MODELO DE CARTULA PARA PRESENTACIN

DE INFORME DE LABORATORIO
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD de MEDICINA
Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica

CURSO

: UROANALISIS Y FLUIDOS CORPORALES LABORATORIO

HORARIO de PRCTICAS:
DA: Lunes

HORA: 4:00 5:00 pm

FECHA de EJECUCIN de la PRCTICA

: 13-06-16

FECHA de ENTREGA de INFORME DE PRCTICA

: 20-06-16

INFORME DE PRCTICA
PRCTICA N: 11
TTULO DE LA PRCTICA:
Pruebas qumicas cualitativas para descarte de porfirias en orina: la prueba de Watson
Schwartz y test de Hoesch
ALUMNO(a) RESPONSABLE del INFORME:
INTEGRANTES :

Alvarado Tena, Karolayn Medaly

Bonifacio Mundaca , Jenny
Castaeda Toribio, Katherine
Hernandez Mesas , Sofa
Mayanga Badajos , Melody
Reynoso Francia , Javier
Ortega Ruiz Rossmery
LIMA - PER
2016

PRUEBAS QUMICAS CUALITATIVAS PARA DESCARTE DE PORFIRIAS EN ORINA:

LA PRUEBA DE WATSON SCHWARTZ Y TEST DE HOESCH

I - OBJETIVOS:

- Conocer los mtodos para la determinacin de los metabolitos de las drogas de

abuso: Cocana y marihuana
- Conocer y ejecutar las pruebas qumicas cualitativas que se usan para el descarte de
porfirias en orina: la prueba de Watson Schwartz y test de Hoesch.
II- INTRODUCCIN:
El diagnostico de Porfirias en nuestro pas es de muy poca difusin debido a que muchas veces
estas enfermedades no son diagnosticas de forma correcta o no son muchos los especialistas que
se han especializado en esta rama. Por lo que la probabilidad de encontrar un Reactivo de Ehrlich
que contribuye con la identificacin de Porfirias en un centro de salud es mnima. Otro punto
importante es saber cmo diagnosticar los precursores del ciclo de Hem o porfirinas que podemos
encontrar en dichas Porfirias, se conoce tres niveles de estudio: El primero es dosar en muestra
biolgicas dichos precursores, segundo medir la actividad enzimtica de la enzima afectada y
tercero realizar un anlisis gentico por biologa molecular para identificar el gen especifico. Es
importante discernir acerca del momento donde ocurre la alteracin para que as podamos brindar
un tratamiento adecuado.
Las pruebas de laboratorio usadas para dosar drogas recae mayoritariamente en la habilidad para
detectar o medir una variedad de sustancias psicoactivas y sus metabolitos en los fluidos o tejidos
(indicadores biolgicos). La interpretacin de los hallazgos biolgicos requiere adems del uso de
datos contextuales, incluyendo la historia de ingestin. El uso de pruebas de laboratorio se lleva a
cabo principalmente para actuar como ayuda de una valoracin ms extensa y de un
procedimiento diagnstico. La ms usada es la Inmunocromatografa debido a que es una tcnica
no invasiva y no incomoda al paciente. Adems se deben de seguir ciertas reglas ms estrictas a
la hora de tomar muestras debido a que muchas veces al dosar drogas en orina lleva una
implicancia legal por lo que se debe tener una mayor consideracion. Con los ltimos avances en
las tcnicas para dosar metabolitos de las drogas se recomienda como glod estndar la pruebas
que puedan tener un seguimiento con Espectrometra de Masas.

III- RESULTADOS

DIAGNSTICO DE PORFIRIAS
Tubo 1 Extraccin con
cloroformo
Orina capa superior
Cloroformo capa inferior

Urobilingeno
Incoloro
Rojo

Otros Rvos.
Erhlich
Rojo
Incoloro

Porfobilingeno
Rojo
Incoloro

Tubo 2 Extraccin con

Urobilingeno
Otros Rvos.
Porfobilingeno
Butanol
Erhlich
Orina capa superior
Rojo
Rojo
Incoloro
Capa inferior
Incoloro
Incoloro
Rojo
Segn lo encontrado se reporta como Watson Schwartz positivo o negativo.

