Informe de laboratorio

Prctica
Pruebas Cualitativas Para
Carbohidratos

Bioqumica

Presentado por:

Presentado a:

FUNDAMENTOS TERICOS.
PRUEBA DE MOLISH: El cido sulfrico concentrado hidroliza los enlaces
glicosdicos para dar monosacridos que pueden ser luego deshidratados dando
furfural y sus derivados. Estos productos se combinan con -naftol sulfonato,
originando un complejo prpura. Esta reaccin es general para los carbohidratos
pero algunos otros compuestos orgnicos dan tambin furfural con cido sulfrico
concentrado.
PRUEBA DE BENEDICT: Es una
modificacin de la prueba de felhing,
introducida por Benedict. En ella se usa nicamente una solucin, lo cual lo hace

mucho ms simple con la ventaja adicional de que el reactivo es ms estable que

el de felhing. Esta prueba solo la dan los azucares reductores.
PRUEBA DE BARFOED: reactivo de Barfoed es dbilmente cido y solamente
puede ser reducido por monosacridos. Si se deja hervir por largo tiempo
existe la posibilidad de hidrolizar los disacridos dando as reacciones
falsamente positivas. El precipitado de xido cuproso es menos denso que en
los mtodos previos y se recomienda dejar el tubo en reposo hasta que el
precipitado sedimente.
PRUEBA BIAL PARA PENTOSAS. Cuando se calientan las pentosas en cido
clorhdrico concentrado se forma furfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones frricos para dar un color verde azuloso.
PRUEBA DE SELLIWANOFF. Las cetosas deshidratan ms rpidamente que las
aldosas dando derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar
un complejo rosado; por lo tanto debe evitarse un calentamiento prolongado de la
muestra que se est estudiando.
PRUEBA PARA SACAROSA. La sacarosa es el nico disacrido comn no
reductor y por lo tanto no reduce las soluciones alcalinas de cobre. Esta es
hidrolizada en solucin cida y luego se ensayan la glucosa y la fructosa
resultante.
PRUEBA PARA POLISACRIDOS. Los polisacridos contienen slo un grupo
reductor por varios cientos o ms residuos, as que en la prctica, no son
reductores. La hidrlisis cida libera los monosacridos constituyentes que luego
son ensayados.

OBJETIVOS.
Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema
mediante la prueba de molish.

 Diferenciar carbohidratos reductores de no

comportamiento frente al reactivo de Benedict.

reductores

por

su

Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos

especficos.

MATERIALES Y RECTIVOS
Pipetas de 5 y de 10ml.
Beakers de 100 y 400ml.
10 tubos de ensayo.

Reactivo de Bial.
Gradilla
Reactivo de Selliwanoff.
Papel tornasol
Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa,
Sacarosa, lactosa, fructosa, almidn, leche (traer de la casa)
Solucin de yodo.
Leche (traer)
Reactivo de Molish
cido sulfrico concentrado
Reactivo de Benedict
Reactivo de Barfoed
Pinzas para tubos de ensayos
Alcohol amlico
cido clorhdrico
Hidrxido de sodio 1M
gotero

PROCEDIMIENTO
Prueba de Molish: Se le Agregaron 5 gotas del reactivo de Molish a 1 ml de una
muestra que contena carbohidratos (Leche). Luego se le aadi cuidadosamente
por las paredes del tubo 1ml de cido sulfrico concentrado, hasta que se
formaron dos capas. Se observaron cualquier cambio de color en la interfase de
los dos lquidos.
Prueba de Benedict: Se Tomaron 3 tubos de ensayo y se le agreg al primero
0.5 ml de solucin de lactosa, al segundo 0.5 ml de solucin de glucosa y al

