UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA

QUMICA ANALTICA INSTRUMENTAL

CURVA DE RINGBOWN. DETERMINACIN
DE LA ZONA DE TRABAJO. DETERMINACIN
DE LA CONCENTRACIN PTIMA
PROFESORA:
Mg. Norma Carlos
Casas
INTEGRANTES:
Aguilar Puente, Antonio Martin
Campos Salazar, Antony Brayan
Crdenas Toribio, Karen Regina
Chvez Pacheco, Sair Mximo
Colonio Garca, Katia Stephanie
Martinez Cabrejos, Karen Janet
Pizarro Herrera, Vctor Romario
Quevedo Torres, Sergio
Quinteros Espino, Norah Miryam
Torres Chipana, Melissa
Mercedes
LIMA-PER
2010

OBJETIVOS

Aprender a graficar la curva de Ringbom.

Conocer la concentracin ptima de un compuesto para que

cumpla con la Ley de Lambert Beer a travs de la curva de
Ringbom.

Conocer las limitaciones de la ley de Lambert Beer.

INTRODUCCIN
En la primera prctica aprendimos la constitucin, el manejo y el
cuidado del espectrofotmetro UV-vis y la importancia que tena dicho
instrumento para el reconocimiento de una sustancia.
Para reconocer una sustancia hallamos su curva espectral la cual
despus era comparada con la curva espectral de una sustancia patrn,
otra manera es que debe de cumplir con la Ley de Lambert Beer pero
debemos de saber que esta ley tiene sus limitaciones y que una de las
limitaciones tiene que ver con la concentracin del analito.
En esta prctica se aprender a hallar la concentracin ptima para una
mejor lectura en el espectrofotmetro UV-vis y para que el analito
cumpla con la Ley de Lambert - Beer, esto lo lograremos con el uso de
la Curva de Ringbom.
La curva de Ringbom relaciona la absortancia con la concentracin del
analito. Mediremos la absorbancia de diferentes concentraciones de un
analito, hallaremos el porcentaje de transmitancia y con esto la
absortancia, luego la relacionaremos sus concentraciones y de acuerdo
a la curva reconoceremos la concentracin ptima en la cual se cumpla
con la Ley de Lambert Beer.

FUNDAMENTO TERICO

LEY DE LAMBERT Y BEER

Ocurre cuando en el caso de la radiacin monocrmatica, la
absorbancia es directamente proporcional a la longitud b de la
trayectoria a travs de un medio y la concentracin c de la especie
absorbente. sta relacin se representa con la siguiente frmula:
A= abc
a : constante de proporcionalidad llamada absortividad
b : longitud (cm)
c : concentracin (g/L)
Cuando la concentracin de la ecuacin se expresa en moles por litro y
el largo de la celda est en centmetros, la absortividad se llama
absortividad molar, y se representa con el smbolo especial . Por tanto,
cuando b est en centmetros y c en moles por litro se tiene:
A = bc
Se han encontrado pocas excepciones a la generalizacin de que la
absorbancia est relacionada en forma lineal con la longitud de la
trayectoria. Por otra parte, se ha encontrado desviaciones frecuentes de
la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentracin cuando b es constante. Para que no ocurran errores
durante nuestro anlisis y hacerlo demanera adecuada hacemos uso de
la curva de ringbown.

GRFICA DE RINGBOW
Cuando se realiza un anlisis espectroscpico se debe trabajar, en lo
posible, se debe trabajar, en lo posible, con concentraciones que
permitan que se cumpla la ley de Beer, con el fin de obtener una curva
de calibracin que tenga una relacin lineal.
Para obtener el intervalo ptimo de concentraciones primero se
construye la curva de Ringbom, que consiste en construir una grfica
de absorbancia (100- %T) vs. lg Concentracin. Los datos se obtienen
preparando una serie de soluciones patrn del analito, que cubran una
variacin de por lo menos dos rdenes de magnitud de concentracin
de este y se miden las transmitancias correspondientes a la longitud de
onda analtica escogida. Para la mayora de los sistemas la curva de
Ringbown corresponde a una curva en forma de S. La parte lineal de
esta grfica permite obtener el intervalo de concentraciones ptimo o el
intervalo que presentara una relacin lineal entre absorbancia y
concentracin. En esta grfica, los cruces de la parte recta (la
intermedia), con la parte baja y con la parte alta, pueden servir para
determinar un valor para los lmites de deteccin mnimo y mximo,
respectivamente.

