Guia Practica Bioquimica 2016-II - Laboratorio

3B-2
GUA DE PRCTICAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA
LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGICA
BIOQUMICA
Autores:
Mg. Q.F. HCTOR ALEXANDER VILCHEZ CCEDA

Lic. TM. ADALBERTO CRISTHIAN DELGADO GARCA
Lic. TM. CESAR AUGUSTO PLASENCIA VEGA
2016
INDICE
PAGINA
CARATULA
INDICE
INTRODUCCIN
PAUTAS PARA INFORME DE LABORATORIO- NORMAS DE BIOSEGURIDAD
SIMBOLOS DE SEGURIDAD
PRACTICA 01:
MATERIAL DE LABORATORIO, INSTRUMENTOS. USO CORRECTO
Y MANIPULACIN PREPARACIN DE SOLUCIONES
PRACTICA 02:
ESPECTROFOTOMETRA: FACTOR Y CURVA DE CALIBRACIN
13
PRACTICA 03:
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA I: SUSTRATO Y PH
18
PRACTICA 04:
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA II: ENZIMA,
TIEMPO, TEMPERATURA
21
PRACTICA 05:
RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
24
PRACTICA 06:
DIGESTIN ENZIMTICA DEL ALMIDN
27
PRACTICA 07:
AISLAMIENTO DE GLUCGENO HEPTICO - CUANTIFICACIN DE GLUCOSA
30
SEMANA N 08 PRIMER EXAMEN ESCRITO

PRACTICA 09:
HIDRLISIS DE LAS GRASAS POR ACCIN DE LA LIPASA PANCRETICA
33
PRACTICA 10:
LPIDOS: SOLUBILIDAD Y SAPONIFICACIN
35
PRACTICA 11:
COLESTEROL OBTENCIN E IDENTIFICACIN
38
PRACTICA 12:
IDENTIFICACIN Y VALORACIN DE LA VITAMINA C EN CTRICOS
41
PRACTICA 13:
DETERMINACIN DE PROTENAS: OVOALBMINA
44
PRACTICA 14:
DETERMINACIN DE ACIDO URICO
47
PRACTICA 15:
EXTRACCIN DE ADN
50
INTRODUCCIN
Uno de los cursos fundamentales en las carreras de la salud es la Bioqumica, el cual
permite comprender los mecanismos de formacin, transformacin y utilizacin de los
distintos nutrientes que componen un determinado alimento; as como tambin como
se interrelacionan las distintas vas metablicas.
La presente Gua de Prcticas de Bioqumica, est elaborada de acuerdo al Programa
de Bioqumica para la Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica:
Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica y contiene una serie experimentos de
Laboratorio de diferentes grados de dificultad, que permiten a los estudiantes adquirir
habilidades y destrezas para el anlisis individual del material orgnico e inorgnico,
al mismo tiempo que complementan los conceptos fundamentales impartidos en las
clases tericas.
Con los principios aplicados en esta gua, los estudiantes los podrn orientarse en la
realizacin de trabajos de investigacin que incrementen sus conocimientos
bioqumicos. Cada prctica tiene un pequeo resumen terico.
Al iniciar cada prctica el alumno tendr una pequea orientacin sobre la
importancia del anlisis y de la utilidad del ensayo contenida en el Marco Terico,
seguidamente se mencionarn los objetivos que se alcanzarn y que van acorde al
tema asignado en el Silabo del curso de Bioqumica.
En cada prctica tambin se indicar la lista de reactivos y materiales de Laboratorio
a utilizar, el procedimiento a seguir, los principales resultados a obtener, una pequea
lista de preguntas contenidas en un cuestionario que se complementar sus
conocimientos y por ltimo la bibliografa recomendada donde se apoyar cada
prctica.
Los experimentos descritos son de fcil ejecucin y permiten al estudiante desarrollar
su capacidad y criterio cientfico. Los temas de laboratorio se han diseado teniendo
en consideracin la accesibilidad de material e instrumentos con que cuenta la
universidad.
La presente Gua orienta el procedimiento de las prcticas que complementa el
aprendizaje de la Bioqumica bsica en relacin del desarrollo terico del curso.
Los autores agradecen anticipadamente la(s) crtica(s) o sugerencias que puedan tener
los lectores que sirvan para mejorar el presente trabajo.
Mg. Q.F. HCTOR ALEXANDER VILCHEZ CCEDA

Lic. TM. ADALBERTO CRISTHIAN DELGADO GARCA
Lic TM. CESAR AUGUSTO PLASENCIA VEGA
PAUTAS PARA EL INFORME DE LABORATORIO

Cada estudiante debe presentar el informe de la prctica, a la semana siguiente del
mismo, teniendo en cuenta los siguientes puntos:
Titulo de la prctica.
Breve marco terico.
Objetivo general.
Reacciones qumicas que ocurren.
Diagrama de flujo del procedimiento.
Tabla de datos, resultados y observaciones.
Clculos.
Grficas, (si la prctica lo requiere)
Anlisis de resultados y de grficas.
Aplicaciones en la profesin.
Conclusiones.
Recomendaciones (posibles errores ocurridos).
Bibliografa.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
En el laboratorio existe una serie de normas de bioseguridad las cuales pueden evitar
o disminuir los riesgos de accidentes debido a la mala manipulacin o desconocimiento
de lo que se realiza.
NORMAS PERSONALES
Cada grupo de prcticas se responsabilizar del orden de su zona de trabajo y del
material que utilizara.
Utilizar obligatoriamente mandilones para evitar posibles salpicaduras de sustancias

qumicas lleguen a la piel y deterioro en sus prendas de vestir.
Usar lentes de bioseguridad.
Mantener recogido el cabello largo, en todo el proceso de la prctica.
En el laboratorio est terminantemente prohibido fumar, beber y ni comer.
Usar guantes de asbesto, para el aislamiento trmico, al manipular material caliente.
No manipular con las manos y menos con la boca, los productos qumicos.
No pipetear con la boca, se debe utilizar una pera manual o dispositivo que se
disponga para tal fin.
Nunca adicionar agua sobre los cidos, si se requiere diluir; siempre verter con
cuidado el cido sobre el agua. No olvidar que hay desprendimiento de calor.
Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) no deben estar cerca de fuentes
de calor. Si hay que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara, nunca
directamente a la llama.
Si algn cido o producto corrosivo, tocase su piel, lavar inmediatamente con
abundante agua y avisar al profesor.
Al preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado
convenientemente.
Manipular con cuidado materiales punzocortantes
Dejar enfriar el vidrio antes de tocarlo para evitar posibles quemaduras.
Al calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo:
O fijarte que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningn compaero. Puede hervir
el lquido y salir disparado, por lo que podras ocasionar un accidente.
O Calentar el contenido por la zona lateral del tubo, nunca por el fondo; agitar
constantemente y suavemente.
Al pesar masas de productos qumicos con balanza, se colocar papel de filtro u otro
sobre los platos de la misma y si es necesario, si el producto a pesar fuera corrosivo,
se utilizar un vidrio de reloj.
Mantener en todo momento el orden y disciplina.
SMBOLOS DE RIESGO
Para manejar con seguridad las sustancias qumicas se han ideado diversos cdigos
dependiendo de la casa fabricante, pero en general los sistemas clasifican las
sustancias en las siguientes categoras:
Sustancias explosivas
Peligro. Este smbolo sealiza sustancias que pueden explotar bajo determinadas
condiciones. Ejemplo: dicromato de amonio.
Precaucin. Evitar choques, percusin, friccin, formacin de chispas y contacto con
el calor.
Sustancias oxidantes (comburentes)

Peligro: Los compuestos comburentes pueden inflamar sustancias combustibles o
favorecer la amplitud de incendios ya declarados, dificultando su extincin. Ejemplo:
permanganato de potasio, perxido de sodio. Precaucin: Evitar cualquier contacto
con sustancias combustibles.
Sustancias fcilmente inflamables
Sustancias autoinflamables: Ejemplo: alquilos de aluminio, fsforo. Precaucin. Evitar
contacto con el aire. Gases fcilmente inflamables: Ejemplo: butano, propano.
Precaucin. Evitar la formacin de mezclas inflamables gas-aire y aislar de fuentes de
ignicin. Sustancias sensibles a la humedad: Productos qumicos que desarrollan
emanaciones de gas inflamable al contacto con el agua. Ejemplo: litio, borohidruro de
sodio. Precauciones: evitar contacto con agua o con humedad.
Lquidos inflamables
En trminos muy sencillos, los lquidos inflamables son aquellos que fcilmente
pueden arder. El que un lquido arda con ms o menos facilidad depende de su punto
de llama. Entre ms bajo sea este punto ms fcilmente arde el reactivo y por lo
tanto mayor cuidado se ha de tener en su manejo, almacenamiento y transporte. Con
estos lquidos se ha realizado una clasificacin teniendo en cuenta lo anteriormente
expuesto y su solubilidad en el agua.
Sustancias txicas
Peligro: Tras una inhalacin, ingestin o absorcin a travs de la piel pueden
presentarse, en general, trastornos orgnicos de carcter grave o incluso la muerte.
Ejemplo: trixido de arsnico, cloruro de mercurio (II). Precaucin: Evitar cualquier
contacto con el cuerpo y en caso de malestar acudir inmediatamente al mdico.
Sustancias nocivas
Peligro: La incorporacin de estas sustancias por el organismo produce efectos nocivos
de poca trascendencia. Ejemplo: tricloroetileno. Precaucin: Evitar el contacto con el
cuerpo humano as como la inhalacin de vapores. En caso de malestar acudir al
mdico.
Sustancias corrosivas
Peligro: Por contacto con estas sustancias se destruye el tejido vivo y tambin otros
materiales. Ejemplo: bromo, cido sulfrico. Precaucin. No inhalar los vapores y
evitar el contacto con la piel, los ojos y la ropa.
Sustancias irritantes
Peligro: Este smbolo destaca en aquellas sustancias que pueden producir accin
irritante sobre la piel, los ojos y sobre los rganos respiratorios. Ejemplo: amonaco,
cloruro de bencilo. Precaucin. No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel y
los ojos.
PRCTICA N 01
MATERIAL DE LABORATORIO, INSTRUMENTOS. USO CORRECTO Y MANIPULACIN
PREPARACIN DE SOLUCIONES.
1.1
MARCO TERICO
Los Laboratorios son unidades de trabajo acadmico adscritos a los Departamentos de
la Escuela cuya finalidad esencial es asegurar a los docentes-investigadores y a los
alumnos de sta las condiciones para el cumplimiento de actividades de investigacin
y de prcticas asociadas a las asignaturas del Plan de Estudios vigente que as lo
exigen. Para el desarrollo de las prcticas y las actividades del laboratorio se
requieren diversos materiales, equipos e instrumentos, entre los principales tenemos:
Materiales de Vidrio: Los materiales en los que se combinan las sustancias estn
fabricados con vidrio ptico, vidrio de Jena o vidrio duro. stos, debido a su
composicin, son muy resistentes a la accin de los reactivos qumicos y/o los
cambios bruscos de temperatura. Algunos nombres comerciales de estos tipos de
vidrio son el Pyrex y el Kimax. Algunos ejemplos de estos materiales son: Tubo de
ensayo; Vaso de precipitados; Matraz Erlenmeyer; Matraz Base plana; Matraz de
destilacin; Balones, etc. Los materiales de vidrio que no se utilizan para calentar
sustancias estn elaborados con otros tipos de vidrio.
Materiales para medir volmenes: Los materiales para medir volmenes son de
vidrio o de plstico transparente y estn graduados. Algunos de estos materiales son:
Probeta; Pipeta; Bureta; Matraz aforado.
Materiales de soporte y sujecin: En cuanto a los materiales de soporte y sujecin,
con excepcin de la gradilla, que puede ser de madera o de plstico, son de metal.
Algunos de los materiales que pertenecen a esta clasificacin son: Soporte universal
con anillo de fierro, pinzas para bureta y tela de alambre con asbesto; Gradilla para
tubos de ensayo; tringulo de porcelana; Pinzas para tubo de ensayo; Pinzas para
crisol; Pinzas de 2 o 3 dedos con nuez.
Otros materiales del Laboratorio son: Mechero de alcohol, Embudo, luna de reloj;
Cpsula de porcelana, Mortero con piln, Cuba hidroneumtica, Cucharilla de
combustin, Agitador de vidrio, Frascos goteros, Esptula Tapones, Escobillones.
Instrumentos para medir: Los principales instrumentos para medir son: Balanza de
dos platillos y marco de pesas, Regla de 1m, Vernier Balanza triple brazo,
Dinammetro, Termmetro.
Otros instrumentos y aparatos que usamos son: Lupa Lentes; Pinzas; Microscopio;
Agitador; Aguja Para Diseccin; La bagueta; Balanza elctrica; Balanza analtica;
Pipetas automticas; Bistur.
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Preparacin de Soluciones.
Las soluciones, son mezclas homogneas de sustancias en iguales o distintos estados
de agregacin. La concentracin de una solucin constituye una de sus principales
caractersticas.
Bastantes propiedades de las soluciones dependen exclusivamente de la
concentracin. Su estudio resulta de inters tanto para la fsica como para la
qumica. Algunos ejemplos de soluciones son: agua salada, Hidrxido de sodio y
bicromato de potasio. Todas las propiedades de las soluciones: color, sabor, densidad,
punto de fusin y ebullicin dependen de las cantidades que pongamos de los
diferentes solutos. La sustancia presente en mayor cantidad suele recibir el nombre
de solvente, y a la de menor cantidad se le llama soluto y es la sustancia disuelta. El
soluto puede ser un gas, un lquido o un slido, y el solvente puede ser tambin un
gas, un lquido o un slido. El agua con gas es un ejemplo de un gas (dixido de
carbono) disuelto en un lquido (agua). Las mezclas de gases, son soluciones. Las
soluciones verdaderas se diferencian de las soluciones coloidales y de las
suspensiones en que las partculas del soluto son de tamao molecular, y se
encuentran dispersas entre las molculas del solvente.
Algunos metales son solubles en otros cuando estn en el estado lquido y solidifican
manteniendo la mezcla de tomos. Si en esa mezcla los dos metales se pueden
solidificar, entonces sern una solucin slida.
Propiedades fsicas de las soluciones: Cuando se aade un soluto a un solvente, se
alteran algunas propiedades fsicas del solvente. Al aumentar la cantidad del soluto,
sube el punto de ebullicin y desciende el punto de solidificacin. As, para evitar la
congelacin del agua utilizada en la refrigeracin de los motores de los automviles,
se le aade un anticongelante (soluto). Pero cuando se aade un soluto se rebaja la
presin de vapor del solvente. Otra propiedad destacable de una solucin es su
capacidad para ejercer una presin osmtica. Si separamos dos soluciones de
concentraciones diferentes por una membrana semipermeable (una membrana que
permite el paso de las molculas del solvente, pero impide el paso de las del soluto),
las molculas del solvente pasarn de la solucin menos concentrada a la solucin de
mayor concentracin, haciendo a esta ltima ms diluida. Estas son algunas de las
caractersticas de las soluciones:
-
Las partculas de soluto tienen menor tamao que en las otras clases de mezclas.
Presentan una sola fase, es decir, son homogneas.
Si se dejan en reposo durante un tiempo, las fases no se separan ni se observa
sedimentacin, es decir las partculas no se depositan en el fondo del recipiente.
Son totalmente transparentes, es decir, permiten el paso de la luz.
Sus componentes o fases no pueden separarse por filtracin.
Concentracin de una solucin: La concentracin de una solucin lo da el nmero de
molculas que tenga el soluto de una sustancia y el nmero de molculas que tiene el
resto de la sustancia. Existen distintas formas de decir la concentracin de una
solucin, pero las dos ms utilizadas son: gramos por litro (g/l) y molaridad (M). Los
gramos por litro indican la masa de soluto, expresada en gramos, contenida en un
determinado volumen de disolucin, expresado en litros. As, una solucin de cloruro
de sodio con una concentracin de 40 g/l contiene 40 g de cloruro de sodio en un litro
de solucin. La molaridad se define como la cantidad de sustancia de soluto,
expresada en moles, contenida en un cierto volumen de solucin, expresado en litros,
es decir: M = n/V. El nmero de moles de soluto equivale al cociente entre la masa de
soluto y la masa de un mol (masa molar) de soluto.
Soluciones acuosas: El agua es la biomolcula ms abundante del ser humano,
constituye un 65-70 % del peso total del cuerpo. Esta proporcin debe mantenerse
muy prxima a estos valores para mantener la homestasis hdrica, por lo contrario el
organismo se ve frente a situaciones patolgicas debidas a la deshidratacin o la
retencin de lquidos. La importancia del estudio de la biomolcula agua radica en el
hecho de que la totalidad de las reacciones bioqumicas se realizan en el seno del
agua, todos los nutrientes se transportan en el seno del agua.
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UNIDADES FSICAS DE CONCENTRACION

