Exprience2Prparationdesolutionsetspectrophotomtrie

Prparation de solutions et
spectrophotomtrie
Objectif gnral :
Dterminer la concentration d'une solution par spectrophotomtrie.
Objectifs spcifiques :
Dterminer le mode de prparation de solutions partir d'une solution plus concentre.
Utiliser correctement une pipette, une fiole jauge et un spectrophotomtre.
Dterminer la longueur d'onde optimale pour des mesures d'absorbance.
Tracer une courbe d'talonnage.
Dterminer graphiquement une grandeur physique par interpolation sur une courbe
d'talonnage ou laide de lquation de la droite.

La thorie

La mesure de labsorbance

Lorsqu'un solut donne une coloration une solution, il est possible d'en dterminer la
concentration par l'utilisation d'un spectrophotomtre. Si, par exemple, la solution a une couleur
jaune, cela signifie que la substance en solution absorbe la couleur complmentaire du jaune, cest-dire le bleu. La longueur donde o labsorption sera la plus importante se situera donc dans la
rgion du bleu (415 480 nm). Il en va de mme pour les autres couleurs. Il faut donc auparavant
procder une analyse spectrale du compos color en le soumettant diffrentes longueurs
donde afin de dterminer la longueur donde qui correspond une absorption maximale.
Un spectrophotomtre est un appareil qui permet de slectionner une longueur donde
spcifique et dy soumettre un chantillon color. Si lchantillon absorbe la longueur donde
choisie, on pourra le mesurer et relier cette valeur la concentration de la substance en solution
car il existe une relation quantitative entre lintensit de labsorption lumineuse et la concentration
dune solution. Le schma qui suit rsume le fonctionnement de lappareil.
Schma interne de base dun spectrophotomtre
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Filtre

Il existe divers appareils plus ou moins sophistiqus permettant dobtenir les spectres
UVvisibles des substances. Certains permettent de travailler dans les deux rgions spectrales,
alors que dautres fonctionnent seulement dans le visible. Les composantes principales de ces
appareils sont :

la source lumineuse, diffrente selon que lon travaille dans le visible (une lampe au
tungstne) ou dans lUV (gnralement, une lampe la vapeur de deutrium) ;
lanalyseur, dont la fonction est de dcomposer la lumire en ses diffrentes longueurs
donde, qui peut tre un prisme, mais plus gnralement, un rseau de diffraction ;
un puits permettant de placer lchantillon dans le parcours du faisceau lumineux ;
un dtecteur qui traduit la puissance lumineuse lui parvenant en signal lectrique ;
des cellules (ou cuvettes sur le schma), petites prouvettes contenant les solutions dont on
veut mesurer labsorption ; ces cellules, en quartz ou en verre, de dimensions trs prcises,
sont introduites dans le puits.

Le spectrophotomtre mesure ainsi labsorbance (A) dune solution, cest--dire le logarithme

du rapport entre lintensit de la lumire avant (Io) et aprs (I) la traverse de lchantillon.
Labsorbance est relie la concentration de lchantillon par la relation de Beer-Lambert :

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A = l c

A = log

Io
I

A : labsorbance de la solution
c : la concentration de lchantillon, en mol/L
l : lpaisseur de la solution traverse par le faisceau lumineux
: le cfficient dabsorption molaire (ou cfficient dextinction
molaire)

Io : lintensit de la radiation incidente

I : lintensit de la radiation mise

On constate que la premire quation est celle dune droite passant par lorigine (y = mx), de
pente gale l. Pour un dosage donn, l est maintenu constant et lest galement, puisque ces
paramtres sont fonction de la nature de la molcule absorbante, du solvant utilis et de la
longueur donde de travail, tous ces facteurs tant maintenus constants au cours dune mme
analyse.
En thorie, si on connat la valeur de pour une substance, dans des conditions donnes, on peut
dduire par interpolation la concentration dune solution par la mesure de labsorbance
correspondante.
Courbedtalonnage

En pratique, il est prfrable de tracer la courbe

dtalonnage, cest--dire la courbe de labsorbance en
fonction de la concentration (A =f(c)) mesure pour
plusieurs solutions talon (des solutions dont on connat
trs prcisment la concentration) et den dduire, par

A
A

interpolation, la concentration des solutions analyser

(voir la figure ci-contre ). Lorsquon utilise le logiciel
Excel pour tracer la courbe, on peut facilement dterminer
concentration en utilisant labsorbance mesure et
lquation de la droite dtermine par le logiciel.

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ce

c(mol/L)

A=absorbancedelchantillon

c=concentrationdelchantillon

la

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La prparation des solutions talon

La solution qui servira prparer, par dilution, les solutions talon est appele solution
mre. Pour prparer une dilution, il sagit de mesurer un volume de solution mre qui contient le
nombre de moles (n) de solut quon veut retrouver dans la solution dilue, puis dajouter
suffisamment de solvant pour obtenir le volume de solution dilue dsir. Ainsi,
nconc = ndil
Dans cette exprience, la solution mre aura une concentration de 0,500 mol/L. On
prparera cinq solutions talon, dont la concentration s'talera de 0,0200 0,0600 mol/L. Sachant
qu'il faudra 50 mL de chacune de ces solutions, on pourra calculer le volume ncessaire de
solution mre en appliquant l'quation suivante, qui dcoule de lquation prcdente :
cconcVconc = cdilVdil
Par exemple, pour prparer 50 mL dune solution dilue 0,0100 mol/L partir de la
solution mre, on utilise la formule ainsi :
Vconc =

