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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y DE ALIMENTOS


ESCUELA PROFESIONAL INGENIERIA DE ALIMENTOS

AVANCES EN CIENCIA Y
TECNOLOGIA DE ALIMENTOS

TEMA DEL PDF N018


EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
DE CUATERNARIO BASADA QUITINA / QUITOSANO
DERIVADOS EN VITRO
CATEDRATICO: OLEGARIO MARIN MACHUCA

ALUMNO:
SIFUENTES ZELAYA ,Katherine

060612-C

2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO


Escuela Profesional de Ingeniera de Alimentos

Facultad de Ingeniera de Pesquera y de Alimentos

PDF N 18

EVALUACIN DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE


CUATERNARIO BASADA QUITINA / QUITOSANO DERIVADOS
IN VITRO
Xiaodong Geng, Ronghua Yang, Jianying Huang, Xiao Zhang, and Xiangyang Wang

Resumen:
Total de 3 derivados de la quitina / quitosano cuaternario basados en solubles en agua, que
tienen un peso molecular idntica y el anin, se sintetizaron y caracterizaron. Sus actividades
antibacterianas contra Salmonella cholerae-suis y Bacillus subtilis fueron evaluados in vitro. Los
polisacridos mostraron la eficacia antibacteriana. Sus valores de concentracin inhibitoria
mnima (CIM) varan desde 0,02 hasta 20,48 mg / ml, y los valores de su concentracin
bactericida mnima (MBC) varan desde 0,08 hasta 40,96 mg / ml contra S. cholerae-suis y B.
subtilis, respectivamente.Futhermore, en la medida de Bacillus subtilis clulas daos se
examin a travs de microscopa electrnica de transmisin (TEM) para mostrar la forma en N,
N, N-trimethylchitosan (TMC) destruidos gradualmente y mataron a las clulas de B. subtilis
cuando fueron tratados con TMC. Uno de esos polmeros cuaternarios, O-([2-hidroxi-3trimetilamonio]) propil quitina (quitina-OHT), que se puede sintetizar directamente y fcilmente
de

la

quitina

en

cantidades

granel,

tambin

se

ha

demostrado

su

actividad

antibacteriana. Estos derivados de la quitina / quitosano cuaternario basados en solubles en


agua que tienen un efecto antibacteriano deben utilizarse potencialmente como agentes
antimicrobianos en muchos campos.

Palabras clave: actividad antibacteriana; quitina, quitosano, polisacridos, anlisis de tiempo


kill

Aplicacin Prctica:
La principal aplicacin prctica detrs de la investigacin y la actividad antibacteriana de
evaluacin 3 derivados de la quitina / quitosano cuaternario basados en solubles en agua
podra ser utilizado potencialmente como agentes antimicrobianos en muchos campos. Estos
polisacridos representan una fuente de polmeros biodegradables naturales renovables y
cumplir con la aparicin de ms y ms problemas de seguridad alimentaria

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ING. Olegario Marin Machuca

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I.