1. Porcentaje en peso (% W)
%W
Peso del soluto (g)

X 100
Peso solucin (g)
2. Porcentaje en volumen (% V)
%V=
Volumen del soluto (mL)

X 100
Volumen solucin (mL)
3. Porcentaje peso/volumen (% W/V)

% W/V =
Peso del soluto (g)

X 100
Vol de solucin (mL)
UNIDADES QUMICAS DE CONCENTRACION

MOLARIDAD: La molaridad es la unidad qumica internacional que expresa la
concentracin en una solucin o mezcla, indica la cantidad de moles que se
encuentran presentes en un determinado volumen de solucin el cual se ha
establecido como un litro. La abreviatura que expresa la molaridad es la letra M y la
simbologa de su unidad es mol/L
La frmula esta dad por:
Donde:
M = n/v
n: es el nmero de moles y
V: es el volumen de la solucin en litros.
El nmero de moles es la cantidad de veces que est contenido el peso molecular de

una sustancia en un determinado peso de la misma en condiciones de 100% de
pureza, as el nmero de moles (n) queda expresado por:
n = W/PM
W: es el peso de la sustancia y
PM: es el peso molecular de la sustancia referida.
Donde:
NORMALIDAD: Es tambin una unidad de concentracin qumica que indica

concentracin de una soluto en una solucin, teniendo en consideracin su estado de
oxidacin o valencia de dicho compuesto. La normalidad queda expresada por la letra
N y se utiliza este smbolo despus de la expresin numeral.
Donde:
N = N Eq / v
N Eq: es el nmero de equivalentes.
V: es el volumen de la solucin en litros.
El nmero equivalente de un compuesto queda expresado por:
Donde:
N Eq = W/P-Eq
W: es el peso de la sustancia y
P-Eq: es el peso equivalente.
El peso equivalente de un compuesto queda expresado por:
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P-Eq = PM/EO
Donde: PM: es el peso molecular del compuesto correspondiente a la Sustancia
EO: es el estado de oxidacin o valencia.
1.2
COMPETENCIAS
- Conceptuales: Al finalizar la practica el alumno reconoce los Materiales e
instrumentos ms usados en el Laboratorio de Bioqumica y explica las
caractersticas de las soluciones
- Procedimentales: Describe y manipula los principales materiales e instrumentos del
Laboratorio de Bioqumica. Resuelve problemas y Prepara Soluciones de uso mas
frecuente en el Laboratorio Clnico.
- Actitudinales: Participa del cuidado del material, demuestra capacidad analtica,
diligencia y orden; coopera con el grupo respetando las reglas acordadas, brinda
ayuda oportuna a sus compaeros
1.3
MATERIALES Y EQUIPOS
Beaker 100ml.
Bureta 25ml.
Matraz Erlenmeyer 250ml.
Fiola 100ml.
Pipeta serolgica 10ml.
Pera de decantacin
Piceta 500ml.
Esptula de metal
Gradilla de metal 15 x 160
Probeta 100ml.
Micropipeta (100 - 1000)
Pinza para bureta (de plstico)
Espectrofotmetro
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Bao mara
Balanza analtica
Potencimetro porttil (Hanna)
Gradillas de metal
Tubos de ensayo 13x100
Agar fosfato dipotasico
Agar fostato monopotasico
Glucosa anhidra
Sodio acetato anhidrido
Sodio hidroxido (lentejas)
Sodio tiosulfato pentahidratado
Amarillo de alizarina
Safranina
Azul de metileno
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1.4 PROCEDIMIENTO
a) Reconocer los diferentes instrumentos.
b) Describir las partes de cada uno de ellos.
c) Realizar la manipulacin de uso y transporte.
d) Experiencia I.
1) Pesar 5, 15 y 30 g de glucosa
2) Disolver en beakers por separado los 5,15 y 30 g del soluto con 50 mL de agua
destilada, obteniendo las soluciones A, B y C respectivamente.
3) Agregar 1gota de Amarillo de Alizarina al tubo A, 1 gota de Safranina al B y 1 gota de
Azul de Metileno al tubo C
4) Encuentre los volmenes de cada una midiendo en una probeta.
5) Encuentre en cada caso la concentracin de las soluciones en P/P, P/V, V/V.
e) Experiencia II.
1. Coloque en un tubo de ensayo 4 mL de la solucin A.
2. Agrega inclinando el tubo y muy lentamente por las paredes, 1 mL de la solucin C
3. Observe y explique.
f)
Experiencia III: prepara un Buffer fosfato 0,5 molar pH: 7,5, volumen: 500 mL
1. A una fiola de 500 mL agregarle 200 mL de agua desionizada, luego agregarle 11,5 g
de fosfato dicido de potasio y homogenizar. Luego agregar 28.85g de fosfato
monocido dipotsico, disolver y completar con agua desionizada hasta el aforo
(500mL). Verificar el pH con el potencimetro.
2. Agregue hidrxido de sodio 1N 1mL y luego compruebe con el potencimetro si el pH
ha cambiado. Agregue acido clorhdrico 1N 2 mL y luego compruebe con el
potencimetro si el pH a variado.
3. Explique.
1.2.5
RESULTADOS
-
El alumno presenta los esquemas sealando las diferentes partes de los equipos e
instrumentos ms usados en el laboratorio de bioqumica.
Manipula correctamente las pipetas automticas. Se obtendrn soluciones de diferentes

concentraciones y densidades y se observar la formacin de capas, fases e interfaces.
Se obtendr un buffer fosfato 0,5 molar pH 7,5
1.2.6 CUESTIONARIO
a) Cmo debe ser lavado el material de uso constante en el Laboratorio de Bioqumica?
b) Qu sustancias son corrosivas para los equipos e instrumentos?
c) Cul es la composicin qumica del material de vidrio utilizado en el laboratorio?
d) Qu cuidado especial se debe tener con el material de vidrio nuevo, antes de usarlo por
primera vez?
e) Cual ser la densidad, concentracin en P/P, P/V y mol/L de una mezcla de:
Solucin a con solucin b en partes iguales.
Solucin a con solucin c en partes iguales.
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f)
5 mL de solucin a con 3 mL de solucin b
5 mL de solucin c con 4 mL de solucin b

Describir las Unidades Bsicas del Sistema Internacional.
g) Describir los mltiplos y submltiplos utilizados con las principales medidas del SI
h) Qu diferencia hay entre volumen y capacidad y cules son sus unidades?
i)
1.7
Qu es un buffer? de qu est compuesto?
FUENTES DE INFORMACIN
-
Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
Mdica Panamericana; 2006.
Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
http://www.quimicaweb.net/ciencia/paginas/laboratorio/material.html
http://laboratoriopasteur.mex.tl/20239_equipo-y-material-de-laboratorio.html
http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39593.pdf
http://www.amschool.edu.sv/paes/science/concentracion.htm
http://quimicamedusac.files.wordpress.com/2013/05/semana-09-2012-clase.pdf
http://www.sc.ehu.es/sbweb/fisica/unidades/unidadMedida.htm
PRCTICA N 02.
ESPECTROFOTOMETRA: FACTOR Y CURVA DE CALIBRACIN
2.1 MARCO TERICO.
El anlisis colorimtrico contempla al conjunto de mtodos de anlisis cuantitativo
que se fundamenta en la medicin de la intensidad de la luz transmitida a travs de una
solucin coloreada, ya sea que se trate de sustancias naturalmente coloreadas o que se han
hecho de tal calidad mediante reacciones qumicas adecuadas.
Casi todas las sustancias en
solucin tienen la capacidad de absorber en forma selectiva determinadas radiaciones
luminosas unas ms que otras, dejndolas pasar. La longitud de onda en la que las molculas de
dicha sustancias absorben con mayor intensidad la luz, se denomina longitud de mxima
absorcin o lambda mximo. Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada
cantidad de luz, la intensidad de la luz transmitida por una solucin disminuir en relacin con el
aumento del nmero de molculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador.
Este nmero vara de acuerdo a la concentracin del soluto y al espesor del recipiente que
contiene la solucin, estos factores estn considerados en la LEY DE LAMBERT Y BEER, que rige los
principios de la colorimetra.
LEY DE LAMBERT: Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una
solucin coloreada y la distancia que recorre el haz de luz monocromtica en ella (sin variacin de
la concentracin).
LEY DE BEER: Expresa la proporcionalidad que existe entre la absorbancia de una
solucin coloreada y la concentracin de sta en un haz de luz monocromtica (sin variacin de la
longitud que recorre el haz)
A = l. c. e
FRMULA: La expresin de relacin de la ley de Lamber y Beer est dado por: DO = E =

Donde: DO: es la densidad ptica.
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E:
A:
l:
c:
e:
es la extincin.
es absorbancia.
es la longitud que atraviesa el haz de luz.
es la concentracin de la solucin coloreada.
es el coeficiente de extincin molar.
RELACION ENTRE ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA:

A = Log Io / I1
Donde:
A es absorbancia.
Io es la luz incidente.
I1 es la luz transmitida.
CURVA DE CALIBRACION
El mtodo consiste en emplear soluciones de concentraciones conocidas y crecientes
denominadas estndares o patrones a las cuales se les determinar su absorbancia ya sea en un
fotocolormetro o en un espectrofotmetro y pueden ser expresadas en absorbancia.; en
cualquier caso los resultados se grafican en un sistema de coordenadas donde en el eje "X" se
grfica la concentraciones y en el "Y" la absorbancia. Los puntos resultantes en el sistema
empleado se traza una recta de tal manera que pase por el origen y que una en la medida posible
a todos los punto o a la mayora de estos.
La lnea obtenida constituye la curva de calibracin; tambin se le denomina curva
estndar. Por ejemplo:
Supongamos los estndares de 1, 2, 4, 6 y 8 g/dL y sus absorbancias son 40, 81, 161, 238
y 323 respectivamente; con estos puntos podemos construir la grfica. Posteriormente leemos la
muestra de concentracin desconocida y la lectura la llevamos al eje Y de la grfica, extrapolamos
y ubicamos el punto de corte con la lnea luego se ubica el punto de la recta que corresponde al
componente del eje X y esta ser la concentracin de la muestra analizada.
FACTOR DE CALIBRACION (Fc)
El factor de calibracin es un trmino que relaciona la concentracin de una sustancia
con su absorbancia. Tiene la caracterstica de ser un nmero constante o muy aproximado entre s,
a lo largo de la curva de calibracin y se cumple slo en la zona lineal de la misma.
Matemticamente el factor de calibracin es la inversa de la pendiente de la recta generada en la
curva de calibracin. El factor de calibracin es la relacin entre la concentracin del estndar (St)
y la absorbancia del mismo:
Fc[ ] = [St ]/ DOSt
Si hay ms de un estndar, entonces se obtendr un promedio de los Fc.
CASO 1: Si la muestra problema (MP) y el estndar (St) son procesados de igual manera
(diluciones, tratamientos trmicos, centrifugaciones etc.) se podr usar directamente la siguiente
formula:
[MP] = DOmp. Fc[ ]
CASO 2: Si la muestra problema ha sido diluida previamente, se determinar el
FACTOR DE DILUCIN (Fd) que matemticamente es la inversa de la dilucin, o sea 1/dil de
donde se deduce:
dil = Vol MP/Vol T
Donde:
Vol MP: es el volumen de la muestra problema tomada para hacer la dilucin.
Vol T: es el volumen total (volumen de la muestra ms el volumen del diluyente).
Para este segundo caso, para conocer la concentracin de una MP se aplicar la
siguiente frmula:
[MP] = AMP. Fc[ ]. Fd
Donde:
AMP:
Fc:
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es la absorbancia de la muestra problema.

