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Data: 29/04/2015

Bioqumica Fundamenta e Experimental 21015NI_1

Caracterizao da enzima Urease

Alunos: Daniele De Anhaia Mikovski; Letcia Malinoski; Paulo Alexandre


Silveira Da Silva.

OBJETIVO:
Demonstrar a natureza proteica da enzima urease, analisando sua

atividade enzimtica, sua reatividade com o biureto e sua especificidade


atravs da comparao dos resultados obtidos nos experimentos.

METODOLOGIA:
Urease est presente em bactrias e plantas, podendo ser extrada da

soja, e no podendo ser sintetizada por animais. Essa enzima responsvel


por catalizar a reao de hidrlise da Uria.
Extrao da urease de soja: 15-30 g soja + 100mL (Glicerol 75%).

Reao catalisada pela urease

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Em meio aquoso temos:


2 NH3 + 2 H2O 2 NH4OH
CO2 + H2O H2CO3
2 NH4OH + H2CO3 (NH4)2CO3* + 2 H2O
*

O carbonato de amnio pode ser evidenciado com um indicador cido-

base (Vermelho de fenol).

MATERIAIS:

Tubos de ensaio;

Tampo fosfato 1mmol/L, pH 7 contendo 1% de ureia;

Tampo fosfato 1mmol/L, pH 7 sem ureia;

Tampo fosfato 1mmol/L, pH 7 contendo 1% de tioureia;

Soluo de urease;

Soluo de vermelho de fenol;

Incubao;

gua destilada;

Reativo de biureto.

MTODOS:

Teste de atividade de urease

1) Utilizaram-se 2 tubos de ensaio os quais foram identificados como tubos


A e B, respectivamente;
2) No tubo A colocou-se 3mL tampo fosfato 1 mol/L, pH 7, contendo 1%
de ureia e foram adicionadas 4 gotas de urease;
3) No tubo B (branco) colocou-se 3mL tampo fosfato 1 mol/L, pH 7, sem
ureia e foram adicionadas 4 gotas de urease;
4) Em ambos os tubos adicionou-se 1 gota de soluo de vermelho de
fenol;

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5) Os tubos foram agitados e incubados durante 5 minutos submetidos a


uma temperatura de 37 C;
6) Os tubos A e B foram observados e comparados.

Atividade enzimtica:
S+E

ES

E+P

E: Determinao da concentrao da enzima Protenas Biureto


S ou P

Reao de biureto

1) Em um tubo identificado como tubo C foram colocadas 2 gotas da


soluo de urease + 2mL de gua destilada, o tubo foi agitado;
2) Adicionou-se 2mL do reativo de biureto, o tubo foi homogeneizado;
3) Em tubo D colocou-se 2mL de gua destilada + 2mL de reativo de
biureto;
4) Compararam-se a colorao dos tubos e os resultados foram
interpretados.

Especificidade da enzima

1) Utilizaram-se dois tubos, os quais foram marcados como tubos E e F;


2) No tubo E colocou-se 3mL de tampo fosfato 1mmol/L, pH 7, contendo
1% de ureia, logo aps foram adicionadas 4 gotas de urease;
3) No tubo F colocou-se 3mL de tampo fosfato 1mmol/L, pH 7, com 1% de
tioureia, foram adicionadas 4 gotas de urease;
4) Em ambos os tubos adicionou-se 1 gota de soluo vermelho de fenol;
5) Os tubos foram agitados e incubados a 37 C;
6) Compararam-se os resultados.

RESULTADOS:
Teste de atividade de urease

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Inicialmente, os tubos denominados A e B tinham a mesma aparncia,


uma cor bege escura, referente a cor da soja filtrado presente nos tubos.
Depois da incubao, a soluo contida no tubo A, tudo onde a enzima foi
adicionada, apresentava uma cor rosada. O tubo B, que no continha a
enzima, estava com uma soluo amarelada, com pouca diferena da cor
original.

Figura 1: Tubos A e B, respectivamente, aps incubao.

Reao de biureto

Depois de homogeneizar o tubo C, foi perceptvel uma colorao lils e


opaca da soluo, que continha o reagente biureto com a enzima extrada da
soja. A soluo D, que s continha somente gua destilada e o reagente
biureto, apresentava uma soluo de aparncia transparente

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Figura 2: Tubos C e D, respectivamente.

Especificidade da enzima

O tubo E, que continha como a uria, apresentou inicialmente, j com o


corante, uma colorao amarelada , prxima da cor da soja de onde a enzima
foi extrada. O tubo F, que continha a tioureia, apresentou uma cor rosada
devido o uso do corante. Depois de incubados, os tubos intensificaram suas
cores originais, o que comprovou a existncia de da reao causada pela
enzima presente em ambos os tubos.

Figura 3: Tubos E e F, respectivamente, antes da incubao.

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Figura 4: Tubos E e F, respectivamente, aps incubao.

DISCUSSO:
1) Qual a reao catalisada pela urease?
R: A urease catalisa a hidrlise da ureia amnia e dixido de

carbono.

2) Qual a fonte de urease utilizada nos experimentos?


R: A urease utilizada na aula prtica foi extrada da soja.

3) Como ocorre a reao de biureto?


R: O reativo de biureto um reagente composto por uma soluo de
sulfato de cobre (CuSO4) e hidrxido de potssio (KOH) juntamente ao
tartarato de sdio e potssio (KNaC4H4O6.4H2O) que ao reagir com os ons
cpricos (Cu2+), forma um produto de colorao violceo. Utilizamos esse
reativo para identificao de compostos proteicos, visto que as ligaes
existentes nas molculas de biureto se assemelham s ligaes peptdicas
durante a formao de protenas.

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4) Explique o uso do indicador cido-base vermelho de fenol.


R: O vermelho de fenol usado como indicador de pH, com a
finalidade de determinar se o meio cido, bsico ou neutro atravs da
mudana na colorao (propriedade halocrmica).

5) Explique o resultado obtido no teste de atividade.


R: Foi possvel perceber a mudana de colorao no tubo que continha
a enzima somente que ambos os tubos ficaram incubados numa temperatura
de 37C. Isso s foi possvel pois essa temperatura define o melhor "estado"
que a enzima cataliza determinada reao.

6) Explique o que especificidade e o resultado obtido no respectivo


teste.
R: Especificidade enzimtica pode ser definida como uma parte do stio
ativo de uma enzima onde determinado substrato, que esta cataliza, se
encaixa. Esse tipo de reao especfica a este determinado substrato, e pode
tambm ser chamada de reao chave-fechadura. A urease uma enzima
especfica para a uria, catalizando somente reaes deste substrato, ou seja,
no sendo capaz de catalizar reaes nem mesmo com uma molcula parecida
com a uria, como a tiouria.

CONCLUSO:
A enzima urease extrada da soja uma enzima que cataliza apenas

reaes com a substncia uria.


Com os experimentos foi possvel demonstrar a reatividade da enzima
com o reagente biureto e sua especificidade pela uria, cumprindo o objetivo
proposto. Tornou-se evidente as mudanas na colorao das solues
preparadas, mudanas essas caracterizadas pela alterao do pH da soluo
nos tubos conforme a reao causada pela enzima, o que auxiliou na
observao da efetividade da atividade enzimtica.