Crescimento de Microalgas em Águas Residuais: Produção de Biomassa e Remoção de Nutrientes

MESTRADO INTEGRADO EM ENGENHARIA DO AMBIENTE 2013/2014
Crescimento de Microalgas em guas Residuais:

Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes
Nuno Filipe Pereira da Silva
Dissertao submetida para obteno do grau de
MESTRE EM ENGENHARIA DO AMBIENTE
Presidente do Jri: Professora Cidlia Maria de Sousa Botelho

Professora auxiliar do Departamento de Engenharia Qumica da Faculdade de Engenharia da
Universidade do Porto
Orientador Acadmico: Doutor Jos Carlos Magalhes Pires

Investigador de Ps-Doutoramento do Departamento de Engenharia Qumica da Faculdade de
Engenharia da Universidade do Porto
Co-Orientador: Doutor Vtor Jorge Pais Vilar

Investigador Principal do Departamento de Engenharia Qumica da Faculdade de Engenharia
da Universidade do Porto
Porto, julho de 2014
Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes
Porm, seja o que for:

Mude-se, por meu dano, a Natureza;
Perca a inconstncia Amor;
A Fortuna inconstante ache firmeza;
E tudo se conjure contra mim,
Mas eu firme estarei no que empreendi."
Lus Vaz de Cames
iii
Agradecimentos
Para que este trabalho fosse possvel e ganhasse forma, vrios foram os contributos
dados por diferentes pessoas, s quais merecida uma palavra especial.
Ao Doutor Jos Carlos Pires uma enorme palavra de apreo pela inexcedvel
disponibilidade demonstrada em todo o processo de elaborao deste trabalho. Para alm da
orientao terica, um verdadeiro exemplo da procura incessante por novo conhecimento e
postura digna de um Engenheiro. Ao Doutor Vtor Vilar, por disponibilizar todos os recursos
sua disposio em prol do desenvolvimento desta dissertao, demonstrando um enorme
sentido de entreajuda e cooperao. Este trabalho foi cofinanciado pela FCT e FEDER ao abrigo
do Programa COMPETE (Projeto PEst-C/EQB/LA0020/2013) como tambm pelo QREN, ON2 e
FEDER (Projetos NORTE-07-0124-FEDER-000026 e NORTE-07-0162-FEDER-000050). Agradeo
tambm ao Laboratrio de Engenharia de Processos, Ambiente e Biotecnologia e Energia
(LEPABE) e ao Laboratrio de Processos de Separao e Reao (LSRE), da Faculdade de
Engenharia da Universidade do Porto. O meu sincero obrigado a toda a equipa do laboratrio
E404, principalmente Eng. Francisca Moreira e Eng. Tnia Valente, pelo apoio dado na
utilizao dos equipamentos de anlise. Uma palavra de agradecimento Ana Lusa por toda a
ajuda prestada, essencial na fase de arranque do trabalho e Eng. Liliana e D. Maria do Cu
por acrescentarem alguma alegria nos rduos dias de trabalho.
Um grande obrigado famlia que tive a oportunidade de escolher, os meus amigos,
principalmente aqueles que me acompanharam no s nesta fase, mas ao longo de todo o meu
percurso nesta faculdade.
Por ltimo, e porque os melhores vm no fim, dedico esta tese minha famlia, a quem
devo tudo. Por me fazerem acreditar, que tudo possvel e por fazerem de mim o Homem que
sou hoje. A todos vs, por fazerem, de alguma forma, parte de algo que me trouxe um grande
sentimento de realizao pessoal, o meu muito obrigado.
Resumo
A explorao dos combustveis fsseis est a conduzir a uma crise a nvel ambiental e
energtico, levando procura por alternativas viveis a esta fonte de energia. Para alm de se
tratar de um recurso limitado cada vez mais escasso, a utilizao de combustveis fsseis
acarreta grandes problemas a nvel ambiental, como a emisso de gases que potenciam o efeito
estufa, contribuindo para o aquecimento global do planeta. Nesta perspetiva, urge a
identificao de alternativas viveis, quer a nvel econmico como ambiental. A produo de
biocombustveis assume-se atualmente como um dos potenciais mercados emergentes, como
alternativa ao consumo de energias fsseis. A produo de biomassa ento encarada como
uma das reas prioritrias no panorama atual da investigao cientfica, de forma a encontrar
tecnologias que maximizem a produo de biomassa. O crescimento de microalgas j foi
sugerido por diversos autores, como uma das mais promissoras fontes de biomassa. Visto que
apresenta taxas de produtividade em biomassa e lpidos elevadas, a produo de biomassa a
partir de microalgas assume-se como uma tcnica particularmente atrativa. Para alm disso,
possvel acoplar ao crescimento de microalgas o tratamento de guas residuais, usando os
contaminantes nelas contidos como nutrientes. Assim, este estudo avalia as produtividades de
biomassa e remoo de nutrientes por duas espcies de microalgas (Chlorella vulgaris e
Pseudokirchneriella subcapitata) em diferentes composies do meio (razo molar de azoto,
fsforo e presena de amnia e/ou nitrato).
Confirmou-se o potencial de microalgas para a produo de biomassa e a sua elevada
eficincia na remoo de nutrientes, em particular de azoto (N) e fsforo (P). A produtividade
em biomassa mxima foi observada para C. vulgaris (0,106 g L-1 d-1), enquanto a P. subcapitata
atingiu um mximo de 0,050 g L-1 d-1. Verificou-se a completa remoo (100%) de NH4+ e
observou-se altas percentagens mdias de remoo de NO3- (95%) e de PO43- (97%). No que diz
respeito remoo de NH4+, importante notar que cerca de 44% da concentrao inicial foi
perdida por volatilizao. Observou-se tambm uma remoo de K+ e SO42-, atingindo uma
mdia de 66% para K+ e para SO42- os valores variaram num intervalo entre 54-100%. As cinticas
de remoo de todos os nutrientes foram determinadas, com a aplicao de diferentes modelos.
Em concluso, este trabalho oferece informaes relevantes para o cultivo de microalgas em
guas residuais, com o objetivo de produzir biomassa e remoo de poluentes.
Palavras-chave: Microalgas; Chlorella vulgaris; Pseudokirchneriella subcapitata; Tratamento

de guas residuais; Biomassa; Remoo de nutrientes
vii
Abstract
The exploitation of fossil fuels is leading to an environmental and energy crisis. Besides
the increasing scarcity, the use of fossil fuels causes major problems for environmental
protection, such as the emission of greenhouse gases, which contribute to global warming. In
this perspective, it is urgent to identify viable alternatives. Biofuel production is currently
assumed as an alternative to fossil fuel consumption. Biomass production is then regarded as
one of the priority areas in the current landscape of scientific research in order to find
technologies that maximize biomass production. The growth of microalgae has been suggested
by many authors as one of the most promising sources of biomass. The high values of biomass
productivity and lipid productivity are the major advantages for the production of biomass from
microalgal cultures. It is possible to couple the growth of microalgae for biomass production
and remediation of wastewater. Thus, this study evaluates the biomass productivities and
nutrient removal by two species of microalgae (Chlorella vulgaris and Pseudokirchneriella
subcapitata) in different medium compositions (nitrogen to phosphorus molar ratio and
presence of ammonia and/or nitrate).
It was confirmed the potential of microalgae for biomass production and their high
efficiency on removal of nutrients, particularly nitrogen (N) and phosphorus (P). Maximum
biomass productivity were observed for C. vulgaris (0,106 g L-1 d-1), while P. subcapitata
reached a maximum of 0,050 g L-1 d-1. A complete removal (100%) of NH4+ was measured and
high average percentages were observed for NO3- (95%) and PO43- (97%). Regarding the removal
of NH4+, it is important to note that about 44% from the initial concentration was lost by
volatilization. It was noticed also a removal of K+ and SO42-, reaching an average of 66% for K+
and for SO42- the values varied in a range from 54 to 100%. The removal kinetics for all the
nutrients have been estimated, with the application of different models. In conclusion, this
work offers relevant information for culturing microalgae in wastewater, with the objective of
producing biomass and removing pollutants.
ix
ndice
1.
2.
3.
Introduo ............................................................................................. 1
1.1
Enquadramento e apresentao ............................................................ 1
1.2
Objetivos ........................................................................................ 2
1.3
Organizao da tese ........................................................................... 2
Reviso da Literatura ............................................................................... 5

2.1
Microalgas ....................................................................................... 5
2.2
Aplicaes das microalgas .................................................................... 6
2.3
Tecnologias de crescimento ............................................................... 10
2.4
Remoo de nutrientes em guas residuais ............................................. 14
Avaliao da Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes em guas Residuais .. 19

3.1
Material e mtodos .......................................................................... 19
3.1.1
Instalao experimental ............................................................................... 19
3.1.2
Meio de cultura e microrganismos ................................................................... 19
3.1.3
Mtodos de anlise ..................................................................................... 20
3.1.4
Modelos cinticos ....................................................................................... 23
3.2
Resultados e discusso ...................................................................... 25
3.2.1
Produo de biomassa .................................................................................. 25
3.2.2
Remoo de nutrientes ................................................................................ 32
4.
Concluses .......................................................................................... 45
5.
Avaliao do Trabalho Realizado ............................................................... 47
A.
B.
5.1
Objetivos realizados ......................................................................... 47
5.2
Limitaes e trabalho futuro .............................................................. 47
Anexos: Material e mtodos ..................................................................... 57

A.1
Equipamentos de anlise usados para obteno dos dados experimentais ....... 57
A.2
Retas de calibrao usadas nas medies de cromatografia inica ................ 60
Anexos: Resultados e discusso ................................................................. 61

B.1
Variao temporal da temperatura para todos os ensaios ........................... 61

xi
Crescimento de Microalgas em guas Residuais: produo de biomassa e remoo de nutrientes
B.2
Variao temporal do pH para todos os ensaios........................................ 62
B.3
Variao temporal da concentrao de O2 dissolvido para todos os ensaios ..... 63
B.4
Variao temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido para todos os
ensaios .................................................................................................. 64
B.5
Variao temporal da concentrao de carbono inorgnico dissolvido para todos
os ensaios .............................................................................................. 65
xii
B.6
Variao temporal da concentrao de PO43- para todos os ensaios ............... 66
B.7
Variao temporal da concentrao de SO42- para todos os ensaios ............... 67
B.8
Variao temporal da concentrao de K+ para todos os ensaios ................... 68
ndice de Figuras
Figura 2.1 - Diagrama processual de uma biorefinaria com comercializao de produtos a partir de
microalgas (adaptado de Cellana (2013)) ........................................................................... 10
Figura 3.1- Instalao experimental usada para crescimento das microalgas............................... 20
Figura 3.2 Imagem de uma amostra recolhida: a) - antes e b) - aps centrifugao. ................... 21
Figura 3.3 Cromatograma obtido para uma das amostras recolhidas ....................................... 22
Figura 3.4 Curvas de crescimento para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie P.
subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH 4+:NO3- (2:0 A e D;
1:1 B e E; 0:2 C e F). Valores apresentados resultam da mdia obtida a partir de dois ensaios
independentes. .......................................................................................................... 26
Figura 3.5 Representaes grficas dos efeitos do crescimento das microalgas nos parmetros de
anlise para o ensaio 1 (C. vulgaris, razo N/P=16- A, B e C) e para o ensaio 6 (P. subcapitata, razo
N/P=8- D, E e F): pH (A e D), temperatura (B e E) e concentrao de oxignio dissolvido (C e F). ...... 31
Figura 3.6 Evoluo temporal da concentrao de carbono inorgnico nos ensaios 2 (A) e 5 (B). ..... 33
Figura 3.7 Comparao da evoluo temporal da concentrao de carbono inorgnico (CI) com o pH
(A), temperatura (B) e concentrao de O2 dissolvido (C). ...................................................... 34
Figura 3.8 - Evoluo temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido nos ensaios 2 (A) e 5
(B). ......................................................................................................................... 34
Figura 3.9 Evoluo temporal da concentrao de NH4+ para os ensaios 1 (A), 2 (B), 4 (C) e 5 (D). .. 35
Figura 3.10 Evoluo temporal da concentrao de NO3- para os ensaios 2 (A), 3 (B), 5 (C) e 6 (D). . 37
Figura 3.11 Aplicao do Modelo de Gompertz Modificado aos ensaios 2 (A, B e C) e 5 (D, E e F) para
as razes N/P 8 (A e D), 16 (B e E) e 24 (C e F). ................................................................... 39
Figura 3.12 - Evoluo temporal da concentrao de PO43- nos ensaios 2 (A) e 5 (B). ..................... 40
Figura 3.13 - Evoluo temporal da concentrao de SO42- nos ensaios 2 (A) e 5 (B). ..................... 42
Figura 3.14 - Evoluo temporal da concentrao de K+ nos ensaios 2 (A) e 5 (B). ........................ 43
Figura A.1 Espetrofotmetro usado para medio da densidade tica. .................................... 57
Figura A.2 Equipamento usado para medio de oxignio dissolvido e temperatura. ................... 57
Figura A.3 Equipamento usado para medio do pH das culturas. .......................................... 58
Figura A.4 Equipamento usado para medio da intensidade luminosa. ................................... 58
Figura A.5 Equipamento usado para medio da concentrao de carbono orgnico e inorgnico
dissolvido no meio. ...................................................................................................... 59
Figura A.6 Equipamentos usados para determinao da concentrao dos ies dissolvidos no meio: Acaties e B- anies. ..................................................................................................... 59
xiii
Figura B.1 Evoluo temporal da temperatura para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie
P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH 4+:NO3- (2:0 A e
D; 1:1 B e E; 0:2 C e F). ............................................................................................. 61
Figura B.2 - Evoluo temporal do pH para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie P.
1:1 B e E; 0:2 C e F). ................................................................................................ 62
Figura B.3 - Evoluo temporal da concentrao de O2 dissolvido para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e
para a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo
NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F). .................................................................... 63
Figura B.4 - Evoluo temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido para a espcie C.
vulgaris (A, B e C) e para a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8,
16 e 24) e razo NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F). ............................................... 64
Figura B.5 - Evoluo temporal da concentrao de carbono inorgnico (CI) dissolvido para a espcie
C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P
(8, 16 e 24) e razo NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F)............................................ 65
Figura B.6 - Evoluo temporal da concentrao de fosfato para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para
a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH 4+:NO3(2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F). ................................................................................ 66
Figura B.7 - Evoluo temporal da concentrao de sulfato para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para
a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH 4+:NO3(2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F). ................................................................................ 67
Figura B.8 - Evoluo temporal da concentrao de potssio para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e
NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F). .................................................................... 68
xiv
ndice de Tabelas
Tabela 2.1- Comparao entre os diferentes mtodos de crescimento de microalgas (adaptado de
(Ferell et al., 2010)). ................................................................................................... 12
Tabela 2.2- Caraterizao da composio genrica em azoto e fsforo de vrios tipos de guas
residuais (adaptado de Cai et al. (2013)) ........................................................................... 15
Tabela 2.3 - Remoo de azoto e fsforo em guas residuais por microalgas. ............................. 16
Tabela 3.1 Concentraes de NH4Cl e NaNO3 para os diferentes ensaios realizados. .................... 20
Tabela 3.2 Listagem dos equipamentos usados na etapa de mtodos de anlise. ....................... 22
Tabela 3.3 Parmetros de anlise do crescimento das microalgas para os diferentes ensaios:
concentrao de biomassa mxima, taxa de crescimento e produtividade de biomassa mxima e mdia
.............................................................................................................................. 27
Tabela 3.4 Parmetros cinticos e eficcia de remoo de NH4+. ........................................... 36
Tabela 3.5 Parmetros cinticos e eficcia de remoo de NO3- para os ensaios 3 (C. vulgaris) e 6 (P.
subcapitata). ............................................................................................................. 37
Tabela 3.6 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de NO3- para os ensaios 2 (C. vulgaris) e 5 (P.
subcapitata). ............................................................................................................. 38
Tabela 3.7 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de PO43-............................................ 40
Tabela 3.8 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de SO42-. ........................................... 42
Tabela 3.9 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de K+. .............................................. 43
Tabela A.1 Curvas de calibrao usadas para clculo da concentrao dos ies analisados nas
culturas 1, 2 3. ........................................................................................................... 60
Tabela A.2 - Curvas de calibrao usadas para clculo da concentrao dos ies analisados nas
culturas 4, 5 e 6. ........................................................................................................ 60
xv
Notao e Glossrio
Smbolos
X
Px
S
t
kN1
kN2
kP
kS
kK
kG
Concentrao biomassa
Produtividade em biomassa
Concentrao do nutriente
Tempo
Constante cintica de remoo de NH4+
Constante cintica de remoo de NO3Constante cintica de remoo de PO43Constante cintica de remoo de SO42Constante cintica de remoo de K+
Constante cintica do Modelo de Gompertz modificado
g L-1
g L-1 d-1
mg L-1
d
d-1
d-1
d-1
d-1
d-1
h-1
Letras gregas
Taxa especfica de crescimento

