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ISSN 1808-9976

Deteco e Controle de Viroses em Videira


Introduo

On line

90

Petrolina, PE
Dezembro, 2009

Autor
Mirtes Freitas Lima
Eng. agrn., Ph.D., Pesquisadora Embrapa Semirido.
E-mail:
mflima@cnph.embrapa.br

O polo Petrolina, PE/Juazeiro, BA a principal regio produtora de uvas finas de


mesa do Pas, contribuindo com mais de 90% das exportaes brasileiras. O cultivo de
videira (Vitis vinifera L.) nesta regio foi iniciado nos anos 1970 com a criao dos projetos
de irrigao e, atualmente, a rea total cultivada est em torno de 10.000 ha, dos
quais 90% encontram-se em fase produtiva (ANURIO BRASILEIRO DE
FRUTICULTURA, 2006). Metade desta rea ocupada com uvas apirnicas. Os
ciclos produtivos da videira nesta regio so condicionados, principalmente, s
condies edafoclimticas da regio e s prticas de manejo da cultura que,
associadas irrigao, propiciam duas safras anuais.
As doenas causadas por vrus so difceis de serem controladas, alm de bastante
destrutivas. O ataque desses patgenos, geralmente, resulta no declnio de plantas e,
consequentemente, na reduo da longevidade do parreiral, diminuio da produo e
da qualidade dos frutos. Entretanto, devido natureza dessas doenas, o estado
fitossanitrio do material propagativo a ser utilizado na produo de mudas e em
enxertias o fator mais importante. A disseminao desses patgenos pode ser
potencializada quando se considera que a videira , comercialmente, multiplicada por
propagao vegetativa, o que propicia a possibilidade da ocorrncia de infeco
latente, na qual plantas infectadas no apresentam sintomas aparentes. Outros
fatores que contribuem para o agravamento do problema so: presena de infeco
mista - presena de diferentes espcies de vrus infectando uma mesma planta suscetibilidade da cultivar a estes agentes, combinao copa/porta-enxerto e
presena de vetores desses vrus na rea do parreiral, entre outros.
A seguir, sero discutidos mtodos utilizados na diagnose de doenas virais em
videiras e as estratgias de controle.

Principais Viroses da Videira Relatadas no Brasil


Cerca de 50 vrus j foram identificados em infeces de videira em todo o mundo
(MARTELLI; BOUDON-PADIEU, 2006; REGENMORTEL et al., 2000). No Brasil, as
doenas mais importantes causadas por vrus e relatadas at o momento so: a)
enrolamento da folha (Leafroll); b) malformao infecciosa ou doena dos entrens
curtos (Fanleaf disease); c) mancha das nervuras (Fleck disease); d) lenho rugoso
(Rugose wood complex) e, e) necrose das nervuras (Vein necrosis disease).
O lenho rugoso compreende quatro doenas: intumescimento dos ramos (Corky
bark); doena das caneluras do tronco do Rupestris (Rupestris stem pitting
disease); acanaladura do lenho de Kober (Kober stem grooving) e acanaladura do
lenho do LN33 (LN33 stem grooving). Para a maioria dessas doenas, os
respectivos agentes etiolgicos j foram identificados e associados ocorrncia de
sintomas caractersticos em videiras, especialmente em plantas indicadoras (Tabela 1).
Estas doenas so frequentes em reas vitcolas de todo o mundo, podendo infectar
cultivares de copa e de porta-enxerto.

Deteco e Controle de Viroses em Videira

Tabela 1. Doenas de origem viral mais frequentes em videira no Brasil, seus agentes etiolgicos e plantas
indicadoras utilizadas na indexao biolgica.

Plantas herbceas utilizadas na indexao desses vrus.


GLRaV-7: no foi designado a nenhum gnero dentro da Famlia Closteroviridae.
/3
Doena considerada de origem viral, entretanto, o agente causal dos sintomas em videira ainda no foi identificado.
/4
Doena cujo agente possivelmente um vrus.