tercero 0.5 ml de solucin de sacarosa. Se les Adicion 0.5 ml del reactivo de

Benedict a cada tubo y se colocaron en un bao de agua hirviendo por 3 min.
Prueba de Barfoed: Se tomaron 3 tubos de ensayo, se le adicion al primero 0.5
ml de solucin de galactosa, al segundo 0.5 ml de solucin de ribosa y al tercero
0.5 ml solucin de almidn. Despus se le adicion 1 ml del reactivo de Barfoed a
cada tubo, hirvieron por 2 min y se dejaron reposar.
Prueba Bial: Se tomaron 3 tubos de ensayo; luego se le adicion al primero
0.5ml de solucin de ribosa, al segundo 0.5ml de solucin de arabinosa y al
tercero 0.5ml de solucin de almidn. Despus se le adicion 0.5 ml del reactivo
de Bial a cada tubo y se calentaron hasta que empez a hervir, se dej enfriar y
luego se le agreg 1 ml de alcohol amlico se procedi a agitar.
Prueba de Salliwanof: Se tomaron 3 tubos de ensayo; Luego se le adicion al
primero 0.5ml de solucin de fructosa, al segundo 0.5ml de solucin de arabinosa
y al tercero 0.5ml de solucin de glucosa. Despus se le Adicion 1ml del reactivo
de Selliwanoff a cada tubo. Se Calent durante 1 min en un bao de agua
hirviendo.
Prueba para sacarosa: A 2.5 ml de una solucin de sacarosa se le agreg 3
gotas de cido clorhdrico concentrado, caliente durante 5 minutos en un bao de
agua hirviendo, se enfri y se le agreg Hidrxido de Sodio 1M hasta que la
solucin sea neutra o ligeramente alcalina (prueba con papel tornasol), luego se
dividi la solucin hidrolizada en dos porciones y se realiz por separado las
pruebas de Benedict y Selliwanoff.
Prueba para polisacridos: Se coloc 1ml de solucin de almidn, luego se le
aadi 1 gota de solucin de yodo. Se Observ la produccin de un color azul.
Despus se Calent el tubo.

ANALISIS Y RESULTADOS
PRUEBA DE MOLISH:
Se obtuvo un cambio de color, se present en la forma de un anillo de color
purpura.

Muestra Prueba de Molish

PRUEBA DE BENEDICT:

Antes
Despus

En l tubo uno dio un color ladrillo y tiene presencia de la azcar reductora.

En el tubo dos dio un color ladrillo y tiene presencia de la azcar reductora.

En l tuvo tres no dio los resultados esperados, no tiene presencia de la azcar

reductora.
PRUEBA DE BARFOED:

Muestra Prueba de Barfoed

En los tres tubos dio el
ladrillo aunque no se
la presencia de

resultado esperado un color rojo

nota tanto esto indica que tienen
monosacridos.

PRUEBA DE BIAL:

En los tubos 1 y
presenta la
verdosa asi que

Muestra Prueba de Bial

2 la prueba es positiva ya que

aparicin de una coloracin azul
es positiva para pentosas.

En el tubo 3 no se present ninguna reaccin.

PRUEBA

SELLIWANOFF:

Muestra Prueba de
Selliwanoff
En el tubo 1 dio
color rosado la
cetosas. En los tubos
resultados esperados.

positivo, ya que obtuvimos un

prueba es positiva para
2 y 3 no obtuvieron los

PRUEBA DE SACAROSA:

Antes
Despus

Como resultado a aparte

se obtuvo:

Muestra Prueba de
Selliwanoff
Y Benedict
La prueba de benedict y selliwanoff nos dieron positivas.
PRUEBA DE POLISACARIDOS:

Antes
Despus

Como resultado se
obtuvo un
precipitado el color
azul quedo en el
fondo del tubo y en
la parte superior quedo color transparente, luego de dejar enfriar; volvi todas las
sustancias homogneas.

CONCLUSIN
Despus de analizado el trabajo podemos concluir que utilizando las pruebas que
realizamos en esta prctica, se usan para poder detectar carbohidratos, pentosas,
aldosas, cetosas, su accin reductora de azucares y carbohidratos lineales y
ramificados. Esto es muy importante en nuestra carrera para poder diferenciar
que sustancias pueden ingerir cierto organismo cual las pueden rechazar y como
pueden reaccionar algunas con un cierto organismo metabolizndolas

CUESTIONARIO
1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para
carbohidratos.
2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas?
Respuesta:/
Reaccin de Molish. La prueba de Molish est basada en la formacin de
furfural o derivados de ste a partir de los carbohidratos, que se condensan
con el alfa-naftol, dando un producto violeta. Es una reaccin muy sensible
puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa al 0.0001% dan
positiva la prueba. Esta prueba tambin es positiva para aldehdos, cetonas
y algunos cidos como frmico, oxlico, lctico y ctrico. Tambin sirve para
el reconocimiento general de carbohidratos donde polisacridos y
disacridos se hidrolizan formando monosacridos formando un color
purpura violeta.
Reaccin de Benedict. Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en
presencia de agentes oxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta
caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es
oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con un
grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los
que el grupo carbonilo se encuentra combinado en unin glicosdica se
conocen como azcares no reductores.
Reaccin de Barfoed. Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos
y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta
oxido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los
disacridos. Reaccin de Bial. La prueba de Bial es una reaccin
caracterstica de pentosas y est basada en la formacin de furfural a partir
de pentosas y posterior condensacin con el floroglucinol dando un color
rojo verdoso.
Reaccin de Seliwanoff. La prueba de Seliwanoff es una reaccin para
diferenciar cetosas de aldosas; aunque ambas dan la reaccin, las cetosas
la dan rpidamente y las aldosas lentamente .Est basada en la formacin
de durfural o en un derivado de ste y su posterior condensacin con el
resorcinol dando un color rojo fuego para cetosas y rosa para aldosas.
1. Explique estructuralmente, porque la maltosa es
reductor y por que el almidn no lo sus observaciones
Respuesta:/

