1.- Material utilizado para la toma de muestras.

Condiciones de uso:

Tubos de sangre de diferentes tipos.

Tubos estriles.
Frascos de hemocultivos
Frascos de esputo, orina y heces.
Hisopos, torundas.
Pulseras de transfusin.
Jeringas, agujas, compresor, algodn.
Campanas de vacutainer. (consiste en extraer sangre intravenosa al vaco)
Soluciones antispticas
Guantes estriles y no estriles, cubre bocas (ciertas ocasiones), batas estriles
Sistema al vaco: tubo vacutainer, aguja mltiple, mariposa vacutainer, adaptador o
camisa (holder).
Sistema tradicional: jeringa tradicional, aguja desechable, tubo vacutainer.

2.- Causas por las cuales el laboratorio rechaza procesar una muestra:

Criterios de Rechazo:
Muestras sin rotular.
Discordancia entre solicitud y rtulo del tubo.
Envase incorrecto con respecto a los exmenes solicitados.
Muestra coagulada o hemolizada.
Tubo con volumen de sangre incorrecto o relacin sangre/anticoagulante
incorrecta.
3.- Procedimiento para recoleccin de muestras para uro cultivo, hemocultivo, cultivo
absceso, de quemaduras. Cultivo anaerbico.
Urocultivo:
Sospecha ITU (disuria, hematuria, orinas turbias,
mal olor).
Sndrome febril en estudio, examen preoperatorio
Previo procedimiento invasivo en estudio

Procedimiento general
Primera miccin de la maana
Orina del 2 chorro: depende de la edad, sexo y cooperacin del paciente.
Tomada por personal adiestrado
Transporte
En el mismo tubo o recolector con orina, enviar antes de 1 hora al laboratorio.
Transporta a temperatura ambiente en unidad de transporte trmico.

Nios y adultos que controlan esfnteres: Orina 2do chorro, asistida por personal
salud, idealmente la primera orina matinal.

Nios y adultos que NO controlan esfnteres recolector urinario: Catter Vesical Puncin suprapbica asistida por personal salud -idealmente la primera orina matinal.
Muestra de 2 chorro Aseo genital con agua jabonosa. Enjuagar en forma abundante,
eliminar el primer chorro de orina. Recolectar 2 chorro de la miccin.
Conservacin: transporte rpido menos o igual 2 horas refrigerar a 4C hasta por 24 hrs.

Recolector urinario para lactantes: Aseo genital con agua y jabn. Pegar bolsa
recolectora Repetir cada 30 minutos.

Puncin Vesical Procedimiento mdico (invasivo): Slo para casos especiales.

Rendimiento excelente til en neonatos, lactantes.

Cateterizacin vesical transitoria (invasivo): til en incontinencia vesical. Riesgo de

arrastre retrgrado de MO.

Orina por puncin sonda Foley: Desinfeccin sonda con alcohol 70%. Pinzar
sonda extremo proximal puncionar sonda y aspirar orina.

Hemocultivo:
Procedimiento:
Se recomienda recoger la muestra: en el peak febril, antes de cualquier antibioterapia o
despus de abandonarla.
1. La enfermera (o) debe realizar un lavado clnico de sus manos y usar guantes estriles
ante cada uno de estos procedimientos.
2. Explicar el procedimiento y su utilidad al paciente.
3. Colocar el compresor de goma en la zona seleccionada para realizar la puncin.
4. Localizar mediante palpacin la vena o arteria que se va a puncionar.
5. Retirar la tapa externa de los frascos y desinfectar sus tapones de goma con alcohol
etlico al 70 y dejar que estos se sequen.
6. Desinfectar la zona seleccionada de piel de aproximadamente 10 cm. de dimetros con
gasas estriles impregnadas en alcohol etlico, esto se debe realizar con movimientos
circulares desde el centro a la periferia y dejar secar alrededor de unos 30 a 60 segundos.
7. Insertar la aguja en la vena seleccionada sin tocar la piel y extraer la cantidad de
sangre necesaria: 1-5 ml para nios (en neonatos y nios pequeos solo debe ser un
frasco) y 10-20 ml para adultos.
8. Aflojar el compresor y retirar la aguja y jeringa mientras se aplica la gasa sobre la zona
de puncin.
9. Inocular 5 o 10 ml de sangre en cada frasco con la aguja en posicin vertical, esta debe
ser cambiada cada vez que se cambie el frasco. Primero se inoculan los anaerbicos y
luego los aerbicos.
10. Tirar las agujas en los contenedores de los materiales contaminados.
11. Quitarse los guantes y lavarse las manos.
Transporte:
Rotular los frascos con nombre y apellido del paciente, nmero de la ficha mdica, fecha y
hora de extraccin y nmero de muestra, sin daar la zona de Cdigo de Barra, transporte
inmediato a temperatura ambiente.
Absceso:
Este tipo de muestras pueden representar al proceso patolgico entero
Procedimiento
1.- Realizada por personal idneo
2.- Si lesin es grande o numerosa, muestras de varios sitios.
3.- Debe incluir muestra de contenido lquido interno como tambin porcin de las
paredes. Extraer con aguja y jeringa.
Transporte
Colocar en tubo estril o medio transporte Stuart sin la trula, en un tiempo no mayor a 2
horas.
Cultivo absceso de quemaduras :
El tipo de toma de muestra es controvertido, pero los mejores resultados se han logrado
con fragmentos de tejido de 3 o 4 mm para realizar cultivos cuantitativos.
Se transportan en tubos con tapa rosca estriles.
Recipiente:
- Tubos estriles con tapn.
- Hisopo estril.
- Tubo con 2 ml. de suero fisiolgico
- Tira de papel de 2 cm. de superficie.