/1
/2

Fonte: Rowhani et al. (2005).

Deteco e Controle de Viroses em Videira

Figura 1. Enrolamento e avermelhamento de


folhas em videira (cultivar tinta).

Alm da disseminao por meio do material propagativo,


espcies do gnero Ampelovirus, como o GLRaV-1 e
GLRaV-3 so tambm disseminados de maneira
semipersistente por cochonilhas algodonosas (Famlia
Pseudococcidae) e de carapaa (Famlia Coccidae). De
maneira geral, neste tipo de transmisso, o vrus adquirido
quando estes insetos se alimentam em planta infectada por
cerca de 15 min. Este tempo denominado perodo de
aquisio, durante o qual as cochonilhas adquirem e
acumulam as partculas virais.
A transmisso para plantas sadias ocorre durante o
processo de alimentao desses insetos virulferos em
videiras por perodos de tempo bastante variveis. A
alimentao em plantas doentes por perodos mais longos
aumenta a eficincia de transmisso desses patgenos. A
multiplicao do vrus no vetor no ocorre, assim como
tambm no h transmisso viral para os insetos
descendentes. No caso das espcies virais pertencentes
ao gnero Closterovirus, como o GLRaV-2, so
transmitidos por afdeos, alm do material propagativo
(Tabela 1). No Brasil, o GLRaV-1 e o GLRaV-3 tm sido

frequentemente detectados.
b) A malformao infecciosa ou doena dos entrens
curtos, causada pelo Grapevine fanleaf virus (GFLV),
foi uma das primeiras viroses descritas em videira,
podendo afetar os porta-enxertos americanos e outras
espcies de Vitis e/ou hbridos. Os sintomas podem ser
diferenciados em mosaico amarelo (Figura 2), folha em
leque e faixa das nervuras, dependendo da estirpe do
vrus. O GFLV disseminado por nematides do gnero
Xiphinema, destacando-se as espcies X. index e X.
italiae, as quais podem reter o vrus por at 8 meses na
ausncia de plantas hospedeiras (MARTELLI, 1986;
MARTELLI; SAVINO, 1994).
Quando videiras velhas e infectadas pelo GFLV so
eliminadas, parte de suas razes que ainda permanecem
no solo por muitos anos, constituem os reservatrios do
vrus que pode ser transmitido pelos nematides vetores.
No Brasil, as espcies X. americanum (=X. brevicolle), X.
index, X. brasiliensis e X. krugi j foram identificadas em
videiras (KUHN; FAJARDO, 2003). Entretanto, no h
informaes sobre a incidncia desses nematides, assim
como no h informaes sobre o seu papel como
agentes disseminadores de vrus, em parreirais do Pas.
Nas razes de videira, os nematides podem ser disseminados pelo solo, gua e por meio de prticas culturais
realizadas dentro do parreiral. Naturalmente, o GFLV
infecta apenas a videira (Vitis spp.), entretanto,
experimentalmente, pode ser transmitido pela frico do
extrato de plantas infectadas em folhas de plantas
herbceas dos gneros Chenopodium, Gomphrena e
Cucumis, utilizadas na diagnose da malformao
infecciosa.

Foto: Gilmar Bacelar Kuhn.

Foto: Gilmar Bacelar Kuhn.

a) O enrolamento da folha a doena de origem viral


mais disseminada e mais importante da videira, podendo
infectar cultivares de copa e de porta-enxerto. At o
momento, nove espcies de vrus (Grapevine leafrollassociated virus 1-9 - GLRaV 1-9), j foram associadas
doena (ROWHANI et al., 2005). Em videiras tintas
infectadas, as folhas tornam-se avermelhadas e apenas o
tecido ao longo das nervuras permanece verde (Figura 1),
enquanto que, em cultivares brancas, as folhas tornam-se
clorticas. Nos dois casos, ocorre o enrolamento dos
bordos das folhas para baixo, sintoma do qual originou o
nome da doena. As folhas tornam-se espessas e
quebradias devido ao acmulo de carboidratos, como
consequncia da degenerao do floema, resultando em
menores teores de slidos solveis totais nos frutos.

