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determin con la frmula: %Adhesin= (DO 590nm bacterias formadoras de biofilm/ DO 590nm bacterias
planctnicas)x 100.11
Produccin de Biofilm. Los aislamientos se sembraron en 50 ml de medio TSC hasta fase estacionaria
de crecimiento y luego se diluyeron hasta alcanzar una DO (590 nm) 0,2. Se coloc 1 ml de cada uno de los
cultivos en tubos eppendorf estriles, y se incub sin agitacin durante 7 das a 28C en cmara
hmeda. Luego de la incubacin, se aspir con pipeta automtica el medio de cultivo conteniendo las
bacterias planctnicas. Los pocillos se lavaron dos veces con 500 l de NaCl 0,9 % (p/v). Despus del
lavado, se agreg 1,2 ml de cristal violeta 0,1% (p/v) en cada tubo, y la placa se incub durante 15
minutos a temperatura ambiente en oscuridad. Se aspir el exceso de colorante de cada tubo, y se lav
con 1 ml de NaCl 0,1% (p/v) tres veces. Los tubos se dejaron secar durante 2 minutos, y se agregaron
250 l de EtOH absoluto por tubo para extraer el colorante adherido a las bacterias formadoras de
biofilm. Finalmente, la produccin de biofilm se cuantific por determinacin de absorbancia medida
a 590 nm.12
Todos los ensayos fueron realizados utilizando un diseo totalmente al azar con tres repeticiones. Los
resultados se analizaron con ANOVA y prueba LSD de Fisher con un nivel de significacin del 5%.
Resultados y discusin. En cuanto a la solubilizacin de fosfatos en medio slido, existieron
diferencias significativas entre los tres aislamientos, destacndose J 1 con una ESP de 341, valor que
concuerda con el obtenido para la misma cepa por el autor de referencia 8. En medio lquido la
concentracin inicial de P fue de 1250 mgL -1. La concentracin de P soluble en el medio se mantuvo
entre 85,2 mg.L-1 y 405,3 mgL-1, dependiendo del aislamiento. La mayor solubilizacin fue medida
para J1: 405,3 mgL-1, seguido de J3: 166,3 mgL -1 y J2: 85,2 mgL -1. Estos valores se encuentran en el
orden de los obtenidos por otros autores9 con excepcin de J1 cuyo valor duplica al obtenido para otras
cepas en dicha investigacin. En cuanto al porcentaje de adherencia no se observaron diferencias
significativas, con valores de 28,57% (J 1), 37,44% (J2) 35,47% (J3), bastante alejados de los valores
estndares ptimos6. Las tres cepas evaluadas fueron capaces de formar biofilm y los resultados avalan
los obtenidos por otros autores11; existieron diferencias significativas entre los tres aislamientos siendo
J2 el de mayor produccin.
Conclusiones. En base a los resultados obtenidos, se concluye que los tres aislamientos estudiados
presentaron capacidad para solubilizar fosfatos en condiciones in vitro, tanto en medio slido como en
medio lquido, destacndose Pseudomonas fluorescens (J1). Asimismo, los tres aislamientos
presentaron capacidad para formar biofilm con un mejor comportamiento por parte de Pseudomonas
chlororaphis (J2). Estos mecanismos ponen en evidencia la potencialidad de las cepas bacterianas
estudiadas como promotoras del crecimiento vegetal en cultivos de inters agrcola. Sin embargo se
requiere estudiar estrategias para incrementar la capacidad de adherencia de estas rizobacterias a los
fines de favorecer la interaccin planta-microorganismo.
Bibliografia