Você está na página 1de 64

ROTEIROS PARA AULAS PRTICAS

HISTOLOGIA GERAL
Tecidos: Epiteliais
Conjuntivos
Musculares
Nervoso

Roteiros HG Histologia Geral

Francisco Benedito Kuchinski


Jlio Fernandes

ROTEIROS PARA AULAS PRTICAS DE


CITOLOGIA (Biologia Celular)
HISTOLOGIA GERAL
HISTOLOGIA ESPECIAL
EMBRIOLOGIA GERAL

Francisco Benedito Kuchinski


Jlio Fernandes

ROTEIROS PARA AULAS PRTICAS DE

CITOLOGIA (Biologia Celular)

Roteiros TH Tcnicas microscpicas


Roteiros CT - Citologia (Clula eucaritica)

Francisco Benedito Kuchinski


Jlio Fernandes

ROTEIRO TH 01

INTERPRETAO TRIDIMENSIONAL
MACROSCOPICAMENTE

DE

CORTES

UNIDADES DE MEDIDAS EM MICROSCOPIA.


MATERIAL

Pecolo de mamona, ovos cozidos, limo ou laranja, abacate, faca


bem afiada

TCNICA

Cortes macroscpicos, em diferentes materiais

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Diferentes tipos de cortes de um mesmo material

PROCEDIMENTO: Faa cortes dos tipos: transversais, oblquos, longitudinais medianos e


excntricos e ainda tangenciais. Nos pecolos de mamonas, faa cortes em diferentes nveis. O
objetivo desses cortes permitir uma interpretao tridimensional a partir de fatias com duas
dimenses (a espessura desprezvel). O importante, que, trabalhando com estes pecolos
macroscpicos, voc pode confrontar o seu exerccio mental com a realidade desses cortes
(por exemplo, cortes de artrias, veias, ductos de glndulas excrinas, entre outros rgos).
Em relao aos demais materiais (limo, ovo cozido, abacate, faa os cortes indicados,
coloque-os uns ao lado dos outros e faa uma boa observao e comparao. Cortes de
limo/laranja sugerem macroscopicamente cortes de pores secretoras ( de adenmeros) das
glndulas excrinas. Ovos e abacate sugerem cortes de clulas (cuidado, ningum est
afirmando que o ovo de galinha e o abacate so clulas.....). Lembrar ainda que um corte
(seco) num plano mediano, um corte longitudinal no maior eixo separando o lado direito
do lado esquerdo. Seces (cortes) sagitais / planos sagitais so cortes paralelos ao plano
mediano. Uma seco (corte) vertical produzindo o plano frontal, separa a poro anterior da
posterior, portanto, um corte vertical em ngulo reto ao plano mediano. Cortes (seces)
transversais ocorrem no menor eixo, com base num ser humano, separa a poro superior da
inferior. Agora, observe um corte transversal de esfago, rgo tubular oco. Qual ser o
aspecto dessa fatia? Ser o de uma circunferncia, sem dvida: o contorno corresponder
parede do rgo e o interior, cavidade (luz) delimitada pela parede, pela qual transitam os
alimentos. Observe nesta parede, invaginaes de clulas epiteliais originando ductos de
glndulas. Notar que o corte no esfago foi transversal e voc observar o ducto da glndula
em corte longitudinal (vide figura abaixo). Raciocine sobre os dois cortes observados. Aps
cortar os materiais citados e observ-los macroscopicamente, faa sempre interpretaes
como so, em trs dimenses, os rgos seccionados e observados no MOC. NOTA:
Unidades de medidas usadas em microscopia: 1 Micrmetro (m) 1 = 0,001mm
(1mm dividido por 1000); 1 Nanmetro (nm) 1 nm = 0,001 (1m dividido por
1000); 1 Angstron () 1 = 0,1nm (1 nm dividido por 10).

Dividir os crculos abaixo em quatro partes e realizar os esquemas dos cortes em


apenas dois planos e no em trs planos (na forma tridimensional).

ROTEIRO TH 02

IDENTIFICAO DAS PEAS DO MICROSCPIO


PTICO COMPOSTO (MICROSCPIO DE LUZ)

MATERIAL

Microscpio ptico Composto (MOC)

PROCEDIMENTO: identificar no microscpio as peas pticas, que permitem o exame


de material invisvel a olho nu (o limite de visibilidade do olho humano de 0,2mm ou
200 m). Para o pleno funcionamento dessas peas pticas, o MOC dispe de vrios
dispositivos mecnicos. As peas pticas possuem vidros especiais denominados de
lentes. Essas peas so: oculares; objetivas; condensador e espelho plano-cncavo
(atualmente, substitudo pelo sistema iluminador). As peas mecnicas so: tubo ou
canho (de dimenses compatveis com as distncias focais da ocular e das
objetivas); revolver (cmbio das objetivas); brao ou estativo, parafusos macromtrico
e micromtrico de focalizao (correo de distncias focais); sistema Charriot de
mudana na disposio da lmina sobre a platina (sentidos verticais e horizontais);
platina ou mesa (suporte para a lmina); diafragma; filtro, parafuso do sistema
condensador (move o condensador, o diafragma e o filtro); base ou p do MOC.

ROTEIRO TH 03

MANUSEIO DO MICROSCPIO PTICO COMPOSTO


(MICROSCPIO DE LUZ).

MATERIAL

Microscpio ptico composto (MOC), lminas, lamnulas, letra


maiscula F, recortada de jornal, papel de filtro, frasco com gua e
pipeta (ou conta gotas). Rgua de plstico transparente.

Procedimento: ETAPA DA FOCALIZAO: 1. Ligar a fonte luminosa (verifique a voltagem


correta); 2. Abaixar a platina utilizando o parafuso macromtrico; 3. Colocar a lmina j
preparada sobre a platina (coloque sobre uma lmina, a letra F maiscula, utilize conta gotas
e coloque uma gota de gua sobre a letra F, a seguir coloque a lamnula sobre a preparao
com ngulo de 45. Para evitar a formao de bolhas de ar) ; 4. Utilize corretamente o
condensador e o diafragma para obter uma boa iluminao (s no aumento mximo de 1000 X
que h necessidade de luz total); 5. Focando (olhando) em direo platina, girar o parafuso
macromtrico para aproximar o material existente na lmina da objetiva de menor aumento
(4x). 6. Olhe pelas oculares e gire o parafuso macromtrico no sentido contrrio at obter a
imagem do material. Aps tal procedimento, gire o parafuso micromtrico para obter a
imagem bem ntida do material. Aps focalizao neste aumento, o que voc descobriu?
Consulte o professor para obter a resposta desta descoberta. 7. Para passar do aumento de
40X (ocular de 10 X e objetiva de 4 x) para o aumento de 100 X, gire o revolver para objetiva de
10 X e fazer o uso apenas do parafuso micromtrico. Repita tal procedimento para o aumento
de 400 X (gire o revolver para objetiva de 40 X e fazer o uso apenas do parafuso micromtrico).
Se for necessrio, conforme o material, se deve movimentar o sistema Charriot para ajuste do
material a ser observado. O que voc constatou nestes aumentos? 8. Para observao com a
objetiva de 100 X (objetiva de imerso), faa o seguinte procedimento: colocar uma gota de
leo de imerso sobre a lmina com o material (uma nica gota deve ser colocada sobre a
lamnula), a objetiva de 100 X deve ficar posicionada sobre a preparao, girar o parafuso
macromtrico at aproximao da objetiva no leo de imerso, mover agora apenas o
parafuso micromtrico para ajuste do foco. A lente da objetiva de imerso deve ser limpa logo
aps a observao, evitando que o mesmo seque e cause danos a lente da objetiva de
imerso. Ateno: neste exerccio prtico ainda no ser utilizada a objetiva de imerso. Os
objetivos desta aula (deste exerccio) so: 1. Treinar o aluno na utilizao do microscpio; 2.
Desenvolver a capacidade de observao para a verificao da proporcionalidade entre as
vrias estruturas observadas ( quanto maior o aumento, menor o campo de observao.
Entender que aumentar na microscopia chegar mais prximo do material). As operaes de
iluminao, focalizao, mudanas de objetivas, correo de iluminao, entre outros
procedimentos, transformam-se numa cadeia rotineira de reflexos, mais ou menos como
ocorre com as operaes que resultam na direo de um veculo, neste caso, a sequncia dos
trabalhos de suma importncia; assim sendo, oriente cada passo deste trabalho at adquirir
reflexos. Evite quebrar lminas utilizando o MOC, pois, as lentes das objetivas sero
danificadas.

Sobre o Limite de resoluo do MOC:

Tem como definio ser a menor distancia entre dois pontos que a objetiva do
microscpio consegue separar.

Calculo do limite de resoluo:


LR = k.
AN
Onde:
LR = o limite de resoluo
K = a constante (0,61)
= o comprimento de onda na faixa verde-amarelado da luz branca (0,55); e AN =
a abertura numrica.

O valor da abertura numrica aparece na objetiva:


Objetiva de 4x possui 0,10 de AN. Onde LR = 0,61x0,55 LR = 3,35m
0,10
Objetiva de 10x possui 0,25 de NA. Onde LR = 0,61x0,55 LR = 1,34m
0,25
Objetiva de 40x possui 0,65 de NA. Onde LR = 0,61x0,55 LR = 0,52m
0,65
Objetiva de 100x possui 1,25 de NA. Onde LR = 0,61x0,55 LR = 0,27m
1,25
Quanto maior a objetiva, maior o valor da abertura numrica e menor o valor
do limite de resoluo. Quanto menor o valor do limite de resoluo, com mais
nitidez que a objetiva consegue separar pontos prximos.

ROTEIRO TH 04

MICROMETRIA

MATERIAL

Microscpio ptico composto e rgua de plstico transparente

TCNICA

Cortes macroscpicos em diferentes materiais

OBSERVAR

A rgua nos aumentos de 40X, 100X e 400X

PROCEDIMENTO: para o exerccio de MICROMETRIA proceda assim: coloque sob a objetiva,


portanto, na platina, a rgua graduada e transparente. Voc observar a graduao da rgua.
Na microscopia ptica utiliza-se como unidade de medida, micrmetros. Sabe-se que um
milmetro dividido por 1.000 igual a 1m (um micromtrico a milsima parte do milmetro,
portanto, em 1mm h 1.000 m, em meio milmetro h 500 m). Quando voc muda para a
objetiva de 10x, o aumento ser de 100x e no campo observa-se apenas 1,5mm, logo, 1.500
m. Caso haja, por exemplo, uma clula arredondada ocupando todo o campo do microscpio,
seu dimetro ser igual a 1.500 m. Assim, voc conclui que ao mudar para o aumento de
400x, o campo foi reduzido em quatro vezes (o aumento era de 100x, voc mudou para 400x)
e a imagem observada ser outra: no aumento de 100 X, a clula hipottica era observada,
agora, no aumento de 400 X apenas o seu ncleo ser visto em sua totalidade. Qual ser sua
concluso sobre o tamanho deste ncleo? Resposta: no aumento de 100x, o campo igual a
1.500 m, no aumento de 400x o campo foi reduzido em quatro vezes, logo, a diviso 1.500
m por quatro ser igual a 375 m, portanto, esse ser o dimetro do ncleo. Faa os clculos
em micrmetros para saber qual ser o campo num aumento de 40x como tambm no
aumento de 400X e 1.000X.

