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AVANCES EN CIENCIA Y
TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
ALUMNO:
SIFUENTES ZELAYA ,Katherine
060612-C
2013
PDF N 18
Resumen:
Total de 3 derivados de la quitina / quitosano cuaternario basados en solubles en agua, que
tienen un peso molecular idntica y el anin, se sintetizaron y caracterizaron. Sus actividades
antibacterianas contra Salmonella cholerae-suis y Bacillus subtilis fueron evaluados in vitro. Los
polisacridos mostraron la eficacia antibacteriana. Sus valores de concentracin inhibitoria
mnima (CIM) varan desde 0,02 hasta 20,48 mg / ml, y los valores de su concentracin
bactericida mnima (MBC) varan desde 0,08 hasta 40,96 mg / ml contra S. cholerae-suis y B.
subtilis, respectivamente.Futhermore, en la medida de Bacillus subtilis clulas daos se
examin a travs de microscopa electrnica de transmisin (TEM) para mostrar la forma en N,
N, N-trimethylchitosan (TMC) destruidos gradualmente y mataron a las clulas de B. subtilis
cuando fueron tratados con TMC. Uno de esos polmeros cuaternarios, O-([2-hidroxi-3trimetilamonio]) propil quitina (quitina-OHT), que se puede sintetizar directamente y fcilmente
de
la
quitina
en
cantidades
granel,
tambin
se
ha
demostrado
su
actividad
Aplicacin Prctica:
La principal aplicacin prctica detrs de la investigacin y la actividad antibacteriana de
evaluacin 3 derivados de la quitina / quitosano cuaternario basados en solubles en agua
podra ser utilizado potencialmente como agentes antimicrobianos en muchos campos. Estos
polisacridos representan una fuente de polmeros biodegradables naturales renovables y
cumplir con la aparicin de ms y ms problemas de seguridad alimentaria
Pg. 2
I.
INTRODUCCION
Pg. 3
betainates, que poseen resto cuaternario, no era muy activo contra E. coli y S. aureus
en condiciones neutras como se esperaba ( Holappa y otros, 2006b ). Por lo tanto, la
eficacia antibacteriana de quitosano cuaternario se convierte en un tema controvertido.
El objetivo del presente estudio fue investigar sistemticamente la medida de la
actividad antibacteriana de las sales de amonio cuaternario de quitosano frente a S.
cholerae-suis y B. subtilis in vitro. Los aspectos clave de este estudio fueron la sntesis
y caracterizacin de 3 sales cuaternarias diferentes, TMC, OHT-quitina y NHT-quitosano
con el anin cloro, el examen de la concentracin inhibitoria mnima (CIM) y la
concentracin bactericida mnima (MBC), y el seguimiento de su efecto bactericida con
perfiles de anlisis de poblacin en tiempo real (PAP).
Pg. 4
II.
MATERIALES Y METODOS
El quitosano y chemcials
La quitina se obtiene a partir de cscara de camarn de acuerdo con la literatura (
Shahidi y otros 1999 ). El quitosano con una viscosidad de 100 mPa s (1%, 20 C) y
una desacetilacin DS de valor 80% se adquiri de Qingdao Honghai Bio-Technology
Co. (Shandong, China). Cloruro de 3-cloro-2-hidroxipropiltrimetilamonio (CTA) se obtuvo
por Tokyo Chemical Industry Co. (Japn). 1-metil-2-pirrolidinona (NMP), ter anhidro,
cido frmico (88%), formaldehdo (37%), yoduro de metilo, etanol absoluto, acetona,
hidrxido de sodio, y el alcohol isoproplico se obtuvieron de Aladdin Reactivo Co.
(Shanghai , China).
Microorganismos
S. clulas vegetativas de B. cholerae-suis (Centro Chino de Industrial Culture Collection
21.524) y subtilis (General China de Coleccin de Cultivos Microbiolgicos Centro
1,1377) fueron cultivadas en caldo LB (Hopebiol HB0128), y se agit a 200
revoluciones por minuto (rpm) a 37 C durante 18 a 24 h.
Pg. 5
NaNO3
/ L) como
poliestireno lineales.
Pg. 6
Determinacin de la MIC
El MIC se determin de acuerdo a un mtodo turbidimtrico modificado de informe
anterior ( Mallick y otros 2012 ). Los polmeros se disolvieron en caldo nutriente
estril para preparar las diferentes soluciones con concentraciones variadas.
