Bioenergia DIGITAL PDF

Eliana G. de M.
Lemos
Nelson R. Stradiotto
(orgs.)
Bioenergia
desenvolvimento, pesquisa
e inovao
f
r o
n t e
BIOENERGIA
CONSELHO EDITORIAL ACADMICO

Responsvel pela publicao desta obra
Maria Jos Soares Mendes Giannini
Erivaldo Antnio da Silva
Kleber Toms de Resende
Maria Valnice Boldrin
Maysa Furlan
ELIANA G. M. LEMOS
NELSON R. STRADIOTTO
(ORGS.)
BIOENERGIA
DESENVOLVIMENTO, PESQUISA
E INOVAO
2012 Editora UNESP

Cultura Acadmica
Praa da S, 108
01001-900 So Paulo SP
Tel.: (0xx11) 3242-7171
Fax: (0xx11) 3242-7172
www.editoraunesp.com.br
feu@editora.unesp.br
CIP BRASIL. Catalogao na fonte

Sindicato Nacional dos Editores de Livros, RJ
B512
Bioenergia: desenvolvimento, pesquisa e inovao / Eliana G. M. Lemos e Nelson
R. Stradiotto (orgs.). So Paulo: Cultura Acadmica, 2012.
il.
Inclui bibliografia
ISBN 978-85-7983-256-7
1. Biocombustveis. 2. Combustveis. 3. Energia Fontes alternativas Brasil.
4. Desenvolvimento sustentvel. 5. Inovaes tecnolgicas. I. Lemos, Eliana G. M.
II. Stradiotto, Nelson R.
12-4488.
CDD: 662.88
CDU: 662.6
Este livro publicado pelo Programa de Publicaes Digitais da Pr-Reitoria de Pesquisa

da Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (UNESP)
Editora afiliada:
SUMRIO
Apresentao 9
Parte I
Biomassa para bioenergia
13
1 Metabolmica de cana-de-acar e sua relao com

a produo de biomassa vegetal para bioenergia 15
2 Estudos da dormncia e do condicionamento fisiolgico
de sementes: possveis contribuies propagao de
espcies vegetais com potencial energtico 35
3 Tecnologia de aplicao e inovaes voltadas ao uso
racional de defensivos agrcolas em culturas destinadas
produo de bioenergia 53
4 Metagenoma e a desconstruo da biomassa 83
5 Modificaes genticas em plantas de cana-de-acar visando
aumento de produtividade e a utilizao de genes de Bacillus
thuringiensis para o controle biolgico de insetos praga 113
6 Eucalipto adensado: manejo para florestas energticas 125
Parte II
Produo de biocombustveis
163
7 A complexidade da produo do bioetanol em fermentaes

abertas de matrias-primas industriais 165
SUMRIO
8 Produo de etanol por Zymomonas mobilis CCT 4494

utilizando substratos no convencionais como alternativa
produo convencional 195
9 Hidrlise enzimtica na cadeia produtiva do bioetanol e uso
de enzimas para diagnsticos de produtos da fermentao 251
10 Resduos agrcolas e agroindustriais: potencialidades
de uso na produo de etanol 271
11 Utilizao de enzimas lipolticas na produo de biodiesel 319
12 Estressores biticos em cana-de-acar:
reflexos quali-quantitativos na matria-prima
e no processamento industrial 341
13 Produo, caracterizao e utilizao do biodiesel
de tucum originrio da regio amaznica 409
14 Contaminao microbiana na fermentao alcolica
para produo de etanol carburante 447
Parte III
Utilizao de bioenergia
489
15 Combustvel renovvel em trator agrcola:

experincias na utilizao de biodiesel 491
16 Efeitos da utilizao do biodiesel em motores
de combusto interna 521
17 Uso de etanol para a produo de hidrognio
e acionamento de motor aeronutico flex 547
18 Uso de biogs para produo de gua gelada e eletricidade 595
19 Biodiesel e gs de gaseificao em motor
de combusto interna 633
20 Aspectos do incremento da cogerao no setor
sucroalcooleiro com o uso de novos equipamentos
e tecnologias para melhor aproveitamento energtico 657
Parte IV
Biorrefinarias, alcoolqumica e oleoqumica
21 Da biotecnologia biorrefinaria 753
751
BIOENERGIA
Parte V
Sustentabilidade dos biocombustveis
833
22 Mudanas recentes na ocupao sucroalcooleira em

decorrncia da mecanizao do corte de cana-de-acar
no estado de So Paulo 835
23 Potenciais riscos ambientais do biodiesel 855
24 Impactos do uso de concentrado de vinhaa biodigerida
e outras fontes de nutrientes nos agroecossistemas
de cultivo da cana-de-acar 865
25 Avanos brasileiros no desenvolvimento de normas
tcnicas analticas para certificao e controle
da qualidade de biodiesel 889
26 Novos mtodos analticos para avaliao da qualidade
do bioetanol combustvel 945
27 Aspectos relacionados produo de biodiesel com
aproveitamento de resduos, caracterizao e testes
de misturas em motores de combusto interna 981
Lista de autores 1043
APRESENTAO
A bioenergia constitui atualmente um importante segmento das denominadas energias renovveis, frao cada vez mais representativa entre as
matrizes energticas de vrios pases do mundo. No Brasil, a pesquisa sobre bioenergia tem se desenvolvido consideravelmente, e seu uso, apontado
como exemplo a ser seguido na evoluo tecnolgica energtica da sociedade contempornea.
Nesse contexto, a edio deste livro, intitulado Bioenergia: desenvolvimento, pesquisa e inovao, tem por objetivo proporcionar uma viso abrangente sobre as diversas reas que compem este segmento, com o intuito de
contribuir para melhor compreenso dessa importante energia renovvel
fundamental para o desenvolvimento do pas.
Este livro apresenta uma coletnea de trabalhos realizados por vrios
pesquisadores do Instituto de Pesquisa em Bioenergia (Bioen) da Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho (Unesp). Essas pesquisas
foram agrupadas em cinco partes distintas, perfazendo um total de vinte e
sete captulos.
Na primeira parte so mostradas as vrias formas de biomassa utilizadas na obteno de bioenergia; na segunda, os diversos processos usados na
produo de biocombustveis; na terceira, as aplicaes dos bicombustveis
em motores; na quarta, os aspectos concernentes s biorrefinaria, alcoolqumica e oleoqumica; e na ltima, os impactos ambientais, sociais e econmicos da sustentabilidade dos bicombustveis.
10
APRESENTAO
Na primeira parte intitulada Biomassa para bioenergia so aportados,

em seis captulos, temas da maior relevncia acadmica, tais como: a metabolmica de cana-de-acar e sua relao com a produo de biomassa
vegetal para bioenergia; os estudos da dormncia e do condicionamento fisiolgico de sementes e as possveis contribuies propagao de espcies
vegetais com potencial energtico; a tecnologia de aplicao e as inovaes
voltadas ao uso racional de defensivos agrcolas em culturas destinadas
produo de bioenergia; o metagenoma e a desconstruo da biomassa; as
modificaes genticas em plantas de cana-de-acar visando ao aumento
de produtividade e utilizao de genes de Bacillus thuringiensis para o controle biolgico de insetos praga; e o uso do eucalipto adensado no manejo de
florestas energticas.
Na segunda parte intitulada Produo de biocombustveis so descritos em oito captulos tpicos da maior envergadura cientfica, como: a produo de etanol por Zymomonas mobilis CCT 4494, utilizando substratos
no convencionais como alternativa produo convencional; a hidrlise
enzimtica na cadeia produtiva do bioetanol e o uso de enzimas para diagnsticos de produtos da fermentao; a utilizao de enzimas lipolticas na
produo de biodiesel; os resduos agrcolas e agroindustriais e as potencialidades de uso na produo de etanol; a complexidade da produo do bioetanol em fermentaes abertas de matrias-primas industriais; os estressores
biticos em cana-de-acar e seus reflexos quali-quantitativos na matria-prima e no processamento industrial; a produo, caracterizao e utilizao do biodiesel de tucum originrio da regio amaznica; e a contaminao
microbiana na fermentao alcolica para produo de etanol carburante.
Na terceira parte intitulada Utilizao de bioenergia so relatados em
seis captulos temas da mais alta importncia tecnolgica, tais como: o uso
de combustvel renovvel em trator agrcola e as experincias na utilizao
de biodiesel; os efeitos da utilizao do biodiesel em motores de combusto interna; o uso de etanol para a produo de hidrognio e acionamento
de motor aeronutico flex; o uso de biogs para produo de gua gelada
e eletricidade; o biodiesel e o gs de gaseificao em motor de combusto
interna; e os aspectos do incremento da cogerao no setor sucroalcooleiro
com o uso de novos equipamentos e tecnologias para melhor aproveitamento energtico.
BIOENERGIA
11
Na quarta parte intitulada Biorrefinarias, alcoolqumica e oleoqumica so discutidos dentro de um nico captulo tpicos altamente relevantes
para o desenvolvimento industrial, tais como: a evoluo da biotecnologia
biorrefinaria, em que so relatadas importantes aplicaes em biotecnologia e recentes desenvolvimentos de tecnologias de bioprocesso para utilizao de biomassa com foco principal na bioconverso industrial das fontes
renovveis em qumicos de interesse.
Na quinta parte intitulada Sustentabilidade dos biocombustveis
so aportados em seis captulos temas extremamente vitais para a sociedade,
como: as mudanas recentes na ocupao sucroalcooleira em decorrncia da
mecanizao do corte de cana-de-acar no estado de So Paulo; os potenciais
riscos ambientais do biodiesel; os impactos do uso de concentrado de vinhaa
biodigerida e outras fontes de nutrientes nos agroecossistemas de cultivo da
cana-de-acar; os avanos brasileiros no desenvolvimento de normas tcnicas analticas para certificao e controle da qualidade de biodiesel; os novos
mtodos analticos para avaliao da qualidade do bioetanol combustvel; e
os aspectos relacionados produo de biodiesel com aproveitamento de resduos, caracterizao e testes de misturas em motores de combusto interna.
Concluindo, gostaramos de agradecer imensamente aos autores dos captulos pela inestimvel contribuio; professora Maria Jos Soares Mendes Giannini pelo convite para organizarmos a edio deste livro; aos revisores dos captulos pelas correes altamente qualificadas; Neusa Maria
Luiz pelos excelentes servios de secretaria; Pr-Reitoria de Pesquisa da
Unesp pela oportunidade proporcionada pelo Programa de Publicaes Digitais; e Editora da Unesp pela esmerada produo desta obra.
Eliana G. M. Lemos
Nelson R. Stradiotto
Parte I
Biomassa para bioenergia
1
Metabolmica de cana-de-acar
e sua relao com a produo
de biomassa vegetal para bioenergia
Alberto J. Cavalheiro, Isabel Duarte Coutinho,
Gabriel Mazzi Leme, Alexander Alves da Silva,
Ana Paula Dias da Silva
A produo de biocombustveis tem recebido ateno crescente, vislumbrados como fontes biodegradveis e no poluentes de energia. Merecem nfase o diesel e o etanol obtidos de fontes vegetais, com destaque
para este ltimo, j produzido em vrios pases a partir da fermentao da
sacarose obtida, em ordem de importncia, de cana-de-acar, milho, sorgo e beterraba. A produo a partir da cana-de-acar desenvolveu-se de
forma impressionante no Brasil, a ponto de se tornar uma cultura agrcola
de importncia estratgica para a economia nacional.
A cana-de-acar pertence famlia Poaceae, tribo Andropogoneae e
ao gnero Saccharum, destacando-se a espcie Saccharum officinarum, originria do sudeste asitico, onde cultivada desde tempos remotos. Cruzamentos dessa espcie com outras quatro do mesmo gnero permitiram o
desenvolvimento de diversas variedades, com o objetivo de obter plantas
com caractersticas agronmicas melhoradas, incluindo resistncia a doenas. Variedades modernas de cana-de-acar so derivadas principalmente
de cruzamento interespecfico entre a cana nobre S. officinarum e a espcie
selvagem S. spontaneum. Como resultado disso, as variedades atuais de cana
possuem um genoma interespecfico complexo, aneupoliploide (n 12), com
o nmero de cromossomos variando de 100 a 130 (Hoarau et al., 2001). Essa
complexidade genmica e a natureza multiallica e multignica da maioria
das variedades agronmicas torna o melhoramento da cana-de-acar uma
16
BIOMASSA PARA BIOENERGIA
tarefa muito difcil (Casu et al., 2004). Os gneros Saccharum, Erianthus,

Miscanthus, Narenga e Sclerostachya so considerados muito similares e formam o complexo Saccharum (Mukherjee, 1957), cujas espcies so passveis de intercruzamento forado em programas de melhoramento gentico.
Por que estudar metabolmica de cana-de-acar?

O crescimento e ciclo de vida das plantas envolvem sequncias complexas de expresso gnica altamente controladas, alm de respostas e adaptaes ao meio ambiente, no qual esto sujeitas a vrias situaes de estresses
biticos e abiticos que podem modificar essa expresso. A maior parte
dos progressos no entendimento desses processos em vegetais foi obtido
a partir de estudos em espcies modelo, principalmente com Arabidopsis e
arroz. Embora o impacto da poliploidia sobre a expresso gnica tenha sido
estudado em vrias espcies alopoliploides (algodo e Arabidopsis tetraploides, trigo e Sencio hexaploides), com relatos de efeitos aditivos e no
aditivos sobre subconjuntos de genes, observados juntamente com a poliploidizao (Jackson; Chen, 2010), estudos micos com cana-de-acar
podem proporcionar descobertas importantes acerca da regulao gnica
em genomas complexos (Manners; Casu, 2011).
Metabolmica estuda os processos ecofisiolgicos no nvel micromolecular, monitorando o maior nmero possvel de metablitos primrios e secundrios de clulas, rgos e tecidos de um organismo por meio de tcnicas
analticas de alto desempenho como cromatografia gasosa acoplada a espectrmetro de massas (CG-EM), cromatografia lquida acoplada a espectrmetro de ultravioleta e visvel com arranjo de diodos e/ou espectrmetro
de massas (CLAE-DAD-EM) e espectrmetro de ressonncia magntica
nuclear (RMN) acoplado ou no a um cromatgrafo lquido. Resulta, portanto, na caracterizao de fentipos micromoleculares de organismos sob
condies especficas (fatores ambientais, genticos e patolgicos), visando
a associao dessas substncias ao gentipo e funo gnica (Villas-Bas;
Rasmussen; Lane, 2005).
Ao conjunto de dados gerados, aplica-se tratamento quimiomtrico
visando correlacionar as informaes qumicas s caractersticas vegetais
observadas no experimento para, a seguir, proceder-se formulao de hi-
METABOLMICA DE CANA-DE-ACAR
17
pteses. Trata-se de abordagem complementar genmica e protemica,

no sentido do entendimento dinmico e funcional de organismos no nvel
micromolecular. Esse conhecimento detalhado de espcies teis para a produo de bioenergia tem aplicao potencial no melhoramento do rendimento de biomassa, teor de molculas diretamente relacionadas produo
de energia e manipulao molecular da maquinaria bioqumica para estabelecimento de cultivares mais resistentes a situaes de estresses biticos e
abiticos, e tambm mais produtivos.
Constituio micromolecular de cana-de-acar