Tempo de atraso
d-1
h
ndices
max
med
0
i
f
Mximo
Mdio
Instante inicial
ndice ou contador
Instante final
Lista de Siglas
ATP
CI
COD
CT
DO750
EPA
Adenosina trifosfato
Carbono Inorgnico
Carbono Orgnico Dissolvido
Carbono Total
Densidade tica a 750 nm
Agncia de Proteo Ambiental dos Estados Unidos (do ingls
Environmental Protection Agency)
NDIR
Infravermelho no-dispersivo (NDIR, do ingls non-dispersive infrared)
OCDE Organizao para a Cooperao e Desenvolvimento Econmico
TN
Azoto Total
TP
Fsforo Total
US DOE Departamento de Energia Norte-Americano (do ingls United States
Department of Energy)
xvii
1. Introduo
1.1 Enquadramento e apresentao
A contnua explorao dos combustveis fsseis como principal fonte de energia nas
diferentes atividades antropognicas afigura-se como um dos maiores desafios da humanidade.
Tratando-se de recursos limitados, a inevitvel escassez dos combustveis fsseis conduz
procura de fontes alternativas de energia, que acarretem um menor impacto ambiental (Mata
et al., 2010). A limitao da emisso de gases com efeito de estufa e que tm conduzido ao
aquecimento global, com consequncias nefastas para o Homem, passar tambm pela
substituio gradual das atuais fontes energticas por energias alternativas (Demirbas and
Demirbas, 2011; Pittman et al., 2011). O recurso a biomassa (i.e., matria orgnica
continuamente renovvel, como cereais, rvores, algas e resduos de origem vegetal e animal)
como matria-prima para a produo de biocombustveis apresenta-se como uma das potenciais
solues (Demirbas, 2001; Kamm et al., 2006). Neste contexto, o uso de microalgas como
biomassa para a produo de biocombustveis e outros produtos tem sido estudado por diversos
autores (Brennan and Owende, 2010; Christenson and Sims, 2011; Suali and Sarbatly, 2012). No
entanto, a explorao a nvel comercial e industrial no se apresenta ainda como sendo
economicamente vivel, pelo que necessrio um esforo por parte de todas as entidades
interessadas (instituies governamentais, laboratrios de investigao, indstria), por forma
a estimular o crescimento deste sector (Chisti, 2007; Takeshita, 2011).
A necessidade de reduzir os custos associados produo de biomassa com base no
crescimento de microalgas, conduziu a um conjunto de estudos no sentido de acoplar este
processo ao tratamento de guas residuais. Visto que o metabolismo de crescimento das
microalgas remove alguns dos contaminantes habitualmente presentes em guas residuais, sem
a necessidade de adio de outros compostos qumicos, o seu uso para tratamento de guas
promissor. O potencial das microalgas para remoo de azoto (N) e fsforo (P) j foi evidenciado
em vrios estudos (Abdelaziz et al., 2014; Termini et al., 2011), sendo que tal facto promove
o uso de guas residuais, ricas em compostos azotados, como meio de cultura para o
crescimento de microalgas. A partir das caractersticas j apresentadas destes microrganismos,
possvel aliar o tratamento de guas residuais com a produo de biomassa, tornando esse
processo ambientalmente e economicamente atraente (Park et al., 2011; Rawat et al., 2011).
A utilizao das microalgas como etapa de tratamento de guas residuais e posterior
recolha da biomassa gerada para produo de biodiesel j foi alvo de estudo sob o ponto de
vista energtico (Sturm and Lamer, 2011) e econmico (Suali and Sarbatly, 2012), salientandose ainda o seu potencial na captura de gases com efeito estufa (Hende et al., 2012).
1
Introduo
No entanto, necessrio um estudo mais aprofundado da relao entre a remoo de

nutrientes, e consequente produo de biomassa, sob diferentes condies. Este projeto
assenta nessa premissa como fundamento para o seu desenvolvimento.
1.2 Objetivos
O principal objetivo deste trabalho avaliar a produo de biomassa e remoo de
nutrientes por parte de microalgas em guas residuais, tendo sido estudadas duas espcies de
microalgas: Chlorella vulgaris e Pseudokirchneriella subcapitata.
A anlise do crescimento das duas espcies de algas referidas fornecer dados que
permitiro avaliar a sua eficincia para produo de biomassa. Para alm do clculo da
produtividade em termos de biomassa, pretende-se estimar a velocidade de crescimento das
mesmas microalgas, em meios com composio diferentes. Desta forma, procura-se identificar
as condies timas para potenciar ao mximo o seu crescimento.
A partir de uma composio do meio cultura previamente conhecida, pretende-se avaliar
as cinticas de remoo de alguns nutrientes caractersticos de gua residuais, NH4+, NO3-, PO43, SO42- e K+ (Cai et al., 2013; Pittman et al., 2011). Com este estudo, ser possvel avaliar a
eficincia das microalgas no tratamento de guas residuais (tratamento secundrio e tercirio).
Com este trabalho pretende-se compreender de que forma esta dualidade entre
crescimento de microalgas e remoo de nutrientes, se comporta sob diferentes condies. As
duas microalgas foram inoculadas em meios com diferentes composies, variando a fonte de
azoto (NH4+ ou NO3-) e a razo entre azoto e fsforo presente na composio do meio (N/P).
Desta forma, procura-se obter as cinticas de remoo de nutrientes, permitindo compreender
melhor os mecanismos metablicos das microalgas e a sua relao com os nutrientes
disponveis.
1.3 Organizao da tese

Esta dissertao encontra-se dividida em 5 captulos. No primeiro captulo apresenta-se
as problemticas associadas ao tema desenvolvido, identificando-se tambm os principais
objetivos do trabalho e a estrutura/organizao do presente documento.
O Captulo 2 apresenta a reviso crtica da literatura. As principais caractersticas das
microalgas e conceitos relacionados com as mesmas, bem como as suas principais aplicaes,
so alvo de ateno. O estado de arte das tecnologias de crescimento de microalgas j
existentes tambm revisto.
O Captulo 3 descreve os mtodos experimentais usados e apresenta os resultados obtidos
na avaliao do crescimento das microalgas estudadas (Chlorella vulgaris e Pseudokirchneriella
2
subcapitata) em guas residuais sintticas, quantificando a remoo de nutrientes pelas

mesmas. O efeito da razo N/P e da razo NH4+/NO3- no crescimento de microalgas alvo de
estudo e discusso.
O Captulo 4 apresenta as principais concluses obtidas com o desenvolvimento deste
projeto. Os contributos mais importantes resultantes do trabalho realizado, como valores de
referncia para remoo de nutrientes e crescimento de microalgas, so sumarizados com vista
a servirem de referncia para trabalho futuro.
O Captulo 5 avalia qualitativamente o trabalho realizado, tendo em conta os objetivos
iniciais traados. As limitaes encontradas durante o mesmo e sugestes para trabalho futuro
a desenvolver na mesma temtica so tambm apresentados.
2. Reviso da Literatura
Este captulo apresenta as aplicaes de microalgas no tratamento de gua residuais e
produo de biomassa, com particular ateno para as tcnicas de crescimento atualmente
existentes em escalas piloto e industrial.
2.1 Microalgas
Microalgas so microrganismos (unicelulares ou de estrutura multicelular simples)
fotossintticos, capazes de converter energia solar em energia qumica sob a forma de biomassa
(Demirbas and Demirbas, 2011; Mata et al., 2010). De forma simplificada, a fotossntese baseiase na produo de matria orgnica a partir de dixido de carbono e gua, na presena de
radiao luminosa. A composio bioqumica das microalgas essencialmente uma combinao
de quatro elementos fundamentais: (i) hidratos de carbono, com funo estrutural e tambm
metablica; (ii) protenas, com as mesmas funes dos hidratos de carbono, acrescentando-se
o papel das enzimas como catalisadores das reaes metablicas; (iii) cidos nucleicos, que
suportam o processo de diviso e crescimento das clulas; e (iv) lpidos, que para alm da
funo estrutural, representam uma forma de armazenamento de energia (Williams and
Laurens, 2010). Visto que possuem um alto teor em lpidos e a taxa de crescimento bastante
superior s matrias-primas habitualmente usadas para produo de biocombustveis, o uso de
microalgas para fins comerciais apresenta-se, teoricamente, como sendo bastante apelativo
(Singh and Gu, 2010).
A classificao das vrias estirpes de microalgas existentes varia consoante as
caractersticas morfolgicas, os pigmentos fotossintticos e a composio qumica dos produtos
resultantes do seu metabolismo (Gonalves, 2012). O conceito de microalgas abrange vrias
classes de algas, sendo que em termos de abundncia e aplicao prtica, as classes que
assumem maior preponderncia so: as algas verdes (Chlorophyceae), algas douradas
(Chrysophyceae) e as diatomceas (Bacillariophyceae). As cianobactrias (Cyanophyceae),
tambm conhecidas como algas azuis-verdes, so algas procariotas tambm includas no
conceito que abrange todas as microalgas passveis de algum tipo de aplicao comercial
(Demirbas and Demirbas, 2011; Richmond, 2004). As duas espcies de microalgas alvo de estudo
neste trabalho, Chlorella vulgaris e Pseudokirchneriella subcapitata, pertencem ambas
diviso Chlorophyta, isto , so algas verdes, apresentando por isso um conjunto de
caractersticas morfolgicas e metablicas semelhantes. Uma das principais caractersticas
deste tipo de microalgas o facto de serem cosmopolitas, ou seja, apresentam uma distribuio
bastante abrangente, proliferando em ambientes terrestres, aquticos de gua doce ou gua
salgada e ainda em habitats subareos (Richmond, 2004). O seu rpido crescimento em
diferentes condies ambientais despoletou o interesse pela sua explorao a nvel comercial.
5
Reviso da Literatura
A espcie Chlorella vulgaris uma das mais utilizadas quer em estudos cientficos, quer
escala industrial, dada a sua tolerncia a diferentes condies e rpido crescimento (Memon
et al., 2014). A sua composio rica em lpidos, hidratos de carbono e protenas faz com que
se assuma como uma das principais microalgas usadas na indstria bioenergtica, visto o seu
alto rendimento em termos de produo de biomassa e lpidos, comparativamente com outras
matrias-primas (Chisti, 2007; Heredia-Arroyo et al., 2011). Dada a vasta base de dados
existente no que diz respeito a esta espcie, o seu estudo tem-se diversificado por vrias reas
desde a produo de biocombustveis a possveis tcnicas de tratamento e reabilitao
ambiental, bem como investigao na rea da ecotoxicologia (Gomes et al., 2014; Silva et al.,
2009).
A Pseudokirchneriella subcapitata est normalmente associada a estudos e processos na
rea da ecotoxicologia, dada a sua sensibilidade a alguns contaminantes, como a presena de
metais pesados dissolvidos. Visto que a sua denominao taxonmica foi recentemente
alterada, bastante frequente encontrar literatura onde citada como Selenastrum
capricornutum. Sendo uma das espcies que apresenta uma maior distribuio espacial, o seu
uso para testes de toxicidade tem sido recorrente, ao ponto de figurar atualmente nas
principais normas internationais (OCDE - Organizao para a Cooperao e Desenvolvimento
Econmico - e EPA - Agncia Proteo Ambiental Norte-Americana) para os testes a realizar
neste mbito (Moreira-Santos et al., 2004). No entanto, estudos recentes (Gonalves, 2012;
Song et al., 2013) demonstraram que a P. subcapitata pode apresentar taxas de produo de
lpidos superiores a outras espcies de microalgas, tornando-a numa espcie-alvo para a
produo de biodiesel.
2.2 Aplicaes das microalgas

O recurso a microalgas como matria-prima para vrios processos tem aumentado nos
ltimos anos, dada a necessidade de se encontrarem substitutos para as fontes de biomassa
mais comuns. O crescimento de algas apresenta um conjunto de vantagens que as torna numa
possvel soluo para um conjunto de problemticas energticas e ambientais. A taxa de
produtividade de biomassa e de lpidos por unidade de rea pode ser entre 7 a 31 vezes superior
planta terrestre que apresenta melhor desempenho, a rvore do leo de palma (Clark et al.,
2012). Uma das aplicaes que se encontra ainda em fase de investigao e desenvolvimento
a produo de biocombustveis a partir de microalgas.
A produo de biocombustveis segue uma das seguintes duas vias: termoqumica ou
bioqumica. Na primeira, a biomassa sujeita a processos com diferentes gamas de
temperatura, por forma a se obterem produtos com caractersticas distintas. Assim, possvel
obter gs de sntese por gasificao, bioleo por liquefao, uma mistura de produtos por
pirlise e ainda produo de eletricidade por combusto directa. A alternativa a via
6
bioqumica onde se recorre atividade biolgica de certos organismos, com o intuito de

produzir combustveis mais especficos. Atravs da digesto anaerbia obtm-se uma mistura
de metano (CH4) com hidrognio (H2), habitualmente designada por biogs, que tem como
principal caracterstica apresentar um alto poder calorfico, tornando-o adequado para gerao
de energia. Um processo tambm habitual para outras matrias-primas, a produo de etanol
por fermentao alcolica. Este pode ser usado como aditivo nos combustveis habitualmente
usados para propulso de veculos motorizados (Brennan and Owende, 2010).
O conceito de biorefinaria definido pela IEA Bioenergy Task 42 como sendo a converso
sustentvel de biomassa num espectro de bioprodutos (comida, rao, qumicos) e bioenergia
(biocombustveis, calor), enquadra-se tambm na rea das microalgas. A biorefinao uma
abordagem que permite rentabilizar ao mximo toda a biomassa passvel de ser transformada
em
produtos
comercializveis,
contribuindo
para
desenvolvimento
de
solues
economicamente e ambientalmente mais sustentveis (Clark et al., 2012). A produo de

biocombustveis baseia-se na elevada composio em lpidos das microalgas, no entanto outros
constituintes apresentam interesse comercial. As formas de biocombustveis produzidos a partir
de microalgas mais habituais so o biodiesel, o bioetanol e o biometano (Singh and Gu, 2010).
O primeiro tem sido amplamente estudado (Chisti, 2007; Scott et al., 2010; Takeshita, 2011),
quer pelo elevado potencial de converso a partir de microalgas, quer pela facilidade de
implementao no mercado, visto poder ser utilizado nos motores de propulso comuns, sem
modificaes adicionais.
A utilizao de microalgas em processos de tratamento de guas residuais outra forma
de aplicao destes microrganismos. Com base no metabolismo de crescimento das microalgas,
que necessita de carbono orgnico e formas inorgnicas de azoto e fsforo, possvel associar
a produo de biomassa remoo de contaminantes em guas residuais (Pittman et al., 2011).
Como j foi explicado, atravs da fotossntese as microalgas conseguem captar CO2 da
atmosfera ou do meio onde se inserem e convert-lo em outros compostos orgnicos. Atravs
de um processo de assimilao as microalgas conseguem captar formas inorgnicas de azoto
(NO3-, NO2- e NH4+) e produzir compostos orgnicos. Os fosfatos (PO43-) presentes no meio so
captados pelas microalgas e incorporados em compostos orgnicos como consequncia da
fosforilao, necessria para a produo de ATP (adenosina trifosfato) (Cai et al., 2013). Sendo
algumas guas residuais ricas em azoto e fsforo, a sua aplicao como meio de cultura para
microalgas uma forma de reduzir os custos de produo (adio de nutrientes no ser
necessria) e o impacto ambiental, principalmente, o uso de gua limpa. Tal facto j foi
inclusivamente reconhecido pelo Departamento de Energia Norte-Americano (US DOE),
promovendo a incorporao de gua residuais nos processos de produo de biocombustveis a
partir de microalgas (Christenson and Sims, 2011).
Esta vertente do tratamento de guas residuais pode ser aplicada a efluentes

