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Vacinas Virais

Jenner e a variolao

Ramss V
1157 a.C.

Varola

A variolao foi desenvolvida na China


Levada para a Europa

Edward Jenner mdico ingls, variolado quando criana, teve sua


ateno voltada para a proteo supostamente presente em ordenhadoras
portadoras de cowpox (varola das vacas).

Em 1796 fez um experimento, utilizando como cobaia o menino James


Phipps, que aps variolao com as leses de cowpox retiradas das mo de
Sarah Nelmes resistiu ao desafio com a varola humana (smallpox).

Vacina um termo derivado do latim, vacca (vaca) e vaccina (vindo da vaca),


consolidado por Pasteur em referncia ao trabalho de Jenner, no qual se baseou
para desenvolver uma vacina de carter experimental contra a bactria
Pasteurella multocida, letal para galinhas (1879).
Pasteur posteriormente desenvolveu a vacina contra a Raiva (1885),
a segunda vacina antiviral da histria.
Ao serem descobertos os vrus, o nome cientfico do cowpox virus
ficou sendo variolae vaccinae.

Porque uma vacina eficiente na preveno


de doenas causadas por microrganismos?
As respostas comearam a vir com o
desenvolvimento da Imunologia.

Imunidade

Imunidade = resistncia a infeces, do latim immunis


Clulas, tecidos e molculas que mediam resistncia = sistema
imune (SI)
Reao coordenada destas = a resposta imune.

SI se baseia no reconhecimento do prprio x no prprio (self x


non-self)
Este reconhecimento observado ao longo da evoluo, a partir de
organismos primitivos como as colnias de esponjas
O SI essencial vida, a falta ou deficincia dele levam doena
ou morte

Imunidade Inata

Barreiras epiteliais
O muco, o suco gstrico, a lisozima presente na saliva e lgrimas, e
a microbiota normal
Se os microrganismos quebram essas barreiras e entram nos
tecidos ou circulao, temos ainda:
Natural Killer (NK)/Macrfagos (fagocitose)
Protenas do plasma e sistema de complemento (ataque ao
envoltrio).
Interferons IFNs alfa e beta, induzem um estado antiviral

- RNAdf ativa 2'5'Oligo A sintetase que converte ATP no polimero 2'5' Oligo A
(contem 2'- 5fosfodiester) que ativa RNAse L, que degrada o RNAviral.
- Uma proteina quinase autofosforilada na presena de RNAdf, e fosforila o
fator de elongao eIF-2 inibindo a sintese proteica.

Imunidade Adaptativa
O sistema imune adaptativo consiste de leuccitos e seus produtos,
anticorpos e citocinas.
Reconhece substncias diferentes, microbianas ou no, estas
substncias so chamadas antgenos.
Os antgenos so ativos se atravessam as barreiras inatas e so
reconhecidos.
Esse reconhecimento ativa mecanismos que so especializados
para combater tipos diferentes de infeces.

Imunidade Humoral

Os anticorpos produzidos por linfcitos B


So secretados na circulao e mucosas
Neutralizam e eliminam microrganismos e toxinas microbianas
no sangue e no lmen de rgos mucosos, assim impedem que
micrbios presentes na mucosa ganhem acesso para colonizar
clulas e tecidos.
Previnem infeces de se estabelecer.

Imunidade Celular
Anticorpos no tm acesso a microrganismos que vivem e se
dividem dentro de clulas infectadas.
A defesa contra tais microrganismos chamada imunidade celular.
Mediada por linfcitos T.
Ativam fagcitos para destruir micrbios.
Os citotxicos matam clulas que esto abrigando
microrganismos no citoplasma.

A imunidade adaptativa pode ser


induzida no indivduo

Por infeco ou vacinao, tambm chamada de imunidade ativa.


A imunidade conferida por transferncia de anticorpos ou linfcitos de
um indivduo ativamente imunizado a outro no imunizado chamada
de imunidade passiva.

Imunidade Passiva
Imunidade passiva til para conferir imunidade rapidamente,
antes do indivduo montar uma resposta ativa
no induz resistncia duradoura infeco
Natural
Anticorpos maternos (leite e placenta)
No natural
Tratamentos mdicos (ex.: soro antiofdico)

Propriedades da Resposta Imune Adaptativa

Especificidade
Discriminao entre o prprio e o no-prprio
Memria

Memria Imunolgica
a capacidade de recordar um contato prvio com uma molcula e
responder a este novo contato de forma mais rpida e ampla.

Aperfeioa a habilidade do SI para combater infeces


persistentes e reincidentes
Ativa clulas de memria previamente geradas.
Cada encontro gera + clulas de memria.
Razes porque vacinas e/ou infeces conferem proteo longa
e duradoura.