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INTRODUCCION

Quitosano, un polisacrido incluyendo N-acetil--1 ,4-unidades anhidro glucosamina


tanto -1,4-anhidro glucosamina y, es particularmente atractivo para aplicaciones
biolgicas y clnicas debido a su no toxicidad, biodegradabilidad, fisiolgica, y
propiedades antibacterianas ( No y otros, 2002, 2007 ; Seo y otros 2008 ; Chen y Zhao
2012 , Huang y otros, 2012 ). Sin embargo, el quitosano no ha sido utilizado en su
totalidad debido a su limitada solubilidad en medios acuosos neutros y alcalinos ( Zhang
y otros 2012 ).
Muchos nuevos derivados de quitosana se han obtenido por modificacin qumica ( Ravi
Kumar y otros, 2004 ; Holappa y otros 2006a ). Quitosanos de amonio cuaternario, un
tipo de derivados de quitosano con cargas catinicas permanentes en la cadena principal
de polisacrido, han atrado mucho la atencin para ser utilizado como agentes
bacteriostticos ( Rnarsson y otros, 2007 ), agentes de acabado textil ( Lim y Hudson,
2004 ), y las compaas de suministro de frmacos ( Mourya y Inamdar 2009 ). Esto es
ya que el quitosano modificado con sales de amonio cuaternario puede llegar a ser
soluble en agua y presentan una mejor actividad antimicrobiana que no modificada
quitosano ( Li y otros, 2011 ).
Lim inform que O-acrilamida metil-N-([2-hidroxi-3-trimetilamonio] propil) quitosano
mostr actividad antibacteriana contra Staphylococcus aureus y E. coli ( Lim y Hudson
2004 ). Copolmeros a base de 2 - (dimetilamino) etil metacrilato y poli (2 - [dimetilamino]
metacrilato de etilo) demostraron una excelente actividad fungicida y bactericida (
Yancheva y otros, 2007 ). Incluso cuaternario quitosano injertado a una superficie de
xido de silicio epxido-derivatived exhibi actividad antibacteriana contra S. aureus (
Lee y otros, 2011 ). Adems, cuaternizacin de quitosano con grupos metilo (TMC)
tambin mostr una excelente actividad antibacteriana frente a E. coli ( Da Silva y otros
2010 ; Jia y otros 2001 ), y Listeria innocua ( Belalia y otros 2008 .) N, N, N-trimetil O (propil-2-hidroxi-3-trimetilamonio) quitosano, que se sintetiz por reaccin de TMC con
cloruro de amonio trimetil 3-cloro-2-hidroxi-propilo, exhibi una mayor actividad
antibacteriana de TMC ( Xu y otros, 2011 ).

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N - ([2-hidroxi-3-trimetilamonio]) propil cloruro de quitosano (NHT-quitosano), que se


puede preparar fcilmente a travs del acoplamiento quitosano con cloruro de
glicidiltrimetilamonio (GTMAC), se ha demostrado que tiene una buena capacidad de
retencin de humedad y antimicrobiana actividad contra S. aureus, E. coli y Canidia
albicans en condiciones alcalinas ( Qin y otros, 2004 ). En nuestro estudio anterior, nos
haban informado de que O - ([2-hidroxi-3-trimetilamonio]) propil quitina (OHT-quitina) y
NHT-quitosano tienen mejor actividad antioxidante que el quitosano ( Zhang y otros,
2012 ).
Aunque se llevaron a cabo muchos estudios anteriores sobre las actividades
antimicrobianas de TMC y NHT-quitosano, haba poca informacin sobre el efecto del
peso molecular, diferentes grupos de amonio cuaternario, el anin, bacterias, y el
disolvente sobre las actividades antibacterianas de amonio cuaternario sales de
quitosn.Es por eso que algunos investigadores reportaron que cuaternizacin de
quitosanas disminuy sus actividades antibacterianas.

Por ejemplo, quitosano N-

betainates, que poseen resto cuaternario, no era muy activo contra E. coli y S. aureus
en condiciones neutras como se esperaba ( Holappa y otros, 2006b ). Por lo tanto, la
eficacia antibacteriana de quitosano cuaternario se convierte en un tema controvertido.
El objetivo del presente estudio fue investigar sistemticamente la medida de la
actividad antibacteriana de las sales de amonio cuaternario de quitosano frente a S.
cholerae-suis y B. subtilis in vitro. Los aspectos clave de este estudio fueron la sntesis
y caracterizacin de 3 sales cuaternarias diferentes, TMC, OHT-quitina y NHT-quitosano
con el anin cloro, el examen de la concentracin inhibitoria mnima (CIM) y la
concentracin bactericida mnima (MBC), y el seguimiento de su efecto bactericida con
perfiles de anlisis de poblacin en tiempo real (PAP).

El dao celular en diversos

grados se investig adicionalmente mediante microscopa electrnica de transmisin


(TEM) cuando las clulas de Bacillus subtilis fueron tratados con TMC.

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II.

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MATERIALES Y METODOS

El quitosano y chemcials
La quitina se obtiene a partir de cscara de camarn de acuerdo con la literatura (
Shahidi y otros 1999 ). El quitosano con una viscosidad de 100 mPa s (1%, 20 C) y
una desacetilacin DS de valor 80% se adquiri de Qingdao Honghai Bio-Technology
Co. (Shandong, China). Cloruro de 3-cloro-2-hidroxipropiltrimetilamonio (CTA) se obtuvo
por Tokyo Chemical Industry Co. (Japn). 1-metil-2-pirrolidinona (NMP), ter anhidro,
cido frmico (88%), formaldehdo (37%), yoduro de metilo, etanol absoluto, acetona,
hidrxido de sodio, y el alcohol isoproplico se obtuvieron de Aladdin Reactivo Co.
(Shanghai , China).

