DISTINTOS TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos

es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez
o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo
y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene
efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.

ATENDIENDO A SU ESTADO FSICO:

Medios de cultivo: Slido y Lquido: tambin llamados caldos, En ambos
medios debe haber una buena cantidad de nutrientes que faciliten el
crecimiento bacteriano y entonces cual es la diferencia?.pues la diferencia
radica en la presencia de una sustancia que se llama Agar o Agar-Agar y que
es la encargada de darle la solidez y consistencia al medio. Esta sustancia
proviene, principalmente, de un alga llamada Gelidium, aunque muchos otros
gneros pueden servir como fuente de este polisacrido (es decir, un azcar
grande formado por la unin de azcares pequeos). Y como se obtiene del
alga?Se toman sus semillas, se lavan, se secan, se realizan procesos de
extraccin, filtracin, purificacin y desecacin para que queden hojuelas o
polvo y luego si adicionarla al medio de cultivo.
Tiene alguna ventaja el uno sobre el otro? Pues la ventaja fundamental de usar
un medio de cultivo lquido, es que permite que crezcan bacterias que se
encuentran en muy poca cantidad, es decir, cuya concentracin es muy baja
en la muestra que estemos analizando. Para el caso del medio de cultivo
slido, la ventaja radica en que permite detectar los diferentes tipos de
bacterias que puedan encontrarse en una sola muestra...entonces el usar
uno u otro medio de cultivo depender de lo que busquemos o queramos:

aislar una bacteria que se encuentre en cantidades muy pequeas (medio

lquido) o todas las bacterias que puedan haber en una muestra (medio slido).

Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando

a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar
medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las
bacterias.

SEGN SU UTILIZACIN:
Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para
que pueda crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos
especiales. El medio ms conocido de agar nutritivo o agar comn, que resulta
de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes grupo son el agar
tripticase de soja, el agar Columbia, etc.
2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias
nutritivas normales, serie de factores indispensables para el crecimiento de
microorganismos exigentes. Este enriquecimiento hace por adicin de sangre u
otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, dichos factores.
En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los enriquecimiento
del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita
para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada
adicionada al medio chocolate).
3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de
ciertas bacterias una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios
consiste en facilitar nutricionalmente de una poblacin microbiana especfica.
Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que favorecer el
crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.
4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo
impiden crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los
medios inhibidores podran considerarse variante ms restrictiva de los medios
selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente de sustancias
antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de
determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento
de los grmenes impide el crecimiento de los Gram positivos.
5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas
diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un
sustrato metabolizable este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial

porque permite distinguir los grmenes lactosa de aquellos que no lo hacen.

Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa hemlisis), el SS (que es
doblemente diferencial), etc.
6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna
cualidad especfica que para reconocer la identidad de un microorganismo.
Estos medios han de poseer los elementos asegurar el crecimiento de los
microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado que nos
muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general,
cualquier medio haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo,
son medios utilizados Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran
cantidad de medios especficos de identificacin ciertos microorganismos, con
lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y reducir identificacin.
Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux),
identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de
cultivo gracias a sustratos cromognicos especficos.
7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de
clulas a partir de un microorganismo aislado. Se emplean en la obtencin de
vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios para la multiplicacin
suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es medios.
8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por
diversas razones mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de
calidad de las pruebas y reactivos el Laboratorio de Microbiologa. En el
laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas:
a) haciendo pases peridicos de placa a placa,
b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.
9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas
que no pueden inmediatamente. Su utilizacin debe hacerse introduciendo la
torunda con la que se obtuvo interior del medio (generalmente en un tubo).
Son ejemplos tpicos de este grupo los medios Amies,Cary-Blair, etc.

ATENDIENDO A SU COMPOSICIN :
Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios
de cultivo pueden ser clasificados en:
1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se
preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su
composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es

rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en

condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En
la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms
empleados.
2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin
exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en
proporciones determinadas, resultando un medio de composicin
perfectamente definida.
3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento
exigidos para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico
para estos grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan
los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo
(extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en
ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente
en clulas vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo
son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

SEGN SU ORIGEN:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin
qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.