A partir de esta grfica podemos obtener otros datos como:

Lmite de deteccin mnimo: Es la cantidad o concentracin mnima
de sustancia que puede ser detectada con fiabilidad por un mtodo
analtico determinado. Intuitivamente sera la concentracin mnima
obtenida a partir de la medida de una muestra (que contiene el analito)
que seramos capaces de discriminar de la concentracin obtenida a
partir de la medida de un blanco, es decir, de una muestra sin analito
presente.
Sera la cantidad o concentracin ms pequea del analito que produce
una seal XL significativamente diferente de la seal del ruido de fondo
Xb.

El criterio utilizado para que la concentracin mnima detectable sea

distinguible con certeza del ruido de fondo es que la diferencia entre la
seal del analito, de concentracin muy baja, y la seal de los blancos
sea igual a tres veces la desviacin estndar de la seal de los blancos,
utilizados para medir el ruido de fondo. Es decir que:
En donde XL es la seal lmite, obtenida para la concentracin mnima
detectable de analito, Xb es la seal promedio de los blancos, y sb es la
desviacin estndar de las lecturas del blanco.
Lmite de deteccin mximo:

Vendra a ser la mxima concentracin de un analito que se puede

analizar. Esto se debe a que las soluciones se hacen tan concentradas,
que en el caso de los mtodos espectrofotomtricos, toda la luz es
atrapada por el analito y tenemos una situacin equivalente al ajuste
del 0 % de transmitancia. En este caso, el detector no diferencia dos
soluciones de concentraciones altas.La determinacin queda limitada a
concentraciones menores del valor de lmite de deteccin mximo, pero
en este caso, a diferencia del lmite de deteccin mnimo, el problema
se soluciona fcilmente mediante una dilucin adecuada. En el caso del
lmite de deteccin mnimo, las soluciones deben concentrar la muestra
o usar otra tcnica con lmite de deteccin menor.
El lmite de deteccin mximo, se puede obtener de la parte superior de
la
curva
de
Ringbown.

TRANSICIONES
ORGNICAS

ELECTRNICAS

EN

MOLCULAS

Clasificacin:
Las bandas de absorcin en las regiones Ultravioleta y Visible que
presentan los compuestos orgnicos se asocian con transiciones
electrnicas en la capa de valencia. Los electrones involucrados en
dichas transiciones corresponden a aquellos mas dbilmente atrados
por el conjunto de ncleos atmicos que componen la molcula y cuyos
estados pueden ser descritos a travs de orbitales moleculares que se
expresan como combinaciones lineales de orbitales atmicos de la capa
de valencia. Las transiciones electrnicas a orbitales moleculares ms
externos dan lugar a las denominadas transiciones Rydberg presentes
en el Ultravioleta de Vaco. Por otra parte las transiciones electrnicas
que involucran a los electrones de las capas internas son muy
energticas y se presentan en la regin de los rayos X del espectro
electromagntico. Nuestro anlisis se reducir a las transiciones
electrnicas en la capa de valencia. A estos efectos resulta conveniente
recordar la clasificacin convencional de los orbitales moleculares en la
capa de valencia de los compuestos orgnicos.
Orbitales y *. Son orbitales moleculares localizados a lo largo del eje
de unin de los tomos. Los orbitales generan una densidad
electrnica elevada en la regin internuclear teniendo un carcter
fuertemente enlazante.
Los orbitales *, como todos los orbitales antienlazantes, presentan un
plano nodal perpendicular al eje del enlace en la regin internuclear y
tienen un acentuado carcter antienlazante.
Orbitales y *. Estos orbitales se emplean en la descripcin de los
enlaces mltiples. Las regiones de mayor densidad electrnica
correspondiente a los mismos son aquellas colaterales al eje del enlace.

El carcter enlazante o antienlazante de estos orbitales es menos

acentuado que el de los orbitales .
Orbitales n. Estos orbitales moleculares tienen un acentuado carcter
local y describen pares electrnicos libres asociados con heterotomos
(O, S, N, Hal). Energticamente tienen carcter no-enlazante.

Figura.1 se representan esquemticamente la distribucin energtica

de los orbitales moleculares antes tratados.

