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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO. FACULTAD DE ESTUDIO SUPERIORES IZTACALA MODULO INSTRUMENTACIÓN DRA. BERTHA ALICIA HASHIMOTO

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO. FACULTAD DE ESTUDIO SUPERIORES IZTACALA

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO. FACULTAD DE ESTUDIO SUPERIORES IZTACALA MODULO INSTRUMENTACIÓN DRA. BERTHA ALICIA HASHIMOTO

MODULO INSTRUMENTACIÓN

DRA. BERTHA ALICIA HASHIMOTO YAÑEZ DRA. MARCELA AMALIA N. PALACIOS HERNÁNDEZ

Procedimientos para realizar la biometría hemática

Equipo: 2

Grupo: 1163

Biometría hemática.

También denominada citometría hemática es una prueba que consiste en el estudio cuantitativo y cualitativo de los eritrocitos.

La serie roja está compuesta por la determinación de los índices eritrocitarios primarios, que incluyen la determinación de hemoglobina, hematocrito y número de eritrocitos por milímetro. Los índices secundarios que son el volumen globular medio (VGM), hemoglobina globular media (HGM), que se calculan a partir del índice primario.

Recursos:

FÍSICOS

1 Espectrofotómetro

1 Microscopio

1 MICROCENTRIFUGA

1 Pipeta de sahli (0.02ml)

1 Tubo de ensayo con 0.25 ml de edta al 10%

1 Pipeta de Thoma para globulos rojos

1 Cámara de Neubauer (hematocitometro o cámara contadora)

1 Tubo de Wintrobe

1 Gradilla de sedimentación globular (Wintrobe)

4 Portaobjetos

2 Tubos capilares

1Pipeta Pasteur con bulbo

QUIMICOS:

  • Frasco con solución salina isotónica

1

1

  • Frasco con reactivo de Drabkin

Hemoglobina

Se determina por la formación del complejo de cianometahemoglobina, por medio del reactivo de Drabkin.

Técnica

1-. Marcar dos tubos de ensayo de 13x100 uno con la letra “b” (blanco) y con la letra “p” (problema).

2-. Depositar encada tubo 5ml de reactivo de Drabkin.

3-. Con una pipeta de Shali con boquilla se aspira sangre arriba de la marca 20.

4-. Se limpia el exceso de sangre

  • 5. Se afora a la marca 20

6-. Se deposita en el tubo marcado con la letra”p”, aspirando y soplando varias veces sobre el reactivo hasta homogeneizar la mezcla.

  • 7. Se deja reposar durante 30 min a temperatura ambiente.

8-. La densidad óptica de este pigmento se mide en el espectrofotómetro a 540 nm en absorbancia, obteniendo un valor que se multiplica por el factor 36.8 (valor previamente establecido) y se reporta en gramos/ ml.

VALORES DE REFRENCIA

Hombres: 15.5-20g/100ml Mujeres: 13.5-17g/ml

CUENTA DE ERITROCITOS

  • 1. Aspirar la sangre con la pipeta de Thomapara glóbulos rojos hasta la marca de 0.5

límpiese el extremo de la pipeta y llénese con liquido de Gowers hasta la marca de

101 cuidando que no entre aire.

  • 2. Agitar durante 3 minutos en ángulo recto al eje longitudinal de la pipeta

  • 4. Soplando, se elimina las 3 a 5 primeras gotas de la pipeta.

  • 5. Llenar la cámara contadora (Neubauer) mediante un goteo parejo único del líquido

debajo del cubreobjetos

  • 6. Determinar transcurrir 4 minutos con el objeto de que se sedimente los eritrocitos.

4-. Se limpia el exceso de sangre 5. Se afora a la marca 20 6-. Se

7. Colocar la cámara en la platina del microscopio, se enfoca con el objetivo de 10x y se observa la cuadrícula para asegurarse que las celular están

en

dilución

homogénea.

 

8.

Cambiar

el

objetivo

de

40x

reduciendo adecuadamente la iluminación

CUADRICULA

DEL

HEMATOCITÓMETRO DE NEUBAUER

La cuadricula superior mide 9mm 2 y proporciona una escala adecuada para medir el tamaño de los objetos pequeños como los huevos de parásitos.