Despus de eso, se trataron en autoclave a 121 C durante 15 min, y se
inocularon con 100 l de la suspensin de bacterias recin preparada.
El
Determinacin de la MBC
El MBC que mata el 99,9% de las bacterias se determin mediante el ensayo de
los organismos vivos en los tubos de la prueba de CIM que no mostr crecimiento (
Qi y otros 2004 ). Total de 1 ml, cada tubo se inocul en agar para recuento en
placa (PCA, Hangzhou microbiana reactivo Co. Ltd.) y se examina para detectar
signos de crecimiento.
Pg. 7
Tiempo de matar-anlisis
El ensayo de sensibilidad al tiempo se determin de acuerdo con el mtodo
descrito por Joray ( Joray y otros 2011 ). Las soluciones de muestras ensayadas,
incluyendo agua destilada y caldo LB (1: 1, v / v) con las concentraciones finales
que van desde MIC a 4 MIC se inocularon con suspensiones de bacterias (casi
10
Pg. 8
III.
RESULTADOS Y DISCUSION
Figura 2.- Espectro FT-IR de la quitina (A), quitosano (B), NHT-quitosano (C),OHT-quitina (D)
y TMC (E).
Pg. 9
El espectros FT-IR (B) y (E) muestran la evidencia de la metilacin del quitosano. Los
picos caractersticos de amina tijera banda en 1659 y 1567 cm
desaparecer, y la nueva banda a 1490 cm
-1
-1
de quitosano
wn
Pg. 10
Organismos
Salmonella
cholerae-suis
Bacillus subtilis
OHT-quitina (mg /
NHT-quitosano (mg /
TMC (mg /
ml)
ml)
ml)
MIC
MBC
MIC
MBC
MIC
MBC
20.48
40.96
10.24
40.96
0.16
0.32
2.56
10.24
2.56
10.24
0.02
0.08
Tabla 1.-MIC y MBC de OH quitina, NHT- quitosano y TMC contra Salmonella cholerae-suis y
Bacillus subtilis crecimiento.
Concentracin
Concentracin
Pg. 11
El CBM de NHT-2 quitosano contra bacterias fueron los mismos que OHT-quitina (
Figura 4 B y Tabla 1 ). En cuanto a TMC, el CBM era 2 MIC (0,32 mg / ml) contra S.
cholerae-suis, y 4 MIC (0,08 mg / ml) frente a B. subtilis ( Figura 4 C y Tabla 1 ).
Pg. 12
Para explorar ms a fondo las actividades antimicrobianas de OHT-quitina, NHTquitosano y TMC, los ensayos de letalidad se llevaron a cabo frente a S. cholerae-suis
y B. subtilis. Representativos de tiempo para matar los perfiles de los polmeros se
muestran en la Figura 5-7 (inculo, ~ 10
10
Tiempo (h)
Tiempo (h)
Pg. 13
cholerae-suis (izquierda) y B.
Tiempo (h)
Tiempo (h)
Figura 6.-Tiempo .matar curvas de NHT- quitosano contra Salmonella cholerae-suis (izquierda)
Bacillus subtilis(derecha)
Pg. 14
Tiempo (h)
Tiempo (h)
De acuerdo con la investigacin anterior ( Aranaz y otros 2009 ; Tsai y otros, 2011 ;
Sadeghi y otros, 2008 ; Wang y otros 2009 ), TMC, NHT-quitosano puede mejorar su
actividad antibacteriana contra una serie de bacterias gram-negativas y gram-positivas.
Xu y otros informaron que TMHTMAPC, que era ms O-cuaternizacin de TMC, exhibi
actividad antibacteriana ms fuerte que TMC, y inferirse que los grupos propilo 2hidroxi-3-trialquilamonio, que se introdujeron fueron eficientes para mejorar su actividad
antibacteriana ( Xu y otros 2011 ).
Desde diversos factores intrnsecos y extrnsecos, como el tipo de quitosano, peso
molecular, las condiciones ambientales, bacteria, influir en los resultados de las
pruebas, es difcil comparar directamente y con precisin con modificar quitosano y
otros derivados de quitosano, tambin se ve el resultado actual con otras derivados de
quitosano cuaternizado. Por lo tanto, slo la tendencia de la actividad de quitosano y
sus derivados podra ser comparado. En nuestro estudio, propiedades antimicrobianas
generales de OHT-quitina, quitosano-NHT, y TMC mostraron que todos ellos exhiben
las actividades antibacterianas. Y el efecto antibacteriano de TMC contra B. subtilis y
S. cholerae-suis era ligeramente ms fuerte que los de NHT-quitosano y quitina-OHT
en las mismas condiciones.