Apesar da produo de sacarose a partir da cana-de-acar remontar
poca do Imprio Gupta, por volta do ano 350, na ndia, sua estrutura molecular s foi elucidada em 1927 (Avery; Haworth; Hirst, 1927), aps estudos intensivos de vrios cientistas por cerca de trs dcadas. Relatos sobre
outros constituintes qumicos micromoleculares desse vegetal s aparecem
na literatura cientfica a partir da dcada de 1930. Burr e colaboradores publicaram, em 1957, uma reviso interessante sobre vrios aspectos da canade-acar, incluindo o que era conhecido poca sobre sua constituio
qumica. Em relao s micromolculas, so citados, nessa reviso, estudos
que relataram a ocorrncia de pirogalol, cido protocatecuico e vanilina na
frao lignnica; vitamina A, inositol, fitina e os cidos acontico, ctrico,
fumrico, gliclico, mlico, mesacnico, oxlico, succnico, sirngico e ascrbico na garapa; tiamina, riboflavina, cido pantotnico, niacina e biotina
nos colmos; cido flico no melao; piridoxina e cido ascrbico nas folhas.
Da graxa exterior dos colmos foram obtidos lcool miriclico e hidrocarbonetos. cidos palmtico e linoleico, estigmasterol, sitostetol, glicerol,
clorofila e caroteno foram obtidos de extratos da planta. Entre os compostos fosforados, at 1957 j haviam sido identificados em cana-de-acar
frutose difosfato, glicose-1-P, glicose-6-P, adenosina trifosfato, cido fosfomlico e cido glicrico-3-P. Entre os aminocidos, asparagina era frequentemente encontrada em grande quantidade no melao, mas tambm j
haviam sido relatadas as ocorrncias de cido asprtico e glutmico, lisina,
alanina, valina, cido -aminobutrico, leucina, isoleucina, glicina, serina,
glutamina, fenilalanina, norleucina, tirosina, cisteina, metionina, norvalina, cido -amino isobutrico, prolina e treonina.
18
Investigaes preliminares sobre a ocorrncia de substncias fenlicas

em cana-de-acar foram feitas por Stevens (1959), que no conseguiu confirmar as presenas de cidos ferlico e cafeico na garapa, mas verificou na
cutcula do vegetal (B 37-161) a presena de pigmento cuja aglicona apresentou caractersticas similares cianidina. A ocorrncia de antocininas em
cana j havia sido proposta por Sakuma e Momose, em 1935.
No bagao de cana foram determinados vrios compostos fenlicos:
cido p-coumrico, cido ferulico, p-hidroxibenzaldeido, vanilina e cido
vanlico (Leal et al., 1994). Um estudo amplo sobre a composio qumica
no complexo Saccharum envolveu a investigao de 120 plantas dos gneros Saccharum, Erianthus, Ripidium, Miscanthus, Narenga, Sclerostachya,
Imperata, incluindo hbridos interespecficos e intergenricos e variedades
comerciais de cana (Williams; Harborne; Smith, 1974). Como principal resultado, o estudo indica as flavonas de folhas como potenciais marcadores
sistemticos, acrescentando que Saccharum officinarum, S. edule, S. robustum e Erianthus maximus podem ser facilmente distinguidos de S. spontaneum, Narenga, Miscanthus, Imperata, Scleostachya, Ripidium e outras
espcies de Erianthus pela presena de bissulfatos de tricina-7-O-glicosideo
e tricina-7-O-neohesperidosideo e tricina-7-O-diglicosideo.
Tambm foi observado nesse estudo que as espcies de Erianthus, todas
africanas, podem ser distinguidas de Ripidium, que ocorrem nas Amricas,
pela presena de uma luteolina di-C-glicosdeo apenas neste ltimo gnero.
Embora com a identificao incompleta de vrias substncias, outras flavonas C- e O-glicosdeos foram encontradas em todos os gneros estudados:
iso-orientina, iso-vitexina, iso-orientina-O-raminosilglicosdeo, iso-orientina 7-O-glicosdeo, uma possvel iso-orientina O-triglicosdeo e trs luteolina di-C-glicosdeos. Os autores observaram tambm que alguns hbridos
F1 de Saccharum officinarum x S. spontaneum apresentaram alterao no
padro de hidroxilao do anel B das flavonas, principalmente em relao
aos derivados de iso-orientina, alm de vitexinas C-glicosdeos. Os hbridos apresentaram maior teor de vitexina C-glicosdeos (uma hidroxila),
enquanto as matrizes apresentaram principalmente luteolina C-glicosdeos
(duas hidroxilas no anel B).
A partir de 2005, surgiram novos trabalhos de caracterizao de flavonas
de folhas de plantas hbridas, transgnicas e em garapa a partir de cultivares
brasileiros de cana-de-acar, porm, empregando tcnicas mais refinadas,
19
como CLAE-DAD-EM. Nesses estudos, vrias flavonas O e C-glicosiladas

foram descritas, incluindo diosmetina-8-C-glicosil-arabinosdeo, diosmetina-8-C-glicosdeo, tricina-7-O-ramnosilgalacturondeo, tricina-4-O-(eritro ou treo-guaiacilgliceril) ter e tricina-4-O-(eritro ou treo-guaiacilgliceril) ter-7-O-glicopiranosdeo, tricina-7-O-ramnosil-galacturondeo, tricina-7-O-neohesperosdeo, tricina-7-O-neohesperosdeo-4-O-ramnosdeo, tricina-7-O-metilglicurondeo, orientina, vitexina, luteolina8-C-ramnosil-glicosdeo, 4,5-dimetil-luteolina-8-C-glicosdeo, luteolina-8-C-glicosil-7-O-glicurondeo, escaftosideo, iso-escaftosdeo e 7-O-metilapigenina-6-C-glicosdeo (Colombo et al., 2005; Colombo et al.,
2006; Colombo; Yariwake; McCullaghb, 2008; Vila et al., 2008; Colombo
et al., 2009).
A ao antiproliferativa e antioxidante observada por Duarte-Almeida
e colaboradores (2006 e 2007) na garapa obtida de cana-de-acar (cultivar
SP813250) foi atribuda aos constituintes fenlicos apigenina, luteolina,
cido cafeico, cido hidroxicinmico e cido sinpico, alm de tricina-7-O-(6-metoxicinmil)-glicosdeo.
As flavonas luteolina-8-C-ramnosil-glicosdeo, tricina-7-O-ramnosilgalacturondeo, diosmina e as antocianinas petunidina-3-O-(6-succinil)-raminosdeo e cianidina-3-O-glicosdeo foram identificadas e quantificadas nas folhas, colmos e razes de Saccharum sinensis Roxb (Li et al., 2010).
A composio qumica de kokuto, um tipo de acar bruto similar rapadura e preparado no Japo e regio a partir da cana-de-acar, foi estudada, resultando na descrio de vrios compostos fenlicos, muitos com
propriedades antioxidantes. Vrias lignanas esto entre eles (Nakasone et
al., 1996; Takara et al., 2002 e 2003). Nas figuras 1.2 e 1.3 esto ilustradas
vrias dessas substncias.
Arundona (fernenol metil ter) e taraxerol metil ter (savamiletina)
foram os primeiros triterpenos a serem relatados nas folhas de Saccharum officinarum L. (Bryce et al., 1967). Posteriormente, foram caracterizados -sitosterol, estigmasterol e os compostos minoritrios taraxerol,
-amirina, betulina, -amirina metil ter (iso-savamiletina), fernenol, cilindrina, 24-metil-lofenol, 24-etil-lofenol, estigmasten-5-en-3-diol (ikshusterol), estigmasten-5-en-3-diol (epi-ikshusterol) e estigmastan-3, 5,
6-triol (Deshmane; Dev, 1971). Os triterpenos e esteroides campesterol; -sitosterol; estigmasterol; 24-metilcolesta-3,6-diona; 24-etilcolesta-
20
Figura 1.1 Flavonas e antocianinas j identificadas em estudos qumicos com Saccharum

spp. Ara = arabnose, Fuc = fucose, Gal = galactose, Glc = glicose, Glr = cido glicurnico,
MeGlr = metil ster do cido glicurnico e Rha = ramnose, Ru = rutinosdeo.
21
Figura 1.2 Compostos fenlicos e estilbenos j identificados em amostras de Saccharum

spp. ou em produtos obtidos a partir da planta.
Figura 1.3 Lignanas j identificadas como constituintes de kokuto, alimento preparado

no Japo a partir de caldo de cana.
22
-3,6-diona; 24-etilcolest-22-en-3,6-diona; 6-hidroxi-campest-4-en-3-ona;

6-hidroxiestigmast-4,22-dien-3-ona; colesta-4-en-3-ona; 24-metilcolest-4-en-3-ona; 24-metilcolesta-4,22-dien-3-ona; 24-etilcolest-4-en-3-ona
e 24-etilcolesta-4,22-dien-3-ona foram isolados da torta de filtro da cana-de-acar (Georges et al., 2006). A torta de filtro um resduo obtido na
fabricao do acar, depois que as borras resultantes da clarificao tm
a sacarose residual extrada, e tem sido empregada como adubao orgnica
(Pereira et al., 2005). As estruturas dessas substncias esto representadas
nas figuras 1.4 e 1.5.
Figura 1.4 Esteroides identificados em estudos qumicos de Saccharum spp.
23
Figura 1.5 Triterpenos identificados em estudos qumicos de Saccharum spp.
Constituio micromolecular associada a eventos

ecofisiolgicos
Os trabalhos citados acima descrevem apenas o isolamento e caracterizao estrutural desses compostos obtidos de diferentes partes e hbridos de
Saccharum spp., e tambm de produtos e subprodutos oriundos do processamento do vegetal. Nesses casos, importante ressaltar que muitas dessas
substncias podem ser resultado de hidrlise, rearranjos e isomerizaes
causadas pelos processos trmicos e alcalinos envolvidos na preparao de
melao, rapadura e kokuto, principalmente.
A seguir esto revisados alguns estudos que relacionam metablitos de
cana-de-acar a processos ecofisiolgicos. Nesses estudos, so avaliados
grupos especficos de metablitos (em alguns casos uma substncia apenas) e que podem ser considerados estudos preliminares abordagem metabolmica.
Os primeiros trabalhos relacionando alteraes na constituio qumica de cana-de-acar com situaes de estresse associaram floroglucinol (1,3,5-triidroxibenzeno) ao cultivo sob deficincia de potssio (Hartt,
1934) e o aumento expressivo do teor de aminocidos quando cana foi submetida seca (Wiggins; Williams, 1955).
24
O cido hidroxmico 2,4-diidroxi-1,4-benzoxazin-3-ona (DIBOA),

obtido de folhas de cana-de-acar, e seu produto de degradao 2-benzoxazolinona (BOA) possuem efeitos alelopticos (Singh; Suman; Shrivastava, 2003). A aplicao dessa substncia em concentraes maiores que
0,3 mM inibiu o crescimento da cana-de-acar e, em concentraes superiores, mostrou ao aleloptica no desenvolvimento do trigo, mostarda e
feijo (Pushpa et al., 2009). Ensaios de alelopatia tambm foram realizados
com extratos da palha de cana-de-acar. A partir do fracionamento do extrato, foram isolados e quantificados os cidos trans-ferulico, cis-ferulico,
vanilico e siringico (Sampietro; Vattuone; Isla, 2006), que inibiram o crescimento de ervas daninhas (Amaranthus quitensis L., Bidens subalternans L.,
Brassica campestris L., Sida rhombifolia L.) e de Lactuca sativa L. (alface).
Piceatanol (Figura 1.3) foi isolado e caracterizado a partir do extrato clorofrmico dos colmos de Saccharum sp. (cvs. CP807, C 33-324, e CP36-13).
Esse estilbeno foi biossintetizadao pela planta quando inoculada com o fungo Colletotrichum falcatum, conhecido como podrido vermelha (Brinker;
Seigler, 1991), sendo caracterizado como fitoalexina. Estilbenos como o
piceatanol, resveratrol e pinosilvina foram tambm identificados em outras espcies de Poaceae quando infectadas com fungos endofticos (Powell
et al., 1994). As fitoalexinas so substncias produzidas pelo vegetal como
resposta a presena de patgenos invasores.
Frana et al. (2001) usaram um conjunto de genes relacionados ao metabolismo secundrio, extrado do banco de sequncias tag expressas pela
cana (SUCEST). O objetivo desse estudo foi investigar tanto o padro de
expresso gnica de enzimas chaves reguladoras das vias do metabolismo
secundrio e das classes principais de metablitos envolvidos na reposta da
cana-de-acar a desafios ambientais e durante seu desenvolvimento. Os
resultados mostraram que cDNAs de cana-de-acar codificam sesquiterpeno ciclases (SC) induzidos por luz UV, assim como chalcona sintase
(CHS), a primeira enzima na ramificao metablica que leva a flavonoides, isoflavona sintase (IFS), que est envolvida na defesa da planta e nodulao da raiz, isoflavona redutase (IFR), uma enzima chave na biossntese de fitoalexinas fenilpropanodicas e cido cafeico-O-metiltransferase,
enzima chave na biossntese de lignina e precursores de parede celular.
Metablitos secundrios so sintetizados a partir de intermedirios do
metabolismo primrio do carbono. Considera-se que a sntese aumentada
25
desses metablitos sob condies de estresse esto relacionadas proteo

das estruturas celulares de danos oxidativos (Chalker-Scott; Fuchigami,
1989; Close; McArthor, 2002; Winkel-Shirley, 2002; Wahid; Ghazanfar,
2006). Carotenoides (carotenos e xantofilas) atuam como pigmentos acessrios na captao de luz e tambm como antioxidantes (Havaux, 1998; de
Pascale et al., 2001). Os compostos fenlicos so antioxidantes poderosos,
importantes na proteo de tecidos sob estresse (Dixon; Paiva, 1995; Sgherri,
Stevanovic; Navari-izzo, 2004). Eles so quimicamente heterogneos, incluindo flavonoides, ligninas e taninos. Desempenham ampla variedade de
funes, incluindo defesa contra herbvoros e patogenos, suporte mecnico, atrao de polinizadores, absoro de luz e ao inibitria sobre plantas
vizinhas competidoras (Harborne; Williams, 2000; Taiz; Zeiger; 2002).
Recentemente, o papel dos fenlicos foi revisado devido s evidncias
de seu maior envolvimento na tolerncia ao estresse oxidativo do que na defesa contra herbivoria (Close; McArthor, 2002; Wahid; Ghazanfar, 2006).
Antocianinas so solveis em gua e produzidas sob vrias condies de estresse, incluindo UV-B (Mendez; Jones; Manetas, 1999), seca (Balakumar
et al., 1993), baixa temperatura (Krol et al., 1995), deficincia de nutrientes
(Rajendran et al., 1992), oznio (Foot et al., 1996) e salinidade (Wahid;
Ghazanfar, 2006). O acmulo desses metablitos sob condies de estresse
merece estudos avanados.
Kumar e Narayanaswamy (2006) tentaram relacionar nveis de cidos
carboxlicos, -hidroxi cidos e amino cidos com o desenvolvimento da
podrido vermelha. Poliamidas foram identificadas em garapa (Rodrguez
et al., 2000). Ropenack e colaboradores (1998) relacionaram o aumento nos
nveis de poliaminas e cidos fenlicos em tecidos vegetais com a diminuio na eficincia da infestao fngica e viral, incluindo inibio da germinao de esporos de fungos e reforo da parede celular vegetal, tornando-as
mais resistentes ao de enzimas hidrolticas.
A maioria dos cidos fenlicos, como os derivados do cido cinmico,
esto amplamente distribudos no reino vegetal e so reconhecidos como
participantes constitutivos (antecipinas) nas interaes planta-patgeno.
No entanto, h relatos do aumento da atividade de fenilalanina amnia
liase (PAL) aps a infeco do vegetal por patgenos e a caracterizao de
hidroxicinamoilamidas como fitoalexinas, biossintetizadas em resposta ao
ataque de patgenos (Matern; Grimmig; Kneusel, 1995).
26
Fontaniella et al. (2003) avaliaram os teores das poliaminas putrescena, cadaverina, espermidina e espermina e dos cidos p-hidroxibenzoico,
clorognico, cafeico, sirngico, p-coumrico e ferlico em dois cultivares
de cana-de-acar (L55-5 e C439-52) com susceptibilidades diferentes em
relao escaldadura das folhas, uma doena causada pela bactria Xanthomonas albilineans. Foram avaliados os sucos obtidos de dois cultivares
infectados, que apresentaram nveis significativamente aumentados de atividade de putrescena e ornitina descarboxilase. No entanto, os patgenos
induziram mudanas diferentes nos dois cultivares, em etapas metablicas
subsequentes. Enquanto espermidina desapareceu completamente no cultivar altamente susceptvel C 439-52, um aumento no teor dessa substncia
foi observado no cultivar moderadamente susceptvel L 55-5. O metabolismo de cidos fenlicos tambm foi diferente nos dois cultivares. Em resumo, esse estudo demonstrou que a composio de poliaminas e cidos fenlicos no suco da cana foi alterada de forma diferenciada pela infeco por X.
albilineans, sendo que essas alteraes tambm so cultivar dependentes.
Dimetilsulfoniopropionato (DMSP), glicina betana e prolina betana
j foram encontradas e quantificadas em cana (Colmer et al., 2000). Essas
substncias possuem propriedades osmoprotetoras geralmente relacionadas a situaes de estresse salino e hdrico (seca), fundamentais na estabilizao conformacional de protenas e membranas.
Glassop e colaboradores (2007) observaram mudanas metablicas durante o desenvolvimento da planta (cultivar Q-117) atravs de anlises do
perfil metablico de internodos em vrios estgios de desenvolvimento,
ao longo dos colmos, por CG-EM. Verificaram que os teores de trealose
e de sacarose foram positivamente correlacionados, embora desconheam
mecanismo para explicar essa correlao. No entanto, existem relatos que
indicam modulao por trealose da atividade hexoquinase, enzima associada ao desenvolvimento vegetal (Rolland; Baena-Gonzalez; Sheen, 2006;
Zhang; Yang; Feng, 2006). Existem tambm relatos que associam o acmulo de trealose em plantas submetidas a estresses hdrico, salino e trmico
(Mller; Boller; Wiemken, 1995). Poliis, como manitol, xilitol e sorbitol,
so considerados osmoreguladores e associados a estresse osmtico causado
por temperatura, seca, sal e altos teores de acar (Bieleski, 1982; Pommerrenig; Papini-Terzi; Sauer, 2007).
27
De forma mais ampla, vrias associaes entre nveis de acares e expresso gnica j foram relatadas. Mais especificamente, os acares palatinose, turanose, celobiose, gentiobiose, lactilose e leucrose foram relacionados supresso de sinalizao de giberelinas em embries de cevada
(Loreti; Alpi; Perata, 2000). Alm de sacarose, o mais abundante em canade-acar, glicose e frutose esto sempre presentes em baixas concentraes. Adicionalmente, outros 32 acares solveis foram detectados em
concentraes mnimas em vrias espcies e hbridos do complexo Saccharum (Glassop et al. 2010). O eventual papel dessas substncias na modulao de sinais fisiolgicos, incluindo crescimento vegetal e resposta a estresses, ainda no entendido.
Wahid e Ghazanfar (2006) encontram fortes evidncias para a hiptese
de que os metablitos secundrios desempenham papel fisiolgico na tolerncia salinidade pela cana-de-acar, particularmente em relao aos
danos oxidativos. A funo de tais metablitos pode ficar restrita aos compartimentos em que so acumulados, como carotenoides em cloroplastos e
fenlicos, antocianinas e flavonas no citosol.
O aumento na temperatura ambiente global outro fator crtico para o
crescimento vegetal. Para estudar alteraes no crescimento vegetal e nos
nveis de metablitos primrios e secundrios, e suas relaes com termotolerncia, mudas de cana-de-acar (NCO-310) de um ms de idade foram cultivadas sob condies controle (28C) e sob estresse trmico (40C)
e avaliadas em intervalos de doze horas. Inicialmente, o estresse trmico
reduziu significativamente a matria seca e a rea foliar das plntulas, mas
esse efeito foi posteriormente reduzido. Alteraes nas taxas de crescimento relativo e na assimilao lquida de gua foram maiores que a expanso
foliar relativa, indicando um efeito adverso do calor sobre a assimilao de
nutrientes e de CO2 na produo de matria seca.
Embora a reduo no potencial hdrico foliar tenha sido uma resposta
imediata ao calor, esse efeito foi compensando pela sntese prematura de
prolina livre, glicina betana e acares solveis. Entre os metablitos secundrios, a sntese de antocianinas foi similar de metablitos primrios;
carotenoides e fenlicos solveis acumularam posteriormente, enquanto o
teor de clorofila no sofreu alterao. As relaes entre nveis de atributos
de crescimento e nveis metablicos, no observados nos controles, foram
28
evidentes nas condies de estresse trmico, indicando sua importncia na