provenientes de diferentes fontes. O caso mais habitual o uso de guas residuais
domsticas/municipais, visto no apresentarem compostos txicos que inibam o crescimento
das microalgas e conterem uma razo N/P prxima da teoricamente ideal (Rawat et al., 2011).
Para alm disso, outros tipos de guas residuais podem ser tambm usadas, sendo necessrio
aprofundar o estudo sobre os efeitos de diferentes composies iniciais. A gua residual
proveniente de agricultura e pecuria apresenta nveis de azoto e fsforo superiores aos
encontrados nos efluentes municipais. Alguns estudos j provaram que o crescimento, e
consequente produo de biomassa, nestes meios pode inclusivamente ser superior dado o
excedente de nutrientes. No entanto, as guas residuais deste tipo podem tambm conter
vestgios de pesticidas e herbicidas, inibindo o crescimento das microalgas (Cai et al., 2013).
guas residuais com origem em indstrias apresentam composies bastante variadas,
dependendo do sector comercial. O principal interesse na aplicao de microalgas no
tratamento deste tipo de efluentes a remoo de metais pesados (Cd, Cr, Zn) e outros
compostos orgnicos txicos. Porm, a baixa concentrao em azoto e fsforo conduz a taxas
de crescimento e de produo de biomassa relativamente baixas, em comparao com as
obtidas usando outros tipos de guas residuais (Pittman et al., 2011). A utilizao de gua
residual artificial, ou seja, gua laboratorialmente preparada, j permitiu concluir que, para
as mesmas razes de N/P encontradas em efluentes reais, as taxas de crescimento eram
superiores em solues artificiais. Tal facto, corrobora a ideia de que a toxicidade, fatores
ambientais e a presena de outros microrganismos, situaes comuns em guas residuais reais,
afetam consideravelmente o crescimento de microalgas (Pittman et al., 2011).
O recurso a microalgas como forma de tratamento e remoo de contaminantes no se
limita s guas residuais. A capacidade de assimilao de diferentes compostos, sejam estes
orgnicos ou inorgnicos, incentiva a sua utilizao como forma de bioremediao de solos e
guas contaminadas com diferentes espcies poluentes (Cai et al., 2013; de-Bashan and Bashan,
2010; Subashchandrabose et al., 2013). Assim sendo, a ficoreabilitao pode ser definida como
o conjunto de tecnologias baseadas em macro e microalgas que permitem a remoo ou
converso de poluentes, incluindo nutrientes e xenobiticos em guas residuais, bem como
dixido de carbono proveniente de gases de exausto (Rawat et al., 2011). A combinao da
produo de biomassa a partir de microalgas com o tratamento de gases de combusto j foi
alvo de estudo por parte de vrios autores (Hende et al., 2012; Kumar et al., 2010; Pires et al.,
2012), dado o seu potencial futuro. Acresce vertente ambiental de reduo das emisses de
CO2, a possvel reduo de custos com a produo de biomassa, j que o mesmo dixido de
carbono vai permitir o crescimento de microalgas, e consequente aumento da biomassa
produzida. Para alm da remoo de CO2, outros gases com impacto no meio ambiente, como
xidos de azoto (NOx) e dixido de enxofre (SO2), so passveis de serem convertidos por parte
das microalgas (Chiu et al., 2011; Hende et al., 2012).
A combinao do processo de remoo de nutrientes de guas residuais, juntamente com
a captura de CO2 a partir de gases de exausto, apresenta-se como uma soluo promissora
para impulsionar a produo de biomassa com base em microalgas (Jiang et al., 2011; Pires et
al., 2012). As vantagens de acoplar ambos os processos abrangem a vertente ambiental,
econmica e energtica. O aumento da produo de biomassa aliado reduo de custos com
o crescimento de microalgas, devido ao uso de elementos residuais de outros processos, permite
obter produtos gerados a partir de biomassa com um custo bastante inferior, tornando-os mais
competitivos comercialmente (Pandey et al., 2013; Pires et al., 2012; Sturm and Lamer, 2011).
A produo de biomassa no se confina gerao de biocombustveis, pelo que outros
compostos qumicos de interesse comercial podem ser gerados a partir desta. A biomassa com
origem em microalgas pode ser direcionada para produo de suplementos nutricionais,
alimentao animal e aquacultura, bem como outros compostos qumicos com valor comercial
desde cosmticos e produtos farmacuticos, a agentes corantes e fertilizantes para solos (Ferell
et al., 2010). Todas as aplicaes baseiam-se nos produtos resultantes do metabolismo das
microalgas, ou seja, biomassa, carotenides e antioxidantes, cidos gordos, enzimas, polmeros
e outros bioqumicos especficos como istopos estveis, usados na rea da investigao
cientfica (Satyanarayana et al., 2011).
Como j tinha sido abordado, a explorao das microalgas de forma comercial ser
economicamente vivel, se feita num sistema que potencie e integre todas as valncias
resultantes do crescimento de microalgas. Assim sendo, fulcral a otimizao de processos em
biorefinarias, para que tal possa vir a adquirir maior preponderncia num futuro prximo. No
diagrama apresentado na Figura 2.1, pode-se constatar a complexidade que pode estar
associada ao dimensionamento de uma instalao deste tipo. O diagrama apresentado
proveniente da empresa Cellana Inc., que se trata, atualmente, de uma das empresas que lidera
o mercado mundial na produo de produtos a partir de microalgas. Esta companhia baseia-se
no conceito de biorefinaria, direcionando o desenvolvimento das tecnologias adotadas para
solues mais eficazes no processamento das microalgas cultivadas (Cellana, 2013). Na
verdade, o vasto leque de produtos gerados, como o exemplo do caso apresentado, o fator
que pode tornar o processo rentvel, dadas as receitas geradas com a comercializao de cada
um deles. Outros tipos de processos combinados podem ser explorados (Gong and You, 2014;
Zhu, 2014), sendo que uma etapa de simulao do diagrama processual e uma anlise
econmica do mesmo fundamental antes de iniciar qualquer operao desta magnitude.
Figura 2.1 - Diagrama processual de uma biorefinaria com comercializao de produtos a partir de
microalgas (adaptado de Cellana (2013))
2.3 Tecnologias de crescimento

O crescimento de microalgas para produo de biomassa pode ser classificado segundo
diferentes parmetros. Normalmente, a diviso pode ser feita com base nos mtodos de
crescimento, ou seja, a via metablica que se induz para o crescimento, ou na tecnologia/
sistema de produo de biomassa adotado, isto , o sistema que servir de base para o
crescimento das culturas.
Previamente importa realar as principais condies ou fatores que influenciam o
crescimento das microalgas. A satisfao das necessidades metablicas obviamente o ponto
fulcral, pelo que no caso mais habitual, de microalgas fotossintticas, a intensidade luminosa,
a concentrao de CO2 e a presena de nutrientes no meio esto diretamente relacionados com
a taxa de crescimento. Dada a diferena de requisitos por parte de diferentes espcies, no
possvel apontar valores timos. No entanto, j foi provado que a intensidade luminosa pode
estimular o crescimento at atingir o nvel de saturao, valor a partir do qual pode ocorrer a
chamada fotoinibio (Richmond, 2004). A luz tida como o principal parmetro a controlar
na otimizao do processo de crescimento, seguindo-se a temperatura, o pH e a presena de
CO2 e O2 no meio (Behrens, 2005). A gama de temperaturas ideais um fator que varia de
espcie para espcie, pelo que apenas atravs do estudo cientfico possvel otimizar essa
condio. No aconselhvel testar o crescimento de algas para temperaturas superiores a
30 C, visto tratarem-se de temperaturas demasiadas altas para a maioria das espcies e
resultarem na inibio do seu crescimento (Suali and Sarbatly, 2012).
10
A variao do pH do meio e da concentrao de CO2 esto estreitamente correlacionados,

visto que o aumento da alcalinidade do meio de cultura se deve ao consumo do dixido de
carbono por parte das microalgas. O aumento da concentrao de CO2 no meio pode conduzir
ao aumento da taxa de crescimento e produo de biomassa, mas para tal o mesmo tem de ser
eficazmente injetado na cultura. A injeo de ar enriquecido com CO2 apresenta-se como a
soluo mais eficaz, at porque o aumento da produtividade no depende apenas do aumento
de CO2, mas tambm da remoo do O2 em excesso. A presena de oxignio dissolvido em
quantidades acima do valor de saturao na atmosfera inibe a ocorrncia de fotossntese por
parte das microalgas (Christenson and Sims, 2011). De igual forma, fulcral manter os valores
de pH controlados num intervalo genrico entre 7 e 9, j que um meio demasiado acidificado
pode ser txico para as microalgas e um meio alcalino conduzir precipitao da biomassa
juntamente com sais inorgnicos (Pandey et al., 2013). Como j foi possvel compreender so
vrios os fatores que se relacionam entre si, tornando o processo de otimizao do crescimento
de microalgas extremamente difcil de prever. Para alm dos fatores j referenciados, existem
ainda outros parmetros que podem influenciar a eficincia do processo como a salinidade,
agitao e as formas inicas como os nutrientes esto disponveis no meio (Richmond, 2004).
Tal facto deve-se em grande parte as diferentes vias metablicas que algumas espcies de
microalgas podem adotar, em funo das condies onde esto inseridas.
Assim sendo, um dos princpios bsicos para a implementao de um processo de
crescimento de microalgas a identificao do mtodo de cultura, isto , selecionar qual a
via metablica que se pretende que as culturas adotem. As microalgas podem crescer com base
em 4 tipos de metabolismo (Gouveia, 2011):
- fotoautotrfico: usando a luz como nica fonte de energia, transformando energia solar
em energia qumica atravs da fotossntese;
- heterotrfico: recorrendo exclusivamente a compostos orgnicos como fonte de carbono
e energia;
- mixotrfico: ambas as formas de carbono, ou seja, orgnico e inorgnico (CO2), so
essenciais visto que o organismo capaz de crescer autotroficamente e heterotroficamente,
dependendo da concentrao de compostos orgnicos e da intensidade luminosa disponvel;
- fotoheterotrfico: no caso de necessitarem de luz para processar compostos orgnicos
como fonte de carbono. Existe alguma confuso entre esta via e a mixotrofia, j que a diferena
reside apenas na fonte de energia necessria para ocorrer crescimento e produo de
metabolitos especficos.
11
A escolha pelo crescimento de microalgas e produo de biomassa segundo uma das vias
metablicas apresentadas obedece a um conjunto de critrios relacionados com a tecnologia
que requerida para implementao do mtodo. Cada uma das vertentes metablicas
apresenta as suas vantagens e desvantagens, que foram sumarizadas na Tabela 2.1. A via
fotoautotrfica pode ser explorada a partir de diferentes condies, sendo que a principal
diferena a diviso entre crescimento em lagoas ou em reatores fechados, habitualmente
designados por fotobioreatores. As principais necessidades neste tipo de mtodo a
climatizao do meio, captao de gua, CO2 e outros nutrientes, terreno e energia para
operao do sistema. Quanto ao crescimento heterotrfico baseia-se, normalmente, na
produo de biomassa com recurso a um fermentador convencional. Neste caso, os requisitos
para a operao envolvem uma fonte de carbono orgnico adequada e sustentvel do ponto de
vista econmico e ambiental.
Tabela 2.1- Comparao entre os diferentes mtodos de crescimento de microalgas (adaptado de

(Ferell et al., 2010)).
Mtodo de
crescimento
Tecnologia
Mixotrfico
12
Desvantagens
Fotobiorreatores
fechados
Menores perdas de gua

Tempo de reteno da
cultura superior
Capacidade para suportar
densidades celulares
elevadas
Implementao a escala
comercial
Regulao da temperatura
Limpeza peridica
Necessidade mxima de
exposio luminosa
Lagoas
abertas
Arrefecimento espontneo
por evaporao
Capital para investimento
inicial inferior
Alteraes dirias e
sazonais da temperatura e
humidade
Contaminaes
Necessidade mxima de
exposio luminosa
Fermentadores
Facilidade no controlo das

condies timas para
produo
Preveno de
contaminao
Obteno de
concentraes de biomassa
superiores
Custo e disponibilidade de
matria-prima
Competio pela matriaprima com outras
tecnologias para produo
de combustveis
Fotobiorreatores
Requerem menor
exposio luminosa
Concentrao de biomassa
superior
Produo de lpidos
superior
Elevados custos com

implementao e
manuteno
Operao complexa
Contaminaes
Aplicao restrita a apenas
algumas espcies
Fotoautotrfico
Heterotrfico
Vantagens
Para alm disso necessria uma capacidade logstica eficiente, para a implementao
de um sistema integrado de produo de biomassa e ps-processamento da mesma, para
gerao de biocombustveis e outros produtos (Gouveia, 2011). A produo mixotrfica de
biomassa permite rentabilizar os compostos orgnicos no meio e reduzir as perdas de biomassa
durante a ausncia de luz. As dificuldades prendem-se com o restrito leque de microalgas
capazes de proliferarem nestas condies e ao facto de entrar em competio com outras
indstrias paralelas, pelo substrato orgnico que permite o crescimento (Brennan and Owende,
2010; Perez-Garcia et al., 2011). Esta vertente ainda se encontra em fase de desenvolvimento,
embora alguns estudos j tenham demonstrado o seu potencial para produo de biomassa e
lpidos, aps acerto e otimizao das condies de operao (Heredia-Arroyo et al., 2011; Mitra
et al., 2012).
Como se pode observar, dependendo da tecnologia escolhida para o crescimento
fotoautotrfico, diferentes obstculos se apresentam na implementao do processo. Estando
sujeito s condies ambientais, o sistema de lagoa aberta suscetvel ocorrncia de
contaminaes e alteraes nos parmetros de cultura. No entanto, o investimento de capital
necessrio consideravelmente inferior implementao de um fotobiorreator. Assim sendo,
surgiram sistemas hbridos, que combinam ambas as tecnologias para produo de biomassa.
Desta forma, consegue-se aumentar a eficincia global do processo, tornando comercialmente
atrativo para gerao de biocombustveis. Basicamente, as culturas so inoculadas inicialmente
num reator fechado, de modo a crescerem sob condies otimizadas. Posteriormente, uma
poro dessas culturas transferida para lagoas abertas, onde a limitao de nutrientes no
meio conduz ao aumento da produtividade em lpidos. Em suma, trata-se de um sistema de
produo que permite extrair as vantagens das duas tecnologias (Gouveia, 2011).
No caso dos fotobiorreatores, o modo de funcionamento dos mesmos pode ter tambm
influncia na produo de biomassa. Tal como acontece com todos os tipos de reatores
fechados, o processo pode ser contnuo ou por partidas (batch). O funcionamento em contnuo
apresenta algumas vantagens como maior controlo das condies de cultura, regulao da
extenso do crescimento das microalgas e da concentrao da biomassa e ainda obteno de
resultados mais fiveis, dado o estado estacionrio do processo (Brennan and Owende, 2010;
Mata et al., 2010).
As tecnologias de produo de biomassa j referidas baseiam-se todas no crescimento de
microalgas em suspenso, ou seja, sistemas que promovem o crescimento de microalgas
suspensas num meio nutritivo. A grande maioria de todos os processos existentes quer para
produo de biomassa, quer para tratamento de guas residuais com base em microalgas, so
culturas em suspenso. No entanto, estas tecnologias tm em comum a dificuldade na recolha
de biomassa, isto , o processo de separao da biomassa da soluo e posterior processamento.
O estudo da produo de biomassa baseada em culturas imobilizadas tornou-se uma questo
13
pertinente, dada a maior facilidade na fase de recolha da biomassa (Lam and Lee, 2012). De
forma simplificada, possvel dividir as culturas imobilizadas em duas categorias: imobilizao
de microalgas em matriz e em biofilme. Na primeira situao as clulas so aprisionadas num
gel de polissacardeos, ou seja, uma matriz de alginatos ou outros polmeros que impedem a
mobilidade das microalgas na soluo. Na segunda tcnica, promove-se o processo natural de
aderncia de microrganismos em superfcies, originando biofilme. O crescimento microbiano,
nas faces de uma superfcie presente num meio aqutico, resulta na excreo de compostos
orgnicos como polissacardeos, protenas e cidos nucleicos. Essa concentrao de compostos
orgnicos vai conduzir adeso e posterior crescimento de microalgas na superfcie, resultando
naquilo que se designa habitualmente por biofilme (Christenson and Sims, 2011). As tecnologias
de crescimento de microalgas em culturas imobilizadas acarretam elevados custos, pelo que a
sua implementao a escala comercial no se afigura como sendo provvel. No entanto, as
culturas imobilizadas apresentam-se como sendo bastante eficazes na remoo de nutrientes e
outros poluentes em guas residuais (de-Bashan and Bashan, 2010; Tam and Wong, 2000).
2.4 Remoo de nutrientes em guas residuais

