AO DE LA INVERSIN PARA EL

DESARROLLO RURAL Y LA
SEGURIDAD ALIMENTARIA

UNIVERSIDAD NACIONAL
DE PIURA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE
CIENCIAS BIOLGICAS

Informe N 2
Bioqumica de la Familia
Micrococcus y Staphylococcus
CURSO

Microbiologa de Alimentos

ALUMNA :

Lily Vernica Cerna Vega

DOCENTE

Mcblgo. Jaime Fernndez Ponce

PIURA, Febrero del 2013

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

La familia Micrococcaceae comprende cocos Gram positivos, no

exigentes, catalasa positivos, con agrupacin en racimos, aerobios o
anaerobios facultativos. De los tres gneros que la integran,
Micrococcus, Planococcus y Staphylococcus, este ltimo es de
importancia mdica. Se caracterizan por ser aerobios o anaerobios
facultativos, capaz de fermentar la glucosa en anaerobiosis; poseer
cidos teicoicos en su pared, y ser sensible a la enzima lisostafina.
Dentro del gnero Staphylococcus se conocen ms de 20 especies,
de las cuales S. aureus es la ms importante; otras tambin como S.
epidermidis y S. saprophyticus son actualmente reconocidas como
capaces de actuar como patgenos bajo determinadas circunstancias
(Chans, 2002).

1.
2.
4.
5.
6.
7.

Los distintos tipo de micrococos son interesantes por las siguientes

caractersticas:
Ciertas especies son capaces de utilizar las sales amnicas y
otros compuestos nitrogenados simples como nica fuente de
nitrgeno.
la mayora de las especies fermentan los azcares, produciendo
cantidades moderadas de cido.
3. algunos son cidos proteolticos (M. Freudenreichii).
otros toleran gran cantidad de sal, creciendo por lo tanto a
niveles de humedad bajo; estas especies se desarrollan en salmueras
de curado de carnes, tanques de salmuera, etc.
muchos son termodricos, es decir, resisten la pasteurizacin
comercial de la leche (M. Varians).
otros son pigmentados y dan una coloracin anormal a las
superficies de los alimentos sobre los que crecen; M. Luteus, por
ejemplo, es amarillo y M. Roseus, rosa.
ciertos micrococos crecen bien a temperaturas alrededor de 10
C o incluso ms bajas.
Los micrococos son muy abundantes en la naturaleza, vindose
aislado mas frecuentemente del polvo y del agua. A menudo se
encuentra en utensilios y equipos usados en alimentacin que no han
sido adecuadamente limpiados e higienizados (Guerci, 1985).
Los Staphylococcus Gram positivos, crecen aislados, en parejas,
en ttradas o en masas irregularmente agrupadas como racimos de
uvas. La especie mas importante, Staphylococcus aureus,
generalmente crece ando color amarillo a la naranja, aunque en
ocasiones puede ser blanco. Necesita una fuente nitrogenada
orgnica y en sus necesidades de oxgeno es facultativo. Muchas de
las cepas beta-hemolticas coagulosa positivas son patgenas y
Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

algunas producen una enterotoxina

alimentaras. (Ramrez, 1988).

que

causa

intoxicaciones

El objetivo fue determinar mediante pruebas bioqumicas presencia

de Micrococcus y Staphylococcus.

a)

Materiales
Tubo con Agar nutritivo

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Placa petri con Agar Manitol Salado

Tubo con Agar Manitol con PBC
Tubos con Agar HughLeifson
Asa de kolle
Aguja para picadura

b)Procedimiento

Coloracin gram

Fijar calor suave, colorear con cristal violeta, lavar con agua, cubrir
con lugol por un minuto, lavar con alcohol acetona, colorear con
safranina 30 segundos. Lavar y secar. Presencia de cocos gram
positivos dispuestos en pares o cadenas muy cortas. Micrococcus, se
encuentra dispuesto en racimos Staphylococcus

Prueba de la catalasa:
-

Colocar una fraccin del crecimiento bacteriano sobre un

portaobjeto limpio; cubrir con unas gotas de H2O2 al 3%
El desprendimiento gaseoso (burbujas) indica que la prueba es
positiva.

