) Tome a srie PBV tanto para hemcias de co como para hemceas humanas:
por que a permeabilidade aumenta com o coeficiente de partio?
b) Observe que para a srie PBV, hemceas de co tm permeabilidades maiores
que as humanas. Faa suposies generalizadas que possam explicar a relao
entre permeabilidade e composio da bicamada lipdica.

3) Suponha um experimento onde glbulos vermelhos foram colocados nas seguintes solues:
3.1 300 mM de sacarose e permaneceram com o volume intacto.

6
3.2. 300 mM de sacarose e aps algum tempo adicionou-se 200 mM de uria. O resultado foi o
mostrado abaixo:

3.3. 400 mM de uria e estouraram.


Discuta:
a) Classifique essas solues quanto a osmolaridade e tonicidade.
b) Por que no item 4.2 o volume das hemcias retornou ao valor inicial? O que
isto indica?
c) Qual a osmolaridade plasmtica? Que substncia a principal responsvel por
ela?
d) Qual o (coeficiente de reflexo) da sacarose? E da uria?

4) A tabela abaixo mostra valores de concentrao de cations e anions difusveis e de protenas


no plasma e no lquido intersticial. Calcule quais devero ser as concentraes de cations e anions
difusveis no interstcio. Comente seus clculos e os resultados encontrados.
Nota: ax2 + bx + c = 0; x =

Proteinato
Ctions difusveis
Anions difusveis

b b 2 4ac
2a
Plasma (mM)
17,0
161,0
144,0

Interstcio (mM)
4,0
?
?

4) O eletrodo de vidro, comumente usado para determinao de pH, pode ser visto
simplesmente como uma membrana altamente seletiva a ions H+. Monte um esquema onde
essa membrana estaria separando dois compartimentos com solues de atividade
hidrogeninica distintas. Correlacione seu esquema com um eletrodo. Para uma dada

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diferena de atividade de ions hidrognio entre os lados (1) e (2) da membrana desenvolvese uma DP atravs da mesma. Qual a relao entre esta DP e as atividades de H+? Explique.

5) A figura abaixo foi retirada de um trabalho de Hodgkin e Horowicz (1959). Trata-se da


investivao, por tcnicas eletrofisiolgicas, da origem do potencial de repouso e das
permeabilidades inicas da membrana celular de msculo semitendinoso de r.

Em soluo de Ringer (soluo idntica ao plasma na composio em eletrlitos) o potencial de


repouso de -98 mV. Nestas condies o potencial de membrana (Vm) igual ao potencial de
equilbrio para o cloreto (Ecl). Quando a soluo de Ringer instantaneamente trocada por uma
outra com menor concentrao de Cl (30 mM) e idntica quanto aos demais ions, observa-se uma
rpida despolarizao da membrana, seguida de repolarizao. Ao se retornar soluo de Ringer
tem-se um traado que praticamente uma imagem especular do anterior. Discuta:
a) As variaes do potencial de repouso que se observam nas mudanas sbitas de
concentrao do Cl no meio extracelular. Pode-se concluir que a membrana
permevel ao cloreto? Por que? Explique a repolarizao que se observa ao se manter a
fibra muscular na soluo de baixa concentrao de Cl.
b) Para um dado valor estvel do potencial de repouso, se voc pretendesse calcular o
potencial de repouso pela equao de Hodgkin-Katz e Goldman, sabendo as
concentraes dos ions e suas permeabilidades, voc consideraria o cloreto na
equao? E nos transientes?
c) Se se inibisse a bomba de Na/K com ouabaina, o que deveria ocorrer com o potencial
de repouso? Por que?

8
5) A figura abaixo mostra registros temporais da corrente inica que passa por um nico
canal de potssio ativado por clcio, observado em clulas de Leydig, a um potencial de +
60mV (lado intracelular do canal positivio) e com concentraes de K+ iguais em ambos
os lados.

Deflexes para cima significam corrente passando pelo canal.


a) Estime a condutncia do canal.
b) Analise as oscilaes de corrente. Explique-as. Qual o significado dessas oscilaes
para a condutncia da membrana celular, que contm milhares desses canais por
micrmetro quadrado?
c) Que argumentos voc usaria a favor do canal e contra a difuso facilitada neste caso?
6) Os dados abaixo foram extrados do trabalho de Hodgkin e Horowics (1959) onde foram
medidas as diferenas de potencial eltrico, atravs da membrana celular do msculo
semitendinoso da r, em vrias condies de composio inica da soluo externa.