tolerncia da cana-de-acar ao calor (Wahid, 2007).
Alm dos metablitos destacados nos estudos citados acima, os compostos orgnicos volteis biognicos (BVOCs) liberados por plantas e que
incluem terpenoides, hidrocarbonetos no oxigenados e oxigenados (lcoois, aldedos, cetonas, steres) desempenham funo importante na sinalizao vegetal, incluindo atrao de polinizadores espcie-especficos,
defesa a herbvoros e patgenos (por exemplo, atravs da atrao de seus
inimigos naturais), regulao celular no desenvolvimento vegetal e, de uma
maneira geral, tambm podem ser indicadores da condio fisiolgica do
vegetal em condies de estresse (Farmer, 2001; Pechersky. Gershenzon;
2002; Penuela; llusia, 2003). Outro fato significativo que BVOCs desempenham tambm papel importante na qualidade do ar, na formao do aerosol orgnico secundrio (SOA), no sequestro de carbono e nas interaes
biosfricas (Atkinson; Arey, 2003).
Quase nada de BVOCs de cana-de-acar conhecido. Uma exceo
foi a caracterizao dos componentes volteis (Figura 1.6) responsveis
pelo aroma do suco fresco de cana-de-acar (variedade NCO 376), entre
os quais foram identificados os cidos hexanoico, heptanoico e nonanoico,
os lcoois benzlico, 2-feniletanol, 3-fenil-1-propanol e 3-fenil-2-propanol,
os fenis 2-metoxifenol, fenol, 4-hidroxi-3-metoxiestireno, 4-vinilfenol e
4-hidroxi-2-metxi-benzaldedo e a lactona 4-nonanolido (Tokitomo; Kobayashi; Yamanishi, 1984). As substncias volteis 3-hidroxi-4,5-dimetil-2(5H)-furanona (sotolona), 3-hidrxi-2-metil-4-piranona e 2-hidrxi-3-metil-2-ciclopentenona, relacionadas ao aroma do melao, no foram
detectadas no suco fresco, o que indicativo de que so produzidas durante
o processamento do suco, em condies alcalinas e sob alta temperatura.
Figura 1.6 Substncias volteis identificadas como responsveis pelo aroma de suco de
cana (garapa) e do melao.
29
Estudo da composio molecular da graxa epicuticular de cana exemplo recente de como a anlise multicomponente pode ser usada juntamente
como mtodos quimiomtricos para revelar caractersticas fenoqumicas
indicadoras de resistncia do vegetal a situaes especficas (Purcell et al.,
2005). Foram utilizados como caractersticas qumicas os catorze componentes principais da graxa epicuticular dos colmos, entre os quais sete aldedos, cinco lcoois e dois alcanos, todos de cadeia carbnica longa (C24
a C33), cujos teores foram avaliados em 122 clones de cana-de-acar com
diferentes nveis de resistncia broca da cana. As diferenas encontradas
nos diversos clones analisados so fundamentalmente quantitativas, cada
um possuindo uma proporo caracterstica entre os vrios componentes
da graxa epicuticular.
Utilizando anlise de componentes principais (PCA) foi possvel classificar arbitrariamente as amostras em trs grupos e relacion-los com os
constituintes da graxa. Atravs dessa anlise foi possvel relacionar os aldedos triacontanal (C30), dotriacontanal (C32), tetratriacontanal (C34)
e hexatriacontanal (C36) e o alcano heptacosano (C27) e o lcool triacontanol (C30) com os clones mais resistentes, enquanto os lcoois tetracosanol (C24), hexacosanol (C26) e octacosanol (C28) e o aldedo hexacosanal
(C26) foram relacionados aos clones mais susceptveis. Modelagem dessas
informaes atravs de quadrados mnimos parciais (PLS) confirmou a
possibilidade de prever a susceptibilidade de clones a partir da composio
qumica da graxa cuticular. Em outras palavras, esse mtodo pode reduzir
sensivelmente o tempo de desenvolvimento de novas variedades, uma vez
que o melhorista poder classificar novas plantas sem necessidade de experimentao biolgica.
Consideraes finais
Os relatos apresentados acima indicam a necessidade de sistematizao
e complementao do conhecimento das alteraes metablicas associadas
aos vrios cultivares de cana-de-acar, visando o entendimento de suas
funes nas variedades genticas resistentes a doenas e a estresses ambientais. O estudo metabolmico detalhado de cana-de-acar durante os
estgios de crescimento vegetal e sob condies diversas e severas de culti-
30
vo podem suportar essa proposta. Objetivos adicionais devem considerar a

avaliao de alteraes metablicas durante a infeco/infestao da planta
por patgenos e desenvolvimento de doenas, com intuito de identificar
marcadores qumicos de sade vegetal e fatores de resistncia a situaes de
estresse abitico ou bitico.
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2
Estudos da dormncia e
do condicionamento fisiolgico de sementes:
possveis contribuies
propagao de espcies vegetais
com potencial energtico
Edvaldo Aparecido Amaral da Silva,
Cludio Cavariani, Simoni Anese, Sue Ellen Ester Queiroz,
Ana Carla Resende Fraiz
Introduo
O Brasil, pas com expressiva biodiversidade, tambm o local de origem de vrias espcies vegetais de importncia econmica mundial, destacando-se a castanha do Par, a seringueira, o mogno, a mandioca e outras.
Alm dessas espcies, j mundialmente conhecidas e utilizadas, as espcies
com potencial energtico podem diversificar a matriz energtica brasileira
e, desse modo, reduzir a dependncia de fontes no renovveis de energia.
Atualmente no Brasil, iniciativas governamentais tm criado incentivos
produo de matrias-primas para suprir a demanda por biodiesel. Todavia, vrias dessas espcies carecem de estudos que possam favorecer a
propagao com o desenvolvimento de mtodos e protocolos de propagao
mais eficiente.
Nesse sentido, estudos sobre os mecanismos de dormncia e germinao, apoiados em tcnicas de pr-semeadura, como o condicionamento
fisiolgico, ampliaro as perspectivas quanto a utilizao das espcies de
potencial energtico por contribuir na sua propagao.
Existe, na literatura brasileira, elevado nmero de trabalhos cientficos que contemplam mtodos para a superao da dormncia de sementes de vrias espcies vegetais. Entretanto, poucos deles visaram ampliar
os conhecimentos sobre os mecanismos da germinao e da dormncia em
36
associao com as condies ambientais. Tais conhecimentos, quando gerados, podem, por exemplo, possibilitar o entendimento da influncia do
ambiente (temperatura, luz e precipitao) na superao da dormncia e na
germinao das sementes.
Adicionalmente, o uso da tcnica de condicionamento fisiolgico (priming) constitui uma ferramenta importante no apenas por proporcionar
germinao mais rpida e uniforme, mas, tambm, por induzir tolerncia s
sementes durante a geminao e o desenvolvimento de plntulas e plantas
em condies adversas de ambiente.
Assim, estudos fisiolgicos e tratamentos de pr-semeadura, juntamente com os avanos alcanados na rea da genmica, transcriptoma, proteoma e metaboloma, podem proporcionar a identificao de genes, protenas
e metablitos envolvidos com os referidos processos biolgicos e, tambm,
com a qualidade das sementes. O conjunto dessas iniciativas deve resultar
no desenvolvimento de marcadores moleculares para auxiliar no monitoramento da qualidade das sementes, para predizer seu desempenho, alm de
ter sua aplicao no melhoramento vegetal pela seleo assistida por marcadores. Finalmente, transformaes genticas, objetivando a melhoria da
qualidade de sementes, podem tambm ser aplicadas.
Atualmente, existe um grande nmero de espcies vegetais cujos genomas ou ESTs (Expressed sequence tags) foram realizados e, para muitas
delas, as informaes encontramse disponveis para acesso. (http://www.
ncbi.nlm.nih.gov). Entre as espcies com potencial para utilizao na produo de biodiesel, cita-se a Jatropha curcas L. (pinho-manso). Nessa espcie 13.249 ESTs foram obtidas durante o desenvolvimento e a germinao das sementes (Costa et al., 2010).
Definio de dormncia
De acordo com Bewley (1997), a dormncia pode ser interpretada como
uma falha de uma semente intacta e vivel em germinar sob condies aparentemente favorveis germinao. Para Laboriau (1983), a dormncia
de sementes definida como uma condio negativa, ou seja, mesmo sob
condies ambientais favorveis ou normalmente adequadas, a germinao
no ocorre.
ESTUDOS DA DORMNCIA E DO CONDICIONAMENTO FISIOLGICO DE SEMENTES
37
Em um conceito mais amplo, a dormncia de sementes pode ser entendida como um fenmeno que determina a ausncia momentnea ou a lenta
germinao de sementes viveis, apesar da existncia de condies ambientais favorveis ao processo.
Tipos de dormncia
A classificao de dormncia segundo a sua origem contempla dois tipos
de dormncia: a primria ou inata, e a secundria, ou induzida.
Dormncia primria
A dormncia primria instala-se durante a fase de desenvolvimento
e/ou maturao, de modo que a semente dispersa j em estado dormente,
exigindo tratamentos ou condies especficas para tornar-se quiescente.
As sementes, durante seu desenvolvimento, podem adquirir capacidade
de germinar logo aps a maturao, mas existem, na maioria das espcies,
mecanismos controladores do crescimento do embrio que impedem a
germinao na planta me. A persistncia dos fatores restritivos germinao, aps a maturidade e disperso da semente, caracteriza a dormncia
primria.
O cido abscsico (ABA), entre outros fatores, responsvel pela induo da dormncia. A dormncia primria no depende s do gentipo, mas
tambm das condies ambientais durante a maturao. Fatores como a posio da flor ou inflorescncia na planta, posio da semente na inflorescncia ou no fruto e idade da planta me durante a induo floral ou maturao
da semente tambm influenciam, diretamente, o grau de dormncia de
uma semente, alterando sua capacidade de germinao.
A dormncia primria possui duas funes bsicas: a primeira impedir a germinao precoce das sementes durante a fase de maturao; a segunda funo distribuir a germinao das sementes no tempo, ou seja,
evitar que todas tenham germinao sincronizada. A estratgia amplia as
possibilidades de sobrevivncia da espcie, mas interfere negativamente na
sua propagao comercial.
38
Dormncia secundria
A dormncia secundria de sementes ainda no foi completa e suficientemente elucidada na literatura pertinente. reconhecido que as sementes com
dormncia secundria so as que germinam normalmente, mas quando expostas a fatores ambientais desfavorveis, so induzidas ao estado de dormncia. Portanto, a dormncia secundria pode ocorrer em sementes anteriormente no dormentes ou com dormncia primria superada. De acordo com
Hilhorst (1995), as sementes podem passar por ciclos de dormncia, pela
ocorrncia sucessiva de induo e superao da dormncia secundria aps o
declnio da dormncia primria (no dormente), dependente das variaes de
fatores ambientais, at que as condies se tornem favorveis germinao.
Causas da dormncia
Bewley e Black (1982) reconheceram basicamente as seguintes causas de
dormncia: dormncia do embrio, includos os casos de inibio metablica e imaturidade do embrio, e dormncia imposta pelo envoltrio (ou tecido de cobertura), relacionada aos casos de impermeabilidade do tegumento,
presena de inibidores e restrio mecnica. Um sistema mais abrangente
dividiu a dormncia do embrio (dormncia endgena) em fisiolgica,
morfolgica e morfofisiolgica, e a dormncia imposta pelo envoltrio (ou
exgena) em fsica, qumica e mecnica (Baskin e Baskin, 1998).
Considerando uma abordagem mais clssica, as causas de dormncia em
sementes so: impermeabilidade do tegumento gua; impermeabilidade
da cobertura protetora a trocas gasosas; resistncia mecnica imposta pelo
tegumento, pericarpo ou tecidos de reserva; ao de substncias inibidoras
da germinao e imaturidade do embrio.
Impermeabilidade do tegumento gua
As sementes com tegumento impermevel gua so conhecidas por sementes duras, dureza que confere atraso na germinao das sementes. Esse
mecanismo de dormncia induzido durante o processo de maturao, no
perodo de acmulo de matria seca. No tegumento, ou envoltrio, dessas
sementes so depositadas substncias de natureza orgnica e hidrofbica
(lipdios, suberinas, cutinas e ligninas) em uma ou mais camadas de clula
39
que impedem a entrada de gua na semente. A hidratao e a consequente

superao da dormncia esto relacionadas, em muitos casos, formao de
aberturas em estruturas anatmicas especializadas, como o hilo, por exemplo, localizado na superfcie da semente, em que ocorre a reduo da resistncia entrada de gua (Baskin e Baskin, 2004).
A impermeabilidade do tegumento gua considerada uma das causas
mais comuns de dormncia em sementes de espcies tropicais e verificadas
com frequncia nas seguintes famlias: Fabaceae (leguminosas, principal
grupo), Cannaceae, Chenopodiaceae, Convallariaceae, Convolvulaceae,
Gramineaceae, Malvaceae, Solanaceae, Anacardiaceae e Rhamnaceae.
Alm dessas, diversas espcies de palmeiras possuem dormncia, principalmente relacionada impermeabilidade penetrao de gua para o embrio e o endosperma.
As sementes podem ser dispersas com diferentes graus de impermeabilidade gua ou dureza, por influncia do gentipo, da desuniformidade de
maturao e das alteraes das condies climticas durante a fase de maturao. Devido a essas diferenas de profundidade de dormncia das sementes, esse mecanismo possui importante papel ecolgico de distribuio
na germinao no tempo. A superao da dormncia devido a impermeabilidade entrada de gua ocorre na natureza, por processos que envolvem a
participao e a interao de microrganismos e temperaturas alternadas, e,
tambm, devido a ingesto das sementes por animais.
Impermeabilidade do tecido de cobertura a trocas gasosas
Neste caso de dormncia, os tecidos impermeveis que circundam o embrio limitam sua capacidade de trocas gasosas de modo a impedir o acesso necessrio ao oxignio obrigatrio germinao, mantendo a semente
dormente. sugerido por alguns autores que o tegumento ou envoltrio
das sementes possam oferecer resistncia entrada de oxignio ou sada
de gs carbnico durante a embebio. Entre outros fatores, a composio
qumica e a estrutura do tegumento podem controlar as trocas gasosas da
semente e o meio.
Resistncia mecnica
A ocorrncia de sementes com dormncia mecnica causada por tecidos que impedem expanso do embrio e protruso da radcula. Nesse
40
caso, a absoro de gua e oxignio ocorrem normalmente pelas sementes,

sendo que, o crescimento do embrio limitado pela rigidez dos tecidos que
o envolvem. Essa dormncia, muitas vezes, relacionada ao endosperma
que muito rgido, como o endosperma micropilar (endosperma localizado
na frente da radcula).
Endosperma micropilar rgido, que precisa ser enfraquecido para ocorrer a protruso da radcula, j foi constatado em diversas espcies, tais como
tomate (Solanum esculentum) (Groot; Karssen, 1987; Toorop; Bewley;
van Aelst; Hillhorst, 1996; Toorop; van Aelst; Hillhorst, 2000), pimenta
(Capsicum annum) (Watkins; Cantliffe, 1983), tabaco (Nicotiana tabacum) (Leubner-Metzger et al., 1995); melo (Cucumis melo) (Welbaum et
al., 1995), Datura ferox (Sanchez et al., 1986); caf (Coffea arabica) (Silva
et al., 2004); lobeira (Solanum lycocarpum) (Pinto et al., 2007); e jenipapo
(Genipa americana) (Queiroz, 2009). A superao desse mecanismo de dormncia ocorre devido a ao de vrias enzimas, entre elas, -galactose (EC
3.2.1.22), -manosidase (EC 3.2.1.25) e endo--mananase (EC 3.2.1.78),
no enfraquecimento do endosperma micropilar por hidrlise de mananas e
galactomananas, presentes nas paredes celulares do endosperma micropilar
das sementes.
Substncias inibidoras
A dormncia causada por substncias inibidoras est relacionada

substncias produzidas tanto fora como dentro das sementes, que, quando
translocadas para o embrio, podem inibir a germinao. Portanto, inibidores, presentes tanto na semente quanto no fruto, podem inibir a germinao
em situaes em que o embrio no se encontra dormente.
Imaturidade do embrio
As sementes de algumas espcies vegetais podem ser dispersas com

embrio fisiologicamente imaturo, que necessita ter o desenvolvimento
completado para que a germinao ocorra. No primeiro caso, as sementes
so dispersas da planta me com embrio no diferenciado, ou seja, no
possvel identificar as partes principais do embrio, como os cotildones,
hipoctilo e radcula. Nesse caso, o embrio teria que finalizar o seu desenvolvimento aps a disperso. Algumas sementes de orqudeas so dispersas
com o embrio formado por uma massa de clulas na qual no possvel
41
identificar as partes do embrio. Alguns autores classificam esse tipo de

dormncia como dormncia morfolgica.
Outras espcies vegetais tm suas sementes dispersas com embrio pouco desenvolvido, embora diferenciado em cotildones e em eixo hipoctilo-radcula, mas com barreiras fisiolgicas. Nesse caso, a germinao precedida por uma fase de crescimento desencadeada por condies ambientais
apropriadas. A combinao de dormncia morfolgica e fisiolgica chamada de dormncia morfofisiolgica. Sementes de Annona crassiflora, tambm conhecida como marolo ou araticum, um exemplo de espcie que
tem dormncia morfofisiolgica.
Do ponto de vista prtico, a dormncia presente em sementes de Annona
crassiflora compromete a produo de mudas da espcie. Exemplo de que
a pesquisa tem auxiliado nesse aspecto com relao ao entendimento das
condies ambientais necessrias para a superao da dormncia dessa espcie. Hoje conhecido que as oscilaes de temperaturas, bem como temperatura baixa do solo, prximas a 10C durante os meses de junho e julho,
so necessrias para a superao da dormncia.
Condicionamento fisiolgico de sementes

