Identificacin de anticuerpos

antieritrocitarios

QFB. Ma. del Carmen Santamara Hernndez

Dr. Hctor A. Baptista Gonzlez
Dra en CQB. Fany Rosenfeld Mann

Anticuerpos antieritrocitarios

 Se producen en respuesta ante un

estmulo
antignico
eritrocitario.
Transfusin, embarazo, transplante.

 Eventualmente

por

enfermedades

autoinmunes,
medicamentos,
infecciones, malignidad.
Algunas ocasiones se desconoce el
evento desencadenante inmunizante.

Anticuerpos antieritrocitarios

Clasificacin
1. Especie
5. Actividad trmica
Heteroanticuerpos
Aloanticuerpos Fros
Autoanticuerpos Calientes
Amplio espectro
2. Naturaleza
Naturales 6. Medio de reaccin
Inmunes Salino Completos
Proteico Incompletos
3. Frecuencia
Enzimtico
Regulares Otros potenciadores
Irregulares
7. Mollison
4. Isotipo
IgM Hemolticos

 IgG Aglutininas fras

IgA Aglutininas calientes

Rastreo de anticuerpos
irregulares antieritrocitarios
Finalidad

En pacientes con necesidades transfusionales, para la

deteccin previa de anticuerpos.

En embarazadas RhD negativo o con sospecha de

aloinmunizacin, detectar los anticuerpos que puedan

causar EHRN.
En donantes, para prevenir su
transferencia
al
receptor.
Para aclarar discrepancias en el ABO y Rh y en pruebas
cruzadas incompatibles.
En el estudio de reacciones hemolticas
postransfusionales.
En el estudio de anemias hemolticas autoinmunes.

Tcnica salina
QFB. Jose Luis Alcarz Lpez
Tcnica: Suero en estudio y eritrocitos de panel a
concentracin: 3-5% en Solucin salina isotnica estril o
Alsever.

 AHAI: Sr, S22, S37, SCoombs.

Reaccion transfusional: Sr, S37, SCoombs.
Despus de cada incubacin investigar hemlisis en el
sobrenadante.
Con esta tcnica se puede diferenciar muy bien los anticuerpos
fros de los calientes; de los que fijan complemento y de los que
no lo fijan.

Tcnica hiperprotica
QFB. Jose Luis Alcarz Lpez
Albmina 22% 30% (gramos %)

 Tcnica: Suero + eritrocitos + albmina para una

concentracin de protenas mayor a 10 %
Ar, A37, ACoombs (4 lavados previos)

 Detecta bien anticuerpos del sistema Rh y Kell antes de

llegar a fase Coombs.

Potencia aglutinaciones en anticuerpos con baja
concentracin

Tcnica hiperprotica
QFB. Jose Luis Alcarz Lpez

Potencia la aglutinacin de anticuerpos fros

hacindoles aparecer a 37oC.

 Fija complemento en presencia de anticuerpos.

fros sin importancia clnica.

Aglutina las clulas en sueros de pacientes con
Mieloma Mltiple y en otros padecimientos:
Complejos inmunes relacionados)

Tcnica con enzimas

QFB. Jose Luis Alcarz Lpez

Destruye antgenos de sistemas MNS, Duffy, Ge2.

Fija mucho complemento inespecficamente.

 Debe tener un control muy estricto porque destruye

con facilidad los eritrocitos.

Tcnica en LISS
QFB. Jose Luis Alcarz Lpez

 Tcnica: Suero en estudio + eritrocitos resuspendidos

en L.I.S.S.+ 2 gotas, Incubar a 37o, lavar 3 veces

agregar suero de Coombs (de preferencia IgG
monoespecfico).

Tcnica muy rpida.

Detecta casi todos los anticuerpos inmunes clase IgG.
Alta sensibilidad.

Tcnica con LISS

QFB. Jose Luis Alcarz Lpez

No detecta IgM.

 Fija mucho complemento inespecficamente.

 Al usar solo IgG monoespecfica se corre el riesgo

de
no
detectar
anticuerpos
peligrosos
dependientes de complemento: Duffy, Kidd
Lewis.

Columnas en gel

QFB. Jose Luis Alcarz Lpez Por

intercambio de cargas: Fuera de mercado

Por gradiente de densidad:

Utilizan LISS como fase lquida.
Tcnica rpida, especfica, alta sensibilidad.
No detecta IgM ni complemento por estar
precargada con el reactivo de Coombs anti-IgG.