ROTEIRO TH 05

Observao de clulas epiteliais e manuseio do MOC

MATERIAL

Esptula de madeira, lmina, lamnula, corante azul de


metileno ou violeta de genciana, pipeta (ou conta-gotas),
papel de filtro.

TCNICA

Tcnica da dissociao da mucosa oral (bucal)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Clulas epiteliais vistas de frente, de perfil, isoladas e


aglomeradas. Em todas as clulas, possvel identificar o
ncleo como uma esfera corada em azul escuro e de
posio central. O citoplasma aparece corado em azul
claro e com a presena de minsculas granulaes. Caso
formem bolhas de ar, estas sero observadas com
margens pretas.

PROCEDIMENTO: com a esptula, raspe suavemente a mucosa que reveste a bochecha, na


cavidade oral. Espalhe o material sobre o centro da lmina e acrescente uma gota do corante.
Segure uma lamnula com o polegar e o indicador da mo direita, de tal maneira que o ngulo
que contm o material seja de 45. Deixe a lamnula cair sobre o material, largando-a
bruscamente. Enxugue o excesso de corante com o papel de filtro.
.

ROTEIRO TH 06

Observao da cromatina sexual em clulas femininas

MATERIAL

Esptula de madeira, lmina, lamnula, corante orcena


actica pipeta (ou conta-gotas), papel de filtro.

TCNICA

Dissociao de clulas femininas da mucosa oral (bucal)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Cromatina sexual em 40 at 70% dos ncleos, geralmente


na periferia interna da membrana do ncleo

PROCEDIMENTO: raspe a mucosa oral com a esptula de madeira e coloque o material no


centro da lmina. Pingue rapidamente uma ou duas gotas de orcena actica sobre o material
coletado. Deixe corar por uns 10 minutos. Coloque ento a lamnula conforme orientao
dada, utilize dois pedaos de papel filtro grosso (entre a lmina e a lamnula) e pressione forte
a lamnula coberta com o papel de filtro com o polegar. Tome cuidado para no desloc-la
lateralmente. Observao: clulas femininas normais possuem caritipo representado por 44A
+ XX enquanto em clulas normais masculinas essa representao : 44A + XY.

ROTEIRO TH 07

Observao de clulas sanguneas anucleadas e


nucleadas (diferentes formas de ncleo) e de
fragmentos celulares (plaquetas). Prtica facultativa.

MATERIAL

Microscpio, lminas, lanceta, algodo, lcool 70%,


corante Leishman. (Opo para a Tcnica do Pantico),
papel de filtro, caixa de descarte, cuba para descarte de
lminas e leo de imerso.

TCNICA

Esfregao de sangue perifrico segundo Leishman.


Tcnica do Pantico.

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Glbulos vermelhos (hemcias ou eritrcitos), glbulos


brancos / leuccitos polimorfonucleados (neutrfilos,
eosinfilos e basfilos) e mononucelados (linfcitos e
moncitos). Plaquetas (trombcitos). Em neutrfilos de
clulas femininas possvel (A=1.000X) observar a
cromatina sexual (baqueta)

PROCEDIMENTO: 1. Faa assepsia digital na polpa do dedo mnimo da mo esquerda do


doador com soluo de lcool 70%). Com a lanceta, pique (perfure) a polpa interna da
falange do dedo mnimo, espere sangrar (presena da hemorragia), utilize, se possvel a
segunda gota de sangue, colocando-a na extremidade da lmina. Faa com uma segunda
lmina, o procedimento do esfregao. Ao levar a segunda lmina at a gota de sangue, por
capilaridade, o sangue escorre na borda desta lmina (entre a bordo apical da lmina de
esfregao e a primeira lmina, a que voc colocou a gota. Faa o esfregao da direita para a
esquerda e com movimento normal (nem rpido, nem lento demais), conforme esquemas
abaixo. No volte com a lmina. Faa o preparo de duas lminas. Deixe o sangue distendido
secar. A colorao dever seguir os seguintes passos: 1. A lmina deve ficar (permanecer) num
suporte numa cuba ou na pia. 2. Cobrir o esfregao com o corante Leishman por cinco
minutos ( o lcool do corante o fixador e o eosinato cora estruturas bsicas, como o
citoplasma e o azul de metileno cora estruturas cidas como o ncleo. 3. Gotejar gua
destilada sem tirar o corante, com uso da pipeta e/ou conta gotas por sete minutos. 4.
Escorrer e lavar com gua destilada; 5. Deixar o esfregao secar ao ar ambiente. 6. Aps
secagem da lmina, observe-a no aumento de 1000 X utilizando leo de imerso (no use
lamnula). 7. Observe glbulos vermelhos em maior nmero e glbulos brancos, em roxo e em
menor nmero. Nota: Tcnica de esfregao (extenso) para sangue perifrico, segundo
Leishman ( a mistura de ROMANOWSKY = eosina + azul de azul de metileno + azur de
metileno, que o azul de metileno oxidado. Na tcnica de PANTICO para esfregao de
sangue, so trs os corantes utilizados: corante I soluo de triarilmetano 0,1% ( tempo de
10 segundos); corante II soluo de xantenos 0,1% (tempo de 8 segundos) e corante III,
soluo de tiazinas 0,1% (tempo de 5 segundos). Aps essas passagens pelos corantes, s
deixar secar e observar as clulas sanguneas.

ROTEIRO TH 08

Observao de clulas epiteliais (clulas do fgado ou


hepticas ou hepatcitos) e manuseio do MOC

MATERIAL

Microscpio, lmina de fgado previamente preparada e


do acervo da Instituio, leo de imerso.

TCNICA

Tcnica da Hematoxilina e Eosina (H&E)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Clulas hepticas mononucleadas e binucleadas. Ncleo,


nuclolo e grnulos de cromatina. Esquematizar apenas
duas ou trs clulas no aumento de 400X ou de 1.000X.

PROCEDIMENTO: Conforme aulas anteriores, inicie a observao manuseando corretamente


o microscpio. Aps colocar a lmina na platina, observe nos aumentos de 40 X, 100 X e 400 X.
Identifique os ncleos em roxo e como estruturas arredondadas. No seu interior possvel
identificar o nuclolo e os grnulos de cromatina (DNA + protena histona). O citoplasma
encontra-se corado em rseo pela ao da eosina, pois, trata-se de uma estrutura alcalina
(base), portanto, possui afinidade pelo corante cido (eosina). O corante hematoxilina
quimicamente base (alcalino), logo, evidencia estruturas celulares de natureza qumica cida,
como o ncleo. Pode-se afirmar que o ncleo apresenta basofilia celular enquanto o
citoplasma eosinofilia (acidofilia) celular. Com aumento de 1.000 X (utilize apenas uma gota de
leo de imerso) faa o esquema de dois cordes de clulas hepticas com seus detalhes.

ROTEIRO TH 09

Identificao de componentes celulares com o uso do


mesmo material (fgado), corado por tcnicas
diferentes.

MATERIAL

Microscpio e lminas de fgado

TCNICA

Tcnicas: H&E Hematoxilina e Eosina


H +PAS Hematoxilina e cido Peridico + reativo de
Schiff

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Clulas hepticas com aumento de 400 X pela tcnica do


H&E e pela tcnica do H+PAS (ncleo e glicognio).

PROCEDIMENTO: Sempre inicie suas observaes utilizando o menor aumento do MOC, isto
, utilize de incio a objetiva que aumenta 4 X, logo o aumento inicial ser de 40 X. Mude de
objetiva, utilize agora a que aumenta 10x. Neste aumento de 100 X voc ao observar a lmina
corada por H&E identificar o ncleo em roxo e o citoplasma na colorao rseo. Algumas
clulas do fgado (clulas hepticas ou hepatcitos) so binucleadas (apresentam dois
ncleos). Utilize tambm o aumento de 400 X, voc observar grnulos de cromatina e
nuclolo bem evidente no ncleo dos hepatcitos. Faa o mesmo procedimento com a lmina
corada por H + PAS, utilizando os mesmos aumentos. Voc no observar o ncleo to
evidente, porm, constata que a colorao do citoplasma diferente, pois, no foi utilizada a
eosina, que cora o citoplasma. Na colorao do H+PAS, h grnulos de colorao vermelho
magenta, os quais correspondem ao glicognio evidenciado pelo PAS, da, a utilizao da
afirmao PAS+. O principal objetivo deste exerccio o de fazer voc perceber que um dado
mtodo de colorao usado para mostrar certos pormenores das clulas; j outros mtodos
podem no ter a mesma finalidade. Ateno: voc no deve memorizar cores, mas sim as
estruturas das clulas e dos tecidos. Na lmina corada pelo H&E, as reas claras (transparentes
no citoplasma) correspondem a imagem negativa do glicognio.

ROTEIRO TH 10

Ao enzimtica da catalase e fatores que atuam na


ao enzimtica (temperatura e pH).

MATERIAL

Batata inglesa, fgado de boi, lminas de barbear ou


estilete, gua oxigenada, vinagre, fonte de calor, tubos de
ensaio, pina de madeira, suporte e pegadores de tubos
de ensaio.

TCNICA

Experimento laboratorial

OBSERVAR

Efeito do pH e da temperatura

PROCEDIMENTO: o trabalho dever ser realizado em equipes. Cada equipe dever cortar
com auxlio da lmina de barbear ou estilete, fragmentos de batata e de fgado com
aproximadamente 1 cm de aresta. Coloque em tubo de ensaio, 3 cm3 de gua oxigenada (tubo
controle). Coloque em outro tubo de ensaio, 3 cm3 de gua oxigenada, adicionando um pedao
de fgado; verifique o efeito. Constate o oxignio desprendendo-se. No terceiro tubo de
ensaio, coloque a mesma quantidade de gua oxigenada mais um pedao de batata; verifique
o efeito. Concluso: pela ao da enzima catalase, a gua oxigenada desdobra-se em gua e
oxignio. Coloque agora no tubo controle pedaos de fgado e num outro tubo 3 cm 3 de gua
oxigenada e de vinagre. Observe e compare o que ocorreu (efeito do pH). Num outro tubo de
ensaio, coloque gua de torneira e um pedao de fgado e leve a fervura por alguns minutos. A
seguir, o pedao de fgado deve ser colocado em outro tubo de ensaio, com 3 c m 3 de gua
oxigenada. Oberve o efeito (efeito temperatura). Responda em equipe: Qual o efeito do
vinagre sobre a ao enzimtica; por que, com o fgado cozido, no houve reao enzimtica?
O que pH? Nota: a catalase uma enzima que fica localizada no interior dos peroxissomos.
RESPOSTAS:
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________

ROTEIRO CT 01

Membrana impregnada por sais de prata

MATERIAL

Mesotlio nitratato (Epitlio simples pavimentoso)

TCNICA

Impregnao Argntica AgNO3

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 100 X e 400 X observe contornos irregulares


delimitando espaos claros. Esses contornos so depsitos de
sais de prata que se precipitam sobre a membrana plasmtica,
enquanto os espaos claros correspondem ao meio intracelular
no evidenciado pela tcnica.