es el factor de calibracin.
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Fd:
[MP]:
es el factor de dilucin.
concentracin de la muestra problema.
2.2 COMPETENCIAS
-
Conceptual: Explica frmulas de clculo espectrofotocolorimtrico en las soluciones problemas.
Procedimental: Elabora una curva de calibracin y encuentra la concentracin de muestras

problemas.
Actitudinal: Demuestra capacidad analtica, diligencia y orden; coopera con el grupo respetando las
reglas acordadas, brinda ayuda oportuna a sus compaeros.
2.3 MATERIALES Y EQUIPOS
-
Beacker 100ml.
Piceta 500ml.
F-CV3-3B-2
Esptula de metal
Espectrofotmetro
Gradillas de metal
Tubos de ensayo13x100
Cobalto (II) nitrato hexahidrato
Cobre (II) sulfato pentahidrato
Permanganato de potasio
Rev. Junio 2007
2.4 PROCEDIMIENTO
Preparacin de las soluciones trabajo
a)
de
Nitrato de Cobalto
(II) (5mg/dL)
Agua destilada
Volumen final
Concentracin final
Sulfato
Cobre
(10mg/dL)
-
Sulfato de Cobre (II)

(10mg/dL)
Agua destilada
Volumen final
Concentracin final
b)
Nitrato de Cobalto (II) (5mg/dL)
c) Permanganato de Potasio (1g/dL)

-
Permanganato de
Potasio (1g/dL)
Agua destilada
Volumen final
Concentracin final
Determinacin de las concentraciones finales.
Por medio de clculos matemticos determinar las concentraciones

obtenidas luego de diluir el reactivo con agua destilada, utilizando la frmula:
(Concentracin inicial) x (Volumen inicial) = (Concentracin final) x (Volumen

final)
-
Determinacin de la longitud de mxima absorbancia
Efectuar las lecturas de los tubos N2 de cada reactivo y leerlo a 400, 500,
600, 700 nm, y anotar en que longitud se encuentra la mayor absorbancia, luego ajustar las
longitudes para hallar la longitud de onda de mayor absorbancia.
-
Determinacin de las absorbancias
Efectuar las lecturas de los tubos en la longitud de onda mxima hallada

segn el reactivo utilizado. Anotar los resultados.
-
Construccin de la curva de calibracin:
Con los datos obtenidos anteriormente construir la curva de calibracin en

papel milimetrado. Graficar concentracin versus absorbancia.
-
Determinacin del Factor de Calibracin:
Halla el Factor de calibracin de cada uno de los patrones o estndares

construidos (que deben ser muy cercanos entre s) de acuerdo a cada reactivo utilizado, luego
obtener el Factor de Calibracin promedio y utilizar este para los clculos.
-
Determinacin de la concentracin de una muestra problema:
Efectuar la lectura de 3 muestras y determinar su absorbancia (si es

necesario, realizar una dilucin a criterio del alumno. Hallar su concentracin empleando la
curva de calibracin y empleando la formula con el factor de calibracin promedio.
Los resultados deben ser iguales o muy cercanos
2.5 RESULTADOS
Grfico del anlisis para hallar la longitud de mxima absorbancia para cada reactivo en
papel milimetrado (Abs vs. Long de onda)
Grfico de la curva de calibracin en papel milimetrado para cada reactivo (Abs vs
concentracin)
Obtencin del factor de calibracin promedio.
Halla diferentes concentraciones en muestras problemas, usando la curva de calibracin as
como el factor de calibracin.
2.6 CUESTIONARIO
Transformar
DO a T%
a)
Transformar
T% a DO
0.050
0.120
0.230
0.325
0.420
0.538
0.756
0.925
1.062
1.348
1.426
1.653
15%
26%
38.5%
42.3%
30%
46%
54.5%
50%
63.2%
74.5%
87%
95.4%
b) Resolver:
-
Una muestra obtuvo una absorbancia de 0.380, si el estndar de calibracin tena una
concentracin de 50 mg/dl y obtuvo una absorbancia de 0.250, Cul ser la
concentracin de la muestra problema?
Una muestra al procesarse por espectrofotometra se conoce que tiene 80mg/dl, si el

estndar obtuvo como DO 0.350 y la muestra una DO de 0.400 Cul es la concentracin
del estndar?
Una muestra al estar muy concentrada se diluy al quinto, luego se obtuvo como
absorbancia 0.460, el estndar de 100mg/dL obtuvo 0.300 de DO. Cul es la
concentracin de la muestra?
Describir en que consiste el Espectro electromagntico

-
2.7 FUENTES DE INFORMACIN

-
Espectrofometra: Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de biomolculas.

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf
http://electromagnetismo2010a.wikispaces.com/file/view/ESPECTRO+ELECTROMAGNETICO.p
df/139152159/ESPECTRO+ELECTROMAGNETICO.pdf
http://www.espectrometria.com/espectro_electromagntico
http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_electromagn%C3%A9tico
-
PRCTICA N 03
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA I: SUSTRATO Y PH
3.1. MARCO TERICO.

Las enzimas son en su gran mayora protenas que catalizan las reacciones
biolgicas que tienen lugar en los seres vivos, sin alterar el equilibrio de la reaccin. En general
las reacciones catalizadas por enzimas, son especficas y esenciales para las funciones
fisiolgicas. La cintica enzimtica se estudia midiendo la velocidad de una reaccin.
Tericamente la velocidad de una reaccin puede determinarse por el consumo de sustrato por
unidad de tiempo (-dS/dt) o bien la velocidad de aparicin de productos de la reaccin en el
tiempo (+dP/dt). El estudio se realiza bajo condiciones de velocidad inicial, la cual se define
como la relacin directa entre la velocidad de reaccin y el tiempo. La velocidad de reaccin y
por ende el consumo de sustrato o aparicin de productos, est controlado por las
concentraciones de sustrato y enzima as mismo se modifica de manera variable por lo cambios
de pH y/o temperatura de reaccin. La presencia de activadores o inhibidores en tambin
pueden afectar la velocidad de reaccin.
En esta prctica se utilizar al sistema enzimtico glucosa oxidasa
peroxidasa en el cual se observa que su sustrato, la glucosa, es oxidada por la glucosa oxidasa a
cido glucnico y perxido de hidrgeno y en una segunda; la reaccin es acoplada a la
peroxidasa en presencia de fenol y 4-amino fenazona formando un cromgeno coloreado que es
la oxazona, de color rojo cereza y se lee a 505 nm. De tal manera que la intensidad del color o
y por lo tanto la lectura, es directamente proporcional a la actividad enzimtica.
3.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Explica los efectos de sustrato y pH sobre la actividad de una enzima.
Procedimental: Elabora una curva de Michaelis y Menten as como la curva del pH.
Actitudinal: Demuestra capacidad analtica, diligencia y orden; coopera con el grupo

respetando las reglas acordadas, brinda ayuda oportuna a sus compaeros.
3.3. MATERIALES Y EQUIPOS

Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Piceta 500ml.
Esptula de metal (pequea)
Propipetas de jebe
Probeta 100ml.
Espectrofotmetro
Bao mara
Balanza analtica
Baguetas
Esptula de metal
Gradillas de metal
Cronmetros.
cido clorhdrico
Sodio hidrxido (lentejas)
Glucosa anhidra (polvo)
Reactivo Glucosa-Oxidasa
Glucosa (estndar)
Solucin de azida de sodio
3.4.
PROCEDIMIENTO
-
PREPARACION DEL SUSTRATO
Preparar 50mL de una solucin de glucosa al 20mmol, tomando en cuenta su PM
PREPARACION DE LA ENZIMA
Enzima Glucosa-oxidasa marca Valtek.
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO
1. Preparar una batera de 4 tubos de ensayo segn el siguiente esquema:

-
Concentraciones
(mmoL/L)
TUBO
S
Soluci
n de
glucos
a (20
mmol/
L)
Agua
destila
da
Finales
2. En otro tubo colocar 3 mL de la solucin de enzima y llevar los 5 tubos a preincubar en

bao Mara a 37C por 5 minutos.
3. Agregar del tubo que contiene la solucin de enzima 0,4 mL al tubo 1, mezcle y
mantenga el tubo en incubacin a 37C, despus de dos minutos agregue 0,4 mL de la
enzima al tubo dos, agite e incube.
4. Espere dos minutos, es decir, despus que hayan transcurrido 4 minutos desde la
primera vez que agreg la enzima al tubo 1, retrelo del bao Mara y adale
inmediatamente 2 gotas de Azida de sodio y mezcle por inversin, dos minutos despus de
haber retirado el tubo 1 del bao de agua, retire el tubo 2 y agregue inmediatamente 2
gotas de azida de sodio y mezcle.
5. Lleve a leer los tubos al espectrofotmetro a 505 nm.
6. Proceda de la misma forma que en el paso 3 y 4 con los tubos 3 y 4; de esta manera
cada uno tendr 4 minutos exactos de incubacin.
7. Leve a leer las absorbancias en el espectrofotmetro a 505 nm de cada tubo, calibrando

a cero, usando como blanco la solucin de enzima.
-
EFECTO DEL pH

TUBO
S
- Sol.
de HCl
(0.05
mol/L
)
- Sol.
de
NaOH
(0,05
mol/L
)
- Agua
destila
da
- Sol.
de
glucos
a (20
mmol/
L)
-
pH Final
2. Colocar en otro tubo de ensayo 5 mL de la solucin de enzimas y llevar los 8 tubos a

preincubar en bao Mara a 37C por 5 minutos.
3. Agregar del tubo que contiene la solucin de enzima 0,5 mL al tubo 1, mezcle y mantenga el
tubo en incubacin a 37C, despus de dos minuto agregue 0,5 mL de la enzima al tubo dos,
agite e incube.
4. Espere dos minutos, es decir, despus que hayan transcurrido 4 minutos desde la primera
vez que agreg la enzima al tubo 1, retrelo del bao Mara y adale inmediatamente 2
gotas de Azida de sodio y mezcle por inversin, dos minutos despus de haber retirado el
tubo 1 del bao de agua, retire el tubo 2 y agregue 2 gotas de azida de sodio. Lleve a leer
los tubos al espectrofotmetro.
5. Proceda con los tubos 3, 4, 5, 6 y 7, de la misma forma que en el paso (3) y (4) de esta
manera cada uno tendr 4 minutos exactos de incubacin.
3.5. RESULTADOS
-
Encuentre las concentraciones de sustrato en los tubos.
Realizar el grfico de Michaelis Menten: concentracin de sustrato (eje X) versus velocidad

de reaccin (eje Y), expresado como absorbancia.
Hacer una segunda grfica con las dobles recprocas o grfica de Lanewaever y Burk.
Calcular el valor de velocidad mxima (Vmx) y de la constante de Michaelis (Km).
Encuentre el pH de cada uno de los tubos en la experiencia del efecto del pH
Hacer una grfica tomando como velocidad de reaccin a la DO colocando los valore en el
eje Y y el pH en el eje X.
Realice un comentario de la grfica obtenida.
Determinar el pH ptimo.
3.6. CUESTIONARIO
a)
b)
c)
d)
-
Definir:
Sitio activo.
Co-enzima cite dos ejemplos.
Metaloenzima; cite dos ejemplos.
Activador, cite dos ejemplos.
Qu tipo de inhibicin causa la Azida de sodio en el sistema usado en la prctica?
Qu le ocurre a la enzima cuando se le someta a altas temperaturas?
Qu mecanismos de control de la actividad enzimtica se han propuesto?
Qu es Km, cul es su importancia?
-
3.7. FUENTES DE INFORMACIN

-
Mosby; 2011
Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires: Mdica
Panamericana; 2006.
http://www.fmv-uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/segundo_a%C3%B1o/
bioquimica/Seminario%206-Enzimas.pdf
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm
http://www.uhu.es/08007/documentos%20de
%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_08_enzimas_2.pdf
-
PRCTICA N 04
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA II: ENZIMA,

TIEMPO, TEMPERATURA
4.1. MARCO TERICO.