  • 1. La cámara cuenta células tiene una profundidad de 0.1mm y se emplea en la siguiente forma:

  • 2. Contar las células de los pequeños cuadros (1 central y 4 angulares). Cuente los eritrocitos situados en los límites superior izquierdo de los cuadros “R” pero no se cuenten aquellos que toquen los límites derecho inferior.

  • 3. Anote la cantidad hallada por 10,00 con objeto eritrocitos por microlitro de sangre.

de obtener el número de

VALORES DE REFERENCIA

Hombres: 5’000,000 a 6’000,000 millones/mm 3

Mujeres: 4’500,000 a 5’500,000 millones/mm 3

R= 5 cuadros pequeños cada uno contiene 16 cuadritos que mide 1/400mm 2 cada uno de ellos. Estos 80 cuadritos son los únicos en los que se cuentan los eritrocitos, generalmente con gran aumento.

W= 4mm 3 Cuéntese los leucocitos en éstos con poco aumento.

X= 4mm 3 que se emplean con otros cuadros para el conteo de células en líquido cefalorraquídeo.

HEMATÓCRITO

1-.Se efectúa por medio de la técnica del microhematocrito

2-. Se recoge la sangre por medio de un capilar y se llena hasta las ¾ partes de su longitud total del tubo capilar, se inclina para acelerar su llenado. Se tapa uno de sus extremos con una pequeña porción de plastilina o se flamea con un cerillo para cerrarlo (extremo que no ha estado en contacto con la sangre) y se limpia el exceso de sangre.

3-. Se coloca adecuadamente en la microcentrifuga clínica, con la parte cerrada sobre la empaquetadura de caucho (alrededor de la microcentrifuga), se coloca la tapa, se atornilla y se centrifuga a 16.000 rpm durante 5min.

4. Se valora el microhematócrito como el porcentaje de toda la sangre venosa ocupaba por los eritrocitos y se interpreta de la forma siguiente:

Con una escala o regla se mide desde la superficie de separación de plastilina hasta el menisco del plasma (100%) después de mide el paquete globular y se determina el porcentaje que corresponde.

VALOR DE REFERENCIA

Hombres: 45-57%

Mujeres: 42-48%

  • 1. Velocidad de sedimentación globular

Fundamento: La velocidad de sedimentación globular, refleja cambios en el contenido proteico del plasma, que se observa en la mayoría de las infecciones crónicas y agudas.

Procedimiento.

  • 1. Con la pipeta Pasteur, llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca de 0.

  • 2. Colocar el tubo en la gradilla para sedimentación, perfectamente vertical y ajustado al nivel de la gradilla.

  • 3. Dejar el tubo de Wintrobe en reposo durante 60 min. a temperatura ambiente.

  • 4. Transcurrido el tiempo registrar el nivel de la columna de plasma, leyendo la escala de arriba hacia abajo. Esta lectura es la velocidad de sedimentación eritrocitaria expresada en

mm/ hr.

Interpretación.

Hombres. 0 -5 mm/hr

  • 2. Índices globulares medios.

Mujeres. 0 -13 mm/ hr

  • a) Volumen globular medio ( VGM) Fundamento. Indica el volumen medio de un eritrocito, es de gran valor en el esclarecimiento de la causa de una anemia, si es mayor a los límites normales se considera anemia macrocitica o microcitica si es menor a los límites normales.

Procedimiento.

  • 1. Se calcula a partir del volumen de hematocrito y el número de eritrocitos expresados en

millones.

VGM=

Hematocrito X 100 Número de eritrocitos

  • b) Hemoglobina corpuscular media (HCM) Fundamento. Representa la cantidad promedio de hemoglobina en cada eritrocito, Procedimiento.

    • 1. Se calcula a partir de la cantidad de hemoglobina y el número de eritrocitos.

HCM = Hemoglobina X 10

Número de eritrocitos

  • c) Concentración de hemoglobina globular media ( CMHbC) Fundamento. Es el más importante de los índices por representar la cantidad de hemoglobina en porcentaje contenida en un eritrocito. Procedimiento.

    • 1. Se calcula teniendo en cuenta la cantidad de hemoglobina y hematocrito. CMHbC = Hemoglobina X 100 Hematocrito