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SORO

ANTI-D
(ANTIRho)
Monoclon
al IgM +

SORO ANTI-D (ANTI-Rho)


Monoclonal IgM + IgG combinados
ANTI-D (ANTI-Rho)
Para testes em lmina, tubo e deteco de Dfraco
INTRODUO
As expresses Rh positivo ou Rh negativo so baseadas na presena ou
ausncia do antgeno D (RH1) nas hemcias. De acordo com Mollinson(1)
aproximadamente 15% dos caucasianos no tm o antgeno D e so
normalmente estimulados pelo D(+) a produzir Anti-D na gravidez ou transfuso
sangunea. Isto pode causar a Doena Hemoltica do Recm-nascido ou
severa reao hemoltica transfusional.
Depois dos antgenos do sistema de grupos sanguneos ABO, o D o antgeno
de grupo sanguneo mais importante na rotina do Banco de Sangue. De modo
diferente do Sistema ABO, os anticorpos do Sistema Rh no ocorrem
regularmente no soro mas, quase sempre so resultados da exposio ao
antgeno durante a gestao ou em uma transfuso de sangue.
O termo genrico Dfraco usado para designar clulas que tm diferenas
quantitativas ou qualitativas das hemcias normais D(+). O componente anti-D
IgM monoclonal deste reagente causar aglutinao direta das hemcias que tm
antgeno D e a maioria das variantes Dfraco. O componente anti-D IgG
monoclonal aglutinar as baixas expresses de Dfraco atravs do teste de
antiglobulina indireto.
PRINCPIO DO TESTE
O procedimento do teste recomendado para uso dos reagentes baseado na
aglutinao das hemcias que tm antgeno D na presena de anticorpo ANTI-D.
O reagente uma mistura de Anti-D IgM monoclonal humano derivado do clone
Th28 e anti-D IgG monoclonal humano derivado do clone
MS26. A presena ou a ausncia do antgeno D determinada testando as
hemcias com Anti-D. A Aglutinao indica que as hemcias em teste so D
positivo. A ausncia de aglutinao indica que as hemcias em teste so D
negativo, devendo ser testadas para D fraco.
Para que o resultado do teste com o Soro Anti-D seja vlido necessrio
realizar em paralelo um teste com o reagente Controle Rh, a fim de se detectar
falsas reaes positivas que podem ser causadas por rouleaux, aglutininas frias
ou auto-anticorpos.
DESCRIO DO REAGENTE
Anti-D monoclonal humano IgM + IgG combinados um reagente de baixa
concentrao protica, formulado para uso em teste rpido em lmina e em tubo.
O uso deste reagente apropriado para o mtodo de deteco das variantes
Dfraco. O reagente contm albumina bovina. Isto tem favorecido os resultados
apresentados pelas tcnicas recomendadas sem quaisquer diluies ou adies. O
reagente contm 0,1% de azida sdica e somente para uso no diagnstico
profissional in vitro. Utilizar o reagente com cuidado para manter a esterilidade
dos produtos. No utilizar os reagentes que apresentarem turvao. No pipetar
com a boca
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhado de conta
gotas. Soro Anti-D
cd. 103
lquido incolor
ARMAZENAMENTO
O reagente deve ser estocado entre 2-8C. No congelar ou expor o produto
temperaturas elevadas.
CUIDADOS E PRECAUES
No utilizar o produto aps a data de vencimento
No reutilizar os frascos vazios.
O reagente contm azida sdica que pode reagir com cobre e chumbo dos
encanamentos formando sais explosivos. No descarte, diluir com grande
quantidade de gua para impedir a formao destes compostos.
Os materiais de origem biolgica devem se considerados como pontecialmente
infectantes. Devem ser estabelecidos mtodos adequados para manuseio e
descarte equivalentes aos utilizados no descarte das amostras.
COLETA E PREPARO DAS AMOSTRAS
No necessrio nenhum preparo especial do paciente para a coleta da amostra.
O sangue deve ser colhido com tcnica assptica, com ou sem anticoagulante e
o soro separado o mais breve possvel para realizao dos testes.
As hemcias obtidas de cogulo podem ser tipadas em 5 dias aps sangria. As
amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser tipadas em at 48 horas.
Se a demora para a execuo do teste for inevitvel, hemcias de sangue
coagulado e as colhidas em EDTA ou heparina devem ser separadas do
soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em soluo preservativa de glbulos.
Estocar a 2-8C por no mximo 20 dias. O armazenamento prolongado de
hemcias antes da execuo do teste pode causar deteriorao de antgenos e
resultar em reaes mais fracas.
PROCEDIMENTO PARA TESTE

