EXTRACCIN DE ADN BACTERIANO Y VERIFICACIN DEL ADN OBTENIDO

MEDIANTE ELECTROFORESIS

Angie Marcela Muoz1, Cristina Cruz Fajardo2, Karen Molano Serna3, Marisol Buitrn
Cabezas4
Universidad del Cauca, Popayn - Cauca, Colombia, Estudiantes de ingeniera
agroindustrial.
E-mails: angiemunoz@unicauca.edu.co, yeca1705@unicauca.edu.co,
kmolano@hotmail.com & marisolbc@unicauca.edu.co

RESUMEN
La prctica reconocimiento de laboratorio se llev a cabo con el fin de identificar y conocer
los equipos e instalaciones del laboratorio de biotecnologa dado que su correcto
funcionamiento est relacionado con el conocimiento de las normas de seguridad e higiene y
el uso adecuado, teniendo en cuenta sus respectivos cuidados y polticas establecidas por el
fabricante del equipo o del encargado del lugar.

PALABRAS CLAVE: reas, equipos, instalaciones, normas, prctica.

ABSTRACT
Recognition of laboratory practice was conducted in order to identify and meet the
equipment and facilities of the laboratory of biotechnology since its proper functioning is
related to knowledge of the rules of safety and hygiene and proper use, taking into account
their respective care and policies established by the manufacturer of equipment or of the
Manager of the place.
KEYWORDS: area, equipment, facilities, rules, practice.

Reconocimiento de las reas, materiales y equipos del laboratorio de Biotecnologa

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Reconocimiento de las reas, materiales y equipos del laboratorio de Biotecnologa

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1. INTRODUCCIN
Las bacterias acidolcticas (BAL) son un grupo de microorganismos Gram positivos utilizados
ampliamente en la preservacin de alimentos debido a sus propiedades probiticas y su capacidad
para producir bacteriocinas. Las bacteriocinas son compuestos antimicrobianos de naturaleza
peptdica importantes en la industria de alimentos debido a su uso potencial como sustitutos de
aditivos qumicos [1]. Este trabajo reporta el aislamiento y caracterizacin de la cepa de
Lactobacillus plantarum, entre otras.
La purificacin de cidos nuclicos es un requisito imprescindible para realizar diversas tcnicas de
biologa molecular. El mtodo clsico de purificacin se basa en el uso de disolventes orgnicos
txicos, siendo la extraccin mediante fenol/cloroformo la ms conocida. La purificacin salina
consiste en desempacar el ADN utilizando una alta concentracin salina en lugar de solventes,
garantizando su integridad mediante conservantes. El RNA presente se elimina mediante
tratamiento con RNAsa. Se eliminan las protenas y otros contaminantes celulares, por
precipitacin salina. Finalmente, el DNA genmico se asla mediante precipitacin en presencia de
alcohol y se disuelve en agua o en una solucin tamponada. Existen diversos mtodos para la
identificacin de bacterias, desde mtodos tradicionales como la tincin de Gram, hasta tcnicas
ms recientes que permiten el uso de marcadores moleculares para la caracterizacin e
identificacin de especies. En general, esto se da en cinco etapas principales: homogeneizacin del
tejido, lisis celular, separacin de protenas y lpidos, precipitacin y redisolucin del ADN. La
obtencin de un ADN es Un paso fundamental bacteriano de buena calidad. El mtodo CTAB
consiste en un procedimiento bsico para extraer ADN, donde un detergente aninico puede romper
la pared y producir la lisis celular, de esta manera purificar el ADN genmico de las bacterias.
Despus de aislar y purificar el ADN, se procede a verificar mediante electroforesis.
El termino electroforesis se refiere a una tcnica separativa que emplea un campo elctrico aplicado
que al actuar sobre las partculas cargadas causa su movimiento a travs de una matriz. Tiselius, fue
quien desarrollo el primer aparato sofisticado de electroforesis en 1937 (Premio Nobel 1948).
Tiselius introdujo el concepto de frente mvil, conocido ms tarde como electroforesis de zona y se
us para separar protenas en solucin [2]. A nivel de sus aplicaciones tcnicas, la electroforesis
permite saber la carga que poseen los polipptidos de la materia recombinante del ADN as como
separar los polipptidos resultantes de las variaciones que se hagan en laboratorio con el ADN
recombinante.
Una de las sustancias ms usadas en estos procesos es el Buffer TBE 5X, que es una solucin
amortiguadora compuesta por cido brico, EDTA y una tris base. En biologa molecular, el Buffer
TBE 5X es usado en procedimientos que involucren cidos nucleicos, como en la electroforesis.
Tiene la propiedad de mantener estable el pH de una disolucin frente a la adicin de cantidades
pequeas de cidos o bases fuertes.
Los fragmentos de ADN migran en direccin al polo positivo, una vez que tiene carga elctrica
negativa, conferida por la ionizacin de sus grupos fosfato. Despus de la migracin
electrofortica, todas las molculas de ADN del mismo tamao quedan agrupadas en una
determinada regin del gel y son visualizadas como una banda.