Pg. 15
Microscopa Electrnica
Interaccin de la TMC con B. subtilis se estudi adems por TEM. B. TMC-tratada
subtilis micrografas electrnicas mostraron dao celular en diversos grados, revelando
roturas en las paredes de las clulas con la prdida de material interna de la clula y
los restos celulares evidente ( Figura 8 ), mientras que, bacteria no tratado estaba sano
y de morfologa de la superficie habitual.
Despus de 90 min de
+ 3
Pg. 16
Pg. 17
IV.
CONCLUSION
-
Adems,
V.
AGRADECIMIENTO
Este estudio fue apoyado por la Fundacin de Ciencias Naturales de la provincia de
Zhejiang de China (Y3110204), el Proyecto de Planificacin de Tecnologa de la
provincia de Zhejiang de China (2011C12031), el proyecto de aplicacin de la
tecnologa Gongyi, provincia de Zhejiang de China (2011C22024), y la Fundacin
Apertura de Zhejiang Provincial Top Disciplina Key.
Pg. 18
VI.
REFERENCIAS
Aranaz I, Mengbar M, Harris R, Paos I, Miralles B, Acosta N, Galed G, A Heras 2009
Caracterizacin funcional de la quitina y el quitosano Curr Chem. Biol. 3: 203-30.
Belalia R , Grelier S , Benaissa M , Coma V . 2008 . New bioactive biomaterials based
on quaternized chitosan . J Agric Food Chem 56 : 1582 8 . .. Belalia R, Grelier S, M
Benaissa, Coma V 2008 nuevos biomateriales bioactivos basados en quitosano
cuaternizado J Agric Food Chem. 56: 1582-8.
Chen JL , Zhao YY . 2012 . Effect of molecular weight, acid, and plasticizer on the
physicochemical and antibacterial properties of -chitosan based films . J Food Sci 77
: E127 36 . Chen JL, Zhao YY 2012 Efecto del peso molecular, cido, y el
plastificante en las propiedades fsico-qumicas y antibacterianas de pelculas a base
de -quitosano J Food Sci. 77: E127 - 36.
Da Silva LP , de Britto D , Seleghim MHR , Assis, OBG . 2010 . In vitro activity of watersoluble quaternary chitosan chloride salt against E. Da Silva LP, de Britto D, Seleghim
MHR, Assis, OBG. 2010. Actividad in vitro de sal de cloruro soluble en agua quitosano
cuaternario contra E. coli . World J Microbiol Biotechnol 26 : 2089 92 . coli Mundial J
Microbiol Biotechnol 26: 2089-92.
Holappa J , Nevalainen T , Soininen P , Masson M , Jarvinen T . 2006b . Synthesis of
novel
quaternary
chitosan
derivatives
via
Chloroacyl
Pg. 19
Joray MB, Joray ML, Palacios SM, Carpinella MC 2011 La actividad antibacteriana de
los compuestos derivados de plantas 23-metil-6-O-desmethylauricepyrone y (Z, Z) -5 .. (Trideca-4 ,7-dienilo) resorcinol y su sinergia con antibiticos contra sensible a
meticilina y Staphylococcus aureus resistente a J Agric Food Chem. 59: 11534-42.
Lee HS , Eckmann DM , Lee D , Hickok NJ , Composto RJ . 2011 . Symmetric pHdependent swelling and antibacterial properties of chitosan brushes . Langmuir 27 :
12458 65 . .. Lee HS, Eckmann DM, D Lee, NJ Hickok, Composto RJ 2011
propiedades simtricas dependientes del pH hinchazn y antibacterianas de cepillos
quitosano Langmuir 27: 12458-65.
Li P , Poon YF , Li WF , Zhu HY , Yeap SH , Cao Y , Qi XB , Zhou CC , Lamrani M ,
Beuerman RW , Kang E , Mu YG , Li CM , Chang MW , Leong SSJ , Chan-Park MB .