Muestra: Micrococcus

Agar Manitol Salado

Materiales: 01 placa petri, asa de Kolle, mechero.

Siembra Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.
Incubacin De rutina: durante 18-24 horas a 35-37C, en aerobiosis.
Resultado:

(+) Vira a amarillo

(-) No vira

Baird Parker (BP) Medio Base

Materiales: 01 placa petri, asa de Kolle, mechero.

Siembra Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0,1 ml
de la dilucin de la muestra a analizar.
Incubacin 24-48 horas a 35-37C, en aerobiosis.
Resultado:

(+) halo de precipitacin ; (-) No presenta halo

Prueba DNAasa

Materiales: 01 placa petri, asa de Kolle, mechero.

Sustrato: DNA
Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Siembra Sembrar por estras en superficie un inculo denso de la muestra.

Incubacin 24 horas a 37C, en aerobiosis.
Resultado:

(+) halo claro ; (-) No presenta halo

Diferenciacion de Micrococcus y Staphylococcus

Agar Manitol + PBC

Materiales: 01 tubo de ensayo, 01 pipeta pasteur, mechero.

Procedimiento:

Licuar el medio a bao 98C. Luego enfriar 45-46C

Con la pipeta pasteur tomar una alcuota de la suspensin
de la bacteria.
Decantar parte de la alcuota tomada dentro del agar
licuado.
Enfriar, en agua fra.
Incubar por 2-4 das a 37 C
Resultado:

Vira

(+) Morado
(-) no vira

amarillo

Hugh Leifson (HL)

Materiales: 02 tubos de ensayo, 01 pipeta pasteur, vaselina lquida,

mechero.
Procedimiento:

Licuar el medio de los tubos a bao 98C. Luego enfriar

45-46C
Con la pipeta pasteur tomar una alcuota de la suspensin
de la bacteria.
Decantar parte de la alcuota tomada dentro del medio
licuado, a cada tubo. Despus a uno de los tubos decantar
la vaselina liquida.
Enfriar, en agua fra.
Incubar por 2-4 das a 37 C
Resultado:
Cepa fermentante: Los dos tubos viran de verde a amarillo.
Cepa alcalinizante: Vira el tubo sin vaselina de verde a azul.
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Cepa oxidante: Vira el tubo sin vaselina de verde a amarillo.

Agar Cisteina

Materiales: 01 tubo de ensayo, 01 pipeta pasteur, mechero.

Procedimiento:

Licuar el medio a bao 98C. Luego enfriar 45-46C

Con la pipeta pasteur tomar una alcuota de la suspensin
de la bacteria.
Decantar parte de la alcuota tomada dentro del agar
licuado.
Enfriar, en agua fra.
Incubar por 40 horas a 37 C
Resultado:
Turbidez en todo el tubo: Staphylococcus
Turbidez en la superficie del agar: Micrococcus

Pruebas bioqumicas
Coloracin gram
Catalasa
Agar manitol salado
DNasa
Agar Baird Parker

Resultados
Presencia de cocos ,Gram
positivos dispuesto en pares
Desprendimiento gaseoso
(burbujas) (+)
Manitol positivo
Reaccin positiva
Colonias negras

Prueba de la Catalasa
Agregamos unas gotas de reactivo sobre un cultivo joven de perxido
de hidrgeno al a una laminilla previamente esterilizado y debemos
observar la reaccin de esta.
Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Antes

