BIOQUMICA AMBIENTAL

Gua de Laboratorio
C. A. Bonilla F.

2014

Facultad de Ingeniera y Gestin Ambiental

Bioqumica Ambiental
INFORME DE LABORATORIO
De forma prctica y concreta, un informe de laboratorio es una sntesis especfica de las experiencias realizadas en cada
sesin de laboratorio, y debe responder con facilidad al qu, cmo y para qu se desarrollaron cada uno de los trabajos.
Un informe es de suma importancia, pues lejos de ser un documento formal, nos ayudar afianzar nuestra capacidad
analtica y a contrastar cada uno de los resultados con la teora aprendida en clase, adems de modelar nuestro lenguaje
tcnico y cientfico, logrando cada vez una comunicacin ms fluida y eficaz.
La estructura principal de un informe de laboratorio es la siguiente:
Cartula
Su funcin es facilitar la identificacin del trabajo, por lo tanto el ttulo deber ser el texto ms resaltante. Es importante
colocar el logo de la universidad, los autores, colaboradores y el ao en curso.
Introduccin
Esta seccin no debe abarcar ms de una pgina, y en ella debern estar comprendidos: los objetivos, la problemtica
y el marco terico referido al tema, redactados de forma continua.
Materiales y mtodos
o Materiales
o Mtodos
o Procedimientos
Resultados
Presentacin de grficas, tablas y datos obtenidos en cada experiencia, con una explicacin (interpretacin) clara y
precisa. Es necesario detallar al mximo los productos de cada actividad realizada durante la prctica.
Conclusiones
Esta seccin sirve para reafirmar los conocimientos de cada prctica en funcin a los resultados. Las conclusiones son
generales y pueden incluir comentarios acerca de las destrezas y actitudes aprendidas, sin embargo, debern
presentarse como afirmaciones categricas.
Recomendaciones
Reportar incidentes y accidentes ocurridos en cada prctica, a fin de evitar problemas futuros. Tambin es importante
colocar algunas sugerencias en los procedimientos que permitan realizar los trabajos con mayor eficiencia.
Bibliografa
Todo trabajo prctico experimental requiere de una serie de soportes bibliogrficos como: libros, revistas, notas,
manuales, etc., los cuales deben citarse de manera adecuada.
Ejm: Erwin T, Moore W. 2007. Taxonomic review of the Neotropical genus Moriosomus Motschulsky (Insecta:
Coleoptera, Carabidae, Morionini) with notes on the way of life of the species. Zootaxa 1438: 49-23.
NORMAS DE LABORATORIO
INTRODUCCIN
El trabajo en el laboratorio debe respetar un conjunto de medidas preventivas, cuya finalidad es proteger a los operadores,
de los riesgos inminentes de cada experiencia. Por tanto, la seguridad en el laboratorio es una labor colectiva entre los
estudiantes, los docentes y el personal tcnico de apoyo. Los agentes potencialmente dainos para la salud presentes en el
laboratorio son los siguientes:
Agentes Biolgicos: virus, bacterias, hongos y parsitos.
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Agentes fsicos y mecnicos: temperaturas extremas, radiaciones ionizantes, conexiones elctricas defectuosas y/o
inadecuadas e instrumentos daados o rotos.
Agentes qumicos: Compuestos corrosivos, inflamables, comburentes, irritantes, dainos para el ambiente, etc.
OBJETIVOS
Proteger al estudiante de la exposicin innecesaria contra agentes potencialmente dainos (qumicos, fsicos y/o
biolgicos) que puedan poner en riesgo su salud.
