28/04/2016

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

ESCOLA DE QUMICA

INSTRUMENTAO EM BIOPROCESSOS

Prof. Elcio Ribeiro Borges

Profa. Maria Antonieta Peixoto Gimenes Couto
a
Prof . Andra Medeiros Salgado
Departamento de Engenharia Bioqumica
Escola de Qumica/UFRJ
e-mail: elcio@eq.ufrj.br

AUTOMAO E CONTROLE APLICADO A BIOPROCESSOS

Limitaes a Aplicaes de Controles Automticos em Bioprocessos

Caractersticas especficas dos processos biotecnolgicos (comp de meios, m-orgs,

etc..).

Dificuldade medidas in-line (leia-se dentro) das principais variveis do processo

(carncia de sensores comercialmente disponveis).

Complexidade cintica dos processos biotecnolgicos (dificulta elaborao de

modelos).

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AUTOMAO E CONTROLE APLICADO A BIOPROCESSOS

Limitaes a Aplicaes de Controles Automticos em Bioprocessos

Caractersticas especficas dos processos biotecnolgicos (comp de meios, m-orgs,

etc..).

Dificuldade medidas in-line (leia-se dentro) das principais variveis do processo

(carncia de sensores comercialmente disponveis).

Complexidade cintica dos processos biotecnolgicos (dificulta elaborao de

modelos).

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Finalidade da Instrumentao Aplicada

a Bioprocessos

Conhecimento do sistema.
Processos de troca de escala correlacionar parmetros.
Controle de qualidade (monitoramento).
Comportamento aerodinmico.
Reduo custos.
Aumento produtividade.
Controle timo do processo
(driblar efeitos de inibio).
REPRODUTIBILIDADE DO PROCESSO

Requisitos Principais dos Sensores

Esterilizavis .

Possa atuar em meios com turbidez elevada (cresc. celular).

No adsorva protenas.

Resistentes a eroso e foras mecnicas (processos agitados)

Estveis

Especficos

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Formas Analisar um Bioprocesso

1) In-situ

2) On-line

3) Off-line

Importncia da estimao On-line

aplicada a biorreatores

Permite o estudo do sistema microbiano de forma real e segura

variveis medidas tempo real conhecimento da cintica bioagentes.

Descrio mais completa do processo

Informao continua dos rendimentos calculados pela medida contnua

dos produtos e/ou substratos presentes no meio reacional.

Implementao de Estratgias de Controle

Eliminao de possveis problemas com o manuseio das amostras

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Variveis Medidas em um Bioprocesso

90

45

80

40

70

35

60

30

38,4

50

25

40

20

30

15

4,0
20

10

1,42
10

0
0

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

Biomassa, c. succnico e Subprodutos(g/L)

2) Baseadas em Princpios Qumicos

A) Acidez (pH)
B) Oxignio Dissolvido
C) Oxignio na Fase Gasosa
D) CO2 na Fase Gasosa
E) Biomassa
F) Substratos e Produtos na fase lquida

Glicose e Celobiose (g/L)

1) Baseadas em Princpios Fsicos

A) Temperatura
B) Presso
C) Vazo Gasosa
D) Vazo Lquida
E) Velocidade de Agitao
F) Viscosidade
G) Anti-espumante

Glicose

Celobiose

c. succnico

c. frmico

c. actico

60

Tempo (h)

1) Medidas Baseadas em Princpios Fsicos

2) A) Temperatura

Termopares (decimal C) preciso (+/- 2oC)

Sensibilidade / Faixa medida / Preo Baixo/ T amb
Resistncias de Platina (metal semicondutor)

Termistores ( 10-4 a 10-5 C) metal semicondutor:

quanto menor, maior sensibilidade de resposta

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Fotografias de Termstores e Termoresistncias

CTN: coeficiente trmico negativo

CTP: coeficiente trmico positivo (posisitors).

