PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

INFORME DE LABORATORIO #2 BIOQUIMICA BSICA

CURVA DE CALIBRACIN
ANGIE CATALINA MORENO SUNA
KAREN PLAZAS CAICEDO
ESTEBAN AMIR AYALA VARGAS
06/09/16

1.OBJETIVOS :

Realizar la tcnica espectofotomtrica para cuantificar protenas.

Definir a partir de la variable de la recta la concentracin de la muestra problema.
Determinar la relacin entre una concentracin x y la absorcin de la luz.
Comprender la aplicacin de la ley Lambert-Beer en la prctica de laboratorio.

2. INTRODUCCIN :

4.METODOLOGA :
1.Para empezar con la prctica fue necesario calcular el volumen que necesitabamos,a
partir de la solucin patrn de protenas,para esto se utiliz la ecuacin:
Tomando en cuenta que el volumen inicial era, segn la gua el que se deba aadir a
cada uno de los tubos, la concentracin inicial era de 8 mg/ml, y el volumen final sera de
5 ml fue posible determinar los valores de la concentracin, expresados en la Tabla 1.
Posteriormente se convirtieron los datos de mg/ml a g/L, obteniendo los mismos valores. A
continuacin se hizo la conversin de stos valores de g/L a mol/L teniendo en cuenta que
1 mol de albmina pesaba 66382 g, dando como resultado los valores expresados en la
Tabla 2.
Luego de esto, fueron obtenidos los valores de absorbancia para cada uno de los tubos,
incluyendo las muestras problema, mediante el espectrofotmetro. presentadas en las
Tablas 1 y 2. Para el caso de las muestras problema, las concentraciones presentadas en
la Tabla 1, y la Tabla 2 fueron determinadas interpolando en cada una de las grficas, a
partir de sus correspondientes valores de absorbancia en las ecuaciones de la recta.
Posteriormente, despejando en la ecuacin de la ley de Lambert- Beer se determin el
valor para cada una de stas concentraciones con el fin de contrastar con el valor

obtenido interpolando. Sin embargo, para poder utilizar esta ecuacin fue necesario
calcular inicialmente el coeficiente de extincin molar de la solucin ( ). ste puede ser
calculado de dos formas: la primera es despejando la variable en la ecuacin de LambertBeer a partir de informacin que ya era conocida debido a que fue hallada para los
primeros cinco tubos, y la segunda es mediante la ecuacin de la recta debido a que el
coeficiente de extincin molar de la solucin corresponde a la pendiente de las grficas,
que se encuentra expresada en las ecuaciones de la recta.
Utilizando la informacin correspondiente al tubo #1, que tuvo un valor de absorbancia de
0,586, y un valor de concentracin de la solucin patrn de protenas de 2,08 g/L, se
obtuvo que el coeficiente de extincin molar para la solucin es de 0,28; valor que
coincide con la pendiente de la ecuacin de la recta.
Una vez teniendo sta informacin fue posible determinar el valor de las concentraciones
de las muestras problema, en g/L. Para la muestra problema 1 (MP1) se determin una
concentracin de 0, 69 g/L; y para la muestra problema 2 (MP2) se calcul una
concentracin de 0,122 g/L.

5.RESULTADOS :
TABLA : Absorbancia y cantidad soluto y solvente protenas.
TUBO

Cantidad H20 ml

A
B
C
D
E
F
MP1
MP2

2.375
2.25
2
1.5
1.25
0.5
1.99
0.012

Cantidad de protena
ml
0.125
0.25
0.5
1
1.25
2
0.505
2.488

Absorbanca
0.054
0.129
0.275
0.465
0.653
0.99
0.534
0.338

C1 x V1= C2 x V2
a. 10 g/ml x = 0.5 x 2.5
X =1.25 / 10 = 0.125 ml

b. 10 g/ml x = 1 x 2.5
X =2.5 / 10 = 0.25 ml

c. 10 g/ml x = 2 x 2.5
X =5/ 10 = 0.5 ml

d. 10 g/ml x = 4 x 2.5

e 10 g/ml x =5 x 2.5

X =10 / 10 = 1 ml

f 10 g/ml x =8 x 2.5

X =12.5 / 10 = 1.25ml

X = 20 / 10 = 2 ml

GRFICA 1:CURVA DE CALIBRACIN

CURVA DE CALIBRACIN
Concentracin y absorvancia
1.2
1

f(x) = 0.12x + 0
R = 1

0.8

Absorbancia 0.6
0.4
0.2
0

Concentracin (mg/ml)