Las enzimas son en su gran mayora protenas que catalizan las reacciones
biolgicas que tienen lugar en los seres vivos, sin alterar el equilibrio de la reaccin. En general
las reacciones catalizadas por enzimas, son especficas y esenciales para las funciones
fisiolgicas. La cintica enzimtica se estudia midiendo la velocidad de una reaccin.
Tericamente la velocidad de una reaccin puede determinarse por el consumo de sustrato por
unidad de tiempo (-dS/dt) o bien la velocidad de aparicin de productos de la reaccin en el
tiempo (+dP/dt). El estudio se realiza bajo condiciones de velocidad inicial, la cual se define
como la relacin directa entre la velocidad de reaccin y el tiempo. La actividad de la enzima y
por ende el consumo de sustrato o aparicin de productos, est controlado por el medio es
decir por el pH, debido a que el estado de ionizacin de la enzima, del sustrato o de ambos
condiciona la velocidad con que puede ocurrir la reaccin, de manera tal que cada enzima
tiene un pH adecuado en el que la actividad es mxima; a este valor se le considera como el pH
ptimo.
As mismo, la actividad de las enzimas depende de la temperatura en las que
se encuentren. No todas las enzimas actan a la misma temperatura; si bien muchas de ellas
pueden actuar en un rango ms o menos amplio, existe una temperatura en la cual la actividad
de la enzima en mxima y por lo tanto su capacidad de interactuar con el sustrato; a este nivel
trmico se le denomina temperatura ptima. La velocidad de reaccin y por ende el consumo
de sustrato o aparicin de productos, est controlado por las concentraciones de sustrato y
enzima y la presencia de activadores o inhibidores en tambin pueden afectar la velocidad de
reaccin; por ello en esta prctica se mantiene constante la concentracin del sustrato y de la
enzima, en todos los experimentos. En los experimentos a desarrollar, se utilizar al sistema
enzimtico glucosa oxidasa peroxidasa en el cual se observa que su sustrato, la glucosa, es
oxidada por la glucosa oxidasa a cido glucnico y perxido de hidrgeno y en una segunda; la
reaccin es acoplada a la peroxidasa en presencia de fenol y 4-amino fenazona formando un
cromgeno coloreado que es la oxazona, de color rojo cereza y se lee a 505 nm. De tal manera
que la intensidad del color o y por lo tanto la lectura, es directamente proporcional a la
actividad enzimtica. En esta prctica, el tiempo es una variable crtica, de manera tal que los
experimentos que se realizarn deben ser hechos teniendo en cuenta EL CONTROL EXACTO DEL
TIEMPO. As mismo, es IMPRESINDIBLE, que las pipetas no se mezclen y si no sabe que pipeta
corresponde al reactivo a usar, lvela previamente o use otro instrumento limpio.
4.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Explica los efectos de concentracin de enzima tiempo y temperatura sobre

la actividad de una enzima.
Procedimental: Elabora una curva de efectos de la concentracin de enzima tiempo y

temperatura sobre la actividad de una enzima.


-
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Probeta 100ml.
Piceta 500ml.
Propipetas de jebe
Olla de cocina
Trpode de metal
-
4.4.
Espectrofotmetro
Bao mara
Balanza analtica
Baguetas
Esptula de metal
Pinza de madera
Gradillas de metal
Cronmetros
Glucosa anhidra (polvo)
Reactivo de glucosa-oxidasa
Glucosa (estndar)
Solucin de azida de sodio
PROCEDIMIENTO
- EFECTO DEL TIEMPO
1. Preparar una batera de 5 tubos de ensayo correspondientes al sustrato segn el siguiente

esquema:
TUBOS
Solucin
de
glucosa
20
mmol/L
Agua
destilad
a
2. Lleve a pre incubacin todos los tubos por 5 minutos a 37C.

3. Sin retirar los tubos del bao mara, agregar 0,6 mL de enzimas al tubo 1 agitar y controlar
exactamente 1 min y aadir 2 gotas de azida de sodio. Mezclar y llevar a leer.
4. En el bao mara, agregar 0,6 mL de enzimas al tubo 2 agitar y controlar exactamente 2 min y
aadir 2 gotas de azida de sodio. Mezclar y llevar a leer.
5. Agregar 0,6 mL de enzimas al tubo 3 agitar y controlar exactamente 3 min y aadir 2 gotas de
azida de sodio. Mezclar y leer.
azida de sodio. Mezclar y llevar a leer.
azida de sodio. Mezclar y llevar a leer.
-
EFECTO DE LA TEMPERATURA
1. Preparar una batera de 4 tubos de ensayo correspondientes al sustrato segn el siguiente

esquema:
TUBOS
- -
Solucin
de
glucosa
20
2.
mmol/L
otra
- Agua
destilad
a
correspondientes a la solucin de enzima segn el siguiente esquema:
-
TUB
OS
3. Lleve a
por
5
siguientes temperaturas:
-
So
- -
- -
Preparar
batera de
tubos de
ensayo
pre incubacin
minutos a las
En bao de hielo (4C) los tubos 1 de sustrato y 1 de enzima.

Deje a temperatura ambiente (20C) los tubos 2 de sustrato y 2 de enzima.
En bao mara a 37C los tubos 3 de sustrato y 3 de enzima.
En agua hirviendo (100C) los tubos 4 de sustrato y 4 de enzima.
4. Luego mezcle la solucin de enzima y sustrato correspondientes de cata tubo y mantenga las
mezclas de los tubos en las mismas temperaturas en que estn por 5 minutos ms.
5. Finalmente retire del bao y agregue inmediatamente 2 gotas de azida de sodio, mezcle por
inversin y proceda a leer las absorbancia.
-
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE ENZIMA

-
TUB
OS
Sol
Ag
2. En otro tubo colocar 5 mL de la solucin de glucosa (sustrato) y llevar los 6 tubos a preincubar
en bao Mara a 37C por 5 minutos.
3. Agregar del tubo que contiene la solucin de glucosa (sustrato) 0,8 mL al tubo 1, mezcle y
mantenga el tubo en incubacin a 37C, despus de dos minutos exactos, agregue 0,8 mL del
sustrato al tubo dos, agite e incube.
4. Espere dos minutos, es decir, despus que hayan transcurrido 4 minutos desde la primera vez
que agreg el sustrato al tubo 1, retrelo del bao Mara y adale inmediatamente 2 gotas de
Azida de sodio y mezcle y lleve a leer, dos minutos despus de haber retirado el tubo 1 del
bao de agua, retire el tubo 2 y agregue 2 gotas de azida de sodio y lleve a leer el tubo al
espectrofotmetro.
5. Proceda de la misma forma que en el paso 3 y 4 con los tubos 3, 4 y 5; de esta manera cada
uno tendr 4 minutos exactos de incubacin.
4.5. RESULTADOS
-
Obtener las graficas correspondientes a los efectos de: Tiempo, Temperatura y

concentracin de Enzima vs DO en papel milimetrado.
Indicar su mxima actividad, resaltando el tiempo ptimo, la temperatura ptima y la

concentracin de la enzima ptima.
4.6. CUESTIONARIO
Cul es la clasificacin general de las enzimas?
Cmo se nombran y clasifican las enzimas segn su cdigo enzimtico?
- Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
- Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires: Mdica
Panamericana; 2006.
- Villavicencio Nuez, M. Bioqumica. 2a. ed. Lima: CONCYTEC; 2010.
- Voet, D, Voet, J. Bioqumica. 1a. ed. Barcelona: Ediciones Omega; 1992.
- http://www.fmv-uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/segundo_a%C3%B1o/
bioquimica/Seminario%206-Enzimas.pdf
- http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm
- http://www.uhu.es/08007/documentos%20de
%20texto/apuntes/2005/pdf/tema_08_enzimas_2.pdf
PRCTICA N 05
RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
-
5.1. MARCO TERICO.

Los carbohidratos, conocidos tambin como hidratos de Carbono, glcidos o
azcares (sakcharon, azcar), son compuestos orgnicos formados en su mayora por Carbono,
Hidrgeno y Oxgeno, aunque en algunos, se encuentran tambin el azufre y nitrgeno. Los
carbohidratos o azcares, son compuestos formados por Carbono, hidrgeno y oxgeno que son
sintetizados a partir de CO2 (bixido de Carbono) y de H2O (agua) por los organismos
fotosintticos mediante el aprovechamiento de la energa de la luz solar (fotosntesis), o bien
por rutas sintticas en los organismos hetertrofos, aunque el mayor aporte de los mismos
para estos organismos esta dado por la dieta. El Carbono (C), es el elemento ms abundante
en las biomolculas constituye alrededor del 50 % del peso seco de los seres vivos. El
hidrgeno (H) es el elemento ms pequeo. Su ncleo solamente contiene un protn y tiene
solo un orbital en el cual gira solo un electrn. El oxgeno (O), elemento muy electronegativo,
constituye entre el 25 y 30 % de las biomolculas. Cabe sealar que el agua est formada por
O e H en una proporcin 1:2, y en los carbohidratos, la relacin de tomos de C y molculas
de agua est en una proporcin de 1:1, de ah su nombre: hidratos de Carbono. La palabra
carbohidratos deriva de la condicin emprica de sus frmulas moleculares:
-
Cn(H2O)n
Donde n 3 porque en sus frmulas moleculares, no todos los tomos de

Carbono estn "hidratados". En la siguiente Tabla se muestra la relacin entre de algunas
molculas para un hombre adulto y sano. En los seres vivos las funciones de los carbohidratos
se pueden generalizar en:
a) Energticas (glucgeno en animales y almidn en vegetales, bacterias y hongos).La
glucosa es un de los carbohidratos ms sencillos comunes y abundantes; representa a la
molcula combustible que satisface las demandas energticas de la mayora de los
organismos. De reserva. Los carbohidratos se almacenan en forma de almidn en los
vegetales (gramneas, leguminosas y tubrculos) y de glucgeno en los animales. Ambos
polisacridos pueden ser degradados a glucosa.
b) Compuestos estructurales (como la celulosa en vegetales, bacterias y hongos y la
quitina en artrpodos). Los carbohidratos estructurales forman parte de las paredes
celulares en los vegetales y les permiten soportar cambios en la presin osmtica entre
los espacios intra y extracelulares. Esta, es una de las sustancias naturales ms
abundantes en el planeta. En las grandes plantas y en los rboles, la celulosa,
estructura fibrosa construida de glucosa, cumple la doble funcin de carga y soporte. La
celulosa es de origen vegetal principalmente, sin embargo algunos invertebrados tienen

celulosa en sus cubiertas protectoras. El polisacrido estructural ms abundante en los
animales es la quitina. En los procariontes forma la pared celular construida de
azcares complejos como los pptidoglicanos y cidos teicoicos. A las propiedades de
esta estructura se le atribuyen muchas de las caractersticas de virulencia y
antigenicidad. En algunos animales como los insectos los carbohidratos forman la
quitina, el cido condroitn sulfrico y el cido hialurnico, macromolculas de sostn
del aparato muscular.
c) Precursores. Los carbohidratos son precursores de ciertos lpidos, protenas y dos
factores vitamnicos, el cido ascrbico (vitamina C) y el inositol.
d) Seales de reconocimiento (como la matriz extracelular). Los carbohidratos intervienen
en complejos procesos de reconocimiento celular, en la aglutinacin, coagulacin y
reconocimiento de hormonas. Existen reacciones que permiten identificar a estos
carbohidratos, azcares o glcidos y son las siguientes:
-
REACIONES PARA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
REACCIN DE MOLISH: Se fundamenta en que el cido sulfrico deshidrata

a los carbohidratos para dar furfural o sus derivados, los cuales reaccionan con el alfa naftol
de reactivo, formando un complejo de color violeta. Reacciona con los carbohidratos en
general.
REACCIN DE LUGOL: Los polisacridos tienen la propiedad de formar
complejos de ADSORCIN con el yodo de manera que originan complejos de color. El almidn
dar reaccin azul intenso con el yodo, el cual desaparece al calentamiento y reaparece por
enfriamiento. El glucgeno (polisacrido animal) da color rojiso en esta reaccin.
REACCIN DE BENEDICT: Los carbohidratos reductores en medio alcalino,
sufren fenmenos de enolizacin formndose cuerpos fuertemente reductores los cuales, en
caliente, transforman el in cprico 8Cu+2) a ion cuproso (Cu+1), formndose oxido cuproso
que tiene color rojo ladrillo y es insoluble que precipita con el tiempo.
REACCIN DE SELIWANOFF: Por accin del cido clorhdrico del reactivo,
se obtiene furfurales a partir de los carbohidratos, los cuales con el resorcinol presente en el
reactivo generan un compuesto color salmn. La reaccin de Seliwanoff es positiva en
presencia de cetosas y negativa en aldosas.
REACCION DE BIAL: Por del dehidratante de los cidos fuertes, las pentosas
dan furfural, las cuales al reaccionar con el orcinol, dan compuestos de color verde. Esta
reaccin es negativa con las hexosas, ya que estas al deshidratarse originan
hidroximetiletilfurfural, el cual no forma complejo coloreado con el orcinol. Por ello esta
reaccin se constituye como de diferenciacin entre hexosas y pentosas.
REACCION DE BARFOED: Es una reaccin para identificar monosacridos (57 min de reaccin), aunque algunos disacridos (los reductores) dan positiva a la reaccin,
pero con ms tiempo (10-12 min), ya que se hidroliza el disacrido. El fundamento radica en la
reduccin del acetato cprico a oxido cuproso por los monosacridos.
5.2. COMPETENCIAS
- Conceptuales: Explica los fundamentos para la determinacin y reconocimiento de carbohidratos
diferenciado monosacridos, disacridos de polisacridos.
- Procedimentales: Realiza las pruebas de reconocimiento y clasificacin de carbohidratos.
- Actitudinal: Demuestra capacidad analtica, diligencia y orden; coopera con el grupo respetando las
reglas acordadas, brinda ayuda oportuna a sus compaeros.
-
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Pipeta serlogica 2ml.

Piceta 500ml.
Propipetas de gebe
Probeta 100ml.
Espectrofotmetro
Bao maria
Balanza analitica
Baguetas
Esptula de metal
Gradillas de metal
Tubo de ensayo 16 x150
Pinza de madera
Olla de cocina
Trpode de metal
Solucin de glucosa 2%
Solucin de fructuosa 2%
Solucin de galactosa 2%
Solucin de ribosa 2%
Solucin de arabinosa 2%
Solucin de maltosa 2%
Solucin de sacarosa 2%
Almidn soluble 2%
Solucin de glucgeno 1%
Etanol
Lugol (solucion)
Reactivo Molish
Reactivo Benedict
Reactivo de Selliwanoff
Reactivo de Bial
Reactivo de Barfoed
cido Sulfrico qp
6.
6.1.
PROCEDIMIENTO
1. Realizar la reaccin de Molish con cada una de las muestras colocando en un tubo de ensayo
2 mL de ella con 1 mL de alcohol, agregar 3 a 4 gotas del reactivo de Molish y mezclar;
agregar en zona, por las paredes y con mucho cuidado 0,5 mL de cido sulfrico
concentrado. Observar e identificar las muestras. Separar las que sean identificadas como
no carbohidratos.
2. Con las muestras identificadas como carbohidratos realizar la reaccin de Lugol colocando
en un tubo de ensayo 2 mL de muestra y agregar II gotas de reactivo de lugol (si est muy
concentrado, diluir 1/10), mezclar y anotar los resultados.
3. Con las muestras identificadas como no polisacridos, realizar la reaccin de Bnedict,
Seliwanoff, Bial
a. Tcnica de Bnedict: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 0,5 mL
de reactivo de Bnedict, llevar por 4 min. a bao mara hirviente. Anotar los resultados.
b. Tcnica de Seliwanoff: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 0,5
mL de reactivo de Seliwanoff, llevar por 4 min a bao mara hirviente. Anotar los
resultados.
c. Tcnica de Bial: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 0,5 mL de
reactivo de Bial, llevar por 3 min a bao mara hirviente. Anotar los resultados.
d. Tcnica de Barfoed: Colocar en un tubo de ensayo 0,2 mL de muestra y agregar 1 mL de
reactivo de Bial, llevar por 5 y 7 min min a bao mara hirviente. Si no se forma el
precipitado, dejar reaccionar por 10-12 min
6.2. RESULTADOS
Verificacin de polisacridos.
Identificacin de monosacridos y disacridos
Identificacin de hexosas y pentosas
Clasificacin de azucares reductores de no reductores.
Construccin de una tabla con los resultados obtenidos.
6.3. CUESTIONARIO
-
Analizar los resultados obtenidos.