Observao: a membrana plasmtica imperceptvel na microscopia ptica, possui espessura


de 7,5 at 10 nm (ou 60 at 100 angstroms). Na microscopia eletrnica vista como duas
camadas escuras e separadas por um espao claro entre elas. Ao nvel molecular apresenta-se
na forma de bicamada lipdica com protenas suspensas (mosaico fluido). H tambm nesta
membrana molculas de colesterol. As protenas globulares a presentes so classificadas em
protenas integrais e perifricas. As protenas integrais criam canais por onde transitam outras
molculas, canais estes que podem ser seletivos e que so portadores de poros (aqui ocorre a
passagem de gua sem resistncia). As protenas globulares formam outras protenas que so
denominadas de perifricas, presentes tanto externamente como internamente na membrana
plasmtica. As perifricas internas apresentam limitaes de movimentos, pois, encontram-se
ligadas ao citoesqueleto celular, j as perifricas externas ligam-se aos lipdios (glicolipdios) e
aos acares (glicoprotenas). As glicoprotenas formam o glicoclix, o qual possui duas
categorias de molculas: uma de adeso celular (CAMs) e outra atuando como receptor de
membrana. Um receptor de membrana pode ser, portanto, uma glicoprotena e/ou uma
protena simplesmente integral. Os receptores de membrana so importantes, pois, realizam o
reconhecimento celular (entre as clulas) sinalizao celular (resposta imune mediada por
clulas linfcito do tipo T), tambm auxilia microrganismos a reconhecerem s clulas alvo. A
sinalizao qumica tambm relaciona-se com os receptores. Este tipo de sinalizao ocorre na
ao dos hormnios, dos neurotransmissores e dos ligantes, tipo de mensageiro qumico que
pode alterar o metabolismo celular. Alguns ligantes so enzimas.

ROTEIRO CT 02

Especializaes da membrana plasmtica: clios,


flagelos, microvilos (borda estriada ou em escova) e
estereoclios.

MATERIAL

Vias
respiratrias
e
tuba
uterina/oviduto
(clios);
Espermatozide e organismos patognicos (flagelo); Intestino
delgado: duodeno e jejuno-leo (microvilos ou microvilosidades);
Epiddimo
(estereoclios);
epiderme
(tonofibrilas
/
tonofilamentos)

TCNICA

H&E, Azul de Metileno (espermatozides) e Azul de


Toluidina para tonofilamentos

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com 400 X, clios, flagelos, microvilos e estereoclios.

Observao: Clios e flagelos so extenses da membrana plasmtica. So mveis


e com funes diferentes. Os clios movimentam partculas, bactrias, muco e o ocito
fecundado enquanto o flagelo aderido clula realiza sua movimentao. Clios
possuem de comprimento 10 m enquanto o flagelo de 60 m. Ambos relacionam-se
com o citoesqueleto, apresentam nove pares de microtbulos que rodeiam um par
central. Originam-se de um par de centrolos, os corpsculos basais, de localizao
perifrica na clula. Crescem a partir destes corpsculos. Microvilosidades so
projees da membrana plasmtica para o lmen do rgo. Cada clula absortiva
intestinal apresenta em mdia trs mil microvilosidades. A funo de absoro,
tamanho mdio: comprimento 1 m e dimetro 0,1 m. Os estereoclios so microvilos
longos e ramificados do epitlio pseudo estratificado colunar estereociliado deste
ducto extratesticular que o ducto epididimrio. Os tonofilamentos no MOC so
prolongamentos celulares localizados nos desmossomos (so de queratina e com
funo de adeso celular).

ROTEIRO CT 03

Permeabilidade da membrana plasmtica

MATERIAL

Microscpio, lminas, lamnulas, pipetas e solues hipo e


hipertnicas de sacarose e de cloreto de sdio, gua
destilada e epiderme da planta Tradescantia sp ou Rhoeo
discolor

TCNICA

Ruptura, destacando a epiderme inferior da folha (ser


rasgada)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumentos de 40 X e de 100 X as modificaes que


ocorrem na clula em meios hipo e hipertnico.

Observao: A membrana plasmtica semipermevel. A planta utilizada possui o


pigmento antociana (roxo) dentro dos vacolos das clulas epidrmicas, cuja cor
auxilia na observao do experimento (de plasmlise). Em meio hipertnico a gua sai
da clula, do vacolo (plasmlise) e caracterizado pela menor quantidade de
antociana no vacolo, j em meio hipotnico, a gua entra na clula, no vacolo
(deplasmlise) e caracterizado pela maior quantidade deste pigmento no vacolo.
Tal experimento pode ser realizado com glbulos vermelhos (hemcias), cuja
morfologia em meio isotnico a de um disco bicncavo e em meio hipertnico, de
forma crenada. interessante aplicar os conhecimentos tericos do transporte passivo
(difuso simples, difuso facilitada e osmose) e do transporte ativo.

ROTEIRO CT 04

Basofilia Celular (Retculo Endoplasmtico Granular


ou Rugoso REG ou RER) e Incluso de Protenas

MATERIAL

Pncreas

TCNICAS

Gallocianina e H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X, por Gallocianina, basofilia celular


(REG) no polo basal das clulas acinosas pancreticas,
ncleo e nuclolo e por H&E: basofilia celular, ncleo,
nuclolo e incluso de zimognio (protena) no polo apical.

PROCEDIMENTO: Observe inicialmente a lmina corada por H&E, no menor aumento,


verificando o aspecto geral do rgo: lbulos pancreticos separados por tecido conjuntivo
com vasos, nervos e ductos excretores. O pncreas uma glndula mista com funes
excrina (produz o suco pancretico) e endcrina (produz hormnios). O que nos interessa no
momento a poro excrina, constituda por clulas epiteliais acinosas serosas, secretoras de
protenas. Essas clulas so basfilas devido predominncia do REG, os ncleos so
arredondados com nuclolo bem visvel. Essa basofilia caracterizada pela colorao azulada,
a qual se encontra localizada no polo basal da clula acinosa. No polo oposto, no apical, ocorre
uma colorao avermelhada (eosinofilia e/ou acidofilia celular) que caracteriza a presena da
incluso da protena que constitui o suco pancretico (zimgeno ou zimognio). O Retculo
endoplasmtico (RE) que possui ribossomos REG ou RER e o que no possui o REAgranular
ou Liso REAg ou REL. So funes do RE: transporte e armazenamento de materiais, sntese
de lipdios, de carboidratos e de protenas pelos ribossomos do REG. Os ribossomos so
partculas de 20 at 30 nm constitudos por quatro tipos de RNAr e por oitenta protenas. H
tipos diferentes de ribossomos em clulas procariontes, cloroplastos, mitocndrias e de clulas
eucariontes. Ribossomos unidos por uma molcula de RNAm constituem polirribossomos. No
REG ou RER ocorrem os polirribossomos, os quais conferem a basofilia celular para este tipo de
RE. Os ribossomos so os locais onde ocorre a sntese de protenas.

ROTEIRO CT 05

Complexo de Golgi

MATERIAL

Epiddimo

TCNICA

Impregnao Argntica AgNO3 (Tcnica de Aoyama)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X, Complexo de Golgi visto no MOC


por tcnica Citoqumica.

PROCEDIMENTO: O epiddimo um ducto genital extratesticular e se constitui num nico


tubo enovelado (enrolado) cujo comprimento total pode superar 5 metros. A parede deste
tubo possui os tecidos epitelial, conjuntivo e muscular do tipo liso. Na luz ou lmen do tbulo
epididimrio esto localizados os espermatozides que foram produzidos nos testculos. As
seces nos ductos apresentam-se circulares, elpticas ou com outras formas. As clulas
epiteliais constituintes destes ductos apresentam os estereoclios, os quais esto voltados para
o lmen do tubo, local da existncia dos espermatozides. Estas clulas epiteliais que
revestem internamente o ducto epidimrio apresentam grande desenvolvimento do Complexo
de Golgi, o qual se caracteriza na microscopia eletrnica como uma rede tubos ou sacos
achatados, empilhados uns sobre os outros com funo de armazenamento e embalagem de
material a ser secretado para o citoplasma ou para o meio extracelular. O Complexo de Golgi
tambm origina as organelas denominadas de lisossomos. No MOC, o Complexo de Golgi ser
observado na forma de precipitaes escuras (pretas) no polo apical, tendo logo abaixo o
ncleo de colorao cinza azulada.

ROTEIRO CT 06

Observao
hidrolticas)

de

Lisossomos

(de

suas

enzimas

MATERIAL

Rim

TCNICAS

Gomori (Fosfatase alcalina) e Hlt (Fosfatase cida)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X enzimas presentes nos


lisossomos

PROCEDIMENTO: Os rins so rgos responsveis pela homeostasia do organismo, filtram o


sangue produzindo a urina e tambm produzem hormnios. Apresentam quando seccionados
uma poro central (regio medular) mais clara e outra mais externa (regio cortical) menos
clara. As tcnicas utilizadas so citoqumicas / histoqumicas. A enzima fosfatase alcalina por
Gomori ser observada no interior das clulas renais da poro mais externa (cortical) na
colorao preta, trata-se de colorao especfica (seletiva) para tal tipo de enzima, porm,
clulas renais e seus respectivos ncleos sero palidamente observados. J a enzima fosfatase
cida por Hlt tambm ser observada na regio cortical, na forma de grnulo castanho escuro
e no sero perceptveis demais componentes celulares, pois, trata-se tambm de corante
seletivo. No microscpio eletrnico de transmisso os lisossomos so observados como
vesculas eltron densas. So funes dos lisossomos: digesto de materiais absorvidos e
autlise. NOTA: os peroxissomos so vesculas que tambm armazenam enzimas (peroxidases
e catalases) e abundantes nas clulas hepticas e renais. A enzima peroxidase realiza oxidao
de compostos orgnicos e de radicais livres produzindo o perxido de hidrognio enquanto a
catalase realiza a reduo deste perxido (gua oxigenada) em gua mais oxignio.
Provavelmente, os peroxissomos se originam quando se dividem em suas metades.

ROTEIRO CT 07

Mitocndrias

MATERIAL

Fgado

TCNICA

Impregnao argntica AgNO3 (Tcnica de Polak)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X e/ou 1.000 X o estroma heptico


(citoplasma amarelado) com grnulos de colorao
castanho escuro (so as mitocndrias)

PROCEDIMENTO: A tcnica em uso citoqumica / histoqumica, ela no objetiva aspectos


morfolgicos como os lbulos hepticos, portanto, do tipo seletiva. Consulte os roteiros TH
08 e TH 09. Com pequeno e mdio aumento se constata a presena de um estroma amarelado,
pois, no perceptvel a observao polidrica das clulas hepticas (elas perdem seu
contorno devido tcnica). Caso utilize o aumento mximo, pingue uma gota de leo de
imerso. Com o aumento de 400 X j possvel a observao de minsculas partculas coradas
em castanho escuto. Cada uma dessas partculas corresponde a uma mitocndria vista no
MOC. Podem aparecer pequenas esferas (esfrulas) as quais correspondem aos ncleos de
clulas hepticas e mesmo hemcias (glbulos vermelhos). Na microscopia eletrnica de
transmisso as mitocndrias estruturalmente apresentam duas membranas, uma externa lisa
e outra interna com as cristas para aumentar a rea de superfcie, alm da matriz mitocondrial.
Podem ter vrias formas e sua funo a produo do trifosfato de adenosina (ATP) da
respirao celular.

ROTEIRO CT 08

Incluso de lipdios (imagem negativa)

MATERIAL

Pele (hipoderme)

TCNICA

H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X clulas adiposas (adipcitos ou


lipcitos) que formam o tecido adiposo.