Microcolumnas de Cephadex
QFB. Jose Luis Alcarz Lpez

 Cargadas con
monoespecfico.

reactivo

de

Coombs

Con antisueros para Sistema AB0 y RhD.

Columnas neutras.

Panel de clulas
Conjunto de eritrocitos de grupo O con fenotipos
conocidos de diferentes grupos sanguneos, que
se emplean en la identificacin de anticuerpos
irregulares antieritrocitarios.

Panel de clulas

Semipanel: Grupo de clulas de fenotipo conocido que

contiene menor cantidad de clulas que nos permiten la
identificacin del anticuerpo, pero no la especificidad.

Panel completo: Grupo de clulas de fenotipo

conocido que contiene el nmero de antgenos

eritrocitarios necesarios para obtener una aproximacin
estadstica de p 0.05, que nos permite conocer la

especificidad del anticuerpo.

Panel dirigido: Contiene clulas con fenotipo
conocido elegidas para aumentar la probabilidad y
definir la especificidad.

Clculo de la probabilidad
Frmula

p = A+B C+D A+C B+D /T A B C

D
Ag +

Ag -

Ac +

Tabla de 2X2
Ac -

VP
A

FP
B

A+B

FN
C

VN
D

C+D

A+C

B+D

A+B+C+D=T

Clculo de la probabilidad

A+B = Nmero total de clulas con aglutinacin.

C+D = Nmero total de clulas sin aglutinacin.
A+C= Nmero total de clulas con el antgeno.
B+D= Nmero total de clulas sin el antgeno.
A+B+C+D = T = Nmero total de clulas evaluadas.

 A = Clula positiva y anticuerpo positivo.

 B = Clula negativa y anticuerpo positivo. C =

Clula positiva y anticuerpo negativo.

D = Clula negativa y anticuerpo negativo.

Caso clnico

Mujer de 37 aos con dos embarazos, el

primero con una muerte intrauterina de 32

semanas de gestacin y el segundo es el
actual con de 22 semanas. Hace 15 aos fue
transfundida
con
3
concentrados
eritrocitarios. La paciente es grupo
sanguneo A1 RhD Positivo. Se solicita un
rastreo de anticuerpos irregulares.

Caso

Anti-N

Antgeno Presente

Antgeno Ausente

Anticuerpo
Positivo

A+B

Anticuerpo
Negativo

C+D

10

8
Anti-Fya

A+C

Antgeno Presente

B+D

Antgeno Ausente

Anticuerpo
Positivo

A+B

Anticuerpo
Negativo

C+D

10

A+C

B+D

Calculo de la probabilidad

Probabilidad

Para Anti-N p = 8 2

8 2 / 10 8 0 0 2 p
= 0.022 significativo
Para Anti-Fya p =
5 5 5 5 /
10 5 0 0 5 p = 0.003
significativo

Limitaciones del mtodo

 El tipo de panel de clulas utilizadas limitado al

tipo de antgenos eritrocitarios presentes.

La habilidad del operador para leer e interpretar
aglutinaciones.
A los antgenos sanguneos privados presentes
en algunos pacientes o disponentes.

Discrepancias entre RAI y las

pruebas cruzadas
RAI positivo y PC negativas
Una o ms de las clulas del panel expresan

antgenos de moderada a baja frecuencia (K,

Lua, Cob,Ytb) que las unidades cruzadas no

los poseen.
Una o ms de las clulas del panel expresan
doble dosis del antgeno (Jka+b-, M-N+) que
las unidades cruzadas no las tienen.

Discrepancias entre RAI y las

pruebas cruzadas
RAI positivo y una o ms PC positivas
Las clulas del panel son del grupo O, no se detectan los
anticuerpos naturales regulares.
Las clulas del panel no poseen antgenos de baja a moderada
frecuencia (Wra,Kpa, Jsa,
Cw, Dia,Goa,SC2,Mia,Lua,
Cob,Ytb)que una o ms de las unidades cruzadas los expresan.
Las clulas del panel no poseen antgenos complejos que las
unidades cruzadas si los expresan.
Los anticuerpos del receptor pueden reaccionar de dbil a negativo
con eritrocitos frescos, aunque los eritrocitos del panel posean el
antgeno involucrado (Xga+).
Las clulas del panel no expresan el antgeno de manera
homocigota, el cual si lo tiene una o ms unidades cruzadas.