Figura 2. Sintomas de mosaico amarelo


causados pelo vrus da malformao
infecciosa.

c) A mancha das nervuras causada pelo Grapevine


fleck virus (GFkV) foi detectada em diversas reas
vitcolas de todo o mundo. Nas folhas, surgem manchas

Deteco e Controle de Viroses em Videira


clorticas e translcidas, irregulares, acompanhando a
posio das nervuras. Este vrus disseminado apenas
por meio de material propagativo infectado.

Foto: Beverly Ferguson.

d) O lenho rugoso um termo que compreende quatro


doenas (Tabela 1), caracterizadas por anomalias no
lenho, sendo transmitidas por enxertia e diferenciadas,
segundo a expresso de sintomas, em diferentes
cultivares diferenciadoras de porta-enxerto:
intumescimento dos ramos (Corky bark), associada
ao Grapevine virus B (GVB); caneluras do tronco de
Rupestris (Rupestris stem pitting), associada ao
Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) (Figura
3); acanaladura do lenho de Kober (Kober stem
grooving), associada ao Grapevine virus A (GVA)
(Figura 4) e, acanaladura do lenho de LN33 (LN33 stem
grooving), cujo agente causal ainda desconhecido.

Figura. 3. Sintomas tpicos


da doena caneluras do
tronco, em V. rupestris,
cv. St. George.

Foto: Mirtes Freitas Lima.

Figura 4. Sintomas de
caneluras no cilindro
lenhoso de videira.

Essas doenas encontram-se disseminadas em reas


vitcolas de todo o mundo e, muito frequentemente,
podem ocorrer em infeco mista numa mesma
videira, acarretando severos prejuzos. No Brasil,
apenas a acanaladura do lenho de LN33 ainda no foi

detectada. Dentre estes agentes, o GVA e o GVB


do gnero Vitivirus so disseminados de maneira
semipersistente por cochonilhas algodonosas da Famlia
Pseudococcidae e de carapaa da Famlia Coccidae.
e) A necrose das nervuras ocorre em parreirais de
todo o mundo, em cultivares de uva europeias e
americanas e em alguns porta-enxertos. O sintomas
mais caracterstico da doena a necrose das
nervuras, principalmente naquelas secundrias e
tercirias, visveis na face dorsal da folha
(MARTELLI, 1986). A doena transmitida por meio
de material propagativo infectado e o seu agente
etiolgico , possivelmente, um vrus.

Deteco de Vrus em Videira


Diversos mtodos tm sido desenvolvidos para a
deteco e identificao de vrus de plantas. A
diagnose de doenas virais em videira baseada,
principalmente, em resultados obtidos nos testes de
campo e nos testes laboratoriais. Isso ocorre porque a
sintomatologia apresentada por plantas doentes no
campo pode ser complexa, envolver diversos agentes
virais e no ser caracterstica de uma doena em
particular. A ocorrncia de infeco latente um
outro fator a ser considerado.
Dessa maneira, plantas infectadas e sem sintomas
aparentes, podem propiciar a disseminao desses
patgenos quando utilizadas como matrizes. Alm
disso, um outro fator a ser levado em conta que
sintomas semelhantes aos de viroses apresentados
pela planta podem no ter sido incitados por vrus,
mas por outros patgenos ou mesmo por fatores
abiticos. A diagnose acurada, com a correta
identificao do agente causal da doena, assim como
a sua distribuio no campo, so essenciais para o
estabelecimento de medidas eficientes ao seu
controle. Por isso, mtodos biolgicos, sorolgicos e
moleculares tm sido utilizados na deteco e
identificao de vrus em videiras.

