UNIVERSIDAD AUTNOMA DE NUEVO LEN

Facultad de Ciencias Biolgicas

Carrera:
Licenciado en Biotecnologa Genmica

Materia:
Terapia Gnica

Propuesta con fundamento en la Terapia Gnica:

Para la regeneracin de tejido del hueso del soporte del diente o alveolar en un modelo de
roedor

Profesora:
Dra. Brenda Gonzlez Hernndez

Grupo:
410

Alumno:
Jaime de Jess Covarrubias Martnez

Matrcula:
1443768

San Nicols de los Garza, N.L.

26 de mayo de 2015

INTRODUCCIN
La dentadura es un rgano biolgico complejo que consiste de mltiples tejidos, incluyendo
el esmalte, dentina, cemento y pulpa. La prdida de dientes es comn y frecuente en
poblaciones de edad avanzada. Para tratar estos defectos, el enfoque actual involucra
prtesis fijas o removibles, autotransplantes e implantes dentales. La exploracin de nuevas
estrategias para el reemplazo de dientes se ha convertido en un tema caliente. Utilizando los
fundamentos de la Embriologa Experimental, Biologa Molecular y del Desarrollo y los
principios de Biomimetismo, la regeneracin de la dentadura se est volviendo una
posibilidad realista. Varios mtodos diferentes se han propuesto para alcanzar un
reemplazamiento biolgico del diente. Esto incluye regeneracin de diente basado en
scaffold, ingeniera de pellet celular, y regeneracin de diente por manipulacin gentica.
La idea de que una tercera denticin pueda ser inducida para reemplazar dientes perdidos es
un concepto atractivo. Este enfoque es generalmente presentado en trminos de aadir
molculas para inducir iniciacin del diente de novo en la boca. Esto podra ser combinado
con regeneracin de diente basado en manipulacin gentica; esto es, clulas endgenas
dentales in situ pueden ser activadas o reprimidas por una tcnica de entrega de genes para
producir un diente.
El desarrollo del diente es el resultado de seales reciprocas y reiterativas entre epitelio
dental derivado de ectodermo oral y mesnquima dental derivada de clulas de la cresta
bajo control gentico. Ms de 200 genes son conocidos por estar expresados durante el
desarrollo del diente. Un nmero de mutantes de ratn estn ahora empezando a proveer
algunos conocimientos sobre los mecanismos de la formacin de diente supernumeraria.
Mltiples dientes supernumerarios podran tener componentes genticos en su etiologa y
parcialmente representar la tercera denticin en humanos. Estas molculas candidatas o
genes podran ser aquellas que estn involucradas en la induccin de diente embrionario, en
formacin de diente exitoso, o en el control del nmero de dientes. Esto significa que esto
podra ser posible para inducir la formacin de diente de novo por la represin in situ o
activacin de un solo gen candidato.
La tercera denticin
Ha sido sugerida en humanos, una tercera denticin con uno o ms dientes
supernumerarios que pueden ocurrir adems de la tercera denticin, y los dientes
supernumerarios son a veces representantes de denticin parcial post-permanente. El patrn
bsico de denticin observado en mamferos es difiodonte (se renuevan las piezas una sola
vez) y consisten en tres incisivos, un canino, cuatro premolares y tres molares, mientras que
los humanos son difiodonte excepto los molares permanentes. Los dientes caducos son,
ontolgicamente, la primera generacin de dientes. Los dientes permanentes (excepto el
molar) pertenecen a la segunda denticin. El trmino tercera denticin se refiere a la
opinin de que ms de un set de dientes se puede ocurrir en adicin a los dientes
permanentes. Los dientes humanos son difiodonte excepto los molares permanentes. La
denticin normal del ratn es monofiodonte y compuesto de un incisivo y tres molares en
cada cuadrante. El nmero de dientes es usualmente estrictamente determinado. Se ha
reportado inicialmente un anlage de la tercera denticin en mamferos. La presencia de un
anlage epitelial de la tercera denticin tambin se ha notado en humanos. Los dientes y el
anlage que aparecen en la tercera denticin en las bocas infantiles y algunos fetos ha sido
analizada.

El epitelio, el cual es considerado como el anlagen de la tercera denticin desarrolla lingual