Garantizar la integridad de la muestra contra la degradacin o contaminacin cruzada.
Identificar los desechos txicos y almacenarlos en ambientes adecuados hasta su eliminacin.
NORMAS DE SEGURIDAD EN EL TRABAJO EXPERIMENTAL
Conocer el manejo de los accesorios y equipos a utilizar. No debe manipularse ningn instrumento si no se le conoce.
El trabajo en el laboratorio debe realizarse con cuidado, precisin y bajo la supervisin de un profesional competente.
A. PARA INGRESAR AL LABORATORIO
Est prohibido el ingreso a laboratorio sin el mandil correspondiente, el cual deber ser largo y permanecer
completamente abrochado.
Se prohbe el ingreso al laboratorio con bolsos, maletines o mochilas. Los estudiantes y docentes debern adecuar
sus pertenencias en los casilleros ubicados en cada pasadizo.
Algunos equipos como computadoras y calculadoras estn permitidos, bajo la entera responsabilidad de cada
estudiante.
Revisar los antecedentes conceptuales y el protocolo de trabajo experimental presente en la gua de prcticas de
cada curso, donde adems cada estudiante colocar la informacin pertinente a su grupo sanguneo, alergias,
contactos en casos de emergencia, entre otros.
El tiempo de tolerancia para cada una de las sesiones de prcticas ser de 10 minutos luego de los cuales, el
estudiante no podr ingresar al laboratorio.
Revisar el estado de la mesa de trabajo, del material y de los equipos recibidos. Reportar cualquier falla o
irregularidad al responsable del laboratorio. El material se debe lavar y secar antes de ser usado.
B. DURANTE EL TRABAJO DE LABORATORIO
Seguir las medidas de seguridad necesarias para la conservacin de cada equipo y accesorios con el que se est
trabajando, incluyendo a los bancos metlicos, los cuales permanecern bajo las mesas cuando no sean usados.
Tomar slo las cantidades de reactivos necesarios para el trabajo experimental y colocarlas en material de vidrio
limpio y seco.
Etiquetar y rotular todos los recipientes donde se coloquen reactivos, productos y residuos, indicando
principalmente: nombre, concentracin y fecha de preparacin. Seguir las medidas de contingencia dadas por el
personal del laboratorio en caso de accidente.
No recibir visitas en el interior del laboratorio. Evitar las distracciones para no ocasionar accidentes.
Informar al profesional responsable cuando se requiera abandonar temporalmente el laboratorio, o reincorporarse.
No ingerir alimentos ni bebidas en el interior del laboratorio, a menos que lo indique el protocolo.
No fumar en el interior del laboratorio. Todas las fuentes de fuego o calor deben estar controladas.
C. AL CONCLUIR LA SESION
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Disponer de los residuos y de los reactivos de la manera indicada por las normas. Los reactivos no usados no
debern devolverse a los frascos originales. Los frascos de reactivos puros deben regresarse al almacn.
Es obligacin de cada grupo de trabajo, el correcto lavado del material utilizado, el mismo que ser entregado
limpio y seco en orden y esperando su turno.
Dejar limpio y seco el lugar de trabajo. Colocar los bancos junto a las mesas o invertidos sobre stas.
El mandil es de uso exclusivo para el laboratorio. Retirarse el mandil y dems equipo de seguridad, guardarlo
en una bolsa de plstico exclusiva para este uso. El mandil deber lavarse al final de cada sesin.