un

azcar

Maltosa: es un azcar reductor porque tienen un carbono anomrico libre

capaz de oxidarse, si puede oxidarse, entonces puede reducir a otro
compuesto, por eso es reductor. De tal modo que todo monosacrido tiene
poder reductor, sea una aldosa o una cetosa, porque posee potencialmente
un carbono cuyos sustituyentes pueden oxidarse.
Almidn: se considera un azcar no reductor porque a pesar de que tiene
carbonos anomricos libres capaces de oxidarse, hay muy pocos en
comparacin a la cantidad de unidades de monosacridos que componen el
almidn. Es decir, solo los de los extremos de la larga cadena que compone
al almidn pueden oxidarse.
2. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de
los carbohidratos.
Respuesta:/El consumo de carbohidratos en exceso puede provocar, como
todos los excesos, enfermedades y problemas en el organismo.
Estas enfermedades por exceso de carbohidratos estn directamente
relacionadas con los rganos del cuerpo que participan en Una de estas
enfermedades es la obesidad: se produce, generalmente por el consumo en
exceso de los carbohidratos llamados refinados que son los azcares,
almidones y sus combinaciones manufacturadas, por ejemplo: golosinas,
productos de confitera, panes y pastas. El organismo simplemente, recibe
ms energa de la que necesita y comienza a acumularla en el cuerpo. Otra
enfermedad provocada por el exceso de carbohidratos es la diabetes, como
se dijo, tambin es provocada por la obesidad. El metabolismo de
carbohidratos es el que se encarga de convertir los carbohidratos que
consumimos en energa. La mayora de los carbohidratos refinados
provocan un aumento del ndice de glucosa en el organismo. La insulina es
una hormona producida en el pncreas que se encarga de trasladar la
glucosa por la sangre hasta las clulas que la transforman en energa. Otra
enfermedad que provocada por el exceso de carbohidratos dulces son las
caries, especialmente en los nios. Por lo que lo ms importantes es
mantener una dieta equilibrada y comer sano, siempre eligiendo los
alimentos naturales e integrales a los fabricados o comunes
3. Por qu la celulosa a pesar de estar formada por molculas de
glucosa es insoluble en agua.
Respuesta:/
La celulosa tiene una estructura lineal o fibrosa, en la que se establecen
mltiples puentes de hidrgeno entre los grupos hidroxilo de distintas
cadenas y estn compuestas puestas de glucosa, hacindolas
impenetrables al agua, lo que hace que sea insoluble en agua, y originando
fibras compactas que constituyen la pared celular de las clulas vegetales.

4. por que la sacarosa es un azcar no reductor? Consulte las

posibles estructuras de las muestras problemas.
Respuesta:/
La sacarosa es un azcar no reductor porque ambos carbonos anomricos
forman un acetal y cetal respectivamente.

5. Consulte el fundamento de otras tcnicas

determinacin de la glucosa en el laboratorio.

usadas

para

la

MTODOS BASADOS EN EL PODER REDUCTOR DE LOS HIDRATOS DE

CARBONO.
* Reduccin del cobre: se basa en la capacidad que tiene la glucosa para
reducir los iones cpricos (Cu2+) a iones cuprosos (Cu+). Por
calentamiento, los iones cuprosos pueden formar oxido cuproso (Cu2O), el
cual puede ser detectado por diversos mtodos
* Mtodo de la o-toluidina: se basa en la condensacin de azucares
reductores con orto-toluidina en un medio de cido actico glacial
producindose en cromgeno.
MTODO ENZIMTICO
* Mtodo De Hexoquinasa: es un mtodo de referencia, se basa en la
fosforilacin de la glucosa por la enzima hexocinasa.
* Mtodo De Glucosa Oxidasa: se basa en la oxidacin de la glucosa por la
enzima glucosa oxidasa, reaccin en la que se consume oxigeno (O2) y se
genera agua oxigenada (H2O2).

BIBLIOGRAFIA:
PLUMER, D.T. Introduccin a la bioqumica prctica. Mexico. MaGrawLatinoamericana, S.A.

Hill

CONN, E y Stumpf, P.K. Bioqumica F.

LOPEZ, E y ANZOLA, C. Guas de laboratorio de Bioqumica. Facultad de
ciencias. Universidad
Nacional de Colombia sede Bogota.