INTRODUCCIN:

Todos los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los
mantienen vivos. A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y
consiste de un gran nmero de reacciones qumicas destinadas a transformar las
molculas nutritivas en elementos que posteriormente sern utilizados para la
sntesis de los componentes estructurales; como pueden ser las protenas. Otra
parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la energa que
est contenida en una reaccin qumica en algn proceso que requiera de energa,
como puede ser el trabajo o el movimiento. El metabolismo se produce por
secuencias de reacciones catalizadas enzimticamente y se divide en anabolismo y
catabolismo. El proceso por el cual la clula bacteriana sintetiza sus propios
componentes se conoce como anabolismo y resulta en la produccin de nuevo
material celular; tambin se denomina biosntesis. La biosntesis es un proceso que
requiere energa, por lo tanto las bacterias deben ser capaces de obtenerla de su
entorno para crecer y, eventualmente, multiplicarse. El conjunto de reacciones
degradativas de los nutrientes para obtener energa o para convertirlos en unidades
precursoras de la biosntesis, se conoce como catabolismo. As, hemos visto dos
tipos de transformaciones qumicas que ocurren simultneamente en la bacteria,
por lo tanto el metabolismo es el resultado colectivo de ambas reacciones.

OBJETIVOS

Conocer el metabolismo de las bacterias, as como otras actividades

bioqumicas, que servirn de criterio para clasificarlas e identificarlas.

Poner en evidencia la capacidad de algunas bacterias de producir enzimas

hidrolticas para la utilizacin de almidn, protenas y lpidos.

Poner en evidencia la capacidad de las bacterias de utilizar azcares y

aminocidos y relacionarla con el metabolismo.

MATERIALES
Medios de cultivo en placas:

Agar almidn

Agar gelatina

Agar leche

Agar grasa

Gelatina nutritiva en tubo

Cultivos de 24 horas en cuas de agar:

Bacillus

E. coli

Staphylococcus

Salmonella

Aguja de Klle

Medios de cultivo:

Agar Kligler (dispuesto en semicuas)

Agar citrato de Simmons (en cuas amplias)
Agar fenilalanina (en cuas amplias)
Agua triptonada (triptona 1%, NaCl 0.5%)

Reactivos de revelado:

Para la produccin de amilasa: Lugol

Para produccin de lipasa: Sulfato de cobre 1%
Para fenilpirvico: solucin de Cloruro frrico
Para indol: reactivo de Kovacs
Para degradacin de gelatina: Solucin de bicloruro de mercurio HgCl 2

lascon
cepas
en cadamarcador.
lado de las placas con una estra de aproximadame
de cada placa en dosSembrar
secciones
un plumn

AGAR ALMIDN

PROCEDIMIENTO: AGAR LECHE

1

ENZIMAS HIDROLTICAS

Incubar las placas a 37C por 48 horas.

AGAR GRASA

AGAR GELATINA

E.Coli
Staphylococcus
Bacillus
S. Enteritis

cada tubo con agar, sembrar las sepas con ayuda de la Asa de kolle.
2 UTILIZZACIN DE CARBOHIDRATOS

Agar
Fenilalanina
Agar Citrato de Simmons
Agar
Incubar los tubos inoculados a 37C por 24-48 h.
Kligler
Agua
Triptonada

RESULTADOS:
1 ENZIMAS HIDROLTICAS
a Hidrlisis de almidn

Las zonas no coloreadas de azul alrededor de las colonias indican

hidrlisis de almidn (produccin de amilasa).

b Hidrlisis de lpidos

La aparicin de un color verde azulado sobre y alrededor de las

colonias indica hidrlisis de la grasa (produccin de lipasa)- Se pudo
observar en bacillus, staphylococus, E.coli y salmonella.

Hidrlisis de casena

Las zonas claras alrededor

de

las

colonias

indican

hidrlisis de la casena de la
leche.

Se pudo observar en bacillus,

staphylococus,

E.coli

salmonella.
d Hidrlisis de gelatina (placas)

Al agregar una solucin de HgCl 2 sobre la superficie del agar gelatina,

se observ la presencia de zonas claras alrededor de las colonias que
indican la hidrlisis de gelatina. La gelatina no hidrolizada precipita
tornando

opaco

el

medio.(

Se

staphylococus, E.coli y salmonella).

pudo

observar

en

bacillus,

e Hidrlisis de gelatina (tubos)

La falta de solidificacin del medio indica hidrlisis de la gelatina.

2 UTILIZACIN DE CARBOHIDRATOS Y PROTEINAS

A Agar Kligler:
Staphylococus
No
fermentacin,

Salmonella

E.Coli

Bacillus

hay Existe fermentacin de Existe fermentacin Existe

glucosa por la presencia de

glucosa fermentacin

formacin de H2S de color amarillo en la (presencia de color glucosa

(color negro en la parte profunda de la semi amarillo en la parte presencia
parte profunda de cua y la presencia de profunda
la semicua.

lactosa(color rojo bajo en semicua

de

por

de
la
de

la color amarillo en
con la parte profunda

la cua- se puede decir formacin de gas de la semi cua y

que existe pero en menor rotura del medio) y la presencia de
cantidad)

presencia
lactosa(color

de lactosa(color rojo
rojo intenso

intenso en la cua).