KO (mM)
0,5
1,0
2,5
5,0
5,0
10,0
30,0
80,0

D.P. da Membrana (mV)


-117,0
-109,0
-94,0
-80,0
-80,0
-65,0
-38,0
-14,0

9
onde: KO = concentrao de K+ na soluo banhante; D.P. = diferena de potencial eltrico
atravs da membrana, sinal refere-se ao intracelular. A fim de manter a eletroneutralidade das
solues as mesmas continham outros ions que no interessam ao problema. Sacarose foi usada
para se manter a osmolaridade.
Com base nos dados analise as seguintes questes:
a) Coloque em grfico o valor da DP medida contra o log da concentrao externa
de K+. Que concluso voc pode tirar deste achado? Explique.
b) Que tipo de equao descreve os dados em sua totalidade?
c) Trace, sobre os pontos, a linha esperada considerando-se que a funo fosse
descrita pela equao de Nernst. Por que os pontos iniciais fogem dessa linha?
Explique.
7) Os resultados mostrados nos grficos que seguem, foram obtidos em neurnios de
moluscos com a finalidade de entender-se os fatores determinantes do potencial de
repouso. Foram feitas determinaes do mesmo, com microeletrdios, em funo da
concentrao externa de K+ em diversas temperaturas. Leia com ateno a legenda das
figuras.

Potencial de repouso dependente de [K]o em neurnios de moluscos. A, os potenciais de


repouso medidos a 11oC se afastam do potencial de equilbrio do potssio (EK) exceto para
[K]o elevados. As linhas 1 e 2, dadas pela equao do campo constante, para dois valores de
PNa/Pk, tambm se afastam dos pontos experimentais. B, A 4o C, mas no a 17 oC, a linha
dada pela equao do campo constante se ajusta aos pontos assumindo-se PNa/Pk = 0.033:
[K]i =235mM. PNa = permeabilidade a sdio e PK=permeabilidade a potssio.

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Discuta:
a) Que tipo de concluses se podem tirar desses dados com respeito a bomba de
Na/K ? Explique.

8) O esquema abaixo representa uma clula com as concentraes intra e extracelulares dos
principais ons indicadas em mEq/l.
Na+ = 144,0
Na+ = 10,0

K = 4,0
2+

K+ = 160,0

Ca = 2,3
-

Ca2+ = 10-7

Cl = 110,0
HCO3 = 25,0

Cl- = 3,5

Proteinato = 2,0

HCO3 = 8,0

_
+ 87 mV

Proteinato = 17,0

Discuta os seguintes tpicos:


a) Considerando-se que as concentraes de protena dentro e fora da clula so
diferentes e, que as mesmas no permeiam a membrana celular, seria de se
esperar um movimento resultante de gua para o interior celular (inchamento),
o que poderia levar a um rompimento da membrana. Qual o mecanismo
desenvolvido pela clula que lhe permite regular seu volume e, portanto, no
estourar?
b) Considerando-se as concentraes inicas acima e a Diferena de Potencial
atravs da membrana, medida com um microeletrdio de vidro, quais as
hipteses mais plausveis que explicariam a origem dessa D.P.? Explique.
c) Considere a razo entre as permeabilidades ao sdio e potssio. Como essa
razo pode determinar o nivel de potencial atravs de uma membrana. Que
equao relaciona Vm a permeabilidade?

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Fisiologia de Membranas RCG-213
Questes para o seminrio sobre Excitabilidade Celular

1 Suponha um experimento onde um axnio gigante de lula impalado com uma srie de
microeletrodos, para injeo de corrente (estim) e para registro de voltagem (reg), como mostrado
na figura abaixo.
estim
reg0
1