a grmenes de dientes totalmente permanentes. Adems, cuando esto aparece, el predecesor
(grmen de diente permanente) est en la fase con forma de campana. El tiempo de
aparicin de la tercera denticin aparece despus del nacimiento (1)
El gen de inters para la propuesta: Bone Morphogenetic Protein 7
Las BMPs pertenecen al grupo TGF- (transformando el factor de crecimiento-) el cual
juega un papel esencial en inducir a las clulas madres mesenquimales diferenciarse a
osteoblastos por regulacin importante ro abajo de los blancos as como rutas de seales
para producir tejido seo. Tambin estas protenas son resistentes a la inhibicin noggin, y
esta caracterstica es responsable de la potente actividad osteognica de BMPs. Varias
formas recombinantes de BMP, como BMP-2, BMP-7 y BMP-9, mantienen la promesa de
promover regeneracin sea. Estos BMP estimulan regeneracin del hueso y reduce el
tiempo de curacin, acelera la formacin de huesos y madurez. Sin embargo, BMPs
tambin puede tener ciertas desventajas como el alto costo y la rpida prdida de su
bioactividad en condiciones fisiolgicas (2)
PROTEINA OSTEOGENICA-1 (OP-1) La protena osteognica-1 (OP-1), tambin
conocida como protena morfogentica-7 (BMP-7), pertenece a la superfamilia de los TGF, y acta, al igual que las protenas de la subfamilia de BMPs, como un regulador del
desarrollo animal estimulando en particular la diferenciacin de clulas mesenquimticas
en clulas condrognicas y osteoprogenitoras. Inicialmente se purific a partir de hueso
bovino v las tcnicas de caracterizacin bioqumica han permitido distinguir 2 subunidades,
una de ellas con un peso molecular de 18 kDa que es equivalente a la protena codificada
por el gen de la OP-1 y la otra de 16 kDa similar a la protena codificada por el gen de la
BMP-2A (95). Griffith et al. (96) han obtenido los primeros datos cristalogrficos y de
difraccin de rayos X de la OP-1 y de 2 derivados de elevado peso molecular. Gracias a
sofisticadas tcnicas de secuenciacin de ADN se ha aislado el gen que codifica la OP-1 y
el anlisis secuencial indica que este gen est relacionado con el de la protena vegetal en
Xenopus (Vg-1); se ha descrito la estructura del ADN complementario clonado y la
secuencia nucleotdica que lo caracteriza (26). En mridos se ha conseguido aislar el gen de
la OP-1 que codifica una OP-1 homloga en humanos y los resultados sugieren que los
rones podran ser la zona principal de sntesis de esta protena a pesar de encontrarse
alejada de su punto de accin (97). El gen que la codifica en el genoma humano se localiza
en el cromosoma 20 (94). En Xenopus la distribucin del ARNm de la OP-1 se limita al
ovario y a los embriones, mientras que los ARNm de las BMP-2 y 4 se distribuyen en
tejidos adultos, detectndose en pulmn, corazn y ri- n (98). En embriones de pollo se
ha observado que la expresin de la OP-1 en la fisis se limita a la zona hipertrfica, sin que
aparezca en la zona de reserva ni en la proliferativa (99). El hecho de que la protena sea
capaz de activar selectivamente genes de las clulas mesenquimticas pluripotentes
regulando su diferenciacin posterior, evidencia que es necesario analizar aquellos
receptores celulares que se unen a esta protena y que permiten el inicio de la fase de
activacin. Las protenas de la familia de TGF- manifiestan sus efectos cuando se unen a
receptores tipos I y II de la kinasa de serina/treonina. La OP-1 se une a receptores tipo 1 de
la activina (ActR-I) y a recepto res tipo IA (BMPR-IA) e IB (BMPR-IB) de las BMP en
presencia de receptores tipo II (ActR-IIA) y IIB (ActB-TIB) de la activina. Ciertos efectos

de la activina, tales como la induccin a la secrecin de la hormona estimulante de los