Las principales transiciones electrnicas que se consideran para

muchas especies moleculares son: , n *, *, n *.
A continuacin se presentan algunas de las transiciones ms
importantes en molculas orgnicas:
a. La transicin es la que requiere mayor energa para que
se lleve a cabo, este tipo de transiciones generalmente ocurre en
el ultravioleta al vaco en longitudes de onda menores que 150
nm. Entre los enlaces tpicos que presentan esta transicin se
encuentran C-H con absorcin cercana a 125 nm y el enlace C-C
con absorcin cercana a 135 nm. As, compuestos orgnicos como
los hidrocarburos saturados y cadenas saturadas - enlaces sigmapresentarn absorcin solamente en el ultravioleta lejano y por
tanto son transparentes en el UV cercano.
b. La transicin n generalmente requiere menos energa que
la transicin s s * Estas transiciones generalmente se
presentan entre 150 y 220 nm. Muchas de estas transiciones se
observan en molculas orgnicas que contienen un heterotomo:
N,O,S,Cl,Br,I, como haluros de alquilo, aminas, teres, tioles, etc.
Por ejemplo el CH3OH presenta una banda n * en 180 nm
con e = 315 M-1cm-1. Se considera para este tipo de transicin

que un electrn que se encuentra en el orbital p del heterotomo

- u orbital n de la molcula es excitado al orbital s de la
molcula.
c. Las transiciones implican que el cromofro debe poseer al
menos una insaturacin para proveer el orbital molecular pi
antienlazante *, molculas con dobles o triples enlaces
frecuentemente presentan absorcin entre 160 y 220 nm para
cromforos aislados es decir separados por ms de un enlace
sencillo. En el caso de molculas con grupos cromofros que
entren en conjugacin como dienos, enonas, o con anillos
aromticos la absorcin se encuentra generalmente entre 200 y
360 nm, en el UV cercano y puede presentarse en el visible 360700 si el sistema conjugado es grande.Las transiciones *
presentan coeficientes de absortividad e altos que oscilan entre
1000 y 15000 M-1cm-1

Las bandas atribuidas a las transiciones * de sistemas

conjugados como el butadieno polienos, enonas, el benceno o
molculas aromticas que poseen sustituyentes que a su vez son
cromforos (como el estireno, benzaldehido, o acetofenona) se
denominan bandas K (del alemn konjugierte).
Estas transiciones p p *, bandas K, se caracterizan por
absortividades molares altas e mx >104 y sufren desplazamiento
batocromico cuando hay aumento en la polaridad del solvente.
d. Las transiciones n implican que el cromofro debe poseer
una insaturacin (para proveer el orbital molecular *) con un
heterotomo que contenga un par de electrones no compartido,
electrones n, por ejemplo cromforos como C = O, N = N, NO,
NO2, entre otros, presentan absorcin entre 200 y 350nm para
cromforos aislados. Se considera que uno de los electrones del
orbital molecular no enlazante, n, ( o que uno de los electrones de
un orbital tomico no enlazante del heterotomo ) es excitado al
orbital antienlazante * asociado con el doble o triple enlace.
Las transiciones n *presentan coeficientes de absortividad e bajos,
que oscilan entre 10 y 102 M-1cm-1, son prohibidas y estos valores
permiten distinguirlas de las transiciones *.
Las transiciones n *tambin son llamadas bandas R (del alemn
radikalartig). Se caracterizan adems de sus bajos coeficientes de
absortividad por el efecto hipsocrmico que se observa con el
incremento en la polaridad del solvente.

CLCULO DE ERRORES: ERROR ABSOLUTO, ERROR

RELATIVO

Bien sea una medida directa (la que da el aparato) o indirecta

(utilizando una frmula) existe un tratamiento de los errores de medida.
Podemos distinguir dos tipos de errores que se utilizan en los clculos:
Error absoluto. Es la diferencia entre el valor de la medida y el valor
tomado como exacta. Puede ser positivo o negativo, segn si la medida
es superior al valor real o inferior (la resta sale positiva o negativa).
Tiene unidades, las mismas que las de la medida.
Error relativo. Es el cociente (la divisin) entre el error absoluto y el
valor exacto. Si se multiplica por 100 se obtiene el tanto por ciento (%)
de error. Al igual que el error absoluto puede ser positivo o negativo
(segn lo sea el error absoluto) porque puede ser por exceso o por
defecto. No tiene unidades.

Parte Experimental
MATERIALES, EQUIPOS Y
REACTIVOS
Equipo:
- UV-2100 Spectrophotometer
Materiales:
- Matraz Aforado (100, 50, 25 y
10ml)
- Pipeta volumtrica (15,10,5,2,1)
- Matraz simple (250, 100ml)
- Tubos de ensayo
- Vaso precipitado (250, 100 ml)
Reactivos:
- Aseptil Rojo (Azosulfamida 5%)
- Permanganato de potasio
- Anaranjado de metilo
- Agua destilada

Espectrofotometra: Absorbancia y %T
entre una sustancia inorgnica y una
orgnica
KMnO
( 4)
Permanganato de potasio
(nm)