2011 . A polycationic antimicrobial and biocmpatible hydrogel with microbe membrane
suctioning ability . Nat Mater 10 : 149 56 . Li P, Poon YF, Li WF, Zhu HY, Yeap SH,
Cao Y, Qi XB, Zhou CC, Lamrani M, Beuerman RW, Kang E, Mu YG, Li CM, Chang
MW, Leong SSJ, Chan-Park MB. 2011 Un hidrogel antimicrobiano policatinico y
biocmpatible con membrana microbio aspiracin capacidad Nat. Mater 10: 149-56.
Lim SH , Hudson SH . 2004 . Application of a fiber-reactive chitosan derivative to cotton
fabric as an antimicrobial textile finish . Carbohydr Polym 56 : 227 34 . Lim SH,
Hudson SH 2004 Aplicacin de un derivado reactivo con las fibras de quitosano a la
tela de algodn como un acabado textil antimicrobiano Carbohydr Polym 56: 227-34.
Mallick S , Sharma S , Banerjee M , Ghosh SS , Chattopadhyay A , Paul A . 2012 .
Iodine-stabilized Cu nanoparticle chitosan composite for antibacterial applications .
ACS Appl Mater Interf 4 : 1313 23 . ... Mallick S, Sharma S, M Banerjee, Ghosh SS,
Chattopadhyay A, Pablo A 2012 yodo estabilizado Cu nanopartculas de quitosano
compuesto para aplicaciones antibacterianas ACS Appl Mater Interf 4: 1313-1323.
Mourya VK , Inamdar NN . 2009 . Trimethyl chitosan and its applications in drug
delivery . J Mater Sci Mater Med 20 : 1057 79 . ... Mourya VK, Inamdar NN 2009
Trimetil quitosano y sus aplicaciones en la administracin de frmacos J Mater Mater
Sci Med 20: 1057-1079.
Nam CW , Kim YH , Ko SW . 1999 . Modification of polyacrylonitrile (PAN) fiber by
blending with N -(2-hydroxy)propyl-3-trimethylammonium chitosan chloride . J Appl
Polym Sci 74 : 2258 65 .
Pg. 20
amonio
trimetil
quitosano-N-2-hidroxipropil
sobre
el
crecimiento
de
Pg. 21
Shahidi F , Arachchi JKV , Jeon YJ . 1999 .Food applications of chitin and chitosans .
Trends Food Sci Technol10 :37 51 .Shahidi F, Arachchi JKV, Jeon YJ 1999
Aplicaciones alimentarias de quitina y quitosano Tendencias Food Sci Technol 10: 37
- 51.
Tsai T , Chien HF , Wang CT , Ker YB , Chen CT . 2011 . Chitosan augments
photodynamic inactivation of Gram-positive and Gram-negative bacteria . Antimicr
Agents Chemother 55 : 1883 90 . Tsai T, Chien HF, Wang CT, Ker YB, Chen CT
2011 quitosano aumenta la inactivacin fotodinmica de las bacterias Gram-positivas
y Gram-negativas antimicr Agents Chemother 55: 1883-1890.
Wang XY , Du YM , Luo JW , Yang JH , Wang WP , Kennedy JF . 2009 . A novel
biopolymer/rectorite nanocomposite with antimicrobial activity . Carbohydr Polym 77 :
449 56 . Wang XY, Du YM, Luo JW, JH Yang, Wang WP, JF Kennedy 2009 Un
nuevo biopolmero / rectorita nanocompuestos con actividad antimicrobiana
Carbohydr Polym 77: 449-56.
Xu T , Xin MH , Li M , Huang HL , Zhou SQ , Liu JZ . 2011 . Synthesis, characterization,
and antibacterial activity of N,O -quaternary ammonium chitosan . Carbohydr Res 346
: 2445 50 . Xu T, Xin MH, Li M, Huang HL, Zhou SQ, Liu JZ 2011 Sntesis,
caracterizacin y actividad antibacteriana de N, O-amonio cuaternario quitosano
Carbohydr Res. 346: 2445-50.
Yancheva E , Paneva D , Maximova V , Mespouille L , Dubois P , Manolova N ,
Rashkov L . 2007 .
Polyelectrolyte complexes
between (cross-linked) N-
2007
entre
complejos
de
polielectrolitos
(reticulado)
N-
of
chitin
and
chitosan
with
the
[(2-Hydroxy-3-
Pg. 22