Describir los fundamentos de cada prueba, colocando las estructuras qumicas de cada
reactivo en su reaccin correspondiente.
Graficar las molculas y los enlaces de los principales disacridos y del almidn.
Si tengo una muestra desconocida. Cules seran las pruebas y en qu orden se realizaran
para reconocer los carbohidratos que posee?
7.
8.
Mosby; 2011
http://www.fsalazar.bizland.com/pdf/POLISACARIDOS.pdf
http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/ntic/trabajos/10/davidyoscar/paginas/reccarb
.htm
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/20%20REACCIONES%20COLOREADAS
%20DE%20AZ%C3%9ACARES.pdf
9.
10.
11.
12.
13.PRCTICA N 06
14.
15.DIGESTIN ENZIMTICA DEL ALMIDN
16.
6.1. MARCO TERICO
17.
Uno de los polisacridos ms comunes en la dieta del ser humano es el
almidn, el cual se encuentra en muchos alimentos de origen vegetal y en muchos productos
elaborados como pan, fideos, etc. En el organismo, las enzimas digestivas lo degradan hasta
glucosa, la cual es absorbida y utilizada por todos los tejidos o almacenada principalmente en
el hgado y msculos bajo la forma de glucgeno. El almidn estructuralmente est
constituido por la amilosa (cadena lineal) y la amilopectina (cadena ramificada). La cadena
lineal o amilosa, es la sucesin de unidades de 300 a 350 unidades glucosa unidas por enlaces
alfa 1-4. Las cadenas ramificadas de la amilopectina tienen enlaces alfa 1-4 y enlaces alfa 16, entre cada 24 a 30 molculas de glucosa. La digestin enzimtica del almidn consiste en
hidrolizar los enlaces alfa 1-4 por la enzima amilasa ya sea salival o pancretica, originando
dextrinas lmites, maltotriosa y hasta maltosa; posteriormente por accin de las enzimas
intestinales o la degradacin total llega hasta glucosa. La alfa amilasa presente en la saliva y
en la secrecin pancretica tiene un pH ptimo de 6,7 a 7,2.
6.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Define y explica los fundamentos del proceso de digestin del almidn por
la amilasa salival.
Procedimentales: Realiza las pruebas de reconocimiento de hidrlisis del almidn y

reconoce las reacciones involucradas.


-
Beaker 250ml.
Beaker 100ml.
Piceta 500ml.
Esptula de metal pequea
Propipetas de jebe
Pinza de madera
-
Olla de cocina
Trpode de metal
Bao mara
Tubo de ensayo 13 x 100
cido Clorhdrico
Almidn soluble
Lugol
Reactivo Benedict cualitativo
Cloruro de sodio
Buffer fosfato pH 6.8
6.4. PROCEDIMIENTO.
-
PROCEDIMIENTO I: Recoleccin de la saliva.
Uno de los alumnos proceder a enjuagarse repetidas veces la cavidad oral

con abundante agua; luego mantendr la boca cerrada por un espacio de 7 minutos, evitando
pasar la saliva. La saliva
acumulada se colectar en
- Tubos para la Reaccin
un beaker dejando caer por
de Lugol
gravedad
la
saliva
- Mezcla del tubo
acumulada para evitar la
de Digestin 1
(
formacin
de
espuma.
Realizar una dilucin de la
enzima 1/7 con
- TUBOS DE DIGESTION
- agua destilada,
- Mezcla del tubo
agitar
de Digestin 2
(
lentamente hasta
- Solucin
de
- lograr
la
Almidn 1g/dL
homogeneidad.
Mezcla del tubo

de Digestin 3
cido
Clorhdrico
N
Solucin
Lugol
Buffer( Fosfato
pH 6.8/0.1M
0.5 -
cido (
Clorhdrico 0,5
N
de
--
E-
--
--
PROC
DIMIENTO
II:
Preparar
los
siguientes tubos
de digestin:
Agua destilada
Cloruro
de
Sodio 0,9 g/dL
Llevar los tubos a

pre
incubacin
a
37C por 5 minutos y luego agregar 0,5 mL de saliva diluida, agitar y mantener los tubos en
incubacin por 10 minutos ms. Luego retirar todos los tubos de digestin.
-
PROCEDIMIENTO III
REACCIN DE LUGOL: Identificar la presencia de almidn por la aparicin

de la coloracin azul oscura.
-
Prepare los siguientes tubos:
PROCEDIMIENTO IV.
REACCION DE BENEDICT: El reactivo de Bnedict en su composicin presenta

in cprico (solucin de color celeste) en medio alcalino, el cual es reducido a in cuproso en
caliente por la presencia de agentes reductores, en este caso azcares reductores,
observndose una coloracin rojo ladrillo caracterstica. Prepare los siguientes tubos:
Tubos para la Reaccin

de Benedict
Mezcla del tubo
de Digestin 1
Mezcla del tubo

de Digestin 2
Mezcla del tubo

de Digestin 3
Reactivo
Benedict
de
(
(
6.5.
Mezclar y colocar los tubos en bao de agua hirviente por 3 min.
RESULTADOS
Evidenciar la coloracin azulada de reaccin lugol positiva.
Observar la reaccin amarilla de reaccin de lugol negativa.
Evidenciar la coloracin de amarillo a rojo ladrillo de reaccin Benedict positiva.
Evidenciar la coloracin celeste de reaccin Benedict negativa.
-
6.6. CUESTIONARIO
-
Cules son los productos finales de la digestin del almidn por la amilasa?
Rol del NaCl en el sistema de reaccin?

Que funcin cumple el HCl 0,5 N en el tubo 3 de digestin? Calcular el pH en este tubo.
Fundamento de la reaccin de Lugol y Benedict.
Cite los disacridos y monosacridos que son reductores y no reductores e indique a que
se debe esta caracterstica.
Que hubiera pasado si el donante de saliva hubiera ingerido alimentos y
no hubiera
realizado un buen enjuague bucal al colectar la saliva. Explique
-

-
Mosby; 2011
http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/autoestudio/FISIOLOGIAPANCREAS.PDF
-
PRCTICA N 07
AISLAMIENTO DE GLUCGENO HEPTICO - CUANTIFICACIN DE GLUCOSA
7.1.MARCO TERICO
Los seres vivos almacenan hidratos de carbono en forma de polisacridos, que sirven
como materiales de reserva. El almidn, la inulina en los vegetales superiores y el glucgeno
en los animales. El glucgeno consta de unidades de glucosa unidas por enlaces glicosdicos
alfa (1-4) y cada 8 10 unidades de glucosa se ramifica en enlace glicosdico alfa (1-6). El
glucgeno es especialmente abundante en el hgado y en msculo. Esta prctica consiste en
el aislamiento de glucgeno heptico de rata. La Extraccin consiste en que el glucgeno
presente en una muestra de tejido heptico y posterior hidrlisis cida que despolimeriza al
glucgeno y genera una disolucin cida de glucosa (hidrolizado). En esta Prctica el
glucgeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte
(KOH) hasta la destruccin total del tejido. La separacin del glucgeno del tejido se
consigue mediante la adicin de etanol (precipita polisacridos y elimina los monosacridos
solubles) y sulfato de sodio (coprecipitante). As, se produce un precipitado que contiene una
mezcla de glucgeno, protenas y cidos nucleicos, que han resistido el calentamiento
anterior. El tratamiento posterior con cido tricloroactico (TCA) hace que precipiten las
protenas y cidos nucleicos de la mezcla. El glucgeno aislado se vuelve a precipitar con
etanol, obtenindose una preparacin con un alto grado de pureza. Entre los carbohidratos,
la glucosa es el que se usa principalmente en el metabolismo energtico. Constituye el
principal componente de los productos de la digestin de almidones y otros hidratos de
carbono. Se trata de una molcula de seis carbonos, es una hexosa con que se encuentra en
sus formas aldehdica y enlica. Tiene un peso molecular de 180 y es muy higroscpica, siendo
uno de los principales componentes de la presin osmtica de la sangre. En la segunda parte
de esta practica cuantificaremos la glucosa presente en el residuo obtenido del aislamiento
del glucgeno heptico, utilizando el mtodo enzimtico en cual consiste que la glucosa por
accin de la glucosa oxidasa produce cido glucnico y peroxido de hidrgeno; este ltimo
por accin de la peroxidasa oxida a la 4-aminofenazona generando la oxazona de color
rosado, color que es proporcional a cantidad de glucosa y medible a 505 nm.
7.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Explica los mecanismos del metabolismo del glucgeno heptico y Explica
los fundamentos de la cuantificacin de la glucosa en una muestra.
Procedimentales: Realiza el aislamiento, cuantificacin por peso del glucgeno heptico y

cuantificacin glucosa en la muestra obtenida.
Actitudinal: Demuestra capacidad analtica, puntualidad, diligencia y orden, interpreta

los cambios patolgicos encontrados y coopera con el grupo respetando las reglas
acordadas, brinda ayuda oportuna a sus compaeros.
-

-
Hgado de res o de cerdo congelado o

recin extrado
Baguetas
Beaker 250ml.
Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Balanza analtica
Olla de cocina
Trpode de metal
Pinza de madera
Bao mara
Espectrofotmetro
Gradillas de metal
Material de diseccin
Tabla de cortar
cido Tricloroacetico (TCA)
Etanol
Hidrxido de potasio
- Solucin
de
sulfato
de
(saturado)
- Reactivo de glucosa-oxidasa
- Glucosa (estandar)
-
sodio
7.4. PROCEDIMIENTO
- HOMOGENIZADO:
1. Se ponen 3 mL de la solucin de hidrxido potsico al 30% en un tubo de ensayo de vidrio de
16X150.
2. Se pesan 4 g de tejido (hgado) y se introducen en el tubo anterior.
3. Se calienta en un bao de agua hirviendo, homogenizando con cuidado para acelerar el
proceso, durante 10 minutos (o hasta su digestin). USAR PINZAS DE MADERA PARA
MANIPULAR LOS TUBOS. PRECAUCION: ALCALI HIRVIENDO!!
4. Se enfra el tubo bajo el grifo una vez acabada la digestin.
PURIFICADO:
5. Una vez enfriado el tubo de ensayo, se aaden 0.2 mL de la solucin saturada de Na 2SO4 y se
mezclan fuertemente. Reposar 5 minutos.
6. Se precipita el glucgeno que est en solucin por adicin de 7 mL de Etanol al 95%. Se
agita y deja en fro en un bao de hielo durante 5 minutos.
7. Se pasa la solucin a 2 tubos de vidrio de 13x100 y se centrifuga a 4,000 rpm durante 5
minutos. Se desecha el sobrenadante y se coloca el tubo invertido sobre papel de filtro.
8. Se aaden 3 mL de la solucin de TCA al 10% a cada tubo y se disuelve totalmente el
sedimento agitando fuertemente.
9. Se centrifuga de nuevo 5 minutos a 4,000 rpm
10. Se aade los 2 sobrenadantes obtenidos en la ltima centrifugacin a un tubo de ensayo
de 16x150, al que previamente se han aadido 10 mL de etanol al 95%, desechando el
sedimento de la centrifugacin. Se deja reposar 5 minutos para que se produzca la
precipitacin del glucgeno.
11. Se traslada la solucin 2 tubos de vidrio de 13x100 (previamente pesados), y se centrifuga
durante 5 minutos ms a 4,000 rpm. Una vez acabada la centrifugacin se descarta el
sobrenadante. El sedimento obtenido representa el glucgeno prcticamente exento de
sustancias contaminantes. Dejar secar en la estufa a 37C y volver a pesar los 2 tubos.
12. Obtener la diferencia en peso de los tubos y sumarlas (este ser el peso de glucgeno
aislado de 4 g de tejido (hgado)
13. Disolver 8 mg de glucgeno por mL de tampn fosfato 0,02 M pH 7.0 con NaCl 0,005 M
14. Diluir 1/50 del glucgeno disuelto (0.1 mL en 4.9 agua destilada)
15. Separar del producto anterior obtenido medio mililitro de muestra y trabajarlo como a
continuacin se indica.
-
F-CV3-3B-2
TUBOS
Muestra
Solucin estndar
100 mg/dL
Reactivo
enzimtico
S
T
M
P
1
0
0
1
0
Rev. Junio 2007
Llevar los tubos a incubar en bao mara a 37C por 5 min.