PROCEDIMENTO: Aps explicaes dadas pelo professor, observe cuidadosamente a lmina


macroscopicamente, visando sua colocao correta na platina (ou mesa do MOC), para que o
tecido epitelial (epiderme) da pele fique posicionado em primeiro plano. Para tanto, a poro
mais clara na lmina corresponde hipoderme e a mais corada epiderme e derme, portanto,
a colocao da lmina na platina deve ser feita com a poro mais corada voltada para o aluno,
logo, a poro mais clara ficar oposta ao aluno. Com o menor aumento (40 X) faa uma
observao global do material (pele) e localize a hipoderme. Movimente o sistema Charriot e
posicione a hipoderme para ser observada em outros aumentos (100 X e 400 X). Nestas clulas
adiposas, medida que ocorre o armazenamento de gordura, ocorre o deslocamento do
citoplasma e do ncleo para a periferia da clula. O ncleo inclusive fica achatado. O
citoplasma ser observado em rseo e o ncleo em roxo. Fios rseos (eosinfilos) mais
espessos correspondem s fibras colgenas. Devido ao uso de lcool e xilol na tcnica do H&E
(materiais que so includos em parafina), a gordura foi dissolvida e removida no curso da
preparao da lmina, da, a denominao de imagem negativa de lipdios (de gordura). Nota:
quando o material for fixado pelo mtodo de congelao e tratado com corante especfico, por
exemplo, o SUDAM III, a base de cido smico, a gordura permanece na clula adiposa e
revelada no MOC na colorao castanho. As incluses localizam-se em vesculas, em vacolos
e/ou na forma de gotas lipdicas. A funo geral das incluses representada por: estocagem
de material produzido e/ou absorvido pela clula e transporte de substncias.

ROTEIRO CT 09

Incluso de melanina (incluso endgena)

MATERIAL

Pele fina

TCNICA

H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X, grnulos de melanina no interior


de melancitos como tambm no interior de seus
prolongamentos e nas clulas epidrmicas

PROCEDIMENTO: A melanina um pigmento marrom escuro, produzido pelas clulas


denominadas de melancitos (so clulas epiteliais) que se localizam na epiderme, na coride
do globo ocular e nas papilas dos folculos pilosos. Nesta lmina a melanina pode ser
observada tanto na epiderme como nas papilas dos folculos. Focalize a lmina, com aumento
de 40X localize a epiderme e posteriormente papilas de folculos pilosos. Passe para aumento
de 100 X e posteriormente para aumento de 400 X e observe na epiderme e/ou em alguma
papila grnulos de melanina que aparecem bem escuros (marrom amarelado). A melanina
possui funo protetora contra os raios UV. Tambm responsvel pela colorao da pele com
o pigmento caroteno. Alm destes dois fatores que agem na colorao da pele h outros como
a quantidade de capilares sanguneos. A sntese da melanina dependente da enzima
tirosinase produzida no REG, a qual enviada ao Golgi e deste para o citoplasma em vesculas
denominadas de melanossomos I. Uma vez presente no citoplasma o aminocido tirosina,
sofre ao da enzima tirosinase. Tirosina + tirosinase constituem os melanossomos dos tipos II
e III. A inexistncia da tirosinase no melanossomo III j caracteriza o grnulo de melanina. Os
grnulos se localizam nos prolongamentos dos melancitos e no interior das clulas
epidrmicas denominadas de queratincitos. Lisossomos dos queratincitos destroem tais
grnulos. No albinismo no ocorre a sntese da melanina, por estar ausente a enzima tirosinase
(fator hereditrio) ou pela incapacidade de absoro do aminocido tirosina pelo melancito.
A deficincia na produo do hormnio cortisol pela glndula endcrina supra renal causa a
produo excessiva do hormnio ACTH pela glndula hipfise, promovendo maior produo
de melanina.

ROTEIRO CT 10

Incluso de Bilirrubina (incluso exgena)

MATERIAL

Fgado e/ou Fgado com esteatose heptica

TCNICA

H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X incluso de bilirrubina na


colorao amarelo alaranjado dentro e fora das clulas.

PROCEDIMENTO: A bilirrubina um pigmento resultante da degradao da protena


hemoglobina (Hb) pelos macrfagos do bao. Glbulos vermelhos (eritrcitos ou
hemcias)apresentam no seu interior a Hb. A Hb um protena conjugada com ferro com
funes no transporte de oxignio e de dixido de carbono. As hemcias possuem vida mdia
de 90 at 120 dias. A destruio (processo denominado de hemocaterese) destas clulas
ocorre no rgo bao. Esse pigmento cai na corrente sangunea e capturado pelos
hepatcitos (clula do fgado) e utilizado para a fabricao por parte destas clulas, da bile,
tipo de secreo cida que ser armazena na vescula biliar (ateno: quem produz a bile o
fgado e no a vescula biliar). Quando da presena de problemas hepticos, como na
esteatose, hepatites entre outras, essa bilirrubina se acumula no fgado e tambm em outras
partes do organismo (caso da ictercia, caracterizado pelo aumento de bilirrubina lipossolvel
no organismo). Especificamente, a bilirrubina insolvel em gua, porm, no REG dos
hepatcitos ocorre a sntese da enzima glucoronil transferase a qual promove a conjugao da
bilirrubina com glucuronato de bilirrubina no REAg ou REL, formando assim um composto
solvel em gua, que ser excretado, caso contrrio, ocorre o seu aumento promovendo a
ictercia. Muitas so as causas da ictercia (desde a incapacidade dos hepatcitos de
absorverem a bilirrubina lipossolvel, ausncia de enzima, no excreo para o canalculo biliar
do glucoronato, clculos biliares e at tumores hepticos).

ROTEIRO CT 11

Pigmento corado Hemossiderina (Ferro inico)

MATERIAL

Bao

TCNICA

H&E + Pearls

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X o pigmento hemossiderina em


azul no interior de macrfagos no rgo linfoide bao.

PROCEDIMENTO: O bao o maior rgo linfoide do organismo, possui morfologia


semelhante a uma lngua e se encontra do lado esquerdo do abdome e fica interposto na
circulao sangunea e responsvel pelo processo de destruio das hemcias
(hemocaterese), pela produo de linfcitos (tipo de glbulo branco / leuccito) e pela
filtrao da linfa. Seu maior constituinte o tipo celular denominado de linfcito, os quais se
renem e constituem ndulos ou folculos linfoides. Estes ndulos em conjunto formam a
polpa branca do bao sendo que as demais estruturas deste rgo constituem a polpa
vermelha. Portanto, o bao apresenta funo linftica e hematolgica. No menor aumento (40
X) identifique estruturas arredondas (ndulos linfticos); com o aumento de 100 X j
possvel observar enorme quantidade de ncleos de linfcitos (pontos roxos com nuclolo e
cromatina), bem mais visveis no aumento de 400 X. Neste mesmo aumento possvel
diferenciar pontos roxos que so os ncleos dos linfcitos e reas de colorao roxa com azul
claro, as quais correspondem aos macrfagos contendo o ferro inico (hemossiderina)
revelado pelo corante Pearls na colorao azul claro. O bao externamente possui uma
cpsula fibrosa representada por fibras colgenas (protena) e por fibras musculares lisas. Essa
cpsula envia septos para o interior do rgo nos quais h vasos sanguneos, nervos e tecidos
muscular liso. importante saber neste momento que quando ocorre contraes desta
musculatura lisa o sangue expulso do interior do bao de volta circulao, portanto, o bao
tambm um rgo armazenador de sangue.

ROTEIRO CT 12

Incluso de Carboidrato (incluso do polissacardeo


glicognio)

MATERIAL

Fgado

TCNICA

Hematoxilina + cido Peridio com Reativo de Schiff (H+PAS)

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X, clulas hepticas, ncleos destas


clulas e glicognio na colorao vermelho magenta.

PROCEDIMENTO: Com o aumento menor (40X e 100 X) faa uma observao geral do material
e escolha uma boa rea para observao com aumento de 400 X. Os hepatcitos formam
cordes celulares, procure observar grnulos de colorao vermelho magenta (prpura) os
quais correspondem ao glicognio (tipo de polissacardeo) no interior dos hepatcitos, alm do
ncleo, nuclolo e da cromatina. Um carboidrato constitudo por carbono, hidrognio e
oxignio (CHO), com hidrognio e oxignio na mesma proporo que a gua dois para um. A
frmula molecular da gua H2O e do acar glicose que um carboidrato C6H12O6. So
molculas usadas para energia, armazenamento de energia entre outras estruturas celulares.
Monossacardeos apresentam de trs a sete tomos de carbono em uma cadeia ou anel. A
glicose possui seis carbonos, logo um acar hexose e ribose e a desoxirribose,
respectivamente do RNA e do DNA possuem cinco carbonos, portanto, so pentoses. Nas
frutas ocorre o acar frutose com a mesma frmula molecular da glicose, porm, possui a
disposio dos tomos diferentemente na molcula. Quando dois monossacardeos se unem
formam um dissacardeo e liberam gua, tal reao qumica se denomina sntese por
desidratao. Exemplo clssico a formao da sacarose a partir da unio de uma glicose com
uma frutose. Nas clulas ocorrem reaes similares de snteses visando a construo de
molculas para vida celular, processo que denominado de anabolismo. Quimicamente, a
sacarose quando decomposta na gua em monossacardeos, afirma-se que a reao de
hidrlise. Nas clulas tambm ocorrem reaes de decomposio visando a liberao de
energia contida nas ligaes entre os tomos. A decomposio dos nutrientes provenientes
dos alimentos e o catabolismo. Polissacardeos so combinaes de muitos monossacardeos
com liberao de gua. Os polissacardeos apresentam funo estrutural e de armazenamento
de energia. O glicognio armazena combustvel nos tecidos do corpo (fgado, msculos).

ROTEIRO CT 13

Clula caliciforme (tipo de clula epitelial glandular) e


muco

MATERIAL

Traquia

TCNICA

H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X clulas caliciformes da mucosa


traqueal contendo muco

PROCEDIMENTO: Geralmente a lmina que contm a traqueia possui tambm o rgo


esfago. Observe macroscopicamente para diferenciar um rgo do outro. Na traqueia,
macroscopicamente, possvel observar um semianel em azul ( a cartilagem hialina deste
rgo). O lmen (a luz) da traqueia por onde circula o ar arredondado, ocorrendo o oposto
no lmen do esfago (este rgo possui paredes colabadas / aderidas). Vide roteiro CT 02. As
clulas caliciformes so encontradas nas vias respiratrias, exceto nos pulmes; no intestino
delgado e grosso como tambm na tuba uterina / oviduto. So clulas secretoras de muco
(glicoprotenas) com alta taxa de polissacardeos, logo, do reao PAS positiva (PAS+). Pela
tcnica do H&E so reveladas na colorao bem clara e intercaladas com clulas ciliadas de
revestimento. J na tcnica de tricrmico de Masson com aldedo fucsina, so clulas com
tonalidades de roxo e as de revestimento com os clios se apresentam na colorao
avermelhada. A morfologia destas clulas a de um clice, da a sua denominao. O muco
localiza-se superficialmente e logo abaixo deste fica o ncleo alongado e roxo. O microscpio
eletrnico revelou que o polo basal desta clula bem estreito e contm REG e mitocndrias,
mais acima, deste polo se localiza o ncleo achatado tambm envolto por RER e por
mitocndrias. No polo apical localiza-se o Complexo de Golgi que libera os grnulos de
secreo para o meio externo. Cerca de 50% ou mais do volume desta clula representado
pelos grnulos de secreo com glicoprotenas. A sntese de protenas ocorre na base da
clula, local do REG. Monossacardeos so acrescentados s protenas tanto no RE como no
Golgi. O muco ao ser secretado (eliminado da clula) bem hidratado (tipo de secreo
viscosa, elstica e lubrificante). bom no confundir clulas caliciformes produtoras de muco
com outras clulas epiteliais que no so caliciformes e produzem muco, como clulas das
glndulas do excrinas do esfago, do colo uterino (muco cervical) e da mucosa gstrica.

