UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

TRABAJO
DE REPRODUCCIN
INTEGRANTES:
DIANA CAJAMARCA
LISSETH HIDALGO
DIANA RODRIGUEZ
VALERIA SARMIENTO
JENNIFER ARISTEGA
JENNIFFER MONTES
EDITH MARQUEZ
EBELIN MORA
MARIA SALINAS

CAPRINOS
COLECCIN DEL SEMEN
La tcnica ms recomendada para obtener una colecta de semen es el empleo
de una vagina artificial.
La misma provee estimulacin trmica (temperatura) y mecnica (presin) para
producir la eyaculacin.
Es importante comenzar con el entrenamiento de los machos al menos 2
meses antes de su inclusin en un programa de extraccin seminal. Para ello,
los animales son entrenados para realizar el salto en la vagina artificial. En la
poca reproductiva se facilita el adiestramiento, dado que el inters sexual
disminuye la inhibicin de los machos ante la presencia del hombre
Para el entrenamiento, se debe contar con una hembra en celo. El estro puede
ser inducido y mantenido durante el perodo de entrenamiento y extraccin
seminal, mediante una inyeccin IM cada 48 horas de 1 mg de valerato de
estradiol
La vagina artificial se acondiciona con 40-60 cc de agua caliente a 50-70C,
segn las prdidas de calor que se produzcan hasta el momento de su
utilizacin, siendo importante que la temperatura interior de la vagina artificial al
momento de la eyaculacin, sea de aproximadamente 38C. A uno de sus
extremos, se adosa un tubo de recoleccin seminal templado y seco. El
acondicionamiento final de la vagina se logra por el agregado de aire a la
cmara de agua, con el fin de estrechar la luz vaginal aproximadamente a 1 cm
de dimetro.
La recoleccin del semen se realiza en un lugar limpio y libre de polvo. Se lava
y seca el vientre y el prepucio del macho y se recortan los pelos prepuciales
para evitar la contaminacin del semen cuando se efecta la colecta seminal.
Asegurada la cabra en un cepo, el operador se sita al lado de la hembra,
sujetando la vagina artificial con el extremo abierto frente al prepucio en un

ngulo de 45. Un "golpe" del animal hacia arriba y hacia adelante indica que la
eyaculacin ha ocurrido. El tubo de recoleccin se protege de los cambios
bruscos de temperatura y se coloca en un bao de agua a 36C.
Cuando se inicia la poca de obtencin de semen y, si los animales no han
estado previamente en servicio, se recomienda no utilizar los primeros 10 a 15
eyaculados para el congelamiento, en orden de producir una remocin de las
reservas espermticas. En el caso de que los machos estn en servicio, es
recomendable darles un descanso sexual de una semana, antes de iniciar las
colectas seminales.
La frecuencia de obtencin de semen est supeditada a la lbido de cada
macho en particular. Para un programa de congelamiento se recomienda
obtener uno o dos eyaculados diarios, durante 4-5 das seguidos y dar
descansos de 2-3 das.
Una vez obtenido el semen, se lo debe colocar en un bao de agua a 36C,
evalundose motilidad masal, volumen y concentracin espermtica (nmero
de espermatozoides/ml).
Una pequea gota sobre un portaobjetos entibiado permite observar el grado
de movimiento en masa o motilidad masal, que brinda una estimacin del
porcentaje de espermatozoides vivos y su vigor. La motilidad masal, el volumen
y la concentracin espermtica varan entre individuos y an entre los
eyaculados de un mismo animal.

VAGINA ARTIFICIAL
La recogida de semen mediante vagina artificial es el mtodo ms usado en
ganado ovino y caprino debido a su rapidez y limpieza, permitiendo la
obtencin de varios eyaculados consecutivos
La vagina artificial, diseada originalmente por Spallanzani para perro, ha
sufrido diversas modificaciones en cuanto a su longitud y dimetro en funcin
de las caractersticas anatmicas y fisiolgicas de cada especie. La vagina
artificial utilizada para pequeos rumiantes consta de:
1) Cuerpo rgido (de metal o caucho), que incluye una vlvula de doble espita a
travs de la cual se aade agua y aire
2) Camisa interna, de pared delgada que forma una cmara al doblarse hacia
el exterior;
3) Tubo cnico o intermediario, que sirve de unin entre el cuerpo rgido y el
tubo colector
4) Tubo colector, situado al final del tubo cnico y generalmente de 10 ml de
capacidad, graduado en 0,1 ml
4) Manta, encargada de mantener la temperatura y proteger el semen frente a
la luz.