Condicionamento fisiolgico, ou priming, de sementes uma importante tecnologia pr-semeadura usada comercialmente para aprimorar
a qualidade de sementes, traduzido por elevao da taxa de germinao,
uniformidade de emergncia de plntulas e, em alguns casos, liberao de
dormncia, em diferentes espcies. A tcnica envolve a hidratao controlada das sementes suficiente para promover atividades pr-metablicas nas
fases iniciais da germinao (fases I e II), sem, contudo, ocorrer a protruso
da radcula (fase III) e secagem posterior para grau de umidade anterior
aplicao do tratamento (Heydecker; Higgins; Gulliver; 1973; Karssen et
al., 1989; McDonald, 1998; Powel et al., 2000). Os benefcios do priming
so constatados depois da reidratao. Em geral, ocorre aps o tratamento a
reduo da fase II, porque parte da preparao para entrada na fase III no
precisa ser repetida, de modo que a germinao subsequente mais rpida
e sincronizada (Powel et al., 2000; Karssen et al., 1989).
42
Solues osmticas, com agentes inorgnicos, como o NaCl, KNO3 e

MgSO4, e orgnicos, como polietilenoglicol (PEG), tm sido usadas e referem-se ao osmopriming. J o hidropriming envolve o uso de gua, com o controle da embebio realizado em funo do perodo de tempo que as sementes se mantm em contato com a gua e pela temperatura. A eficincia do
osmopriming sobre vigor, uniformidade de germinao, estabelecimento de
diferentes espcies e tolerncia a condies de estresse relatada em muitos
estudos (Ella; Dionisio-Sese; Ismail, 2011; Kissmann et al., 2010; Butler et
al., 2009; Kausar et al., 2009; Nascimento, 2005; Liu et al., 1996).
Contudo, o hidropriming tem vantagens por ser mais simples, econmico e de fcil aplicao, porque somente gua utilizada durante a embebio (Farooq et al., 2006a). Hidropriming tem sido usado com sucesso em
sementes de cereais (Farroq; Barsa; Wahid, 2006b; Moradi Dezfuli; Sharif-Zadeh; Janmohammadi, 2008), em hortalias (Caseiro; Bennett; Marcos
Filho, 2004; Venkatasubramanian; Umarani, 2007; Marcos Filho; Kikuti,
2008) e em sementes de espcies florestais (Pinedo; Ferraz, 2008; Anese et
al., 2011).
Os benefcios proporcionados pelo priming so influenciados por muitos
fatores. Inicialmente, para definir as melhores situaes de condicionamento, necessrio conhecer o comportamento da embebio e da fase inicial
da germinao da espcie de interesse. Aps isso, necessrio determinar a
melhor combinao de potencial osmtico, agente condicionador, perodo
de tempo e temperatura em que as sementes ficaro expostas ao tratamento
e o efeito da secagem aps o tratamento (Badek; van Duijn; Grzesik, 2006).
Portanto, no h um procedimento nico para o condicionamento de sementes de diferentes espcies, o que torna necessrio o desenvolvimento de
pesquisas para estabelecer um protocolo eficiente para a espcie, ou mesmo
cultivar.
Quando o condicionamento das sementes for favorvel, diversos eventos
metablicos podem ser ativados e contribuem com a melhoria da germinao subsequente. Os benefcios tm sido associados ativao de mecanismos de reparos macromoleculares e do sistema de membranas, incremento
nas atividades enzimticas e mobilizao de acares e protenas (Srinivasan; Saxena; Singh, 1999; McDonald, 1998). Em reviso recente, Varier e
colaboradores (2010) sumarizaram os principais processos, em nvel subcelular, resultantes da aplicao do priming. Foi destacado, mediante estudos
43
envolvendo anlise protemica, que enzimas associadas com a mobilizao

de reservas so ativadas ou sintetizadas durante o condicionamento. Alm
disso, foi possvel detectar o acmulo de protenas com a funo de minimizar danos celulares.
Da mesma forma, estudos de expresso gnica revelaram a presena de
genes que codificam protenas envolvidas na produo de energia e defesas
qumicas. O condicionamento tambm proporciona a pr-ativao do ciclo
celular, pelo preparo das clulas do embrio para a diviso, por aumentar a
sntese de -tubulina, que um componente dos microtbulos, mostrando-se, assim, como um dos mecanismos que propicia desempenho superior
da germinao de sementes submetidas ao tratamento.
O condicionamento fisiolgico, para algumas espcies, tambm est envolvido no mecanismo de superao de dormncia. O enfraquecimento do
endosperma micropilar tem sido proposto como o evento que controla a
germinao de diferentes espcies, tais como alface (Lactuca sativa) (Nascimento; Cantliffe; Huber, 2004), tomate (Groot et al., 1988) e Solanum
lycocarpum (Pinto et al., 2007). Endo--mananase (EBM) uma enzima
relacionada com o enfraquecimento do endosperma micropilar de tomate
(Still; Bradford, 1997; Toorop, 1998). Foi demonstrado em sementes de tomate durante o priming aumento da atividade de EBM e reduo da fora de
ruptura do endosperma micropilar (Still; Bradford, 1997; Toorop, 1998).
Do mesmo modo, em sementes de alface, EBM uma enzima chave na
regulao do enfraquecimento do endosperma e exige a ao do etileno para
ser ativada. Altas temperaturas durante a embebio das sementes podem
inibir a germinao atravs da supresso da sntese de etileno que, por sua
vez, reduz a atividade de EBM (Nascimento; Cantliffe; Huber, 2004). O
condicionamento das sementes em PEG (-1,2 MPa), 15C, mostrou-se
eficiente para superar os efeitos inibitrios da alta temperatura em sementes
de alface, melhorando a germinao e a atividade de EBM, o que sugere a capacidade do osmocondicionamento proporcionar a superao da termodormncia, mesmo em condies de supresso da sntese de etileno (ibidem).
Para ocorrer a germinao de sementes dormentes de S. lycocarpum,
uma espcie nativa do bioma Cerrado e importante colonizadora de reas degradadas, necessrio o enfraquecimento do endosperma micropilar,
processo coincidente com a elevao da atividade de EBM nessa regio do
endosperma (Pinto et al., 2007). Anese e colaboradores (2011) constataram
44
ambos os fenmenos durante o condicionamento em gua (hidropriming) de

sementes de S. lycocarpum, por quinze dias, 15C.
Assim, o enfraquecimento do endosperma micropilar, e consequente reduo da fora de resistncia ao alongamento do embrio e da protruso radicular na germinao subsequente das sementes, resultou em diminuio
do tempo necessrio para 50% de germinao (T50), elevao da uniformidade de germinao e melhor desempenho das mudas em condies de viveiro, traduzidos por incrementos em emergncia, em altura, em dimetro
e em massa da matria seca das plantas jovens. Foi sugerido a possibilidade
do emprego da tcnica de priming para beneficiar a produo de mudas na
restaurao de reas degradadas in situ, por exemplo.
Em espcies agrcolas, como a soja, Bejandi e colaboradores (2009) verificaram efeito positivo da imerso das sementes em gua durante doze
horas, 25C, seguida de secagem, assim como da imerso com a adio
de auxina e giberelina taxa mdia de emergncia, aos contedos relativos
de gua das folhas e de clorofila, ao comprimento da parte area e produtividade de gros em condies salnicas. Rouhi e colaboradores (2011)
avaliaram o efeito do osmoprimig e do hidropriming na melhoria qualitativa
de lotes de sementes de soja. O osmopriming em PEG (-1,2 MPa), por doze
horas, foi o tratamento que resultou em valores superiores de germinao,
de velocidade de germinao e de comprimento das plntulas, com a concluso de constituir excelente tcnica para aprimorar o desempenho fisiolgico das sementes, inclusive das de vigor inferior, traduzido por emergncia
uniforme de plntulas no campo.
O condicionamento fisiolgico pode favorecer a germinao e o crescimento de plntulas sob condies de dficit hdrico em sementes de oleaginosas, como o girassol (Kaya et al., 2006). Em condies de campo, a
imerso de sementes de girassol em gua durante 24 horas a 27C, seguida
de secagem, promoveu aumento na velocidade de emergncia das plntulas
(Hussain et al., 2006). Barros e Rossetto (2009) demonstraram que o osmocondicionamento dos aqunios de girassol em KNO3 foi eficiente em promover a superao da dormncia e/ou o reparo metablico do lote de aqunios envelhecido artificialmente. Em sementes de canola, outra cultura com
potencial para produo de biodiesel, Basra e colaboradores (2003) relataram que o priming afetou significativamente os parmetros de crescimento
e registrou um aumento no ndice de rea foliar e acmulo de matria seca.
45
Sementes de linhagens hbridas de milho submetidas ao hidropriming

por 36 horas, tiveram elevada germinao e maior comprimento radicular
das plntulas em comparao ao controle (Moradi Dezfuli; Sharif-Zadeh;
Janmohammadi, 2008). Do mesmo modo, o condicionamento osmtico
realizado por trs dias com polietilenoglicol, sob potenciais de -1,0 MPa e
-1,2 MPa, proporcionou aumento da germinao de sementes de milho doce
armazenadas por seis meses, e pode constituir uma alternativa para superar
a queda de germinao durante o armazenamento (Oliveira et al., 2007).
Apesar dos estudos realizados e tendo em vista a diversidade de espcies
da flora brasileira com potencial energtico, so necessrias, ainda, mais informaes a respeito do condicionamento fisiolgico das sementes para esse
grupo vegetal. Assim, investigaes mais detalhadas para desvendar as bases fisilogicas, bioqumicas e os aspectos da biologia molecular das sementes, durante e aps a aplicao do condicionamento fisiolgico (osmopriming
e ou hidropriming), poderiam indicar os aprimoramentos necessrios da
tcnica e, consequentemente, o desenvolvimento dos protocolos adequados
para o alcance de benefcios reais que contribuam expanso da produo.
Mecanismos fisiolgicos e moleculares associados

s sementes submetidas ao condicionamento fisiolgico
Embora os efeitos da tcnica de priming sejam conhecidos, conferindo
tolerncia s situaes de estresse, ainda no existem trabalhos suficientes
para desvendar os mecanismos moleculares associados a essa tolerncia.
Assim, atualmente, uma linha de pesquisa que se destaca so os estudos
voltados para promover no apenas rpida e uniforme germinao s sementes, mas, tambm, para conhecer em nvel molecular quais protenas
so induzidas durante os tratamentos que favorecem a emergncia das
plntulas e o desenvolvimento das plantas em situaes de estresse.
Os estresses ambientais podem provocar perdas na planta, porm, em
contrapartida, acarretar respostas de preveno e de reparo (Kranner et al.,
2010) que so controladas em nvel molecular mediante mudanas na expresso gnica. As plantas so capazes de expressar um tipo de memria,
tambm chamada de impresso do estresse. Essa impresso, comumente
traduzida por modificaes genticas e bioqumicas induzidas por uma
primeira exposio ao estresse, aumenta a resistncia a uma condio ad-
46
versa subsequente (Bruce et al., 2007), mediante a induo de respostas de

tolerncia. A tolerncia pode estar relacionada a um arranjo de respostas
morfolgicas, fisiolgicas, bioqumicas e moleculares que diminuem as
perdas causadas pela exposio ao estresse, ou facilitam o reparo de perdas
do sistema (Potters et al., 2007).
Alguns trabalhos indicam que o efeito benfico do condicionamento
fisiolgico diante do estresse tem sido associado ao acmulo de mRNA e de
protenas inativas produzidas durante o condicionamento osmtico (Bray
et al., 1989; Gallardo et al., 2001; Ozbingol et al., 1999), ao reparo e sntese
de novas molculas de DNA e RNA (Kausar et al., 2009) e ao aumento da
sntese de antioxidantes (Chen; Arora, 2011; Srivastava et al., 2010). Esses so alguns exemplos de eventos que contribuem para a preservao da
integridade do genoma e para a qualidade de sementes. Soeda e colaboradores (2005) identificaram expresso de genes relacionados tolerncia a
estresse durante o condicionamento de sementes de Brassica oleracea, como
SOD (superoxido dismutase), HSP (protenas de choque trmico) e LEA
(protenas abundantes do final da embriognese).
Alm de mudanas na sntese de macromolculas, outro modo das plantas superarem condies adversas evitar o estresse. Esse mecanismo
conhecido como escape (Larcher, 2000) e tambm pode ser desencadeado
pelo condicionamento osmtico. ndices superiores de velocidade de germinao (IVG) de sementes condicionadas, em relao as no condicionadas, foram observados em trabalhos de pesquisa e significam reduo do
tempo entre a semeadura e a protruso da radcula, ou seja, maiores chances
de escape a possveis intempries ambientais.
A maior eficincia na absoro de gua do meio, o incio antecipado das
atividades metablicas do processo de germinao (Hassanpouraghdam,
et al., 2009) e a menor aderncia do tegumento durante a emergncia das
plntulas (Nascimento; West, 1998) so justificativas ao menor tempo para
a protruso da radcula, como demonstrados em Cucumis melo e Brassica
napus. O reduzido espao de tempo para a protruso da radcula e emergncia das plntulas, a partir da semeadura, considerado a caracterstica
que proporciona possvel vantagem ecolgica no estabelecimento da planta
em reas com condies subtimas (Bewley; Black, 1994), como baixas e
altas temperaturas (Wahid; Shabbir, 2005), baixas umidades no solo (Du;
Tuong, 2002) e salinidade (Wahid et al., 2007).
47
Outras caractersticas encontradas foram maior capacidade de ajustamento osmtico das clulas e a maior quantidade de acar e cidos orgnicos em plantas de tomate originrias de sementes condicionadas em solues salinas. Nesse caso, as plantas de tomate mostraram maior tolerncia
salinidade do solo (Cayuela et al., 1996).
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Tecnologia de aplicao e inovaes voltadas
ao uso racional de defensivos agrcolas em
culturas destinadas produo de bioenergia
Caio Antonio Carbonari,
Edivaldo Domingues Velini,
Ulisses Rocha Antuniassi
Introduo
A produo de energia a partir da biomassa vegetal , luz do conhecimento atual, a alternativa mais vivel para a substituio dos combustveis
fsseis. Nesse contexto, o Brasil apresenta destaque no cenrio mundial
com ampla produo de energia por fontes renovveis, com vasto uso de
biomassas vegetais. Entre as fontes de energia primria no Brasil, destacam-se os produtos provenientes da cana-de-acar e a lenha, respectivamente
responsveis por 18,8% e 10,2% da energia primria brasileira (Empresa
de Pesquisa Energtica, 2010). Assim, as culturas da cana-de-acar e do
eucalipto, que a principal espcie florestal plantada no Brasil, destacam-se no pas como culturas de grande importncia quanto produo de bioenergia.
A cana-de-acar sobressai como uma das culturas mais notveis do
pas, produzindo matria-prima para a indstria sucroalcooleira e cogerao de energia eltrica. O Brasil o maior produtor mundial de cana-de-acar, com uma rea plantada de aproximadamente 8 milhes de ha, sendo 4,35 milhes de ha somente no estado de So Paulo (Companhia Nacional de Abastecimento Conab, 2011). Essa rea representa um aumento
de 8,4% do obtido na safra passada, ou seja, uma quantidade de 674 mil
hectares adicionais da cultura.
54
A agroindstria canavieira est plenamente implantada e em expanso

no Brasil. Nas ltimas dcadas, a indstria canavieira tem demonstrado
grande capacidade de agregar valor a coprodutos do lcool e do acar,
como a vinhaa (como fertilizante), a torta de filtro, o bagao (matria-prima industrial, alimentao animal e gerao de energia) e a palhada (gerao de energia). A tendncia para os prximos anos que cada unidade
industrial destinada transformao da cana produza, alm do acar e do
lcool, energia, crditos de carbono e um grande nmero de matrias-primas industriais.
A palhada o coproduto mais recente da cultura e a sua acumulao no
campo foi desencadeada pela alterao do mtodo de colheita. A colheita
mecanizada da cana sem queima da palha deu origem a um novo sistema
de produo denominado de cana crua. A colheita tradicional com queima
da palha dever estar extinta em futuro prximo, em funo de presses
ambientais e trabalhistas. O sistema de cana crua j utilizado de maneira
predominante nos canaviais do estado de So. As bases para o uso da palhada para a produo de energia ou para fins industriais ainda esto sendo
criadas. Esse resduo normalmente supera 10t ha-1 de biomassa no campo,
justificando os esforos para o seu uso.
Do mesmo modo, o plantio de eucalipto assume grande importncia nacional pela gerao de matria-prima para a indstria e gerao de energia.
De acordo com ABRAF (2010), 56% (2.534.240 ha) das reas com florestas
plantadas de eucalipto no Brasil se localizam na regio Sudeste, com destaque para o estado de Minas Gerais (1.300.000 ha) seguido por So Paulo
(1.029.670 ha), respectivamente, com participaes de 29% e 23% do total
do pas. A expanso de ambas as culturas ocorre em reas ocupadas anteriormente por outras culturas, menos rentveis, particularmente em pequenas propriedades, assim como em reas recm-desmatadas.
Outras duas culturas de grande destaque em termos de produo de bioenergia so a soja e o milho. O leo de soja utilizado na produo de 86%
do biodiesel consumido no Brasil (ANP, 2011). Desde o incio de 2010, o
biodiesel adicionado ao leo diesel na proporo de 5% em todo o territrio nacional. O milho constitui a base para o programa de produo de
etanol nos EUA, o maior produtor mundial desse combustvel.
As quatro culturas citadas, cana, eucalipto, soja e milho so as de maior
relevncia para a produo de bioenergia no Brasil (as trs primeiras) e no
TECNOLOGIA DE APLICAO E INOVAES VOLTADAS AO USO RACIONAL
55
mundo. Culturas como beterraba aucareira, mamona, dend, girassol,