O estudo da remoo de nutrientes em guas residuais por parte de microalgas tem sido
alvo de intenso estudo nos ltimos anos. Esta possibilidade permite aliar o tratamento de guas
contaminadas produo de biomassa, reduzindo os custos e criando uma alternativa
ambientalmente e economicamente sustentvel.
Os principais nutrientes presentes em guas residuais, que as microalgas aparentam
remover com bastante eficcia so o azoto e o fsforo, visto serem fundamentais para o
processo metablico das mesmas, seja ele fotoautotrfico ou heterotrfico. A presena de
carbono orgnico no meio tambm poder ter grande influncia, principalmente nas culturas
heterotrficas, sendo que para alm de CO2, as formas inorgnicas (HCO3- e CO32-) dissolvidas
no meio tambm influenciam a taxa de crescimento em certas condies. O azoto e fsforo so
dois elementos que fazem parte da composio de guas residuais com diferentes origens. A
Tabela 2.2 apresenta a composio genrica de guas residuais provenientes de diferentes
setores. Como se pode observar, a concentrao dos elementos referidos varia consoante o tipo
de origem da gua residual, o que significa que possvel identificar efluentes mais aptos para
o crescimento de microalgas, em funo da composio da razo ideal N/P (Cai et al., 2013).
Pittman et al. (2011) analisaram com maior detalhe as caractersticas e a adequabilidade de
cada categoria de gua residual, tendo em conta o seu potencial para posterior produo de
biocombustveis. O desafio atual passa por otimizar o processo, identificando as concentraes
ideais de azoto e fsforo para as diferentes condies de cultura. A razo N/P parece ser
fundamental, visto que estudos realizados com elevadas concentraes de um destes elementos
e baixas quantidades do outro, demostraram uma reduo da taxa de crescimento (Xin et al.,
14
2010). A chamada razo Redfield (106C:16N:1P) que estima a composio elementar das
clulas de microalgas, utilizada como ponto de partida para estimar a razo N/P ideal no
meio (Behrens, 2005). Pressupe-se que a razo crtica ser 16:1, no entanto vrios estudos j
testaram diferentes razes. bastante usual encontrar tambm na literatura a referncia
frmula emprica calculada por Stumm (C106H263O110N16P), para alm de outros estudos que
apontam razes semelhantes como 119C:17N:1P apontado por Hillebrand and Sommer (1999).
Estudos recentes estimaram que a razo ideal para o crescimento de microalgas dever rondar
os 7-8 (Cai et al., 2013; Xin et al., 2010). Desta forma, possvel justificar a combinao da
produo de biomassa a partir de microalgas com o tratamento de guas residuais, j que as
razes N/P encontradas em guas residuais no se afastam muito do valor que se pensa ser o
ideal, com base nos estudos de Cai et al. (2013) e Farooq et al. (2013)(ver Tabela 2.2).
Tratando-se dos nutrientes fundamentais para o seu crescimento, a remoo de azoto e fsforo
presentes em guas residuais, por parte de microalgas, um processo bastante eficaz. Vrios
autores j testaram este processo para diferentes espcies de microalgas, com diferentes
concentraes de azoto e fsforo, de modo a averiguar a eficincia do processo.
Tabela 2.2- Caraterizao da composio genrica em azoto e fsforo de vrios tipos de guas
residuais (adaptado de Cai et al. (2013))
Tipo de gua
residual
Origem
TN (mg/L)
TP (mg/L)
N/P
Municipal
Esgoto
15-90
5-20
3,3
Pecuria de leite
185-2636
30-727
3,6-7,2
Avicultura
802-1825
50-446
4-16
Suinicultura
110-3213
310-987
3,0-7,8
Pecuria de corte
63-4165
14-1195
2,0-4,5
Txtil
21-57
1,0-9,7
2,0-4,1
Vincola
110
52
2,1
Curtume
273
21
13,0
Papel
1,1-10,0
0,6-5,8
3,0-4,3
Azeite
532
182
2,9
Cervejeira
30-75
12-20
1,7-3,1
Estrume de pecuria de leite
125-3456
18-250
7,0-13,8
Estrume de avicultura
1380-1580
370-382
3,6
Lamas de esgoto
427-467
134-321
1,4-3,2*
Resduos orgnicos urbanos
1640-1885
296-302
5,5-6,2*
Agropecuria
Industrial
Efluente de
digesto
anaerbia
NOTA: TN Azoto Total; TP Fsforo Total; N/P razes mssicas;* No disponvel na fonte, calculado.
15
A Tabela 2.3 apresenta os resultados obtidos para alguns dos estudos mais recentes
realizados nesse mbito. De forma genrica, uma maior concentrao de azoto conduz a uma
taxa de crescimento superior, desde que a presena de fsforo no meio no seja inferior ao
valor mnimo limitante. Apesar da remoo de azoto ser mais evidente, por normalmente se
encontrar em maior percentagem nas guas residuais, a remoo de fsforo tambm
altamente eficiente. A otimizao da razo N/P fulcral para a rentabilidade do processo,
visto que a limitao de azoto pode conduzir a uma taxa de crescimento inferior, mas pode
aumentar a produtividade em lpidos. Esta situao comercialmente vantajosa para a
posterior recolha da biomassa com vista produo de biocombustveis (Griffiths et al., 2014).
Sendo assim, mais estudos relativamente a este parmetro so necessrios, para otimizar ao
mximo o processo de produo de biomassa a partir de guas residuais.
O estudo das cinticas de remoo de nutrientes importante para compreender melhor
o modo como os mesmos so assimilados pelas microalgas. Esta informao essencial para um
dimensionamento correto de processos em maior escala, visto que importa saber com que
velocidade ocorre a assimilao dos diferentes nutrientes, para calcular o tempo de reteno
nos reatores ou lagoas. A taxa de remoo de azoto por parte das espcies S. intermedius e
Nannochloris sp. em culturas suspensas foi estimada em 83 mgN L-1 d-1 e 56 mgN L-1 d-1,
respetivamente.
Tabela 2.3 - Remoo de azoto e fsforo em guas residuais por microalgas.
Azoto Total
Ci
%
(mg/L)
Rem.
Fsforo Total
Ci
%
(mg/L) Rem.
(d-1)
Ref.
12-28
36-197
51-96
3,5-4,0
95-96
0,110,13
(Wang
et al.,
2014)
12-28
36-198
46-93
3,5-4,1
95-96
0,110,14
(Wang
et al.,
2014)
57
0,19
(AbouShanab
et al.,
2013)
15,8
83
0,25
(Ji et
al.,
2014)
45-99
0,1-2,0
99
(Xin et
al.,
2010)
69-83
18-156
85100
0,290,49
(Zhu et
al.,
2013)
Espcie
Meio de
cultura
Durao
(d)
Chlorella
sp.
Municipal+
lama digerida
Micractinium
sp.
Municipal+
lama digerida
C. vulgaris
Industrial
(pecuria)
20
56
52
13,5
M. reisseri
Mistura
(municipal+
indstria
mineira
15
56
97
Scenedesmus
sp.
Artificial
13
2,5-25
C. zofingiensis
Industrial
(pecuria)
10
17-148
NOTA: Ci - concentrao inicial; - taxa de crescimento.

16
No que diz respeito remoo de fsforo, os valores obtidos foram 21 mgP L-1 d-1 e 10 mgP
L-1 d-1, para S. intermedius e Nannochloris sp., respetivamente (Jimnez-Prez et al., 2004).
Num outro estudo, desta vez testando a espcie C. vulgaris, as taxas de remoo dos mesmos
nutrientes foram 10,5 mgN L-1d-1 e 2,0 mgP L-1d-1, sendo consideravelmente inferiores aos valores
previamente referenciados (Aslan and Kapdan, 2006). No entanto, outras condies
experimentais para alm das espcies, como a intensidade luminosa e concentrao de
nutrientes no meio, diferem, o que pode explicar a discrepncia entre os dois resultados.
Entretanto, o estudo dos mesmos parmetros em diferentes tcnicas de cultura tambm j foi
estudado, nomeadamente para culturas imobilizadas (Kapdan and Aslan, 2008). Visto que o
objeto de estudo no presente trabalho o crescimento de microalgas em suspenso, no se
aprofundar a anlise quanto s culturas imobilizadas. A maioria dos estudos aponta para uma
velocidade de remoo de azoto do meio superior velocidade de assimilao de fsforo, por
parte das microalgas. Importa compreender melhor os mecanismos que intervm nestes
processos e de que forma fatores como a concentrao inicial no meio, pH e temperatura
afetam o desempenho das microalgas, na remoo de nutrientes.
17
3. Avaliao da Produo de Biomassa e Remoo

de Nutrientes em guas Residuais
3.1 Material e mtodos
3.1.1 Instalao experimental
As culturas foram inoculadas (sem recurso a tcnicas asspticas) durante 12 dias partindo
de uma concentrao celular inicial entre os 20-30 mg/L, para todas as culturas arejadas (1 L).
Como j referido, a agitao das mesmas foi obtida por injeo de ar atmosfrico na base dos
frascos. A temperatura inicial rondava os 221C, ou seja, semelhante temperatura ambiente.
A temperatura era registada diariamente para observar a sua variao ao longo da experincia,
com recurso a um medidor WTW Oxi 340i da WTW GmbH. A instalao (ver Figura 3.1) estava
sujeita a um fotoperodo 24:0 (contnuo) e comportava um conjunto de 4 lmpadas
fluorescentes comuns de 18 W, resultando numa intensidade luminosa superfcie dos frascos
entre 2,5 e 3,0 klux. As lmpadas encontravam-se, aproximadamente, a 30 cm da superfcie
onde estavam assentes as culturas. A intensidade luminosa era tambm monitorizada
diariamente, de formar a garantir que se mantinha constante, com recurso a um medidor de
luz modelo IsoTech Lux-1335 Light Meter. As diferentes condies testadas resultaram da
variao dos seguintes parmetros: (i) razo N/P do meio de cultura; (ii) razo NH4+/NO3- como
fonte de azoto inorgnico; (iii) espcie de microalgas.
3.1.2 Meio de cultura e microrganismos
As microalgas alvo de estudo neste trabalho foram obtidas a partir do American Type
Culture Collection (ATCC) e inoculadas em meio de cultura teste da OCDE (OECD, 2011)
modificado, com a seguinte composio (mg L-1): 12 MgCl26H2O; 18 CaCl22H2O; 15 MgSO47H2O;
20 KH2PO4; 0,08 FeCl36H2O; 0,1 Na2EDTA2H2O; 0,185 H3BO3; 0,415 MnCl24H2O; 0,003 ZnCl2;
0,0015 CoCl26H2O; 10-5 CuCl22H2O; 0,007 Na2MoO42H2O e 1300 NaHCO3. Por forma a testar a
fonte preferencial de azoto por parte da C. vulgaris e P. subcapitata, adicionaram-se solues
de NH4Cl e NaNO3 com diferentes razes molares, ou seja, foi testada a preferncia por NH4+
ou NO3-. A composio em NH4Cl e NaNO3, para as diferentes composies testadas,
apresentada na Tabela 3.1. As culturas foram inoculadas, em duplicado, em frascos de vidro
borosilicato com 1 L de volume e mantidas temperatura ambiente e sujeitas continuamente
a uma intensidade luminosa de 2,5-3,0 klux. A agitao das culturas foi obtida atravs do
borbulhamento de ar atmosfrico, com recurso a bombas de ar Trixie D-2463 Tarp (50-300L),
com um caudal de ar igual a 180 L/h.
19
Avaliao da Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes em guas Residuais
Tabela 3.1 Concentraes de NH4Cl e NaNO3 para os diferentes ensaios realizados.

Razo N/P
8
16
24
Razo
NH4+ : NO3-
NH4Cl
(mg L-1)
63
126
189
2:0
3e6
NaNO3
(mg L-1)
100
200
300
0:2
2e5
NH4Cl /
NaNO3
(mg L-1)
31,5/ 50
63 / 100
94,5/ 150
1:1
Ensaio
Nutriente
1e4
NOTA: C. vulgaris: ensaios 1, 2 e 3; P. subcapitata: ensaios 4, 5 e 6.
3.1.3 Mtodos de anlise

Todas as culturas eram alvo de medies dirias da temperatura, oxignio dissolvido, pH
e densidade tica. A densidade tica a 750 nm (DO750) era medida com recurso a um
espetrofotmetro (ver Tabela 3.2), tendo sido preparadas previamente 2 curvas de calibrao
que correlacionam a densidade tica com a concentrao de biomassa, para ambas as espcies
(Griffiths et al., 2011). A biomassa em peso seco (g L-1, ) em funo da densidade tica (DO750,
), estimada com base nas seguintes regresses lineares: = 1,796 + 0,043 ( 2 = 0,998)
para a espcie C. vulgaris e = 2,614 + 0,069 (2 = 0,995) para a espcie P. subcapitata. Os
valores de absorvncia medidos estavam compreendidos entre 0,1 e 0,8, tendo sido diludas as
amostras que excediam o limite referenciado.
Figura 3.1- Instalao experimental usada para crescimento das microalgas.
20
Figura 3.2 Imagem de uma amostra recolhida: a) - antes e b) - aps centrifugao.
A recolha de amostras das culturas, para a anlise de carbono orgnico dissolvido (COD)
e cromatografia inica, foi feita nos primeiros 3 dias de ensaio, num dia intermdio e no ltimo
dia de ensaio. As mesmas amostras eram posteriormente submetidas a centrifugao, com
recurso a uma centrifugadora Himac CT6E da Hitachi Koki Co., Lmt., durante 15 minutos a uma
velocidade de rotao de 4000 rotaes por minuto (ver Figura 3.2).
Posteriormente, as amostras eram filtradas atravs de filtros de seringa em membrana
de nylon com poros de 0,45 m (Acrodisc, Pall). A soluo resultante era submetida a anlises
para identificar os nveis de carbono orgnico/inorgnico dissolvido e conduzida para
cromatografia inica, processo usado para estimar as concentraes dos nutrientes no meio de
cultura. Os equipamentos usados para praticar os mtodos de anlise citados esto
identificados na Tabela 5 (ver Anexo A.1).
A anlise de COD foi efetuada num analisador TOC-VCSN da Shimadzu, o qual utiliza as
tcnicas de oxidao cataltica por combusto a 680 C e deteo por infravermelho nodispersivo (NDIR, do ingls non-dispersive infrared). A concentrao de COD determinada
atravs da diferena entre o carbono total (CT) e o carbono inorgnico (CI) de amostras filtradas
(COD=CT-CI). Na anlise do CT, uma poro da amostra sujeita a oxidao cataltica por
combusto a 680 C e todo o carbono (orgnico e inorgnico) convertido a CO2, o qual
quantificado por um detetor de NDIR. Na anlise do CI, uma poro da amostra acidificada
com HCl, o que permite que s a frao inorgnica do carbono seja convertida a CO2, o qual
tambm quantificado por intermdio de um detetor de NDIR. Este analisador foi calibrado com
solues padro de hidrogenoftalato de potssio para deteo do CT e com uma mistura de
NaHCO3/Na2CO3 para determinao de CI.
21
Tabela 3.2 Listagem dos equipamentos usados na etapa de mtodos de anlise.