Mtodos Biolgicos
A diagnose de viroses em videiras era realizada
apenas por meio dos testes biolgicos, que so
trabalhosos e demandam muito tempo para a
obteno dos resultados. Entretanto, o
desenvolvimento dos mtodos sorolgicos e,
posteriormente, dos mtodos moleculares, viabilizaram
a identificao desses patgenos em material
propagativo infectado de forma rpida e acurada,
prevenindo a sua disseminao por meio de mudas e
gemas, garantindo a movimentao do material
propagativo de forma mais segura. Ainda hoje, os
mtodos biolgicos e os sorolgicos so considerados
os mais tradicionais, constituindo-se em ferramentas

Deteco e Controle de Viroses em Videira

fundamentais em programas voltados para a produo


de material livre de vrus. Embora os mtodos
sorolgicos e os moleculares permitam a identificao
de vrus de forma precisa, alm de serem
extremamente sensveis e rpidos, para que se
obtenha uma diagnose plenamente confivel, a
utilizao dos trs mtodos , geralmente, necessria.
No mtodo biolgico, a transmisso de vrus ocorre por
meio da unio de tecidos (enxertia) ou por inoculao
mecnica, podendo ser realizado em dois grupos de
plantas hospedeiras, denominadas indicadoras,
empregadas de acordo com a doena a ser identificada.
O primeiro grupo formado por plantas lenhosas, que
so diferentes cultivares de copa ou de porta-enxerto de
videira sensveis a determinadas viroses e, o segundo,
constitudo por plantas herbceas.
A indexao em plantas lenhosas realizada para a
deteco dos vrus que infectam a videira e so limitados
ao floema, no sendo transmitidos mecanicamente. Estes
pertencem s famlias Closteroviridae (GLRaVs),
Flexiviridae (RSPaV) e Tymoviridae (GFkV). A indexao
feita por meio de enxertia de gemas de videiras candidatas
em mudas de porta-enxertos e, tambm, em mudas de
material de copa (Figura 5). As plantas enxertadas so
mantidas em casa de vegetao por cerca de dois
meses e, posteriormente, transferidas para o campo,
onde permanecem por at 3 anos, quando ocorre a
avaliao dos sintomas. Alternativamente, as plantas
enxertadas podem ser mantidas em casa de vegetao,
pelo mesmo perodo de 3 anos at a avaliao.
Para o complexo rugoso da videira, aps o arranquio das
plantas, a casca do porta-enxerto removida para
verificao da presena de caneluras no lenho.

Mtodos Sorolgicos
A sorologia apresenta diversos mtodos para deteco
viral que se caracterizam pelo emprego de anticorpos
especficos capazes de reconhecer protenas
capsidiais. Um dos mtodos sorolgicos mais comuns
para deteco de vrus em material vegetal e insetos
vetores o ELISA (Enzyme-linked immunosorbent
assay), utilizado na deteco de vrus em plantas pela
primeira vez por Clark e Adams (1977). Neste, os
anticorpos produzidos contra a protena capsidial de
um determinado vrus so empregados na sua
deteco (Figura 6). Nesta reao, extratos preparados pela macerao de tecido vegetal infectado em
tampo so utilizados como antgeno.
No teste dot-blot ou dot-ELISA, o extrato das amostras
fixado em membrana de nitrocelulose, ao contrrio do
ELISA tradicional, no qual as amostras so depositadas em
poos de placas de microtitulao. Alm
desta diferena, sistemas distintos de
substrato/enzima so usados nas
reaes.

Fotos: Beverly Ferguson.

No caso das plantas herbceas, a inoculao feita


mecanicamente. As folhas de videira infectadas com
vrus so maceradas em tampo e o extrato
friccionado na superfcie das folhas dessas indicadoras,
previamente pulverizadas com agentes abrasivos,
como carborundo (500 mesh a 600 mesh) ou celite.
Estes abrasivos provocam pequenos ferimentos no limbo
foliar das plantas propiciando a penetrao das partculas
virais no tecido vegetal. As plantas inoculadas so
mantidas em casa de vegetao. Quando o vrus
transmitido s plantas indicadoras, estas apresentam
sintomas de 5 a 20 dias aps a inoculao. Os vrus de
maior importncia transmitidos por este mtodo pertencem
aos gneros Nepovirus (GFLV), Vitivirus (GVA e GVB) e
Closterovirus (GLRaV-2) (ROWHANI et al., 2005). As
indicadoras mais utilizadas pertencem aos gneros
Nicotiana, Chenopodium e Cucumis (Tabela 1).

