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GROHMANN
NUEVOS TIEMPOS, NUEVOS LDERES, NUEVAS
PERSPECTIVAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUMICA
PRCTICA DE LABORATORIO N
03
ESPECTROFOTOMETRA
PRESENTADO POR
Maryori Thania.
Gmez Mamani,
CDIGO
2014-125030.
CURSO
Bioqumica clnica I.
DOCENTE
AO
3er ao.
FECHA DE ENTREGA
Martes 24 de mayo.
GRUPO DE LABORATORIO :
A.
TACNA-PER
2016
PRCTICA DE LABORATORIO N 03
ESPECTROFOTOMETRA
I. OBJETIVOS:
Desviaciones qumicas:
Desviaciones instrumentales:
2.8. Aplicaciones:
Las aplicaciones principales son:
Determinar la cantidad de concentracin en una solucin de
algn compuesto utilizando las frmulas ya mencionadas;
Ayudar en la determinacin de estructuras moleculares;
La identificacin de unidades estructurales especficas, ya que
estas tienen distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales
o isomeras);
Determinar constantes de disociacin de indicadores cidobase.
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Espectrofotometra
Figura
01:
precipitado
Vaso
Figura
succin
04:
Pera
de
Figura
ensayo
06:
Tubos
de
Figura
09:
milimetrado
Papel
Calculadora
Figura
Espectrofotmetro
3.2. Equipos:
Figura 11:
cientfica
12:
3.3. Reactivos:
Figura
14:
metileno
Azul
de
BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Azul de metileno [ ] = 0,04 mg/ml
380 410 440 470 500 530 560 590 620 65
0
A
3. Completar la tabla de barrido espectral con la ayuda de un
espectrofotmetro.
4. Graficar con los datos obtenidos del barrido espectral.
4.1.2. CURVA DE CALIBRACIN:
5. Realizar una curva de calibracin a partir del barrido espectral.
6. Con los datos obtenidos en el espectrofotmetro, hallar las
diferentes concentraciones de los 5 tubos.
7. Completar la tabla para la curva de calibracin:
Tubos
[ ] mg/ml
A
BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Violeta de Genciana [ ] = 0,00002 g/ml
350
400 450
500 550 600
650
70
0
RECORDAR:
[ ] = gr soluto/ L disolucin = gr/L = mg /ml
No se debe trabajar en g/L ni gr/ml.
V. PRESENTACIN DE RESULTADOS:
BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Azul de metileno [ ] = 0,04 mg/ml
380 410 440 470 500 530 560 590 620 650
Se us:
Espectrofotmetro
Colorante:
410
440
380
0,007
1
0,07
1
0,09
2
BARRIDO ESPECTRAL
Azul de metileno [ ] = 0,04 mg/ml
470
500
530
560
590
620
0,14
0
0,21
1
0,35
1
0,65
2
0,95
3
0,92
3
650
0,77
6
Tubo
1
Tubo
2
Tubo
3
Tubo
4
Tubo
5
Procedimiento
Se disolvi las disoluciones
siempre
de
menor
concentracin
a
mayor
concentracin.
Respecto
al
barrido
espectral, se obtuvo como
longitud de onda del Azul de
Metileno a 590 nm, y a esta
longitud de onda se midi
los 5 diferentes tubos para
hallar su absorbancia, todo
esto en diferentes cubetas
para el espectrofotmetro.
1ml
3ml
5ml
7ml
9ml
de
de
de
de
de
AM
AM
AM
AM
AM
Las soluciones se completaron
hasta 10 ml con agua destilada.
Luego estas disoluciones se fueron
agregando a 5 diferentes cubetas
0,038
0,449
0,594
0,843
1,050
Soluci
ones:
Hallar
C2
para
cada
tubo.
Tubo 1
V1=1 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C
2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(1ml.0,
04mg/ml)/1
0ml
C2=0,004
mg/ml
Tubo 2
V1=3 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(3ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,012
mg/ml
Tubo 3
V1=5 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(5ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,020
mg/ml
Tubo 4
V1=7 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(7ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,028
mg/ml
Tubo 5
V1=9 ml
V2=10 ml
C1=0,04
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C
2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(9ml.0,
04mg/ml)/
10ml
C2=0,036
mg/ml
1
0,004
0,038
2
0,012
0,449
3
0,020
0,594
4
0,028
0,843
5
0,036
1,050
C2=0,005 mg/ml
Entonces 0,005 mg/ml sera la concentracin de la disolucin del
matraz de 100 ml, la cual llamaremos Disolucin A.