ROTEIRO CT 14

Observao de miofibrilas em fibras musculares.


Citoesqueleto celular (miofilamentos de actina e
miosina).

MATERIAL

Lngua

TCNICA

Hematoxilina Frrica HF

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 1.000 X miofibrilas contradas e


relaxadas

PROCEDIMENTO: Aps explicaes dadas pelo professor, observe no menor aumento (40 X) a
lmina de lngua seccionada transversalmente e corada por HF. Externamente, a lngua
apresenta tecido epitelial de revestimento, tendo logo abaixo uma pequena rea clara de
tecido conjuntivo. O maior volume da lngua representado por tecido muscular estriado
esqueltico, tipo de msculo de contrao voluntria. Neste mesmo aumento, possvel
diferenciar a poro dorsal da lngua, a qual apresenta diversas elevaes, as papilas linguais.
Tambm possvel observar tubos seccionados de forma transversal, oblqua, longitudinal e
at oblqua, so vasos sanguneos. Com o aumento mdio de 100 X, procure diferenciar feixes
de fibras musculares seccionadas longitudinalmente e transversalmente. Neste aumento,
posicione-se com ajuda do sistema Charriot nos feixes longitudinais e passe para o aumento de
400 X. Obverve agora os ncleos com nuclolo e cromatina (pontos escuros) que se
posicionam externamente na clula muscular estriada esqueltica que alongada, da a sua
denominao de fibra muscular. Tambm neste aumento j possvel detectar estriaes
claras (bandas I) e escuras (bandas A) ao longo das miofibrilas no interior da fibra muscular.
Passe para o aumento de 1.000 X e utilize o leo de imerso. Oberve com este aumento que
h miofibrilas contradas e outras relaxadas. Na banda I s ocorre o filamento fino de actina
enquanto na banda A existe miofilamentos de actina e de miosina. Na miofibrila contrada no
se observa a faixa ou banda H da banda A, esta s ocorre na miofibrila relaxada ou em
repouso.

ROTEIRO CT 15

Ncleo interfsico e Citoplasma

MATERIAL

Fgado

TCNICA

H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 1.000 X, ncleo, nuclolo, grnulos de


cromatina

PROCEDIMENTO: Inicie corretamente o manuseio do microscpio. Utilize leo de imerso e


identifique ncleos interfsicos em clulas hepticas (hepatcitos). A clula heptica por ser
muito verstil pode ser mono e binucleada. O ncleo ou os ncleos so esfricos e roxos, de
localizao central, nesta clula de forma polidrica. O ncleo foi evidenciado pela
Hematoxilina e o citoplasma pela Eosina, em rseo. O ncleo o coordenador geral da clula,
possui todas as informaes genticas para o correto funcionamento metablico como
atividades de sntese de protenas - transcrio do DNA e da reproduo celular - replicao
do DNA (estgio S). Possui uma dupla membrana com lamelas interna e externa, esta ltima
contnua como REG ou RER. H poros nesta membrana a qual tambm denominada de
envoltrio e possui funo se separar o ncleo do citoplasma, permitindo tambm a entrada e
sada de molculas do ncleo. Num ncleo interfsico h cromatina (eucromatina e
heterocromatina) a qual constituda por DNA e por protenas histonas. Quando ocorrer a
condensao da cromatina constituem-se os cromossomos, porm, o ncleo j no mais
interfsico mittico (a clula se encontra em reproduo mitose / meiose). O ncleo
interfsico h estgios metablicos distintos, caracterizados pelos estgios G1, S e G2. O DNA
regula a sntese de protenas entre outras atividades metablicas (estgio G1). O nuclolo
geralmente nico, porm h clulas com dois ou mais nuclolos. Contm muito RNAr e
protenas e so os responsveis pela origem dos RNAs dos tipos ribossmico (que forma os
ribossomos) RNAr e RNA transportador RNAt. O RNA mensageiro RNAm forma-se a partir
do DNA pelo processo de transcrio (estgio G1). O citoplasma um fludo com eletrlitos,
nutrientes de diferentes categorias qumicas, aminocidos, protenas, enzimas e contm
diferentes tipos de organelas citoplasmticas, inclusive o ncleo, incluses e pigmentos. H
pesquisadores que diferenciam no citoplasma uma poro denominada de citosol, a qual
formada pelo fluido descrito, pelas incluses e pelo citoesqueleto de protenas.

ROTEIRO CT 16

Tcnica de esmagamento de meristema apical de


raiz de cebola Allium cepa

MATERIAL

Cebola, bquer (Becker), papel alumnio, gua, pina,


gilete, vidro relgio, placa de Petri, tubo de ensaio, bico
de Bunsen.

TCNICA

Orcena actica

DESENVOLVIMENTO O trabalho dever ser efetuado em equipe no laboratrio


DA TCNICA
de Citologia da USJT.
PROCEDIMENTO: Selecionar uma cebola globosa (por aluno), aparar suas razes e coloc-la
na boca do bquer com gua (as pontas das razes no devem mergulhar na gua), o bquer
deve ser revestido com papel alumnio (promover artificialmente um ambiente para o
geotropismo positivo). Aps alguns dias (3 ou 4 dias), cortamos algumas pontas das razes
novas (0,5 cm) da extremidade livre. Para esta espcie de planta, o melhor momento para os
cortes por volta 1:30 hora ou ento s 22:00 horas (nestes horrios, a atividade mittica
atinge os mais altos ndices e/ou entre 16 /17 horas). Pode-se cortar tambm em outros
horrios. A seguir, mergulhamos as razes cortadas, utilizando uma pina ou pincel num tubo
de ensaio, com 2 a 3 ml do corante orcena actica a 5%, levamos o tubo de ensaio ao bico de
Bunsen at ferver (2 a 3 minutos). Despejamos o material numa placa de Petri e com a pina
ou pincel conduzimos as razes (2 ou 3 razes) para cada lmina. Pingamos sobre cada raiz uma
gota de orcena actica fria e deixamos em repouso durante 5 minutos. Colocamos uma
lamnula sobre o material e, com o uso de papel de filtro, pressionamos a lamnula com
cuidado para esmagar a raiz. Com este mtodo, o meristema apical da raiz de cebola sofre
dissociao das clulas e os cromossomos so intensamente corados, mantendo-se na posio
esperada para cada fase da mitose e tambm da interfase. NOTA IMPORTANTE: convm
lembrar que tal tcnica refere-se a mitose em clulas vegetais e h diferenas com a mitose de
clulas animais. A mitose em clulas animais pode ser observada em tecidos embrionrios
e/ou no extrato germinativo da epiderme, utilizando fragmentos destes tecidos, fixados em
Carnou, ou Bouin ou em lquido de Zenker, a colorao pode ser feita com hematoxilina frrica
de Rgaud.
A preparao pela tcnica de esmagamento de meristema apical de raiz de cebola (Allum
cepa) pode ser observada consultando o site: http://www.biologia.seed.pr.gov.br

ROTEIRO CT 17

Figuras de Mitose e/ou Ciclo celular mittico

MATERIAL

Raiz de Cebola

TCNICA

Hematoxilina Frrica

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X e/ou 1.000 X com leo de imerso,


ncleo interfsico e fases: prfase, metfase, anfase e
telfase.

PROCEDIMENTO: Observe, no meristema primrio apical, algumas clulas, procurando


reconhecer as diversas fases da mitose. Para facilitar a observao, utilize aumento de 100 X
e/ou 400 x. Na mitose a clula se divide ativamente. Uma nica clula origina duas clulas
filhas idnticas clula me. Essas clulas filhas apresentam o mesmo potencial da clula me
para se duplicarem e assim continuar replicando / duplicando o DNA. A mitose possui quatro
fases: prfase, metfase, anfase e telfase. Denomina-se citocinese, a diviso do citoplasma
que ocorre no final da telfase. A prfase se caracteriza pela condensao da cromatina
originando os cromossomos (so formados por duas cromtides idnticas unidas pelo
centrmero ou cinetcoro). A membrana do ncleo deixa de existir como tambm o nuclelo.
Na metfase os cromossomos se encontram no centro do fuso mittico. Ao se separarem de
forma uniforme, constituem a placa metafsica. O centrmero de cada cromossomo se
encontra ligado a uma nica fibra do fuso mittico (essa fibra um microtbulo /
citoesqueleto). No incio da anfase, os centrmeros separam-se e cada cromtide (molcula
de DNA) torna-se cromossomo. Essa separao atribuda s fibras do fuso. A morfologia
cromossmica desta fase lembra letras V com disposio horizontal. Na anfase a clula tornase mais alongada. Esse processo de separao das cromtides muito importante. Na telfase,
os cromossomos adquirem novamente aspecto de grnulos de cromatina. Surge novamente a
membrana do ncleo e os nuclolos. Microfilamentos citoplasmticos formam um tipo de anel
o qual promove a citocinese. O controle de mitose feita por protenas reguladoras e
especficas denominadas de ciclinas e ciclinas dependentes de cinases (CDKs). O volume (a
porcentagem) de ciclinas varivel a cada ciclo mittico, deixando de existir totalmente no
final da mitose (na telfase). J as CDKs quando ativadas proporcionam uma srie de reaes
enzimticas as quais promovem a mitose.

ROTEIRO CT 18
MATERIAL

Morfologia cromossmica (Cromossomos metafsicos)

Xrox de caritipo com cromossomos metafsicos

PROCEDIMENTO: Identifique no caritipo normal dado diferentes tipos de cromossomos


metafsicos: cromossomos metacntricos, submetacntricos e acrocntricos. A posio do
centrmero fundamental para a identificao. Observao: cada brao cromossmico
observado corresponde a uma cromtide, a qual por sua vez uma molcula de DNA. A
montagem do caritipo entre outros estudos pertinentes aos cromossomos sero realizados
pela disciplina de Gentica e Citogentica. No espao abaixo faa esquema dos trs diferentes
tipos de cromossomos metafsicos.

ROTEIRO CT 19

Montagem de clulas com base na microscopia


eletrnica de transmisso ( MET)

MATERIAL

Esquemas (desenhos) de imagens das organelas


citoplasmticas obtidas da MET, cola, papel A-4, lpis
preto.

TCNICA

Reconstruo de clulas a partir de modelos bsicos

OBJETIVO

Caracterizar a funo celular atravs da anlise ultra


estrutural.

PROCEDIMENTO: Realizar a montagem no espao abaixo de apenas de uma das clulas


citadas a seguir (consulte a bibliografia recomendada): clula secretora de protenas; clula
secretora de glicoprotenas; clula secretora de esteroides e clula transportadora de ons.

