ENZIMAS

ASPECTOS GENERALES

Reacciones qumicas en los seres vivos

estn catalizadas por enzimas.
Catalizadores especficos: Un solo tipo de
reaccin, y casi siempre acta sobre un
nico sustrato o sobre un grupo muy
reducido de ellos.

Enzima + Sustrato

Complejo Enzima-Sustrato

Enzima + Productos

ASPECTOS GENERALES
Sustancia sobre la que acta la enzima
sustrato.
El sustrato se une a una regin concreta de la
enzima centro activo.
1. Sitio de unin Aminocidos que estn en
contacto directo con el sustrato
2. Sitio cataltico Aminocidos directamente
implicados en el mecanismo de la reaccin
Una vez formados los productos la enzima puede
comenzar un nuevo ciclo de reaccin

1.- La enzima y su
sustrato

2.- Unin al centro activo

3.- Formacin de productos

PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Protenas que actan como catalizadores.

Altamente especficas
Se requieren pequeas cantidades para lograr la
reaccin
Punto de saturacin determina la velocidad
mxima
Cambios en la conformacin cambios en la
actividad cataltica debido a factores que afectan
la reaccin.

ALTA
ESPECIFICIDAD
DE REACCIN
INTERACCIN
ESTEREO
ESPECFICA
CON SU
SUSTRATO

REGULACIN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA

Una enzima no acta siempre a la misma

velocidad. Su actividad puede modularse por:
cambios en el pH
cambios en la temperatura
presencia de cofactores
concentraciones del sustrato y de los
productos finales
presencia de inhibidores
modulacin alostrica
modificacin covalente
activacin por protelisis
isoenzimas

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

Enzimas grupos qumicos ionizables (carboxilos COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las
cadenas laterales de sus aminocidos.

Segn el pH del medio carga elctrica positiva,

negativa o neutra.

Conformacin de protenas cargas elctricas pH

en el cual la conformacin ser la ms adecuada para
la actividad cataltica = pH ptimo.

EFECTO DEL pH SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Generalmente sensibles
a cambios de pH.
Pequeas desviaciones
(dcimas) del pH ptimo
pueden afectar su actividad
drsticamente.
Los seres vivos amortiguadores
fisiolgicos.

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD

ENZIMTICA

EFECTO DE LA TEMPERATURA
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Aumentos de temperatura aceleran reacciones qumicas*:

C/ 10C de incremento, la velocidad de reaccin se
duplica.

Las enzimas protenas: se denaturan por calor a partir

de cierta temperatura.

Temperatura ptima: T a la cual la actividad cataltica es

mxima. Por encima de esta temperatura, la velocidad de
rx es contrarrestada por prdida de actividad cataltica por
desnaturalizacin trmica la actividad enzimtica
decrece rpidamente hasta anularse.

EFECTO DE LOS COFACTORES

SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Cofactores: Grupos prostticos y coenzimas

unidos covalentemente a la enzima. 1/3 de las
enzimas conocidas requieren cofactores.

Coenzimas: Molculas orgnicas derivadas de las

vitaminas, transfieren grupos.
Grupos prostticos : Sustancias no proteicas que
colaboran con la funcin enzimtica. Iones
inorgnicos Fe++, Mg++, Mn++, Zn++ ...

EFECTO DE LOS COFACTORES

SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Holoenzima: Forma catalticamente activa de la

enzima. Enzima unida a su grupo prosttico.
La parte proteica de una holoenzima (inactiva) se
llama apoenzima.

Apoenzima + Cofactor = Holoenzima

EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES

SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una rx enzimtica concentracin

de sustrato.
La presencia de los productos finales puede hacer
que la reaccin sea ms lenta, o invierta su sentido.

INHIBIDORES ENZIMTICOS

IRREVERSIBLES: Genera la inactivacin inminente de la

enzima, se usan en farmacologa y tratamientos para
diferentes patologas.

ORGANOFOSFORADOS -/ ACETILICOLINESTERASA

REVERSIBLES: Hay de tres tipos:

- Competitivo
- No competitivo
- Acompetitivo

Inhibidor Irreversible
Fluorofosfato
de diisopropilo (DFP)

Acetilcolina

Acetilcolinesterasa

Acetato + Colina

EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE

LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Inhibidores: Molculas que impiden o disminuyen la

accin cataltica de un enzima.
inhibidor competitivo: Ocupa temporalmente el centro
activo por semejanza estructural con el sustrato original
inhibidor no competitivo: Altera la conformacin
espacial de la enzima, impidiendo su unin al sustrato
Inhibidor acompetitivo: Favorece la unin E-S pero
inhibe la liberacin del producto

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Activadores alostricos: Molculas que actan en la

enzima sobre una regin diferente al centro activo,
aumentan afinidad por el sustrato.

