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CURSO TCNICO DE BIOTECNOLOGIA

ATIVIDADE LABORATORIAL N.1


TURMA:
DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA GERAL
TEMA: COLORAO DE GRAM

ANO LETIVO: 2011


PROF:

Amostras: Activia (Bifidobacterium animalis), Cana de Acar, Yakult, Placa Sem nome e com gua(Tanque de Peixes)
Nome:
Introduo: Proposta por C. Gram em 1884, esta tcnica permite
distinguir clulas bacterianas quanto composio das suas
paredes celulares, facilitando a observao morfolgica das prprias
clulas. Em termos fsico-qumicos, o processo baseia-se na reao
de um corante alcalino com os cidos da clula. Por adio de lugol
(soluo de iodo) forma-se um complexo que , quando se aplica o
lcool, desaparece ou retido, consoante a diferente sensibilidade
das paredes celulares. Torna-se assim possvel distinguir entre
bactrias Gram positivas (Gram +) e Gram negativas (Gram -),
consoante a cor final que as clulas tomam. Esta colorao um
dos critrios fundamentais usados em taxonomia bacteriana, pois
esta diferena de comportamento atribuda a diferenas na
composio da parede celular.

Slido: pingou-se uma gota de gua destilada na lmina,


colheu-se com a ala bacteriana uma poro da colonia
bacteriana da placa de petri na superfcie do gar e misturou-se
com a gota de gua na lmina, at obter um esfregao
homogneo;
Aps fixa-se o esfregao, passando a lmina 3 vezes sobre a

Procedimento da colorao para todos os mtodos:

Cobriu-se o esfregao com cristal violeta durante 1 minuto;


Lavou-se com gua corrente (somente um fio de gua) evitando
incidir o jato diretamente sobre o esfregao;
Cobriu-se com lugol durante 1 minuto;
Repetiu-se a lavagem;
Descorou-se com lcool/acetona(gotejou-se a soluo at que
no saia mais o corante);
Repetiu-se a lavagem;
Cobriu-se com fucsina durante 30 segundos;
Repetiu-se a lavagem;
Esperou-se a lmina secar naturalmente ao ar livre.

Objetivo: Demonstrar a importncia da colorao de Gram e


estabelecer a distino entre:

Bactrias Gram-positivas e Gram-negativas;

As morfologias cocos, bacilos;

Arranjos bacterianos (estafilococos, estreptococos, etc.;

Leveduras.

Materiais:

Microscopia: Examinou-se a amostra ao microscpio. ColocouAL3 - Pgina nica

- Lminas,placas de petri, vidro de relgio, cadinho, pistilo, pisseta,


bquer, gua destilada, leo de imersao, frasco com lcool/areia,
ala bacteriolgica, microscpio ptico, bico de bunsen, balana
analtica, capela, luvas.
- Soluo de cristal violeta, lugol, lcool/acetona, fucsina.
- Activia(bifidobacterium animalis), caldo de cana, yakult, placa sem
nome, placa do tanque de peixes.

se a lmina com amostra corada ao microscpio e focalizou-se com


a objetiva 10X, logo em seguida, mudou-se para a objetiva 20X e
focalizou-se, aps, mudou-se para a objetiva 50X e focalizou-se e
antes de mudar para a ltima objetiva, pingou-se uma gota do leo

Preparo de Solues:
As solues de Cristal Violeta e Fucsina que utilizamos, ja estavam
preparadas.

Preparao Lugol:
- Iodo..................................................0,25 g;
- Iodeto de Potssio...........................0,50 g;
- gua Destilada..................................75 ml;
- Cadinho, balana analtica, pistilo, pisseta, vidro de relgio.
Colocou-se o vidro de relgio na balana analtica e tarou-se, pesouse os ingredientes slidos (gramas) colocou-se no vidro de relgio,
em seguida, colocou-se em um cadinho os ingredientes slidos e
triturou-se bem, juntou-se a gua destilada misturando os
ingredientes.

Analisando os resultados:
- Activia (Bifidobacterium animalis) - observou-se a presena de
cocos, diplococos e estaphylococus gram-positivos;
- Yakult Observou-se a presena de bactrias gram-positivos;
- Caldo de cana Observou-se a presena de muitas leveduras e
bacilus gram-positivos e gram-negativos;
- Placa sem nome Observou-se a presena de leveduras, bacilus
gram-negativos e gram-positivos;

Preparao lcool-Acetona:
- lcool etlico.....................................200 ml;
- Acetona..............................................50 ml;
- Bquer, Pipeta, capela;
Mediu-se os ingredientes lquidos na capela utilizando uma pipeta e
colocou-se as solues em um bquer, misturou-se bem.

Concluso: A realizao de testes bsicos para identificao de


bactrias, atravs do mtodo de colorao de Gram, permitiu-se
concluir que existem diferenas significativas na composio da
parede celular de bactrias Gram positivas e Gram negativas.O
mecanismo de reao de Gram demonstrou-se um mtodo eficiente
de colorao diferencial, podendo-se, atravs dos resultados obtidos,
diferenciar bactrias Gram positivas de Gram negativas, atuando
como ferramenta auxiliar, na identificao de bactrias
fitopatognicas.

Preparao do Esfregao:

Limpou-se bem uma lmina de vidro com algodo embebido em


lcool e depois secou-se com papel toalha;
Passou-se a ala bacteriolgica em uma soluo de lcool/areia
para limpar a ala;
Flambou-se a ala bacteriolgica no bico de bunsen at ficar
vermelha;
Lquido: Pegou-se uma poro da amostra a ser analisada e
preparou-se o esfregao na lmina;

Bibliografia:

Microbiologia Conceitos e aplicaes Vol.1


Michael J. Pelczar Junior
E.C.S Chan
Noel R. Krieg
Sites:
http://pt.wikipedia.org/wiki/T%C3%A9cnica_de_Gram
http://www.infoescola.com/bioquimica/coloracao-de-gram/

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