ROTEIRO CT 20

Necrose

MATERIAL

Bao

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X, necrose celular

PROCEDIMENTO: Inicie sua observao com aumento de 40 X, passe para aumento de 100 X
e posteriormente para 400x. Clulas em processo de necrose se caracterizam por
apresentarem ncleo picntico (volume reduzido, hipercorado devido cromatina condensada
e com distribuio irregular aderida na lamela interna da membrana do ncleo (cariorrxis ou
cariorrexe), clulas anucleadas, pois aps a carorrexe a cromatina sofre dissoluo.
Posteriormente ocorre a morfosfase (alteraes citoplasmticas): surgem grnulos e espaos
irregulares, citoplasma opaco e posteriormente eosinfilo e perda do contato com clulas
vizinhas. O processo da necrose ocorre devido a um processo de agresso no protoplasma.
um tipo de morte celular / tecidual que no fisiolgico, ocorre como afirmado devido a um
processo de leso, o qual promove a lise celular com liberao de contedos citoplasmticos e
do ncleo, desencadeando um processo inflamatrio. No uma morte fisiolgica como
ocorre no processo da apoptose, mas sim um tipo de morte celular que mantm contato com
clulas vivas. Necrose pode ter as seguintes causas: a) fsica (ao mecnica, temperatura,
radiaes), b) qumica (lcool, fenis, detergentes, medicamentos entre muitas outras) e c)
biolgicas (vrus, bactrias, fungos, parasitas).
No processo da apoptose ocorre nas clulas uma diminuio do volume celular (ficam
atrofiadas; presena de citoplasma bem eosinfilo (devido a agregao das organelas
citoplasmticas e da atrofia celular), cromatina perifrica no ncleo, ncleo denso e/ou
fragmentado. Apoptose uma morte programa geneticamente pela clula e dependente da
enzima caspase. Trata-se de fenmeno comum nos organismos pluricelulares. Tal processo
pode ocorrer durante o desenvolvimento embrionrio e fetal como tambm na vida ps natal
(infncia, adolescncia e adulta), portanto, so mortes celulares programadas, fisiolgicas,
dirigida por genes. No ocorre processo de autlise nem de inflamao, porm, h gasto de
energtico (de ATP). Suas causas relacionam-se com: manuteno da homestasia, regulaes
celulares e teciduais e ainda estmulos patolgicos como leses no DNA (devido a estmulos de
radiao, qumicos e virais), portanto, a apoptose pode ocorrer por estmulos normais
(fisiolgicos) e patolgicos.

ROTEIROS PARA AULAS PRTICAS


HISTOLOGIA GERAL
Tecidos: Epiteliais
Conjuntivos
Musculares
Nervoso

Roteiros HG Histologia Geral

Francisco Benedito Kuchinski


Jlio Fernandes

I - TECIDO EPITELIAL (TE)


ROTEIRO HG 01

TE - EPITLIOS DE REVESTIMENTO SIMPLES

MATERIAL

Mesentrio Nitratado (mesotlio) e/ou rim (A)


Rim (tbulos renais) e/ou tireoide (tiroide) (B)
Vescula biliar e/ou intestino / estmago (C)

TCNICA

Impregnao Argntica (Nitrato de prata) e/ou H&E (A)


Hematoxilina e Eosina para (B) e (C)

LMINAS

(A):________

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Epitlios simples dos tipos: pavimentoso (A), cbico (B) e


colunar ou cilndrico/prismtico (C) utilizando aumentos de 40 X
100 X e 400 X.

(B):_______

(C):_______

PROCEDIMENTO: (A) - observe a lmina macroscopicamente e focalize a lmina de


rim inicialmente com os aumentos de 40X e de 100X. Voc verificar que o rim
formado por duas pores distintas at o olho nu: uma externa (camada cortical, mais
corada) e outra interna (camada medular, menos corada). Localize a camada cortical
e, nesta, observe ao MOC a cpsula de Bowman, que tem seu aspecto
aproximadamente circular, circundando o glomrulo renal. Identifique o folheto parietal
desta cpsula, constitudo por epitlio simples pavimentoso. Observando, ainda a
camada cortical, localize ncleos arredondados de tbulos renais. Estes ncleos
pertencem s clulas epiteliais que esto constituindo o epitlio simples cbico do
tbulo contorcido proximal (B). Na poro medular do rim observe ncleos achatados
do epitlio simples pavimentoso, da poro delgada da ala de Henle descendente
(A). Este tipo de epitlio apresenta clulas com citoplasma delgado e ncleo saliente
na poro mediana das clulas. Utilizando o aumento de 400X esquematize o folheto
parietal da cpsula de Bowman. No mesotlio nitratado, evidenciado o depsito de
prata metlica sobre as membranas na colorao escura, portanto, no se observa a
membrana plasmtica, mas sim a prata. O citoplasma das clulas do epitlio simples
cbico bem eosinfilo. (C) Todos os rgos citados apresentam parede
constituda por camadas (tnicas) denominadas de mucosa, submucosa, muscular e
serosa. Localize a revestimento interno de um destes rgos com o menor aumento.
Com aumento de 400 X observe as clulas alongadas com ncleos basais.
importante notar que as clulas se dispem numa nica camada. A camada mais
interna, em contato com a luz / lmen a mucosa, e nestes rgos possui epitlio
simples colunar. O tecido subjacente ao epitlio o conjuntivo do tipo frouxo areolar
denominado de lmina prpria ou crion.

ROTEIRO HG 02

TE - EPITLIOS DE REVESTIMENTO ESTRATIFICADOS

MATERIAL

Esfago e/ou Bochecha / Vagina (A)


Pele Grossa (B)

TCNICA

Hematoxilina e Eosina para (A) e (B)

LMINAS

(A):________

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Epitlios estratificados dos tipos: pavimentoso estratificado no


queratinizado (A) e queratinizado (B) utilizando aumentos de 40X
100 X e 400 X.

(B):_______

PROCEDIMENTO: (A) - Localize o epitlio que reveste a mucosa do esfago e/ou a


mucosa da bochecha. Observe os diferentes tipos de clulas, caracterizando-as
atravs de seus ncleos. Notar que somente as clulas mais superficiais apresentam
ncleos achatados, portanto, so de clulas pavimentosas e o epitlio do tipo
estratificado pavimentoso. Represente com aumento de 400 X, um trecho da mucosa
com o epitlio solicitado. O tecido subjacente o conjuntivo e ambos constituem uma
mucosa. Na vagina, as clulas epiteliais superficiais sofrem processo de descamao
contnua, da a denominao de epitlio escamoso. Nota: outras disciplinas daro
nfase para a Citologia esfoliativa da vagina pelas tcnicas de Papanicolau e/ou de
Shorr. (B) Observe macroscopicamente a lmina da pele e descubra uma rea mais
avermelhada. Est rea corresponde queratina localizada acima das clulas
epiteliais. Com aumento de 40 X e posteriormente com 100 X e 400 X, esquematize
um trecho deste epitlio, observando tambm diferentes morfologias de ncleos sendo
que as clulas mais superficiais possuem ncleos que caracterizam clulas
pavimentosas. Essas clulas deste epitlio so denominadas de queratincitos.
Observe grnulos basfilos no interior destas clulas (so grnulos de querato hialina).
Tal epitlio se localiza acima do tecido conjuntivo (derme), da a denominao de
epiderme. Nota: a pele constituda pela epiderme + derme.

ROTEIRO HG 03

TE EPITLIOS DE REVESTIMENTO PSEUDO


ESTRATIFICADO E DE TRANSIO (polimorfo).
EPITLIO GLANDULAR CLULA CALICIFORME

MATERIAL

Traqueia (A)
Bexiga urinria e/ou ureter (B)

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E para (A) e (B)

LMINAS

(A):________

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Epitlio pseudoestratificado colunar ciliado com clulas


caliciformes e epitlio de transio utilizando aumentos de 40 X
100 X e 400 X.

(B):_______

PROCEDIMENTO: (A) Provavelmente, a lmina utilizada alm de possuir a traqueia


tambm contm o esfago, portanto, h dois cortes transversais de estruturas
tubulares nesta lmina, ao ser observada macroscopicamente (a olho nu). Identifique
na lmina a estrutura que possui arco azul e luz / lmen arredondado, a traqueia. O
outro rgo tubular com luz bem reduzida e estrelada o esfago. Na mucosa
traqueal identifique ncleos localizados em diferentes alturas (em nveis diferentes),
embora as pores basais de suas clulas esto situadas no mesmo plano inferior,
acima da lmina basal. Este epitlio possui dois tipos celulares, as maiores ciliadas e
com ncleo prximo superfcie e as outras so menores e denominado de epitlio
respiratrio. A clula caliciforme um exemplo de glndula excrina unicelular,
secreta muco e encontrada em mucosas como das vias respiratrias, intestinal e da
tuba uterina. A expresso glndula utilizada para designar estrutura secretora
multicelular. (B) Observe no aumento de 40 X e de 100 X a mucosa da bexiga
urinria e/ou do ureter e identifique duas ou mais camadas de clulas com ncleos
arredondados. No aumento de 400 X constate que as clulas mais superficiais so
grandes e esfricas enquanto s inferiores apresentam forma varivel. Trata-se de um
epitlio estratificado com variao conforme o estado da vacuidade da bexiga urinria.
Assim, quando a bexiga se encontra cheia de urina, as clulas superficiais apresentam
morfologia achatada.

ROTEIRO HG 04

TE - EPITLIOS GLANDULARES EXCRINO

MATERIAL

Pele Fina (A), Esfago (B) e Partida (C)

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E

LMINAS

(A):________

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Epitlios glandulares: glndulas sudorparas, sebceas,


esofgicas e salivar,utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

(B):_______

(C):__________

PROCEDIMENTO: (A) Na lmina de pele fina, inicialmente, macroscopicamente e


posteriormente com aumento de 40 X identifique a epiderme, a derme (rea mais
avermelhada) e a hipoderme (rea mais clara). A epiderme possui o epitlio
estratificado pavimentoso queratinizado (menos espesso do que na pele grossa). Com
esse mesmo aumento e com 100X possvel identificar os folculos pilosos
seccionados em vrios planos e cada um acompanhado da glndula sebcea
presente na derme (tecido conjuntivo). A glndula sebcea acinosa. Identifique
tambm aglomerados de tubos cortados tambm em planos diferentes, so as
representaes da glndula sudorpara. A glndula sudorpara tubulosa ou tbulo
glomerular. (B) Na mucosa do esfago voc dever rever o epitlio estratificado
pavimentoso e reconhecer a glndula mucosa esofgica com suas pores: ducto
excretor e poro secretora mucosa com clulas acinosas mucosas. (C) Na glndula
salivar partida reconhecer cinos serosos, clulas mioepiteliais e ductos excretores
com: epitlio simples cbico (ducto intercalar); epitlio simples colunar (ducto estriado)
e com epitlio estratificado (ducto excretor). A luz / lmen do ducto intercalar a
menor e a do excretor a maior. Inicie sempre seu trabalho de observao dos
tecidos utilizando a sequncia do menor aumento para aumentos de 100X e 400X.

ROTEIRO HG 05

TE - EPITLIOS GLANDULARES ENDCRINO

MATERIAL

Tireoide (A), Paratireoide e/ou Supra Renal / Adrenal

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E

LMINAS

(A):________

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Epitlios glandulares: glndula endcrina vesicular ou folicular e


cordonal, utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

(B):_______

PROCEDIMENTO: (A) - Com o menor aumento voc dever reconhecer os folculos


tireoidianos que caracterizam a estrutura vesicular ou folicular deste rgo endcrino,
constitudos por epitlio simples cbico. Notar a presena no interior destes folculos
do coloide eosinfilo que contm a tireoglobulina (pr-hormnio). Essas clulas
cbicas so as foliculares e responsveis pela produo dos hormnios tireoidianos:
triiodotironina e tiroxina. Entre os folculos h vasos sanguneos, predominantemente
de capilares, de tecido conjuntivo e de clulas parafoliculares responsveis pela
sntese do hormnio tireocalcitonina ou calcitonina. Observe tambm nos aumentos de
100X e 400X. (B) As glndulas paratireoides e o crtex das adrenais apresentam
estrutura cordonal. Na paratireoide as clulas denominadas de principais formam
cordes em diferentes planos, o que dificulta a caracterizao perfeita de cordes.
Entre estes cordes h capilares sanguneos. O hormnio produzido o paratormnio.
H clulas bem eosinfilas denominadas de oxfilas cuja funo ainda desconhecida.
J o crtex da supra renal possui clulas com distribuio cordonal distinta
constituindo trs zonas, a mais perifrica a glomerulosa, produtora de aldosterona, a
intermediria a fasciculada que produz andrgenos e glicocorticoides e a mais
interna a reticulada, responsvel tambm pela produo dos mesmos hormnios
feitos pela fasciculada. A poro central da supra renal denominada de medula e
sintetiza catecolaminas (adrenalina e noradrenalina). Focalize a paratireoide ou o
crtex da supra renal nos trs aumentos: 40X, 100X e 400 X e esquematize em
apenas um nico aumento, diferenciando estrutura endcrina vesicular (folicular) da
cordonal.