En programas de seleccin es imprescindible asignar una vagina artificial a

cada macho con el fin de no mezclar eyaculados.

CONTROL DE LA CANTIDAD Y CALIDAD DEL SEMEN

En la evaluacin del semen hemos de tener en cuenta la poca del ao en la
que efectuamos la recogida. Indicamos a continuacin los valores medios de
produccin y calidad de semen, tanto en fotoperiodo ascendente como
descendente, de dos razas caprinas espaolas, Verata y Malaguea,
explotadas a una latitud de 40 y 37 N, respectivamente.

PRODUCCIN Y CALIDAD DE SEMEN DE LA RAZA VERATA

FOTOPERIODO
FOTOPERIODO
Volumen
Concentracin
N

ASCENDENTE
0,58 ml
5761 x 106
3260 x 106

DESCENDENTE
1,01 ml
3857 x 106
3920 x 106

espermatozoides/eyaculado
% Motilidad
Calidad de movimiento (0-5)
% Formas anormales
% Acrosomas

70,3%
3,7
17,9%
14,9%

71,1%
4,5
7,7%
13,9%

PRODUCCIN Y CALIDAD DE SEMEN DE LA RAZA MALAGUEA

FOTOPERIODO
FOTOPERIODO
Volumen
Concentracin
N

ASCENDENTE
1,15 ml
4741 x 106
5059 x 106

DESCENDENTE
1,25 ml
4118 x 106
5329 x 106

espermatozoides/eyaculado
% Motilidad
Calidad de movimiento (0-5)
% Formas anormales
% Acrosomas

74,8%
4,3
5,7%
8,6%

75,4%
4,6
4,3%
6,5%

Volumen de eyaculado
La medida del volumen del eyaculado se efecta por lectura directa de la
graduacin que hay en el tubo de recoleccin del semen. El volumen medio por
eyaculado est entre 1 y 1,5 ml pero puede ser muy variable.

Evaluacin del semen

Una vez que el semen fue recolectado en vagina artificial, se lo mantiene en
un bao de agua a 36C durante su evaluacin. Se observa una gota de semen

al microscopio con 100 aumentos sobre portaobjetos templado por platina

trmica. Se puede tener una idea de la calidad del semen por la velocidad con
que se hacen y deshacen las ondas seminales, denominado motilidad masal.
La motilidad se estima por el vigor del movimiento de las ondas en una escala
subjetiva (0, mnimo; 5, mximo). nicamente si la motilidad masal es de 4 o
mayor se procede a congelar el semen.
En todo momento es importante que el semen se mantenga protegido de los
cambios bruscos de temperatura, contacto con el agua, radiacin solar directa
e impurezas.

ANLISIS MACROSCPICO
Volumen
La determinacin del volumen se realiza inmediatamente despus de su
recogida, valorndolo directamente en el tubo colector (graduado en 0,1 ml),
evitando el error producido al pasar el eyaculado de un recipiente a otro para
su valoracin. La determinacin precisa del volumen de un eyaculado es
imprescindible para determinar el nmero total de espermatozoides contenido
en el mismo.
El volumen medio de un eyaculado en ganado caprino es de 1 mI, existiendo
variaciones segn el mtodo de recogida, especie, estado fisiolgico del
macho, raza, edad, tamao corporal, alimentacin y rgimen sexual al que se
le somete

Aspecto fsico
El color del semen caprino vara del blanco cremoso al amarillento. Dicha
coloracin, producida por la presencia de riboflavina en el plasma seminal, est
sujeta a variaciones raciales e individuales.
Tonalidades grises y/o pardas, y rosceas son indicadores de contaminacin
y/o infeccin del sistema reproductor; y de la presencia de hemates en el
semen (debido principalmente a lesiones del pene durante la recogida)
respectivamente
La densidad que presenta el semen de pequeos rumiantes es debida a su alta
concentracin