Microorganismos
S. clulas vegetativas de B. cholerae-suis (Centro Chino de Industrial Culture Collection
21.524) y subtilis (General China de Coleccin de Cultivos Microbiolgicos Centro
1,1377) fueron cultivadas en caldo LB (Hopebiol HB0128), y se agit a 200
revoluciones por minuto (rpm) a 37 C durante 18 a 24 h.

Sntesis de TMC, OHT-quitina, quitosano y NHT-Chitosan


TMC se sintetiz de acuerdo con los informes anteriores ( Belalia y otros 2008 , Xu y
otros, 2010 ).

La cantidad de quitosano, cido frmico, formaldehdo, y el agua

destilada se mezclaron y se agit a 70 C durante 72 h. Despus de retirar la 1 mol / L


de solucin acuosa de disolvente, se aadi gota a gota NaOH hasta que el valor de
pH 12 a la que se produjo la formacin de gel. A continuacin, el gel se dializ frente a
agua desionizada durante 3 das y se liofiliz para dar N, N-dimetil quitosano (DMC).
DMC se dispersa ms en NMP con yoduro de metilo con agitacin vigorosa a 40 C
durante 24 h. Despus de enfriar a temperatura ambiente, se aadi la mezcla de
reaccin gota a gota con 1: 1 (v / v) de etanol / ter dietlico para precipitar el producto.
Despus, el slido se dializ frente a solucin acuosa de NaCl al 1% durante 3 d para
llevar a cabo intercambio de iones, y se liofiliz para obtener TMC ( Figura 1 ).

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Figura 1.-Rutas hacia la sntesis derivados cuaternarios de quitina / quitosano.

OHT-quitina y quitosano-NHT se prepararon de acuerdo con la literatura ( Zhang y


otros 2012 ). La quitina o quitosano y 2-propanol se agit durante 0,5 h a temperatura
ambiente. Despus se agit adicionalmente durante 2 h, se aadi CTA en la mezcla y
se hizo reaccionar 6 horas a 40 C. Posteriormente, la mezcla se lav con etanol al
95% para proporcionar un slido viscoso blanco. Despus de la filtracin, el slido se
disolvi en agua, se filtr para eliminar las partculas insolubles de tipo gel. Por ltimo,
el filtrado se precipit con ter anhidro para obtener OHT-quitina o NHT-quitosano
como un slido viscoso blanco. Los productos se secaron durante la noche bajo vaco
a 80 C. ( Figura 1 ).

Caracterizacin estructural de OHT-quitina, NHT-quitosano, y TMC


Los espectros de infrarrojos por transformada de Fourier (FT-IR) se registraron con
pellets de KBr en un Nexus Nicolet 870 FT-IR espectrofotmetro. Distribuciones de
pesos moleculares se midieron en un sistema de cromatografa de permeacin en gel
convencional (GPC) equipado con una bomba isocrtica 1525 HPLC de aguas, un
2414 detector de ndice de refraccin aguas, y un conjunto de columnas Waters
Styragel (HR1, HR2, y HR4, 7.8 x 300 mm ). Mediciones de GPC se llevaron a cabo a
35 C utilizando un, (DMF) solucin de N-dimetilformamida N (5,5 g
eluyente con un caudal de 1 ml / min.

NaNO3

/ L) como

El sistema se calibr con patrones de

poliestireno lineales.

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Propiedades antimicrobianas de OHT-quitina, NHT-quitosano, y TMC


contra S. cholerae-suis y B. subtilis

Determinacin de la MIC
El MIC se determin de acuerdo a un mtodo turbidimtrico modificado de informe
anterior ( Mallick y otros 2012 ). Los polmeros se disolvieron en caldo nutriente
estril para preparar las diferentes soluciones con concentraciones variadas.
Despus de eso, se trataron en autoclave a 121 C durante 15 min, y se
inocularon con 100 l de la suspensin de bacterias recin preparada.

El

crecimiento de bacterias se determin por densidad ptica, medida a 600 nm


utilizando un lector de microplacas (M200, TECAN, Suiza).
La concentracin ms baja de muestras que inhiban el crecimiento de las
bacterias se consider como MIC. Total de 3 repeticiones se llevaron a cabo para
cada tratamiento y los controles correspondientes.