Parmetro de anlise
Modelo do equipamento
Marca
Oxignio dissolvido
WTW Oxi 340i
WTW GmbH
pH
pH 212
Hanna
Instruments
Densidade tica
(espetrofotmetro)
Genesys 10uv Scanning
Thermo
Scientific
Cromatografia inica
ICS-2100 (anies)
DX-120 (caties)
Dionex
Carbono orgnico/inorgnico
(COD-CI)
TOC-VCSN
Shimadzu
Os resultados obtidos a partir da cromatografia inica permitem avaliar a remoo de

nutrientes, a partir da anlise da concentrao de dados ies no meio (ver Anexo A.2). O
equipamento est munido com colunas AS9-HC/CS12A (4 mm250 mm) e supressores
ASRS300/CSRS300 (4 mm), respetivamente, para anies (Fl-, Cl-, NO2-, NO3-, SO42-, Br- e PO43) e caties (Li+, Na+, NH4+, K+, Mg2+ e Ca2+). A determinao de anies/caties compreende 12
minutos de leitura, com recurso a uma eluio isocrtica com 30 mM NaOH/20 mM CH3SO2OH a
um caudal de 1,5/1,0 mL min-1. A quantificao da remoo de azoto inorgnico e fsforo um
dos principais objetivos traados para este trabalho, recorrendo-se a este mtodo de anlise
para o cumprir. No entanto, a partir dos dados recolhidos com base neste mtodo (ver Figura
3.3), quantificou-se a remoo das seguintes espcies inicas: NH4+, NO3-, PO43-, SO42-, K+.
Figura 3.3 Cromatograma obtido para uma das amostras recolhidas
22
Os resultados da cromatografia inica eram obtidos com recurso ao programa informtico

Chromeleon, desenvolvido pela mesma marca responsvel pela comercializao do
equipamento. Desta forma, a aquisio e converso dos dados simplificada, sendo possvel
converter o sinal obtido para valores de concentrao, recorrendo a retas de calibrao
previamente estabelecidas para cada espcie inica.
3.1.4 Modelos cinticos
A partir dos dados recolhidos diariamente, determinou-se a taxa especfica de
crescimento (, d-1) e a concentrao mxima de biomassa (Xmax, g L-1) para cada espcie
testada, nas diferentes condies j referidas. O clculo foi feito tendo por base a Equao
3.1, tal como sugerido por outros trabalhos (Gonalves, 2012; Wang et al., 2014):
(1 0 )
= =
1 0
(3.1)
onde que X1 a concentrao de biomassa (g L-1) no instante t1 e X0 a concentrao de

biomassa no instante inicial (t0) do respetivo ensaio. Este parmetro permite identificar com
maior clareza qual o ensaio, ou seja, quais as condies mais favorveis para o crescimento de
microalgas, j que a cultura que apresentar o valor mais elevado ser aquela que apresentou
maior crescimento. Para alm de se ter procurado inocular todas as culturas com a mesma
concentrao inicial de biomassa, o clculo da taxa especfica de crescimento restringe-se
fase de crescimento exponencial (tendo sido considerados os dados obtidos at as 72 horas,
visto que o ponto de amostragem s 96 horas pode pertencer j a uma fase de transio). Desta
forma, procura-se igualar as variveis com influncia na comparao entre resultados de
diferentes culturas.
A produtividade em termos de biomassa (Px, g L-1 d-1) tambm foi calculada, resultando
da diferena entre a concentrao de biomassa por unidade de tempo entre duas amostras
consecutivas (Equao 3.2):
=
+1
+1
(3.2)
Para permitir a comparao deste parmetro entre ensaios com condies diferentes,
procedeu-se ao clculo da produtividade mxima (Px max) e a produtividade mdia (Px med). O
primeiro resulta do clculo da produtividade entre 3 valores consecutivos durante todo o
ensaio, considerando-se como mximo aquele que apresentar o resultado mais elevado. A
produtividade mdia resulta da mdia geral do ensaio, isto , a razo entre toda a biomassa
produzida e o tempo de ensaio decorrido (Griffiths et al., 2014). Com base nos dados das
concentraes dos diferentes nutrientes ao longo dos ensaios, possvel calcular as taxas de
remoo (R) de alguns nutrientes especficos, com base na Equao 3.3 (Wang et al., 2014):
=
0
0
(3.3)
23
sendo S0 a concentrao de um dado nutriente no instante inicial (t0) e Si a concentrao do

mesmo nutriente no instante ti. Este clculo pode ser aplicado no s remoo de azoto e
fsforo, mas tambm a outros nutrientes que apresentem uma diminuio gradual da sua
concentrao na soluo.
Importa ainda realar que a cintica de remoo de alguns nutrientes neste trabalho
ajusta-se aproximadamente a uma cintica de 1 ordem (Wang et al., 2014). Como tal, a
remoo de nutrientes pode ser expressa por uma expresso idntica Equao 3.4:
= 0
(3.4)
A obteno da constante cintica de remoo (k) feita atravs da linearizao da

Equao 3.4, convertendo a expresso para a forma exibida na Equao 3.5. Desse forma,
possvel estimar a constante cintica pelo declive da reta obtida.
( ) =
0
(3.5)
Assim sendo, possvel calcular o valor das constantes cinticas de remoo para os
diferentes nutrientes. Este parmetro poder identificar as condies para as quais se obteve
taxas de remoo mais elevadas. Com base nos dados obtidos experimentalmente, verificou-se
que o NO3- no era imediatamente assimilado por algumas culturas. O Modelo de Gompertz
modificado (Equao 3.6) aplicado em processos biolgicos (elekli et al., 2008; Queiroz et al.,
2011), representa casos em que a variao de um parmetro apresenta trs fases distintas: uma
fase inicial de adaptao, uma fase intermdia correspondente ao crescimento exponencial e
uma fase final de estagnao.
() = 0 + ( 0 ) {[ ( ) + 1]}
(3.6)
Para o tipo de anlise pretendida, tendo em conta que o objetivo analisar a remoo
de nutrientes (e no o crescimento da cultura), o mesmo modelo foi ajustado para a remoo
de nutrientes e simplificado, visto que apenas se pretende estimar o tempo de atraso (, h)
para a completa remoo do nutriente (Sf = 0; concentrao final do nutriente). O parmetro
kG (h-1) est associado velocidade de remoo do nutriente na fase exponencial. Uma
modificao semelhante do Modelo de Gompertz j foi aplicada em outros estudos (Mohamed
et al., 2014; Queiroz et al., 2011).
O tempo de atraso na assimilao de NO3- obtido com a aplicao deste modelo, fornece
dados empricos que comprovam que a assimilao do mesmo no ocorre imediatamente aps
o incio do ensaio.
24
3.2 Resultados e discusso

De modo a facilitar a interpretao de todos os resultados obtidos, esta seco est
dividida nas duas vertentes alvo de estudo neste trabalho: a produo de biomassa e a remoo
de nutrientes. Na primeira parte, so apresentados os dados relacionados com o crescimento
das microalgas, isto , todos os parmetros provm dos valores da concentrao de biomassa
obtidos no decorrer dos ensaios. Posteriormente, feita a anlise da remoo dos nutrientes
contidos no meio de cultura, desde percentagens de remoo ao clculo das cinticas de
remoo dos mesmos.
3.2.1 Produo de biomassa
A medio contnua da concentrao de biomassa ao longo do perodo de ensaio permite
calcular um conjunto de parmetros que ajudam a caracterizar o comportamento do
crescimento das microalgas. Para alm de identificar as condies e espcie para as quais se
atingiu maior concentrao de biomassa, procedeu-se ao clculo das taxas de crescimentos e
produtividades para cada ensaio testado.
Com base nos resultados obtidos poder ser apontada a razo N/P para a qual se verifica
maior crescimento e maior produtividade de biomassa. Para alm disso, ser feita a mesma
anlise para os ensaios com diferentes composies do meio. Com base nas curvas de
crescimento apresentadas na Figura 3.4, possvel afirmar que o comportamento genrico
entre as diferentes condies testadas para a mesma espcie semelhante. Na verdade, mesmo
entre as duas espcies a diferena reside na quantidade de biomassa produzida e no numa
diferena na evoluo do crescimento. De forma geral, verifica-se que at s 96 horas de
ensaio, ocorre um crescimento exponencial para ambas as espcies, convertendo-se aps as
168h num crescimento mais gradual, atingindo a fase estacionria para alguns casos especficos.
A partir dos mesmos grficos no possvel retirar concluses muito precisas quanto
velocidade de crescimento das culturas, bem como a concentrao mxima de biomassa
atingida em cada ensaio. Com base nos mesmos, consegue-se deduzir quais foram os ensaios
para os quais se atingiram mais valores de produtividade de biomassa. No entanto, todos estes
parmetros foram calculados, de forma a ser possvel retirar as concluses necessrias.
Para proceder a uma anlise clara e rigorosa do crescimento verificado para todos os
ensaios, apresenta-se a Tabela 3.3, que resume todos os parmetros calculados com base nos
dados obtidos para a concentrao de biomassa em todos os ensaios realizados.
25
A.
D.
8
24
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
24
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
0,8
16
24
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
0,8
Concentrao de biomassa (g L-1)
16
0,7
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
16
24
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
0,8
0,8
16
16
24
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
0,8
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
0,8
16
24
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.4 Curvas de crescimento para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie P.
1:1 B e E; 0:2 C e F). Valores apresentados resultam da mdia obtida a partir de dois ensaios
independentes.
26
coeficiente de determinao (R2) superior a 0,97 para todas as amostras.
ajuste de uma regresso com base no mtodo dos mnimos quadrados. O resultado apresenta-se na forma de valor erro-padro, com um
Os valores apresentados resultam da mdia obtida a partir de dois ensaios independentes. A taxa de crescimento calculada atravs do
crescimento e produtividade de biomassa mxima e mdia
Tabela 3.3 Parmetros de anlise do crescimento das microalgas para os diferentes ensaios: concentrao de biomassa mxima, taxa de
27
No que diz respeito s concentraes mximas obtidas para as microalgas, os valores

variaram entre os 0,188 e os 0,707 g L-1. A espcie C. vulgaris atingiu valores superiores em
comparao com a espcie P. subcapitata, sendo que para a primeira se obteve valores mximo
de concentrao entre os 0,622 e os 0,707 g L-1, enquanto na segunda a concentrao de
biomassa restringiu-se a um intervalo entre 0,188 e 0,288 g L-1. Os valores mximos de
concentrao correspondem a culturas com razes N/P igual a 16 e 24 e os mnimos a culturas
de razo 8, o que concordante com a ideia que mais substrato levar a maior produo de
biomassa.
O clculo da taxa de crescimento na fase exponencial, permite quantificar e identificar
com maior rigor as culturas para as quais a velocidade de crescimento foi superior. A C. vulgaris
apresenta valores entre 0,554 e 0,848 d-1, ao passo que a P. subcapitata apresenta valores entre
0,574 d-1 e 1,16 d-1. No entanto, importa realar que o maior crescimento verificado para a P.
subcapitata est relacionado com uma fase de crescimento mais curta,atingindo uma fase de
de estagnao no final dos respetivos ensaios, enquanto a C. vulgaris apresenta um crescimento
continuado. Com base em estudos prvios onde se testaram diferentes condies de cultura,
constata-se que os resultados obtidos enquadram-se no intervalo de 0,31-1,50 d-1, para as taxas
mximas de crescimento para a espcie C. vulgaris (Blair et al., 2014; Griffiths et al., 2014;
Pires et al., 2013). No que diz respeito espcie P. subcapitata, apesar de no existirem tantos
estudos focados nesta vertente, um conjunto de trabalhos sobre o crescimento desta espcie
(Moreira-Santos et al., 2004; Pires et al., 2013; Terigar and Theegala, 2014), aponta para um
intervalo de valores entre 0,635 e 1,44 d-1, como taxa especfica mxima de crescimento.
Quanto razo NH4+:NO3-, verifica-se que a cultura composta por NH4+e NO3- (1:1) da espcie
C. vulgaris evidenciou um crescimento mais elevado. O ensaio 4 apresenta as taxas de
crescimento mais elevadas de todos os ensaios testados. Comparando as duas espcies, deduzse que a P. subcapitata se adapta melhor a um meio com NO3-, j que apresenta valores da taxa
de crescimento superiores C. vulgaris, nos ensaios compostos unicamente por NO3- (ensaios 3
e 6). Verifica-se que para a C. vulgaris as taxas de crescimento mximas foram obtidas com
razo N/P igual a 8 nos ensaios 1 e 2 e 16 no ensaio 3. Simultaneamente, a espcie P.
subcapitata regista maior taxa de crescimento na razo 16, para todas as condies testadas.
Este facto pressupe que uma concentrao inferior de azoto no meio conduz a um crescimento
mais rpido e eficiente e que, portanto, a razo ideal para estimular a produo de biomassa
ser um valor entre os 8 e 16.
Para suportar esta hiptese, o passo seguinte baseou-se na interpretao dos resultados
obtidos para o clculo da produtividade de biomassa. A Tabela 3.3 apresenta valores de
produtividade mxima e mdia. A produtividade mdia permite estimar a quantidade de
biomassa que potencialmente se pode gerar numa cultura. No entanto, para um processo
industrial, espera-se que as culturas permaneam continuamente na fase exponencial de
28
crescimento, onde a cultura apresenta uma produtividade mxima. Como tal, o valor de
produtividade mxima trata-se de um parmetro com maior preponderncia na identificao
das condies timas de cultura, j que, quanto mais elevado for o valor obtido mais eficiente
est a ser o crescimento. A espcie C. vulgaris apresenta valores de produtividade mxima num
intervalo entre 0,077 e 0,106 g L-1 d-1, enquanto a outra espcie analisada exibe valores
significativamente inferiores. O valor mais elevado obtido para a P. subcapitata no atinge
sequer metade (0,050 g L-1 d-1) do respetivo valor para a C. vulgaris. Os resultados obtidos para
a C. vulgaris enquadram-se dentro dos intervalos 0,016-0,373 e 0,066-0,162 g L-1 d-1 obtidos
pelos trabalhos realizados por Griffiths et al. (2014) e Pires et al. (2013), respetivamente. Ainda
relativamente produtividade de biomassa, os valores obtidos para a P. subcapitata
assemelham-se aos obtidos por outro estudo (0,034-0,162 g L-1 d-1) realizado com a mesma
espcie (Pires et al., 2013). A partir destes dados j possvel verificar que a espcie P.
subcapitata demonstra nveis de produtividade inferiores C. vulgaris, apesar de apresentar
taxas de crescimento superiores, em alguns casos. Assim, possvel afirmar que para as
condies testadas, a C. vulgaris possui um maior potencial para a produo de biomassa.
Importa tambm realar, que a forma de azoto disponvel no meio no aparenta ter grande
influncia em termos de produtividade, dada a semelhana entre os valores obtidos para as
culturas da mesma espcie.
Quanto relao entre produtividade mxima e razo N/P, conclui-se que os valores mais
elevados correspondem razo 8 para os ensaios 1 e 3 (C. vulgaris) e razo 16 para os
restantes. Assim sendo, conclui-se que, tal como o verificado para a taxa de crescimento, a
espcie P. subcapitata apresenta maior crescimento para a razo 16, ou seja, esse ser o rcio
para o qual as condies de cultura so ideais. Atualmente, no se encontra na literatura
trabalhos onde se procurou otimizar a razo N/P para o crescimento da P. subcapitata.
Por outro lado, a espcie C. vulgaris volta a apresentar valores mximos para a razo 8 e
16, tal como apontado na taxa de crescimento. Como tal, a hiptese mais provvel a razo
ideal para o crescimento desta espcie de microalgas cifrar-se entre 8 e 16. Na verdade,
analisando a situao do ponto de vista da maior eficincia e dado que as diferenas no so
significativas, pode-se considerar que o rcio timo de N/P para a produo de biomassa a
partir desta espcie de microalgas 8. Como j fora referido existem alguns trabalhos que
estimaram a razo N/P ideal para o crescimento de microalgas a rondar os valores referidos
(Cai et al., 2013; Xin et al., 2010). Para alm disso, estudos onde se procurou otimizar
crescimento da C. vulgaris realizados por Hadj-Romdhane et al. (2012) e Kapdan and Aslan
(2008) concluram que os valores de 9,2 e 8, respetivamente, seriam as razes N/P molares
ideais. Todos estes dados corroboram a hiptese lanada com base nos resultados obtidos, de
que a razo molar ideal para esta espcie cifra-se nos 8/1 (N/P).
29
As diferenas na razo ideal para o crescimento das duas espcies testadas confirmam a
teoria de que a razo Redfield no se trata de um rcio timo universal, tratando-se
simplesmente de uma mdia ponderada para todas as espcies existentes. A razo N/P ideal
para o crescimento de uma dada espcie de microalgas depende das condies existentes,
podendo variar entre 8,2 e 45 (Klausmeier et al., 2004).
Com base nos resultados obtidos para a produo de biomassa, no possvel estabelecer
uma associao inequvoca entre a espcie preferencial de azoto para cada uma das espcies
analisadas. Os dados obtidos para a remoo de nutrientes podero oferecer uma perspetiva
mais clara sobre este especto. Antes disso, feita a anlise dos 3 parmetros associados s
condies de crescimento com particular relevncia: pH, temperatura e O2 dissolvido. O
comportamento evidenciado por todos os ensaios quanto evoluo temporal dos 3 parmetros
coincidente, pelo que, por razes prticas, optou-se por selecionar 2 casos exemplificativos
para anlise. Assim sendo, so apresentados os dados obtidos na cultura onde se verificou maior
concentrao de biomassa (ensaio 1, razo N/P 16) e os dados da cultura que apresentou menor
concentrao final de biomassa (ensaio 6, razo N/P 8). Desta forma, pretende-se recorrer a
dois exemplos discordantes para garantir a abrangncia das concluses obtidas. Para tornar a
interpretao dos resultados obtidos mais intuitiva, apresenta-se na Figura 3.5, variao
temporal da concentrao de biomassa e, simultaneamente, cada um dos trs parmetros
analisados, para as duas culturas referidas (ver Anexo B.1, B.2 e B.3 para restantes culturas).
No que diz respeito variao do pH, constata-se que existe um aumento de 8-8,25 at
9-9,25, ao fim de aproximadamente 24 horas de ensaio. Posteriormente, ocorre uma subida
gradual do valor de pH at prximo das 168 horas, a partir das quais se verifica uma estagnao
e ligeiro decrscimo do pH. Como se verifica pela anlise dos grficos A e D da Figura 3.5, o
aumento do pH do meio coincide com a fase de crescimento exponencial das culturas. Este
fenmeno explicado pelo consumo de CO2 necessrio para a fotossntese, aumentando a
concentrao de HCO3- e CO32- no meio e consequente subida do valor de pH. Assim que a cultura
transita para uma fase de crescimento menos acentuada, a alcalinidade do meio reduz
ligeiramente, devido diminuio do consumo de CO2 dissolvido, at atingir o equilbrio.
Comparando os valores obtidos pelas duas espcies, verifica-se que a cultura inoculada com C.
vulgaris apresenta, em mdia, uma alcalinidade superior P. subcapitata. Esta situao poder
estar relacionada com o facto da concentrao de biomassa ser tambm superior, o que
pressupe um maior consumo de CO2 e, como tal, um aumento mais significativo do pH.
30
A.
D.
Biomassa (g/L)
pH
pH
0,7
9,75
0,7
9,75
0,6
9,50
0,6
9,50
0,5
9,25
0,5
9,25
0,4
9,00
0,4
9,00
0,3
8,75
0,3
8,75
0,2
8,50
0,2
8,50
0,1
8,25
0,1
8,25
0,0
8,00
10,00
pH
pH
0,8
0,0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
8,00
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
E.
T (C)
28,0
27,0
0,6
26,0
0,5
25,0
0,4
24,0
0,3
23,0
0,2
22,0
0,1
21,0
0,7
0,0
0,8
20,0
T (C)
28,0
0,7
27,0
0,6
26,0
0,5
25,0
0,4
24,0
0,3
23,0
0,2
22,0
0,1
21,0
0,0
20,0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
O2 diss (mg/L)
Biomassa (g/L)
O2 diss (mg/L)
0,8
0,7
9,0
0,7
9,0
0,6
8,0
0,6
8,0
0,5
7,0
0,5
7,0
0,4
6,0
0,4
6,0
0,3
5,0
0,3
5,0
0,2
4,0
0,2
4,0
0,1
3,0
0,1
3,0
0,0
2,0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
10,0
[O2] dissolvido (mg L-1)
0,8
Biomassa (g/L)
0,0
10,0
C.
Biomassa (g/L)
Biomassa (g/L)
Temperatura (C)
0,8
Temperatura (C)
B.
Biomassa (g/L)
10,00
0,8
2,0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
Figura 3.5 Representaes grficas dos efeitos do crescimento das microalgas nos parmetros de
anlise para o ensaio 1 (C. vulgaris, razo N/P=16- A, B e C) e para o ensaio 6 (P. subcapitata, razo
N/P=8- D, E e F): pH (A e D), temperatura (B e E) e concentrao de oxignio dissolvido (C e F).
31
Quanto evoluo da temperatura das culturas, verifica-se tambm um aumento