Termstor NTC Encapsulado

em vidro
Gama Temp.: -55 a 250C
(utilizados em electrodomsticos
automveis, medidas)

Termstor NTC
Dimenso: ~ 1mm
Gama Temp.: -80 a 150C

Termstor NTC Cermico

Gama Temp.: -30 a 125C
(utilizados na compensao
de temperatura, medidas
e controlo processos)

Termstor PTC Comutado

Termstor NTC

Termistncia de Liga de
nquel,
cobre, mangansio e ferro
(bob.)
Gama Temp.: -40 a 150C

Dimenso: ~2 mm

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B) Presso
Afeta indiretamente o metabolismo pois influncia na solubilidade dos gases dissolvidos de acordo com
sua intensidade.
Maiores Presses (Entupimento sistema)
Menores Presses (Contaminao)
Os instrumentos baseia-se em deslocamento mecnico ou deformao elstica do elemento sensor
(provocado por uma P) gerando sinal eltrico, o qual convertido em valores de presso.
Manmetros capacitivos (2 placas capacitivas separadas por uma membrana)
Manmetros piezoeltricos (cristal elemento sensor)- submetido tenso mecnica gera sinal
eltrico. Mais preciso, porm mais caros.
Medidor strain-gages cilindro oco com tiras extensoras

C) Medidas de Vazes Gasosas

Quantificao do ar fornecido e controle do O2 dissolvido no meio (CL)

Medidores de vazo de rea varivel (rotmetros) na maioria dos

casos no emitem sinal eltrico;
Aumento da vazo aumenta rea livre de escoamento.
Medidor Trmico de Vazo Mssica quantidade de energia para
manter Temperatura constante funo da vazo mssica. Mais
precisos

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Rotmetros e Medidor Trmico Vazo Mssica

Plsticos

Acoplamento magntico

Vidro

Para baixa vazo

Quanto maior vazo, menor a

diferena de temperatura entre
os dois termstores. Logo, faz-se
correlao de temperatura com
vazo.

Medidores de vazo
Magntico-Indutivos Mssicos

Mssicos

D) Medidores de Vazes Lquidas

Controle das vazes de entrada e sada ao processo (principalmente contnuos)
Medidor presso diferencial (Placas de orifcio e tubos de Venturi) medidas de
diferenas de presso

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Medidores Magnticos
Tubo com 2 eletrodos de lados opostos produzem campo magntico
perpendicular ao fluxo fludo gera fora eletromotriz sinal linear com a
vazo lamas, polpas lquidos condutores.
Balanas Necessitam longos intervalos de medidas e clculos
- teis na determinao da massa adicionada ao fermentador

Placas de Orifcio

E) Velocidade de Agitao
Controle de O2 dissolvido no meio

Tacmetro CC dispositivo
eletromecnico contm gerador de
fluxo eletromagntico, rotor e
dispositivo que gera tenso com
agitao

F) Viscosidade e Densidade
Viscosmetros - medida manual viscosmetros

Densmetros - haste ferromagntica no interior

do densimetro ligado a um transmissor.,
Densmetro transmissor contnuo
C-cmara do densmetro,
Ce- circuito eltrico,
F- fonte de 24 V,

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2) Medidas Baseadas em Princpios Qumicos

A) Acidez (pH)
Influncia na atividade enzimtica e no
metabolismo microbiano.

Conector

Eletrodo de pH

Entrada de eletrlito

Eletrlito

Elemento de Referncia
Fio de Medio
Diafragma
Buffer interno
Membrana

G) Anti-Espumante
Podem afetar crescimento e transferncia de O2 para o meio.
Sonda com haste condutora eletricidade

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Sensores ons comerciais para Processos Biolgicos

Faixa de pH para Medida

Direta

Faixa de Concentrao
(mol)

11-13

1 -10-6

6-8

1-10-5

10-2 10-4

2-11

1-8 x 10-6

10-40

Nitrato

3-10

1 6 x 10-6

Nitrato

0-2

10-2 5 x 10-7

Potssio

3-10

1- 10-5

Sdio

9-10

Saturao a 10-6

Fosfato

5 x 10 30

Sulfato

5x10-30

Espcies Inicas
Amnio
Clcio
Dioxido de carbono
Cloreto
Magnsio

B) Oxignio Dissolvido
Influncia no metabolismo microbiano.

Sondas que medem corrente eltrica

Princpio: oxi-reduo do O2 por potencial externo.

Sonda galvnica
O2 + 2H2O + 4 4 OH
2 Pb 2 Pb+2 + 4

(catodo de prata)

(anodo de chumbo)

Sonda polarogrfica
O2 + 2H2O + 4 4 OH
4 Ag + 4 Cl- 4 AgCl + 4

(catodo de platina)

(anodo de prata)

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C) Oxignio na Fase Gasosa

Espectometria de massa mais preciso e reprodutvel, custo elevado, no

analisa compostos biolgicos no volteis.