pinho-manso, canola so tambm importantes em termos de Brasil e de
mundo, mas em um nvel inferior s quatro destacadas neste texto.
Algumas crticas produo de bioenergia so recorrentes. A primeira delas refere-se ao fato das culturas produtoras de energia, competirem
em rea e recursos com cultivos produtores de alimentos. Esse risco de fato
existe, mas minimizado quando a cultura em questo permite o uso com
mais de uma finalidade como o caso da soja e do milho. No caso dessas
duas culturas, apenas parte dos gros utilizada na produo de combustveis, sendo que o restante destinado produo de alimentos destinados
a animais, principalmente. Na medida em que o cultivo de ambas para a
produo de energia estimulado, a produo de alimentos , na mesma
medida, beneficiada.
Quanto cana-de-acar, praticamente toda a biomassa destinada
produo de energia havendo as seguintes possibilidades principais: 1) energia metablica a partir da sacarose; 2) etanol a partir da sacarose; 3) etanol
de segunda gerao produzido a partir do bagao e de outros resduos como
a palhada; 4) gerao de energia eltrica a partir do bagao e da palhada.
Quando da renovao da cultura (da ordem de 15% ao ano), comum a rotao da cana com culturas anuais como amendoim e soja, havendo a possibilidade de produzir alimentos em reas tradicionalmente cultivadas com a
espcie.
No caso do eucalipto, os sistemas de integrao pastagem, lavoura e
pecuria so alternativas promissoras para a produo de madeira de modo
harmonioso com a produo de alimentos, mas so sistemas cujo desenvolvimento ainda demanda intensa atividade de pesquisa para otimiz-los.
O eucalipto a alternativa mais eficiente para a produo de lenha, que j
corresponde a 10,2% da matriz energtica brasileira (Empresa de Pesquisa
Energtica, 2010) e cresce a sua utilizao na produo de energia eltrica. Nesse ltimo caso, o maior desafio corresponde ao desenvolvimento de
sistemas de cultivo e de colheita voltados a essa nova utilizao da cultura.
Outra crtica frequente produo de bioenergia refere-se elevada demanda de insumos e outros recursos necessrios produo da biomassa
com esse fim. O primeiro fator de produo sempre mencionado a gua.
De fato, a preocupao se justifica quando se considera que mais de dois
teros de toda a gua consumida pela humanidade utilizada para abastecer
56
sistemas de irrigao. Nesse aspecto, os sistemas de produo de soja, milho, cana e eucalipto, desenvolvidos no Brasil so bastante eficientes, pois
a grande maioria das reas cultivadas so reas de sequeiro, ou seja, sem
irrigao. Em outros pases, o uso de irrigao em soja e milho, principalmente, bastante frequente, justificando a preocupao apresentada.
O aumento do uso de fertilizantes para produzir bioenergia tambm
uma grande preocupao em funo da possibilidade da exausto das rochas e fontes de energia utilizadas na sua produo . Nesse aspecto, os sistemas de produo em uso no Brasil tambm so modelos de eficincia.
Praticamente todos os produtores de soja lanam mo de fixadores simbiticos de nitrognio inoculados nas sementes das culturas e que praticamente dispensam o uso desses fertilizantes na cultura. Em cana, o uso de fertilizantes tem sido minimizado pelo retorno da grande maioria dos resduos
como vinhaa e torta, ao campo, reduzindo a necessidade de adubao
da cultura.
Em eucalipto, vem sendo muito bem-sucedido o melhoramento gentico da cultura, associado clonagem dos melhores gentipos, que tem
permitido a obteno de clones mais produtivos, rsticos e com menor demanda de nutrientes por tonelada de madeira produzida. Apesar do grande
esforo feito pelas instituies de pesquisa, pelas indstrias de fertilizantes
e pelos produtores, o Brasil ainda importa cerca de 25%, 50% e 90% de todo
o nitrognio, fsforo e potssio consumidos para fins agrcolas. Talvez seja
esse o ponto de maior vulnerabilidade de nossa produo agropecuria; no
h como mant-la sem a importao de fertilizantes.
Outra crtica recorrente ao uso dessas quatro culturas agrcolas na produo de bioenergia refere-se ao uso de defensivos agrcolas com possveis
efeitos negativos sobre a qualidade dos produtos obtidos e, principalmente,
sobre o meio ambiente. sobre esse tema que versar este texto.
Os defensivos agrcolas desempenham um papel de grande importncia
na agricultura, contribuindo para reduo dos agentes nocivos e aumento na produo e qualidade dos produtos agrcolas, desde que aplicados de
maneira racional, evitando-se a contaminao do solo e da gua, os danos
sade humana e animal e o surgimento de pragas, plantas e patgenos
resistentes (Cunha et al., 2003). Em termos de valores despendidos com
defensivos agrcolas, as informaes podem sofrer alteraes a cada safra,
mas as participaes das trs principais classes de produtos (herbicidas, in-
57
seticidas e fungicidas) tm se mantido prximas a 40%, 30% e 15% respectivamente. Em termos de culturas, as participaes da soja, milho e cana tm
sido prximas a 45%, 12% e 8% respectivamente. Uma quarta cultura de
grande destaque a do algodo com participao no mercado similar da
cana-de-acar. No foram encontradas informaes sobre o mercado total
de defensivos agrcolas na cultura do eucalipto.
As culturas da soja e milho tm se mantido em posio de destaque no
uso de defensivos agrcolas em funo dos seguintes fatores: 1) da rea total
de cultivo; 2) da extenso das reas cultivadas na maioria dos pases, em
regies do Brasil e em sistemas de produo, dificultando o uso do controle manual, por exemplo; 3) amplo uso do plantio-direto (predominante no
Brasil), inviabilizando o uso do cultivo mecnico; 4) aumento do nmero
de aplicaes de herbicidas em funo da elevada utilizao de linhagens
transgnicas que so resistentes a herbicidas de ps-emergncia sem efeito residual (exemplos: glyphosate e glufosinate); 5) presena de plantas
daninhas resistentes a herbicidas. Especificamente para a soja, destaca-se
a recente introduo no Brasil da ferrugem asitica, causada pelo fungo
Phakopsora pachyrhizi, que pode reduzir drasticamente a produtividade da
cultura se no forem adotadas medidas de controle.
Em cana-de-acar, h amplo predomnio dos herbicidas na composio do mercado total de defensivos agrcolas, mas tambm so comuns as
aplicaes de inseticidas no combate de pragas e de maturadores. No caso
dos maturadores, a aplicao tem sido feita com o emprego de aeronaves e
vrios dos compostos utilizados tm tambm ao como herbicida (exemplos: glyphosate; sulfometuron-metil e fluazifop-p-butil). Especificamente quanto aos herbicidas, predominam os produtos aplicados em pr-emergncia ou ps-emergncia com efeito residual no solo para que o controle
de plantas daninhas possa ser feito por perodos que podem ultrapassar 180
dias. Em ps-emergncia, alm da aplicao dos maturadores, h as aplicaes localizadas (catao qumica) e as aplicaes de glyphosate direcionadas s folhas da cana para eliminao das soqueiras quando da renovao
ou substituio da cultura.
Quando so aplicados herbicidas com ao de pr-emergncia, o alvo
preferencial pode ser o solo ou a palhada. As aplicaes sobre a palhada tm
predominado em funo das restries queimada da cultura antes da colheita e do uso crescente do sistema de colheita mecanizada. Em reas de
58
cana colhida crua, sem queima das folhas, a quantidade de palha que permanece sobre o solo pode ultrapassar a 10 t ha-1, e esta camada de resduo interfere de modo decisivo na dinmica e persistncia de herbicidas, de outros
defensivos e de fertilizantes nas reas de produo. Segundo as informaes
referentes a 2009, o mercado de defensivos agrcolas em cana-de-acar
movimentou US$ 768,4 milhes (9,5% das vendas no pas), sendo que, desse total, 73,5% foram gastos com herbicidas, 22,8% com inseticidas e 3,7%
com fungicidas (Souza; Macedo, 2009).
Em eucalipto, tambm predomina amplamente o uso de herbicidas,
com destaque para o glyphosate, que tem como principal modalidade de
uso, a aplicao direcionada s plantas daninhas para que no intoxique a
cultura. O glyphosate tambm pode ser aplicado previamente colheita
para melhorar as condies de trabalho para os envolvidos nessa operao,
na desinfestao inicial das reas antes do plantio da cultura e na prpria
eliminao da cultura (aplicado s rebrotas ou diretamente ao toco). Outros
exemplos de herbicidas de amplo uso na cultura so: sulfentrazone, isoxaflutole e flumioxazin. Nos ltimos anos, a ocorrncia de pragas e doenas
tambm tem levado necessidade de uso de inseticidas e fungicidas nas
reas de produo da cultura, alm dos viveiros de produo de mudas.
Processos envolvidos nas perdas de defensivos agrcolas

Depois da aplicao de um defensivo agrcola, vrios processos fsicos, qumicos e biolgicos determinam seu comportamento. O destino de
herbicidas no ambiente governado por processos de reteno (adsoro,
absoro), de transformao (decomposio, degradao) e de transporte
(deriva, volatilizao, lixiviao, escoamento superficial), e por interaes
desses processos. Alm da variedade de processos envolvidos na determinao do destino ambiental de herbicidas, diferenas nas estruturas e
propriedades das substncias qumicas e, nas caractersticas e condies
ambientais, podem afetar esses processos. Condies meteorolgicas, composio das populaes de microrganismos no solo, presena ou ausncia
de plantas, localizao do solo na topografia e prticas de manejo dos solos
podem tambm afetar o destino de defensivos agrcolas no ambiente (Spadotto, 2002).
59
Deriva e uniformidade nas aplicaes de defensivos agrcolas

Quando se realiza a aplicao de determinado defensivo agrcola, geralmente, busca-se colocar a quantidade certa de ingrediente ativo no alvo desejado, com mxima eficincia e de maneira mais econmica possvel, sem
afetar o meio ambiente (Durigan, 1989). A deriva definida como parte da
pulverizao agrcola que carregada para fora da rea-alvo, pela ao do
vento (Miller, 1993) ou pela volatilizao do produto. Entre os fatores que
interferem na ocorrncia da deriva, podem ser mencionadas as caractersticas do herbicida, o tipo de equipamento, a calibrao, o tipo de pontas de
pulverizao, as tcnicas de aplicao, as condies meteorolgicas e a habilidade do operador (Costa et al., 2007; Cunha et al., 2003; Ozkan, 2011;
Penckowski; Podolan; Lpezovejero, 2003; Viana et al., 2007).
A deriva em aplicaes de defensivos agrcolas pode ser considerada como um dos maiores problemas da agricultura atualmente, tendo em
vista o grande aumento no consumo e dependncia desses produtos para a
proteo das culturas agrcolas. Dessa forma, altos nveis de perdas durante a aplicao de um defensivo agrcola implicam em uma menor eficcia
biolgica e um maior risco ambiental. Segundo Friedrich (2004), estima-se que cerca de 50% dos defensivos agrcolas so desperdiados devido s
ms condies de aplicao. Carbonari e colaboradores (2011) observaram
perdas entre 2% e 62 % do volume total da calda de herbicidas aplicados em
reas de cana-de-acar, em funo de falhas operacionais e/ou condies
climticas inadequadas no momento da aplicao.
Dessa forma, alm dos prejuzos diretos para o produtor que realiza a
pulverizao, causados pela menor deposio do produto aplicado sobre o
alvo, existem outros motivos que tornam a deriva indesejvel, como o pagamento de indenizaes por perdas em reas vizinhas, a contaminao de
alimentos, a contaminao do ar e da gua, efeitos prejudiciais sade e
segurana do ser humano e animais, entre outros.
A Tabela 3.1 apresenta resultados de pesquisa cujo objetivo foi a determinao do ndice de deriva de aplicaes areas e terrestres em condies
consideradas prximas dos limites operacionais quanto s condies climticas. Nessas aplicaes, possvel observar que o uso de gotas finas em
condies limites pode resultar em nveis elevados de deriva, com potencial
tanto para redues significativas das doses reais dos produtos a campo
como para o risco de deriva direta de produtos em reas vizinhas, o que
pode efetivamente causar danos econmicos e ambientais.
60
Tabela 3.1 ndices de perdas em aplicaes areas e terrestres de acordo com as condies climticas no momento das aplicaes
Sistema
Volume
Temperatura Umidade
Adjuvante Gotas
(L/ha)
(C)
(%)
Areo
12
Areo
Terrestre
Terrestre
Vento
(km/h)
Perdas
(%)
OV 10%
Finas
25,4
76,0
7,7 11,9
28,8
30
Finas
29,5
74,5
13,0 24,0
40,1
30
OV 5%
Finas
27,6
73,7
11,0 14,0
39,8
50
Finas
29,5
62,5
8,5 24,1
42,5
Fonte: Antuniassi et al., 2009
A classificao de valores de deriva como aceitveis ou inaceitveis

uma prtica difcil, pois a variabilidade de condies de trabalho a campo
muito grande, dificultando a determinao de parmetros de comparao.
Em tese, o ideal que a deriva fosse nula, mas o cotidiano das aplicaes
mostra que extremamente frequente em uma situao normal de campo
que algum nvel de deriva sempre ocorra.
Cada sistema produtivo apresenta peculiaridades, as quais induzem a
diferentes nveis de perdas nas aplicaes. A prtica agronmica tem mostrado que ndices totais de perdas acima de 50% podem ser aceitveis para
alguns tipos de aplicaes em fruticultura (turboatomizadores de fluxo divergente, por exemplo), enquanto nveis prximos a estes seriam inaceitveis numa aplicao com pulverizador de barras na cultura da soja, por
exemplo. Mesmo dentro de um nico mercado, o ndice total de perdas
considerado aceitvel apresenta variaes prticas. Aplicaes de dessecantes como glyphosate e 2,4-D so usualmente realizadas com extremo
cuidado, frequentemente utilizando pontas com induo de ar de gotas
grossas ou muito grossas, e por isso o nvel de deriva total muito baixo, em
geral inferior a 10%. J em uma aplicao de fungicidas ou inseticidas com
gotas finas, visando maximizar a cobertura das folhas em soja, um nvel de
perdas totais da ordem de 20% a 25% poderia ser considerado normal, dada
a grande suscetibilidade dessas gotas finas, no que se refere aos fatores que
causam a deriva.
Assim, de acordo com os dados de pesquisa apresentados na Tabela 3.1,
observa-se que a aplicao area a 12 L ha-1 foi realizada em condies climticas prximas da normalidade, dentro das recomendaes usuais, e o
resultado de 28,8% de perdas totais poderia ser considerado um pouco
acima do aceitvel. Por outro lado, as demais aplicaes apresentadas na
61
Tabela 3.1 foram todas realizadas com excesso de vento e/ou temperaturas
prximas dos limites operacionais, elevando os valores de deriva a patamares que podem ser considerados inaceitveis (prximos ou acima de 40%
de perdas).
A deteco da deriva tem grande importncia, pois, enquanto as perdas
ocasionadas por esse fator no forem facilmente identificadas, produtores
de culturas sensveis em reas adjacentes podem ter substanciais redues
na produo sem identificar a verdadeira causa (Schroeder; Cole; Dexter,
1983). Matthews (1999) ressalta a preocupao mundial com os efeitos que
a deriva pode provocar fora das reas tratadas, cujo resultado tem sido a
necessidade de instalao de reas de proteo (buffer zones) para cursos
dgua e outras reas sensveis.
Eliminar completamente a deriva bastante improvvel, no entanto,
esta pode ser minimizada usando-se tcnicas e mtodos de aplicao corretos, tamanho de gotas adequados, limpeza e regulagem do equipamento, aplicao em condies climticas adequadas e/ou uso de formulao
apropriada. No entanto, o que se observa no campo a falta de informao
a respeito da tecnologia de aplicao (Costa et al., 2007).
Alm da deriva, em aplicaes com barra de pulverizao, a deposio
do produto extremamente varivel devido a movimentos verticais e horizontais dessa barra. Para alcanar um melhor desempenho na pulverizao
com barras longas no campo, onde a superfcie do solo ondulada, Nation
(1977) sugere mudanas nos modelos das barras e no seu acoplamento visando diminuio dos movimentos verticais e horizontais. Speelman e
Jansen (1974) estudaram os efeitos da movimentao da barra na distribuio da calda de pulverizadores e concluram que as suas vibraes afetam
de maneira negativa a distribuio da calda, principalmente nas pontas
da barra.
Porskamp e Van Zuydam (1992) verificaram que as movimentaes
verticais e horizontais de 20 cm aumentam o coeficiente de variao em
48% a mais no centro e 78% na ponta da barra. Verificaram, tambm, que
o movimento horizontal da barra de pulverizao mais prejudicial que o
movimento vertical. Essa variao nos depsitos pontuais dentro da rea de
aplicao contribui de forma bastante significativa para reduo de eficcia
da maioria dos defensivos agrcolas disponveis, o que acaba implicando na
necessidade de aumento nas doses desses produtos para uma ao efetiva.
62
Perdas por volatilizao e fotodegradao