significativo nas primeiras 24 horas de ensaio e posterior, aumento gradual. Considera-se que
a causa predominante para este aumento seja a exposio luz contnua, o que causa o
aumento da temperatura da soluo. Para alm disso, a temperatura ambiente pode ter
influncia, apesar de no to expressiva. possvel verificar algumas descidas de temperatura
para os dois ensaios, sendo que no grfico E da Figura 3.5, bastante percetvel uma diminuio
abrupta s 240 horas. Estas variaes esto relacionadas com o perodo de funcionamento do
equipamento de refrigerao (ar condicionado) do laboratrio onde a instalao experimental
estava colocada. O mesmo equipamento estava situado imediatamente acima da instalao
experimental, pelo que o efeito de arrefecimento adquiria outra preponderncia. No entanto,
no se apurou qualquer impacto negativo dessa situao na produo de biomassa. As
temperaturas globais das culturas variam entre os 23 e os 27 C, pelo que se ajustam gama
de temperaturas aceitvel para o crescimento de microalgas (Barsanti and Gualtieri, 2014).
Para finalizar, resta avaliar a concentrao de O2 dissolvido no meio. Como j foi
explicado, o O2 um dos produtos resultantes do metabolismo fotossinttico, pelo que de
prever o aumento da sua concentrao com o crescimento das microalgas. Contudo, a
concentrao excessiva de O2 tem um efeito adverso no crescimento das culturas, j que acaba
por se tornar txico para as mesmas. Por essa razo, se recorre ao borbulhamento de ar nas
culturas, de modo a promover a remoo de O2 dissolvido na cultura. O comportamento do O2
dissolvido semelhante evoluo do pH, j que esto claramente interrelacionados. O que se
verifica um aumento da concentrao nas primeiras 24 horas, sendo que com o decorrer do
ensaio a mesma vai diminuindo. Tal como acontece com o pH, medida que o crescimento se
torna cada mais gradual a produo de O2 diminui. A concentrao de O2 dissolvido para a
espcie C. vulgaris superior, visto que a concentrao de biomassa tambm ela superior.
O conjunto de todas estas ocorrncias permite confirmar algumas das concluses
previamente obtidas relativamente ao crescimento das culturas, pois so dados empricos que
resultam do mecanismo de fotossntese. Dado que as culturas foram testadas para um
crescimento fotoautotrfico, os indcios da ocorrncia de fotossntese comprovam que o
processo de crescimento das culturas seguiu a via pretendida.
3.2.2 Remoo de nutrientes

Para simplificar a leitura e interpretao dos resultados obtidos para os diferentes
nutrientes analisados, esta seco est dividida em subseces respeitantes a cada um deles.
Os parmetros calculados, de forma geral, esto relacionados com a eficcia de remoo de
cada nutriente e respetiva velocidade de remoo (cintica).
32
3.2.2.1 Carbono orgnico e inorgnico

A anlise destes parmetros visa verificar qual a fonte de carbono usada pelas microalgas
no seu metabolismo. A concentrao inicial de cada um destes estimada a partir da
composio do meio, sendo que considerado que no momento inicial considera-se como sendo
nula a concentrao de carbono orgnico. Verificou-se um comportamento genrico idntico
para todas as culturas testadas (ver Anexo B.4 e B.5) pelo que, apenas sero apresentados os
resultados obtidos para as culturas mistas de NH4+:NO3- das duas espcies (cultura 2 e 5).
Na Figura 3.6 possvel contemplar a variao da concentrao de carbono inorgnico ao
longo do tempo, para as culturas j referidas. Os resultados obtidos apontam para uma
oscilao da concentrao entre os 140-180 mg L-1, prximo do valor inicial terico de 186 mg
L-1. Estes dados mostram que, apesar de algumas variaes, as culturas apresentam valores
consideravelmente constantes para este parmetro, indiciando que o consumo de carbono
inorgnico corresponde mesma taxa temporal com que o CO2 dissolvido na cultura, devido
ao arejamento proporcionado.
A.
B.
8
225
16
24
16
24
240
200
220
175
200
CI (mg L-1)
CI (mg L-1)
260
180
150
160
125
140
120
100
100
75
80
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.6 Evoluo temporal da concentrao de carbono inorgnico nos ensaios 2 (A) e 5 (B).
A Figura 3.7 apresenta a variao temporal do CI, pH, temperatura e concentrao de

O2 dissolvido para as culturas referentes cultura inoculada no meio com razo N/P 16 do
ensaio 2. O comportamento das variveis analisadas foi semelhante nas restantes culturas (ver
Anexos B.1, B.2 e B.3).
No que diz respeito concentrao de carbono orgnico dissolvido, verifica-se um
comportamento semelhante ao registado para o CI, isto , a ocorrncia de ligeiras oscilaes
em torno de um intervalo genrico entre os 30-45 mg L-1 (Figura 3.8). Tal situao leva a crer
que a concentrao de carbono orgnico no meio dever ser um produto do metabolismo das
microalgas, no interferindo no mesmo.
33
B.
CI
IC
T (C)
225
200
9,50
200
26,0
175
9,20
175
25,0
150
24,0
125
23,0
22,0
CI (mg L-1)
9,80
CI (mg L-1)
225
pH
8,90
125
8,60
100
8,30
100
8,00
75
pH
150
75
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
27,0
Temperatura (C)
A.
21,0
0 24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
C.
CI
225
O2 dissolvido
7,7
7,5
175
CI (mg L-1)
7,4
150
7,3
125
7,2
100
7,6
200
7,1
75
7,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.7 Comparao da evoluo temporal da concentrao de carbono inorgnico (CI) com o pH
(A), temperatura (B) e concentrao de O2 dissolvido (C).
A.
B.
8
24
50
45
45
40
40
35
35
COD (mg L-1)
COD (mg L-1)
50
16
30
25
20
15
24
30
25
20
15
10
10
16
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.8 - Evoluo temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido nos ensaios 2 (A) e 5
(B).
34
3.2.2.2 NH4+
Como j foi explicado previamente, testaram-se diferentes concentraes de NH4+,
fazendo variar a razo N/P do meio de cultura. Como tal, 4 ensaios continham este nutriente,
sendo dois deles exclusivamente compostas pelo mesmo (ensaios 1 e 4) e outras duas
constitudas por uma mistura equimolar de NH4+:NO3-. Para todas elas, verificou-se uma
remoo total (100%) da concentrao inicial de NH4+, por volatilizao e assimilao pelas
microalgas. Na Figura 3.9, esto expressos os resultados obtidos para este nutriente, sendo que
apenas foi possvel ajustar cinticas de 1 ordem em trs culturas, dada a rpida remoo de
NH4+. Verifica-se que, de modo geral, ao fim de 48 horas de ensaio a NH4+ presente na soluo
foi completamente removida. Estes dados so auspiciosos no que diz respeito eficcia do
tratamento de guas residuais contendo o mesmo nutriente. Uma reduo abrupta da
concentrao de NH4+ foi verificada ao fim de apenas 3 horas de ensaio. Para analisar esta
situao, realizou-se um ensaio com o objetivo de quantificar a extenso de perda de NH4+ por
volatilizao, ou seja, perda para a atmosfera sob a forma de NH3 gasoso.
A.
C.
8
70,0
16
24
60,0
70,0
16
24
60,0
50,0
NH4+ (mg L-1)
M16= 36,6e-0,086t
R = 0,985
40,0
30,0
NH4+ (mg L-1)
50,0
40,0
30,0
M24 = 50,7e-0,063t
R = 0,938
20,0
10,0
M24 = 26,5e-0,048t
R = 0,688
20,0
10,0
0,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
D.
8
70,0
16
24
60,0
50,0
50,0
16
24
NH4+ (mg L-1)
60,0
NH4+ (mg L-1)
70,0
40,0
40,0
30,0
30,0
20,0
20,0
10,0
10,0
0,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.9 Evoluo temporal da concentrao de NH4+ para os ensaios 1 (A), 2 (B), 4 (C) e 5 (D).
35
Tabela 3.4 Parmetros cinticos e eficcia de remoo de NH4+.

Ensaio
Razo N/P
kN1
(d-1)
R2
Remoo
(%)
n.a.
n.a.
100
16
2,056
0,985
100
24
1,518
0,938
100
n.a.
n.a.
100
16
n.a.
n.a.
100
24
1,149
0,689
100
NOTA: n.a. No aplicvel.
Com a realizao do teste num perodo de 24 horas e medio da concentrao de NH4+