ANLISIS MICROSCPICO
Movilidad masal
Esta prueba valora la formacin y progresin de ondas producidas por el
desplazamiento de los espermatozoides. La onda de movimiento slo puede
ser observada en especies de alta concentracin espermtica, como es el caso
de pequeos rumiantes
La valoracin de la movilidad masal se realiza mediante microscopia ptica a 1
Ox sobre una gota de semen puro colocada sobre un portaobjetos atemperado
a +3PC. La clasificacin varia en tincin de la escala utilizada: de O a 5 ; 0 a ++

Movilidad individual
La movilidad individual es una de las pruebas que con mayor frecuencia se
utilizan para evaluar la calidad seminal y en algunas especies parece estar
correlacionada con la capacidad fertilizante del espermatozoide
La movilidad espermtica se valora rutinariamente de manera subjetiva
mediante un microscopio ptico (a 1 Ox 20x) sobre una gota de semen
diluido

en

una

solucin

isosmtica,

determinando

el

porcentaje

de

espermatozoides mviles y su calidad de movimiento. La utilizacin de

mtodos fotogrficos y sistemas computarizados han relegado a un segundo
plano la valoracin subjetiva por parte de los. Los actuales sistemas de anlisis
de imagen asistidos por ordenador sistemas C.A.S.A (Computer-AssistedSperm-Analysis) son capaces de determinar, de manera objetiva, toda una
serie de parmetros de velocidad y angularidad, que colaboran en el
establecimiento de un grado de calidad de movimiento
El movimiento desarrollado por los espermatozoides es caracterstico de
especie y del estado fisiolgico en que se encuentre- (movimiento tras la
eyaculacin, dilucin, refrigeracin, congelacin, hiperactivacin), estando
sujeto tambin al efecto ejercido por el mtodo de recogida, factores
ambientales, manejo del semen tras su obtencin
Existen

variaciones

estacionales

relativas

la

movilidad

de

espermatozoides de macho cabro, estando relacionadas con la fertilidad

Concentracin espermtica

los

La

concentracin

espermtica

viene

definida

como

el

nmero

de

espermatozoides por unidad de volumen (expresado normalmente en millones

por ml) de eyaculado.
La tcnica ms empleada en la valoracin de la concentracin espermtica es
la espectrofotometra. La concentracin seminal es obtenida mediante una
tabla de conversin, asignando a cada valor de transmitancia un valor de
concentracin previamente calculado mediante recuento directo contador de
partculas. Las diferentes tonalidades de color presentes en los eyaculados
caprinos no interfieren en el resultado obtenido mediante esta tcnica debido al
ttulo de la dilucin empleada
La concentracin media estimada en el ganado caprino es de 2.500 a 3.000 x
106 espermatozoides/ml, siendo susceptibles a variaciones estacionales,
raciales e individuales

Formas anormales
La morfologa espermtica es una de las caractersticas ms estudiadas en el
anlisis seminal con el objetivo de eliminar aquellos individuos no aptos para la
reproduccin. La presencia de altos porcentajes de formas anormales parece
estar asociada con una inmadurez sexual, a procesos degenerativos y
patolgicos e incluso con un excesivo ritmo de recogida.
El porcentaje de las morfoanomalias encontradas en el semen parece ser un
buen indicador de las lesiones o fisiopatologas del aparato reproductor
masculino
El estudio de la morfologa espermtica ha utilizado tradicionalmente tcnicas
de tincin, entre las que destacamos la Eosina-nigrosina, cristal violeta

nitratos de plata
La introduccin de los sistemas C.A.S.A. ha permitido realizar una evaluacin
morfomtrica objetiva y cuantitativa del semen de diversas especies
Sin embargo, la fijacin en suero salino formolado o en glutaraldehdo al 2% en
BL-l (sin tincin previa) y posterior observacin en microscopio de contraste de
fases, es el mtodo ms extendido para la deteccin rutinaria de formas
anormales en animales domsticos