Despus

La prueba se considera como positiva si observamos burbujas de

oxgeno
H2O2

H2O + O2

Prueba del Agar manitol salado

Se siembra la cepa con asa en placa con agar

Agar Manitol: positivo

Interpretacin: Los Staphylococus que degradan el manitol

desarrollan colonias rodeadas de un halo amarillo, por lo general este
tipo de colonias corresponden a Staphylococcus patgenos, aunque
tambin pueden presentar estas caractersticas los Micrococcus. Lo
microorganismos tienen la capacidad de degradar el manitol hacen
virar el indicador

DNasa: + pero no son Staphylococcus patgenos

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Agar bairdParker: Se siembra la cepa con asa en placa con

agar
Resultado:

Prueba positiva: crecimiento de colonias negras redondas y

rodeadas: Staphylococus
Interpretacin: Los Staphylococus aureus dan colonias negras
rodeados de un halo claro de 2 a 5 mm y anillos opacos despus de
de 48 horas. Los Staphylococus epidermis dan colonias negras sin
halo, a veces colonias pardas,

Diferenciacin de Micrococcus y Staphylococcus

Agar Cisteinado: creci en la superficie y en la parte intermedia del
tubo

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Agar Manitol con PBC: +

Hugh Leifson:
sin vaselina a azul)

alcalinizantes (viraje tubo

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Se siembran placas de agar DNAsa con un asa de manera que el

crecimiento en las placas sea como de 1 cm. de dimetro. Se incuba
durante la noche a 37 C. Se inunda la placa con cido clorhdrico 1N. La
transparentacin alrededor de las colonias indica actividad de DNAsa
(Guerci,
1985).El
cido
clorhdrico
reacciona
con
el
cido
desoxirribonucleico no alterado para dar un precipitado turbio. Algunas
otras bacterias, por ejemplo, Serratia, pueden dar una reaccin positiva.
Los estafilococos son fermentadores, pueden producir anaerbicamente
cido de la glucosa; los micrococos son oxidantes y producen cido de la
glucosa solamente en presencia de oxgeno(Ramrez, 1988).
Inhibe el crecimiento de la mayora de los otros organismos, pero los
halfilos facultativos pueden crecer en un 10% de sal. MSA Tambin
contiene manitol y fenol de indicador de pH rojo.(Guerci,1985).Si un
organismo que crece en MSA fermenta el manitol, el cido produce giros
en las colonias ponen amarillo como Staphyloccocus aureus.
(Ramrez,1988).
En medio de Baird Parker despus de 24 horas, Staphylococcus aureus
forma colonias negras, brillantes, convexas, de 1 1,5 mm de dimetro;
hay un estrecho borde blanco y las colonias estn rodeadas por una zona
clara de 2 5 mm de dimetro. Este aclaramiento puede hacerse evidente
tan solo a las 36 horas (Guerci, 1985).
S. aureus puede formar un cogulo, gelificar todo el contenido del tubo o
producir una trama floja de fibrina. La prolongacin de la incubacin puede
dar lugar a la desaparicin del cogulo por digestin (fibrinlisis). (Guerci,
1985)La reaccin en portaobjetos descubre la coagulasa "ligada" (factor
de aglutinacin), que acta sobre el fibringeno directamente o la reaccin
en tubo detecta la coagulasa "libre", que acta sobre el fibringeno en
Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

