B.

- Desarrollo de la ritmicidad elctrica en Clulas intersticiales de Cajal

Una decisin de linaje se hace a alrededor de E15 en el intestino murino, y las

clulas que continan para expresar la actividad marcapasos del desarrollador ckit. Los estudios electrofisiolgicos de los msculos del yeyuno durante el perodo
embrionario finales encontraron ondas lentas no elctricas en E17, pero se
observaron fluctuaciones de pequea amplitud en los potenciales de membrana
(ETS). Redes de ICC fueron bien articuladas en E17, y se observaron mltiples
procesos que unen las clulas entre s. En E18, ondas lentas, resistentes al
bloqueo por dihidropiridinas (una caracterstica de la firma de ondas lentas frente a
los potenciales de accin), fueron registrados por las tcnicas de micro electrodos
intracelulares. La organizacin, la frecuencia y la amplitud de las ondas lentas
continuaron desarrollando a travs del nacimiento y la primera semana de vida,
alcanzando amplitud madura y frecuencias alrededor de P10. Otros investigadores
establecen la aparicin de la ritmicidad elctrica en el intestino delgado proximal
ms tarde en el desarrollo, la bsqueda de la actividad elctrica dbil en recin
nacidos sin alimentar y fuerte reduccin en la actividad elctrica de verapamil.
Estos autores concluyeron que las ICC-MI no eran funcionales al nacer, y la
actividad de marcapasos y ondas lentas no se desarrollaron hasta alrededor de
P2. ICC-MI se identificaron con azul de metileno en este estudio, pero este
colorante es menos fiable que las tcnicas de inmunohistoqumica.
En concordancia con el papel de la ICC como marcapasos, hay un retraso de
proximal a distal en el desarrollo de la actividad marcapasos. Ondas lentas se
registraron desde el tracto GI proximal (estmago y antro) durante el perodo
embrionario tardo (como se describe arriba), pero se desarrollan despus del
nacimiento en el leon y el colon. La actividad de onda lenta, con racimos de
potenciales de accin superpuesta, caracterstico del colon proximal, desarrollado
en los msculos del colon por P6-P8; sin embargo, esta actividad fue poco
frecuente, con largos perodos de quiescencia entre eventos. Regularmente, las
ondas lentas rtmicas y potenciales de accin en racimos no se han desarrollado
completamente en el colon proximal hasta cerca de P10.
El desarrollo de ICC y ondas lentas se produce sin restricciones en cultivos
organotpicos de los msculos gastrointestinales, y este enfoque ha sido utilizado
para correlacionar el tiempo de desarrollo de las ICC-MI y el desarrollo de la
ritmicidad elctrica y para evaluar el impacto de la sealizacin de c-kit en el
desarrollo. La inclusin de anticuerpos neutralizantes de c-kit en los msculos de
los animales recin nacidos aboli redes de ICC y bloque la actividad
marcapasos dentro de unos pocos das de la exposicin. Al nacer, como se

observa en los animales, las CCI eran mucho ms susceptibles a los efectos de
los anticuerpos neutralizantes de c-Kit que despus del desarrollo en los animales
durante varios das antes de su puesta en cultivo de rganos. Se requieren
perodos ms largos (por ejemplo, 30 das) de la exposicin a los anticuerpos c-Kit
para lesionar redes de ICC-MY y bloquear la actividad de marcapasos en los
msculos de animales maduros (>P20). Dado que la dependencia de la
sealizacin de c-Kit para el desarrollo inicial de ICC-MI fue cuestionada por otros,
se realizaron experimentos para determinar si el desarrollo de las ICC funcionales
es bloqueado con c-Kit o es deshabilitado genticamente. Las ICC-MY y ondas
lentas se desarrollan en los msculos del yeyuno de tipo salvaje de ratones tipo W
/+, y W V /+ por E18, pero no se desarrollaron en los msculos tipo W / W V. Las
ICC-MI no se desarrollaron en los msculos yeyunales retirados de ratones en
E17 (es decir, antes del desarrollo de ondas lentas) y se cultivaron con anticuerpos
neutralizantes c-kit. Se obtuvieron resultados similares si los msculos se pusieron
en cultivo de rganos despus de ondas lentas desarrolladas (E18-P0). El
mesilato de imatinib (STI157), un inhibidor de c-Kit, no tuvo ningn efecto agudo
sobre ondas lentas, pero la exposicin a este compuesto bloque el crecimiento
postnatal y el desarrollo de ICC-MI y ondas lentas. Por lo tanto la sealizacin de
c-Kit durante el desarrollo es requisito para el establecimiento y mantenimiento de
la funcin de marcapasos de las ICC