MATERIAL DE USO OBLIGATORIO

Mandil largo (a la rodilla o pantorrilla) y manga larga, en algodn 100% con botones de color blanco
Encendedor para mechero y/o cerillos
Franela de algodn limpia
Cinta para encubrir (masking tape) de 1.27 cm de ancho
Marcador indeleble, preferentemente negro
RECOMENDACIONES GENERALES:
No se debe probar ninguna sustancia qumica, pues la mayora de ellas son txicas y/o venenosas. Observar y leer
cuidadosamente cada etiqueta antes de usar una sustancia.
No se debe oler directamente el contenido de un frasco porque muchas sustancias lquidas emiten vapores txicos;
estos deben llevarse a la nariz con la agitacin de las manos.
Tener cuidado al transportar los lquidos calientes o al calentarlos porque algunos se proyectan.
Cuando se calienta un recipiente de vidrio o un tubo de prueba que contiene una solucin, se debe tener la precaucin
de orientar la boca del tubo hacia un lugar en que no se encuentren otras personas, pues el lquido al hervir puede
causando lesiones muchas veces severas.
Cuando se calienta un material de vidrio debe tenerse en cuenta su calidad y su resistencia a la temperatura. De
preferencia debe tener marca reconocida.
Todo residuo que queda en un recipiente o tubo de prueba debe ser arrojado a un tacho o al lavatorio haciendo fluir
gran cantidad de agua. No se debe arrojar al suelo ni sacudir el tubo.
Al calentar un material de vidrio se debe verificar que no est rajado, porque con el calor puede romperse provocando
accidentes al operador.
ACCIONES A SEGUIR EN CASO DE ACCIDENTES E INCIDENTES
Si hubo inoculacin accidental, cortes o rasgado de piel, o alguna quemadura por agente qumico, la persona
afectada debe quitarse de inmediato el mandil protector, lavarse las manos y la zona afectada del cuerpo,
aplicarse el desinfectante tpico presente en el Botiqun del laboratorio y dirigirse a un Servicio Mdico donde
informar detalladamente la causa de la herida y sobre los agentes infecciosos, qumicos o mecnicos implicados.
Si ocurriese una ingestin accidental de material o reactivo posiblemente peligroso, la persona debe ser trasladada
inmediatamente a un Servicio Mdico despus de quitarse el mandil, informando al mdico de turno el reactivo
ingerido y seguir estrictamente las instrucciones.
Si hay una emisin de un aerosol posiblemente peligroso o la emanacin de vapores txicos, todas las personas
deben evacuar el laboratorio, informando al responsable del mismo. Nadie podr entrar al ambiente afectado hasta
que los responsables lo indiquen, esperando que los aerosoles puedan salir y que se depositen las partculas ms
pesadas. Si es necesario, debe colocarse una seal de prohibicin para no ingresar al Laboratorio.
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Si se estuvo trabajando con muestras biolgicas posiblemente infectadas, las cuales se derramaron
accidentalmente, cubrir con papel peridico toda la zona afectada, humedecer sobre el papel con fenol al 5% y
dejar que este reactivo acte durante 30 minutos como mnimo antes de limpiar el rea.

(Nota: Los temas: Informe de Laboratorio y Normas de Laboratorio, han sido tomado de GUIA DE PRCTICAS DE BIOQUIMICA AMBIENTAL 2014. A. Vlez & R. Salas)

BIOQUIMICA AMBIENTAL
2014 II

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PRACTICA N1
ESPECTROFOTOMETRIA Y MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO

I.- ASPECTOS GENERALES:

ESPECTROFOTOMETRIA.- Es un mtodo ptico que se basa en una propiedad de toda molcula o compuesto
qumico de absorber y emitir energa radiante. La energa radiante es un tipo de energa que se transmite por el
espacio a enormes velocidades y adoptan muchas formas, siendo unas de las ms conocidas la luz y el calor
radiante y tienen como una de sus propiedades de propagacin emitir longitudes de onda, que se expresan en
nanmetros (nm), Armstrong (A). Se usa el espectrofotmetro que es un instrumento de alta precisin que se
emplea en numerosos anlisis bioqumicos, que permiten cuantificar la energa radiante como una frecuencia de
longitud de onda.
Existen 3 clases de espectrofotmetros:
1.- Rango Visible que operan en la regin visible de 400 a 770 nm.
2.- Rango Ultravioleta UV los que operan en la regin ultravioleta de 180 a 360 nm.
3.- Rango Infrarrojo los que operan en esta regin de 800 a 1000 nm.
El Espectro de Absorcin de un compuesto nos indica la fraccin de la radiacin electromagntica incidente que
es capaz de absorber dentro de un rango de frecuencias. Cada elemento qumico posee picos de absorcin en
longitudes de onda definidas. De hecho, se emplea el espectro de absorcin para identificar los componentes
presentes an algunas muestras que pueden ser lquidos o gases.
CLASIFICACION DEL ESPECTRO ELECTROMAGNETICO
GAMMARAYOS XUVVISIBLEINFRARROJO MICROONDAS