DOSAJE DE DROGAS EN ORINA

IV -DISCUSIN DE RESULTADOS:
Los resultados apreciados en la prctica no se presentaron de la manera clsica puede ser debido
a que la muestra estuvo mucho tiempo almacenada de la manera inadecuada o que el transporte
que tuvo desde el hospital no fue el adecuado por lo que se vio que no arrojo los resultados
esperados, por lo que no podramos decir si estamos frente a una muestra positiva o negativa para
distinguir una porfiria por urobilinogeno o porfobilingeno. Aunque en uno de los tubos que fue el
que tena cloroformo se vio que se form de un color medio morado cuando lo clsico es rojo por lo
que tambin podramos decir que hubo una falla en el reactivo adems con esto podramos decir
que se trata de urobilinogeno pero no estamos del todo seguros.
En la prueba para dosar cocana en drogas si bien hubieron muestra y una tcnica turbidim etrica
no lo pudimos apreciar debido a la carencia de un espectrofotmetro en el laboratorio por lo que
tampoco podemos decir si haba o no el metabolito de la droga ya que a simple vista no se podan
ver los complejos formados. Otra carencia es que no pudimos ver este tipo de pruebas debido a
que normalmente se usa la tcnica de inmunocromatografa la cual tampoco estaba disponible en
el laboratorio.
V-CONCLUSIONES:

En la prctica al hacer la parte de turbidimetrica necesitamos el equipo para leerlo ya que a

simple vista no se puede determinar.
Una forma rpida de determinar seria mediante el test de Hoesch ya que solo hacemos uso del
reactivo de Ehrlich que es econmico y por lo tanto debe tenerlo en el laboratorio.
La prueba de Watson-Schwartz aunque no se obtuvieron los resultados esperados que puede
deberse al tiempo que tuvo la muestra hasta su evaluacin o a los reactivos, con esto se logra
diferenciar entre urobilinogeno y porfobilinogeno para hacer un diagnstico ms seguro y
confiable.

VI- RECOMENDACIONES

Utilizar todos los implementos para la bioseguridad.

Tener todos los materiales que sean necesarios en la prctica
Que la muestra de orina se encuentre en un lugar adecuado y bien conservada
Es importante dar la informacin correcta para la toma de muestra.
Tener en cuenta el tiempo trascurrido desde el consumo para la recoleccin de la muestra para
cocana y marihuana.
Vigilar que sea la muestra de la persona.

VII- BIBLIOGRAFA:
GUA DE ASISTENCIA A PERSONAS AFECTADAS POR PORFIRIAS EN EL SSPA PLAN DE
ATENCIN A PERSONAS AFECTADAS POR ENFERMEDADES RARAS DE ANDALUCA (2011)
Gonzales-Meneses Lpez Antonio.
V A MELITO, M. V. (2006). PORFIRIAS POCO FRECUENTES, CASOS DETECTADOS EN LA
POBLACIN ARGENTINA. Rev Argent Dermatol, 87, 248-263

VIII -ANEXO:

1.-INVESTIGAR QUE MTODOS DE LABORATORIO EXISTEN PARA LA DETERMINACIN DE

COCANA Y MARIHUANA. EXPLIQUE EL FUNDAMENTO. HACER CUADRO COMPARATIVO.
ELISA

Cromatografa de gases - Espectrometra de

masas (GC-MS)

Se basa en el uso de antgenos o anticuerpos

marcados con una enzima, de forma que los
conjugados resultantes tengan actividad
tanto inmunolgica como enzimtica. Al
estar uno de los componentes (metabolitos
de cocana o marihuana) marcado con una
enzima e insolubilizado sobre un soporte la
reaccin
antgeno-anticuerpo
quedar
inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente
revelada mediante la adicin de un substrato
especfico que al actuar la enzima producir
un color observable a simple vista o
cuantificable mediante el uso de un
espectrofotmetro o un colormetro.
- Test de screening: positivo o negativo.
- Sensibles
- Rpidos
- Econmicos