MEDIOS DE CULTIVOS COMUNES

Agar nutritivo: es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para
todo tipo de bacteria. Es muy til porque permanece solido incluso a relativas
altas temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en
la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difcilmente observables. El agar nutritivo
contiene normalmente (w/v).
0.5 % Peptona

 0.3 % extracto de carne/extracto de levadura

1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
pH casi neutro (6.8) a 25 C.
Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la
investigacin de los diversos tipos de hemlisis (, gamma). Se utiliza para
el crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se puede
utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado
enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La
adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que
estn en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores
del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Agar chocolate: El agar
chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base.
Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un
importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El
agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de
Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden
crecer muchos otros microorganismos exigentes.
Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est
recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los
microorganismos de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la
invasin de los cultivos por Proteus. La presencia de lactosa en su composicin
le confiere el carcter de medio diferencial, aunque la interpretacin sea
diferente al anterior medio por la incorporacin de otro indicador: el azul de
bromotimol. Las colonias lactosa positivas aparecern de color amarillo y las
lactosa negativas lo harn con un color verdoso, blanco o azulado.
Agar S.S.: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y
de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros
materiales en los cuales se sospeche su presencia.
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, est dada por la
sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram
positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus
spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido
sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos
fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo
virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un
fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa,
crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La

produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro

debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Siembra: Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar.
Incubacin Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Agar Hektoen: Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar SS.
Se utiliza para Facilitar el aislamiento de las enterobacterias. Las cualidades del
agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azcares, que neutralizan el
efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos grmenes de cultivo
delicado (Shigella en particular).El crecimiento de Salmonella es excelente,
igual que el de Shigella, obtenindose colonias ms numerosas y voluminosas
que en los medios selectivos usuales.
C.P.S. ID3. : Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la
identificacin de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualizacin del
cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrn). La
identificacin solo requiere la adicin de un reactivo para confirmar o descartar
la especie sospechada. Otros microorganismos diferentes requieren los
sistemas de identificacin habituales (API, p. ej) Granada, Islam o New GBS:
Medios utilizados para deteccin de Streptococcus agalactiae, mediante la
utilizacin de un sustrato cromognico especfico de este microorganismo.
Agar Mueller-Hinton: El Agar Mueller Hinton es un medio utilizado para
realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en microorganismos
aerbicos por el mtodo de Bauer-Kirby. Este medio tambin es conocido como
Agar M-H. lleva a cabo las pruebas de susceptibilidad a antibiticos, utilizando
un solo disco impregnado con una alta concentracin de un antimicrobiano.
Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de
grmenes exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio
muy enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es
un medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de
aerobios, anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al
aumentar, se manifiesta por un color rosa del medio.
Agar Chapman o manitol salino: Permite el crecimiento de un determinado
grupo de bacterias mientras que inhibe el crecimiento de otras. Este medio es
importante en el laboratorio clnico debido a que es capaz de distinguir los
microorganismo patognicos en un corto periodo de tiempo.
Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa
positivos, a la vez que los diferencia del resto.
Medio de Loeffler: Es un medio especfico para el cultivo de Corynebacterium
difteriae.
Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS): Similar al agar SS. Es
un medio diferencial e inhibidor a la vez.

Agar Kligler: El agar medio de Kligler (TSI, Triple Sugar Iron) es un medio
diferencial que puede ayudarnos a distinguir entre especies de enterobacterias
de acuerdo a su capacidad (o falta de ella) para:
a. Metabolizar lactosa, sacarosa o ambas
b. Producir acido mediante fermentacin
c. Producir gas durante la fermentacin
d. Generar cido sulfhdrico
Agar Levine EMB: El Agar Eosina y Azul de Metileno es un medio utilizado
para el aislamiento y diferenciacin de bacilos entricos Gram negativos.
El uso de la eosina y del azul de metileno permite la diferenciacin de las
colonias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. La sacarosa est
incluida en el medio para detectar a los miembros del grupo coliforme que
fermentan ms rpidamente la sacarosa que la lactosa. Este medio se
considera superior al Agar ENDO, ya que resulta ser un medio ms sensible,
estable y seguro y permite una diferenciacin ms temprana entre las colonias
fermentadoras y no fermentadoras de lactosa.
Agar Cetrimida. Agar King: Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de
Pseudomonas aeruginosa a partir de diversas muestras.
Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el
cultivo de anaerobios.
Agar Gardnerella: Agar con sangre humana ms una mezcla de antibiticos
que permiten la observacin de colonias betahemolticas caractersticas de
Gardnerella vaginalis.
Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales
creciendo a 42 C en microaerofilia.
Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract): Se utiliza para el aislamiento
de bacterias del gnero Legionella.