Tcnica em Lmina ( efetuar ao mesmo tempo o teste com o reagente


Controle Rh Ebram) :
1Preparar a suspenso de eritrcitos a 40% em soluo fisiolgica
0,85%.
2Colocar uma gota do Soro Anti-D Ebram na lmina pr-aquecida
(no obrigatoriamente) em aglutinoscpico, facilitando a
observao de reaes fracas pelo efeito de iluminao e
contraste
3Adicionar 2 gotas da suspenso de eritrcitos.
4Misturar o reagente com a suspenso em uma rea de 2 x 2 cm.
5Movimentar gentilmente a lmina para promover a mistura e
examinar a presena ou no de aglutinao.
6Os testes que no apresentarem aglutinao, devero ser
observados por 2 minutos e no mais. No interpretar secagem
perifrica como aglutinao.

SORO
ANTI-D
(ANTIRho)
Monoclon
al IgM +

7-

Se o resultado for negativo executar os procedimentos da Tecnica para


deteco das formas fracas do antgeno D.

SORO ANTI-D (ANTI-Rho)


Monoclonal IgM + IgG
combinados

albumina bovina. Isto tem favorecido os resultados apresentados pelas tcnicas


recomendadas sem quaisquer diluies ou adies. O reagente contm 0,1% de
azida sdica e somente para uso no diagnstico profissional in vitro. Utilizar
o reagente com cuidado para manter a esterilidade dos produtos. No utilizar os
reagentes que apresentarem turvao. No pipetar com a boca
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhado de conta
gotas. Soro Anti-D
cd. 103
lquido incolor

ANTI-D (ANTI-Rho)
Para testes em lmina, tubo e deteco de Dfraco

ARMAZENAMENTO
O reagente deve ser estocado entre 2-8C. No congelar ou expor o produto
temperaturas elevadas.

INTRODUO
As expresses Rh positivo ou Rh negativo so baseadas na
presena ou ausncia do antgeno D (RH1) nas hemcias. De acordo
com Mollinson(1) aproximadamente 15% dos caucasianos no tm o
antgeno D e so normalmente estimulados pelo D(+) a produzir
Anti-D na gravidez ou transfuso sangunea. Isto pode causar a
Doena Hemoltica do Recm-nascido ou severa reao hemoltica
transfusional.

CUIDADOS E PRECAUES
No utilizar o produto aps a data de vencimento
No reutilizar os frascos vazios.
O reagente contm azida sdica que pode reagir com cobre e chumbo dos
encanamentos formando sais explosivos. No descarte, diluir com grande
quantidade de gua para impedir a formao destes compostos.
Os materiais de origem biolgica devem se considerados como pontecialmente
infectantes. Devem ser estabelecidos mtodos adequados para manuseio e
descarte equivalentes aos utilizados no descarte das amostras.

Depois dos antgenos do sistema de grupos sanguneos ABO, o D


o antgeno de grupo sanguneo mais importante na rotina do Banco
de Sangue. De modo diferente do Sistema ABO, os anticorpos do
Sistema Rh no ocorrem regularmente no soro mas, quase sempre
so resultados da exposio ao antgeno durante a gestao ou em
uma transfuso de sangue.

COLETA E PREPARO DAS AMOSTRAS


No necessrio nenhum preparo especial do paciente para a coleta da amostra.
O sangue deve ser colhido com tcnica assptica, com ou sem anticoagulante e
o soro separado o mais breve possvel para realizao dos testes.
As hemcias obtidas de cogulo podem ser tipadas em 5 dias aps sangria. As
amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser tipadas em at 48 horas.
Se a demora para a execuo do teste for inevitvel, hemcias de sangue
coagulado e as colhidas em EDTA ou heparina devem ser separadas do
soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em soluo preservativa de glbulos.
Estocar a 2-8C por no mximo 20 dias. O armazenamento prolongado de
hemcias antes da execuo do teste pode causar deteriorao de antgenos e
resultar em reaes mais fracas.