c dilVdil 0,0100 mol /L 50 mL

=
= 1,0 mL
c conc
0,500 mol /L

Donc, pour obtenir 50 mL de solution dilue 0,0100 mol/L, il suffit de mesurer

pipette approprie, 1,0 mL de solution mre et de transfrer ce volume
prcisment, laide dune
dans une fiole jauge de 50 mL. En ajoutant de leau distille jusqu la jauge et en agitant le tout
convenablement, on obtient la solution dsire (voir la dmonstration par le professeur).
Afin d'obtenir le meilleur rsultat possible, le spectrophotomtre met un faisceau lumineux
monochromatique, c'est--dire compos d'une seule longueur d'onde ; le faisceau possde donc
une couleur qui lui est propre. Comme on la mentionn plus haut, on choisit la couleur
complmentaire du solut, car c'est pour cette couleur que l'absorbance est maximale. Pour le
sulfate cuivrique (CuSO4), qui est de couleur bleue, l'absorbance est donc maximale une
longueur d'onde qui correspond une couleur rouge. Afin de dterminer cette longueur d'onde, il
faudra d'abord mesurer l'absorbance dans la rgion du spectre visible proche du rouge (de 640
920 nm) ; la longueur d'onde optimale sera celle laquelle l'absorbance mesure est la plus grande.

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Pour prparer adquatement lexprience, on doit calculer lavance le volume de

solution mre requis pour la prparation de chacune des solutions talon dans le but dobtenir les
concentrations indiques au tableau qui suit et le complter avec les rsultats obtenus.
Donnes ncessaires la prparation des solutions talon
Concentration en sulfate cuivrique des solutions
talon (mol/L)

Volume de solution mre ncessaire la

prparation des solutions talon (mL)

0,0200
0,0300
0,0400
0,0500
0,0600
volume des solutions talon prparer : (50,00 0,02) mL
concentration de la solution mre de sulfate cuivrique : 0,500 mol/L

Les manipulations effectuer

a) prparation des solutions talon
Prparer les solutions talon en utilisant des fioles jauges de 50 mL et une pipette gradue
approprie pour prlever les quantits pralablement calcules de solution mre.

b) analyse spectrale
1. Ajuster la longueur d'onde 640 nm sur le spectrophotomtre.
2. Calibrer le spectrophotomtre : verser du solvant (de l'eau distille ici) dans une cuvette et
ajuster l'appareil 0 en appuyant sur le bouton appropri (attendre la dmonstration par le
professeur) ; cette opration informe le spectrophotomtre que la solution se trouvant
dans l'appareil cet instant possde une absorbance de 0 (ce qui correspond une
concentration de 0 mol/L, puisqu'il s'agit du solvant pur).
3. Verser la solution talon la plus concentre dans une cuvette jusqu' environ 1 cm du bord
et mesurer l'absorbance de cette solution.
4. Augmenter la longueur d'onde de 20 nm.
5. Rpter les tapes 2 4 jusqu' une longueur d'onde de 920 nm. Noter les valeurs
mesures dans le tableau ci-dessous, ainsi que leurs incertitudes :

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Absorbance du sulfate cuivrique en fonction de la longueur donde

longueur donde

absorbance

longueur donde

absorbance

(nm)

(s.u.)

(nm)

(s.u.)

640

800

660

820

680

840

700

860

720

880

740

900

760

920

780
concentration de la solution de sulfate cuivrique : 0,500 mol/L
6. Dterminer la longueur d'onde optimale (i.e. celle qui procure la plus grande absorbance).
Longueur d'onde optimale : ________________________

c) courbe dtalonnage
1. Ajuster l'appareil la longueur d'onde optimale et mesurer l'absorbance des solutions
talon, en utilisant chaque fois la mme cuvette. Noter les valeurs obtenues et lincertitude.
Absorbance du sulfate cuivrique en fonction de sa concentration
concentration du sulfate
solution
absorbance (s.u.)
cuivrique (mol/L)
talon 1

0,0200

talon 2

0,0300

talon 3

0,0400

talon 4

0,0500

talon 5

0,0600

inconnue
longueurdondedabsorbancemaximale=

2. Verser de la solution inconnue dans la mme cuvette, mesurer et noter son absorbance.
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Le compte-rendu
N.B. des fins dapprentissage, ce compte-rendu fera exceptionnellement lobjet dun atelier de
rdaction pour que les tudiants se familiarisent avec les normes de prsentation des tableaux et
des graphiques (voir en annexe) ainsi quavec lutilisation du logiciel Excel. Cet atelier aura lieu
une semaine aprs le laboratoire et se droulera selon les indications du professeur.
1. Construire un tableau prsentant les donnes relatives la prparation des solutions
talon : le volume de solution mre utilis, sa concentration, la concentration des solutions
talon prpares et leur volume.
2. Construire un tableau prsentant les valeurs de longueur d'onde et d'absorbance de la
solution utilise pour la dtermination de la longueur d'onde optimale.
3. Construire un tableau prsentant la concentration et l'absorbance des solutions talon et de
la solution inconnue ainsi que la longueur d'onde laquelle les mesures ont t prises.
4. Tracer un graphique de l'absorbance en fonction de la longueur d'onde de la solution
utilise pour la dtermination de la longueur d'onde optimale.
5. Tracer une courbe d'talonnage ; elle doit inclure la dtermination de la concentration de
la solution inconnue, i.e. les valeurs numriques de son absorbance et de sa concentration
de mme que les pointills les reliant.
6. Montrez les calculs effectus pour dterminer les volumes de solution mre utiliss pour
prparer les solutions talon.

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