unin con otros factores del plasma. Pueden estar presentes algunas de
ellas o ambas.
El S. aureus es cogulasa positivo, lo cual constituye su caracterstica ms
distintiva. En los pocos casos de un posible S aureus que no produce
coagulasa puede realizarse la prueba para desoxirribonucleasa
termoestable que es an ms especfica. Otros mtodos para nucleasa
termoestables, como el de Zarzour y Belle, consisten en cavar pequeos
huecos en el agar ADN y colocar suspensiones de cultivos de 18 24 horas
hervidas; este mtodo es algo ms engorroso pero necesario para
laboratorios que no tienen acceso a mecheros de gas. (Ramrez, 1988).
Micrococcus es generalmente un organismo comensal o saproftico,
aunque podra ser tambin un patgeno oportunista, particularmente en
pacientes con inmunodeficiencia, tales como enfermos de VIH.3 Puede ser
difcil identificar Micrococcus como la causa de una infeccin puesto que el
organismo est presente normalmente en la microflora cutnea. El gnero
es raramente asociado con enfermedades. En raras ocasiones la muerte
de pacientes inmunodeprimidos se ha debido a infecciones pulmonares
producidas por Micrococcus. Tambin puede estar implicado en otras
infecciones, incluyendo bacteremia recurrente, sock sptico, artritis
sptica, endocarditis, meningitis y neumona cavitating (pacientes
inmunodeprimidos. (Granados, 1997).
En la Familia. Micrococcaceae. Staphylococcus aureus, especie coagulasa
positiva, es un reconocido patgeno humano, siendo agente etiolgico de
un amplio espectro de infecciones de origen comunitario y nosocomia S.
aureus, tiene una amplia gama de determinantes de virulencia, que
abarca componentes de pared celular y una gran variedad de exoprotenas
que contribuyen en su habilidad para colonizar y causar enfermedad en
mamferos. ( Stanier, 1982)

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

 La muestra de cocos present Agar Manitol Salado (+), porque vir

de rojo a amarillo.
La muestra de cocos present Baird Parker (BP) (+), porque se
observ halos de precipitacin
La muestra de cocos present Prueba DNAasa (+), porque se
observ halos claros.
La muestra de cocos present Agar Manitol +PBC (+), porque vir
de morado a amarillo.
La muestra de cocos present Hugh Leifson: cepa alcalinizante,
porque solo vir de verde a azul, el tubo que no tenia el tapn.
La muestra de cocos present Agar Cisteina, se determin que era
Micrococcus, debido a la turbidez superficial, microorganismos
aerbicos

Chans, G. 2002. Estafilococos. Disponible en:

http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2017.pdf
Granados, R.C, Villaverde 1997.
Microbiologa.
Editorial Paramiento Madrid Espaa.

Ciencia

de

la

Salud

Gureci,A.1995.Laboratorio clinico.3ed.Argentina
Stanier, R. 1982. Microbiologa. Cuarta edicin Editorial Mc Graw
- Hill Interamericana.
Ramirez, R.1988,Laboratrio clnico Bsico.2ed.Lima Per

Informes de Laboratorio Microbiologa de Alimentos

Tabla 01: Preparacin del Medio Manitol (Annimo, 2006)

Frmula (en gramos por litro)

Extracto de carne

1.0

Pluripeptona

10.0

d-Manitol

10.0

Cloruro de sodio

75.0

Agar

15.0

Rojo de fenol

Instrucciones
Suspender 111 g de polvo por litro
de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar calentando a
ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Distribuir y esterilizar en autoclave
a 118-121C durante 15 minutos.

0.025
pH final: 7.4 0.2

Tabla 02: Preparacin del Medio Baird Parker (BP) (Annimo,

2006)

Frmula (en gramos por litro)

Peptona de casena

10.0

Extracto de carne

5.0

Extracto de levadura

1.0

Cloruro de litio

5.0

Agar

17.0

Glicina

12.0

Piruvato de sodio

10.0

Instrucciones
Suspender
60
g
del
medio
deshidratado en 940ml de agua
destilada. Dejar en reposo 5 a 10
minutos.
Calentar
agitando
frecuentemente y hervir durante 1
minuto. Distribuir y esterilizar en
autoclave a 121C (15 libras) durante
15 minutos. Enfriar a 45-50C y
agregar 50 ml de la emulsin de yema
de huevo y 10ml de la solucin de
telurito
(Cdigo
B03-601-61).
Homogeneizar y distribuir en cajas de
Petri.

pH final: 6.8 0.2

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Tabla 3 : Pruebas para determinar los especies de

Staphylococcus

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