reg1
2

reg2
3

reg3
4

reg4

1 mm

Assuma que o potencial de repouso deste axnio seja de 60 mV e que s estejamos analisando
as propriedade passivas do mesmo, isto , nossos estmulos no geram potenciais de ao.
a) Aps aplicarmos um estmulo no ponto marcado pelo eletrodo de estimulao, observou-se
que a voltagem em reg0 foi V; em reg1 foi 0,606V; em reg2 foi 0,36V; em reg3 foi 0,21V
e em reg4 foi
0,13V. Calcule a constante de espao deste axnio. (resolva o problema
graficamente).
b) Monte um circuito eltrico equivalente desse axnio e explique o porque da queda na voltagem
a medida que nos distanciamos de reg1. Que parmetros voc alteraria no seu circuito para que a
Voltagem caia mais acentuadamente com a distncia e menos acentuadamente? Correlacione seus
parmetros eltricos com o existente numa clula.
c) Compare a conduo neste axnio amielnico com aquela observada em axnios mielinizados.
Qual a vantagem da mielinizao? Porque?
d) Quais as alteraes de conduo que voc esperaria ocorrer em axnios de pacientes sofrendo
de um processo de desmielinizao? Explique.
2 Num experimento com uma clula excitvel qualquer procedeu-se a aplicao de um pulso de
corrente com amplitude de 2 nA e durao de 100 ms, obtendo-se a resposta de potencial
mostrada na figura abaixo.
a) Defina constante de tempo e calcule-a para esta clula.
b) Que propriedades da membrana definem esta varivel? Explique.
c) Associe a constante de tempo de uma dada clula com sua capacidade de gerar uma atividade
rtmica de disparo do potencial de ao. Discuta a condio para se ter uma freqncia alta e
uma mais baixa de disparos.

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3 O potencial de ao sempre seguido de um perodo onde a excitabilidade da clula est


reduzida, e que pode ser dividido em duas partes: refratrio absoluto e refratrio relativo.
Descreva esses perodos e analise os mecanismos operantes na membrana celular responsveis
pelos mesmos.
4 - Tetrodotoxina (TTX) uma toxina que apresenta alta afinidade pelo canal para sdio de
tecidos excitveis. Realizaram-se dois experimentos de ligao dessa toxina utilizando-se axnios
mielinizados e amielinizados. A toxina era marcada de forma a poder-se localiza-la em seus stios
de ligao. Discuta a distribuio da mesma nesses dois tipos de axnios ressaltando as
diferenas entre eles.
5 A despolarizao que ocorre durante um potencial de ao propaga-se passivamente para
ambas as direes, a partir do ponto onde est sendo gerado o potencial de ao. No entanto, o
potencial de ao caminha somente em uma direo. Explique.
6 Os registros abaixo referem-se a correntes inicas atravs de um nico canal para sdio em
condies normais (Wild Type) e em clulas que possuem canais para sdio com uma mutao
no aminocido 1592, que passou de uma Metionina para uma Valina (HyperPP M1592V)). O
experimento foi realizado partindo-se de um potencial hiperpolarizado (-120 mV) para um
despolarizado (-40 mV) pelo tempo indicado acima dos registros.
a) Compare os dois traados e descreva-os qualitativamente, ressaltando as diferenas.
b) Faa inferncias sobre o que dever acontecer com o potencial de ao e de repouso num
indivduo acometido por essa mutao, em comparao com o normal.

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7 Hodgkin e Katz foram dos primeiros a investigar os mecanismos de gnese e propagao de


potenciais de ao. Os registros abaixo foram retirados de um de seus trabalhos publicado em
1949, onde os autores mediram potenciais de ao em axnios gigantes de lula em funo da
concentrao de Na+ no lquido que banhava o axnio.
Em A a concentrao de sdio foi reduzida para 33 %, em B para 50 % e em C para 70 % do
normal. Em cada grfico o nmero 1 indica o controle (100% de sdio); 2 indica a situao de
sdio alterado e 3 indica o retorno a situao controle.

33%

50%

70%

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a) Descreva as observaes qualitativamente enfatizando o papel do sdio no processo.
b) Que tratamento voc daria aos dados no sentido de comprovar a participao do on sdio no
processo? Comente.
c) O potencial de repouso dessas clulas encontra-se ao redor de 50 mV. Note que apesar de
reduzirmos a concentrao de sdio no meio externo este potencial no se altera. O que isso
indica? Porque?

8 Hodgkin e Huxley notabilizaram-se pelos estudos que fizeram a respeito dos mecanismos de
gnese e propagao do impulso nervoso. Por seus trabalhos ganharam o Prmio Nobel de
Fisiologia e Medicina em 1963. Uma de suas descobertas mais marcantes relaciona-se s
correntes inicas envolvidas durante um potencial de ao, descritas com a tcnica de voltage
clamp. Neste tipo de experimento, impe-se uma voltagem atravs da membrana, que
permanece fixa durante certo tempo, e medem-se as respostas de corrente em funo do tempo.
Nos registros mostrados abaixo uma clula qualquer foi mantida a 80 mV e no tempo indicado
o pulso de voltagem foi alterado em passos de 15 mV entre 60 e +60 mV (portanto: -60, -45, 30, -15, 0, +15, +30, +45 e +60 mV; conforme indicado pelos nmeros ao lado dos traados de
corrente e pela figura com linhas retas abaixo dos traados de corrente) obtendo-se para cada
voltagem as respostas de correntes mostradas. As concentraes extra e intracelulares do Na e K
nesse experimento foram: Na: 145 e 10 mM; K: 4 e 140 mM, respectivamente.