O termo genrico Dfraco usado para designar clulas que tm


diferenas quantitativas ou qualitativas das hemcias normais D(+).
O componente anti-D IgM monoclonal deste reagente causar
aglutinao direta das hemcias que tm antgeno D e a maioria das
variantes Dfraco. O componente anti-D IgG monoclonal aglutinar as
baixas expresses de Dfraco atravs do teste de antiglobulina indireto.
PRINCPIO DO TESTE
O procedimento do teste recomendado para uso dos reagentes
baseado na aglutinao das hemcias que tm antgeno D na
presena de anticorpo ANTI-D. O reagente uma mistura de Anti-D
IgM monoclonal humano derivado do clone Th28 e anti-D
IgG
monoclonal
humano
derivado
do
clone
MS26. A
presena ou a ausncia do antgeno D determinada testando as
hemcias com Anti-D. A Aglutinao indica que as hemcias em
teste so D positivo. A ausncia de aglutinao indica que as
hemcias em teste so D negativo, devendo ser testadas para D
fraco.
Para que o resultado do teste com o Soro Anti-D seja vlido
necessrio realizar em paralelo um teste com o reagente Controle Rh,
a fim de se detectar falsas reaes positivas que podem ser causadas
por rouleaux, aglutininas frias ou auto-anticorpos.
DESCRIO DO REAGENTE
Anti-D monoclonal humano IgM + IgG combinados um reagente
de baixa concentrao protica, formulado para uso em teste rpido
em lmina e em tubo. O uso deste reagente apropriado para o
mtodo de deteco das variantes Dfraco. O reagente contm

Tcnica em Tubo:
1Preparar uma suspenso a 3 5% das hemcias a serem testadas, em
soluo fisiolgica 0,85%,
2Colocar uma gota do Soro Anti-D Ebram em um tubo devidamente
identificado. Em um segundo tubo (controle negativo) colocar uma gota do
reagente Controle Rh Ebram
3Acrescentar uma gota da suspenso nos tubos do soro Anti D e no tubo do
Controle Rh Ebram. Misture bem o contedo
4Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm ( 900 1000g) ou 1 minuto a
1000 rpm (100 125g)
5Examinar a ausncia de hemlise e ressuspender o boto de hemcias,
agitando delicadamente o tubo, observando a presena ou no de
aglutinao.
6Graduar e registrar os resultados
7Se o teste for negativo ou duvidoso proceder a realizao de teste para D
fraco a partir do item 4 da tcnica para deteco de antgeno D fraco.
Obs: A calibrao adequada das centrfugas so imprescindvel para a garantia da
qualidade dos resultados.
Tcnica para deteco de antgeno Dfraco .
1Preparar uma suspenso a 3 5% das hemcias a serem testadas, em
soluo fisiolgica 0,85%,
2Colocar uma gota do Soro Anti-D Ebram em um tubo devidamente
identificado. Em um segundo tubo (controle negativo) colocar uma gota do
reagente Controle Rh Ebram
3Acrescentar uma gota da suspenso nos tubos do soro Anti D e no tubo do
Controle Rh Ebram. Misture bem o contedo
4Incubar os tubos por 15 minutos 37C
5Lavar as hemcias dos tubos 3 vezes com soluo fisiolgica 0,85% e aps
a ltima lavagem remover completamente a salina
6Adicionar 2 gotas do Soro Anti-Humano Ebram para cada tubo. Misturar bem.
7Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm ( 900 1000g) ou 1 minuto a
1000 rpm (100 125g)
8Examinar a ausncia de hemlise e ressuspender o boto de hemcias,
agitando delicadamente o tubo, observando a presena ou no de
aglutinao.
9Graduar e registrar os resultados.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS


Positivo: Excluindo-se as limitaes do teste, a aglutinao dos eritrcitos pelo reagente
indica presena de antgeno D.
Negativo: Excluindo-se as limitaes do teste, a ausncia de aglutinao dos eritrcitos pelo
reagente indica ausncia de antgeno D.
A tabela seguinte fornece a interpretao dos resultados:

+
-

Controle
Rh
-

+ ou -

Anti-D

LIMITAES DO TESTE

Pesquisa do
Fator Rh
Antgeno D fraco
No testado
Positivo
+
Positivo
Negativo
Teste invlido Analisar se o procedimento
realizado est de acordo com as instrues

PROCEDIMENTO PARA TESTE

Tcnica em Lmina ( efetuar ao mesmo tempo o teste com o reagente


Controle Rh Ebram) :
1Preparar a suspenso de eritrcitos a 40% em soluo fisiolgica
0,85%.
2Colocar uma gota do Soro Anti-D Ebram na lmina pr-aquecida
(no obrigatoriamente) em aglutinoscpico, facilitando a
observao de reaes fracas pelo efeito de iluminao e
contraste
3Adicionar 2 gotas da suspenso de eritrcitos.
4Misturar o reagente com a suspenso em uma rea de 2 x 2 cm.
5Movimentar gentilmente a lmina para promover a mistura e
examinar a presena ou no de aglutinao.
6Os testes que no apresentarem aglutinao, devero ser
observados por 2 minutos e no mais. No interpretar secagem
perifrica como aglutinao.
7Se o resultado for negativo executar os procedimentos da Tecnica
para deteco das formas fracas do antgeno D.