no instante inicial e final, verificou-se que ocorrera uma diminuio em cerca de 44% da
concentrao inicial. A rpida subida de pH e temperatura nas primeiras horas de ensaio levam
a que a reao de volatilizao ocorra em maior extenso do que o esperado. Esta situao j
foi reportada por outros autores (Martnez et al., 2000; Posadas et al., 2014), tendo estimado
a contribuio deste fenmeno para a remoo de NH4+ presente em soluo entre 58 a 82%.
Como tal, compreendeu-se que para uma correta avaliao da remoo deste nutriente
exclusivamente por via biolgica, teria de ser ponderado este valor no clculo dos parmetros
de remoo. Assim sendo, para o clculo das cinticas de remoo foi descontado a quantidade
de NH4+ perdida por volatilizao, estimada neste trabalho em 44%. Um dos objetivos deste
trabalho clculo das cinticas de remoo para alguns nutrientes. No caso especfico da NH4+,
a rpida remoo registada impossibilita o ajuste de um modelo cintico, visto no existir
pontos de dados suficientes. No entanto, conseguiu-se estimar as constantes de 1 ordem para
3 dos 6 ensaios compostos apenas por NH4+. Os resultados obtidos esto expressos na Tabela
3.4. Os valores obtidos para kN1 so relativamente semelhantes, confirmando que a remoo do
mesmo nutriente bastante rpida para todas as culturas testadas. Comparando com o
intervalo de valores obtidos por Wang et al. (2014) entre 0,05-0,16 d-1, verifica-se que este
resultado consideravelmente superior. Contudo, um outro estudo (Ruiz et al., 2012) obteve
resultados entre 1,4 e 1,7 d-1 para a remoo de azoto, tendo atingindo inclusivamente um valor
mximo de 2,5 d-1 para um meio exclusivamente composto por NH4+. Estes dados concedem
uma maior segurana quanto preciso dos resultados obtidos neste trabalho.
3.2.2.3 NO3Pela anlise da concentrao de nitrato em funo do tempo (Figura 3.10), verifica-se
para as culturas inoculadas com NH4+ e NO3- que o mesmo foi praticamente todo removido, com
exceo para apenas uma cultura. Nos ensaios 2 e 5 (A e C, Figura 3.10), a variao de NO3- no
se ajusta a uma cintica de 1 ordem, tendo sido aplicado o modelo de Gompertz modificado.
36
A.
C.
8
16
24
225
200
200
175
175
150
150
NO3- (mg L-1)
NO3- (mg L-1)
225
125
100
75
16
24
125
100
75
50
50
25
25
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
D.
8
225
16
24
200
200
M8 = 48,2e-0,029x
R = 0,766
175
150
M16= 214,6e-0,025x
R = 0,949
125
100
M24 = 234,7e-0,011x
R = 0,981
75
50
150
24
M16 = 92,3e-0,014x
R = 0,768
125
100
M24 = 209,0e-0,015x
R = 0,965
75
50
25
16
M8 = 31,3e-0,009x
R = 0,557
175
NO3- (mg L-1)
NO3- (mg L-1)
225
25
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.10 Evoluo temporal da concentrao de NO3- para os ensaios 2 (A), 3 (B), 5 (C) e 6 (D).
No que diz respeito s culturas exclusivamente constitudas por NO3- como composto
azotado, verifica-se que ocorre uma remoo que se aproxima de uma cintica de 1 ordem.
Facilmente se conclui pelos grficos B e D da Figura 3.10, que a remoo para a espcie P.
subcapitata mais rpida que no caso da C. vulgaris. No entanto, a determinao das cinticas
de 1 ordem permitiro suportar essa ideia, com base num modelo matemtico que traduz a
remoo de NO3- pelas microalgas. Na Tabela 3.5, constata-se que quanto menor a
concentrao inicial de NO3- (e menor razo N/P) maior a constante cintica, ou seja, mais
rpida a remoo de NO3-.
Tabela 3.5 Parmetros cinticos e eficcia de remoo de NO3- para os ensaios 3 (C. vulgaris) e 6 (P.
subcapitata).
Ensaio
Razo N/P
kN2 (d-1)
R2
0,705
0,766
Remoo
(%)
100
16
0,596
0,949
100
24
0,253
0,981
92
8
16
24
0,218
0,325
0,360
0,557
0,768
0,965
96
98
99
37
Os valores obtidos so inferiores ao intervalo entre 1,4-1,7 d-1 obtido num trabalho
semelhante para a remoo NO3- (Ruiz et al., 2012), apesar das altas percentagens de remoo.
Para alm disso, constata-se que a P. subcapitata (ensaio 6) apresente valores de cintica de
remoo inferiores C. vulgaris. A assimilao simultnea de NH4+ e NO3- pela P. subcapitata
pode ser corroborada pela anlise dos resultados obtidos para as culturas compostas por um
meio de NH4+:NO3-, atravs do Modelo de Gompertz modificado. Como se pode visualizar pelos
grficos apresentados na Figura 3.11 e valores da Tabela 3.6, o Modelo de Gompertz modificado
ajusta-se com um nvel de correlao satisfatrio. Este modelo permite entrar em conta com o
facto de haver um atraso na assimilao de NO3-, sendo NH4+ a fonte preferencial de azoto para
o crescimento das microalgas. O patamar inicial visvel nos grficos B e C indicia que existe um
retardamento na assimilao de NO3-, por parte da espcie C. vulgaris. Em contraponto, a
espcie P. subcapitata no revela o mesmo comportamento, ou seja, revela maior facilidade
na captura de NO3-. Existe um tempo de atraso significativo para as culturas da espcie C.
vulgaris (ensaio 2), que vo aumentando com a concentrao de NH4+ inicial. Estes dados
indiciam que a P. subcapitata no apresenta uma preferncia notria por uma das formas
inorgnicas de N disponveis (NH4+:NO3-), enquanto a espcie C. vulgaris aparenta possuir maior
afinidade para a remoo de NH4+ do meio. Apesar de no possurem um significado fsico
explcito, a constante k deste modelo traduz a velocidade de remoo do nutriente.
Comparando os valores obtidos para ambas as espcies verifica-se que, apesar de apresentarem
menor tempo de atraso na assimilao, a espcie P. subcapitata apresenta constantes
inferiores. Esta situao deve-se ao mecanismo de utilizao de azoto por parte das microalgas,
j que para poderem utilizar o mesmo a partir de NO3- necessrio ocorrer uma reao de
reduo qumica, convertendo em NH4+ (Barsanti and Gualtieri, 2014; Perez-Garcia et al.,
2011). Estas concluses esto de acordo com o verificado a partir dos parmetros obtidos por
ajuste de uma curva exponencial, quanto velocidade de remoo do NO3- pelas duas espcies.
Estes dados so de elevada importncia, pois permitem projetar um sistema de tratamento de
guas residuais, com base nas espcies que apresentem maior capacidade de assimilao para
a forma de azoto inorgnico contida no efluente a tratar.
Tabela 3.6 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de NO3- para os ensaios 2 (C. vulgaris) e 5 (P.
subcapitata).
Ensaio
2
38
Razo N/P
(h)
kG (h-1)
R2
Remoo (%)
11,7
0,039
0,997
100
16
61,0
0,097
0,996
98
24
78,5
0,048
0,990
98
18,1
0,063
0,986
99
16
10,3
0,017
0,989
100
24
0,00
0,013
0,971
68
D.
8
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Modelo
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Modelo
NO3- (mg L-1)
NO3- (mg L-1)
A.
R2 = 0,997
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
B.
R2 = 0,986
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264 288
Tempo (h)
E.
16
16
90
80
80
70
70
60
60
Modelo
NO3- (mg L-1)
NO3- (mg L-1)
90
Modelo
50
50
40
40
30
30
20
20
R2 = 0,996
10
R2 = 0,989
10
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264 288
Tempo (h)
F.
24
140
Modelo
120
100
100
Modelo
80
NO3- (mg L-1)
NO3- (mg L-1)
120
80
24
140
60
R2 = 0,971
60
40
40
R2
20
= 0,990
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264
Tempo (h)
20
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264 288
Tempo (h)
Figura 3.11 Aplicao do Modelo de Gompertz Modificado aos ensaios 2 (A, B e C) e 5 (D, E e F) para
as razes N/P 8 (A e D), 16 (B e E) e 24 (C e F).
39
3.2.2.4 PO43A concentrao de PO43- no meio um dos parmetros mais importantes a controlar, dada
a importncia da razo N/P para o crescimento das microalgas, como referido anteriormente.
A variao da concentrao deste nutriente registou um comportamento semelhante para todos
os ensaios realizados (ver Anexo B.6). Como tal, optou-se por apresentar apenas as evolues
para as duas culturas que foram previamente analisadas, ou seja, as culturas dos ensaios 2 e 5.
A Figura 3.12 apresenta a variao temporal da concentrao de PO43-, podendo ser
determinada a cintica de remoo deste nutriente segundo a equao de 1 ordem (Tabela
3.7).
A.
B.
8
15,0
16
24
M8 = 10,0e-0,014x
R = 0,817
12,5
PO43- (mg L-1)
10,0
8,72e-0,015x
M16 =
R = 0,756
7,5
5,0
M24 = 9,39e-0,014x
R = 0,790
2,5
16
24
M8 = 13,4e-0,029x
R = 0,995
12,5
10,0
PO43- (mg L-1)
15,0
M16 = 14,7e-0,030x
R = 0,994
7,5
M24 = 16,5e-0,030x
R = 0,995
5,0
2,5
0,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.12 - Evoluo temporal da concentrao de PO43- nos ensaios 2 (A) e 5 (B).
Tabela 3.7 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de PO43-.
Ensaio
1
40
Razo N/P
kP (d-1)
R2
Remoo (%)
8
16
24
8
16
24
8
16
24
8
16
24
8
16
24
8
16
24
0,420
0,405
0,629
0,344
0,372
0,346
0,475
0,418
0,458
0,413
0,711
0,100
0,691
0,715
0,718
0,684
0,713
0,742
0,938
0,932
0,987
0,817
0,756
0,790
0,778
0,910
0,891
0,809
0,983
0,922
0,995
0,994
0,995
0,792
0,824
0,838
99
98
100
97
98
97
99
100
100
99
100
64
100
100
100
100
100
100
Para as razes N/P testadas a concentrao de P no meio dever ser suficiente para no
se tornar no nutriente limitante no meio. No entanto, verifica-se que a concentrao de PO43atinge valores praticamente nulos, relativamente cedo para as culturas do ensaio 5. Para uma
interpretao mais rigorosa desta hiptese possvel recorrer aos valores das constantes
cinticas obtidas para todas as culturas. A eficincia de remoo deste nutriente variou entre
os 64 e os 100%, sendo que o valor mdio observado superior a 97%. Apesar do elevado pH
verificado no meio, no se considera que tenha ocorrido perda de PO43- sob a forma de
precipitao de Ca3(PO4)2.
Observando os dados presentes na Tabela 3.7 verifica-se que os valores de kP variam entre
0,100 e 0,742 d-1. Ruiz et al. (2012) obtiveram num trabalho idntico constante entre 2,0-8,7
d-1, porm a concentrao inicial no meio era consideravelmente inferior. Um outro trabalho
(Wang et al., 2014) obteve valores a oscilar entre 0,17 e 0,32 d-1, mais coincidentes com os
valores obtidos neste estudo. Para as culturas da espcie P. subcapitata inoculadas em meio
com NO3- (ensaios 5 e 6), verificam-se os valores mais elevados para as constantes cinticas de
remoo. Este facto coincide com as culturas onde o PO43- se esgota rapidamente, o que
relaciona o comportamento destes 2 nutrientes. Como j foi explicado o NO3- necessita de ser
reduzido para entrar no metabolismo das microalgas. Essa reduo acarreta um gasto
energtico, que provm da molcula de ATP, que funciona como motor para a atividade
metablica das microalgas (Barsanti and Gualtieri, 2014). Visto que para a sntese da mesma
molcula se necessita de P, pode-se considerar que o rpido consumo de PO43- devido
necessidade de produo de ATP, usado, posteriormente, na converso de NO3- em NH4+. Desta
forma, se explica o rpido consumo de PO43- nas culturas inoculadas com P. subcapitata, dada
a afinidade, j analisada, que estas apresentaram na remoo de NO3- do meio. Excetuando
estes casos agora referidos, acredita-se que para os restantes ensaios a concentrao de N se
afigure como o nutriente limitante do crescimento das microalgas. No entanto, dado que no
se atingiu a fase de declnio/morte para nenhuma cultura, esta suposio no pode ser
rigorosamente analisada.
3.2.2.5 SO42O consumo de SO42- tambm assume um comportamento semelhante ao verificado para o
PO43-, no entanto as percentagens de remoo no so to elevadas. Na verdade, o
comportamento verificado para a concentrao deste nutriente apresenta desvios significativos
em relao a uma cintica de 1 ordem (ver Anexo B.7). Tal situao pode ser verificada pelos
grficos apresentados na Figura 3.13. O clculo das cinticas de remoo para este nutriente
s foi possvel excluindo alguns dos pontos de amostragem, para os diferentes ensaios. Esta
deciso permite obter uma estimativa da velocidade de remoo, mas no um modelo fidedigno
da variao da concentrao de SO42- em funo do tempo.
41
A.
B.
8
7,0
24
5,0
M24 = 4,19e-0,007x
R = 0,783
2,0
1,0
M16 = 5,08e-0,007x
R = 0,921
4,0
3,0
2,0
M24 = 5,06e-0,005x
R = 0,725
1,0
0,0
24
M8 = 5,01e-0,003x
R = 0,705
5,0
SO42- (mg L-1)
3,0
16
6,0
M16 = 5,41e-0,018x
R = 0,934
4,0
7,0
M8 = 4,79e-0,008x
R = 0,962
6,0
SO42- (mg L-1)
16
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.13 - Evoluo temporal da concentrao de SO42- nos ensaios 2 (A) e 5 (B).
As eficcias de remoo de SO42- variam entre os 54 e os 100%, sendo que a espcie C.

vulgaris apresenta, de forma genrica, maior eficincia na assimilao deste nutriente. O valor
mnimo obtido para a cintica de remoo de SO42- foi 0,055 d-1, enquanto o mximo de 0,426
d-1 foi obtido para a razo 16 do ensaio 2. A utilizao de microalgas no tratamento de guas
residuais contendo SO42- j foi alvo de estudo, porm escasseiam os estudos que analisaram em
especfico a remoo deste nutriente.
Tabela 3.8 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de SO42-.

Ensaio
1
42
Razo N/P
kS (d-1)
R2
Remoo (%)
8
16
24
8
0,147
0,268
0,264
0,181
0,900
0,954
0,900
0,962
81
94
100
89
16
24
8
16
24
8
0,426
0,162
0,141
0,202
0,200
0,055
0,934
0,783
0,942
0,979
0,995
0,774
100
85
75
85
87
54
16
24
8
16
24
8
16
24
0,078
0,134
0,083
0,160
0,115
0,273
0,090
0,193
0,933
0,993
0,705
0,921
0,725
0,875
0,835
0,926
63
78
56
81
64
92
65
88
3.2.2.6 K+
Para finalizar, avaliou-se ainda a concentrao de K+ no meio, de forma a avaliar a
possibilidade de remoo deste io metlico semelhana do que acontece com outros metais
(Wang et al., 2010). Para alm das percentagens de remoo do nutriente, procedeu-se ao
clculo das cinticas de remoo do mesmo ajustando um modelo cintico de 1 ordem.
Verificaram-se as mesmas dificuldades referidas para o SO42- no clculo das constantes
cinticas, sendo que em alguns casos no foi mesmo possvel faz-lo (ver Anexo B.8). Pela
anlise da Figura 3.14, compreende-se que as variaes verificadas, por exemplo, para o ensaio
2 impossibilitaram o clculo do parmetro referido.
A.
B.
8
8,0
M8 = 4,86e-0,004x
R = 0,940
24
6,0
5,0
5,0
3,0
24
M24 = 6,80e-0,002x
R = 0,828
4,0
3,0
2,0
2,0
1,0
1,0
0,0
16
M16 = 6,40e-0,004x
R = 0,768
7,0
6,0
4,0
8,0
M16 = 4,93e-0,005x
R = 0,919
K+ (mg L-1)
K+ (mg L-1)
7,0
16
M8 = 5,84e-0,006x
R = 0,929
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura 3.14 - Evoluo temporal da concentrao de K+ nos ensaios 2 (A) e 5 (B).

Tabela 3.9 - Parmetros cinticos e eficcia de remoo de K+.
Ensaio
1
Razo N/P
kK (d-1)
R2
Remoo (%)
8
16
24
8
16
24
8
16
24
8
16
24
8
16
24
8
16
24
0,074
0,126
0,145
0,102
0,121
n.a.
0,091
0,088
0,065
0,085
0,089
0,089
0,145
0,107
0,052
0,187
0,220
0,192
0,644
0,956
0,870
0,939
0,919
n.a.
0,936
0,717
0,686
0,764
0,895
0,951
0,929
0,768
0,828
0,914
0,950
0,794
69
78
78
71
78
65
63
59
55
67
60
64
80
62
30
73
79
48
NOTA: n.a. No aplicvel.
43
Com base nos dados apresentados na Tabela 3.9, a percentagem de remoo de K+ variou
entre os 30 e os 80%,cifrando-se nos 66% como mdia dos ensaios realizados. No que diz respeito
s constantes cinticas (kK), os valores no variam muito tendo-se obtido uma mdia de 0,116
d-1. No se verifica qualquer efeito da variao da razo N/P, nem qualquer diferena bvia
entre a assimilao do nutriente por parte das duas espcies testadas. Apesar dos resultados
obtidos no serem muito promissores do ponto de vista da eficincia de remoo, possvel
concluir que existe uma tendncia de assimilao de K+ pelas microalgas que pode ser
explorada.
44
4. Concluses
Os principais objetivos deste trabalho eram a anlise da produo de biomassa e remoo
de nutrientes com base no crescimento de microalgas em guas residuais. Para tal, foram
testadas duas espcies Chlorella vulgaris e Pseudokirchneriella subcapitata, inoculadas em
meios com diferentes composies.
No que diz respeito produo de biomassa, verifica-se que a espcie C. vulgaris mais
eficiente que a P. subcapitata, apresentando uma maior concentrao de biomassa final e
valores de produtividade superiores. Apesar deste facto, ambas as espcies apresentam valores
mdios para a cintica de crescimento relativamente prximos, cifrando-se em 0,689 e 0,779
d-1 para a C. vulgaris e P. subcapitata, respetivamente. A partir dos resultados obtidos, concluise que a espcie C. vulgaris apresenta maior taxa de crescimento para uma razo N/P no meio
igual a 8, enquanto a P. subcapitata mostra ser mais eficiente para um valor da razo N/P a
rondar os 16.
Quanto remoo de nutrientes, este trabalho permitiu reunir dados sobre a eficincia
das mesmas espcies de microalgas na remoo de azoto inorgnico (NH4+ e NO3-), PO43-, SO42e K+, habitualmente presentes na composio de guas residuais. Verificou-se a completa
remoo de NH4+ do meio, bem como altas percentagens de remoo para NO3- e PO43-,
nomeadamente, uma mdia de 96 e 97%, respetivamente. A remoo de SO42- e K+ no apresenta
valores to elevados para as condies testadas, tendo sido verificada uma mdia de 80% para
o primeiro e 66% para o segundo. Para todos os nutrientes referidos foram calculadas cinticas
de remoo, permitindo avaliar a velocidade de remoo dos mesmos. Com base em todos estes
dados, conclui-se que a espcie C. vulgaris apresenta preferncia por NH4+ como fonte de azoto,
enquanto a P. subcapitata demonstra maior aptido na assimilao de NO3-. A aplicao do
Modelo de Gompertz modificado na anlise dos dados obtidos para um meio composto por NH4+
e NO3-, revelou-se fundamental na identificao da forma de azoto preferencial para cada
espcie. Importa realar que remoo de NH4+ no se deveu, neste trabalho, exclusivamente
via biolgica, tendo sido estimada em 44% a perda deste nutriente por volatilizao de NH3.
Desta forma, o trabalho realizado confirma o elevado potencial e eficcia da aplicao
de culturas de microalgas na remoo de nutrientes em guas residuais, principalmente, azoto
e fsforo. O crescimento de microalgas em guas residuais pode assumir-se como uma soluo
vivel, pois permite aliar o tratamento de efluentes contaminados produo de biomassa,
passvel de ser rentabilizada de vrias formas.
45
5. Avaliao do Trabalho Realizado

5.1 Objetivos realizados
Os objetivos traados no arranque deste trabalho baseavam-se na avaliao da produo
de biomassa e remoo de nutrientes por cultura de microalgas. Quanto vertente de produo
de biomassa pretendia-se analisar o crescimento para as espcies C. vulgaris e P. subcapitata,
atravs da determinao das taxas de crescimento e clculo de produtividades. Este objetivo
foi cumprido, tendo-se obtido resultados para os dois parmetros referidos, em todos os ensaios
realizados. A partir dos mesmos tornou-se possvel identificar as condies timas, em termos
de composio do meio, para o crescimento das espcies testadas.
Quanto remoo de nutrientes procurou-se avaliar a eficcia das duas espcies testadas
na assimilao de azoto (NH4+ e NO3-) e fsforo (PO43-). Com base no trabalho realizado, foi
possvel calcular as eficcias de remoo para esses nutrientes, tendo sido tambm verificada
uma diminuio da concentrao de SO42- e K+ ao longo do tempo. Procedeu-se ao clculo das
velocidades de remoo dos nutrientes para as diversas condies testadas, por ajuste de
modelos cinticos. Confirmou-se o potencial das microalgas como forma de tratamento de
guas residuais, atravs da remoo de nutrientes includos na composio das mesmas.
5.2 Limitaes e trabalho futuro

