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Metodologias

Mtodo DPPH
Uma das tcnicas atualmente utilizada para avaliar a ao antioxidante,
um mtodo baseado na eliminao do radical livre estvel 1,1-difenil-2-picrilhidrazil
(DPPH). A molcula de DPPH bastante conhecida por caracteriza-se como um
radical orgnico livre estvel e tem muitas vantagens, tais como uma boa estabilidade na
ausncia da luz, aplicabilidade, simplicidade e viabilidade (DENG; CHENG; YANG,
2011). Sendo assim, o mtodo DPPH utilizado em mais de 90% dos estudos de
avaliao antioxidante de substncias puras, misturas ou matrizes complexas.
Para avaliar a capacidade antioxidante dos extratos, ser utilizada a metodologia
descrita por Silva e colaboradores. (2005) com algumas modificaes. Ser preparada
uma soluo estoque do composto derivado do diminazeno (7,2 g/mL), do DPPH (40
g/mL) e do padro Trolox (140 g/mL). As concentraes de 0,9, 1,8, 3,6, 5,4, 7,2
g/mL ser utilizadas na avaliao antioxidante e sero preparadas por diluio a partir
da maior concentrao. A avaliao antioxidante ser realizada em triplicata e os valores
das absorbncias convertidos em porcentagem de capacidade antioxidante (% CA) pela
seguinte equao:
% CA = {(Abs.controle - Abs.amostra) x 100}/Abs.controle
onde, Abs.controle a absorbncia inicial da soluo etanlica de DPPH e Abs.amostra
a absorbncia da mistura reacional (DPPH + amostra). A concentrao efetiva (CE 50)
do 4-fenil-8-acetoxicumaran-2-ona necessria para reduzir a absorbncia do radical
DPPH em 50% a 717 nm foi determinada.
Avaliao do potencial antioxidante in vitro DA AMOSTRA contra a produo de
radical nitrito (NO-2)
O xido ntrico (NO) gerado a partir da decomposio espontnea do nitroprussiato de
sdio (NPS) em tampo fosfato 20 mM (pH 7,4). Uma vez gerado NO, ele interage com
o oxignio para produzir ons nitrito (2NO+O2

NO2- ) que foram medidos pela

reao de Griess (FERREIA et al. 2008). A mistura reacional (1mL) contendo


nitroprussiato de sdio (NPS) em tampo fosfato 10 nM e as amoostras em diferentes
concentraes sero incubados a 37 C durante 1h (BASU,2006) Uma alquota de 0,5

mL retirada e homogeneizada com 0,5 mL do reagente de Griess. A absorbncia do


cromforo media a 540 nm. A porcentagem de inibio do xido ntrico gerado
medida por meio da comparao dos valores de absorbncia dos controles negativos
(apenas 10 nM de nitroprussiato de sdio e veculo) e das preparaes para ensaio. Os
resultados so expressos em porcentagem de nitrito formando por NPS.

Figura 1. Efeitos do extrato das Flores da Tagetes erectana na remoo do radical DPPH. O
trolox, 140 g/ml foi usado como padro antioxidante. Os valores representam a mdia E.P.M.
dos valores de inibio in vitro, n = 3, experimentos em triplicata. ap<0,05 versus DPPH
(ANOVA e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste); *p<0,05 versus DPPH em relao ao
controle (ANOVA e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste).

Reduo do Radical DPPH


A dose de 0,9 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 17,36% a
produo do DPPH.
A dose de 1,8 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 27,17% a
produo do DPPH.
A dose de 3,6 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 29,42% a
produo do DPPH.
A dose de 5,4 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 29,69% a
produo do DPPH.
A dose de 7,2 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 30,39% a
produo do DPPH.
Trolox reduziu em 52,13% a produo do DPPH.

Figura 2. Efeitos do extrato das Flores da Tagetes erectana na remoo do metablito nitrito. O
trolox, 140 g/ml foi usado como padro antioxidante. Os valores representam a mdia E.P.M.
dos valores de inibio in vitro, n = 3, experimentos em triplicata. ap<0,05 versus NPS (ANOVA
e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste); *p<0,05 versus SNP em relao ao controle
(ANOVA e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste).