Imunogenicidade e adjuvantes
Nem sempre um antgeno ou microrganismo, que se pretende utilizar
como vacina imunognico e seguro.
necessrio elaborar uma formulao vacinal cuja imunogenicidade
pode ser aumentada pela associao de um adjuvante.
Depois de comprovada a imunogenicidade e segurana da formulao
vacinal em modelos animais so feitos testes em humanos.
Os adjuvantes mais comuns em vacinas utilizadas em humanos so os
sais de alumnio (hidrxido e fosfato).
O desenvolvimento de novos adjuvantes, mais potentes e seguros, uma
rea importante em vacinologia (ex.: saponinas, protenas, lipossomos)

Erradicao da varola
A varola uma doena de evoluo rpida, aps duas semanas
de incubao comeam os sintomas, culminando com as
pstulas na pele, e em 30% dos casos (varola major) evoluo
para hemorragia grave e morte.
1805, foi iniciado cultivo do vrus em larga escala no dorso de
bezerros. Em algum momento em meados desse sculo o vrus
vaccnia substituiu o cowpox nesse processo de cultivo.
A vacinao massiva passou a ser aplicada com a perspectiva
de obter uma imunidade de rebanho em toda a populao.

reas endmicas de varola em 1945

A partir de 1966 a OMS lanou a nvel mundial um programa


de conteno para erradicar a varola.
Ser humano o nico hospedeiro do
vrus.
Diagnstico eficiente.
Uma interveno efetiva para interromper
a transmisso era possvel.
Formulao vacinal liofilizada.
Sistema de inoculao eficiente.
A identificao dos casos, e a conteno
da transmisso vacinando os contatos
primrios e seus contatos mostrou-se uma
estratgia eficiente.

Contatos dos Contatos


Contatos com casos

Caso(s)

Ali Maow Maalin ltimo caso em 1977 na Somlia.


Ser?
E os estoques nos freezers dos EUA e Rssia?
Potencial utilizao como arma biolgica.
Conseguiremos repetir a proeza da erradicao para outros vrus?
Tentamos erradicar a Poliomielite e o Sarampo mas falhamos.

Desenvolvimento das vacinas contra a

Poliomielite
Famlia Picornaviridae
Enterovrus

Rinovirus

Hepatovrus

Poliomielite

Mais de 100 sorotipos

Hepatite A

Coxsakie

Causam resfriados.

Echovrus
Causam principalmente
meningites e paralisias.
Propriedades dos picornavrus
Vrion icosadrico, com 27nm.
Genoma um RNA+, infectante com aproximadamente 7.500 bases.

Patogenia dos poliovrus.


A boca a porta de entrada, e a transmisso fecal-oral.
Replicao primria no epitlio da faringe e do intestino.
Partculas no intestino continuam detectveis por semanas.
Anticorpos surgem rapidamente, em torno de cinco dias.
Viremia (vrus no sangue) ocorre entre dois e cinco dias.
Multiplicao nos gnglios linfticos, infeco dos nervos perifricos.
Migrao para o SNC, sendo os nervos motores inferiores o primeiro alvo.

Aps um perodo de incubao de 7 a 14 dias, as manifestaes clnicas podem


ser:
Poliomielite abortiva
Poliomielite no paraltica (meningite assptica, com rigidez e dor na nuca).
Poliomielite paraltica (paralisia resultante da leso dos neurnios motores
inferiores, pode progredir e atingir os centros de controle respiratrio, e levar a
bito).
Existem trs tipos, os plios 1, 2 e 3.
A imunidade tipo-especfica.

Preveno
A preveno da plio mudou radicalmente nas dcadas de 50 e 60 com o
aparecimento de vacinas efetivas, a partir do cultivo desses vrus em clulas.
Salk - inativada por formol.
Estimula imunidade srica.
Sabin viva, atenuada.
Estabilizada por MgCl2 por at um ano a 4C.
Estimula abs IgA de mucosa, alm da imunidade srica pois replica-se no
epitlio intestinal.
A verso trivalente oral a mais utilizada mundialmente.
No processo de atenuao os vrus foram cultivados em linhagens celulares no
humanas e a temperatura mais baixa. A adaptao leva ao acmulo de mutaes
e perda da virulncia.

Caracterstica

Inativada (Salk)

Atenuada (Sabin)

Previne a doena

Sim

Sim

Induz IgG humoral

Sim

Sim

Induz IgA ao nvel intestinal

No

Sim

Permite uma proteo secundria


pela disseminao comunidade

No

Sim

Interfere na replicao do vrus


selvagem no intestino

No

Sim

Reverte virulncia

No

Sim (raramente)

Coinfeco com outros enterovrus


compromete a imunizao

No

Sim

Pode causar doena em indivduos


imunocomprometidos

No

Sim

Via de administrao

Injetvel

Oral

Requer refrigerao

No

Sim

Durao da imunidade

Mais curta

Mais longa

As geraes de vacinas virais

1a gerao
animais
Varola
Raiva

At 1900

2a gerao
ovos embrionados
Febre amarela
Influenza

At 1950

3a gerao
cultura celular

4a gerao
DNA recombinante

Poliomielite
Sarampo
Caxumba
Rubola

Hepatite B
Papiloma
Rotavirus

At 1970

Hoje

Principais vacinas virais em uso

Vacina

Fonte

Tipo

Rota

OBS.