MODULACIN ALOSTRICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Inhibidores alostricos: Modifican la protena,

disminuye la afinidad E-S aumenta Km.

AB
AB+CD

B inhibe su propia sntesis

B inhibe A y C la potencia

Disminuye afinidad por el sustrato

EFECTO DE LA MODIFICACIN
COVALENTE SOBRE LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA

Enzimas: forma menos activa forma ms activa

mediante uniones covalentes a un grupo qumico
pequeo (Pi, AMP).
Enzima muy activa se desactiva al liberar algn grupo
qumico.
Vas degradativas del metabolismo: Fosforilada > no
fosforilada.
Vas biosintticas: No fosforilada > fosforilada.
Enzima activa

ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Proenzimas o zimgenos:
Se sintetizan inicialmente
como protenas precursoras
sin actividad enzimtica, para
activarse ataque hidroltico
liberando uno o varios
pptidos.
El resto de la molcula
proteica adopta conformacin
y propiedades del enzima
activo.

ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA

Enzimas digestivas* se secretan como

zimgenos y en el tubo digestivo se convierten
en la forma activa.
Tripsina pancretica (una proteasa)
tripsingeno (inactivo). Si se activa en el propio
pncreas, la glndula sufre un proceso de
autodestruccin (pancreatitis aguda), a
menudo mortal.

ISOENZIMAS

Isoformas de las enzimas que catalizan las

mismas reacciones.
Codificadas por genes homlogos que han
divergido con el tiempo o por diferentes genes

Las Aloenzimas representan enzimas de

diferentes alelos de un mismo gen
* Los dos trminos de forma incorrecta se suelen
usar indistintamente.

ENZIMAS MULTIFUNCIONALES

ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Enzima con varias subunidades catalizadoras, cada
una cuenta con su sitio activo.
Regiones bien definidas, con actividad
independiente, que realizan una reaccin qumica
especifica.
Vas de reaccin:

* Secuencia aleatoria y ordenada

* Secuencia de ping-pong

VIAS DE REACCIN EN LAS

ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Aleatoria y Ordenada

VIAS DE REACCIN EN LAS

ENZIMAS MULTIFUNCIONALES
Ordenada tipo ping - pong

NOMENCLATURA DE LAS
ENZIMAS

Diferentes formas de nombrarlas:

* nombre particular: personas o eventos

relacionadas con su desarrollo.
* nombre sistemtico: Sustrato, tipo de
reaccin, terminacin asa
* cdigo de la Comisin Enzimtica
(Enzyme Comission): Numeracin,
Clases, subclases y grupo qumico.

NOMBRES PARTICULARES

Antiguamente, las enzimas reciban

nombres particulares, asignados por su
descubridor. Al ir aumentando el nmero
de enzimas conocidos, se hizo necesaria
una nomenclatura sistemtica que
informara sobre la accin especfica de
cada enzima y los sustratos sobre los que
actuaba.

NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA

El nombre de cada enzima se identifica por un

cdigo numrico, encabezado por las letras EC
(enzyme commission), seguidas de cuatro
nmeros separados por puntos.

Primer nmero indica a cual de las seis clases

pertenece la enzima.
Segundo nmero se refiere a distintas
subclases dentro de cada grupo

NOMENCLATURA DE LA
COMISIN ENZIMTICA

Tercero y cuarto se refieren a grupos

qumicos especficos que intervienen en la
reaccin.
ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa)
se define como EC 2.7.1.2. El nmero 2
indica que es una transferasa, el 7 que es una
fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es
un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un
OH de la D-glucosa el que acepta el grupo
fosfato.

NOMBRE SISTEMTICO
El nombre consta de 3 partes:
* el sustrato preferente
* el tipo de reaccin realizado
* terminacin "asa

La glucosa fosfato isomerasa que cataliza la isomerizacin

de la glucosa-6-fosfato en fructosa-6-fosfato.

Enzimas catalizan reacciones reversibles.