A presso de vapor a presso exercida por um vapor em equilbrio com
um lquido, a uma determinada temperatura. Essa caracterstica indica o
grau de volatilizao do defensivo agrcola, ou sua tendncia em se perder
na forma de gs na atmosfera. Quanto maior a presso de vapor do defensivo agrcola, maior o seu grau de volatilizao e maiores so as chances de
perdas para a atmosfera (Oliveira, 2001; Monaco; Weller; Ashton, 2002).
Em condies de alta temperatura e baixa umidade relativa do ar, o potencial de volatilizao maior, sendo essas condies inapropriadas para a
aplicao de defensivos agrcolas classificados como volteis. Quanto maior
a presso de vapor (Tabela 3.2), maior seu potencial de volatilizao.
Tabela 3.2 Classificao da volatilidade em funo da presso de vapor
Classificao
No voltil
Presso de vapor (mm Hg)

< 10-8
Pouco voltil
10-7 a 10-5
Medianamente voltil
10-4 a 10-3
Muito voltil
>10-2
Outro mecanismo importante quanto s perdas de defensivos agrcolas

aps a aplicao a fotodegradao ou fotodecomposio, desencadeada
quando a molcula do defensivo agrcola absorve a energia da radiao solar excitando os seus eltrons, o que acarretar na ruptura de ligaes (Monaco; Weller; Ashton, 2002). Esse fenmeno pode causar a desativao das
molculas dos defensivos agrcolas, resultando em perdas significativas dos
produtos. Cada molcula sensvel a comprimentos de ondas especficos,
em geral, na faixa do ultravioleta. Na prtica, a fotodegradao um fenmeno que ocorre para produtos que apresentam picos de absoro de comprimentos de onda entre 295nm e 400 nm (Christoffoleti; Ovejero, 2005).
Para muitos herbicidas so conhecidos os efeitos da fotodegradao
quando aplicados diretamente sobre o solo, sendo estes agravados em condies de solo seco, conforme Velini (1992). Por sua vez, nota-se um crescente aumento de reas cultivadas sobre algum tipo de cobertura morta
(palhada), como plantio direto de culturas anuais, cultivo mnimo em reflorestamentos e cana crua, sendo, atualmente, o herbicida aplicado sobre es-
63
ses restos vegetais. Vale ressaltar que em cana-de-acar, por exemplo, uma
prtica comum a aplicao de herbicidas pr-emergentes imediatamente
aps a colheita que realizada com frequncia em perodos do ano de maior
restrio hdrica (junho a setembro).
A aplicao de herbicidas de ao residual sobre palhadas altera significativamente sua dinmica no ambiente, pois sua chegada ao solo dependente da ocorrncia de chuvas. Assim, a permanncia dos herbicidas sobre
a palhada potencializa os efeitos da fotodegradao pela maior exposio
dos produtos radiao solar. Segundo Locke e Bryson, (1997), um herbicida aplicado sobre a palhada interceptado pela superfcie da palha ali
depositada e torna-se vulnervel degradao causada pela volatilizao
e/ou fotodecomposio, at que seja lixiviado para o solo. Por conseguinte,
a fotodegradao de herbicidas conhecidos por serem foto estveis no solo,
pode ser alterada e potencializada quando da aplicao sobre a palhada,
consequncia da maior exposio aos raios solares.
Perdas por lixiviao no solo

Na maioria das situaes, uma parcela muito significativa dos defensivos agrcolas aplicados, tem como destino final o solo. No solo, os defensivos agrcolas em geral e particularmente os herbicidas com ao residual
podem sofrer processos de soro, lixiviao e/ou degradao por efeitos fsicos, qumicos e biolgicos, alm de ser absorvidos pelas plantas daninhas
e/ou plantas cultivadas (Velini, 1992). Os defensivos agrcolas apresentam
algumas caractersticas fsico-qumicas que, juntamente com as condies
ambientais e atributos fsicos, qumicos e biolgicos do solo, regem sua
dinmica no solo. Essas caractersticas so especficas para cada produto,
mesmo para aqueles pertencentes ao mesmo grupo qumico, e seu conhecimento de fundamental importncia para o sucesso na sua utilizao.
Dentre as caractersticas que determinam o comportamento dos herbicidas no solo, as mais importantes so: constante de equilbrio de ionizao de um cido ou base fraca (pKa); coeficiente de partio octanol-gua
(Kow); solubilidade em gua; presso de vapor e meia-vida do herbicida
no solo. As constantes de ionizao cido/base (pKa ou pKb) de molculas
que possuem carter cido fraco ou base fraca, respectivamente, representam a sua tendncia de ionizao numa determinada faixa de valores de pH.
64
Sendo assim, o pKa o pH no qual metade das molculas esto ionizadas

e metade no ionizadas. Esse parmetro mostra o valor de pH em que as
formas ionizadas e no-ionizadas do herbicida ocorrem em iguais concentraes, respondendo, cada uma das formas, por 50% da concentrao total
do composto (Procpio et al., 2003). Conforme a constante de equilbrio
de ionizao, os herbicidas inicos podem ser classificados em herbicidas
cidos ou herbicidas bsicos (Oliveira, 2001; Regitano et al., 2002).
O coeficiente de partio (Kow) representa a proporo entre as quantidades de um determinado herbicida que migram para um solvente orgnico apolar (geralmente o octanol) ou para a gua (polar), quando adicionado
e agitado em frascos em que se encontram quantidades determinadas dessas substncias utilizadas como solventes, ou seja, os valores de Kow referem-se medida da intensidade da afinidade da molcula pela fase polar
e apolar.
A solubilidade em gua de uma molcula de herbicida caracterizada
pela quantidade do herbicida dissolvida em gua pura, ou seja, indica a proporo de herbicida que poder estar disponvel na soluo do solo, podendo ser absorvida por razes e sementes em germinao, a uma determinada
temperatura. A quantidade de herbicida na soluo do solo diretamente
proporcional ao contedo de gua no solo. A quantidade de espaos livres
para o herbicida na soluo diminui em solos secos, e assim menor quantidade de herbicida fica livre na soluo do solo (maior soro). Em condies
de seca, as plantas so expostas a menor quantidade de herbicida e assim
menor quantidade absorvida pelas plantas daninhas. Quando a umidade
no solo restabelecida ocorre a dessoro do herbicida voltando a soluo
do solo (Hartzler, 2009). Regitano e colaboradores (2002) observaram uma
reduo na mobilidade do herbicida imazaquin em funo do aumento no
perodo em que o solo foi mantido seco aps aplicao do herbicida e antes
do inicio da simulao de chuvas.
A soro e a dessoro de herbicidas no solo regulam o fenmeno de reteno, influenciando o transporte, a transformao e a biodisponibilidade
dessas molculas no solo. Esses processos esto diretamente relacionadas
eficcia dos herbicidas no controle das plantas daninhas e ao risco de
contaminao ambiental por esses compostos. Segundo Andrea e Luchini
(2002), a soro de defensivos agrcolas no solo tambm importante, principalmente por estar relacionada diretamente com os processos de disponi-
65
bilidade para a atividade do composto, ataque microbiano e biodegradao

e inversamente com a possibilidade de lixiviao e contaminao de guas.
O mecanismo de soro de herbicidas, por estes se tratarem de molculas
orgnicas nos mais variados arranjos, muito mais complexo do que a dos
ons que servem como nutrientes para as plantas (Prata; Lavorenti, 2000).
Foras fsicas como pontes de hidrognio, foras de Van der Walls, foras
eletrostticas, ligaes covalentes e interaes hidrofbicas so os principais
mecanismos que podem contribuir com a soro dos herbicidas, sendo que
estes mecanismos podem atuar concomitantemente na soro de uma mesma molcula (ibidem). Quanto menor o coeficiente de soro do composto
nos coloides do solo (Kd), maior a sua lixiviao potencial. O valor de
Kd pode ser determinado em laboratrio, agitando-se uma amostra do solo
com uma soluo aquosa do defensivo agrcola. Em situao de equilbrio
tem-se: Kd = concentrao do composto nos slidos do solo / concentrao
do composto na gua. Briggs (1981) determinou o valor de Kd de dezenas
de defensivos agrcolas no-inicos, em vrios solos da Inglaterra, tendo
observado uma estreita relao entre o valor de Kd do composto, sua polaridade, expressa na forma do seu coeficiente de partio entre n-octanol e
gua, e o percentual de matria orgnica do solo (Kd = 0,045 x Kow0,52 x
%M.O.). Essa relao tem sido amplamente usada para a previso do valor
de Kd de defensivos agrcolas no-inicos em solos.
No entanto, a natureza orgnica dos herbicidas e sua alta afinidade pela
matria orgnica, tornam o teor de carbono orgnico do solo o melhor parmetro isolado para predizer o coeficiente de soro padronizado para o carbono orgnico (Koc) (Oliveira, 2001; Christoffoleti;, 2005). Para o amicarbazone, por exemplo, so encontrados valores de Koc entre 23 e 27, o que o
classifica, segundo Gelber e Spadotto (2004), como um herbicida com fora
de adsoro fraca e consequentemente com alta mobilidade no solo.
Em solos que apresentam altos teores de argila, de matria orgnica ou
ambos, verifica-se maior adsoro e persistncia de herbicidas, seguido
por baixos ndices de dessoro, lixiviao e degradao destes (Li et al.,
2003; Hager; Nordby, 2004; Si et al., 2006). Firmino et al. (2008) avaliando
a soro do imazapyr em solos com diferentes texturas, observou em solos
arenosos e com baixos teores de matria orgnica, uma baixa soro do herbicida, o que predispe o produto lixiviao no perfil do solo, podendo at
mesmo contaminar mananciais de guas subterrneas.
66
Um termo bastante utilizado na literatura o chamado resduo ligado,

que o nome dado interao entre espcies qumicas originadas ou no
de interaes xenobiticas com as substncias hmicas do solo, sendo esses
resduos no passveis de extrao por mtodos que no alterem significativamente a natureza da molcula (Fuhr, 1987). Segundo Prata e Lavorenti
(2000), uma significativa proporo das molculas dos defensivos agrcolas
aplicadas na agricultura permanecem no solo como resduos ligados.
A formao de resduo ligado pode ter como consequncias a diminuio da degradao do defensivo agrcola (Calderbank, 1989), a perda da
sua atividade biolgica e da sua identidade qumica, a alterao da sua absoro por plantas, e a alterao do escoamento superficial e da lixiviao
desses defensivos agrcolas. A adio de materiais orgnicos oxidados ou
estabilizados ao solo, como o caso das substncias hmicas, promove um
aumento dos stios sortivos do solo, o que contribui com a maior soro e
constituio de resduos ligados, conforme Prata e Lavorenti (2000).
O tipo e contedo de argila, teor e caractersticas da matria orgnica e
umidade do solo afetam as interaes do defensivo agrcola no solo (Levanon et al., 1993; Czapar; Kanvar; Fawcett, 1994). A matria orgnica apresenta acentuada capacidade de sorver os defensivos agrcolas e isto reduz
a atividade biolgica no solo e a mobilidade dos compostos qumicos a ele
aplicados . A pronunciada reatividade da matria orgnica est relacionada
principalmente com sua elevada rea superficial especfica e presena de
vrios grupos funcionais, como carboxilas, hidroxilas e aminas, e estruturas
alifticas e aromticas (Lee; Farmer, 1989; Stevenson, 1972; Stearman et
al., 1989; Kuckuk et al., 1997).
Sistemas de manejo de solo afetam diferentemente o teor e a qualidade da matria orgnica do solo, bem como a proporo de substncias hmicas. Considerando que o tipo de manejo do solo pode influir no teor e
caractersticas da matria orgnica e das substncias hmicas, diferenas
na soro das molculas dos defensivos agrcolas so esperadas em solos
submetidos a diferentes sistemas de manejo.
O processo de lixiviao refere-se ao movimento descendente dos herbicidas com a gua na matriz do solo, sendo sua intensidade dependente
das caractersticas fsico-qumicas do produto e das caractersticas de solo e
clima. Para serem lixiviadas, as molculas dos defensivos agrcolas devem
estar na soluo do solo ou adsorvidas a pequenas partculas, como argilas,
67
cidos flvicos e hmicos de baixo peso molecular, aminocidos, peptdeos

e acares, entre outros (Oliveira, 2001).
A movimentao de defensivos agrcolas no perfil do solo ocorre em
todas as direes e dependente da direo do fluxo de gua. Devido
ocorrncia de grandes volumes de gua de percolao nos solos aps chuvas
pesadas ou irrigaes, a direo mais comum na qual o herbicida pode ser
lixiviado a descendente.
Segundo Velini (1992), a ocorrncia da lixiviao fundamental para
a incorporao superficial da maioria dos herbicidas, atingindo sementes
ou plantas em germinao; mas quando excessiva, pode carre-los para
camadas mais profundas do solo, limitando sua ao e podendo, inclusive,
promover contaminao do lenol fretico.
Carbonari (2009) observou para a aplicao do herbicida amicarbazone
em cinco solos cultivados com cana-de-acar, com e sem a presena de palha na superfcie, que o produto foi detectado em todas as camadas do solo
(0 a 10, 10 a 20 e 20 a 40 cm de profundidade), o que demonstra uma grande mobilidade no solo. Em perodos de maior restrio hdrica foram observados, maiores concentraes de amicarbazone no solo nos tratamentos
sem palha e com aplicao sob a palha. Em perodos de alta disponibilidade
hdrica e em solos de textura arenosa e mdia, foram observadas maiores
concentraes do herbicida na camada mais superficial do solo para a aplicao sobre a palha, o que demonstra uma menor lixiviao do produto no
solo nessa condio.
Devido ao seu uso intensivo, os herbicidas so apontados como o grupo
de defensivo agrcola mais frequentemente detectado em estudos de qualidade de guas superficiais e subterrneas (Carter, 2000; Tanabe et al.,
2001), sendo as reas prximas ao cultivo de cana-de-acar de maior ocorrncia de resduos desses compostos, j que esta uma das culturas que
mais utiliza herbicidas no manejo de plantas infestantes (Southwick et al.,
2002; Vivian et al., 2007).
Em solo cultivado com cana, na regio nordeste do pantanal mato-grossense, foram detectados resduos de ametryn na maioria das amostras coletadas em guas de superfcie, embora em baixa concentrao. Entretanto,
em amostras de sedimentos, as concentraes foram superiores a 4,5 g kg-1.
A elevada frequncia de deteco de ametryn, juntamente com sua alta
concentrao em algumas amostras, foi atribuda, conforme os autores, ao
68
intenso cultivo de cana-de-acar no nordeste do pantanal, em que se utiliza esse herbicida (Laabs et al., 2002).
A lixiviao potencial dos defensivos agrcolas no solo pode ser determinada por alguns mtodos diferentes, como por exemplo, por meio da percolao em colunas preenchidas com amostras deformadas ou indeformadas
do solo. Assim, os estudos de lixiviao potencial, no Brasil, ficam restritos
a colunas, modelos matemticos e bioensaios. Segundo Vivian et al. (2007),
estudos comumente conduzidos em laboratrio, com objetivo de avaliar o
potencial de lixiviao e contaminao de solo e gua por herbicidas, nem
sempre representam o comportamento real verificado em condies naturais in situ.
Alm da lixiviao, outra forma de transporte de defensivos agrcolas
na gua que se move sobre a superfcie do solo, chamado de escoamento
superficial, o qual tem sido considerado como um dos principais meios de
contaminao de rios e lagos (Gaynor; Mactavish; Findlay, 1992; Lerch;
Blanchard, 2003). O movimento da gua carreia substncias solveis ou
adsorvidas s partculas de solos erodidos. Estudos tm mostrado que perdas por essa via geralmente variam de 1% a 5%, dependendo das prticas
culturais, solo, dimenso da rea, declividade, extenso do declive, cobertura, umidade do solo e das propriedades dos defensivos agrcolas (Patty;
Real; Grill, 1997).
Verifica-se, portanto, que a dinmica de um defensivo agrcola no solo
bastante complexa e envolve diversos processos de perdas e imobilizao,
desde a aplicao, a interao com a palhada, quando esta se faz presente, e
finalmente com a chegada ao solo.
Tecnologia de aplicao de defensivos agrcolas