En GC la muestra se inyecta en la fase mvil, en esta fase,

los distintos componentes de la muestra pasan a travs de
la fase estacionaria que se encuentra fijada en una
columna. La velocidad de migracin de cada componente
(y en consecuencia su tiempo de retencin en la columna)
ser funcin de su distribucin entre la fase mvil y la fase
estacionaria. Cada soluto presente en la muestra tiene una
diferente afinidad hacia la fase estacionaria, lo que permite
su separacin.
En la MS los analitos son transformados en iones cargados
o fragmentos los cuales son subsecuentemente separados
de acuerdo a su radio masa /carga y sus abundancias son
medidas. Puede identificar de manera casi inequvoca
cualquier sustancia pura, pero normalmente no es capaz
de identificar los componentes individuales de una mezcla
sin separar previamente sus componentes, debido a la
extrema complejidad del espectro obtenido por
superposicin de los espectros particulares de cada
componente. Por lo tanto, la asociacin de las dos tcnicas,
GC y MS da lugar a una tcnica combinada GC-MS que
permite la separacin e identificacin de mezclas
complejas.
- Prueba confirmatoria.
- Identifica sustancias
- Gran sensibilidad

2.-HASTA CUANTOS DAS DESPUS DE HABER CONSUMIDO COCANA Y MARIHUANA SE

PUEDE HALLAR SUS METABOLITOS EN LA ORINA.

Cocana
Marihuana
Opiceos

Desde x del consumo

Hasta

Despus de 3-9 Horas

Despus de 3-9 Horas
Despus de 3-9 Horas

1 a 3 das
3 a 5 das
1 a 3 das

3.-QUE OTRAS PRUEBAS DE LABORATORIO SE UTILIZAN PARA EL DIAGNSTICO DE LAS

PORFIRIAS?. EXPLIQUE LAS DIFERENCIAS QUE EXISTEN ENTRE ELLAS.
DIAGNSTICO DE LAS PORFIRIAS EN EL LABORATORIO
Como toda enfermedad de origen gentico, su DIAGNSTICO debe abordarse desde el punto de vista
bioqumicomolecular, EN TRES NIVELES DIFERENTES que deben realizarse de modo secuencial.
PRIMER NIVEL

SEGUNDO NIVEL

TERCER NIVEL

Evidenciar la presencia de
los precursores y/o
porfirinas en diferentes
muestras biolgicas: orina,
sangre y heces.

Cuantificar la actividad enzimtica

especfica responsable del mismo.

Analizar el gen que

codifica la enzima alterada
mediante el empleo de
tcnicas moleculares que
precisan el aislamiento
previo del ADN.

ESTUDIO
BIOQUIMICO
1. ORINA
Test de Hoesch:
Determinacin de Acido
delta aminolevulnico.
Determinacin de
Porfobilingeno (PBG).
Determinacin de
porfirinas totales.
Cuantificacin de las
diferentes porfirinas e
ismeros por HPLC.
2. SANGRE
Test del barrido
espectrofluorimtrico.
Determinacin de
porfirinas totales.
Cuantificacin de las
diferentes porfirinas e
ismeros por HPLC.
Determinacin de
Protoporfirina en
eritrocitos
3. HECES
Determinacin de
porfirinas totales.
Cuantificacin de las
diferentes porfirinas e
ismeros por HPLC.

ESTUDIO ENZIMATICO

Actividad ALAdeshidratasa.
Actividad PBGdesaminasa
Actividad UROsintetasa

ESTUDIO MOLECULAR
HMBSgene (Hidroximetilbilano
sintetasa/PBGdeaminasa).
UroSgene (Uroporfiringeno
sintetasa).
UroDgene (Uroporfiringeno
decarboxilasa).
CPOXgene (Coproporfiringeno
oxidasa).
PPOXgene (Protoporfiringeno
oxidasa).
FECHgene (Ferroquelatasa).