No hay una manera nica para fijar cual de los dos

sentidos se utiliza para nombrar la enzima.
* La glucosa fosfato isomerasa tambin podra llamarse
fructosa fosfato isomerasa.

CLASIFICACIN DE LAS
ENZIMAS
En funcin de su accin cataltica
especfica:
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Clase 2: TRANSFERASAS
Clase 3: HIDROLASAS
Clase 4: LIASAS
Clase 5: ISOMERASAS
Clase 6: LIGASAS

Clase 1: OXIDORREDUCTASAS

Catalizan reacciones de oxidorreduccin:

transferencia de hidrgeno (H) o electrones
(e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin
general:
AH2 + B
A + BH2

* Succinato deshidrogenasa Citocromo C

oxidasa

Clase 2: TRANSFERASAS

Catalizan la transferencia de un grupo

qumico (distinto del hidrgeno) de un
sustrato a otro, segn la reaccin:
A-B + C

* Glucoquinasa

A + C-B

Clase 3: HIDROLASAS

Catalizan las reacciones de hidrlisis:

A B + H 2O

* Lactasa

AH + B-OH

Clase 4: LIASAS

Catalizan reacciones de ruptura o soldadura

de enlaces covalentes en los sustratos:
A-B
A+B

* Acetacetato descarboxilasa

Clase 5: ISOMERASA

Catalizan la interconversin de ismeros:

A
B

* Fosfotriosa isomerasa y la fosfoglucosa

isomerasa

Clase 6: LIGASAS

Catalizan la unin de dos sustratos con

gasto simultneo de un nucletido
trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP

* Piruvato carboxilasa

A-B + XDP + Pi

MECANISMOS CATALTICOS

Determina la intensidad del metabolismo

asimila o no asimila sustancias. Proceso en el
que aumenta la velocidad a la que una reaccin
llega a su equilibrio.

cido Base
Covalente
Electrosttica
Orientacin y aproximacin
Transicional
Por Iones metlicos

MECANISMOS CATALTICOS

cido Base: La transferencia de un donador

de protones (cido) disminuye la energa libre
de una reaccin. Bioqumicamente comn.
Hidrlisis de steres y pptidos, grupos PO4,
adicin de carbonilo.
Covalente: Entre el sustrato y la enzima se
forma un enlace covalente.
Descarboxilacin qumica de acetoacetato.

MECANISMOS CATALTICOS

Electrosttica: Eliminacin de agua

interaccin E+S, el sitio activo de la enzima es
no polar

Orientacin y aproximacin: Caractersticas

isostricas de la enzima efectos no regulables

Transicional: Depende de la afinidad entre E y

S. Catlisis temporal.

MECANISMOS CATALTICOS

Iones metlicos: 30% de las enzimas.

Metaloenzimas iones metlicos unidos
fuertemente (Fe++, Cu++, Zn++, Mg++, Co++).
Iones en solucin unidos dbilmente ( Na+, K+,
Ca++).

Mecanismos:
*Enlace con S para orientarse adecuadamente.
*Redox con participacin del metal.
*Atraen cargas del S, neutralizndolo y
estabilizando la reaccin.

CINTICA ENZIMTICA

Los principios generales de las reacciones

qumicas se aplican tambin a las reacciones
enzimticas.

Cintica enzimtica
Modelo cintico de Michaelis-Menten
Clculo de la Km y la Vmax de un enzima
Actividad enzimtica

MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS

El comienzo de la reaccin requiere un

aporte inicial de energa energa de
activacin (Ea).

Si es menor la Ea requerida ms fcilmente

transcurre la reaccin.

MODO DE ACCIN DE LAS ENZIMAS

Reaccin con catalizador y sin catalizador

CINTICA ENZIMTICA
Estudia la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas
Mecanismo de reaccin
y especificidad de la enzima.

ALTA ESPECIFICIDAD DE
REACCIN
INTERACCIN
ESTEREO ESPECFICA
CON EL SUSTRATO

CINTICA ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin catalizada por una

enzima puede medirse fcilmente*, no es
necesario purificar o aislar el enzima, utilizando
condiciones ptimas.

V mx, puede determinarse midiendo la aparicin

de los productos o la desaparicin de los
reactivos.

CINTICA ENZIMTICA

CINTICA ENZIMTICA

Curva de avance de la reaccin aparicin de

producto o de desaparicin del sustrato, en
funcin del tiempo

A medida que la reaccin transcurre, la velocidad

de acumulacin del producto va disminuyendo
porque se va consumiendo el sustrato de la
reaccin.