B Agar Citrato de Simmon:

cua-)

en la

E.Coli

Staphylococus

Bacillus

Salmonella

Existe evidencia de Existe evidencia de No existe evidencia No existe evidencia

la

capacidad

del la

capacidad

del de la capacidad del de la capacidad del

citrato como nica citrato como nica citrato, por tanto no citrato-no

hay

fuente de carbono; fuente de carbono; hay

del

cambio

de crecimiento

por crecimiento y por crecimiento y color

microorganismo,

cambio de color del cambio de color del

por tanto no hay

medio

cambio de color.

azul medio

intenso.

C Agar fenilalanina:

intenso.

azul

No se pudo observar la descarboxilacion del aminocido a cido fenilpiruvico por

que no se observ el color verde-azulado cuando agregamos unas gotas de
solucin de cloruro frrico.

D Agua triptonada:
Pero agregamos del reactivo de Kovacs que estaba vencido por tanto no hay
presencia de la formacin del indol y tampoco aparece en la superficie un anillo
color rojo grosella. Solo se puede distinguir un pequeo anillo casi amarillento.

Cuestionario:

1 Mencione qu enzimas microbianas seran tiles en la elaboracin de jugos

de frutas.
Naringinasa:Es una enzima comercial producida por Aspergillus niger que
se emplea en el tratamiento de zumos de pomelo para eliminar el sabor
amargo asociado a la presencia de naringina.
Pectinasas:Las pectinasas son un complejo de enzimas que degradan la
pectina y que se clasifican en funcin de varios factores, como el sustrato
(pectina o cido pctico), el tipo de reaccin (hidrlisis o transeliminacin) y
el mecanismo (intracelular o extracelular). Normalmente se producen a partir
de Aspergillus niger, ya que este microorganismo produce una gran variedad
de estas enzimas. Las pectinasas se emplean para la extraccin y
clarificacin de jugos de fruta.
2 Mencione cmo funcionan las lipasas, tienen alguna utilidad industrial?
Las lipasas son una clase general de enzimas que descomponen las
molculas de grasa. Las grasas, tambin llamadas lpidos, existen en
muchas formas; diferentes tipos de grasas requieren diferentes lipasas para
degradarlos. Tu cuerpo utiliza lipasas para digerir las grasas y tambin
depende de las lipasas para ayudar a mover el colesterol en el cuerpo.
Las lipasas, al igual que todas las enzimas, ayudan a regular las
reacciones

qumicas.

Muchas de las reacciones qumicas que tus

clulas y los sistemas realizan podran ocurrir por su propia cuenta, pero se
produciran muy lentamente. Las enzimas como las lipasas ayudan a que
estas reacciones tengan lugar en escalas ms rpidas y ms eficientes en
tiempo.Adems, lipasas tienen importantes aplicaciones en la industria
alimentaria, como la produccin de grasas con propiedades fsicas y
qumicas deseables, adems de contener una baja proporcin de grasas
trans en el producto final, a diferencia de los procesos de hidrogenacin y
transesterificacin qumica.Las lipasas se han utilizado para la produccin

de determinados sabores en quesos y otros alimentos por la produccin de

cidos grasos voltiles.
Estos aceites disminuyen el incremento de triglicridos en la sangre,
permitiendo as, prevenir la acumulacin de grasas y altos niveles de
colesterol en la sangre.
3 Explique por qu se utiliza sulfato de cobre para evaluar la accin hidroltica
de lpidos.
Porque este compuesto este compuesto que forma cristales azules hace
posible la aparicin de un color verde azulado sobre y alrededor de las
colonias como una reaccin que evidenciando la hidrlisis de la grasa por
ende que hay

produccin de lo que vendra a ser las lipasas. De esta

manera se puede evaluar la accin hidrolitica de los lpidos por medio de las
lipasas.
4 Explique detalladamente la importancia del medio de Citrato de Simmons.
Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces
de crecer con citrato como nica fuente de carbono y sales amnicas
inorgnicas como nica fuente de nitrgeno, provocando la alcalinizacin
delmedio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio,
fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH.
Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en
este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con el metabolismo del
citrato, generar una fuerte basificacin del medio que ser aparente por un
cambio de color del mismo de verde a azul.
5 De acuerdo a la literatura, cules seran las reacciones de E. coli en todos
los medios usados en la prctica

Agar citrato de Simmons:En este medio la bacteria no consume el

sitrato como fuente de carbono.

Agar Kligler:No presenta produccin de SH2,pero si cierta

produccin de gas.

Agar fenilalanina:Presenta una coloracin amarillenta en el lquido

de condensacin.

Agua triptonada:Presenta crecimiento satisfactorio y produccin de

Indol.

Discusin:

Conclusiones:

Bibliografia:

UEAM,Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina y el Caribe,

Espaa y Portugal Sistema de Informacin Cientfica(2015)recuperado
de : http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=77617786013