0-11100180390400 770
LONGITUD DE ONDA (nm)

80010001000300 000

BANDAS DE ABSORCION DEL ESPECTRO VISIBLE

Longitud de
Onda (nm)

400 435

Color

Violeta

Longitud de

Color
Complementario

Onda (nm)

Amarillo Verde

560 580

Color

Amarillo Verde

Color
Complementario

Violeta

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435 480

Azul

Amarillo

580 595

Amarillo

Azul

480 490

Verde Azul

Anaranjado

595 610

Anaranjado

Verde Azul

490 500

Azul Verde

Rojo

610 750

Rojo

Azul Verde

500 560

Verde

Prpura

FOTOCOLORIMETRIA.La fotocolorimetria es un mtodo de anlisis qumico cuantitativo que mide la intensidad de la luz transmitida a
travs de soluciones coloreadas, ya sea se traten de soluciones coloreadas naturalmente o de soluciones
coloreadas mediante reacciones qumicas.
Cuando un haz de luz atraviesa una solucin, parte de su radiacin es absorbida por las molculas del soluto
(Absorbancia) transmitindose con menor intensidad que la original (Transmitancia); esta absorcin de luz ser
proporcional a la concentracin de molculas del soluto. La luz original se denomina luz incidente, y la que se
transmite, luego de pasar por la solucin luz transmitida. La capacidad de absorcin de luz de un cuerpo es
selectiva para un determinado grupo de radiaciones luminosas, dejando pasar otras.

Luz Incidente Lo

Luz Transmitida Lt

Solucin Coloreada absorbe la luz

La selectividad se determina por los distintos niveles de energa necesarios para excitar los electrones de cada
molcula y rechazarlos a rbitas ms externas que las que normalmente ocupan. Diferentes longitudes onda
proporcionan diversos niveles de energa, para excitar un grupo de molculas ser necesario hacer incidir
determinada longitud de onda de luz.
Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada cantidad de luz, la cantidad de luz que deja pasar
una solucin ser tanto menor cuanto mayor sea la concentracin de molculas en la solucin y cuanto mayor
sea el dimetro del tubo a travs del cual pasa la luz. Estos factores estn considerados en la Ley de Lambert y
Beer, expresada en la siguiente frmula:
Lo: Intensidad de luz incidente Lt: Intensidad de luz transmitida.
A: Coeficiente de Extincin Molar (constante para cada soluto a una longitud de
onda determinada).
B: Longitud o dimetro del recipiente atravesado por la luz.

C: Concentracin de la Solucin.

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Log

Lo
A B C
Lt

En la frmula Log Lo/Lt es la Absorbancia o Densidad Optica (D.O) y es directamente proporcional a la

concentracin e inversamente proporcional a la intensidad de la luz transmitida. El factor dependiente del espesor
del tubo se elimina mediante tubos igual dimetro (1cm).
La densidad ptica se lee en una escala logartmica que es de 0.000 a 2.000 y la transmitancia en la escala de
0.000 a 100%.
Existe una relacin entre la Absorbancia y la Transmitancia:

Abs = 2 Log %T

COMPONENTES DE UN ESPECTROFOTOMETRO:
Consta de las siguientes partes:
1.- Fuente de luz, es energa radiante estable
2.- Monocromador (prismas, lentes), permite utilizar una regin de longitud de onda restringida.
3.- Porta celda, recipiente transparente para colocar la muestra.
4.-Fotocelda, detector de radiacin o transductor convierte la energa radiante en seal utilizable.
5.- Galvanmetro, procesa la seal y lo convierte en lectura.