Determinacin Cuantitativa de la
Cintica Enzimtica
1. La reaccin global
2. Procedimiento analtico para determinar el S que
desaparece o el P que aparece
3. S la E requiere Cofactores (ines o coenzimas)

4. La dependencia de la actividad enzimtica con la [S] o

se la KM del S.
5. El pH ptimo
6. Un intervalo de temperatura en la que la E es estable
y muestra actividad elevada.

MODELO CINTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Estudios del efecto de la concentracin

inicial del sustrato sobre la actividad
enzimtica finales del siglo XIX.
1882 introduccin del concepto complejo
enzima-sustrato
1913 Leonor Michaelis y Maud Menten
explican el comportamiento cintico de las
enzimas.

MODELO CINTICO :MICHAELISMENTEN

MODELO CINTICO :MICHAELIS-MENTEN

Vo = Vmax. Los sitios

estn ocupados y no hay
Enzima libre = saturacin
al 100%
Si la saturacin es 50%. Vo = 1/2 Vmax
Km + [S] = 2 [S]

Km = [S]

Km = Cantidad de sustrato necesaria para fijarse a

la mitad de enzima produciendo la mitad de la
velocidad mxima

Cintica enzimtica en funcin de la

concentracin de sustrato

La Km es un parmetro de Actividad
Enzimtica

La Km es inversamente proporcional con

la actividad de la enzima.

Valor de Km grande, baja actividad

Valor de Km pequeo, alta actividad

Km de algunas enzimas
ENZIMA
Catalasa

SUSTRATO
H2O2

Hexoquinasa

Anhidrasa carbnicoa
Quimotripsina

Km (mM)
25.0

ATP

0.4

D-Glucosa

0.05

D-Fructosa

1.5

HCO3-

9.0

Gliciltirosinilglicina

108.0

N-Benzoiltirosinamida

2.5

-Galactosidasa

D-Lactosa

4.0

Treonina deshidrogenasa

L-Treonina

5.0

ENZIMAS EN CLNICA
Anlisis de patologas en suero, saliva, lquido
cefaloraqudeo,
orina,
semen

detectan
alteraciones en diferentes rganos
Enzimas plasmticas
*Especficas: [mayor en suero]
*No especficas: Su funcin no es en plasma
-De secrecin: glndulas exocrinas (pncreas)
-Metabolismo intermediario:[alta] por necrosis

MARCADORES ENZIMTICOS
Diagnstico para actividad enzimtica especfica en
el organismo.

Las patologas pueden alterar la accin enzimtica.

Se realiza combinando la enzima con su sustrato
para monitorear el resultado, que se reporta como
porcentaje de la actividad enzimtica normal.

MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores
hepticos:
Dao
hepatocelular,
obstruccin renal liberacin enzimtica a suero.
*[elevada] por alteracin celular heptica, cirrosis
-Alanino aminotransferasa
-Aspartato aminotransferasa
-Deshidrogenasa lctica
-Glutamiltransferasa

-Fosfatasa alcalina
-Glutatin sulfurotransferasa

MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores pancreticos: descarta pancreatitis
aguda.
-Amilasa: Digestin de CH, 7 isoformas
-Lipasa: Rin y pncreas. [insuficiencia renal]

-Tripsina: Pancreatitis aguda

Marcadores cardiacos: deteccin inmediata de

IAM (infarto agudo al miocardio)
-Deshidrogenasa lctica
-Aspartato Aminotransferasa
-Creatinfosfokinasa (CPK) isoformas

MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores
musculares.

musculares:

Distrofias musculares,
hipotiroidismo, HM.

Valora

transtornos

afecciones
metablicos,

- CPK: muy sensible.

Marcadores seos: Valorar funcin de clulas
seas.
- Fosfatasa alcalina / isoenzima sea: placenta,
hgado, hueso y bazo cambios en la funcin sea
y heptica

MARCADORES ENZIMTICOS EN
SUERO
Marcadores renales: Dao renal temprano.
- Glutatin-s-transferasa: Enzimas detoxificantes.
Rin, hgado, pulmn, glndulas suprarenales,
testculos, placenta, eritrocitos.
Marcadores tumorales: Detectar cncer.
-Deshidrogenasa lctica
-Fosfatasa alcalina