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El procedimiento puede dividirse en cuatro etapas: preparacin del gel, aplicacin de las muestras,
electroforesis y anlisis de los fragmentos separados.

2. MATERIALES Y MTODOS

2.1. Obtencin de las muestras:

Se emplearon siete bacterias catalogadas como acido lcticas, una conocida como
Lactobacillus plantarum y las otras identificadas en la Tabla 1; estas ltimas obtenidas por
aislamientos en diferentes lugares del municipio del Cauca.

Extraccin del ADN

Se emple un Mtodo de extraccin por solventes de Murray y Thompsom
llamado CTAB, mtodo de bromuro de Cetil-Trimetil Amonio con algunas
modificaciones.
Este mtodo requiere de seis soluciones: solucin de SDS 10% (Dodecil sulfato
de sodio), solucin de NaCl 5M, Solucin CTAB 10% (Bromuro de
Hexadeciltrimetilamonio), Tampn TE (Tris-EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 8.0 y 1 mM
EDTA, pH 8.0), Solucin stock de Tris-HCl 1M, pH 8.0 y Solucin stock de EDTA 0.5M,

pH 8.0; mtodos de preparacin ver en lnea

Tampn TE (Tris-EDTA, 10 mM Tris-HCl, pH 8.0 y 1 mM EDTA, pH 8.0)

Tabla 1. Equipos observados en el laboratorio de Biotecnologa

2. OBSERVACIONES Y RECOMENDACIONES

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En trminos de seguridad laboral, as

como el cumplimiento de la normativa, el
orden y la limpieza, algo muy importante
es la sealizacin. Todo lugar de trabajo
debe tenerla, pues es una herramienta
demasiado til para prevenir accidentes
laborales. En el laboratorio, por su misma
naturaleza y caractersticas, existen
riesgos que no pueden ser eliminados, la
sealizacin est destinada a indicarlos, y
es obligatorio que exista. El Manual de
Prevencin de Riesgos y Salud Laboral
en los Laboratorios de la Universidad de
Huelva, indica la sealizacin bsica de
seguridad y salud, comnmente se
observa como mnimo, seales para
indumentaria y lavado de manos; durante
la visita al laboratorio de biotecnologa de
la universidad del cauca, se observa que
no son muy notorias ni tampoco se
encuentran todas de acuerdo a los
parmetros existentes como indican
algunos manuales, la recomendacin que
se da, es iniciar un plan de sealizacin
basndose en estos.
Por otra parte, el etiquetado y rotulado de
cada equipo, rea, reactivos y materiales
es de vital importancia para evitar riesgos
y posible contaminacin cruzada. As
mismo espaciamiento entre los equipos y
para los trabajadores es un parmetro de
importancia a tener en cuenta, sin
embargo, puede observarse que el

laboratorio no cuenta con suficiente

espacio para cumplir con lo dispuesto en
el decreto antes mencionado. As mismo,
es necesaria una secuencia lgica entre
las reas y los equipos, por ejemplo; en el
laboratorio, al momento de ingresar al
cuarto oscuro, se observa que debido al
paso por el mismo, se expone a la luz por
momentos, lo cual por diseo pudo
haberse intervenido.
3. Bibliografa
[1]

Binder, Best Conditions for your succes

Binder, 2015. [En lnea]. Available:
https://www.binderworld.com/es/Productos/Incubadorasrefrigeradas/Seria-KB/KB-400.
[ltimo
acceso: 2 Septiembre 2016].

[2]

E. y. l. d. Colombia, 2015. [En lnea].

Available:
http://www.equiposylaboratorio.com/sitio/co
ntenidos_mo.php?it=1256. [ltimo acceso:
2 Septiembre 2016].

[3] A. d. pacfico, Anlitica del pacfico,

2016.
[En
lnea].
Available:
http://www.analiticadelpacifico.com/product
/exactive-plus-emr-orbitrap/.
[ltimo
acceso: 2 Septiembre 2016].

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