%T

Anaranjado de metilo( Heliantina)

(nm)

%T

400
83.9
0.0762
400
42.1
0.3757
410
85.2
0.0695
420
85.5
0.0680
410
37.9
0.4213
430
85.7
0.0670
420
34.8
0.4584
440
85.4
0.0685
430
32.2
0.4921
450
84.9
0.0660
460
83.7
0.0773
440
30.2
0.5199
470
81.7
0.0873
450
28.3
0.5482
480
78.7
0.1040
460
27.9
0.5543
490
75.1
0.1243
500
70.4
0.1524
470
29.3
0.5331
510
68.2
0.1662
480
32.7
0.4854
520
64.1
0.1931
490
38.7
0.4122
530
65.1
0.1864
0.1837
500
47.6
0.3223
540
65.9
550
67.7
0.1694
510
58.2
0.2350
560
75.6
0.1214
520
80.2
0.0958
570
77.4
0.1112
580
85.7
0.0670
530
87.7
0.0570
0.0447
540
87.7
0.0570
590
90.2
600
91.5
0.0385
550
92.4
0.0343
610
92.1
0.0357
620
92.6
0.0333
560
93.3
0.0301
630
92.9
0.0319
0.0296
640
93.4
Tomaremos a continuacin los datos ledos en el espectrofotmetro. Lo
que buscamos es determinar la longitud ptima analtica y comparar la
naturaleza de dos sustancias diferentes: Una es orgnica (heliantina) y
la otra, inorgnica (permanganato de potasio).
Las curvas espectrales -Absorbancia vs Longitud de onda y %T vs
Longitud de onda- sern graficadas al final del presente informe.

Procedimiento
Lectura del espectrofotmetro: Longitud ptima de la
onda y % Transmitancia

Realizamos dos tipos de anlisis:

1 Determinacin de la longitud
ptima de onda para poder
graficar las curvas espectrales
Absorbancia vs Longitud de
onda
respectivas
del
permanganato y la heliantina
(Inorgnica vs Orgnica)
2 Determinacin
de
la
concentracin ptima de la
muestra (verificar del mismo
modo la zona de trabajo).
Permite graficar la curva de
Ringbown.

Longitud ptima
Azosulfamida:
530 nm
Longitud ptima
Anaranjado
metilo: 460 nm
Longitud ptima
Permanganato:
520 nm

de
de
de
de

Lectura del espectrofotmetro: % Transmitancia

1Para poder comparar la forma de las curvas

espectrales entre dos sustancias de naturaleza
distinta: Inorgnica vs Orgnica. El procedimiento a
seguir fue el desarrollado en la primera prctica:
La sustancia es colocada, junto a un patrn Agua;
en el espectrofotmetro medimos la transmitancia
conforme aumentamos la longitud de onda. El punto
en el cual la transmitancia sea la ms baja posible
ser nuestra absorbancia ms alta, es decir: La
longitud ptima de la onda nos otorga la absorbancia
ms alta posible de la sustancia problema.
2 Si deseamos graficar la curva de Ringbown (la
que nos permite formar nuestra curva de
calibracin) primero debemos realizar las disolucin.

Prepararemos soluciones de una concentracin

(C) desde 0.1 ug/ml, 0.2 ug/ml, 1 ug/ml, 2 ug/ml, 5
ug/ml, 10 ug/ml, 15 ug/ml, 20 ug/ml, 30 ug/ml, 200
ug/ml hasta 500 ug/ml a partir de la solucin
estndar de aseptil rojo (Azosulfamida 5%).
Con las diluciones ya hechas, procedemos a realizar
las lecturas en el espectrofotmetro. Las lecturas
sern del % Transmitancia, nuestra labor consiste en
Absortancia=100%T.
determinar la absortancia:
Para luego graficar nuestra curva Absortancia
vs Log (C).
Preparamos cada concentracin a
partir de la muestra estndar de
aseptil rojo. La forma en cmo se
procedi con las diluciones est
explicada en el presente informe.

Una vez que ya tenemos nuestras diluciones preparadas, podemos comenzar con las
lecturas de la transmitancia. La longitud de onda a utilizar ser: La longitud ptima de cada
sustancia, 530nm para la azosulfamida y 460nm para la heliantina. Iremos aadiendo en
las cubetas del espectrofotmetro cada dilucin unitariamente. El anlisis de la
transmitancia ser llevado a cabo en la longitud ptima. Nuestros datos sern acoplados en
las posteriores tablas.
A partir de la transmitancia leda estaremos en la facultad de poder graficar la Curva de
Ringbown (Absortancia vs Log [C]).