Ecuacin de la recta para hallar concentracin de muestra desconocida MP1 y MP2

y=0.1242x + 0.0029
MP1
0.534-0.0029 = 0.511
0.1242

y-0.0029 =0.1242x y-0.0029 = x

0.1242
MP2
0.338 0.0029 = 0.315
0.1242

MOLARIDAD
a. 0.0005 g
= 7.46 x 10 -9 0.001 = 7.46 x 10 -6
67000 g/mol
b. 0.001 g
= 1.5 x 10 -8 0.001 = 1.5 x 10 -5

y=absorbancia

67000 g/mol
c. 0.002 g
= 2.98 x 10 -8 0.001 =2.98 x 10 -5
67000 g/mol
d. 0.004 g
= 5.97 x 10 -8 0.001 = 5.97 x 10 -5
67000 g/mol
e. 0.005 g
= 7.46 x 10 -8 0.001 =7.46 x 10 -5
67000 g/mol
f. 0.008g
= 1.19x 10 -7 0.001 =1.19 x 10 -4
67000 g/mol
MP1 0.000511g
= 7.63 x 10 -9 0.001 =7.63 x 10 -6
67000 g/mol
MP2 0.000315g
= 4.7 x 10 -9 0.001 =4.7 x 10 -6
67000 g/mol
COEFICIENTE ABSORTIVIDAD MOLAR
A

.0.054 =7238.6
7.46x10-6

B.0.129 = 8600
1.5 x 10-5

DISCUSIN DE RESULTADOS
1.Mediante la curva de calibracin se hall la pendiente de la recta y a partir de esto con
la absorbancia de MP1 y MP2, despejamos x,para hallar la concentracin de las
mismas,encontrando que los resultados concuerdan con los datos de la tabla 1,y difieren
un poco por la desviacin de los datos,que nos di 0.9964,lo que indica una buena
prctica de laboratorio,ya que este valor tiene que estar cerca de 1.
2.

6.DISCUSIN DE RESULTADOS
1.Se pudo observar que hay coherencia en los resultados de la tabla 1,2 y 3,porque entre
ms cantidad de la base se agreg a la solucin ms aument el pH y por lo tanto ms
bsico va a ser; mientras que entre ms cido se agreg, ms bajo fue el pH y por lo tanto
ms cido.
2. Sumado al posible efecto de la temperatura en el porcentaje de error de los resultados,
ya que la temperatura de Bogot es de aproximadamente 15C y la reportada en la
literatura es de 25C aproximadamente, se agrega que debi existir una variacin en los
tiempos de espera del resultado del pH, que rara vez daba un dato invariable.
3. Se pudo observar en la tabla 1que en la segunda dilucin al hacer los clculos hay
menos concentracin de cido ,lo cual es el principio bsico de los resultados que se
esperan en el laboratorio.
7.CONCLUSIONES :
1. Cuando la temperatura cambia, el pH de la solucin a medir tambin cambia, debido al
desplazamiento en los equilibrios de los cidos dbiles, sin embargo esto no es un error,
dado que la lectura obtenida es el pH a esa temperatura.
2.Es importante para las prximas prcticas de laboratorio tener bien organizados todos
los utensilios y tener claridad de una secuencia en los experimentos, para no generar
confusiones y por lo tanto no saber la veracidad de los resultados.
3.Se logr comprender como la titulacin es utilizada para determinar la concentracin
desconocida de soluciones de cidos y bases; as mismo se evidenci la capacidad
amortiguadora de soluciones buffer frente a cidos fuertes como HCl Y bases dbiles
como NaOH.

4. El Ftalato de potasio se uso como factor primario en la valoracin acido-base por que
posee una elevada pureza, mayor del 99,9 %; adems de esto es estable frente a los
agentes atmosfricos, no es dbil ante la humedad y es muy fcil de pesar con exactitud.
El Ftalato de Potasio se puede utilizar como un agente tampn (en combinacin con cido
clorhdrico (HCl) o hidrxido de sodio (NaOH) en funcin de si se desea pH mayor o
menor. Pregunta #3.
5. En las soluciones Buffer la adicin de cido implica como su nombre lo dice que la
solucin sea ms cida; por lo tanto el pH es mejor. La adicin de base hace que la
solucin tienda a ser ms neutra o bsica que cida. Pregunta # 3
6. La solucin Buffer puede amortiguar los cambios de pH en la adicin de cidos y bases
fuertes ya que tambin es cida y fuerte; pues su pH es 4,65, por lo tanto no se presenta
un mayor cambio en su pH. Pregunta #6