Determinacin de la MBC
El MBC que mata el 99,9% de las bacterias se determin mediante el ensayo de
los organismos vivos en los tubos de la prueba de CIM que no mostr crecimiento (
Qi y otros 2004 ). Total de 1 ml, cada tubo se inocul en agar para recuento en
placa (PCA, Hangzhou microbiana reactivo Co. Ltd.) y se examina para detectar
signos de crecimiento.

Las colonias en el agar demostraron la existencia de

bacterias en el tubo de partida.


Por el contrario, si no se observ ninguna colonia, el tubo original, no contena
bacterias que viven, y la concentracin ms baja que no mostr ninguna colonia
fue considerada como el CBM. Cada bacteria se ensay al menos dos veces.

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Tiempo de matar-anlisis
El ensayo de sensibilidad al tiempo se determin de acuerdo con el mtodo
descrito por Joray ( Joray y otros 2011 ). Las soluciones de muestras ensayadas,
incluyendo agua destilada y caldo LB (1: 1, v / v) con las concentraciones finales
que van desde MIC a 4 MIC se inocularon con suspensiones de bacterias (casi
10

UFC / ml), por triplicado, a 37 C durante 24 h con agitacin. Los controles

que no contiene muestra copolmero se llevaron a cabo simultneamente.


El nmero de clulas viables se determin a 1, 3, 6, y 24 h, despus de placas
alcuotas de diluciones en serie y sin diluir 10 veces de cada muestra en un medio
de PCA. Posteriormente, las placas se incubaron durante 24 horas a 37 C, y se
contaron las colonias. Los datos de carreras por triplicado se promediaron y se
representaron grficamente como log CFU / ml contra el tiempo (horas) para cada
punto de tiempo.

Examen de microscopa electrnica.


Culturas examen de B. subtilis se dividieron en 2 porciones: uno fue tratado con
TMC (4 MIC) y se incubaron a 37 C, mientras que el otro fue sirvi como un
control no tratado. Alcuotas del cultivo de control, as como el cultivo de TMCtratada (recogida despus de 30, 60, 90, y 120 min) se recogieron (4.000 g, 5 min,
4 C). El sedimento resultante se resuspendi, se fijaron con 2,5% glutaraldehdo
en tampn de fosfato se lav con tampn de fosfato, se tieron con acetato de
uranilo al 2%. Las muestras fueron vistos y fotografiados con un TEM (H-7650,
Hitachi, Japn).

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III.

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RESULTADOS Y DISCUSION

Espectros FT-IR y GPC


Los espectros de FT-IR de tres polmeros cuaternarios en comparacin quitosano y
quitina se muestran en la Figura 2 . La comparacin de los espectros de la quitina (A) y
quitosano (B), quitosano cuaternario (C), y OHT-quitina (D), podemos encontrar que los
grupos epxido de CTA han acoplado con el 6-OH y NH

grupos de acuerdo con

informes anteriores, respectivamente ( Nam y otros 1999 , Zhang y otros, 2012 ).

Figura 2.- Espectro FT-IR de la quitina (A), quitosano (B), NHT-quitosano (C),OHT-quitina (D)
y TMC (E).

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El espectros FT-IR (B) y (E) muestran la evidencia de la metilacin del quitosano. Los
picos caractersticos de amina tijera banda en 1659 y 1567 cm
desaparecer, y la nueva banda a 1490 cm

-1

-1

de quitosano

corresponde a un estiramiento asimtrico

de C-H en los grupos metilo de TMC.


Los pesos moleculares de quitina y derivados de quitosano son muy importantes para
usos industriales y cientficos desde MW afecta a las funcionalidades. Para estimar la
distribucin de peso molecular de cada fraccin, su peso molecular promedio en peso
(M w) y el peso molecular promedio en nmero (Mn) se midieron por GPC.
La polidispersidad (PD) se determina a partir de la relacin de M a M

wn

para ser 1,01,

1,02, y 1,02 para NHT-quitosano, quitina-OHT, y TMC, respectivamente. Los datos


tambin sugieren que una serie de fracciones de muestras tienen una dispersin
reducida con similares distribucin de pesos moleculares, y todos los polmeros
cuaternarios tienen pesos moleculares casi idnticos, que son 9,723, 8,986, y 9,420
para NHT-quitosano, quitina-OHT, y TMC, respectivamente.