Retirar los tubos del bao de agua, mezclar y llevar a leer al
espectrofotmetro a 505 nm.
Hallar el FC y la concentracin de la muestra. Luego dividir entre 10
Calculo de porcentaje de pureza del glucgeno:
Glucgeno puro (mg):
Rendimiento:
|gluc| geno
x 100
|glucosa|
mg precipitado x %glucgeno
100 mg
mgde gluc geno puro

gramos del higado
7.5. RESULTADOS
Al finalizar cada grupo presentara los resultados obtenidos.
Indicar el rendimiento total en glucgeno y calcular el contenido en glucgeno del hgado,
expresndolo en mg de glucgeno por g de tejido fresco.
Expresar la concentracin de glucosa que se pueda encontrar en la muestra.
7.6. CUESTIONARIO
Adems de la insulina y glucagn, que otras hormas tienen ingerencia en el control de la
glucosa sangunea.
Existen plantas y/o productos naturales que regulan la glicemia, cuales son, que origen
tiene y como son administrados.
Qu otros mtodos para determinacin de glucosa existen?
Se excreta glucosa por la orina de manera normal? Por qu?

Mosby; 2011
- Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
- http://www.fmv-uba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/segundo_a%C3%B1o/
- bioquimica/Seminario10/sem10file2.pdf
- http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioqumica/material-de-clase-1/Tema17Glucogeno08-09.pdf
- http://www.uv.es/jcastell/2_Glucogeno_degradacion.pdf
- http://www.veoapuntes.com/MEDICINA/1/BIOQUIMICA%20METABOLICA/t7-metabolismodel-glucogeno.pdf
-
SEMANA N 08
PRIMER EXAMEN ESCRITO
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
PRCTICA N 09
HIDRLISIS DE LAS GRASAS POR ACCIN DE LA LIPASA PANCRETICA
9.1. MARCO TERICO

Los lpidos o grasas, son un conjunto de compuestos orgnicos que se
caracterizan por ser apolares o tener muy poca solubilidad en agua, pero solubles en
solventes orgnicos. Entre los lpidos se encuentran triacilgliceroles, ceras, esteroles,
fosfolpidos, glucolpidos; cada uno con una funcin determinada en el organismo. Son
esenciales, pues cumplen funcin energtica, de reserva, de defensa, hormonal,
estructural, etc. Los triacilgliceroles constituyen la principal forma de almacenamiento de
los lpidos en el organismo, esto se acumulan en el tejido formando inmensas vacuolas que
llegan hasta desplazar el ncleo hacia la zona perifrica del citoplasma. Despus de su
ingestin, los lpidos son digeridos por la lipasa, enzima esterhidrolasa presente
fundamentalmente en el jugo pancretico, requiriendo de la colipasa para realizar la
hidrlisis de las grasas. Adems por su caracterstica apolar se requiere de un agente que
reduzca la tensin superficial, esta funcin la tienen las sales biliares que permiten la
formacin de micelas en un proceso de emulsin y saponificacin, de all el rol de la bilis en
la digestin. La lipasa pancrtica hidroliza los enlaces ester ya sea en posicin 1 o 3 del
triacilglicerol (TAG) obtenindose como productos a cidos grasos libres (AGL) o 2monoacilglicero (2-MAG). Este ltimo puede ser hidrolizado por medio de la transferencia
del grupo acilo en posicin 2 hacia la posicin 1 o 3 por medio de la isomerasa lipasa y ser
finalmente hidrolizado a glicerol y AGL. En la prctica observaremos la digestin de un
aceite comestible vegetal, para lo cual se emplear una solucin de pancreatina, la cual
contiene disuelta un extracto de jugo pancretico, en la cual se encuentra las lipasas. As
mismo se observar la accin de las sales biliares. La medicin de la digestin se realizar
por medio de una titulacin cido base, midiendo la acidez libre generada durante la
hidrlisis utilizando una solucin de NaOH, y como indicador a la Fenolftalena, la cual vira a
rojo grosella por el exceso de NaOH en la titulacin.
9.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Define e identifica los procesos de digestin de los lpidos y menciona los
fundamentos de la determinacin.
Procedimentales: Realiza las pruebas de medicin y control para la hidrlisis de los

lpidos. Ejecuta una titulacin y cuantificacin de cidos grasos.
Actitudinal: Observa la importancia de la actividad enzimtica de la lipasa en el proceso

de hidrlisis de las grasas.
F-CV3-3B-2
Baguetas
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Buretas 25ml.
Mariposas
Soporte universal
Bao mara
Rev. Junio 2007

Aceite vegetal neutralizado
Fenolftalena
Hidrxido de Sodio
Solucin buffer fosfato ph 8.0
Sales biliares
-
9.4.
Solucin de pancreatina
PROCEDIMIENTO
-
PROCEDIMIENTO I: HIDRLISIS.
Realizar el siguiente protocolo de trabajo.
TUBOS
Aceite
Neutralizado
Sol. Buffer
Fosfato 0.1M
pH:8
Sales Biliares 1%
en Buffer
Agua destilada
Sol. Pancreatina
1% en Buffer
(m
(m
(m
(m
(m
--
--
--
--
--
--
Tapar, agitar los tubos y llevarlos al bao mara a 37C por 60 min (agitar el
tubo cada 10 minutos)
-
PROCEDIMIENTO II: TITULACIN (grado de acidez).
1. Preparar la bureta, colocndola en el soporte universal y agregando NaOH 0,1 N, de

manera tal que la punta est llena y la bureta enrazada a cero.
2. Retirar los tubos del bao de agua.
3. Titular cada uno de los tubos agitando constantemente, hasta obtener de manera
permanente un color rosado plido o tenue.
4. Anote el gasto generado en cada tubo de ensayo.
9.5. RESULTADOS
- Obtener el gasto final del agente titulante.
- Calcular el nmero de miliequivamentes (mEq) de cidos grasos libres: Este ser igual al
nmero de miliequivalentes de NaOH utilizados para neutralizar los cidos grasos libres.
-
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
Normalida
d del
NaOH:
Nmero de mEq
Volumen del NaOH
gastado(mL)
Calcular el porcentaje de cidos grasos libres:

- Porcentaje
- (Vol. del titulado en mL)(Normalidad del NaOH)
de cidos :
(N de mEq)
Grasos
- Cantidad de Muestra Problema (mL)
libres
-
9.6. CUESTIONARIO
a) Qu funcin cumple las sales biliares en la presente prctica.
b) Qu es el aceite neutralizado, y por qu fue necesario usarlo de esta manera.
c) Que funcin cumple los tubos blancos B1 y B2 en la prctica.
d) Para qu es necesario agitar los tubos.
e) Expresar los miliequivalentes hallados en mEq por litro de sustrato.
f) Por qu en el tubo 1 hubo mayor gasto de NaOH.
g) Si se hubiera usado un NaOH de 0,15 mol/L, cuanto de este se hubiera gastado en la
titulacin de cada uno de los tubos de la prctica.
h) Y si el NaOH hubiera sido 0,005 N que volmenes se hubieran gastado.
- Baynes ,John W, Dominiczack ,Marek H. Bioqumica mdica. 3a. ed. Barcelona: Elseiver
Mosby; 2011
- Lodish,H, Berk, A, Matsudaira, P. Biologa celular y molecular. 5a. ed. Buenos Aires:
- http://med.javeriana.edu.co/fisiologia/autoestudio/FISIOLOGIAPANCREAS.PDF
- http://www.sefh.es/fh/83_6.pdf
- http://www.odontochile.cl/archivos/segundo/fisiologia/pancreasdigestionyabsorcion.pdf
- http://www.fodonto.uncu.edu.ar/upload/metabolismo-de-lipidos-claudio-faderodonto.pdf
-
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
PRCTICA N 10
LPIDOS: SOLUBILIDAD Y SAPONIFICACIN
10.1.
MARCO TERICO
Designamos con el nombre de Lpidos a una serie de Principios Inmediatos de
naturaleza qumica heterognea, pero cuyo carcter comn es su insolubilidad en agua, y su
solubilidad en disolventes orgnicos. A los de composicin qumica ms sencilla se les
denomina lpidos simples son compuestos ternarios formados por C, O y H y resultan de la
unin de cidos grasos con alcoholes mediante un enlace tipo ster. Entre los lpidos simples
merecen destacarse los glicridos que son tristeres de cidos grasos con glicerol. Un
ejemplo son las grasas animales y los aceites vegetales.
Estos son lquidos a la temperatura de 20C debido a la presencia de cidos
grasos insaturados (oleico, linolnico, araquidnico), mientras que en las grasas animales de
reserva predominan los steres palmticos y estericos cuyo punto de fusin es superior a
50C. En general, los lpidos se acumulan a modo de gotitas en el interior de las clulas
animales y vegetales, de donde pueden ser extrados mediante los denominados disolventes
de grasa: ter, cloroformo, benceno, petrleo, sulfuro de carbn. En los animales pueden
acumularse en las clulas del cuerpo, en el hgado de muchos peces (hasta el 90% del peso
total), y en el tejido adiposo de los mamferos. En los vegetales, las grasas se acumulan en
las semillas y son utilizadas para la germinacin.
10.2. COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Describe las propiedades de los lpidos segn los diferentes solventes
orgnicos utilizados y el concepto de saponificacin.
Procedimentales: Comprueba la solubilidad de los lpidos en disolventes orgnicos y

explica el concepto de saponificacin y realiza la saponificacin.
Actitudinal: Demuestra capacidad analtica en el proceso de obtencin de los productos

de la saponificacin, demostrando los fundamento de sus reacciones qumicas

-
F-CV3-3B-2
Baguetas
Beaker 100ml.

Probeta 25ml.
Probeta 100ml.
Rev. Junio 2007

Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Bao mara
Balanza analtica
Aceite vegetal
Acetona
Cloroformo
Etanol
Hidrxido de Potasio
Sales biliares
Laurilsufato de Sodio
Tween60
10.4. PROCEDIMIENTO
10.5.
1. Saponificacin de las grasas: En un beaker de 100 mL, colocar 10 gramos de manteca de
cerdo, en otro 10 g de manteca de res y en otro 10 g de manteca de pollo, aadir 20 mL
de Hidrxido de Potasio 50%, y 20 mL de Etanol 96, calentar en Bao mara durante al
menos 30 minutos a 80C, observar.
10.6.
10.7.
10.8.
2. Ensayo de la solubilidad: tomar 4 tubos de ensayo y enumerarlos del 1 al 4, luego:
10.9.
10.10.
10.11.
10.12.
10.13.
10.14.
10.15.
10.16.
10.17.
10.18.
10.19.
10.20.
10.1.
TUBOS
10.6.
Aceite
Veget
al
10.12.
10.7.
(go
10.2.
10.3.
10.8.
4
10.4.
3
10.5.
4
10.9.
10.10.
10.11.
10.15.
10.16.
10.17.
Agua
destil
ada
10.13. 10.14.
10.18.
10.19. 10.20.
10.21.
10.22.
10.23.
10.24.
10.25. 10.26.
10.27.
10.28.
10.29.
Acetona
mL
Etanol
10.30.
Cloroform
o
mL
mL
---
-----
---
10.31. 10.32.
mL
---
10.33.
---
---
--2
10.34.
---
diluir Tween 60 en 20mL de agua destilada.
---
-----
10.35.
2
3. Preparar 20mL
de solucin de
Sales biliares al
1%, 20mL de
solucin
de
Laurilsulfato de
Sodio al 1% y
4. Dispersin de Lpidos en Agua: Tomar 4 tubos de ensayo y enumerarlos del 1 al 4, luego:

10.21.
F-CV3-3B-2
10.22. 10.23. 10.24. 10.25. 10.26.

1
2
3
4
5
TUBOS
10.27.
Aceite Vegetal
10.34.
Agua destilada
10.41.
1%
Sol de sales Biliares
10.28.
(go
10.35.
mL
10.42.
mL
10.29. 10.30. 10.31. 10.32. 10.33.

4
4
4
4
4
10.36. 10.37. 10.38. 10.39. 10.40.
4
4
4
4
4
10.43.
10.45. 10.46.
10.44.
10.47.
-----4
Rev. Junio 2007
10.48.
1%
Sol de Laurilsulfato
10.55.
Sol Tween 60
10.62.
Jabn (obtenido de la
saponificacin)
10.69.
-
10.49.
mL
10.50. 10.51.
10.53.
10.52.
10.54.
-----4
10.56.
mL
10.57. 10.58. 10.59.

10.60. 10.61.
-----4
10.63.
(go
10.64. 10.65. 10.66. 10.67.