Para hallar el barrido espectral; se tom 1,5 ml de la Disolucin A en
tubo de ensayo.
BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Violeta de Genciana [ ] = 0,005 mg/ml
350
400 450
500 550 600
650
4. Se llen la tabla
espectrofotmetro.
de
barrido
espectral
con
la
ayuda
700
de
un
Se us:
Violeta de Genciana [ ] = 0,005
mg/ml
Espectrofotmetro
BARRIDO ESPECTRAL
Colorante: Violeta de Genciana [ ] = 0,005 mg/ml
350
400
450
500
550
600
650
0,028 0,03 0,055 0,13 0,22 0,204 0,040
5
1
4
700
0,015
Tubo
1
Tubo
2
Tubo
3
Tubo
4
Tubo
5
Procedimiento
Se disolvi las disoluciones
siempre
de
menor
concentracin
a
mayor
concentracin.
Respecto
al
barrido
espectral, se obtuvo como
longitud de onda de la VG a
570 nm, y a esta longitud de
onda
se
midi
los
5
diferentes tubos para hallar
su absorbancia, todo esto
en diferentes cubetas para
el espectrofotmetro.
1ml
3ml
5ml
7ml
9ml
de
de
de
de
de
AM
AM
AM
AM
AM
Las soluciones se completaron
hasta 10 ml con agua destilada.
Luego estas disoluciones se fueron
agregando a 5 diferentes cubetas
para luego hallar sus diferentes
absorbancias
espectrofotmetro.
en
el
Resultados:
Tubos
[ ] mg/ml
A
0,053
0,0,72
0,099
0,130
0,154
Soluc
iones
Tubo 1
V1=1 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(1ml.0,
005mg/ml)
/10 ml
C2=0,0005
mg/ml
Tubo 2
V1=3 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C2
C2=(V1.C1)/V
2
C2=(3ml.0,0
05mg/ml)/1
0 ml
C2=0,0015
mg/ml
Tubo 3
V1=5 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(5ml.0,
005mg/ml)
/10 ml
C2=0,0025
mg/ml
Tubo 4
V1=7 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.
C2
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(7ml.0,
005
mg/ml)/10
ml
C2=0,0035
mg/ml
Tubo 5
V1=9 ml
V2=10 ml
C1=0,005
mg/ml
C2= ?
V1.C1=V2.C
4
0,0035
0,130
5
0,0045
0,154
C2=(V1.C1)/
V2
C2=(9ml.0,
005
mg/ml)/10
ml
C2=0,0045
mg/ml
1
0,0005
0,053
2
0,0015
0,0,72
3
0,0025
0,099
VII. CONCLUSIONES:
Se
Se
Se
Se
VIII. BIBLIOGRAFA:
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometra
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wpcontent/uploads/2010/08/TP-ESPECTROFOTOMETRIA.pdf
http://copro.com.ar/Azul_de_metileno.html
http://www.feriadelasciencias.unam.mx/anteriores/feria22/feria316_0
1_degradacion_de_colorantes_azul_de_metileno_por_rea.pdf
IX. CUESTIONARIO:
7.1. Para qu sirve la curva de calibracin?
Se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un
carcter medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de
espectrofotometra) y la variable a determinar (concentracin). Para
Datos
A= 0,420
[]= ?
L= 1cm
E= 30,10 cm-1 x ml/mg
A=e.l.c
C= (A)/(e.l)
C= (0,420) / (30,10 cm-1 x ml/mg x 1
cm)
C= 0,014 mg/ml
Problema a parte
Datos
Solucin
A= 0,449
A=e.l.c
[]= ? Por datos
C= (A)/(e.l)
experimentales es 0,012
C= (0,449) / (30,10 cm-1 x ml/mg x 1
L= 1cm
cm)
-1
E= 30,10 cm x ml/mg
C= 0,015 mg/ml
Matemticamente se observa cmo
debi ser.
Con el dato experimental se hubiese
encontrado un mal coeficiente de
absortividad molar:
E= (0,449) / (1cm x 0,012 mg/ml)
E= 37,40
X. ANEXO:
GRFICA 01: BARRIDO ESPECTRAL DEL AZUL DE METILENO [ ] =
0,04 mg/ml