Figura 5.
a Indexao em plantas lenhosas por enxertia. Corte realizado na muda do
porta-enxerto (a) para encaixe da gema do material a ser testado (b).

A coleta do material vegetal a ser


utilizado no preparo dos extratos
muito importante. Considerando-se que
os vrus apresentam distribuio
irregular dentro da planta, o estdio
fenolgico considerado e o tipo de
tecido a ser coletado devem estar
associados a maior concentrao
destes patgenos na planta, visando
favorecer a sua deteco.

Deteco e Controle de Viroses em Videira

Foto: Mirtes Freitas Lima.

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Figura 6. Deteco do GLRaV-3 por meio


do teste ELISA. Poos com colorao
amarela escura indicam amostras
positivas para o GLRaV-3 e poos sem
colorao ou quase incolor indicam
amostras negativas para esse vrus.

No preparo do extrato, tecido cambial ou pecolos e


nervuras de folhas maduras coletadas no final do ciclo
vegetativo constituem fontes de antgeno ideais para a
deteco de GLRaVs, GVA e GVB, enquanto que para
GFLV e GFkV, a deteco mais acurada em
preparaes obtidas a partir de folhas novas,
coletadas no incio do ciclo vegetativo da cultura.
O resultado do ELISA determinado por uma reao
enzimtica (enzima fosfatase alcalina conjugada ao
anticorpo) com um substrato especfico e a avaliao
realizada pela leitura da absorbncia em uma leitora
de placas, utilizando-se filtro de 405 nm. As amostras
so consideradas positivas quando o valor da sua
leitura for pelo menos duas vezes superior quele do
extrato da planta sadia, utilizado como controle
negativo. Este mtodo apresenta como vantagens: ser
rpido, podendo-se obter os resultados em um perodo
relativamente curto, 24 a 48 horas, ser sensvel e
poder ser utilizado para a avaliao de um grande
nmero de amostras. A limitao do teste ELISA
reside no fato de no haver anticorpos produzidos para
a identificao de todos os vrus que infectam videira.
Neste caso, outros tipos de testes devem ser
utilizados nessa identificao. Dentre os vrus
descritos anteriormente, anticorpos produzidos
comercialmente podem ser encontrados para GFLV,
GFkV, GVA, GVB e alguns GLRaVs.
O Western blot uma tcnica imunoeletrofortica
utilizada na caracterizao de protenas virais
(HAMMOND, 1993). Neste mtodo, protenas totais
extradas de plantas infectadas so desnaturadas e,

posteriormente, separadas em gel de SDSpoliacrilamida. As fraes da protena so transferidas


do gel para uma membrana de nitrocelulose. Esta
transferncia pode ser ativa, pela aplicao de uma
voltagem para propiciar a migrao das protenas do
gel para a membrana, ou passiva, na qual esta ocorre
por capilaridade. O processo de deteco das
protenas virais imobilizadas nas membranas envolve a
sua exposio aos anticorpos produzidos contra a
protena do vrus a ser detectado e a revelao da
membrana utilizando-se reagentes especficos.