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Monocromador
(Prisma)

Porta Celda
Fotocelda

Galvanmetro

Fuente de Luz

OBJETIVOS
1.- Conocer el manejo adecuado de un Espectrofotmetro.
2.- Determinar el pico mximo de absorcin de dos compuestos.
3.- Determinar la concentracin de una solucin empleando el factor de calibracin y la curva de calibracin.
MATERIAL DE LABORATORIO

Solucin de Azul de Metileno 100mg/mL

Solucin de KMnO4 (100mg/ml)
4 pesetas con Agua destilada
25 tubos de ensayo 13x100mm
04 Beackers 150mL
04 matraz de 250mL
Papel platino
Guantes quirrgicos
8 Pipetas de 1mL
8 Pipetas de 5mL

4 Pipetas de 10mL
2 Micropipetas 10-100uL
3 Pipetas descartables
Papel toalla
2 Espectrofotmetro
Tubos o cubetas de lectura
1 tubo de ensayo de 8x100mm
1 tubo de ensayo de 17x150mm
1 tubo de ensayo de 25x150mm

EXPERIENCIA N 1

DETERMINACIN DEL ESPECTRO DE ABSORCIN DE UNA SUSTANCIA

PROCEDIMIENTO

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Preparar el siguiente esquema de trabajo:

Reactivos / Tubo

M1

Estndar de Azul de Metileno (100mg/ml)

Estndar Permanganato de Potasio
(100mg/ml)
Agua destilada

KMnO4

M2

Bla
nco
-----------

100uL

------ 100uL
3mL

3mL

3mL

Leer al espectrofotmetro, los tubos M1 y M2, a las longitudes de onda (): 400,420, 440, . 800nm, llevando
a CERO con el tubo 3 en cada cambio de .
Anotar, en la seccin CALCULOS, las absorbancias y determinar el pico mximo de absorcin para ambos
compuestos

EXPERIENCIA N 2

CLCULO DE LA CONCENTRACIN EMPLEANDO EL FACTOR DE CALIBRACIN

Para la determinar la concentracin de una solucin problema podemos emplear el factor de calibracin o la
curva estndar, para ello se requiere de una solucin de concentracin conocida o "Solucin Standard.
FACTOR DE CALIBRACIN.- Es la unidad en peso de una sustancia que corresponde a una unidad de
lectura del espectrofotmetro.

Se obtiene:
Absorbancia Muestra

[Standard]

[Muestra]

Absorbancia Standard

Procedimiento:
Preparar cuatro tubos segn el siguiente esquema:

f =

Rvos. / Tubo

Standard de Azul de metileno (100

mg/dL)

Standar
d
100uL

M1

M2

------

-----

Blanc
o
-----

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Muestra de Azul de metileno

------

100uL

100uL

-----

Agua destilada

3 mL

3 mL

3 mL

3 mL

Mezclar y leer al espectrofotmetro a una longitud de onda de 660nm, llevando a 0 con el Blanco.
Aplicar el factor de calibracin y encontrar la concentracin de las muestras.

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EXPERIENCIA N 3

CLCULO DE LA CONCENTRACIN EMPLEANDO EL FACTOR DE CALIBRACIN

Curva de Calibracin.- Consiste en determinar la absorbancia de distintas soluciones de concentraciones

conocidas del compuesto en estudio y con los datos realizar una curva: Eje X: Concentraciones, Eje Y:
Absorbancias.
Procedimiento A:

Preparar una serie de 8 tubos de acuerdo al esquema siguiente:

Rvos./ Tubo

Solucin de KMnO4 (1mg/dL)

Agua Destilada

Muestra entregada
profesor

por el

----

1 2 3 4 5

m
m
m
m
m
L
L
L
L
L

5 4 3 2 1

m
m
m
m
m
L
L
L
L
L

---
--

---
--

----

---
--

---
--

---
--

---
--

---
--

----

---
--

----

5 5
m
m
L
L

Leer las soluciones al espectrofotmetro a una longitud de onda de 545nm, llevando a 0 con el tubo (1)
blanco de agua destilada.