Un eyaculado de macho cabro se considera normal cuando el porcentaje de

formas anormales es inferior al 15%
Existen variaciones en la morfologa espermtica debido al estrs, factor
individual, temperatura, estacin del ao
Complejo acrosmico
El acrosoma es un estructura membranosa localizada en la parte anterior de la
cabeza, recubriendo la parte superior del ncleo. Dicha vescula, procedente
del aparato de Golgi, es considerado como un lisosoma especializado rico en
carbohidratos, hidrolasas cidas y tripsinproteasas
Las alteraciones morfolgicas y fisiolgicas del acrosoma parecen asociarse
con una baja capacidad fecundante del esperma, ya que en condiciones
fisiolgicas slo los espermatozoides capaces de experimentar la reaccin
acrosmica en las proximidades del ovocito sern capaces de atravesar la
zona pelcida y penetra el gameto femenino
La valoracin del estado acrosomal se puede realizar mediante microscopia
ptica de campo claro en muestras previamente teidas con Giemsa;
microscopia de contraste de fases por inclusin de las muestras en una
solucin de glutaraldehido al 2% en BL-1 y microscopia electrnica. Otras
tcnicas aprovechan la afinidad de ciertas lectinas o anticuerpos
Para fijarse al acrosoma y determinar su estado.

Porcentaje de espermatozoides mviles.

Esta medida se realiza similar a la anterior pero a 200 aumentos y con semen
diluido entre 60 y 200 106 espermatozoides. El observador decide, tras el
examen sucesivo de 5 campos de una misma preparacin, de una estimacin
visual del porcentaje de espermatozoides mviles, de forma que si la realiza
una persona entrenada el resultado es bastante repetible. Para el aprendizaje y
el entrenamiento, es necesario comparar esta estimacin visual con el
porcentaje exacto de espermatozoides vivos que se obtiene con el test de
eosina/nigrosina.
Este test, que utiliza una coloracin eosina/nigrosina, es eficaz para determinar
el porcentaje exacto de espermatozoides muertos y el de los espermatozoides
anormales. El porcentaje de formas anormales puede cambiar con la estacin
del ao en el caso de la especie ovina pero no en la especie caprina y con la
temperatura ambiente elevada tanto en ovino como caprino. Por ello, si no se
producen problemas debidos a temperaturas muy elevadas este anlisis no es
frecuente realizarlo en la especie caprina.
Para conocer la calidad del semen, es til determinar el porcentaje de formas
anormales en muestras de semen cada dos semanas. El semen de los

reproductores no debe contener ms de un 20-30% de espermatozoides

muertos (coloreados) y no ms de un 15-20% de espermatozoides anormales,
en el primer eyaculado de una serie. Estos valores disminuyen normalmente
con el nmero de colectas.
- Eosina (es soluble en el agua):

1g

- Nigrosina (soluble en agua):

2g

- Tricitrato de sodio:

3,57 g

- Agua destilada:

100 ml

Preparacin del colorante.

El colorante se elabora de la siguiente manera: tras la obtencin de una
solucin homognea, se debe dejar reposar durante 24 h y luego filtrarla. Se
debe medir el pH ya que debe estar comprendido entre 6,7 y 6,8 de manera
que se debe aadir citrato sdico si fuera necesario. La presin osmtica de la
solucin debe ser de unos 310 miliosmoles y puede conservarse a 4C y el pH
debe controlarse mensualmente.
- Coloracin del semen y preparacin de las muestras.
- Utilizar un porta limpio y seco sobre una placa calefactable a 30C.
- En la parte izquierda de la porta, se colocan 3 gotas de 10 m l de
colorante.
- Aadir una gota de semen diluido (dilucin de 1 parte de semen y 4
partes de diluyente) y mezclar con el colorante durante 10 segundos.
- Dejar reposar la mezcla durante 50 segundos.
- Extender la mezcla colorante y semen con la ayuda de un cubre.
- Identificar el porta con el nmero del macho y del eyaculado.
- Conservar la preparacin en una estufa a 30C o en una caja de portas
cerrada y estanca.
En estas condiciones la preparacin puede conservarse sin alteracin
durante varios meses.
Mtodo de contaje de las diferentes clases de los espermatozoides.
Colocar la preparacin sobre una pletina calefactable del microscopio y
examinar

distintos

campos

de

la

misma

hasta

que

se

cuenten

aproximadamente unos 150 espermatozoides. Este contaje se debe repetir al

menos una vez para obtener una medida precisa.