Mtodos Moleculares
Dentre os mtodos moleculares, ou seja, aqueles
baseados na deteco do cido nucleico, a transcrio
reversa associada reao em cadeia da polimerase
(RT-PCR) (MULLIS et al., 1986) o mais utilizado. Os
vrus anteriormente citados podem ser identificados
por meio desta tcnica. A RT-PCR baseia-se na
amplificao e deteco do material gentico do vrus
de RNA ou apenas PCR, no caso de DNA, em
amostras vegetais infectadas. Neste mtodo, pelo
menos parte da sequncia do genoma do vrus a ser
detectado, precisa ser conhecida para dar origem
aos oligonucleotdeos que sero utilizados na reao.
O processo envolve as enzimas transcriptase reversa
e Taq DNA polimerase e a reao automatizada pela
incubao em um termociclador programado para
executar a transcrio reversa do RNA em DNA
complementar e os mltiplos ciclos da PCR, que visam
produo de um grande nmero de cpias do
fragmento alvo deste DNA. Dessa forma, a
amplificao seletiva de um fragmento do genoma do
vrus, compreendido entre dois oligonucleotdeos,
realizada a partir do RNA do vrus utilizado como
molde. Vale ressaltar que mais de 90% dos vrus de
plantas e todos os que infectam a videira possuem
RNA como material gentico.
O preparo do extrato da planta infectada a ser
utilizado na RT-PCR muito importante, tendo em
vista que os tecidos da videira contm altas
concentraes de polissacardeos e de compostos
fenlicos que podem inibir a ao das enzimas
utilizadas na PCR. A vantagem deste mtodo a sua
alta sensibilidade, isto , mesmo que o patgeno
esteja presente na amostra vegetal em pequenas
quantidades, a amplificao pela PCR propicia a sua
deteco. Os produtos da reao so visualizados por
meio de eletroforese em um gel de agarose. O
emprego de brometo de etdeo, corante mais
recomendado e utilizado, forma um complexo com o

Deteco e Controle de Viroses em Videira

DNA e permite que este possa ser visualizado sob luz


ultravioleta, na forma de uma banda (Figura 7).
Quando nenhum DNA de tamanho esperado for
visualizado em gel de agarose, significa que a amostra
vegetal no est infectada com o patgeno ou, ainda,
que a sua concentrao encontra-se abaixo do limiar
de deteco da tcnica utilizada.

Figura 7. Anlise em gel de agarose 1,5%, dos produtos da


RT-PCR realizada utilizando-se RNA total extrado de videira
infectada com RSPaV. A seta indica o fragmento especfico
de DNA amplificado com 650 nucleotdeos (pb=pares de
base).

Outros mtodos moleculares incluem a hibridizao,


Northern blot, utilizado na deteco de RNA
(SAMBROOK et al., 1989). Neste, o cido nucleico
viral imobilizado em membranas de nylon detectado
por meio da utilizao de sondas moleculares. Estas
so constitudas por fragmentos da sequncia do
genoma do vrus a ser detectado e podem ser
sintetizadas in vitro. As sondas podem ser radioativas,
ou seja, marcadas com 32P ou, ainda, as chamadas
sondas frias e, neste caso, marcadas com
digoxigenina. Para as amostras serem consideradas
positivas, deve haver complementaridade entre a
sequncia utilizada como sonda e aquela do vrus
presente na amostra testada, formando duplexes
(DNA:RNA ou RNA:RNA). Os resultados positivos so
detectados pela presena de manchas na membrana,
que servem de suporte para a fixao do cido
nucleico extrado das amostras. Esta tcnica
altamente especfica e requer mo-de-obra
especializada, sendo mais utilizada na caracterizao
de isolados virais e, esporadicamente, como mtodo
diagnstico.

Controle das Viroses da Videira


Dos problemas fitossanitrios que afetam a videira, os
vrus constituem o principal grupo de patgenos

disseminados por meio da multiplicao vegetativa.