+60 mV

-60 mV

-45 mv
-30 mV

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a) Analise a figura qualitativamente e descreva o decurso temporal das correntes obtidas em
cada voltagem aplicada.
b) Mea as amplitudes dos picos de correntes observados logo no incio do pulso e coloque em
grfico contra a voltagem. Faa o mesmo para a corrente estacionria (ao redor de 7 ms).
Conclua a respeito das espcies inicas responsveis por carregarem essas correntes atravs
da membrana celular. Explique.
c) Mostre em esquema como ficariam essas correntes se fossem medidas na presena de
Tetrodotoxina (TTX) e de Tetraetilamonio (TEA). Por que?

9 Esquematize os potenciais de ao observados numa clula muscular cardaca e numa fibra


muscular esqueltica. Quais as diferenas mais marcantes? Correlacione estas diferenas com
aspectos funcionais particulares desses dois tipos de clulas. Explique.
10 A exemplo do que ocorre com registros eletrocardiogrficos, os potencias de ao tambm
podem ser registrados extracelularmente, particularmente em nervos (um conjunto de axnios). O
experimento consiste em colocar-se um eletrodo estimulador num ponto qualquer e eletrodos de
registro na superfcie do nervo, a distancias variveis do primeiro. Perceba que conhecendo-se a
distancia entre os eletrodos e anotando-se o tempo entre o estmulo e a resposta observada no
eletrodo de registro pode-se calcular a velocidade de conduo do potencial de ao. Note ainda,
que as fibras que compem um nervo possuem dimetros distintos. Erlanger e Gasser (1937)
foram dos primeiros a realizar essas medidas em nervos sensoriais. Um dos seus achados
encontra-se mostrado abaixo:
a) Observe a figura e descreva-a qualitativamente.
b) Calcule a velocidade de conduo para os componentes e do potencial de ao. Que
parmetros estruturais dos neurnios podem estar determinando as diferenas nas velocidades
de conduo? Explique.
c) Compare, explicitando as diferenas, o potencial de ao composto, medido
extracelularmente num nervo, com aquele medido intracelularmente.

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-Estes potenciais de ao compostos foram obtidos como descrito acima. A escala a esquerda
indica a distncia a partir do eletrodo de estimulao at o ponto de medida do potencial de ao.
A letra S em cada traado indica o momento em que o estmulo foi aplicado. Note a marcao do
tempo em ms no traado indicado como msec.

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10 O experimento, cujos resultados so mostrados na figura abaixo, foi realizado medindo-se a
condutncia a sdio (gNa) numa clula nervosa, quando a mesma era despolarizada de 60 mV
(potencial de repouso) para 0 mV, em voltage clamp. Perceba que os pulsos despolarizantes
foram aplicados em dupla, sendo que o intervalo entre eles foi aumentando gradativamente nos
trs registros mostrados

a) Analise o que acontece com a condutncia em cada caso.


b) Como explicar que a condutncia varie com o intervalo de tempo entre os estmulos?

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Fisiologia de Membranas RCG-213
Questes para Seminrio sobre Transmisso Sinptica e Gap Junctions

1 Quais as caractersticas que distinguem uma sinpse qumica de uma sinpse eltrica? Discuta
a transmisso do sinal eltrico entre as clulas do miocrdio.
2 O que so mini-potenciais de placa motora? O que representam?
3- Considere o PEPS e o PIPS. Quais as bases inicas desses fenmenos? Detalhe sua anlise.
4 No esquema abaixo mostrado um arco reflexo simples composto pelos msculos extensor e
flexor de um membro e as vias nervosas responsveis pelo reflexo.
Pergunta-se:

(1)

a) Se hiperpolarizarmos o interneurnio inibidor (1) (por exemplo, levando-se o seu potencial


de repouso para 120 mV) o que acontecer com o sistema se o msculo flexor contrair-se?
5 Na figura abaixo so mostrados um motoneurnio e duas de suas sinapses, sendo uma
excitatria e outra inibitria.