Tcnica:
- Obtener fragmentos de tejidos con mal aspecto o bien impregnar el papel de filtro estril
en el exudado de la quemadura. La biopsia se introduce en tubo estril y el papel en el
tubo con suero fisiolgico.
- La muestra puede obtenerse tambin con hisopo estril.
- La ventaja del papel impregnado, es la posibilidad de cuantificar la flora de colonizacin.
Transporte y conservacin:
Las muestras procedentes del rea extrahospitalaria se transportarn en la nevera
correspondiente de cada centro. En cambio, las intrahospitalarias se transportarn en las
primeras 2 horas a temperatura ambiente.
Cuando la muestra no se introduzca en medio de transporte ha de conservarse entre 28C.
1 cm de extensin y profundidad
rea lmite escara y zona viable
Conservacin
Frasco estril con Suero Fisiologico
Transporte
inmediato al laboratorio
Cultivo anaerbico:
til en:
Abscesos cerrados, sangre, lquidos de cavidades serosas.
Requiere coordinacin con laboratorio.
4.- Procedimiento para recoleccin de muestras para diagnstico de tias y candidiasis
mucocutneas:
Superficiales:
Lesiones piel lampia (escamas): Obtener escamas por raspado con bistur o portaobjeto
de los bordes activos de la lesin.
Cuero cabelludo (pelo): Extraer con pinzas estriles cabellos afectados junto con escamas
a travs de bistur o portaobjeto.
Uas: Recoger detritus depositado bajo las uas y posteriormente proceder a cortar las
uas con tijeras
Profundas
Se obtienen de la sangre, tejidos, LCR y aspirado broncoalveolar.
La muestra se obtiene con el mismo mecanismo que se utiliza con las bacterias.
Se recomienda tomar 2 muestras de sitios distintos para evitar contaminacin ambiental.
Se enva la muestra en frascos estriles con suero fisiolgico.
5.- Procedimiento para recolectar muestras de microorganismos de crecimiento
intracelular:
Elemento crucial para realizar el diagnstico de laboratorio de un virus.
Las mejores muestras por lo general son las que se obtienen en un estadio temprano de
la enfermedad (dentro de las primeras 72hs)
Transporte
Transporte con protenas como puede ser la albmina de bovino o la gelatina.
La mayora de las muestras deben transportarse a 4C.

Actualmente sistemas de recoleccin y transporte de muestras virales se pueden obtener

comercialmente.
Ejemplos
Hisopados farngeos : Frotar las amgdalas y faringe con un hisopo de algodn seco.
Colocar el hisopo en 3-4ml de medio de transporte.
Orina: Recolectar un total de 10-15ml de orina recientemente emitida en un recipiente
estril y enviarla directamente al laboratorio.
6.- Mtodos de diagnstico microbiolgico directo:
Cultivo aerobio y anaerobio. Cultivo celular:
Deteccin de antgenos : Consiste en la deteccin de antgenos mediante una
reaccin Ag-Ac mediante la utilizacin de anticuerpos marcados, enzimas, etc.
Inmunofluorescencia directa: Se usa generalmente para el diagnstico de enfermedades
autoinmunitarias, diagnstico viral, chlamydia trachomatis, legionella pneumophila. La
reaccin se puede detectar y cuantificar usando fluorocromos .Este mtodo utiliza
anticuerpos marcados, es bastante sensible y especfico. Sus desventajas son que se
requiere un microscopio especial de fluorescencia y se necesita un personal altamente
capacitado ya que el uso de microscopio puede ser peligroso .
-

Deteccin por microscopa (por tincin o al fresco)

Microscopia: de las tcnicas convencionales, se caracteriza porque puede ser directa, es

decir tom la muestra e inmediatamente la reviso, o sea lo hace el microscopio, y puede
ser al fresco donde permite ver el m.o o parte de ellos suspendidos en lquido y la placa
.El examen en fresco generalmente se usa en deteccin de trofozoitos mviles ,parsitos
intestinales ,etc. Ej. candida sp.
Las puedo teir, para teirlas puedo usar Gram o Zielh Neelsen, que son especficos para
micobacterias. Este mtodo de la tincin Gram especficamente , tiene gran importancia
en la taxonoma bacteriana , nos puede indicar caractersticas morfolgicas de una
bacteria y as llegar al agente etiolgico.
Preparaciones en fresco o in vivo:
Las preparaciones al fresco son muy fciles de preparar; se prepara una disolucin
acuosa donde se introduce el microorganismo, se pone una gota en un porta, se tapa con
un cubre y se observa. Se emplean para observar la morfologa de bacterias,
especialmente de espiroquetas. Sirve tambin para observar la movilidad de las bacterias
y para observar cambios citolgicos; mitosis, esporulacin, etc. Tambin sirve para
observar inclusiones (grasas, etc.)
Ejemplos
Suero fisiolgico: demostrar la presencia de Tricomonas y Treponemas.
Solucin de KOH (10%): identificacin de Hongos.
Tinta china: El frotis se hace con la nigrosina; no hay que fijarla (por eso no se considera a
la tinta china como tincin). Nos sirve para observar la cpsula de bacterias, indicadora de
virulencia. Esta tcnica se utiliza principalmente para identificacin del Cryotococcus
Neoformans.