Es necesario distinguir:
- Los espermatozoides coloreados: todo espermatozoide coloreado, en
su totalidad o en parte, en rosa o en rojo, se considera como muerto en el
momento de la coloracin. Este nmero es utilizado para calcular el porcentaje
de espermatozoides vivos y muertos.
- Los espermatozoides normales que puede repartirse en distintas
clases:
* Sin cola, con una anormalidad a nivel de la cabeza, con
anormalidad en la cola, con gota citoplasmtica proximal o distal.
El clculo de los distintos porcentajes permite clasificar los animales y
decidir cules pueden ser utilizados para IA. Un examen regular del semen de
cada macho permite la deteccin de anormalidades inesperadas o de descubrir
que un macho sufre alteraciones espermticas. En efecto los espermatozoides
sufren muy rpidamente las alteraciones en el caso de infecciones incluso muy
localizadas.

Test de permeabilidad de membrana

La prueba de permeabilidad de membrana (endsmosis Hipo-osmoticswelling
test (HOS test)) est basada en las propiedades fisicas y bioqumicas de la
membrana plasmtica. La inclusin de clulas espermticas en una solucin
hipoosmtica provoca el paso del agua a travs de la membrana desde el
medio extracelular hacia el interior del espermatozoide hasta alcanzar su
equilibrio osmtico, observndose cambios morfolgicos a nivel de la cola. Si la
membrana se encuentra dallada, o se ha vuelto altamente permeable, no se
observan dichos cambios.
Cuando los espermatozoides son sometidos a un medio de elevada
hipotonocidad y alcanzan su volumen crtico, la membrana plasmtica se
rompe y el flagelo se endereza bruscamente, pudiendo variar su morfologa
posteriormente desde recta a ligeramente curvada o totalmente sinuosa

El test de permeabilidad de membrana es indicativo de la resistencia de la

membrana

plasmtica,

estando

correlacionada

positivamente

con

la

fertilizacin de ovocitos in vitro en semen fresco, test de hmster, unin a

anticuerpos 0B24 y tinciones vitales. Se observan cambios en el porcentaje de
espermatozoides con endsmosis positiva tras exponer a las clulas
espermticas a procesos de refrigeracin, congelacin, capacitacin

Tinciones vitales
La viabilidad espermtica depende de la integridad de la membrana plasmtica
y de la actividad biosinttica del espermatozoide.
Actualmente existe toda una serie de tcnicas destinadas a identificar
espermatozoides vivos y muertos. Se han descrito numerosas tinciones
basadas en la permeabilidad selectiva de la membrana plasmtica como por
ejemplo la eosina/nigrosina (Colas, 1980) y Tripn azul, de tal manera que si el
espermatozoide esta vivo la membrana celular acta como barrera impidiendo
el paso del colorante a travs de ella, permaneciendo la clula sin teirse.
La introduccin de la microscopia de fluorescencia en la determinacin del
estado vital del espermatozoide ha hecho aumentar la sensibilidad y resolucin
de las preparaciones destinadas a este fin, como es el caso de la utilizacin del
naranja de acridina en la identificacin del estado del ADN.
Tambin se han utilizado diversas pruebas de valoracin del metabolismo
espermtico, como son la reduccin del azul de metileno, demanda de oxigeno
indice de fructolisis. Sin embargo estas mediciones representan la media de
la muestra, y no tienen en cuenta las diferencias individuales entre los
espermatozoides

TEST DE TERMORRESISTENCIA
Los espermatozoides necesitan varias horas tras la eyaculacin o tras la
inseminacin artificial para alcanzar el lugar de fecundacin en la hembra. Su
capacidad fecundante est, en consecuencia, en parte ligada a su aptitud a
sobrevivir en el tracto genital de la hembra. Este hecho ha provocado que se

realicen test de termorresistencia in vitro, para apreciar la supervivencia de los

mismos. Las condiciones de incubacin varan con la especie y con el tipo de
semen a testar (fresco, congelado), pero tanto en la especie ovina como
caprina,

el

semen

es

generalmente

prediluido

una

concentracin

comprendida entre 80 y 300 millones de espermatozoides por mililitro, y

colocado en bao mara a 37-38C. La tasa de porcentaje de clulas vivas y de
la mortalidad puede calcularse al comienzo del test y 2 3 horas despus o
incluso ms tarde.
Bibliografa