O tamanho de gotas e o volume de aplicao so fatores bsicos que devem ser considerados em primeiro lugar para o planejamento de uma aplicao. Os demais fatores importantes, como o momento da aplicao, as condies climticas, a recomendao do produto e as condies operacionais
devem ser considerados em conjunto para que todo o sistema esteja ajustado, visando o mximo desempenho com o mnimo de perdas, sempre com
o menor impacto ambiental possvel. De maneira geral, os produtos com
69
ao sistmica quando direcionados ao solo ou s folhas podem ser aplicados com gotas maiores. Isso facilita a adoo de tcnicas para a reduo de
deriva, melhorando a segurana ambiental da aplicao e aumentando a sua
eficincia . Se usadas de maneira correta, gotas maiores geralmente oferecem bom nvel de depsito (quantidade de defensivo depositado nos alvos),
apesar de no proporcionar as melhores condies de cobertura das folhas
das culturas. Para os produtos de contato ou de menor ao sistmica, o uso
de gotas menores e/ou maior volume de calda necessrio, devido a maior
dependncia dessa tcnica com relao cobertura dos alvos.
O estudo das caractersticas dos alvos deve incluir a anlise de outros
fatores, como movimentao das folhas, estgio de desenvolvimento das
plantas, cerosidade, pilosidade, rugosidade, face da folha em que a cobertura mais importante (superior/inferior) e arquitetura geral da planta. Na
diferenciao entre plantas como alvos de aplicaes, a posio e o formato
das folhas apresentam importncia fundamental. Por exemplo, as folhas
das monocotiledneas so geralmente mais estreitas e se posicionam na vertical, enquanto as folhas das dicotiledneas so mais largas e permanecem
na horizontal. Esses fatores so fundamentais para a definio da reteno
das gotas nas folhas e na prpria eficincia de penetrao dos defensivos nos
tecidos vegetais. Por este motivo, em muitos casos, a tecnologia de aplicao mais adequada ao milho pode no ser a melhor para a soja, e vice-versa.
A cobertura dos alvos de uma aplicao pode ser definida pela frmula
de Courshee (1967):
C = 15
VRK2
AD
Onde:
C = cobertura (% da rea)
V = volume de aplicao (L/ha);
R = taxa de recuperao da calda nas folhas (% do volume aplicado)
K = fator de espalhamento de gotas
A = rea foliar
D = dimetro das gotas (m)
Assim, em termos genricos, para melhorar a cobertura de uma aplicao deve-se adotar gotas mais finas ou volumes maiores; na aplicao de
70
volumes mais baixos, as gotas mais finas devem ser preferidas, para que
se consiga uma boa cobertura com a calda pulverizada; se a escolha recair
sobre as gotas maiores, o volume de calda deve ser igualmente aumentado
para que se possa garantir um nvel mnimo de cobertura para o tratamento. Por esses motivos, um dos princpios bsicos da tecnologia de aplicao
que no existe uma soluo nica que atenda todas as necessidades.
necessrio, primordialmente, que a tecnologia seja ajustada para cada condio de aplicao.
Para que se faa o ajuste do tamanho das gotas e do volume de calda,
vrias aes podem ser planejadas dentro do manejo dos parmetros de
uma aplicao. Para reduzir o tamanho das gotas, as pontas de jato plano
(leque) podem ser substitudas pelas pontas de jato plano duplo (duplo leque) ou cnico vazio; a presso de trabalho das pontas pode ser aumentada
e um adjuvante pode ser adicionado calda (um surfatante, por exemplo).
Para aumentar o tamanho das gotas, as pontas de jato plano (leque) podem
ser substitudas pelas pontas de pr-orifcio ou induo de ar; a presso de
trabalho pode ser reduzida e outro tipo de adjuvante pode ser adicionado
calda (um leo ou um espessante de calda, por exemplo, cuja ao produza
gotas de maior tamanho). No caso do volume de calda, sua variao pode
ser feita tanto pela troca das pontas como pela variao da velocidade de
deslocamento do pulverizador.
Condies climticas
Outro parmetro fundamental para o sucesso do tratamento a adequao da tecnologia de aplicao s condies climticas. Para a maioria dos
casos, devem ser evitadas aplicaes com umidade relativa inferior a 50% e
temperatura ambiente maior que 30C. No caso do vento, o ideal que as
aplicaes sejam realizadas com vento entre 3 e 10 km h-1. Ausncia de vento tambm pode ser prejudicial, em funo da chance de ocorrer ar aquecido com movimento ascendente, o que dificulta a deposio das gotas pequenas. Esses limites, entretanto, devem ser considerados e eventualmente
flexibilizados de acordo com a tecnologia de aplicao que ser utilizada.
Como exemplo, o uso de gotas grossas ou muito grossas pode facilitar o
trabalho um pouco alm dos limites, sempre com o cuidado para que a aplicao no seja feita em condies muito extremas com relao ao clima.
71
Mesmo dentro das faixas de trabalho relativas a esses limites, as caractersticas da tcnica utilizada devem ser consideradas no momento da tomada de deciso. Um exemplo de otimizao da escolha do tamanho de gotas
em funo das condies climticas (umidade e temperatura, nesse caso)
pode ser observado na Tabela 3.3. Nessa forma de raciocnio, o princpio a
ser utilizado o da adoo da gota mais segura dentro dos limites de cada
situao. Assim, se a umidade permite uma gota muito fina, mas a temperatura indica que o melhor seria uma gota fina, a gota maior (fina) deve ser
a escolhida, por ser a mais segura para tal situao (menor risco de perdas
por deriva e evaporao).
Tabela 3.3 Exemplo de relao prtica entre as condies climticas e a escolha do tamanho das
gotas
Fatores
Temperatura
Umidade relativa
Classes de gotas de acordo com as condies climticas

Muito Finas ou Finas
Finas ou Mdias
Mdias ou Grossas
abaixo de 25C
25 a 28C
acima de 28C
acima de 70%
60 e 70%
abaixo de 60%
Fonte: Antuniassi et al., 2005
O incio da manh, o final da tarde e a noite so perodos em que a umidade relativa maior e a temperatura menor, sendo considerados mais
adequados para as aplicaes. Na prtica, possvel e recomendvel a utilizao de gotas finas nesses horrios. Porm, necessrio um monitoramento das condies ambientais com o passar das horas do dia, pois se houver,
por exemplo, um aumento considervel da temperatura (com reduo da
umidade relativa), o padro de gotas precisa ser mudado (passando-se a
usar gotas maiores). Nesse caso, o volume de aplicao deve ser aumentado,
para no haver efeito negativo na cobertura dos alvos.
Chuva e orvalho so fatores climticos que tambm requerem ateno
no momento do planejamento das aplicaes. No caso da chuva, recomenda-se bastante cuidado na observao do intervalo mnimo de tempo entre
a aplicao e a ocorrncia da chuva, visando permitir o tempo mnimo para a
penetrao e absoro dos ingredientes ativos. No caso do orvalho, a presena de gua nas folhas pode causar interferncia na tcnica de aplicao.
O risco de um eventual escorrimento est ligado ao uso de espalhantes (surfatantes) na caldas. Entretanto, existem situaes, dependendo da tcnica
empregada e do tipo de defensivo utilizado, em que a ao do orvalho pode
ser benfica (muitos fungicidas se posicionam nesta situao).
72
A aplicao noturna apresenta vantagens no que se refere s condies

climticas (umidade, temperatura e vento mais adequadas aplicao de
gotas mais finas), mas essa opo deve considerar a possvel existncia
de limitaes tcnicas relativas aos prprios defensivos, no que se refere s
questes de eficincia e velocidade de absoro/penetrao nas situaes de
ausncia de luz ou baixas temperaturas.
Tamanho de gotas
Atualmente, as gotas produzidas por uma ponta so classificadas como
muito finas, finas, mdias, grossas e muito grossas (em algumas normas de classificao de pontas existe tambm a classe extremamente grossa). Para a classificao de uma determinada ponta usando-se
esse conceito, o seu dimetro mediano volumtrico (DMV) que o dimetro da gota que divide o volume das gotas pulverizadas em duas partes,
de forma que a soma dos volumes das gotas de dimetro menor seja igual
soma do volume das gotas de dimetro maior, sendo medido em micrometros (m) deve ser comparado ao obtido por pontas de referncia avaliadas utilizando-se o mesmo mtodo de determinao do tamanho das gotas.
Tomando-se como base a norma ASAE S572 (ASAE, 2000), se uma ponta
apresenta DMV inferior ao obtido para uma ponta 11001 operando a 4,5 bar,
o spray classificado como gotas muito finas; se o DMV intermedirio
entre o obtido por uma ponta 11001 (operando a 4,5 bar) e uma ponta 11003
(operando a 3,0 bar), o spray classificado como gotas finas; se o DMV
intermedirio entre o obtido por uma ponta 11003 (operando a 3,0 bar)
e uma ponta 11006 (operando a 2,0 bar), o spray classificado como gotas
mdias; se o DMV intermedirio entre o obtido por uma ponta 11006
(operando a 2,0 bar) e uma ponta 8008 (operando a 2,5 bar), o spray classificado como gotas grossas e, finalmente, se o DMV maior do que o
obtido por uma ponta 8008 operando a 2,5 bar, o spray classificado como
gotas muito grossas.
A classe de tamanho de gotas um bom indicativo da capacidade da
pulverizao em cobrir o alvo e penetrar na massa da folhas. Gotas menores possuem melhor capacidade de cobertura (oferecem maior nmero de
gotas/cm2), assim como propiciam maior capacidade de penetrao, e so
recomendadas quando necessria boa cobertura e boa penetrao. Entre-
73
tanto, gotas pequenas podem ser mais sensveis evaporao e aos processos de deriva. Na maioria dos sistemas de produo as gotas grossas so
preferidas para aplicao de herbicidas de grande ao sistmica, enquanto
as gotas finas so mais utilizadas para inseticidas e fungicidas.
Novas tecnologias para a racionalizao

do uso de defensivos agrcolas
Aplicao area de defensivos usando veculo slido
Para a aplicao de defensivos agrcolas voltados ao solo e com absoro
radicular pelas plantas, o uso de um veculo slido (ou formulaes slidas)
pode apresentar algumas vantagens operacionais e ambientais bastante significativas. A mistura de alguns defensivos agrcola, como herbicidas de
ao em pr-emergncia das plantas daninhas, em grnulos de argila de alta
densidade, com sua posterior aplicao area, permite que eles atravessem
os restos culturais e cheguem ao solo, mesmo em sistemas agrcolas com
a presena de restos vegetais na superfcie, o que uma barreira, muitas
vezes, para a aplicao convencional, conforme apresentado anteriormente. Uma vez no solo e dependendo do tipo de porosidade, o grnulo pode
liberar gradativa ou imediatamente todo o ingrediente ativo do defensivo
agrcola, com possibilidade de aumento do perodo residual e eficcia dos
produtos utilizados, alm de reduzir o potencial de lixiviao dos produtos
e risco de contaminao de lenis freticos.
Outra vantagem muito importante que o uso de grnulos elimina um
dos maiores problemas em aplicaes de defensivos agrcolas que a deriva,
em funo do tamanho e da alta densidade das partculas, desde que estas
no formem p. A aplicao area apresenta-se ainda competitiva em custos com a aplicao terrestre de defensivos agrcolas e com ampla vantagem
em termos de capacidade operacional, permitindo tambm uma tima distribuio dos grnulos durante a aplicao.
Em reas de reflorestamento, por exemplo, a aplicao de defensivos
agrcolas por pulverizadores de barra convencionais, tracionados por tratores, apresenta baixa capacidade operacional, altos nveis de deriva e, em
geral, grande desuniformidade na distribuio dos defensivos agrcolas
74
em funo da grande dificuldade de trfego nas reas, causada por irregularidades no terreno, devido ao uso do cultivo mnimo como sistema de
preparo de solo predominante e, dessa forma, pela presena de resduos
vegetais na superfcie do solo. Devido a essa dificuldade nas aplicaes de
defensivos, observa-se, em muitos casos, alm das perdas citadas, baixa
eficcia dos produtos.
Carbonari e colaboradores (2010), avaliando a eficcia desse veculo slido para aplicao de herbicidas em pr-emergncia das plantas daninhas e
aps o plantio do eucalipto, verificaram resultados de controle semelhantes
ou superiores para a aplicao area da formulao granulada em relao
pulverizao de calda lquida (convencional), indicando uma extenso no
perodo do efeito do residual dos herbicidas estudados.
Tambm para a cultura da cana-de-acar esta uma alternativa vivel,
permitindo a aplicao em reas de cana crua e em reas em que a cultura j
tenha atingido um estgio de desenvolvimento que inviabilize a entrada de
pulverizadores convencionais.
Atualmente, na cultura da cana-de-acar, um dos grandes problemas
a eliminao das plantas daninhas com uma nica aplicao de herbicida em pr-emergncia, a qual deve garantir que a cultura permanea sem
a presena de plantas daninhas por um perodo prximo de 180 dias. Em
muitos casos, isso no acontece, havendo a necessidade de se executar o
controle de plantas daninhas atravs de operao manual (aplicao de herbicidas em ps-emergncia, com equipamento costal), devido ao tamanho
das plantas e impossibilidade do trnsito de mquinas na rea. Vale destacar que o custo dessa operao manual bastante elevado, independente do
custo do produto.
Uma possvel soluo para esse problema seria o fracionamento da dose
do herbicida aplicado em pr-emergncia garantindo sua eficcia por um
perodo maior. Dessa forma seria aplicada uma dose inicial do herbicida
e uma segunda dose antes do fechamento da cultura, garantindo que no
ocorra competio entre a cultura e as plantas daninhas. Tal aplicao esbarra na dificuldade operacional de aplicao da segunda dose via calda lquida, uma vez que no existem mquinas terrestres capazes de aplicar o
produto com a cultura j em estagio avanado de desenvolvimento.
A aplicao fracionada e na forma de grnulos reduz a injria a cultura,
pois no h contato com as folhas e a liberao no solo lenta. Assim, talvez
75
a melhor oportunidade para o uso de grnulos corresponda essa extenso

do residual de herbicidas aplicados em pr-emergncia. Essa modalidade
de aplicao tem amplo potencial de uso em cana crua. Nesta, a extenso
do residual , ainda, uma tima oportunidade para garantir o controle de
espcies de difcil controle e germinao tardia como as cordas-de-viola.
Para a aplicao de fungicidas com absoro radicular, essa modalidade
de aplicao tambm oferece vantagens. Antuniassi et al. (2008) avaliaram
a aplicao area do fungicida flutriafol em formulao granulada para controle da ferrugem da soja em diferentes doses, isolado e seguido de aplicaes convencionais complementares, e verificaram uma boa eficcia do
produto aplicado nessa modalidade, alm da extenso do residual do produto com a reduo do nmero de aplicaes complementares.
Uso de adjuvantes para reduo de deriva

Entre as caractersticas da pulverizao que influenciam a deriva, podem ser relacionados os tipos de ponta de pulverizao, as propriedades
fsicas da formulao dos defensivos agrcolas, o tamanho das gotas e outros
produtos adicionados ao lquido a ser pulverizado. Mudanas nas propriedades do lquido podem influenciar tanto o processo de formao das gotas como o comportamento do contato destas com o alvo, alterando o risco
potencial de deriva (Miller; Butler Ellis, 2000).
O uso de adjuvantes apresenta efeito direto sobre a ocorrncia de deriva
em aplicaes de defensivo agrcolas. Existe o conhecimento de que alguns
adjuvantes podem ter um significativo efeito sobre o tamanho das gotas em
pulverizaes agrcolas (Butler Ellis; Miller, 1997) e o tamanho de gota um
dos fatores mais importante que influenciam a deriva.
A converso de um lquido em gotas e o destino final dessas gotas dependem das propriedades fsico-qumicas das solues empregadas (Prokop;
Kejklcek, 2002). O grau de quebra das gotas est diretamente ligado viscosidade e ao escoamento da soluo. Uma reviso do efeito dos adjuvantes sobre a formao e transporte do lquido pulverizado foi apresentada
por Butler Ellis e Miller (1997). Adjuvantes redutores de deriva tm sido
desenvolvidos especificamente para modificar o espectro de gotas, mas
muitos outros adjuvantes, usados para melhorar a dinmica da gota sobre o
alvo, tambm influenciam o tamanho das gotas.
76
Segundo Hall e Fox (1996) polmeros de poliacrilamida so populares

adjuvantes redutores de deriva, entretanto, alguns desses produtos possuem determinadas caractersticas que dificultam o uso e podem prejudicar a eficcia, como hidratao lenta, baixa disperso, sensibilidade qualidade da gua e degradao sob determinadas condies. Apesar disso, os
autores relatam que pesquisas indicam redues de deriva da ordem de 70%
para esse tipo de molcula. Zhu e colaboradores (1997) reafirmam existir
evidncias de diminuio de deriva e aumento no dimetro das gotas pulverizadas causadas pelo uso compostos, entretanto, na maioria dos casos, a
eficcia reduzida pela recirculao da calda de aplicao no pulverizador.
Western e colaboradores (1999) obtiveram incremento no tamanho das
gotas e reduo na deriva detectada em tnel de vento, ao adicionarem leo
vegetal ou mineral na calda de aplicao, quando comparados aos resultados
obtidos com outros adjuvantes e gua somente. As maiores redues na
deriva foram obtidas com a adio leo vegetal calda. Cunha e colaboradores (2003), avaliando estratgias para reduo da deriva de produtos fitossanitrios, concluram que a adio de um leo vegetal calda altera o espectro de gotas pulverizadas, aumentando o dimetro das gotas e diminuindo
a porcentagem delas mais suscetveis s perdas por deriva. Outro exemplo
da eficcia do uso de adjuvante para reduo da deriva foi observado por
Velini e Carbonari (dados no publicados), no qual um adjuvante especfico
(antievaporante e umectante) contribuiu significativamente com a reduo
de deriva, melhorando a chegada do produto at o alvo desejado em at 22%.
Costa (2006) tambm verificou um efeito bastante significativo do uso de
adjuvantes para a reduo da deriva em aplicaes de glyphosate e 2,4-D. O
mesmo autor verificou, ainda, que os efeitos dos adjuvantes utilizados para
reduo de deriva so dependentes das pontas de pulverizao utilizadas.
Aplicao de defensivos agrcolas em operao conjugada

colhedora em cana-de-acar
A colheita mecanizada da cana sem queima da palha deu origem a um
novo sistema de produo denominado de cana crua. A colheita tradicional
com queima da palha dever estar extinta em futuro prximo, em funo de
presses ambientais e trabalhistas. O resduo vegetal que permanece na superfcie, afeta diretamente a dinmica de ocorrncia de plantas daninhas e
77
algumas pragas importantes para a cultura da cana-de-acar e a aplicao