Com o desenvolvimento deste trabalho observaram-se um conjunto de limitaes na
vertente prtica/laboratorial. Um dos aspetos mais relevantes est relacionado com os gastos
associados utilizao dos equipamentos de anlise, nomeadamente, o analisador de carbono
orgnico dissolvido e o cromatgrafo inico. Para alm disso, a elevada sensibilidade dos
mesmos equipamentos acarreta grandes cuidados no seu manuseamento, de modo a no causar
avarias. Quanto s recomendaes e direes a seguir em trabalho futuro, sugere-se a tentativa
de limitar a perda de NH4+ por volatilizao, de modo a quantificar a remoo do mesmo
nutriente unicamente por via biolgica. O prximo passo poder passar pela realizao do
mesmo estudo com base num efluente real, isto , utilizao de uma gua residual proveniente
de uma indstria como meio de cultura. Desta forma, seria possvel estudar condies mais
prximas das que se podem encontrar num processo a maior escala.
Seria de elevado interesse acoplar um sistema de recolha de biomassa ao processo
analisado, visto tratar-se de uma das maiores dificuldades para o desenvolvimento deste tipo
de tecnologias. A incorporao desta etapa permitiria a anlise do ciclo de vida do produto,
desde produo de biomassa at gerao de produtos comercialmente rentveis.
47
Referncias
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53
ANEXOS
55
A. Anexos: Material e mtodos

A.1 Equipamentos de anlise usados para obteno dos dados
experimentais
Figura A.1 Espetrofotmetro usado para medio da densidade tica.
Figura A.2 Equipamento usado para medio de oxignio dissolvido e temperatura.
57
Anexos
Figura A.3 Equipamento usado para medio do pH das culturas.
Figura A.4 Equipamento usado para medio da intensidade luminosa.
58
Figura A.5 Equipamento usado para medio da concentrao de carbono orgnico e inorgnico
dissolvido no meio.
A.
B.
Figura A.6 Equipamentos usados para determinao da concentrao dos ies dissolvidos no meio: Acaties e B- anies.
59
Anexos
A.2 Retas de calibrao usadas nas medies de cromatografia inica

Tabela A.1 Curvas de calibrao usadas para clculo da concentrao dos ies analisados nas
culturas 1, 2 3.
Io
NH4+
NO3-
PO43-
SO42-
K+
Gama de aplicao
(S min)
Reta de calibrao
0 - 0,20
y = 0,2682x2 + 0,3732x - 0,0032
R = 0,9995
1,5 8,0
y = 0,2247x2 + 0,384x + 0,0379
R = 0,9999
0 0,08
y = 13,788x - 0,0421
R = 0,9995
0,08 5,0
y = 12,027x + 0,2948
R = 0,9999
0 0,05
y = 21,66x - 0,0043
R = 0,9999
0,05 4,0
y = 16,991x + 0,9418
R = 0,9989
0 0,12
y = 9,2323x - 0,0052
R = 0,9991
0,12 8,0
y = 7,2468x + 0,5403
R = 0,9998
0 1,5
y = 0,7289x + 0,0059
R = 0,9978
1,5 - 80
y = 0,8493x - 0,7165
R = 0,9999
Tabela A.2 - Curvas de calibrao usadas para clculo da concentrao dos ies analisados nas
culturas 4, 5 e 6.
Io
NH4
NO3-
PO43-
SO42-
K+
60
Gama de aplicao
(S min)
Reta de calibrao
0 - 1,2
y = 0,2349x2 + 0,4693x - 0,0001
R = 0,9998
1,2 6,0
y = 0,2266x2 + 0,5425x - 0,0844
R = 1,0000
0 0,10
y = 11,77x - 0,0641
R = 0,9984
0,10 6,0
y = 10,005x + 0,4935
R = 0,9995
0 0,05
y = 23,557x + 0,0014
R = 0,9992
0,05 3,0
y = 18,548x + 1,0013
R = 0,9986
0 0,15
y = 8,5026x + 0,0005
R = 0,9983
0,15 8,0
y = 7,3353x + 0,73
R = 0,9995
0 1,5
y = 0,7269x - 0,0316
R = 0,9996
1,5 - 80
y = 0,8284x - 0,4921
R = 0,9998
B. Anexos: Resultados e discusso

B.1 Variao temporal da temperatura para todos os ensaios
A.
D.
8
28,0
16
24
28,0
26,0
26,0
24
Temperatura (C)
27,0
Temperatura (C)
27,0
16
25,0
25,0
24,0
24,0
23,0
23,0
22,0
22,0
21,0
21,0
20,0
20,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
28,0
16
24
28,0
26,0
26,0
24
Temperatura (C)
27,0
Temperatura (C)
27,0
16
25,0
25,0
24,0
24,0
23,0
23,0
22,0
22,0
21,0
21,0
20,0
20,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
28,0
16
24
28,0
27,0
26,0
26,0
24
Temperatura (C)
Temperatura (C)
27,0
16
25,0
25,0
24,0
24,0
23,0
23,0
22,0
22,0
21,0
21,0
20,0
20,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.1 Evoluo temporal da temperatura para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie
P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH 4+:NO3- (2:0 A e
D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
61
Anexos
B.2 Variao temporal do pH para todos os ensaios

A.
D.
8
10,00
16
24
10,00
9,50
9,50
9,25
9,25
24
pH
9,75
pH
9,75
16
9,00
9,00
8,75
8,75
8,50
8,50
8,25
8,25
8,00
8,00
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
10,00
16
24
10,00
9,50
9,50
9,25
9,25
9,00
9,00
24
pH
9,75
pH
9,75
16
8,75
8,75
8,50
8,50
8,25
8,25
8,00
8,00
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
10,00
16
24
10,00
9,50
9,50
9,25
9,25
24
pH
9,75
pH
9,75
16
9,00
9,00
8,75
8,75
8,50
8,50
8,25
8,25
8,00
8,00
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.2 - Evoluo temporal do pH para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie P.
1:1 B e E; 0:2 C e F).
62
B.3 Variao temporal da concentrao de O2 dissolvido para todos os

ensaios
A.
D.
8
9,0
16
24
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
24
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
9,0
16
24
9,0
16
24
8,0
8,0
16
8,0
8,0
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
9,0
16
24
9,0
16
24
8,0
8,0
9,0
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
7,0
6,0
5,0
4,0
3,0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.3 - Evoluo temporal da concentrao de O2 dissolvido para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e
NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
63
Anexos
B.4 Variao temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido

para todos os ensaios
A.
D.
8
16
24
120
100
COD (mg L-1)
COD (mg L-1)
60
40
30
20
10
20
0
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
16
24
50
50
40
40
COD (mg L-1)
COD (mg L-1)
24
40
80
30
20
10
16
24
30
20
10
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
16
24
50
50
40
40
COD (mg L-1)
COD (mg L-1)
16
50
30
20
10
16
24
30
20
10
0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.4 - Evoluo temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido para a espcie C.
vulgaris (A, B e C) e para a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8,
16 e 24) e razo NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
64
B.5 Variao temporal da concentrao de carbono inorgnico

dissolvido para todos os ensaios
A.
D.
8
260
16
24
240
220
220
200
200
CI (mg L-1)
CI (mg L-1)
240
180
160
140
260
24
180
160
140
120
120
100
100
80
16
80
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
24
260
240
240
220
220
200
200
16
24
CI (mg L-1)
CI (mg L-1)
260
16
180
180
160
160
140
140
120
120
100
100
80
80
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
260
16
24
240
240
220
220
200
200
16
24
CI (mg L-1)
CI (mg L-1)
260
180
180
160
160
140
140
120
120
100
100
80
80
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.5 - Evoluo temporal da concentrao de carbono inorgnico (CI) dissolvido para a espcie
C. vulgaris (A, B e C) e para a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P
(8, 16 e 24) e razo NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
65
Anexos
B.6 Variao temporal da concentrao de PO43- para todos os ensaios

A.
D.
8
15,0
16
24
M8 = 11,9e-0,017x
R = 0,938
12,5
10,0
M16 = 13,4e-0,017x
R = 0,932
7,5
5,0
M24 = 19,8e-0,026x
R = 0,987
2,5
5,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
15,0
16
24
16
10,0
M16 = 8,72e-0,015x
R = 0,756
7,5
5,0
M24 = 9,39e-0,014x
R = 0,790
2,5
24
M8 = 13,4e-0,029x
R = 0,995
12,5
PO43- (mg L-1)
10,0
15,0
M8 = 10,0e-0,014x
R = 0,817
12,5
PO43- (mg L-1)
7,5
24
M8 = 19,4e-0,017x
R = 0,809
M16 = 21,7e-0,030x
R = 0,983
M24 = 13,1e-0,004x
R = 0,922
2,5
0,0
y = 14,7e-0,030x
R = 0,994
7,5
M24 = 16,5e-0,030x
R = 0,995
5,0
2,5
0,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
12,5
16
24
11,2e-0,020x
M8 =
R = 0,778
10,0
y = 14,9e-0,017x
R = 0,910
7,5
5,0
15,1e-0,019x
M24 =
R = 0,891
2,5
15,0
0,0
16
24
M8 = 11,7e-0,029x
R = 0,792
12,5
10,0
M16 = 11,8e-0,030x
R = 0,823
PO43- (mg L-1)
15,0
PO43- (mg L-1)
16
12,5
PO43- (mg L-1)
PO43- (mg L-1)
10,0
15,0
7,5
M24 = 11,8e-0,031x
R = 0,838
5,0
2,5
0,0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.6 - Evoluo temporal da concentrao de fosfato para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para
a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH4+:NO3(2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
66
B.7 Variao temporal da concentrao de SO42- para todos os ensaios

A.
D.
8
7,0
16
M16 = 4,87e-0,011x
R = 0,954
4,0
M24 = 5,31e-0,011x
R = 0,900
3,0
2,0
6,0
0,0
3,0
2,0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
M24 = 5,57e-0,006x
R = 0,993
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
7,0
16
24
M16 = 5,41e-0,018x
R = 0,934
4,0
3,0
M24 = 4,19e-0,007x
R = 0,783
2,0
16
6,0
1,0
M16 = 5,08e-0,007x
R = 0,921
4,0
3,0
2,0
M24 = 5,06e-0,005x
R = 0,725
1,0
0,0
24
M8 = 5,01e-0,003x
R = 0,705
5,0
SO42- (mg L-1)
5,0
7,0
y = 4,79e-0,008x
R = 0,962
6,0
SO42- (mg L-1)
M16 = 5,25e-0,003x
R = 0,934
0,0
0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
8
7,0
16
24
M8 =
R = 0,942
M16 = 6,02e-0,008x
R = 0,979
4,0
M24 = 5,41e-0,008x
R = 0,995
3,0
2,0
1,0
16
24
5,23e-0,011x
y=
R = 0,875
M16 = 4,83e-0,004x
R = 0,835
M24 = 4,84e-0,008x
R = 0,926
6,0
5,0
SO42- (mg L-1)
5,0
7,0
5,31e-0,006x
6,0
SO42- (mg L-1)
24
4,0
1,0
1,0
16
M8 = 5,01e-0,002x
R = 0,774
5,0
SO42- (mg L-1)
5,0
7,0
M8 = 4,47e-0,006x
R = 0,900
6,0
SO42- (mg L-1)
24
4,0
3,0
2,0
1,0
0,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.7 - Evoluo temporal da concentrao de sulfato para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e para
a espcie P. subcapitata (D, E e F) para diferentes condies: razo N/P (8, 16 e 24) e razo NH 4+:NO3(2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
67
Anexos
B.8 Variao temporal da concentrao de K+ para todos os ensaios

A.
D.
8
16
M8 = 4,32e-0,003x
R = 0,644
8,0
7,0
7,0
6,0
M24 = 4,77e-0,006x
R = 0,870
5,0
4,0
3,0
4,0
3,0
2,0
1,0
1,0
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
B.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
E.
8
8,0
16
M8 = 4,86e-0,004x
R = 0,940
7,0
24
M16 =
R = 0,919
6,0
5,0
5,0
3,0
M16 =
R = 0,768
24
M24 = 6,80e-0,002x
R = 0,828
4,0
3,0
2,0
2,0
1,0
1,0
0,0
16
6,40e-0,004x
7,0
6,0
4,0
8,0
4,93e-0,005x
K+ (mg L-1)
K+ (mg L-1)
5,0
2,0
0,0
M8 = 5,84e-0,006x
R = 0,929
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
C.
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
F.
16
M8 = 5,00e-0,004x
R = 0,936
7,0
6,0
24
M16 = 5,89e-0,004x
R = 0,717
7,0
5,22e-0,003x
5,0
M24 =
R = 0,686
5,0
4,0
8,0
3,0
24
M16 = 4,66e-0,009x
R = 0,950
M24 = 4,59e-0,008x
R = 0,794
4,0
3,0
2,0
2,0
1,0
1,0
0,0
16
M8 = 4,37e-0,008x
R = 0,914
6,0
K+ (mg L-1)
8,0
K+ (mg L-1)
8
16
24
M8 = 5,13e-0,004x
R = 0,764
M16 = 5,66e-0,004x
R = 0,895
M24 = 5,17e-0,004x
R = 0,951
8,0
M16 = 5,16e-0,005x
R = 0,956
K+ (mg L-1)
K+ (mg L-1)
6,0
24
0,0
0
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
24 48 72 96 120 144 168 192 216 240 264

Tempo (h)
Figura B.8 - Evoluo temporal da concentrao de potssio para a espcie C. vulgaris (A, B e C) e
NH4+:NO3- (2:0 A e D; 1:1 B e E; 0:2 C e F).
68

Crescimento de Microalgas em Águas Residuais: Produção de Biomassa e Remoção de Nutrientes

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MESTRADO INTEGRADO EM ENGENHARIA DO AMBIENTE 2013/2014

Crescimento de Microalgas em guas Residuais:

Nuno Filipe Pereira da Silva

Dissertao submetida para obteno do grau de

MESTRE EM ENGENHARIA DO AMBIENTE

Presidente do Jri: Professora Cidlia Maria de Sousa Botelho

Orientador Acadmico: Doutor Jos Carlos Magalhes Pires

Co-Orientador: Doutor Vtor Jorge Pais Vilar

Porto, julho de 2014

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Porm, seja o que for:

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Palavras-chave: Microalgas; Chlorella vulgaris; Pseudokirchneriella subcapitata; Tratamento

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Enquadramento e apresentao ............................................................ 1

Organizao da tese ........................................................................... 2

Reviso da Literatura ............................................................................... 5

Aplicaes das microalgas .................................................................... 6

Tecnologias de crescimento ............................................................... 10

Remoo de nutrientes em guas residuais ............................................. 14

Avaliao da Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes em guas Residuais .. 19

Material e mtodos .......................................................................... 19

Instalao experimental ............................................................................... 19

Meio de cultura e microrganismos ................................................................... 19

Mtodos de anlise ..................................................................................... 20

Modelos cinticos ....................................................................................... 23

Resultados e discusso ...................................................................... 25

Produo de biomassa .................................................................................. 25

Remoo de nutrientes ................................................................................ 32

Avaliao do Trabalho Realizado ............................................................... 47

Objetivos realizados ......................................................................... 47

Limitaes e trabalho futuro .............................................................. 47

Anexos: Material e mtodos ..................................................................... 57

Equipamentos de anlise usados para obteno dos dados experimentais ....... 57

Retas de calibrao usadas nas medies de cromatografia inica ................ 60

Anexos: Resultados e discusso ................................................................. 61

Variao temporal da temperatura para todos os ensaios ........................... 61

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: produo de biomassa e remoo de nutrientes

Variao temporal do pH para todos os ensaios........................................ 62

Variao temporal da concentrao de O2 dissolvido para todos os ensaios ..... 63

Variao temporal da concentrao de carbono orgnico dissolvido para todos os

Variao temporal da concentrao de carbono inorgnico dissolvido para todos

Variao temporal da concentrao de PO43- para todos os ensaios ............... 66

Variao temporal da concentrao de SO42- para todos os ensaios ............... 67

Variao temporal da concentrao de K+ para todos os ensaios ................... 68

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: produo de biomassa e remoo de nutrientes

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: produo de biomassa e remoo de nutrientes

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

Taxa especfica de crescimento

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

No entanto, necessrio um estudo mais aprofundado da relao entre a remoo de

1.3 Organizao da tese

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

subcapitata) em guas residuais sintticas, quantificando a remoo de nutrientes pelas

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

2.2 Aplicaes das microalgas

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes

bioqumica onde se recorre atividade biolgica de certos organismos, com o intuito de

economicamente e ambientalmente mais sustentveis (Clark et al., 2012). A produo de

Esta vertente do tratamento de guas residuais pode ser aplicada a efluentes

Crescimento de Microalgas em guas Residuais: Produo de Biomassa e Remoo de Nutrientes