A reatividade das hemcias humanas D positivas podem variar bastante. Certos indivduos D positivo
possuem pequena quantidade de stios D de tal forma que no sero evidenciados pelas tcnicas
de classificao utilizando reagentes Anti-D Monoclonais. Assim, certos reagentes Anti-D no
detectam um antgeno D de baixa expresso de alguns indivduos. O reagente de origem
monoclonal IgG + IgM tem precisamente a propriedade de melhora a deteco destes antgenos
D de baixa expresso. Fentipos D muito fracos tais como D parciais, particularmente os de
categorias IV e VI podem, eventualmente, no ser detectados pela tcnica direta.
As hemcias com teste de antiglobulina direta positiva tero a pesquisa das formas fracas do
antgeno D prejudicada. Tratando-se de sangue de doador, o mesmo no dever ser utilizado para
fins transfusionais.
Resultados falso-positivo ou reaes fracamente positivas podem ocorrer com amostras de sangue de
subgrupos A e B ou aps estocagem prolongada.
Variveis relativas ao procedimento tcnico, tais como: tcnica, suspenses muito concentradas ou
diludas, centrifugaes ou incubaes inadequadas, amostra e salina contaminadas ou vidraria
suja podem causar falsas reaes positivas ou negativas
GARANTIA
Este produto garantido pela Ebram Produtos Laboratoriais Ltda se conservado na temperatura
recomendada, utilizado durante o prazo de validade e seguindo recomendaes do rtulo e
dessa instruo de uso.
REFERNCIAS
1. Widmann F.K. ed Technical Manual 9th Edition Washington D.C. American Association of Blood
Banks 1985 Chapter 8.
2. Race R.R. and Sanger R. Blood Groups in Man 6th Editioon Oxford Blackwlell Scientific
Publications 1975.
3. Issitt P.D. Applied Blood Group Serology 3rd Edition Montgomery Scientific publicantions Miami,
Florida USA 1985.
4. Walker Rh, ed.Technical manual. 11th editin. Bethesda: AABB, 1993.
5. Mollison PL. Blood Transfusion in clinical medicine. 7th ediditon. Oxforf: Blackwell Scientific, 1983.
6. Guidelines for the Blood Transfusion Servie H.M.S.O.

Tcnica em Tubo:
1Preparar uma suspenso a 3 5% das hemcias a serem testadas,
em soluo fisiolgica 0,85%,
2Colocar uma gota do Soro Anti-D Ebram em um tubo devidamente
identificado. Em um segundo tubo (controle negativo) colocar uma
gota do reagente Controle Rh Ebram
3Acrescentar uma gota da suspenso nos tubos do soro Anti D e no
tubo do Controle Rh Ebram. Misture bem o contedo
4Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm ( 900 1000g) ou 1 minuto a
1000 rpm (100 125g)
5Examinar a ausncia de hemlise e ressuspender o boto de
hemcias, agitando delicadamente o tubo, observando a presena
ou no de aglutinao.
6Graduar e registrar os resultados
7Se o teste for negativo ou duvidoso proceder a realizao de teste
para D fraco a partir do item 4 da tcnica para deteco de antgeno
D fraco.
Obs: A calibrao adequada das centrfugas so imprescindvel para a garantia
da qualidade dos resultados.
Tcnica para deteco de antgeno Dfraco .
1Preparar uma suspenso a 3 5% das hemcias a serem testadas,
em soluo fisiolgica 0,85%,
2Colocar uma gota do Soro Anti-D Ebram em um tubo devidamente
identificado. Em um segundo tubo (controle negativo) colocar uma
gota do reagente Controle Rh Ebram
3Acrescentar uma gota da suspenso nos tubos do soro Anti D e no
tubo do Controle Rh Ebram. Misture bem o contedo
4Incubar os tubos por 15 minutos 37C
5Lavar as hemcias dos tubos 3 vezes com soluo fisiolgica 0,85% e
aps a ltima lavagem remover completamente a salina
6Adicionar 2 gotas do Soro Anti-Humano Ebram para cada tubo.
Misturar bem.
7Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm ( 900 1000g) ou 1 minuto a
1000 rpm (100 125g)
8Examinar a ausncia de hemlise e ressuspender o boto de
hemcias, agitando delicadamente o tubo, observando a presena
ou no de aglutinao.
9Graduar e registrar os resultados.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS


