UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MXICO

FACULTAD DE QUMICA
LICENCIATURA: INGENIERA PETROQUMICA
MATERIA: PROCESOS MICROBIOLOGICOS
REPORTE DE PRACTICA NO. 4: AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS EN CULTIVO PURO
PROFESOR: OCTAVIO DUBLN
EQUIPO 8:
KAREN GUADALUPE MORENO MARTNEZ
KENIA ELIZABETH CONZUELO XING

GRUPO: 37
MIERCOLES 14 DE SEPTIEMBRE DE 2016

PRACTICA NO. 4: Aislamiento de microorganismos en cultivo puro

OBJETIVOS: Seleccionar tcnicas especficas para aislar un microorganismo puro.
DESCRIPCION DE LA PRCTICA:
1. A 90 ml de solucin salina
estril aadir 10 ml de
muestra y agitar tres veces.
(Dilucin
)
Tcnica de vertido en placa

2. Transferir 1.0ml de esta

dilucin a un tubo con 9.0 ml
de solucin salina (dilucin
) y agitar de la misma
manera, continuar con los
siguientes tubos hasta
obtener una dilucin

3. Utilizando las mismas pipetas vaciar el

volumen indicado a las cajas Petri para
preparar por el mtodo de dilucin y vaciado
en placa.

MTODO DE DILUCIN
Y VACIADO EN PLACA

1. Aislamiento de
bacterias.

b) Agregar Agar Nutritivo a temperatura

aproximada de 45 C (20 ml aprox.) y
mezclar lentamente por rotacin.

a) De las 2 ltimas
diluciones transferir 1ml
a una caja petri estril
(realizar por duplicado)

c) Dejar
melificar e
incubar a 37 C
durante 24 hrs.

2. Aislamiento de
hongos.

a) De las 2 ltimas diluciones

transferir por duplicado 1.0 ml
a cajas Petri estriles

b) Agregar medio de
Sabouraud o Papa
Dextrosa Agar (PDA)
fundido y mezclar por
rotacin lentamente.

3. Mtodo de estra cruzada

empleando medios de cultivo
selectivo y diferencial.

a) Tomar una asada de la

muestra original y
descargar la asa en una
de las orillas de las
placas de los medios de
cultivo preparados.

c) Enfriar la asa
y hacer otra
serie de estras

b) Esterilizar la asa
al rojo de la flama
del mechero.

c) Dejar melificar e
incubar a 28 C
durante 48 a 72 hrs.

d) Esterilizar
nuevamente la asa
y dejarla enfriar

e) Realizar la misma
tcnica realizado de
4 series de estras

f) Incubar las placas a

37 C/ 24 hrs.

RESULTADOS:
1) Las cajas Petri con el cultivo se
retiraron a las 48 horas de la
incubadora, de ah se pasaron al
refrigerador.
3) En el cultivo PDA, no se encontr
presencia de bacterias

2) A los 5 das de estar en el

refrigerador, se visualizaron las
muestras, obteniendo los siguientes
resultados.
4) En el medio cuenta estndar, no se
encontr presencia de bacterias

5) Al tomar las cajas petri, (de cuenta

estandar y PDA) no se veia
presencia de colonias, en la tapa
de la caja habia un poco de agua

6) La textura del medio cuenta

estndar pareca ser agrietada
suavemente o rugosa

7) La tertura del medio PDA tambin se

mostraba agrietada suavemente o
rugosa

8) En ninguna caja Petri se pudo

apreciar el borde

9) Se decidi poner las muestras en el

contador de colonias

10) Al poner las cajas Petri en el

contador de colonias encendido, la
caja de cuenta estndar
se
observ esto:

11) Foto de Cuenta estndar

12) Foto de PDA

13) Foto de PDA

OBSERVACIONES:
La tcnica de vertido en placa no se llev a cabo hasta una solucin

, sino hasta

Se utiliz una pipeta para dos soluciones diferentes, generando un error y contaminacin

tamao
Color

Forma
Elevacin

Colonia Cuenta
estndar

Colonia Cuenta
estndar

Colonia de PDA

Colonia de PDA

No se apreci
El mismo color
del agar (amarillo
tenue)
No se apreci
No se apreci

No se apreci
El mismo color
del agar
(amarillo tenue)
No se apreci
No se apreci

No se apreci
El mismo color
del agar
(amarillo tenue)
No se apreci
No se apreci

No se apreci
El mismo color
del agar
(amarillo tenue)
No se apreci
No se apreci

Superficie
Aspecto
Bordes
Luz reflejada
Luz
transmitida
Consistencia

Rugosa
No haban
cambios
No se apreci
Brillante
Transparente

Rugosa
No haban
cambios
No se apreci
Brillante
Transparente

Rugosa
No haban
cambios
No se apreci
Brillante
Transparente

Rugosa
No haban
cambios
No se apreci
Brillante
Transparente

Dura

Dura

Dura

Dura

ANLISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS:

La Tcnica de vertido en placa no se llev a cabo como tal, solo se obtuvo la solucin
salina de
. Las muestras permanecieron en la incubadora durante 48 horas a
temperatura constante de 37C, para favorecer su crecimiento, despus de este tiempo se
pasaron las muestras al congelador . No hubo desarrollo de colonias que pudieran verse a
simple vista, tal vez se pueda ver presencia con ayuda de un microscopio, esto por
consecuencia de que la solucin muestra no tena suficientes bacterias.