10.68.
----4
RESULTADOS
Al finalizar cada grupo presentar los resultados obtenidos.
10.70.
10.71.
-
F-CV3-3B-2
CUESTIONARIO
Realice la formula del compuesto saponificable obtenido y explique la solubilidad de los
lpidos en cada solvente.
FUENTES DE INFORMACIN
Mosby; 2011
http://ucvvirtual.edu.pe/campus/HDVirtual/700426354/Teor
%C3%ADa/7000001834/TecNoAl_08.pdf
http://tuylaquimica.files.wordpress.com/2011/03/saponificacic3b3n-de-grasas-yaceites.pdf
Rev. Junio 2007
10.72.
10.74.
PRCTICA N 11
10.73.
COLESTEROL OBTENCIN E IDENTIFICACIN
10.75.
11.1.
MARCO TERICO
10.76.
El colesterol es un lpido antiptico que se encuentra en los
tejidos y en las lipoprotenas plasmticas como colesterol libre o ster de colesterol. Es un
componente esencial de las membranas celulares. Es sintetizado en numerosos tejidos a
partir de AcetilCoA y finalmente eliminado del organismo en la bilis, ya sea como colesterol
o como sales biliares. El nivel srico de colesterol ha sido objeto de muchas investigaciones
en individuos sanos y enfermos. Su concentracin en la sangre es variable con la edad, el
tipo de dieta, el sexo y en diversas condiciones clnicas. El colesterol es uno de los factores
contribuyentes a la formacin de ateromas. Aproximadamente la mitad del colesterol que
tiene el organismo, resulta de la sntesis endgena y la otra mitad proviene de la dieta. El
tejido heptico es el principal formador de colesterol, seguido de los intestinos y la piel. Los
niveles de colesterol total en sangre varan desde 140 mg/dL en jvenes, 200 mg/dL en
adultos y adulto mayor, sin embargo existe bibliografa que indica el lmite para los adultos
mayores de 250 mg/dL. Se sabe que el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria es tres
veces mayor en varones adultos cuando los niveles son mayores de 230 mg/dL y aumenta a 6
veces en individuos con ms de 260 mg/dL de colesterol srico; de aqu la importancia del
control de los niveles de colesterol sanguneo. En la prctica el colesterol ser extrado del
tejido cerebral de un animal (pollo) por diferencial de solubilidad y luego se determinar
empleando un mtodo enzimtico colorimtrico. Inicialmente los esteres de colesterol son
hidrolizados por la colesterol ster hidrolasa en colesterol libre y cidos grasos. El colesterol
libre es oxidado por la colesterol oxidasa generando en el medio de reaccin colest-4-en-3ona y perxido de hidrgeno; este ltimo por medio de la peroxidasa y en presencia de 4amino fenazona y fenol forma un complejo coloreado el p-benzoquinona monoimino
fenazona, que es de color rosado rojiso, directamente proporcional a la concentracin de
colesterol que se mide a una longitud onda de 520 nm.
11.2.
COMPETENCIAS
Conceptuales: Explica los procesos de obtencin de colesterol a partir de tejido cerebral

y relaciona los reactivos usados con la funcin de estos
en la determinacin
colorimtrica de colesterol.
Procedimentales: Extrae colesterol de tejido cerebral, realiza las pruebas de medicin

volumtrica y colorimtrica para la determinacin de colesterol.
Actitudinal: Demuestra inters en la obtencin del colesterol en tejidos, observando su

importancia como componente importante en la constitucin celular
11.3.
-
F-CV3-3B-2
Baguetas
Beaker 100ml.
Pipeta serolgica 2, 5,10 mL
Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Bao maria
Espectrofotmetro
Balanza analtica
Centrifuga
Material de diseccin
Tabla de cortar
Placa Petri 15x100
Acetona
Eter
Etanol
Colesterol (estndar)
Reactivo de colesterol
Rev. Junio 2007
11.4. PROCEDIMIENTO
1.
Obtener un da anterior 10g cerebro de res y refrigerar para su conservacin.
2.
Pesar fracciones del cerebro de 2.5g cada uno
3.
En un Beaker de 10 mL triturar el cerebro con una bagueta aadiendo acetona (1 mL

por cada 0.5 g de cerebro), hasta que quede desecho.
4.
Verter el homogenizado en un tubo de ensayo y centrifugar a 3000rpm por 2 minutos.
5.
Retirar con una pipeta pasteur todo el sobrenadante en otro tubo de ensayo y rotularlo
como FRACCION I.
6.
Al homogenizado sedimentado agregar 2mL de Acetona, homogenizar en un vortex y

volver a centrifugar a 3000rpm por 2 minutos.
7.
Extraer el sobrenadante con una pipeta pasteur y juntarlo con el primer sobrenadante
obtenido. Esta fraccin contiene principalmente colesterol, pero tambin tiene en menor
cantidad grasas neutras.
8.
Mantener el resto de cerebro sedimentado a temperatura ambiente dentro de la

campana de extraccin, durante 5 minutos para que se evaporen los restos de acetona.
9.
Adicionar 3 mL de ter al sedimento y agitar en vortex. Centrifugar a 3000rpm por 2

minutos.
10.
Retirar con una pipeta pasteur todo el sobrenadante en otro tubo de ensayo y rotularlo
como FRACCION II.
11.
Aadir al homogenizado sedimentado 2 mL de ter, homogenizar en vrtex.

Centrifugar a 3000rpm por 2 minutos
12.
Retirar con una pipeta pasteur todo el sobrenadante y juntarlo con el sobrenadante de
la FRACCION II Esta fraccin contiene fosfolipdos.
13.
Adicionar 3 mL de etanol al 95% caliente (70) al homogenizado sedimentado y agitar

con la bagueta. Centrifugar y colocar el sobrenadante en un tubo rotulado como
FRACCIN III, la cual consiste principalmente de glucolpidos. Repetir la extraccin
con otros 3 ml de etanol y descartar el residuo. Finalmente descartar el sedimento.
14.
De la FRACCION I tomar 0.1mL y verter en otro tubo para su medicin de colesterol.

Desecar por circulacin de aire.
15.
Pesar 3 placas Petri y luego verter el contenido de las fracciones en cada una de las
placas. Luego desecar y volver a pesar las placas. La diferencia de peso corresponde al
peso del material extrado. Anotar los pesos.
16.
Cuantificar la cantidad de colesterol en el tubo con 0.1mL de la FRACCION I,

agregando 1mL de Reactivo, y proceder segn protocolo de trabajo:
BL
-
F-CV3-3B-2
TUBOS
ES
M
U
E
S
T
R
A
Rev. Junio 2007
Muestra
desecad
a
Estanda
r
(100mg
%)
uL
----
Reactiv
o para
Coleste
rol
mL
uL
----
----
1
0
0
10
11.5. RESULTADOS
-
Obtencin de colesterol, describir los cristales blanquecinos en la placa FRACCION I.
Determinacin de la concentracin de colesterol en el sobrenadante y en el tejido

enceflico.
Calcule el porcentaje de cada una de las fracciones, colocando los datos en la siguiente
tabla:
-
FRACCIO
N
COLESTER
OL
FOSFOLIPI
DOS
GLUCOLIP
IDOS
REND
IMIEN
TO
(g)
REN
DIMI
ENT
O
(%)
11.6.CUESTIONARIO
1. Durante la extraccin de los lpidos, Qu ocurri con las protenas del tejido? Explique.
2. Haga una lista de disolventes orgnicos en orden decreciente de polaridad.
3. De los siguientes lpidos: colesterol, fosfolpidos y glucolpidos Cul es la de mayor
polaridad y cual la de menor polaridad?
4. Qu otro tipo de molculas lipdicas se deben encontrar en el tejido cerebral?
5. Qu otros mtodos se conocen para aislar y purificar lpidos?
Mosby; 2011
-
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
PRCTICA N 12
IDENTIFICACIN Y VALORACIN DE LA VITAMINA C EN CTRICOS
12.1.
MARCO TERICO.
- El Per es un pas productor de frutas, uno de los principales frutos cultivados es la naranja,
los principales mritos nutritivos de esta fruta es el elevado contenido en vitamina C, soluble
en agua, que apenas se acumula en el organismo, lo que implica que debe ser ingerida
diariamente, de modo que la Cantidad Diaria Recomendada (CDR) de vitamina C es de 60 mg.
En esta prctica se va a determinar el contenido de vitamina C de un zumo de naranja
(obtenido a partir de naranjas de la zona) mediante una valoracin (titulacin) redox
utilizando disolucin de tiosulfato de sodio como agente valorante (titulante). La vitamina C
(cido ascrbico) es oxidada por un oxidante suave como una disolucin de yodo para dar
lugar a cido deshidroascrbico segn la reaccin
El cido ascorbico en presencia de iodo, se oxida, siendo el iodo el oxidante

para la realizacin de este proceso redox.
El proceso anterior lo realizamos con exceso de oxidante. El iodo en exceso
se obtiene al hacer reaccionar el iodato de potasio con el ioduro de potasio.
Cuando el cido ascrbico se oxida en presencia de exceso de iodo, se
transforma en el cido deshidroascrbico.
Se aada ioduro de potasio para que se produzca el iodo libre.
Se aade tambin ioduro de potasio en exceso sobre el iodato de potasio,
para impedir que el iodo escape.
Conocida la cantidad de iodo generada, procedemos a valorar el exceso de
iodo que sobra despus de valorar el cido ascrbico con una disolucin de tiosulfato de
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
sodio de concentracin conocida, es decir procedemos a la realizacin de una valoracin por

retroceso.
-
IO3K + 6HCl + 5KI 3I2 + 3H2O + 6 XCl
Como indicador para esta reaccin qumica redox, vamos a emplear una
sustancia que presenta actividad redox, la cual presenta distintos colores en su forma
oxidada y reducida, esta sustancia es el almidn.
En aquellos en que el reductor sea el yoduro de potasio y sobre l se haga
reaccionar el oxidante que se desea valorar, el yodo puesto en libertad y cuya cantidad es
equivalente a la del oxidante, se valora con una solucin titulada de tiosulfato de sodio;
esta solucin es de uso general en todos los mtodos yodomtricos en los que se pone yodo
en libertad; as pues la reaccin fundamental de estos procesos es la siguiente:
2Na2S2O3 + I2
Na2S4O6 + 2 NaI
-
12.2. COMPETENCIAS
12.3.
Conceptuales: Explica los efectos de las vitaminas hidrosolubles en el cuerpo humano, as

como su dficit.
Procedimental: Determina el contenido de acido ascrbico de una naranja.

-
Baguetas
Beaker 100ml.
Beaker 250ml.
Probeta 25ml.
Probeta 100ml.
Buretas 50ml.
Mariposas
Embudo mediano
Soporte universal
Olla de cocina
Tripode de metal
Pinza de madera
Gradillas de metal
Solucin de ioduro de potasio
Solucin de iodato de potasio
cido clorhdrico concentrado
Solucin de tiosulfato de sodio
Solucin de almidn
Reactivo Benedict cualitativo
12.4. PROCEDIMIENTO
- DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE LA VITAMINA C
1. Obtener el jugo de 1 naranja y colarlo con una gasa
2. Agregar 3mL del jugo de naranja en un Beaker de 250mL
3. Agregar 20mL de Ioduro de Potasio (KI) y 20mL de Iodato de Potasio (IO 3K) al matraz con el
jugo de naranja.
4. Agregar 3mL de HCL concentrado
5. Agregar 0.5mL de solucin de almidn (indicador).
6. En la Bureta agregar el Tiosulfato de Sodio hasta el ras que indica cero.
7. Dejar gotear el Tiosulfato de Sodio al matraz con la solucin preparada homogenizando
con una bagueta hasta que desaparezca por 10 segundos el color violceo producto de la
reaccin del almidn con el exceso del Yodo que no reaccion con la Vitamina C
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
8. Anotar el gasto de Tiosulfato de Sodio utilizado en la titulacin.

- DEMOSTRACION DE LA CAPACIDAD REDUCTORA DE LA VITAMINA C
1. Del jugo de naranja obtenido, tomar 2mL y colocarlo en un tubo de pyrex 13x100
2. Agregar 2mL del reactivo de Benedict
3. Calentar en bao mara hirviente por 2min
4. Observar y explicar la reaccin.
12.5. RESULTADOS
1. Hallar el nmero de moles del Iodato de Potasio (IO3K)
2. Hallar el nmero de moles del Tiosulfato de Sodio (Na 2S2O3)
3. Hallar el nmero de moles de yodo en exceso que ha sido reducido por el Tiosulfato de
Sodio, sabiendo que segn la reaccin yodomtrica corresponde a la mitad del nmero de
moles del Tiosulfato de Sodio.
- Nmero de moles del Yodo en exceso = Nmero de moles de Tiosulfato de Sodio
4. Hallar el nmero de moles de Yodo generados en la reaccin inicial, sabiendo que segn
esta reaccin corresponde al triple del nmero de moles del Iodato de Potasio.
- Nmero de moles del Yodo generados=3xNmero de moles del Iodato de Potasio
5. Hallar el nmero de moles del Yodo reducido por la Vitamina C, sabiendo que resulta de la
diferencia del Yodo generado al inicio y el Yodo en exceso que redujo con el Tiosulfato de
Sodio. Este nmero de moles hallado corresponde tambin al nmero de moles de la
Vitamina C en la muestra
6. Hallar la masa de la Vitamina C, sabiendo que su PM es 176.12
7. Expresar la concentracin de vitamina C en mg/dL o mg%
12.6. CUESTIONARIO
Explicar con grficos el fundamento de la reaccin ocurrida para determinar la
concentracin de la vitamina C
Qu ocurre con el Benedict cuando reacciona con la vitamina C?
Qu relacin presenta la vitamina C con el Cncer?

-
Mosby; 2011
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/analitic/Asociencia/Vitamina%20C.pdf
http://www.dgadp.uady.mx/salud/articulos/n18_15042010/La.Vitamina.C.como.Antioxida
nte.muchas.cosas.mas.pdf
http://bvs.sld.cu/revistas/ali/vol14_1_00/ali07100.pdf
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
- PRCTICA N 13
DETERMINACIN DE PROTENAS: OVOALBMINA
13.1. MARCO TERICO.

- El nombre Protena proviene de la palabra griega proteios que significa lo primero. Son
sustancias orgnicas muy complejas presentes en toda la materia viva. Todas las protenas
contienen adems de carbono, hidrgeno, tambin nitrgeno y a menudo azufre y fsforo.
Adems las protenas se componen bsicamente de 20 unidades estructurales denominadas
aminocidos unidos por enlaces peptdicos provocando caractersticas especficas en cada
una. Las propiedades de las protenas se ven afectadas por modificaciones en el pH, la
absorcin de protenas mediante intercambio inico depende del pH, es decir de valores de
pH por abajo del punto isoelctrico la carga neta de la protena es positiva y la molcula se
ve absorbida con mayor fuerza en intercambiadores catinicos como la carboximetil celulosa
sdica. Esta propiedad permite la separacin y la purificacin de protenas mediante
cromatografa de intercambio inico. La movilidad de las molculas de protenas en un
campo electrosttico tambin depende del valor de pH. Esta propiedad permiti desarrollar
la tcnica de la electroforsis que es una de las ms utilizadas en la investigacin de
protenas. Los mtodos ms utilizados para determinar los niveles de protenas en suero o
plasma incluyen los fotocolorimtricos, como el mtodo de Biuret, de Lowry, etc. Los
mtodos de precipitacin y digestin cida con conversin de amoniaco y cuantificacin de
nitrgeno proteico (Kjeldahl) son poco usados. Tambin se pueden determinar por la densidad
ptica de sus diluciones a 280 nm midiendo el contenido de tirosina y triptfano en las
protenas, pero puede ser utilizado solo en soluciones puras. En la prctica de determinar de
manera cualitativa (de coloracin) sobre los grupos funcionales a las protenas y aminocidos.
El estudiante conocer la prueba de Biuret el cual se basa en que las Protenas con sulfato
cprico en un medio alcalino dan una coloracin violeta, prueba caracterstica para la
identificacin de protenas. As como La reaccin Xantoprotica en el cual las protenas en
presencia de cido ntrico concentrado y en caliente forman un compuesto, nitroderivado, de
color amarillo, que toma un color anaranjado cuando se alcaliniza la solucin. Tambin se
impartir el conocimiento sobre la desnaturalizacin de las protenas al adicionarles sales de
metales pesados, solventes orgnicos, cidos y bases entre otros y cono estos influyen en sus
caractersticas fsico-qumicas y biolgicas
13.2. COMPETENCIAS
13.3.
Conceptuales: Explica los efectos de los agentes fsicos qumicos sobre las protenas y
como influyen en su solubilidad.
Procedimental: Elabora un cuadro sobre la agresividad de los agentes desnaturalizantes.