II TECIDO CONJUNTIVO - TC
ROTEIRO HG 06

TC - TECIDO CONJUNTIVO Elementos do Tecido


Conjuntivo Clulas Conjuntivas e Conjuntivos de
Propriedades Especiais

MATERIAL

Polpa de dente jovem e/ou Cordo Umbilical (A), mucosas (B),


pele e/ou fgado injetados (C), granuloma dental (D),
mesentrio (E) e hipoderme (F).

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E (A e B); Nankin e Ltio


Carmin (C), H&E (D) e Weigert / azul de toluidina (E)

LMINAS

(A):___ (B):____ (C):___ (D):___ (E):_____ (F):____

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Clula mesenquimal indiferenciada, fibroblastos, fibras


colgenas, SFA e Tecido conjuntivo mucoso (A); ncleos de
fibroblastos e de fibrcitos, fibras colgenas e SFA (B);
macrfagos e histicitos (C); plasmcitos, fibras colgenas e
SFA (D); mastcitos e fibras elsticas distendidas (E), utilizando
aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: Em todos os seis materiais inicie sua observao com o aumento


de 40X, passa para 100 X e posteriormente para 400X. Siga orientao do Professor
para cada uma destas lminas. As clulas mesenquimais possuem prolongamentos
citoplasmticos que se comunicam entre si. O ncleo destas clulas ocupa posio
central. Observe a grande quantidade de imagem negativa da SFA, caracterizando o
tecido conjuntivo mucoso ou mucide. Os fios rseos (eosinfilos) so as fibras
colgenas. Identifique a forma do ncleo comparando fibroblasto com fibrcito no
tecido conjuntivo da mucosa dada. Macrfagos so clulas que apresentam o ncleo
em forma de rim (feijo), pelas tcnicas utilizadas, o citoplasma apresenta coloraes
distintas, fato devido ao processo de fagocitose do Nankin e do Ltio Carmin. Os
plasmcitos apresentam citoplasma basfilo pela alta proporo de REG ou RER. Os
ncleos destas clulas se encontram deslocados para a poro basal (so
excntricos) e com grande quantidade de cromatina, a qual promove uma imagem ao
ncleo de roda de carroa. Neste material h outros tipos de clulas de defesa como
leuccitos (neutrfilos, eosinfilos, linfcitos, moncitos), os quais sero ainda objeto
de estudo. Os mastcitos apresentam ncleo esfrico e central, granulaes com
tonalidades diferentes dependendo do tipo de tcnica utilizada. Os fios finos
observados so de fibras elsticas. Nota: clula mesenquimal indiferenciada uma
clula mater, por exemplo, origina fibroblastos, os quais sintetizam o material
extracelular fibrilar e afibrilar e tornam posteriormente fibrcitos. Miofibroblastos so
fibroblastos diferenciados que realizam processos de contrao (apresentam no
citoplasma filamentos de actina). Macrfagos e histicitos so clulas de defesa. Os
histicitos so macrfagos fixos como a clula de Kupffer do fgado. Os plasmcitos
so clulas responsveis pela produo dos anticorpos (protenas imunoglobulinas
mecanismo de defesa humoral / qumico). Mastcitos produzem histamina e heparina.
Clulas adiposas (lipcitos ou adipcitos) constituem o tecido adiposo unilocular da
hipoderme da pele.

ROTEIRO HG 07

TC - TECIDO CONJUNTIVO Elementos do Tecido


Conjuntivo Material Extracelular Fibrilar e Afibrilar.
Tipos de Tecido Conjuntivo propriamente dito

MATERIAL

Tendo ou Pele Grossa e/ou Pele Fina (A); Rim ou Fgado (B)
Artria Aorta (C) e Mucosas (do esfago, do ureter e/ou........)

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E (A); Impregnao Argntica


(B) e Weigert ou H&E + Aldedo Fucsina

LMINAS

(A):______ (B):_____

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Fibras conjuntivas: colgenas (A); reticulares (B); e elsticas


(C), utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

(C):_____ (D):_______

PROCEDIMENTO: Fibras conjuntivas colgena, elstica e reticular constituem a


poro fibrilar do material extracelular. J a Substncia Fundamental Amorfa (SFA)
representa a poro afibrilar e no observada por tcnicas rotineiras, sua
observao ser sempre realizada na forma de imagem negativa (reas claras entre
as fibras colgenas e clulas conjuntivas). No tendo, voc perceber que as fibras
colgenas ocorrem mais ou menos paralelas entre si e se apresentam eosinfilas, na
colorao rseo pela ao do corante eosina. Essas fibras conjuntamente com clulas
a existentes mais a SFA constituem o tecido conjuntivo denso modelado. Na pele,
focalize a derme e observe que as fibras colgenas predominam no campo e ocorrem
em direes e planos diferentes, constituindo o tecido conjuntivo denso no modelado.
Utilize aumentos de 100X e de 400X. Tanto no tendo como na derme da pele, h
pontos roxos que correspondem aos ncleos das clulas conjuntivas, evidenciados
pelo corante hematoxilina. No rim e/ou no fgado, observe no aumento de 400 X fios
pretos entrelaados entre si e com clulas renais (no rim) e/ou hepticas (no fgado).
Esses fios so as fibras reticulares (reticulina evidenciada por sais de prata). A fibra
elstica no evidenciada pelo corante H&E, sua observao por esta tcnica
realizada na forma de imagem negativa. Para evidenciar fibras elsticas, os corantes
devem ser especficos, como os citados. A colorao das fibras elsticas prpura e
sua morfologia um fio bem fino quando distendidas (esticada) e de um fio tortuoso
quando no sujeita ao processo de alongamento. Nesta lmina de artria, as fibras
elsticas observadas na parede deste vaso sanguneo no se encontram distendidas.
Observe nos trs aumentos: 40X, 100X e 400X. Na mucosa do esfago e/ou do ureter
ou de outro rgo, observe logo abaixo do epitlio, o tecido conjuntivo frouxo sem
predominncia de algum de seus elementos (clulas, fibras e SFA). Neste tecido
conjuntivo que tambm e denominado de lmina prpria h propores bem parecidas
destes constituintes. Observe no aumento de 100X e de 400X. Nota: Fibras colgenas
pela tcnica de tricrmico de Mallory e/ou Tricrmico de Masson so evidenciadas em
azul, j pela tcnica do H&E em rseo (so eosinfilas).

ROTEIRO HG 08

TC - TECIDO CONJUNTIVO DE SUSTENTAO / DE


SUPORTE TECIDO CARTILAGINOSO

MATERIAL

Traqueia, orelha e disco intervertebral

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E (A); Weigert (B) e H&E (C)

LMINAS

(A):___ (B):____ (C):___

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Tecido cartilaginoso hialino (A), tecido cartilaginoso elstico (B)


e Tecido cartilaginoso fibroso, utilizando aumentos de 40X
100X e 400X.

PROCEDIMENTO: (A) - A cartilagem hialina formada pelo tecido cartilaginoso


hialino. Essa cartilagem localiza-se no septo nasal, na traqueia, nos brnquios e nas
superfcies articulares, da a denominao de cartilagem articular. A cartilagem
elstica formada pelo tecido cartilaginoso elstico. Essa cartilagem localiza-se na
orelha, na tuba auditiva, na epiglote e na laringe. A cartilagem fibrosa ou
fibrocartilagem localiza-se no disco intervertebral, em algumas reas que ocorre a
insero dos ligamentos e tendes nos ossos e na snfise pubiana. Observar na
traqueia, abaixo da mucosa, o anel de cartilagem hialina com o pericndrio (local que
ocorre o principal tipo de crescimento, o aposicional) com fibras colgenas, ncleos
de fibroblastos e de fibrcitos, alm dos ncleos dos condroblastos na poro interna
do pericndrio. Mais internamente, na matriz cartilaginosa, ocorre os grupos isgenos
de condrcitos (local que ocorre o crescimento intersticial da cartilagem). A matriz
cartilaginosa a rea basfila entre tais grupos, sendo mais basfila na periferia
destes grupos. Nesta matriz h colgeno do tipo II com cido hialurnico,
proteoglicanas e glicoprotenas, os quais conferem a basofilia. (B) - A cartilagem
elstica localiza-se abaixo da pele da orelha, seus condrcitos so maiores e h fibras
elsticas na matriz contnuas com o pericndrio. (C) - A fibrocartilagem sempre est
muito prxima ao tecido conjuntivo denso. A matriz cartilaginosa da fibrocartilagem
predominantemente eosinfila, sua basofilia fica restrita ao redor dos condrcitos que
se distribuem em fileiras / cordes. Nota: disco intervertebral pode ser observado na
cauda de co / de rato. Sua localizao entre as vrtebras de suma importncia,
pois, amortece impactos e protege contra o desgaste sseo. Siga orientaes do
Professor e observe corpos vertebrais, disco intervertebral contendo o ncleo pulposo
( de fibrocartilagem no indivduo adulto).

ROTEIRO HG 09

TC - TECIDO CONJUNTIVO DE SUSTENTAO / DE


SUPORTE TECIDO SSEO

MATERIAL

Osso descalcificado (calota craniana e/ou osso esponjoso de


epfises / maxila / mandbula e difises (A); osso desgastado
(dploe, processo alveolar, difise (B)

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E para (A e B) e desgaste


para (C e D)

LMINAS

(A):___ (B):____ (C):___ (D):___

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Tecido sseo esponjoso e compacto descalcificado


desgastado utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: Clulas sseas s so observadas pela tcnica de


descalcificao, pois, pela tcnica de desgaste so observados os locais que estas
clulas ocupam, denominados de osteoplastos. Pela tcnica de descalcificao +
H&E, com o menor aumento, observe no osso esponjoso: trabculas sseas com
matriz ssea e ostecito, rea do endsteo e do peristeo, medula ssea nas
cavidades medulares e osteoblastos (so clulas mononucleadas e com citoplasma
basfilo) bem como osteoclastos (so clulas multinucleadas e com citoplasma
eosinfilo) nas membranas de revestimento sseo (peristeo e endsteo). Pela tcnica
de desgaste, observe no osso esponjoso as cavidades medulares (sem medula ssea)
e trabculas sseas com os osteoplastos e canalculos sseos. No osso compacto por
tcnica de desgaste identifique o Sistema de Havers (sistema nutridor) com o canal de
Havers, lamelas sseas concntricas, canalculos sseos. Caso o corte tenha sido do
tipo longitudinal na difise, ser possvel identificar o canal de Volkman.