Para la determinacin de las

actividades enzimticas, y con
objeto de conocer los detalles
sobre la muestra requerida y el
envo de la misma, que siempre
deber ser refrigerado y nunca
congelado

El estudio molecular requiere el

empleo de tcnicas de aislamiento
de DNA genmico en sangre
perifrica, seguido de la realizacin
de una reaccin en cadena de
polimerasa (PCR) para
amplificacin del propio DNA y
posterior secuenciacin del gen de
que se trate.

Se requiere la extraccin de una

muestra de sangre total (5 a 10
cc) recogida con EDTA o
heparina como anticoagulante,
o bien la toma de una biopsia
de piel para la realizacin de un
cultivo de fibroblastos.

Este tipo de tcnicas se realiza en

laboratorios especializados
requirindose previamente la
identificacin de las mutaciones
familiares con el conocimiento de
algn miembro afectado
inequvocamente.

4.-BUSCAR Y ANALIZAR UN ARTCULO DE INVESTIGACIN SOBRE CASOS DE PORFIRIAS EN

EL PER Y LATINOAMRICA.
Ttulo: PORFIRIAS POCO FRECUENTES. CASOS DETECTADOS EN LA POBLACIN
ARGENTINA
Objetivos: En el presente trabajo se presentan 37 casos de porfirias poco frecuentes que han sido
diagnosticados en el Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias (CIPYP). Para cada uno se
describen las caractersticas clnicas y bioqumicas que permitieron llegar al diagnstico preciso, as como
tambin los diferentes tratamientos aplicados y su evolucin. La descripcin de estos casos poco frecuentes,
sus tratamientos y evolucin, facilitaran tanto el diagnstico diferencial de la porfiria como el conocimiento de
las posibilidades teraputicas en cada caso. Asimismo para las porfirias heterocigotas con manifestacin
infantil, su identificacin temprana y tratamiento asegurara una mejor evolucin minimizando los riesgos
asociados.
Mtodos: Para el diagnstico de la porfiria se realizaron las determinaciones en muestras de orina de 24
horas, materia fecal, glbulos rojos, sangre y plasma segn la metodologa descrita por Batlle. Las porfirinas
plasmticas (IPP) se determinaron fluoromtricamente y las porfirinas en orina (PTO), en eritrocitos (PTS) y
en materia fecal (PTMF) se midieron espectrofotomtricamente luego de su extraccin por cromatografa de
intercambio inico en orina y por solventes orgnicos en los otros dos casos. El patrn de excrecin de
porfirinas se obtuvo por cromatografa en capa delgada y/o cromatografa lquida de alta presin (HPLC). Los
precursores urinarios se cuantificaron por espectrofotometra luego de su extraccin por cromatografa de
intercambio inico.
Conclusiones: La prevalencia de las porfirias vara desde 0,5 a 10 por 100.000 habitantes en diferentes
poblaciones. Dentro de las porfirias cutneas, la PCT es la porfiria ms frecuente en la Argentina (1:37.000) y
en segundo lugar se encuentra la PPE con una prevalencia de 1:1.000.000. Las porfirias hereditarias que se
manifiestan desde la niez son la PCE, la PPE y la PHE; sin embargo para la PCE pueden encontrarse casos
de manifestacin en la edad adulta. Por otro lado para la PCT, la PV, la PAI, y la CPH cuya manifestacin
ocurre generalmente en edad adulta, tambin se encuentran descritos casos infantiles. Estos casos
corresponden a individuos portadores de la falla gentica expuestos a factores desencadenantes exgenos o
tambin a variantes homocigotas, como se ha descrito para la PAI, la PV y la PPE. En este trabajo se
describen 37 casos de porfirias poco frecuentes entre los que se encuentran los casos infantiles de porfirias
heterocigotas que incluyen los 25 casos de PCT, un caso de PAI, 2 casos de PV y uno de CPH. En todos
ellos los pacientes estuvieron en contacto con drogas porfirinognicas de diferente etiologa que precipitaron
el cuadro de porfiria. Los otros casos corresponden a porfirias homocigotas tpicas como los 5 casos de PCE
y el de PHE. Se describen adems 2 casos severos de PPE.