-
F-CV3-3B-2

Propipeta de jebe
Piceta 500ml.
Olla de cocina
Trpode de metal
Pinza de madera
Reactivo de Ninhidrina
Reactivo de Biuret
cido ntrico concentrado
NaOH 20% y 40%

Ac Actico glacial
NaCl saturado
Reactivo de Hopkins-cole
Reactivo de Millon
Naftol
Hipoclorito de sodio
Acetato de plomo
-
Rev. Junio 2007
13.4. PROCEDIMIENTO
-
2 mL de Albumina
Prueba
Ninhidrina
Prueba de
Biuret
2 mL de Reactivo de
Ninhidrina
Calentar en Bao mara
hirviente x 1 min
2 mL de Albumina
1 mL de Reactivo de Biuret
2 mL de Albumina
10 gotas de cido Ntrico

concentrado
hirviente x 1 min
Dejar enfriar
8 gotas de NaOH 20%
2 mL de Albumina
Prueba de
la
Coagulaci
n
4 gotas de Ac Actico
glacial 30%
1 mL NaCl saturado
Prueba de
HopkinsCole
Reaccin
Xantoprote
ica
Prueba de
Millon
Prueba de
Sakaguchi
Prueba
para
Grupos SH

hirviente x 1 min
2 mL de Albumina
3 mL de Reactivo de
Hopkins-Cole
2 mL de Albumina
4 gotas de Reactivo de
Millon
2 mL de Albumina
5 gotas de NaOH 40%
8 gotas de Naftol
10 gotas de Hipoclorito de
Sodio 2%
Mezclar bien
2 mL de Albumina
1 mL de NaOH 40%
1 mL de Acetato de Plomo

hirviente x 4 min
O
O
13.5. RESULTADOS
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
Observar las reacciones ocurridas e interpretar los resultados
13.6. CUESTIONARIO
Explicar el fundamento de cada prueba realizada
Cules son las aplicaciones prcticas de cada prueba?
Para la siguiente protena cuya estructura es: ALA-VAL-GLY-GLU-LYS, Qu prueba utilizara
para identificarla y por qu?
Defina usted el termino anlisis cualitativo y anlisis cuantitativo
Grafique un enlace peptdico

-
Mosby; 2011
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/201103/leccin_5_pruebas_cualitativas__
y_cuantitativas_para_determinar__aminocidos___y_protenas_en_laboratorio.html
http://lab-bioquimica2011.blogspot.com/2011/09/laboratorio-3-pruebas-de-aminoacidosy.html
http://biokimik2011.blogspot.com/2011/09/objetivos-aplicar-pruebas-cualitativas.html
http://polimedia.upv.es/pub/visor/pub.swf?file=/ISANZ/P2_Aminoacidos_DVD_PAL_6000
-
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
PRCTICA N 14
DETERMINACIN DE ACIDO URICO
14.1. MARCO TERICO.

La determinacin de cido rico en suero se practica muy comnmente para el
diagnstico de gota. Tambin se encuentran niveles altos de cido rico en leucemia,
policitemia, hiperuricemia idioptica familiar y condiciones asociados con el decremento de
la funcin renal.
El cido rico es una sustancia que forma el hgado cuando ha procesado las purinas,
es decir, compuestos que contienen ciertos alimentos, como carne, pescado, vsceras,
mariscos, frutos secos, embutidos, principalmente. El referido cido no tiene utilidad en el
organismo, por lo cual se desecha a travs de la orina, pero cuando la eliminacin no es
ptima, o si su produccin es muy abundante, se acumula en las articulaciones con
consecuencias.
Hiperuricemia :
Es la concentracin elevada de cido rico en la sangre, que puede depositarse poco

a poco en las articulaciones hasta formar cristales, provocando inflamacin y dolor muy
intenso, en otras palabras, la temible gota. La gota se produce cuando los cristales de urato
mono-sdicos se forman en las articulaciones, en los tendones y en los tejidos circundantes.
La metabolizacin de las purinas da lugar al cido rico, que normalmente se elimina por la
orina.
Es ms probable que se formen cristales ante la presencia de cido rico, pero la
presencia en exceso de ste no implica necesariamente que se padezca de gota. Las purinas
pueden ser generadas por el cuerpo a travs de las clulas de desecho o bien por la ingesta
de alimentos ricos en purinas, como, por ejemplo, el marisco. Los riones son los
responsables de aproximadamente un tercio de la excrecin de cido rico, mientras que el
intestino es responsable del resto. Es posible que defectos hereditarios en el rin sean
responsables de la predisposicin de las personas para el desarrollo de la gota. La gota es
una forma de artritis que afecta principalmente a hombres entre los 40 y 50 aos de edad.
Los altos niveles de cido rico en la sangre son causados por alimentos ricos en protenas.
14.2.
COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Explica los fundamentos para la determinacin de Acido Urico en sangre y

orina.
Procedimentales: Realiza la extraccin de la muestra, prepara muestras y rotula

convenientemente y determina la concentracin de urea en suero.
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007


Beacker 250 ml
Pipeta sereologica 5ml.
Propipeta de jebe
Probeta 1l
Piceta 500ml.
Bao maria memmert
Centrifuga
cido urico (uod pap)

cido urico estandar
Guantes quirurgico
Algodn hidrofilo
Alcohol 70
Agujas y sistema vacuteiner
Tubos vacuteiner sin adiitivo
Ligadura
Puntas amarillas
Puntas azules
14.4. PROCEDIMIENTO
-
Extraer una muestra de sangre sin anticoagulante, esperar a su coagulacin (5min aprox)
y luego centrifugar a 3500 rpm por 5 min. Separar el suero.
Medir el volumen de orina recolectado en 24 horas, anote el resultado.
Tomar una alcuota de la muestra de recoleccin de orina de 24 horas y centrifugar en un

tubo de ensayo 13x100 para trabajar con el sobrenadante.
Precalentar el sobrenadante a 60C por 10 min y diluir la muestra 1/10 con agua
destilada.
14.5. FUNDAMENTO
El cido rico es oxidado por la enzima especfica uricasa generndose
alantona y H2O2, el cual en una reaccin mediada por la enzima POD, reacciona con el Ac.
3-5-Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfnico y 4-AAP (4-aminoantipirina) producindose un
compuesto coloreado con un mximo de absorcin a 520 nm., en cantidad proporcional a la
cantidad de cido rico presente en la muestra.
-
POD: Enzima Peroxidasa
UOD:Enzima Uricasa
14.6 PROCEDIMIENTO
Preparar lo siguiente batera de tubos, realizando blanco, estndar, y la
muestra de orina o suero por duplicado.
-
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
14.7. RESULTADOS
Encuentre la dilucin de la muestra en el procedimiento
Determinar el factor de calibracin
Obtencin de la concentracin de la muestra urinaria.
Clculo de la excrecin de urea en 24 horas. (mg/24h)
14.8.
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
En qu otro(s) fluido(s) biolgico(s) se determina el cido Urico? Cul es su significado?

En qu casos se incrementa la formacin de cido Urico?
Porqu se le conoce como cido rico, si no tiene la funcin acida COOH ?
Expresar los valores de referencia en trminos de mmol/L
Describa brevemente la enfermedad de la gota
Mencione los frmacos que vara los niveles de uricemia (aumenta, disminuye)
-

Mosby; 2011
http://biosalud.saber.ula.ve/db/ssalud/edocs/articulos/Acurico.pdf
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/tutorials/goutspanish/id2191s4.pdf
http://acuricometabolismo.blogspot.com/
http://www.binasss.sa.cr/revistas/rmcc/rmedica/478/art5.pdf
http://cbs.izt.uam.mx/nacameh/v6n1/Nacameh_v6n1_015-024-Valenzuela_etal.pdf
-
PRCTICA N 15
F-CV3-3B-2
Rev. Junio 2007
EXTRACCIN DE ADN.
15.1.
MARCO TERICO.
El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado ADN (y tambin
DNA, del ingls DeoxyriboNucleic Acid), es un cido nucleico que contiene las instrucciones
genticas usadas en el desarrollo y el funcionamiento de todos los organismos vivos
conocidos y algunos virus. El papel principal de las molculas de ADN es el de ser portador y
transmisor entre generaciones de informacin gentica. El ADN a menudo es comparado a un
manual de instrucciones, ya que este contiene las instrucciones para construir otros
componentes de las clulas, como molculas de ARN y protena. Los segmentos de ADN que
llevan esta informacin gentica se llaman genes, pero otras secuencias de ADN tienen
funciones estructurales, o estn implicadas en la regulacin del empleo de esta informacin
gentica. Qumicamente, el ADN es un largo polmero de unidades simples llamadas
nucletidos, con un armazn hecho de azcares y grupos de fosfato unidos alternativamente
entre s mediante enlaces de tipo ster. Conectado a cada azcar est cada uno de los
cuatro tipos de molculas llamadas bases nitrogenadas. La disposicin secuencial de estas
cuatro bases a lo largo de la cadena es la que codifica la informacin. Esta informacin es
leda usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las
protenas. El cdigo es interpretado copiando los tramos de ADN en un cido nucleico
relacionado, el cido ribonucleico (ARN), en un proceso llamado transcripcin. Dentro de las
clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas. Estos cromosomas se
duplican antes de que las clulas se dividan, en un proceso llamado replicacin de ADN. Los
organismos Eukaryota (animales, plantas, y hongos) almacenan la inmensa mayora de su
ADN dentro del ncleo celular y una mnima parte en los orgnulos celulares mitocondrias, y
en los cloroplastos en caso de tenerlos; mientras que en procariticas (las bacterias y
archaeas) se encuentra en el citoplasma de la clula. Las protenas cromticas como las
histonas comprimen y organizan el ADN dentro de los cromosomas. Estas estructuras
compactas dirigen las interacciones entre el ADN y otras protenas, ayudando al control de
las partes del ADN que son transcritas.
15.2.
15.3.
COMPETENCIAS
-
Conceptuales: Define y explica los fundamentos para la extraccin del ADN.
Procedimentales: realiza la ruptura adecuada de la membrana plasmtica de la clula

para liberar el ncleo, libera el ADN y lo extrae.

-Baguetas
-Beacker 250ml.
-Pipeta serolgica 5ml.
-Pipeta serolgica 10ml.
-Probeta 100 ml
-Gradilla de metal 15 x 160
-Propipeta de jebe
-Tubo de ensayo 16x150
-Bao mara memmert
- Vaso de licuadora
-Motor de licuadora
F-CV3-3B-2
-Tabla de picar
-Cuchillo
-Esptula de metal
-Balanza digital
-Embudo de vidrio
-Cloruro de sodio en polvo
-Bicarbonato de sodio
-Solucin de laurilsulfato de sodio
-Alcohol etlico fro
-
Rev. Junio 2007
15.4.
PROCEDIMIENTO
1
En primer lugar cortamos la cebolla en trozos pequeos para poder triturarla con
facilidad en la licuadora.
Pesamos con la balanza 3 gramos de NaCl y 5 gramos de bicarbonato sdico. Depositamos

todo en el vaso de licuadora que contiene a la cebolla, agregamos 100 ml de agua
destilada y lo batimos todo.
Luego de batirlo en la licuadora, filtramos el contenido con una gasa contenida en un

embudo.
Agregamos 10mL de Laurilsulfato (1/6 del volumen de la mezcla), homogenizamos y

dejamos reposar 10 min a temperatura ambiente.
Agregamos 10 mL de Jugo de Pia (previamente filtrado con gasa) y homogenizamos

formar espuma, luego incubamos 15 min a 37C.
La mezcla obtenida se reparte equitativamente en 3 tubos de ensayo de 16x150.
Agregamos por las paredes (en zona) 3 mL de Alcohol Etlico fro a cada tubo y dejamos
reposar 5 min a temperatura ambiente.
Luego verificamos la aparicin del ADN en la interfase y lo extraemos con una bagueta y
observamos.
15.5.
RESULTADOS
Romper la membrana plasmtica de la clula eucariota para poder acceder al ncleo de
la clula
Liberar al ADN
Extraer el ADN de la cebolla
15.6.
CUESTIONARIO
Qu sucede en cada paso de la extraccin de ADN?
Qu utilidad tiene el Laurilsulfato?
Cul es la finalidad de utilizar el jugo de la pia?
Por qu se utiliza alcohol etlico fro?

-
Mosby; 2011
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/39%20AISLAMIENTO%20Y
%20PURIFICACI%C3%93N%20DEL%20DNA%20DE%20UN%20PL%C3%81SMIDO
%20RECOMBINANTE.pdf
http://ibcmunq.files.wordpress.com/2010/03/tp4.pdf
http://www.mdp.edu.ar/agrarias/grado/741_Intr_Biotecnologia/archivos/4_TPN1_Extra
ccion_ADN_Vegetal.pdf
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/42%20AISLAMIENTO%20VISUALIZACI
%C3%93N%20ACIDOS%20NUCLEICOS.pdf

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