ROTEIRO HG 10

TC - TECIDO CONJUNTIVO Osteogneses

MATERIAL

Dploe e Disco Epifisrio

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E

LMINAS

(A):___ (B):____

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Processo de ossificao intramembranoso e endocondral nos


aumentos de 40X, 100X e 400X

PROCEDIMENTO: Com o menor aumento (40X) e posteriormente com aumento


mdio e com 400X, observe na calota craniana reas da osteognese
intramembranosa, a partir do endsteo e do peristeo. A rea fibrosa que voc
encontrou entre as trabculas sseas apresenta tal processo de formao ssea.
Utilizando o mesmo procedimento, focalize no osso longo, a rea do disco epifisrio e
reconhea com aumento de 100X e/ou 400X as seguintes zonas de condrcitos da
cartilagem hialina constituinte deste disco: zona em repouso, zona seriada, zona
hipertrfica, zona em eroso, zona calcificada e zona da ossificao. O material
fornecido no de organismo adulto. O disco epifisrio desaparece no fmur adulto.
Observe tambm na lmina de osteognese endocondral peristeo e endsteo.
Certifique-se que aprendeu: a cartilagem hialina foi substituda pelo tecido sseo e no
se transformou em osso.

ROTEIRO HG 11

TC - TECIDO CONJUNTIVO ARTICULAES

MATERIAL

Articulao do joelho e/ou ATM

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E ou Tricrmico de Mallory

LMINAS

(A):___ (B):____

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Articulao diartrose (sinovial) com aumentos de 40X e 100X

PROCEDIMENTO: identifique no menor aumento o revestimento das epfises desta


unio entre dois ossos longos (articulao do joelho): fmur X tbia. Ambas as epfises
so revestidas por cartilagem hialina (cartilagem articular). As extremidades destes
dois ossos esto ligados entre si por uma cpsula fibrosa de colgeno, a qual delimita
uma cavidade fechada (cavidade articular) a qual contm o lquido sinovial, com
fisiologia no processo de deslizamento das superfcies articulares. Na poro mais
interna da cpsula se localiza a membrana sinovial e sua poro mais desenvolvida
formada por fibras colgenas. bom lembrar que a cartilagem articular (cartilagem
hialina) no possui aqui o pericndrio. Caso seja dada a lmina de ATM, siga as
orientaes do Professor e anote as diferenas histolgicas desta articulao para a
articulao do joelho.

ROTEIRO HG 12

TC - TECIDO CONJUNTIVO Tecido Reticular ou


Hemocitopoitico: Sangue Perifrico

MATERIAL

Esfregao de sangue perifrico. leo de imerso.

TCNICA

Leishman

LMINAS

(A):___

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Clulas sanguneas e Plaquetas com aumento de 1000 X

PROCEDIMENTO: Utilize o leo de imerso e no maior aumento observe: hemcias


ou eritrcitos (glbulos vermelhos), leuccitos (glbulos brancos polimorfonucleados:
neutrfilos segmentares e bastonetes, eosinfilos e basfilos; glbulos brancos
mononucleados: linfcitos e moncitos). Fragmentos de megacaricitos: plaquetas.

ROTEIRO HG 13

TC - TECIDO CONJUNTIVO Tecido Reticular ou


Hemocitopoitico: tecido linfoide e mieloide

MATERIAL

rgos linfoides: bao (A) e linfonodo (gnglio linftico) (B)


Medula ssea*

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E

LMINAS

(A):___ (B):____

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Polpa branca e vermelha no bao e ndulos linfticos no


linfonodo, nos aumentos de 40X, 100X e 400X

PROCEDIMENTO: (A) - Observe no menor aumento que o bao envolto por


cpsula conjuntiva, a partir da qual partem septos conjuntivos. Todo o espao
compreendido entre a cpsula e os septos so ocupados por tecido linfoide disposto
em folculos ou ndulos linfoides e por distribuio cordonal, as trabculas de
linfcitos. Com aumento mdio verifique folculos com seces tangenciais e centrais,
nesta ltima ser possvel identificar no folculo o centro germinativo de Fleming, como
tambm a presena de uma arterola ( especfica do ndulo linftico do bao). Vasos
sanguneos tambm se fazem presentes (artrias e veias). Os folculos so formados
por linfcitos (cada ponto roxo corresponde ao ncleo de um linfcito). As hemcias
(pontos avermelhados) observadas constituem a polpa vermelha conjuntamente com
os linfcitos. A polpa branca o conjunto de todos os folculos linfoides. (B) Os
linfonodos tambm so revestidos por cpsula fibrosa de colgeno. O linfonodo
apresenta os folculos linfoides em sua poro mais externa (poro cortical). Logo
abaixo da cpsula localiza-se um espao denominado de seio sub capsular por onde
circula a linfa. A regio paracortical fica localizada abaixo dos folculos linfoides. Em
sua poro mais central (a medular) o tecido linfoide apresenta estrutura de cordes
de linfcitos, os cordes medulares. No aumento menor e dependendo do corte e da
lmina possvel observar sua poro convexa (rea de entrada dos vasos linfticos /
aferentes) como tambm a oposta, a cncava (rea de sada do vaso linftico /
eferente). Vasos sanguneos (artrias e veias) so perceptveis em seu interior. Nota:
A medula ssea* tambm observada pela tcnica de Leishman. Este tecido mieloide
obtido atravs de puno esternal humana e/ou medula ssea de co e/ou de rato.
possvel observar os megacaricitos (clula gigante com ncleo condensado e
lobulado, citoplasma fracamente basfilo) que originaro as plaquetas (fragmentos de
megacariticos srie megacarioctica ou trombocitria). Outras sries podem ser
estudadas: eritroctica (origem dos eritrcitos / glbulos vermelhos) e leucocitrias
(origem dos leuccitos / glbulos brancos) Vide Hematologia.

ROTEIRO HG 14

TN - TECIDO NERVOSO

MATERIAL

Crebro, cerebelo, medula espinal (A), nervo mielnico (B)

TCNICA

Impregnaes: argntica e metlica e Hematoxilina e


Eosina H&E

LMINAS

(A):___

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Clulas nervosas e neurglia, neurglia, substncias cinzenta e


branca, meninges, nervos e gnglios nervosos nos aumentos
de 40X, 100X e 400X

(B):____ (C):______ (D):______

PROCEDIMENTO: (A) - Examinando o corte de crebro por impregnao, voc


encontrar clulas nervosas (neurnios) com suas partes impregnadas por sais de
prata, corpo celular e seus prolongamentos curtos, os dendritos e o longo, o axnio ou
fibra nervosa. Estes tipos de neurnios do crtex cerebral (substncia cinzenta),
poro mais externa do crebro, so piramidais e multipolares. Entre eles possvel
detectar clulas no nervosas, as gliais ou da neurglia, denominadas de astrcitos
protoplasmticos como tambm vasos sanguneos. Mais internamente h no crebro
os prolongamentos destes neurnios envolvidos por bainha de mielina que constituem
a substncia branca (SB) do SNC. bom registrar que na SC do SNC h: corpos
celulares de neurnios, partes do axnio prximo ao corpo, clulas gliais e vasos
sanguneos. J na SB do SNC h: axnios mielinizados, clulas gliais e vasos
sanguneos (no ocorre corpos celulares na SB). Examinando o crebro por H&E
possvel observar vrias camadas de neurnios que constituem a SC. J, a
quantidade de ncleos (pontos roxos) na SB diminui consideravelmente, pois, no h
neurnios, somente so vistos os ncleos das clulas gliais alm dos ncleos de
outras estruturas teciduais, como clulas dos vasos sanguneos. (B) Examinando o
corte de cerebelo por H&E e posteriormente por Impregnao voc constatar que h
um nmero menor de camadas de neurnios constituindo a SC. Siga orientaes do
Professor em aula prtica. Clulas gliais como astrcitos fibrosos so bem vistos no
cerebelo e no crebro, na SB pela tcnica de impregnao. Oligodendrcitos podem
ser visualizados como tambm a micrglia tanto na SC como na SB pelas tcnicas de
impregnao. (C) - Reconhecer por H&E ou por impregnao na medula espinal, a
SC, SB e o canal do epndima. Corpos celulares da SC da medula espinal revelam o
grande desenvolvimento do corpsculo de Nissl (REG ou RER). Observe ainda na
medula espinal, gnglio nervoso da raiz dorsal como tambm raiz nervosa ventral e
dorsal. (D) Identificar por H&E no nervo mielnico: epineuro, perineuro, endoneuro,
imagem negativa da bainha de mielina, ncleos da clula de Schwan e de
fibroblastos/fibrcitos, alm de vasos sanguneos e dos axnios / fibras nervosas
seccionadas transversalmente ou em outros planos. Observe em microscpio montado
fibra nervosa / axnio no seccionado exibindo o axoplasma, bainha de mielina e
ndulo de Ranvier.

ROTEIRO HG 15

TM - TECIDO MUSCULAR

MATERIAL

Estmago / Intestino / Bexiga Urinria (A); Lngua / Masseter/


Biceps (B); Corao (C)

TCNICA

Hematoxilina e Eosina H&E (A); H&E e Hematoxilina


Frrica - HF (B); H&E e Hematoxilina Fosfotngstica- Hfo.

LMINAS

(A):___ (B):____ (C)_______

OBSERVAR E
ESQUEMATIZAR

Tecido muscular liso (A), Tecido muscular estriado esqueltico,


miofibrilas contradas e em repouso (B) e tecido muscular
estriado cardaco, discos intercalares (C) nos aumentos de 40X,
100X e 400X

PROCEDIMENTO: Observe, a princpio com o menor aumento todas as lminas


indicadas nesta aula. Siga a orientao do Professor. (A) - Identifique no aumento
mdio e posteriormente com 400 X, a disposio das fibras musculares lisas, que se
coram em rseo (eosinfilas), com ncleo nico e central, tonalidade roxo e de forma
elipsoide. Dependendo do corte, alguns ncleos no so visveis. Tambm
dependendo do rgo estudado e do corte podem ser visualizadas fibras em corte
(seco) transversal e longitudinal. (B) - J as fibras estriadas esquelticas
apresentam maior nmero de ncleos e os mesmos so de localizao perifrica.
Essas fibras (clulas musculares) tambm so classificadas como sinccios. Observe
que a seco efetuada no rgo, permitiu observar diferentes direes destas fibras
esquelticas. Dependendo do rgo em estudo possvel identificar o endomsio, o
perimsio e o epimsio. Pela tcnica (HF) identifique banda A, banda I (fibra contrada)
e banda A com faixa H e banda I (fibra em repouso fibra em estado relaxado / no
contrada). (C) Observe no corao que seu maior constituinte o tecido muscular
estriado cardaco (miocrdio). Focalize com aumentos de 100 X e 400 X essa camada
muscular e tente identificar fibras cardacas uni e binucleadas. A grande massa
cardaca apresenta clulas com citoplasma eosinfilo, porm, em algumas fibras essa
eosinofilia muito restrita, trata-se de fibras cardacas modificadas com pouca
quantidade de actina e miosina, portanto, no realizam sstole nem distole, so as
fibras cardacas modificadas e constituintes do tecido nodal cardaco, o responsvel
por gerar (criar) estmulos para o batimento cardaco. H ainda outras fibras cardacas
imperceptveis na MOC responsveis pela produo do hormnio natriurtico. A
tcnica do HFo revela a juno entre duas fibras cardacas denominada de disco
intercalar ou trao escalariforme.