Preparaciones fijadas y teidas:

Las preparaciones fijadas y teidas son las ms utilizadas en Microbiologa por dos
razones:
La tincin facilita la visualizacin de la bacteria
Con varios colorantes clasificamos la bacteria en distintos grupos.
La mayor desventaja es que la bacteria ya est muerta.
-

Deteccin de cidos nucleicos:

PCR:
Este mtodo consiste en la obtencin de fragmentos especficos de ADN o ARN en cortos
periodos de tiempo.
Etapas del proceso:
1. Desnaturalizacin (30 segundos a 95C) Separacin del las hebras de ADN
2. Anillado (Anneal) (30 segundos a 60C) Al disminuir la temperatura, los primer son
capaces de unirse por complementariedad a las hebras de ADN, las cuales se sitan en
cada extremo del enmarcando la secuencia del fragmento a copiar.
3. Extensin o alargamiento (45 segundos a 72C) La polimerasa replica el ADN a partir
de los cebadores unidos a ambas cadenas.
La reaccin de PCR se lleva a cabo en un termociclador, aparato capaz de producir las
temperaturas requeridas
Hibridacin:
El ADN es una estructura de doble cadena que tiene la capacidad des desnaturalizarse
ante el calor, rompiendo los puentes de hidrogeno entre sus base y de aparear estas
cadenas ante la exposicin del frio (re naturalizacin). A partir de esta propiedad es que
se ha creado esta tcnica de diagnostico microbiolgico, ms conocida como hibridacin.
La tcnica consiste en la deteccin de microorganismos. Recordemos que estos cuentan
con su propio cidos nucledo, lo que permite distinguirlos a travs de un fragmento de
acido nucledo sintetizado y marcado, denominado SONDA, que posee una secuencia
complementaria a las secuencias especificas buscada. Esta sonda adems puede ser
marcada con sustancias radioactivas, fluorescente u otros marcadores.
Esta tecnologa puede utilizarse con ventaja en la caracterizacin de aquellos
microorganismos responsables de un brote epidmico, precisando en esa forma su
pertenencia a una misma cepa, as como tambin define la epidemiologa de las
infecciones.
Procedimiento experimental
1. La doble hlice de ADN del microorganismo en estudio es separada mediante un
proceso fsico (calor) o qumico (con una base fuerte).
2. La sonda marcada es aadida junto con las cadenas de ADN.
3. El ADN es enfriado, lo que permite el apareamiento de las bases complementarias.
Este proceso tambin incluye la hibridacin del la sonda con alguna cadena especifica de
ADN
-

Deteccin de exotoxinas

De cada uno describir utilidad y ventajas/desventajas

v-

Inmunocromatografa
Busca la reaccin Ag-Ac utilizando una membrana de nitrocelulosa en donde se
encuentran los anticuerpos especficos. Si la muestra contiene el antgeno problema, se
une al conjugado formando un complejo inmune y migrar a travs de la membrana de
celulosa. Las ventajas de esta prueba son la simplicidad y rapidez.
7.- Mtodo o tcnicas de diagnstico indirecto:
ELISA
Acta de forma similar a la I.F, pero en vez de utilizar como marcador el isotiocianato o
fluorocromo utiliza una enzima, la cual reacciona especficamente con un sustrato y el
resultado es la produccin de color. Esta tcnica detecta una amplia variedad de agentes
infecciosos.
El sistema de deteccin emplea dos anticuerpos: uno primario especfico (de la muestra
del paciente) que acta contra el antgeno y uno secundario anti-anticuerpo conjugado
con la enzima que reacciona con el anticuerpo especfico
ELISA directo para deteccin de antgenos, ELISA indirecto deteccin de anticuerpos
Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
La tcnica se basa en el reconocimiento de los anticuerpos que reconocen estructuras
antignicas celulares nativas. La interaccin se evidencia por medio de un anti.anticuerpo.
Este anti anticuerpo llamado antiinmunoglobulina humano est conjugado o acoplado a
un fluorocromo

Aglutinacin

la reaccin antgeno-anticuerpo se puede detectar y cuantificar por la formacin de una

aglutinacin, en un tubo, plstico o lmina

Western Blot

tcnica analtica usada para detectar protenas especficas en una muestra determinada.
Mediante una electroforesis en gel se separan las protenas atendiendo al criterio que se
desee: peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc. ..