Curva de Ringbown: Absortancia vs

Concentracin ~ Azosulfamida y
Heliantina
En esta parte desarrollaremos la curva de Ringbown, la cual nos
permite encontrar la zona de trabajo y lo ms importante: La
concentracin ptima de la muestra.
*Cabe resaltar que nuestro grupo trabaj con las diluciones de
la azosulfamida
Azosulfamida
g

ml

%T

0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
5.0
6.0
8.0
10.0
15
20
30
40
60
80

98.6
97.8
96.7
96.0
94.4
93.0
84.7
85.1
84.2
78.8
75.1
75.6
71.9
66.1
57.7
50.7
38.7
27.5
11.5
6.4
0.1
0.0

Absortancia
Anaranjado de metilo

1.4
2.2
3.3
4.0
5.6
7.0
15.3
14.9
15.8
21.2
24.6
24.4
28.1
33.9
42.3
49.3
61.3
72.5
88.5
93.6
99.9
100

ml

%T

0.2

74.4

25.6

0.3

95.7

4.3

0.6

69.7

30.3

0.8

69.7

30.3

1.5

90.8

9.2

3.0

35.4

64.6

3.5

30.7

60.3

12.2

87.8

5.5

94.5

3.1

96.9

10

0.0

100

15

100

Absortancia

Azosulfamida: Sustancia estudiada

1 Tabla completa: Absortancia, Log C y % Transmitancia.

Azosulfamida
g/mL

mg/mL

log C

%T

Absortancia

0.1

100

98.6

1.4

0.2

200

2.30103

97.8

2.2

0.1

100

96.7

3.3

0.6

600

2.7781513

96

0.8

800

2.90309

94.4

5.6

1000

93

1.5

1500

3.1760913

88.3

11.7

2000

3.30103

85.1

14.9

2.5

2500

3.39794

84.2

15.8

3.5

3500

3.544068

75.5

24.5

4000

3.60206

75.6

24.4

5000

3.69897

71.9

28.1

6000

3.7781513

66.1

33.9

8000

3.90309

57.7

42.3

10

10000

50.7

49.3

15

15000

4.1760913

38.7

61.3

20

20000

4.30103

27.5

72.5

30

30000

4.4771213

11.5

88.5

40

40000

4.60206

6.4

93.6

60

60000

4.7781513

0.001

99.999

DISCUSIN DE RESULTADOS
CURVA DE RINGBOWN: AZOSULFAMIDA
120
100
80
Absortancia

60
40
20
0
1.5

2.5

3.5

4.5

log C

Para obtener el intervalo ptimo y adecuado de concentraciones con el

menor error por lectura primero se construye la curva de Ringbown que
consiste en construir una grfica de absortancia (100%-T) vs la
concentracin.
La zona lineal corresponde al intervalo de concentraciones de mnimo
error, C/C, por lectura y el punto de inflexin corresponde al valor de:
100%-%T= 49.3; T=50.7; que corresponde al valor de mnimo error.
Para la mayora de los sistemas la curva de Ringbom corresponde a una
curva en forma de S. La parte lineal de esta grfica permite obtener el

intervalo de concentraciones ptimo o el intervalo que presentara una

relacin lineal entre absorbancia y concentracin.
En esta grfica, los cruces de la parte recta (la intermedia), con la parte
baja y con la parte alta, pueden servir para determinar un valor para los
lmites de deteccin mnimo y mximo, respectivamente.
En la curva de Ringboom para la azosulfamida resulto como
concentracin optima el valor de 6.4565 g/mL as como la
concentracin mnima cuantificada a 3.715 g/mL y la concentracin
mxima cuantificada a 11.2 g/mL.

CURVA DE RINGBOWN: ANARANJADO DE METILO

La curva de Ringbom del Anaranjado de Metilo presenta una zona de trabajo
de concentraciones 1 a 5 ug/ml con las absortancias respectivas de 26.8 y
94.5 respectivamente. Adems la concentracin ptima es de 2.2 ug/ml. No
pudiendo comparar estos datos debido a que no encontramos informacin
bibliogrfica sobre el tema.

BIBLIOGRAFIA

Skoog Douglas, Principios de anlisis instrumental. 6ta edicin.

2007

Qumica
analtica
instrumental
I
Precisin
en
espectrofotometra.
2007.
URL:
http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/Documento_de_A
poyo:_Precision_en_espectrofotometria_2598.pdf

Universidad Nacional de Colombia. Establecimiento de un

mtodo
espectrofotomtrico.URL:http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/
ciencias/2001184/lecciones/Cap10/01_01_01.htm