Bioactividad de materiales cuaternario basados


La actividad inhibidora de NHT-quitosano, quitina-OHT, y TMC se midi frente a S.
cholerae-suis y B.subtiis crecimiento por turbidez. Los resultados se presentan en la
Tabla 1 . Como se muestra en la Figura 3 , el ensayo de turbidez mostr una cada
dramtica en la absorbancia ptica de una suspensin de S. cholerae-suis y B. subtilis
cuando expuestos a soluciones de polmeros cuaternarios. TMC exhibi actividad
antibacteriana superior en comparacin con otros polmeros cuaternarios. El valor de
la MIC de TMC contra S. cholerae-suis fue de 0,16 mg / ml, mientras que los de OHTquitina y quitosano-NHT fueron 20,48 y 10,24 mg / ml, respectivamente. Por otra parte,
el valor de MIC de TMC contra B. subtilis fue inferior a 0,02 mg / ml, mientras tanto de
OHT-quitina y quitosano-NHT fueron 2,56 mg / ml ( Tabla 1 ).

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Organismos
Salmonella
cholerae-suis
Bacillus subtilis

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OHT-quitina (mg /

NHT-quitosano (mg /

TMC (mg /

ml)

ml)

ml)

MIC

MBC

MIC

MBC

MIC

MBC

20.48

40.96

10.24

40.96

0.16

0.32

2.56

10.24

2.56

10.24

0.02

0.08

Tabla 1.-MIC y MBC de OH quitina, NHT- quitosano y TMC contra Salmonella cholerae-suis y
Bacillus subtilis crecimiento.

Concentracin

Concentracin

Figura 3.-Efecto antibacteriano de OHT-quitina, NHT-quitosano (izquierda), y el TMC


(derecha) se muestra en el crecimiento de Salmonella cholerae-suis y Bacillus subtilis por
la turbidez.

El CBM de diversos polmeros cuaternarios contra S. cholerae-suis y B. subtilis se


presentan en la Figura 4 y Tabla 1 . Como la Figura 4 (A, derecha) muestra, con el
nuevo crecimiento OHT-quitina contra B. subtilis en concentraciones de 1 MIC (2,56
mg / ml) o 2 MIC (5,12 mg / ml) fue ms variable y sustancialmente menos de OHTquitina contra S. cholerae-suis ( Figura 4 [A la izquierda]). El CBM de OHT-quitina
contra S. cholerae-suis y B. subtilis fueron 40,96 y 10,24 mg / ml, respectivamente.

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El CBM de NHT-2 quitosano contra bacterias fueron los mismos que OHT-quitina (
Figura 4 B y Tabla 1 ). En cuanto a TMC, el CBM era 2 MIC (0,32 mg / ml) contra S.
cholerae-suis, y 4 MIC (0,08 mg / ml) frente a B. subtilis ( Figura 4 C y Tabla 1 ).

Figura 4.-Los resultados del CBM de OHT-quitina de nuevo (A, izquierda)


Salmonella cholerae-suis, (A, Derecha) Bacillus subtilis. Resultados de MBC de
NHT-quitosano contra (B, Izquierda) Salmonella cholerae-suis, (B, derecha)
Bacillus subtilis. Resultados de MBC de TMC en contra (C, izquierda) Salmonella
cholerae-suis, (C, derecha) Bacillus subtilis.

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Para explorar ms a fondo las actividades antimicrobianas de OHT-quitina, NHTquitosano y TMC, los ensayos de letalidad se llevaron a cabo frente a S. cholerae-suis
y B. subtilis. Representativos de tiempo para matar los perfiles de los polmeros se
muestran en la Figura 5-7 (inculo, ~ 10

quitina se puso a prueba contra S.

cholerae-suis ( Figura 5 , izquierda) en la

UFC / ml), respectivamente. Cuando OHT-

concentracin de 2 MIC, bacterias creci un poco y se observ una pequea


diferencia de 1,4 log

10

en el nmero de clulas viables en comparacin con el control

despus de 24 h, lo que indica un efecto bacteriosttico. Cuando la concentracin de


OHT-quitina alcanz 2 MIC, la muerte bacteriana se observ en la tercera hora desde
el inicio del ensayo ( Figura 5 a la izquierda). En los tratamientos de 4 veces la MIC, S.
supervivencia cholerae-suis se redujo drsticamente con el tiempo cada vez mayor, y
estaba completamente muerto en la tercera hora despus de la incubacin. El mismo
polmero se ensay frente a B. subtilis en 1, 2, 4 MIC, respectivamente.
En tratamientos en 2 MIC, el nmero de clulas viables se mantuvo en el valor inicial
hasta el 24 h. Sin embargo, cuando la concentracin de polmero alcanz a 4 MIC,
100% de muerte bacteriana se observ en la tercera hora desde el inicio del ensayo (
Figura 5 , a la derecha).