C.- El destino de las ICC cuando c-Kit es bloqueado

La prdida de la ICC se ha observado en los msculos GI humanos de pacientes
con una variedad de trastornos de la motilidad. Las alteraciones de motilidad
parecen una consecuencia obvia de ICC defectuosas o prdida de ICC debido a
las importantes funciones de estas clulas. A pesar de la importancia clnica, los
factores responsables de la prdida de ICC en pacientes son poco conocidos. Se
han hecho intentos de desarrollar modelos animales de la prdida de la ICC con la
idea de establecer la causa y el efecto de la prdida de la ICC en trastornos de la
motilidad y para estudiar la plasticidad de las Celulas Intersticiales de Cajal.
Las ICC son vulnerables al bloqueo de la sealizacin de c-kit en animales recin
nacidos y adultos; sin embargo, el tiempo requerido para el bloque de C-kit
aumenta desde el periodo postnatal a la edad adulta. Los anticuerpos
neutralizantes de c-Kit inyectados en ratones recin nacidos y durante varios das
despus del nacimiento causa la prdida de ICC dentro de una semana, y todas
las clases de ICC se ven afectados. El inhibidor de c-Kit llamado imatinib mesilato
tambin lesiona las redes de ICC en los msculos intestinales murinos neonatales
en cultivo de rganos. En cobayas adultos, imatinib caus una reduccin

dependiente del tiempo en ICC-MI del intestino delgado, el acortamiento de los

procesos celulares, y el adelgazamiento generalizado de la red. El nmero de ICCMI se redujo en alrededor de un tercio despus de 16 das de tratamiento. ICCDMP tambin se vieron afectados, pero los efectos fueron menos dramtica y ms
lento en el inicio. No se observ evidencia de apoptosis en ICC despus del
tratamiento con imatinib; en cambio, las clulas restantes coexpresan alfa actina
de msculo liso, lo que sugiere que las ICC-MI se someten a un cambio fenotpico
hacia un fenotipo de msculo liso o miofibroblastos cuando c-kit est bloqueada.
Se observ incorporacin de Brud, en las CC-MI despus de la retirada de
imatinib, y pares de clulas con procesos altamente desarrollados que fueron bien
incorporados en redes ICC-MI demostr que la divisin celular de las ICC madura
era al menos parcialmente responsable de la repoblacin de la redes ICC-MY
despus de terminar bloqueo c-Kit.
La sealizacin celular rio abajo iniciada por el factor de clulas madre unido a ckit incluye contribuciones de fosfatidilinositol 3'-quinasa (PI3-quinasa), fosfolipasa
C (PLC), la fosfolipasa D, quinasas de la familia Src, protena activadora de la
p21ras GTPasa, y protena quinasa activada por mitgenos (MAPK). Hay varias
clases de PI3-quinasa, pero los receptores del factor de crecimiento activan
normalmente la clase IA. La unin del factor de clulas madre conduce a la
autofosforilacin y la dimerizacin de c-Kit y generacin de sitios de unin de alta
afinidad para las molculas de sealizacin, incluyendo la PI3-quinasa. La
fosforilacin de c-Kit conduce a la unin de la subunidad reguladora de la PI3quinasa llamada p85 y la posterior activacin de la subunidad cataltica de p110.
Los efectos de los inhibidores de la PI3-quinasa, wortmanina y LY 294002, fueron
probados en el desarrollo de ICC y la actividad de marcapasos en ratones. La
amplitud de las ondas lentas aumenta despus del nacimiento, y este desarrollo
tambin se produce en cultivos organotpicos. Las inclusiones de wortmanina o LY
294002 en cultivos de rganos de los msculos intestinales tomadas de animales
al nacer caus la prdida de ICC-MI y bloque ondas lentas dentro de unos pocos
das. La actividad de marcapasos tambin fue bloqueada en los msculos adultos
por los inhibidores de la quinasa PI3-, pero hasta un mes de exposicin se
requiere para desarrollar estos efectos. Otro estudio emple un ratn transgnico
con una tirosina 719 de fenilalanina mutacin (Y719F) en el kit. No se observ
prdida de funcin de ICC en estos ratones, y se concluy que la sealizacin a
travs de la PI3-quinasa no se requiere para el desarrollo y la funcin de ICC. Hay
dos medios de activacin de PI3-quinasa, sin embargo, por unin directa de PI3kinase al residuo tirosina phorphorylated de c-Kit e indirectamente mediante la
unin a la tirosina fosforilada GAB2 protena accesoria. Por lo tanto la mutacin
Y719F en el kit no puede bloquear toda la sealizacin de la quinasa PI3-.

Las redes ICC-MY y la actividad de onda lenta puede ser restablecido despus de
la eliminacin de las condiciones o reactivos que bloquean c-kit. Este punto se
ilustra de forma ms completa en la siguiente seccin, pero los estudios en
modelos de este concepto se han realizado en las tiras musculares en cultivo de
rganos. Como anteriormente, el tratamiento de los msculos P0 con anticuerpos
neutralizantes c-kit o mesilato de imatinib durante 3 das caus la prdida o
reduccin dramtica en el ICC-MI y la prdida de actividad de marcapasos.
Despus de la eliminacin de estos reactivos, las redes de la CPI y ondas lentas
fueron restaurados dentro de 9 das.