Estes infectam as plantas de forma sistmica,
podendo ser detectados em todas as suas partes e,
neste caso, quando as plantas-matrizes esto
infectadas, as mudas produzidas a partir de material
propagativo - estacas ou gemas - oriundo dessas
matrizes resultam em plantas infectadas.
Alm da disseminao, a propagao vegetativa
propicia, ainda, o acmulo desses patgenos na planta
ao longo dos anos, dando origem a doenas
complexas, podendo envolver diferentes espcies de
vrus. Considerando que no h medidas curativas que
possam ser utilizadas no campo para as doenas
causadas por vrus, as estratgias para o seu manejo
devem estar direcionadas preveno da ocorrncia
da infeco. Estas incluem a erradicao de fontes de
inculo no campo, reduo da disseminao da doena
por meio do controle do vetor, utilizao de mudas e
material vegetativo livres de vrus e incorporao de
resistncia ao vrus (NAYDU; HUGHES, 2008). Entre
estas medidas, a utilizao de material propagativo
livre de doenas extremamente importante para
culturas perenes como a videira, multiplicada,
essencialmente, por via propagativa. Dessa maneira,
na obteno das mudas, essencial a utilizao de
material propagativo com certificado fitossanitrio de
origem, pois somente pelo plantio de mudas livres de
vrus, possvel realizar o controle de viroses em
campo.
Videiras afetadas apresentam uma srie de sintomas,
entre os quais reduo de vigor, declnio e queda da
produtividade. Plantas doentes so, tambm, fonte de
inculo viral para a disseminao secundria por
vetores como insetos e nematides para plantas
sadias. Considerando estes fatores, os mtodos mais
importantes e eficientes para o controle de viroses em
culturas perenes inclui a aplicao de estratgias
como a seleo sanitria, a obteno de clones sadios
e o controle de vetores.

Seleo Sanitria
A aquisio e o plantio de mudas certificadas, livres de
vrus, de fundamental importncia no estabelecimento
de novas reas, pois, esta medida diminui o risco da
introduo desses patgenos no parreiral e, assim, reduz a
sua disseminao via material propagativo infectado. A
qualidade sanitria do material propagativo a ser utilizado
na produo de mudas primordial, e a seleo sanitria
constitui a primeira etapa desse processo.
As estacas enraizadas e as gemas devem ser originadas de

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Deteco e Controle de Viroses em Videira


plantas-matrizes livres dos vrus para os quais essas videiras
tenham sido indexadas. Estas matrizes devem ter sido
submetidas a testes biolgicos, sorolgicos e/ou
moleculares, para certificao da ausncia de vrus.
Dessa maneira, na obteno dessas plantas, que so as
fontes primrias de propagao, diversas etapas devem
ser realizadas, incluindo-se a seleo sanitria e a
seleo clonal. O primeiro passo envolve a escolha de
plantas dentro do parreiral, segundo determinados
critrios tais como conformidade varietal, vigor vegetativo,
produtividade e qualidade sanitria, observadas ao longo
de diversos ciclos vegetativos consecutivos.
As videiras livres de problemas fitossanitrios e que
apresentem boas caractersticas produtivas so as
candidatas ideais para serem selecionadas como
plantas-matrizes. Os clones oriundos dessas videiras
so mantidos em campo e avaliados por alguns ciclos
vegetativos. No processo de seleo clonal, os clones
candidatos permanecem no campo e so avaliados por
um perodo de 2 a 3 anos. A avaliao sanitria das
plantas selecionadas realizada com a utilizao de
ferramentas diagnsticas tais como indexao em
plantas lenhosas ou herbceas, testes sorolgicos e
moleculares. Os clones selecionados segundo os
resultados desses testes sero as fontes primrias que
devem ser cultivadas sob condies controladas, em
casa de vegetao telada.