folculos, no se manifiestan en presencia de la OP-1 (100). Se ha identificado un receptor
tipo II (BMPR-II) que se une a las BMP-2 y BMP-7 junto con otros receptores tipo I,
siendo necesaria la cooperacin de estos 2 receptores para conseguir una adecuada unin y
transduccin de la seal (lo1 ). Los receptores de la activina similares a los de la kinasa-f
(ALK-3 y ALK-6) son receptores tipo I de la OP-1 y de la BMP-4 y sus transcripciones se
han detectado en condensaciones precartilaginosas, masas premusculares, vasos
sanguneos, sistema nervioso central, ojos y orejas en desarrollo (102, 103). Sin embargo, la
ALK-2 es un receptor tipo I de la activina y de la OP-1, pero no de la BMP-4 (102). La
protena osteognica-1 muestra efectos especficos en diversos campos de aplicacin, tales
como la diferenciacin condroblstica y osteoblstica, procesos oncolgicos, desarrollo del
sistema nervioso central, odontologa y embriognesis (104) e interviene en la sntesis de
otras protenas como la osteopontina (OPM) que constituye una de las protenas de la
matriz sea. La expresin del ARNmde la osteopontina est regulada por 3 tipos de
factores: a) factores de crecimiento y de diferenciacin (factores de crecimiento plaquetario
PDGF, EGF, TGF- y OP-1; b) tensiones mecnicas que favorecen la formacin sea,
y c) hormonas osteotrpicas, como el cido retinoico y la vitamina D3 que facilitan la
resorcin y remodelacin sea. Las clulas preosteoblsticas sintetizan una OPM de 55 kDa
que se correlaciona con la formacin de una matriz cementante previa a la deposicin
sea, mientras que los osteoblastos sintetizan una OPM de 44 kDa que se asocia
rpidamente con la hidroxiapatita regulando el crecimiento del cristal y proporcionando un
substrato para la adhesin de los osteoclastos (105). La OP-1 participa en la regulacin de
la mol- cula de adhesin de las clulas neurales cuya funcin es de especial importancia en
el desarrollo y regeneracin del sistema nervioso central (106, 107) y adems presenta un
efecto de proteccin neurol- gica en casos de hipoxias e isquemias cerebrales en ratas
(108). En el campo de la odontologa se ha observado que induce la formacin de dentina
en monos y en perros (109, 110) al inducir la formacin de hueso (7)
OBJETIVO GENERAL
Potenciar la regeneracin del hueso de soporte del diente en un modelo de rata
OBJETIVOS ESPECFICOS
Desarrollar una estrategia para mejorar el sistema de entrega del gen BMP-7
Obtener una expresin significativa del gen BMP-7
HIPTESIS
El uso de este tratamiento para el potenciamiento de la regeneracin del hueso del soporte
del diente logra obtener un rendimiento mayor al control
El uso de este tratamiento para el potenciamiento de la regeneracin del hueso del soporte
del diente logra obtener un rendimiento igual o menor al control
JUSTIFICACIN
La importancia del presente trabajo reside en la necesidad que tienen las personas de poseer
las piezas dentales para poder llevar a cabo sus necesidades como comer y disfrutar los
alimentos, as como hablar y pronunciar de modo correcto (5). Tambin se considera que
las personas con denticin reducida sin el reemplazo de dientes perdidos por prtesis
removibles o fijas reduce el ndice fsico de calidad de vida de la misma manera que con el

cncer o enfermedades renales (6). La protena BMP-7 se expresa en otras partes del cuerpo
y posee otras funciones por lo que la experimentacin con el gen tiene potencial para ser
utilizado en otras condiciones.
ANTECEDENTES
Entrega de Bone morphogenetic protein
a. Franceschi et al., investig in vitro e in vivo transferencia gnica Ad de BMP-7 para
formacin de hueso (3)
b. Dunn et al., demostr que en el caso de entrega directa de DNA in vivo de
Ad/BMP-7 en un acarreador de colgeno de gel promova la regeneracin exitosa de
los defectos del hueso alveolar alrededor de los implantes (4)
c. Yue, et al; entreg el gen BMP-2 a clulas madre mesenquimales de hueso por
medio de un vector no viral
MATERIALES Y MTODOS
Ratas de laboratorio (un grupo con tratamiento con Chitosan-g-PEI ms luciferasa y otro
con Chitosan-g-PEI ms gen BMP-7
Remocin de maxilar nmero 1 y preparacin de defectos en molar 2 con un broca
helicoidal
Se colocan implantes en la maxila de la rata
En la superficie de los implantes y en los defectos seos se coloca el tratamiento
Microscopa electrnica de escaneo para determinar la naturaleza del contacto hueso a
implante
Anlisis histomtrico para evaluar la secuencia temporal y espacial de la ortognesis
durante oseointegracin de implante dental
RESULTADOS HIPOTTICOS

LITERATURA CONSULTADA
1. Takahashi, K. y et al. 2013. Feasibility of Gene Therapy for Tooth Regeneration by
Stimulation of a Third Dentition. Martin, F. 2013. Gene Therapy - Tools And
Potential Applications. 727-728
2. Alves, M. 2014. Advances Using Hydroxyapatite As A Biomaterial In Bone
Regeneration. 14
3. Dunn CA, Jin QM, Taba M, Jr, Franceshi RT, Bruce Rutherford R, Giannobile WV.
2005. BMP gene delivery for alveolar bone engineering at dental implant
defects. Mol Ther. 11: 2949.
4. Dunn, C. 2005. BMP gene delivery for alveolar bone engineering at dental implant
defects. Mol Ther. 11(2):294-9.
5. Snchez, S. y et al. 2007. Estado de la denticin y sus efectos en la capacidad de los
ancianos para desempear sus actividades habituales. Salud pblica Mx 49(3)
6. Mack F. y et al. 2005. The impact of tooth loss on general health related to quality
of life among elderly Pomeranians: results from the study of health in Pomerania
(SHIP-O). Int J Prosthodont. 18(5):414-9
7. J. L. Peris. 1996. Protenas morfogenticas seas (BMPs): Efecto de la protena
osteognica-1 (OP-l/BMP-7) en la condrognesis y osteogenesis. Rev Esp Cir
Osteoart 1996; 31: 37-48
8. Jianhui Yue. 2015. BMP2 gene delivery to bone mesenchymal stem cell by
chitosan-g-PEI nonviral vector. Nanoscale Research Letters 10:203