Os mtodos para quantificar o crescimento bacteriano foram desenvolvidos para

substituir o processo de manipulao de um milionsimo de mililitro ou de grama de um

alimento, pois este ltimo processo no nada prtico. Os mtodos utilizam diluies
seriadas de culturas ou amostras. Com esses procedimentos ser possvel determinar
rapidamente o nmero de bactrias presentes na amostra original. So divididos em dois
tipos: Mtodos diretos e indiretos.
Mtodos diretos para estimar o crescimento bacteriano:
-Filtrao: usado em regies que o nmero de bactrias muito pequeno, como lagos e
fontes de gua. Permite que a bactria seja concentrada sobre a superfcie de uma
membrana de filtro de poros muito pequenos (a bactria no passa pelos poros) aps a
passagem de um volume de 100mL de gua. Esse filtro ento transferido para uma
placa de Petri contendo um suporte embebido em nutriente lquido, que permite que as
colnias bacterianas se desenvolvam sobre a membrana de filtro. Esse mtodo
rotineiramente utilizado na deteco e registro de coliformes, considerados os
indicadores de poluio fecal, em amostras de alimentos e guas. As colnias formadas
por coliformes podem ser identificadas quando se utiliza meio nutriente diferencial.
-Mtodo do nmero mais provvel: uma tcnica que oferece somente uma estimativa
de 95% de probabilidade de a populao bacteriana conter um nmero de bactrias e
que o MNP da tabela estatisticamente o nmero mais provvel. Baseado no princpio:
quanto maior o nmero de bactrias em uma amostra, maior ser o nmero de diluies
necessrias para eliminar totalmente o crescimento em tubos contendo meio de cultura.
Utilizado quando as bactrias em questo no cresceriam em meio slido. Utilizado
tambm quando o crescimento de bactrias em um meio lquido diferencial usado para
identificar os microrganismos.

-Contagem no microscpio: por no precisar de incubao, esse mtodo usado quando

se deseja um resultado imediato. Um volume conhecido da suspenso bacteriana

colocado em uma rea definida da lmina de microscpio. Uma amostra de 0,01mL

espalhada na superfcie de 1cm da lmina e um corante adicionado, e ento se
visualiza a bactria. Deve ser determinada a rea de observao de cada regio da
lmina. Aps a contagem de diferentes regies da lmina a mdia do nmero de
bactrias por campo pode ser determinada. Para calcular o nmero de bactrias por
mililitro de soluo, o nmero encontrado dever ser multiplicado por 100, pois foi
realizada a contagem em somente 0,01mL da amostra. Apresenta dificuldade de
contagem de bactrias mveis, e muitas vezes as bactrias mortas so contadas como
vivas. Requer um nmero grande de clulas, cerca de 10 milhes de bactrias por mL.
Mtodos indiretos para estimar o crescimento bacteriano:
-Turbidimetria: Difcil ser realizado devido ao nmero de bactrias necessrias para a
determinao da turbidez, mais de um milho por mililitro de cultura. Na leitura do
espectrofotmetro a suspenso dever conter entre 10 e 100 milhes de clulas por
mililitro. Quando uma bactria se multiplica em meio lquido, esse meio fica trbido ou
com alta densidade de clulas. O espectrofotmetro ou colormetro o instrumento mais
usado para determinar turbidez de uma amostra. Nesse dispositivo um feixe de luz
transmitido atravs da suspenso bacteriana para um detector fotossensvel. Com o
crescimento bacteriano, menos luz atingir o detector. Essa alterao na luz ser
registrada na escala do aparelho como uma percentagem de transmisso. Tambm est
registrada na escala do aparelho a expresso logartmica denominada absorbncia
(algumas vezes denominada densidade tica ou OD), sendo este valor derivado da
percentagem de transmisso. O valor de absorbncia utilizado para se confeccionar
grficos de crescimento bacteriano. O grfico de absorbncia em funo do tempo ser
uma linha quase reta quando a bactria estiver em fase logartmica de crescimento ou de
morte celular. Se durante as leituras de absorbncia for realizada a contagem do nmero
de clulas, esses valores podem ser utilizados para estimar o nmero de bactrias em
experimento futuros em que somente a turbidez seja quantificada.
-Atividade metablica: este mtodo considera que a quantidade de um certo produto
metablico, como o cido ou o CO, pode ser uma relao direta do nmero de clulas
bacterianas presentes. Uma aplicao prtica de um teste metablico a quantificao
da produo de cido para determinar a quantidade de vitamina presente atravs de um
ensaio microbiolgico.
-Peso seco: nesse procedimento o fungo removido do meio de cultura por filtrao,
para eliminar outros materiais, seco em dessecador para posterior pesagem. Pode-ser
utilizar a mesma metodologia com bactrias.