Varola

Linfa de animais

Atenuada

Escarificao
no brao

Erradicada

Febre amarela

Ovos embrionados

Atenuada

Intramuscular

Imunizao
prolongada

Influenza

Ovos embrionados

Inativada

Intramuscular

Em torno de 70% de
eficincia (variao)

Plio

Clulas diplides
Humanas/macacos

Atenuada

Oral

Alta eficcia

Plio

Clulas diplides
Humanas/macacos

Inativada

Intramuscular

Alta eficcia

Sarampo

Clulas de embrio
de galinha

Atenuada

Intramuscular

Rubola

Clulas diplides
Humanas

Atenuada

Intramuscular

MMR (vacina trplice)


Imunizao prolongada
90% de eficincia
MMR
(idem)

Caxumba

Clulas de embrio
de galinha

Atenuada

Intramuscular

MMR
(idem)

Raiva

Clulas diplides
Humanas

Inativada

Intramuscular

Administrada
ps-infeco

Raiva

Crebro de roedores

Inativada

Intramuscular

Entrando em desuso

Hepatite B

Soro humano

Inativada
(subunidade)

Intramuscular

No mais utilizada

Hepatite B

Levedura

subunidade

Intramuscular

Recombinante

Vacina

Fonte

Tipo

Rota

OBS.

Papilomavrus
(6, 11, 16, 18)

Levedura

Subunidade

Intramuscular

Recombinante

Rotavirus

Clulas diplides
Humanas

Oral

Rearranjo de
genomas

Atenuada

The Rotavirus Vaccine Program is a partnership between


PATH, the US CDC, and WHO, funded by the GAVI Alliance.

If we could prevent rotavirus:


We would save the lives of 1,400 children a day.
We would save countries precious human and financial resources.
We would make a difference.
http://www.rotavirusvaccine.org

Calendrios de imunizao
(http://portal.saude.gov.br/portal/saude/profissional/area.cfm?id_area=1448)
:: Calendrio Bsico de Vacinao da Criana
:: Calendrio de Vacinao do Adolescente
:: Calendrio de Vacinao do Adulto e do Idoso
:: Calendrio de Vacinao da Populao Indgena

Manipulando os vrus para obter novas vacinas


Mtodos clssicos
Atenuao
Isolar novas cepas com menor potencial patognico.
Induzir mutaes em laboratrio e selecionar mutantes (Ex.:
termossensveis).
Quando o genoma viral inteiro est clonado e manipulvel, pode ser feita
uma atenuao no clssica pela insero planejada de mutaes.
Inativao
Agentes qumicos (Ex.: formalina), fsicos (Ex.: irradiao) ou mistos (Ex.:
inativao por foto-adutos como psoralenos).
Fracionamento (protenas purificadas a partir de uma cultura do vrus).

Obteno de novas vacinas virais


Vacinas baseadas em protenas recombinantes
Consistem em clonar genes de protenas virais em sistemas de expresso
para obter protenas em grande quantidade:
Bactrias

Leveduras

Baculovrus

H uma grande quantidade em teste, e o exemplo da vacina contra


hepatite B em uso, mencionado anteriormente.
Essas protenas purificadas, alm de serem administradas isoladamente,
tambm podem ser incorporadas em diferentes formulaes vacinais.

Vacinas baseadas em peptdeos sintticos


Peptdeos que contm eptopos de clulas B ou T so
capazes de induzir resposta humoral ou celular.
Devido baixa imunogenicidade devem ser conjugados a
molculas maiores, com propriedades adjuvantes.

Vacinas de DNA
Consistem em clonar genes de protenas virais em plasmdeos bacterianos
sob o controle de cassetes de expresso eucariticos (entre um promotor e
um sinal de poli-adenilao). Aps incorporao pelas clulas do tecido
inoculado esse antgeno expresso e apresentado ao sistema imune.

Mtodos fsicos de entrega de DNA:


Injeo de DNA (vacina de DNA)
Gene gun (canho de genes)

Mtodos qumicos de entrega de DNA:


Neutralizao das cargas do DNA:
-co-precipitao com fosfato de clcio.
- formao de complexos com polmeros
como DEAE-dextran e polilisina.
Lipossomos catinicos
(vetores no virais).

Vacinas de DNA
Tm sido extensivamente testadas em modelos animais com resultados
promissores para uso humano. So capazes de induzir resposta humoral,
mas so mais eficientes na induo de resposta de clulas T.
Regimes mistos de imunizao DNA-protena frequentemente levam a
efeitos sinrgicos de proteo contra desafio pelo vrus em questo.
Exemplos de vrus alvos estudo com vacinas de DNA: HIV, papiloma,
influenza, e outros. Para uso veterinrio j h vacinas de DNA aprovadas
(Ex.: vrus West Nile).

Manipulando os vrus para obter vetores vacinais

Vaccnia e outros pox vrus


Adenovrus humanos e animais
Etc

Vacinas contra HIV