Positivo: Excluindo-se as limitaes do teste, a aglutinao dos eritrcitos pelo
reagente indica presena de antgeno D.
Negativo: Excluindo-se as limitaes do teste, a ausncia de aglutinao dos
eritrcitos pelo reagente indica ausncia de antgeno D.

+
-

Controle
Rh
-

+ ou -

Anti-D

Pesquisa do
Fator Rh
Antgeno D fraco
No testado
Positivo
+
Positivo
Negativo
Teste invlido Analisar se o procedimento
realizado est de acordo com as instrues

LIMITAES DO TESTE
A reatividade das hemcias humanas D positivas podem variar bastante. Certos indivduos D
positivo possuem pequena quantidade de stios D de tal forma que no sero evidenciados
pelas tcnicas de classificao utilizando reagentes Anti-D Monoclonais. Assim, certos
reagentes Anti-D no detectam um antgeno D de baixa expresso de alguns indivduos. O
reagente de origem monoclonal IgG + IgM tem precisamente a propriedade de melhora a
deteco destes antgenos D de baixa expresso. Fentipos D muito fracos tais como D
parciais, particularmente os de
categorias IV e VI podem, eventualmente, no ser
detectados pela tcnica direta.
As hemcias com teste de antiglobulina direta positiva tero a pesquisa das formas fracas do
antgeno D prejudicada. Tratando-se de sangue de doador, o mesmo no dever ser
utilizado para fins transfusionais.
Resultados falso-positivo ou reaes fracamente positivas podem ocorrer com amostras de
sangue de subgrupos A e B ou aps estocagem prolongada.
Variveis relativas ao procedimento tcnico, tais como: tcnica, suspenses muito
concentradas ou diludas, centrifugaes ou incubaes inadequadas, amostra e salina
contaminadas ou vidraria suja podem causar falsas reaes positivas ou negativas
GARANTIA
Este produto garantido pela Ebram Produtos Laboratoriais Ltda se conservado na
temperatura recomendada, utilizado durante o prazo de validade e seguindo
recomendaes do rtulo e dessa instruo de uso.
REFERNCIAS
1. Widmann F.K. ed Technical Manual 9th Edition Washington D.C. American Association of
Blood Banks 1985 Chapter 8.
2. Race R.R. and Sanger R. Blood Groups in Man 6th Editioon Oxford Blackwlell
Scientific Publications 1975.
3. Issitt P.D. Applied Blood Group Serology 3rd Edition Montgomery Scientific publicantions
Miami, Florida USA 1985.
4. Walker Rh, ed.Technical manual. 11th editin. Bethesda: AABB, 1993.
5. Mollison PL. Blood Transfusion in clinical medicine. 7th ediditon. Oxforf: Blackwell Scientific,
1983.
6. Guidelines for the Blood Transfusion Servie H.M.S.O.

A tabela seguinte fornece a interpretao dos resultados:

ed. Mar/15

Ebram Produtos Laboratoriais Ltda.


Rua Jlio de Castilhos n 500 Belenzinho So
Paulo SP CEP 03059-001
Indstria Brasileira
Marca Registrada CNPJ:
50.657.402/0001-31
Resp. Tc.: Dra. Nadjara Novaes Longen
CRF-SP.: 37.451
N Reg. MS: 10159820203
Departamento de Assistncia ao Cliente
Telefone: (0**11) 2291-2811 www.ebram.com
sac@ebram.com

ed. Mar/15

Ebram Produtos Laboratoriais Ltda.


Rua Jlio de Castilhos n 500 Belenzinho So
Paulo SP CEP 03059-001
Indstria Brasileira
Marca Registrada CNPJ:
50.657.402/0001-31
Resp. Tc.: Dra. Nadjara Novaes Longen CRFSP.: 37.451
N Reg. MS: 10159820203
Departamento de Assistncia ao Cliente Telefone:
(0**11) 2291-2811 www.ebram.com
sac@ebram.com