Tiempo (h)

Tiempo (h)

Figura 5.-Tiempo-matar curvas de OHT-quitina contra Salmonella cholerae-suis (izquierda)


y Bacillus subtilis (derecha).

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Como se muestra en la Figura 6 , en la concentracin de MIC 1 , tanto S. choleraesuis (izquierda) y B.

subtilis (a la derecha) el crecimiento se suprimi por NHT-

quitosano, lo que indica un efecto bacteriosttico. En los tratamientos de 2 veces la


MIC, el nmero de clulas viables de S. cholerae-suis (izquierda) y B. subtilis se
observaron ligeramente menor que el valor inicial. En particular, en 4 veces la MIC,
tanto S.

cholerae-suis (izquierda) y B.

subtilis bacterias (derecha) estaban

completamente muertos en la tercera hora desde el comienzo de los tratamientos.

Tiempo (h)

Tiempo (h)

Figura 6.-Tiempo .matar curvas de NHT- quitosano contra Salmonella cholerae-suis (izquierda)
Bacillus subtilis(derecha)

Como se muestra en la Figura 7 , cuando TMC se puso a prueba contra S. choleraesuis y B.

Se observaron subtilis en 1 concentracin MIC, respectivamente, sin

diferencias significativas en comparacin con el control despus de 24 h ( Figura 7 ,


derecha). S. cholerae-suis se observ 100% de muerte bacteriana en la sexta hora
desde el comienzo del ensayo en los tratamientos en 2 MIC. Sin embargo, en los
tratamientos en 4 MIC, S.

clulas cholerae-suis se redujeron drsticamente y

completamente muertos despus de la incubacin durante 3 h mientras que el nmero


de clulas viables de B. subtilis fue ligeramente menor que el valor inicial a las 24 h en
los tratamientos en el 2 MIC y en la sexta hora del tratamiento result efecto
antibacteriano a 4 veces MIC.

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Tiempo (h)

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Tiempo (h)

Figura7.-Tiempo -matar curvas de TMC contra Salmonella cholerae-suis (izquierda) y


Bacillus subtilis (derecha)

De acuerdo con la investigacin anterior ( Aranaz y otros 2009 ; Tsai y otros, 2011 ;
Sadeghi y otros, 2008 ; Wang y otros 2009 ), TMC, NHT-quitosano puede mejorar su
actividad antibacteriana contra una serie de bacterias gram-negativas y gram-positivas.
Xu y otros informaron que TMHTMAPC, que era ms O-cuaternizacin de TMC, exhibi
actividad antibacteriana ms fuerte que TMC, y inferirse que los grupos propilo 2hidroxi-3-trialquilamonio, que se introdujeron fueron eficientes para mejorar su actividad
antibacteriana ( Xu y otros 2011 ).
Desde diversos factores intrnsecos y extrnsecos, como el tipo de quitosano, peso
molecular, las condiciones ambientales, bacteria, influir en los resultados de las
pruebas, es difcil comparar directamente y con precisin con modificar quitosano y
otros derivados de quitosano, tambin se ve el resultado actual con otras derivados de
quitosano cuaternizado. Por lo tanto, slo la tendencia de la actividad de quitosano y
sus derivados podra ser comparado. En nuestro estudio, propiedades antimicrobianas
generales de OHT-quitina, quitosano-NHT, y TMC mostraron que todos ellos exhiben
las actividades antibacterianas. Y el efecto antibacteriano de TMC contra B. subtilis y
S. cholerae-suis era ligeramente ms fuerte que los de NHT-quitosano y quitina-OHT
en las mismas condiciones.

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Que tal vez debido a que la actividad antibacteriana de cuaternario basados en la


quitina / quitosano derivados no slo es relevante al peso molecular, bacterias, y el
anin, sino tambin relevante para diferentes grupos de amonio cuaternario y grados
de cuaternizacin. Por otra parte, los estudios antibacterianos tambin pueden concluir
que los polmeros bacteria-matanza fueron la concentracin y dependiente del tiempo,
que estaba de acuerdo con los resultados de la actividad bactericida.