Produo de Nitrito
A dose de 0,9 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 5,41% a
produo de nitrito.
A dose de 1,8 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 8,96% a
produo de nitrito.
A dose de 3,6 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 11,14% a
produo de nitrito.
A dose de 5,4 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 16,30% a
produo de nitrito.
A dose de 7,2 g/ml do extrato das Flores da Tagetes erectana reduziu em 23,40% a
produo de nitrito.
Trolox reduziu em 62,08% a produo de nitrito.

Figura 3. Efeitos do extrato das Folhas da Tagetes erectana na remoo do do radical DPPH. O
trolox, 140 g/ml foi usado como padro antioxidante. Os valores representam a mdia E.P.M.
dos valores de inibio in vitro, n = 3, experimentos em triplicata. ap<0,05 versus DPPH
(ANOVA e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste); *p<0,05 versus DPPH em relao ao
controle (ANOVA e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste).

Reduo do Radical DPPH


A dose de 0,9 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 3,16% a
produo do DPPH.
A dose de 1,8 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 13,50% a
produo do DPPH.
A dose de 3,6 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 4,98% a
produo do DPPH.
A dose de 5,4 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 4,02% a
produo do DPPH.
A dose de 7,2 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 5,09% a
produo do DPPH.
Trolox reduziu em 52,13% a produo do DPPH.

Figura 4. Efeitos do extrato das Folhas da Tagetes erectana na remoo do metablito nitrito. O
trolox, 140 g/ml foi usado como padro antioxidante. Os valores representam a mdia E.P.M.
dos valores de inibio in vitro, n = 3, experimentos em triplicata. ap<0,05 versus NPS (ANOVA
e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste); *p<0,05 versus SNP em relao ao controle
(ANOVA e t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste).

Produo de Nitrito
A dose de 0,9 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 00% a
produo de nitrito.
A dose de 1,8 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 3,31% a
produo de nitrito.
A dose de 3,6 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 11,62% a
produo de nitrito.
A dose de 5,4 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 18,40% a
produo de nitrito.
A dose de 7,2 g/ml do extrato das Folhas da Tagetes erectana reduziu em 30,02% a
produo de nitrito.
Trolox reduziu em 62,08% a produo de nitrito.

Figura 3. Efeitos do extrato do Araticum na remoo do radical DPPH. O trolox, 140 g/ml foi
usado como padro antioxidante. Os valores representam a mdia E.P.M. dos valores de
inibio in vitro, n = 3, experimentos em triplicata. ap<0,05 versus DPPH (ANOVA e t-StudentNeuman-Keuls como post hoc teste); *p<0,05 versus DPPH em relao ao controle (ANOVA e
t-Student-Neuman-Keuls como post hoc teste).

Reduo do Radical DPPH


A dose de 0,9 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 5,83 % a produo do DPPH.
A dose de 1,8 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 26,84 % a produo do DPPH.
A dose de 3,6 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 28,32 % a produo do DPPH.
A dose de 5,4 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 34,02 % a produo do DPPH.
A dose de 7,2 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 48,42 % a produo do DPPH.
Trolox reduziu em 52,13% a produo do DPPH.

Figura 4. Efeitos do extrato do Araticum na remoo do metablito nitrito. O trolox, 140 g/ml
foi usado como padro antioxidante. Os valores representam a mdia E.P.M. dos valores de
inibio in vitro, n = 3, experimentos em triplicata. ap<0,05 versus NPS (ANOVA e t-StudentNeuman-Keuls como post hoc teste); *p<0,05 versus SNP em relao ao controle (ANOVA e tStudent-Neuman-Keuls como post hoc teste).

Produo de Nitrito
A dose de 0,9 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 1,97% a produo de nitrito.
A dose de 1,8 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 12,64% a produo de nitrito.
A dose de 3,6 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 22,29% a produo de nitrito.
A dose de 5,4 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 35,07% a produo de nitrito.
A dose de 7,2 g/ml do extrato do Araticum reduziu em 53,36% a produo de nitrito.
Trolox reduziu em 62,08% a produo de nitrito.