Obteno de Clones Sadios


A termoterapia associada cultura de tecidos pode
ser utilizada na obteno de plantas sadias a partir de
videiras infectadas com vrus. O mtodo baseia-se no
princpio de que a inativao desses patgenos em
material vegetal infectado possvel por meio de sua
exposio prolongada a determinadas temperaturas.
Outro fator importante que os vrus no seriam
capazes de atingir o pice caulinar ou os meristemas
das brotaes novas, emitidas durante o processo de
termoterapia, considerando que esta condio
desfavoreceria a multiplicao viral. Embora a
termoterapia e o cultivo in vitro sejam mtodos
trabalhosos, onerosos, e que demandam um longo
perodo de tempo para que novas plantas sejam
obtidas, e para que o processo de indexagem seja
concludo, apresentam grande eficincia na obteno de
videiras livres de vrus. As plantas infectadas so
mantidas temperatura de 37 C a 38 C por um
perodo que varia de 30 a 150 dias ou at mais, de
acordo com o vrus a ser eliminado. Para o GFLV, este
perodo varia de 30 a 42 dias; 90 dias para o GVB; 60
a 120 dias para os vrus do enrolamento da folha
(GLRaV) (GOHEEN, 1977); 150 dias para o GVA

(MARTELLI, 1993) e mais de 150 dias para o RSPaV


(LEGIN et al., 1979).
As tcnicas de cultura de tecidos so empregadas
aps o tratamento termoterpico das plantas, quando
os pices das brotaes so extrados - micropagao
de segmentos caulinares de uma gema - ou os
meristemas so excisados e, posteriormente,
cultivados em condies in vitro. As videiras
regeneradas passam por um processo de indexao
para certificao do seu estado sanitrio.

Controle de Vetores
No Brasil, so escassas as informaes disponveis
sobre as espcies de cochonilhas presentes nas
principais regies vitcolas e a magnitude de atuao
destas como vetores de vrus. Apesar disso,
recomenda-se que o seu controle seja feito no
parreiral considerando, principalmente, se so vetores,
esto virulferos e podem transmitir vrus para plantas
sadias. Segundo Botton e Fajardo (2003), algumas das
espcies j identificadas em parreirais brasileiros so
Pseudococcus viburni, P. vitis, P. longispinus e
Planococcus citri. Ainda de acordo com Botton e
Fajardo (2003), o controle desses insetos ainda uma
prtica pouco frequente, pois as cochonilhas so
difceis de serem observadas e permanecem no solo
ou sob a casca das videiras grande parte do tempo.
Dessa maneira, o estabelecimento de medidas
racionais essencial, a exemplo do monitoramento do
vetor em campo para deteco dos focos de
infestao, como tambm, do perodo de migrao das
ninfas do solo para a parte area das plantas
(BOTTON; FAJARDO, 2003).
A realizao de inspees rotineiras - monitoramento dos parreirais para deteco de pragas constitui a
base do Manejo Integrado de Pragas (MIP), que um
dos componentes mais importantes da Produo
Integrada da Uva (PI-Uva) (LOPES et al., 2009). Estas
visam dar suporte definio do melhor momento
para a utilizao do controle qumico, na tentativa de
reduzir a disseminao da doena quando esta
encontra-se estabelecida no parreiral.
No caso do GFLV que transmitido por nematides,
videiras infectadas devem ser eliminadas e as razes
remanescentes no solo devem ser arrancadas e
destrudas, sendo que o replantio de mudas de videira
em solo infestado com nematides, no deve ser
efetuado imediatamente; somente aps um perodo de
10 anos (MARTELLI; SAVINO, 1994). Nestas reas e
naquelas ainda no implantadas, mtodos como o
pousio prolongado, a eliminao de plantas daninhas e a

Deteco e Controle de Viroses em Videira


fumigao do solo podem ser adotadas visando quebrar o
ciclo do nematide vetor. Entretanto, devido ao alto custo
do tratamento com nematicidas, este recomendado
apenas em reas muito limitadas, como em viveiros.

LOPES, P. R. C.; HAJI, F. N. P.; BORGES, R. M. E.; ASSIS,


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Agradecimentos

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(Ed.). Graft-transmissible diseases of grapevines: handbook for
detection and diagnosis. Rome: FAO, 1993. p. 45-54.

Ao Dr. Gilmar B. Kuhn, ex-pesquisador da Embrapa


Uva e Vinho, Bento Gonalves, RS, pela concesso das
fotos (Figuras 1 e 2) que ilustram esta publicao.

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Circular
Tcnica, 90

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