Microscopa Electrnica
Interaccin de la TMC con B. subtilis se estudi adems por TEM. B. TMC-tratada
subtilis micrografas electrnicas mostraron dao celular en diversos grados, revelando
roturas en las paredes de las clulas con la prdida de material interna de la clula y
los restos celulares evidente ( Figura 8 ), mientras que, bacteria no tratado estaba sano
y de morfologa de la superficie habitual.

Al 30 min desde el comienzo de los

tratamientos, B. las membranas celulares subtilis se hicieron localmente separados de


la pared celular, dando lugar a estructuras "vacuola-como" por debajo de la pared, y la
superficie apareci fresas.

Entonces, en la exposicin de 60 min a TMC, las

membranas celulares se careca de contenido de la celda con restos de clulas lisadas,


que se atribuyen a la separacin genera iones y flujo de salida de agua, provocando
disminuciones en la presin interna de las bacterias.

Despus de 90 min de

interaccin, como se muestra en la figura 8 , algunas membranas celulares eran graves


interrumpido con desprendimiento de la membrana y brechas, incluso desaparecido.
Por ltimo, TMC-tratada B.

subtilis mostraron muy perturbada y alterada de la

membrana celular despus de 2 h. En general, el exterior de la B. pared celular


subtilis experiment gradualmente deshilachado y el debilitamiento, y la duplicacin
tambin fue deprimida desde las clulas fueron tratadas con TMC.
En trminos de accin antimicrobiana, es posible que la actividad final es un efecto
sinrgico de cuaternizacin y quitina / quitosano s mismos columna vertebral.
Cargados positivamente-NH

+ 3

grupos en polmero podra ser un factor fundamental

muy probable que contribuye a interactuar con la superficie celular, y la capa de


peptidoglicano de la pared celular de B. subtilis se compone de las redes con un
montn de poros que tal vez deje TMC soluble entrar fcilmente a las clulas que
conducen en ltima instancia a las bacterias muerte.

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Figura 8.-Efecto sobre la morfologa de las clulas de TMC tratados con


Bacillus subtilis a 30, 60, 90, y 120 min desde el comienzo de los experimentos.

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CONCLUSION
-

OHT-quitina, quitosano-NHT, y TMC se prepararon y su actividad antibacteriana se


evalu in vitro. Todos estos derivados de la quitina / quitosano cuaternario podra
ser bien distribuidos en el medio de cultivo y menos afectada por el pH de la
solucin.

Estas caractersticas hacen que un nuevo sistema de dispersin

antibacteriana de valor potencial en la determinacin del mecanismo antibacteriano


exacta de quitosano, y deben ser potencialmente til para muchas aplicaciones
tecnolgicamente importantes que requieren actividad antibacteriana.
-

Aunque OHT-quitina y quitosano-NHT exhibieron ligeramente ms dbil efecto


antibacteriano frente a B. subtilis y S. cholerae-suis de TMC, que son todava
consideracin particularmente deseable debido a su fcil preparacin en grandes
cantidades sin la necesidad de un proceso de purificacin tediosa.

Adems,

micrografas electrnicas muestran claramente que hubo graves daos en las


clulas bacterianas. Con la aparicin de ms y ms seguras y problemas de salud
alimentaria, estos nuevos derivados naturales cuaternario quitina / quitosano deben
ser potencialmente til para muchas aplicaciones tecnolgicamente importantes en
muchos campos. Por otra parte, diferentes grupos de amonio cuaternario y grados
de cuaternizacin tambin pueden tener efecto sobre la actividad antimicrobiana de
derivados de la quitina / quitosano cuaternario basados en, y que sern estudiados
con ms detalle en el futuro.

V.

AGRADECIMIENTO
Este estudio fue apoyado por la Fundacin de Ciencias Naturales de la provincia de
Zhejiang de China (Y3110204), el Proyecto de Planificacin de Tecnologa de la
provincia de Zhejiang de China (2011C12031), el proyecto de aplicacin de la
tecnologa Gongyi, provincia de Zhejiang de China (2011C22024), y la Fundacin
Apertura de Zhejiang Provincial Top Disciplina Key.

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