CUESTIONARIO:
1. Cul de los dos mtodos utilizados en la prctica es cuantitativo?
Cuenta estndar
2. Cul es la razn del por qu se aslan los microorganismos en cultivo puro?
El crecimiento explosivo de las bacterias produce un gran nmero de ellas, tras un
periodo de incubacin en las condiciones adecuadas, se produce una colonia
observable a simple vista y formada por individuos iguales.
3. Describe el fundamento del medio de cultivo para aislar S. Aureus
Para su aislamiento pueden usarse distintos medios slidos selectivos. En el
medio de cultivo, el extracto de levadura y la triptena aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa.
La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. Las ventajas de
este medio es que permite en la misma placa, obtener pruebas de identificacin
presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentacin de manitol
e hidrlisis de la gelatina. La temperatura ideal de crecimiento 37C, temperatura
de crecimiento 10-46C. Consumen lpidos, protenas y fermenta una gran
variedad de azucares, no es formadora de esporas, crece en niveles de salinidad
7.5-10%, puede sobrevivir a 60C durante 60min.
4. Describe el fundamento del medio de cultivo para aislar E. coli
Esta no es exigente, el contenido de lactosa en este medio, favorece el
crecimiento de bacterias lactosa positivas, mientras que las sales biliares inhiben
el crecimiento de gran parte de la flora acompaante, fermenta glucosa y lactosa
con produccin de gas, es anaerobio facultativo, es un bacilo Gram negativo, no
forma esporas. Las colonias de E. Coli en agar E.M.B. (eosina y azul de metileno),
tienen 2 a 4 mm de dimetro, un centro grande de color oscuro e incluso negro, y
tienen brillo verde metlico cuando se observan con luz refleja. Su desarrollo se
favorece en medios de cultivo generales o selectivos: MacConkey o EMB, en agar

MacConkey las colonias son rojas con halo turbio. Temperatura ideal de
crecimiento 37C
5. Qu precauciones debe tomar al momento de realizar las diluciones para evitar
errores?
Establecer una zona estril para evitar contaminar cajas Petri con el respectivo
cultivo, utilizar pipetas que sean de cantidad aproximada a la cantidad que se va a
usar, evitar derrames, no utilizar una pipeta para dos soluciones, no pipetear con
la boca, sino con propipeta microbiolgica.

ACTIVIDADES DE SNTESIS:
Tcnica de enriquecimiento de cultivo

Tcnica de las diluciones en serie

Tcnica de siembra por estras en placa

Tcnica de vertido en placa

TCNICAS DE AISLAMIENTO
DE MICROORGANISMOS

Tcnica de aislamiento de una sola clula mediante un micromanipulador.

TCNICAS

DE AISLAMIENTO

VENTAJAS
Son tcnicas baratas
Se realizan rpidamente
El material es accesible y en pequeas
cantidades
Se utiliza poca muestra
No hay diluciones
Muestran caractersticas cualitativas y
cuantitativas
Se puede apreciar morfologa colonial

DESVENTAJAS
El tiempo de incubacin
Uniformidad en la
extensin de los
microorganismos

CONCLUSIONES:

El aislamiento de cultivo sirve para inducir el crecimiento de un microorganismo

identificado y ver su desarrollo.
Existen diferentes tcnicas para el aislamiento, desarrolladas al tipo de
microorganismo.
Una vez obtenido el un microorganismo, se puede identificar por su morfologa
colonial (forma, color, superficie, aspecto, bordes, entre otros).
Al pasar las muestras de la incubadora hacia el refrigerador, se disminuye la
temperatura, congelando las bacterias para evitar un crecimiento exponencial y
protegerlas.
No se desarrollaron colonias visibles, debido a que la muestra tena pocas
bacterias.

REFERENCIAS:
a) PRESCOTT, L. M., HARLEY, J. P. Y KLEIN, D. A. (1999) Microbiologa. 4 ed.
Edit. McGraw-Hill-Interamericana. Espaa
b) SALVAT Editores S. A. (1979) Tratado de microbiologa. Espaa. Mallorca 41.
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/estafilococomedio110.htm
http://www.uv.mx/personal/sbonilla/files/2011/06/escherichia-coli-i.pdf
https://www.ecured.cu/Cultivos_puros