Procedimiento B: Preparar una serie de 8 tubos de acuerdo al esquema siguiente:

Rvos./ Tubo

Soluc. Azul
(1mg/dL)

de

Agua Destilada

Muestra entregada
profesor

Metileno

por el

----

1 2 3 4 5

m
m
m
m
m
L
L
L
L
L

5 4 3 2 1

m
m
m
m
m
L
L
L
L
L

---
--

---
--

----

---
--

---
--

---
--

---
--

---
--

----

---
--

----

5 5
m
m
L
L

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Bioqumica Ambiental

CONCENTRACION (mg/dL)

----

Leer las soluciones al espectrofotmetro a una longitud de onda de 660nm, llevando a 0 con el tubo (1)
blanco de agua destilada.

Construir una curva de absorcin en un papel milimetrado con las lecturas y las concentraciones obtenidas.
Utilizar la Curva de Calibracin para calcular la Concentracin de las muestras 7 y 8 entregadas por el docente.

Nota Importante: Para aprender el manejo del espectrofotmetro debera usted prestar la debida atencin a
las explicaciones que el profesor le impartir en su momento oportuno.

Absorbancia

Concentracin (mg/dL)

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PRACTICA N 1

ESPECTROFOTOMETRIA Y MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO

Nombre: . Turno: .. Mesa: ..

1.- MARCO TEORICO:

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EXPERIENCIA N 1
ESPECTROFOTOMETRIA Y MANEJO DEL
ESPECTROFOTOMETRO

2.-CALCULOS

Longitud

Espectro de Absorcin del Azul de Metileno

Az

de Onda

ul

(nm)

de

Mn

Met

O4

ilen
o

400
420
440
460
480
500
520
540
560
580
600
620
640
680
700
720
740
780
800

K2

Espectro de Absorcin del K2MNO4

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RESULTADOS: (Realiza la descripcin detallada de las actividades realizadas durante la experiencia prctica. Los resultados
pueden complementarse con figuras y tablas citadas en el informe)

CONCLUSIONES: (Establece tus conclusiones en base a los resultados obtenidos en la prctica)

RECOMENDACIONES: (Establece recomendaciones que podran mejorar los futuros trabajos)

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EXPERIENCIA N 2
CLCULO DE LA CONCENTRACIN EMPLEANDO EL FACTOR DE CALIBRACIN

2.- CALCULOS (Esquema de trabajo)

Tubo

Stan
dard
M1
M2

Fact
or

Absorba
ncia

RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

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EXPERIENCIA N 3

CLCULO DE LA CONCENTRACIN EMPLEANDO EL FACTOR DE CALIBRACIN

Procedimiento A: K2MnO4

2.- CALCULOS (Esquema de trabajo)

T
u
b
o
2
3
4
5
6
7

Abso
rb

[
]

------------

RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

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CLCULO DE LA CONCENTRACIN EMPLEANDO EL FACTOR DE CALIBRACIN

Procedimiento B: Azul de metileno

2.- CALCULOS (Esquema de trabajo)

T
u
b
o
2
3
4
5
6
7

Abso
rb

[
]

-----------

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3.-RESULTADOS:

4.- CONCLUSIONES:

5.- RECOMENDACIONES:

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PRACTICA N 1

ESPECTROFOTOMETRIA Y MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO

CUESTIONARIO:

1.- Defina:
- Fotocolorimetra: ...

- Absorbancia: .

- Transmitancia: ...

- Espectro de absorcin:

- Curva de calibracin:

- Coeficiente de extincin molar:

2.- Averigue la longitud de Onda de mxima Absorcin de los siguientes pesticidas:

- ABATE =

- BENDIOCARB= BRODIFACOUM =

BROPMADIOLONA =

- CLORPIRIFOS = CIFLUTRINA =

CIPERMETRINA =

- DECAMETRINA =

3.- Diferencias entre un Fotocolormetro y un Espectrofotmetro, esquematice:

ACEPHTE =

ALLETHRINA =

CIFENOTRINA =

DDT =

ANTU =

DIMETOATO =

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4.- Describa el uso de detectores UV Visible en equipos de HPLC (High- Performance Liquid
Chromatography).

BIBLIOGRAFA EMPLEADA EN ESTE INFORME

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