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Supondo-se que tanto o neurnio inibidor como o excitador descarreguem potenciais de ao,
qual ser a condio para que:
a) seja gerado um potencial de ao no motoneurnio
b) no seja gerado um potencial de ao no motoneurnio.
Tente visualizar o fenmeno supondo agora a existncia de um grande nmero de sinpses
tanto inibitrias como excitatrias impingindo sobre uma mesma clula ps sinptica.

6 Na questo 5 voc teve um exemplo do fenmeno de somao. Defina somao temporal e


espacial. Mostre graficamente como os potenciais se somam (considere somente duas sinpses
para facilitar).
7 O que aconteceria com a contrao de um msculo esqueltico qualquer se a quantidade de
ACh presente em cada vescula pr-sinptica achar-se bastante reduzida em relao ao estado
normal? Nestas condies qual a modificao esperada nos mini-potenciais e nos potenciais de
placa?
8 Takeuchi e Takeuchi (1960) foram os primeiros a analisar a juno neuromuscular com
um sistema de voltage clamp que permitia fixar o potencial na placa motora num nvel
qualquer, ao mesmo tempo em se estimulava o axnio pr-sinptico e mediam-se as correntes de
placa no terminal ps-sinptico. O experimento pode ser esquematizado como na figura abaixo:
A tabela abaixo mostra os valores de pico das correntes ps sinpticas, em resposta a
estimulao do terminal pr-sinptico, em funo da voltagem aplicada.

Voltagem (mV)
+75
+55
+40
+20
-20
-50
-90
-120

Corrente de Pico (
A)
0,8
0,65
0,40
0,25
-0,20
-0,50
-0,80
-1,00

As concentraes intra (i) e extracelulares (e) dos principais ons envolvidos no processo so as
seguintes: [Na+]e =115 mM; [Na+]i= 7 mM; [K+]e = 4 mM; [K+]i = 140 mM e [Cl-]e = 110 mM
e [Cl-]i = 10.0 mM. Considere o potencial de repouso igual a 60 mV.
a) Faa um grfico I-V (corrente contra voltagem) utilizando-se dos dados acima. Que
concluses se podem tirar quanto a seletividade do canal colinrgico? Utilize dados numricos e
explicite seu racioncio.

20

9 Curare, uma substncia utilizada pelos ndios para caar e como coadjuvante em anestesias,
reconhecidamente um bloqueador da transmisso sinptica, atuando nos canais colinrgicos da
placa motora. Seu efeito o de bloquear a conduo de ons atravs desses canais. Tome o
grfico que voc construiu no exerccio anterior como controle e trace sobre o mesmo a reta
esperada na presena de uma concentrao no mxima de curare. O que mudou? Por que? Qual
seria a vantagem da utilizao dessa droga num processo cirrgico?

10 Mutaes no domnio M2 do receptor colinrgico tem sido associadas sndrome do canal


lento (SCS slow channel syndrome) e acontecem por uma troca de Treonina (T) por Prolina (P)
no amincido nmero 264. Os resultados mostrados abaixo so registros da atividade do canal
colinrgico, obtidos em bipsias de um indivduo normal (Control) e de um indivduo com a
sndrome do canal lento (Patient).

a) Analise os dois registros e descreva as principais diferenas no funcionamento desses dois


canais colinrgicos.
b) Faa hipteses sobre como deve responder o msculo do paciente, quando um potencial de
ao chega placa motora atravs de um motoneurnio qualquer, em comparao com
normal.
c) Compare sua resposta anterior com uma nova situao onde voc bloquearia a ao da
acetilcolinesterase (enzima que quebra a ACh aps sua ligao ao receptor colinrgico)
com fisostigmina. Como ficariam os PEPS nessa situao? E a contratilidade do msculo?
Por que?

21

11 Miastenia gravis uma doena associada perda de receptores colinrgicos nicotnicos na


regio ps-sinaptica da placa motora. Isto foi demonstrado atravs de uma diminuio
significativa na ligao de -bungarotoxina (uma toxina do veneno de cobra que liga-se com
grande afinidade ao receptor colinrgico) ao msculo de pacientes com a doena. Analise
comparativamente os PEPS num indivduo portador da doena em relao a um indivduo
normal. Como deve ficar a transmisso neuromuscular numa situao como essa?