Espectrmetro de Massa

Sensores paramagnticos propriedades

paramagnticas do O2, mudanas na
concentrao mssica afetam a densidade do
campo magntico e as foras magnticas
geradas por este campo.

D) CO2 na Fase Gasosa

Analisadores Infravermelho N2, O2, e H2 no

absorvem

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E) Medidas de Biomassa
Determina velocidade de crescimento e formao de Produtos

Medida Biomassa por densidade ptica (sensores pticos,

espectrofotmetros no visvel)

Estado da populao celular por Fluorometria.

Novos Sensores
Determinao tamanho e morfologia clulas por citometria de fluxo
Sensores analisam propriedades dieltricas
Biossensores (fibras ticas, microorganismos
bioluminescentes)

Sensor tico
para Medir
Biomassa desenvolvido
no Ladeq/UFRJ

Princpio da Citometria de Fluxo

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F) Medida de Substratos e Produtos

na Fase Lquida
HPLC (High Pressure Liquid Cromatograph)

F) Medida de Substratos e Produtos

na Fase Lquida
HPLC (High Pressure Liquid Cromatograph)

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Cromatografia Lquida (HPLC)

Equipamento

Separao diferenciada dos Componentes

Cromatografia Separao ocorre na partio diferenciada entre o componente (FM) e a F.E (lquido)
Lquida- Lquida Fase Normal- polaridade fase mvel menor que a da estacionria
Reversa - polaridade fase mvel maior que a da estacionria. Mais usada, usa gua
(cromatografia de Fasecomo
fase mvel.
Partio)
Cromatografia
Lquido-Slida
(cromatografia de
Adsoro)
Cromatografia de
Troca inica
(IEC)
Cromatografia por
excluso de
Tamanho

Componentes da amostra lquida competem pelos stios de adsoro da fase slida

(Coluna slica)

Separa compostos inicos (altamente polares). Fase estacionria resina troca inica

Separa componentes de acordo com peso molecular. Molculas menores que o poro
mdio permanecem mais tempo retidas.

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Cromatografia gasosa (substncia orgnicas volteis e gases)

Auto analisadores
FPLC ( Fast Protein Liquid Chromatograph)
Anlise por Injeo em Fluxo (FIA)

Esquema Bsico
de Um Sistema FIA

Altas freqncias de anlise

Pequenos volumes amostra
Rpidos tempos de resposta
Amostragem e preparao integrados
Poucas interferncias
Confiabilidade do sistema,
reprodutibilidade e baixo custo
Flexibilidade e versatilidade

Aplicao Sistemas FIA

Componente Medido

Sistema deteco

Reao

Sacarose

Termistor

glicose oxidase e catalase

glicose oxidase

Glicose

Fotmetro

Galactose

Fotmetro

GAL oxidase

Amnia

Colormetro

difuso gasosa e vermelho de

cresol

Nitrato e Fostato

Colormetro

sulfanilamida

Etanol

Colormetro

lcool oxidase e peroxidase

fenol 4-aminofenasona

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Biossensores
Os Biossensores podem ser definidos como instrumentos
analticos que utilizam um material biolgico ligado a um
sistema adequado de transduo que converte um sinal
biolgico em um sinal eltrico quantificvel e processvel
(Sharmat e Rogers, 1994).

Componentes biolgicos

Enzimas
Clulas Microbianas (Bactrias, leveduras)
Tecidos de animais e vegetais
Organelas
Anticorpos

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Trandutores Aplicados
em Biossensores

Eletroqumicos

Potenciomtricos medem voltagem (eletrodos pH).

Amperomtricos medem corrente (eletrodos de O2 dissolvido,
eletrodos redox).
Condutimtricos medem condutncia e capacitncia.
FET (Transistores Efeito Campo ) potenciomtricos.
ISFET (Eletrodos ons Seletivos) potenciomtricos.
Eletrodos Sensveis a Gases medem voltagem.
Impedimtricos medem impedncia.

Cristais Piezo Eltricos medem variao de massa

ticos (Optoeletrnicos e de fibras ticas)

Calorimtricos medem calor (termistores e diodos)

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