de defensivos agrcolas voltados ao solo, conforme j foi discutido.
Em muitas situaes, o controle de plantas daninhas na cultura da canade-acar deve ser mantido por longos perodos, havendo urgncia na procura de solues e/ou alternativas que permitam o uso de herbicidas de ao
residual em reas com espessas camadas de palha, minimizando as perdas
por reteno e fotodegradao. Uma possvel soluo para se contornar esse
problema o desenvolvimento de um equipamento de aplicao de herbicidas acoplado colhedora de cana, de modo que as operaes de colheita
e aplicao possam ser realizadas simultaneamente. Como a deposio da
palha feita na parte posterior da colhedora, possvel realizar a aplicao,
principalmente de herbicidas, diretamente sobre o solo e cobri-lo com palha aps a operao. Esse tipo de aplicao apresenta grandes vantagens,
destacando-se a proteo do herbicida contra evaporao e fotodecomposio, a manuteno de nveis estveis e mais elevados de umidade do solo e
a reduo da quantidade do herbicida retido pela palha, aumentando a sua
disponibilidade no solo.
Carbonari (2007) verificou que o herbicida amicarbazone aplicado em
operao conjunta com a colhedora, apresentou elevados nveis de controle
de diversas plantas daninhas na cultura da cana-de-acar, indicando uma
maior disponibilidade do herbicida no solo, principalmente na camada superficial, para essa modalidade de aplicao. Para os herbicidas tebuthiuron,
metribuzim, hexazinone + diuron e imazapic, alguns trabalhos realizados
simulando a condio de aplicao na colhedora, aplicando o herbicida sobre o solo e em seguida cobrindo com palha, apresentaram nveis de eficcia,
em geral, iguais ou superiores aos tratamentos convencionais sobre a palha
ou em solo descoberto (Negrisoli, 2005; Rossi et al., 2006; Corra, 2006).
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4
Metagenoma e a desconstruo
da biomassa
Lcia Maria Carareto Alves,
Viviane Schuch, Jackson A. M. de Souza,
Eliana G. M. Lemos
Introduo
Atualmente, uma das preocupaes mundiais so as fontes de energia a serem utilizadas nas prximas dcadas, principalmente porque o petrleo, que
representa 40% da energia mundial, um combustvel fssil no renovvel.
A descoberta de fontes alternativas de energia, portanto, tem despertado
interesse de cientistas ao redor do planeta em virtude tanto da escassez de
petrleo para as prximas dcadas como tambm pelo aumento da preocupao a respeito da poluio do meio ambiente ocasionada pelos derivados da indstria petrolfera. Uma proposta geral a de utilizar a energia da
biomassa como meio de providenciar energia moderna para os milhes de
pessoas que necessitaro dela no futuro. E uma das mais importantes aplicaes do sistema de energia a partir da biomassa pode ser a fermentao
para a produo de etanol.
A biomassa parece ser uma interessante fonte de energia por vrias
razes. A principal delas a de que a energia gerada pela biomassa pode
contribuir para o desenvolvimento, alm de as fontes dessa matria-prima
serem frequentemente disponveis e a converso em energia, possvel sem
altos investimentos de capital.
Nas dcadas passadas, j era consenso que a produo de etanol a partir
da biomassa de plantas deveria ocorrer no somente pelo uso dos acares
84
fermentveis, tais como o amido e a sacarose, mas tambm partindo das

fraes de lignocelulose. Isso porque nesse aspecto existe uma grande variedade de fontes de matria-prima para a produo de etanol alm da canade-acar e milho: rvores de crescimento rpido, grama, plantas inteiras,
produtos colaterais da produo industrial, plantas aquticas, lixo orgnico
municipal, entre outros.
Alm disso, o ltimo levantamento da safra 2010/2011 pela Companhia
Nacional de Abastecimento (Conab) mostrou que foram produzidas no
Brasil 625 milhes de toneladas de cana e, aproximadamente, 167 milhes
de toneladas de bagao. O bagao apresenta potencial para contribuir com
um aumento de cerca de 50% do etanol produzido por meio do uso da lignocelulose. Esse processo, portanto, pode aumentar significativamente a produo de etanol sem expanso de reas cultivveis de cana-de-acar. Descobertas nas novas fronteiras da pesquisa de energia da biomassa poderiam
ter profundas implicaes para o futuro do uso da energia de biomassa.
Os microrganismos podem exercer papel fundamental em diferentes
aspectos, como na desconstruo da estrutura da biomassa ou na prpria
sntese de combustveis. Desse modo, podem ser utilizados para melhorar
as enzimas na despolimerizao da celulose, da hemicelulose e na degradao da lignina, ou ainda em sistemas de biologia sinttica diretamente na
produo de combustveis. Essas atividades podem ser realizadas por microrganismos individuais, ou consrcios microbianos, organismos ntegros
e enzimas isoladas.
O solo o maior reservatrio de carbono orgnico da Terra, constituindo-se em um dos mais importantes habitats para microrganismos, componentes essenciais da biota terrestre. Os microrganismos exercem um importante papel na manuteno da vida na Terra, atuando na ciclagem de
nutrientes e minerais, na produo de biomassa, em relaes simbinticas
e no controle de populaes. Tal versatilidade deriva de um longo caminho evolutivo, no qual inumerveis estratgias metablicas foram acumuladas em diferentes condies de presso seletiva. Essa riqueza tem sido
muito explorada pela biotecnologia na busca por solues diversas tanto na
melhoria no padro de vida humano como na qualidade ambiental. Nesse sentido, a busca por novos isolados e consrcios microbianos e mesmo
abordagens no nvel enzimtico para a realizao de diversos processos tm
captado grandes esforos nas esferas acadmica e industrial.
METAGENOMA E A DESCONSTRUO DA BIOMASSA
85
As rotas para produo de biocombustveis incluem a prospeco de

genes, enzimas e microrganismos. A abordagem metagenmica para prospeco de enzimas degradadoras da biomassa vegetal tem especial vantagem por se destacar como a base para encontrar genes relacionados s
variadas atividades enzimticas em sistemas biolgicos at ento desconhecidos. Nosso grupo j vem aplicando a abordagem metagenmica para
determinao de estruturas de comunidades e anlises filogenticas. Essas
anlises iniciais so vistas potencialmente como formas de identificar a diversidade microbiana em solos e proporcionar um catlogo de promissoras
atividades que podem ser encontradas nos diferentes solos, em virtude da
comunidade neles encontrada.
Tendo como base o DNA metagenmico extrado de solos sob mata, canade-acar e eucalipto, e o gene 16S rRNA obtido desse material, bibliotecas
foram confeccionadas em vetor fosmidial e plasmidial a fim de comporem
um banco de clones prprio do Laboratrio de Bioqumica de Microrganismos e Plantas (LBMP). A partir desse banco, genes relacionados a sntese de
xilose isomerase, amilases, celulases e hemicelulases de diferentes classes podero ser obtidos com sucesso. Esses genes podero ser utilizados em experimentos de engenharia metablica e engenharia evolutiva, visando obteno
de linhagens capazes de realizar uma converso mais eficiente da biomassa em etanol. Os clones contendo os genes 16S rRNA podem, tambm, ser
utilizados para a anlise da diversidade bacteriana e construo de biochips.
Neste captulo, sero apresentados dados referentes diversidade bacteriana de solos submetidos a diferentes manejos e prospeco de enzimas
microbianas importantes na degradao de biomassa. A metodologia abordada refere-se aplicao de ferramentas de biologia molecular, microbiologia clssica e tecnologia metagenmica para o isolamento de genes de importncia biotecnolgica na rea de produo de etanol a partir de biomassa.
Diversidade de microrganismos do solo

e utilizao dos recursos genticos em processos
biotecnolgicos envolvidos na desconstruo
da biomassa e produo de etanol
Os microrganismos catalisam transformaes indispensveis dos ciclos
biogeoqumicos da biosfera e produzem componentes importantes para a
86
atmosfera, alm de representarem a maior diversidade gentica e metablica dentre as formas de vida existentes. O solo o habitat que contm a
maior quantidade e diversidade de microrganismos, um grama de solo contm mais de 10 mil diferentes espcies (Torsvik; Ovreas; Thingstad,2002).
A utilizao de tcnicas de cultivo puro permite o estudo de microrganismos individualmente e sua caracterizao, principalmente por critrios
metablicos (provas bioqumicas). Entretanto, a abordagem do cultivo limita seriamente a avaliao taxonmica e filogentica como estimativa da
diversidade microbiana, devido falha do cultivo da maioria dos microrganismos pelos mtodos convencionais (Pace, 1997).
Microbiologistas sempre investiram grandes esforos na descoberta de
microrganismos capazes de sintetizar compostos e de catalisar reaes importantes, dentro da perspectiva humana. A busca por eles levou os pesquisadores a isolarem dezenas de milhares de linhagens produtoras de diversas
substncias de interesse biotecnolgico e, ainda hoje, aqueles cultivveis de
solo representam, por exemplo, a principal fonte de antibiticos e outros
compostos bioativos.
Atualmente, o uso de tcnicas de biologia molecular permite uma anlise populacional independente do cultivo, baseada no estudo do conjunto
de genomas do ambiente. Anlise da comunidade total de DNA de uma
amostra constitui uma medida de sua heterogeneidade, inferindo-se para
a diversidade microbiana nela presente. Coletivamente, o genoma da microbiota total encontrada na natureza denominado metagenoma termo
usado pela primeira por Handelsman e colaboradores em 1998 , sendo que
tal estratgia permite o acesso de muito mais informao gentica que os
procedimentos baseados em cultivo. Metagenoma o conjunto de genes de
um determinado ambiente, e pode ser analisado de modo similar ao que se
faz com um genoma nico (Figura 4.1).
Essa abordagem envolve o uso de vetores para clonar, estavelmente,
segmentos de DNA de amostras ambientais (Shizua et al., 1992). Vrios
vetores tm sido utilizados como sistema de expresso para estudar genomas microbianos de organismos pr-cultivados ou do DNA microbiano
total extrado diretamente do solo (Figura 4.2) (Rondon et al., 2000) . Essa
clonagem constitui, portanto, uma ferramenta til para o estudo do contedo genmico total da microbiota de uma amostra, como solo. Atravs
87
de clonagem e anlise de grandes segmentos de DNA microbiano do solo

ou de qualquer ambiente, pode-se avaliar com mais detalhes a diversidade,
a fisiologia e a funo dos microrganismos na natureza. Alm disso, essas
metodologias possibilitam o isolamento e expresso de genes de interesse
em diversos setores da indstria biotecnolgica, sem a necessidade de isolamento dos microrganismos do ambiente.
O solo constitui, indubitavelmente, um dos principais reservatrios de
carbono orgnico da Terra e um dos mais importantes habitats para microrganismos, principalmente procariotos. A abundncia do carbono e outros elementos produzidos por procariticos sugerem que cerca de metade
do protoplasma vivo da terra seja de origem microbiana (Whitman et al.,
1998). Devido vasta diversidade, s grandes populaes e longa histria
evolutiva, os microrganismos vm contribuindo fortemente para a rique-
Figura 4.1 Esquema mostrando a sequncia de procedimentos para estudo do DNA metagenmico extrado da amostra de um solo
88
Figura 4.2 Comparao esquemtica de duas diferentes abordagens para obteno de novas enzimas. Usando a tecnologia de cultivo a partir de isolamento de organismos (esquerda); e a partir da tcnica metagenmica (direita). Pela tcnica tradicional de cultura, enzimas
de interesse podem ser obtidas por cultivo e extrao ou clonagem de um gene especfico.
Pela tcnica metagenmica pode-se isolar e clonar vrios genes de um ambiente, para posterior prospeco e expresso de uma enzima desejada. (Lorenz et al., 2002)
89
za e a complexidade das interaes entre os organismos do solo, incluindo

desde simbioses altamente especficas a mutualismos difusos (Beare et al.,
1995). Tais organismos so componentes essenciais no processo de decomposio do solo, no qual resduos de plantas e animais so degradados em
matria orgnica, liberando nutrientes na cadeia alimentar.
O nmero dos microrganismos e sua biomassa coletivas varia dentro e
entre os diferentes tipos e condies dos solos, sendo o grupo das bactrias
mais numeroso (Whitman et al., 1998), mas o grupo dos fungos tem igual
ou maior importncia em muitos solos, como mostrado pela ntima associao com razes de plantas e pela competncia saproftica com detritos
fisicamente maiores e compostos estruturalmente complexos (Meeting Jr.,
1993; Carrol; Wicklow, 1992). Um grau muito maior de plasticidade fenotpica e genotpica existe dentro de comunidades microbianas do que foi
previamente avaliado.
Evidncias demonstram que os microrganismos presentes em ambientes
naturais so filogeneticamente mais diversos do que era sabido pelas anlises
de sequncias de linhagens cultivadas (Hugenholtz; Pace, 1996). A ampla
ocorrncia de partculas virais infecciosas, mutaes, plasmdeos e outros
elementos genticos mveis e seus papis nos processos de transduo, transformao e conjugao permitem concluir que ecossistemas microbianos so
comunidades geneticamente abertas (Terzaghi; OHara, 1990) e com enorme potencial de aquisio de diversidade gentica (Whitman et al., 1998).
At recentemente, com o desenvolvimento de tcnicas de cultivo puro,
os microrganismos puderam ser estudados isoladamente e caracterizados,
em algum grau, por critrios nutricionais, principalmente. Entretanto, a
abordagem do cultivo limitou seriamente a avaliao taxonmica e filogentica, como estimativa da diversidade microbiana, devido falha de cultivo da maioria dos microrganismos pelos mtodos convencionais (Pace,
1997). Nesse contexto, numerosos meios de cultura, seletivos e no-seletivos, foram utilizados para enumerar e isolar microrganismos do solo e da
rizosfera com influncia destes nos graus de diversidade gentica obtida
(Sorheim, 1989; Buyer, 1995; Tabacchioni et al., 2000). Entretanto, ferramentas moleculares e tecnologias baseadas em sequncias gnicas vm reduzindo essas limitaes e revelando nova perspectiva sobre a diversidade
microbiana.
90
A caracterizao dos microrganismos no-cultivveis, utilizando-se

de mtodos moleculares e anlises filogenticas a partir de sequncias de
DNA, , portanto, um esforo para identificar e conhecer suas distribuies e funes no meio ambiente. Os novos mtodos de deteco de microrganismos, sem necessariamente cultiv-los, certamente contribuiro para
inferncias inditas sobre sua significncia nos solos.
Ambas as abordagens, baseada em cultivo (Hattori et al., 1997) ou cultivo independente, apoiam, uma vez mais, o estabelecido de que os solos
representam um dos mais diversos habitats para microrganismos. Estudos
moleculares, tais como os resultantes das anlises de sequncias de 16S
rRNA, confirmam a rica diversidade entre divises bacterianas divergentes
(Hugenholtz et al., 1998), por exemplo. Assim, as divises Proteobacteria
, , e so usualmente bem representadas, como so Cytophagales, Actinobacteria e Gram-positivas de baixo contedo de GC. Esses resultados
so particularmente relevantes para a descoberta de produtos naturais, pois
membros cultivveis dessas ltimas duas divises so prolferos produtores
de antibiticos (Rheims et al., 1996).
Em relao aos fungos, estimativas sugerem que h 1,5 milho de espcies
na Terra, sendo que aproximadamente 70 mil delas foram descritas, donde
se conclui que 95% encontram-se ainda sem descrio (Hawksworth et al.,
1997). Estratgias utilizadas para tal identificao incluem anlises comparativas de sequncias de 18S rRNA (Pace, 1997; Kowalchuk, 1998). Outros
exemplos poderiam ser citados sobre o impacto dos estudos cultivo independentes no conhecimento da filogenia e diversidade microbiana no solo;
e, quo pobremente esto representados pelos seus membros cultivados.
A partir da dcada de 1980, um grande nmero de metodologias moleculares DNsicas vm sendo desenvolvidas para anlise da diversidade
microbiana dos solos (Amann; Ludwig; Schleifer, 1995; Borneman; Triplett, 1997; Cullen; Hirsch, 1998; Duarte et al., 1998; Muyzer et al., 1993;
Torsvik et al., 1998). Com quantidades pequenas de solo, tais procedimentos permitem anlise de mltiplas amostras com eficincias prximas de
80% e purificao de DNA com o emprego de kits, tornando as anlises
mais rpidas (Zhou et al., 1996; Kuske et al., 1998; Ogram et al., 2000).
Empregando-se de reassociao cintica do DNA extrado de comunidades bacterianas, Torsvik e colaboradores (Torsvik et al., 1990a; 1990b)
91
encontraram nmeros acima de 10 mil espcies em apenas um grama de

solo sob floresta, muitas das quais nunca haviam sido cultivadas em laboratrio. Ritz e Griffths (1994), empregando hibridizao do DNA total extrado de diferentes solos, e sob diversas condies, verificaram diferentes
padres de diversidade gentica entre os mesmos. Com relao aos fungos,
avaliao por mtodos moleculares sugere que a grande maioria das espcies do planeta ainda est por ser revelada e analisada (Hawksworth et al.,
1997; Amann; Ludwig; Schleifer, 1995).
O acesso molecular individual aos tipos de bactrias existentes no solo
tem sido baseado na determinao das sequncias dos genes 16S rRNA (Figura 4.3) amplificados e clonados (Borneman; Triplett, 1997; Kuske et al.,
1998; Borneman et al. 1996; Lee et al., 1996; Gesolmino et al., 1999). Por
outro lado, a distino entre espcies de fungos, embora menos frequentemente utilizada, tem sido feita com base nas sequncias 18S rRNA (Borneman; Triplett, 1997; Amann; Ludwig; Schleifer, 1995; Elsas et al., 2000).
Outras tecnologias tm sido avaliadas e aperfeioadas para anlise da biodiversidade do solo, tais como a tcnica do T-RFLP p (Liu et al., 1997) e a de
shotgun para sequenciamento do DNA de clones genmicos, fragmentos de
restrio e produtos de PCR (Birren et al., 1997).
Figura 4.3 Estrutura do genes 16SrRNA O gene do rRNA 16S das bactrias (1542pb)
consiste de nove sequncias conservadas (C1-C9), espaadas por regies hipervariveis
(V1-V9, com 10 a 50 bases). A amplificao do gene 16SrRNA com o uso de primers especficos para regies conservadas e que consigam amplificar tambm regies variveis facilitam
a identificao das bactrias. (Petrosino et al., 2009)
Atualmente, as novas metodologias de sequenciamento de DNA em

grande escala tm colaborado e tornado mais geis os estudos metagenmicos, quer seja nas anlises de diversidade, quer seja na prospeco de genes.
Essas novas tecnologias, alm de estarem se tornando pouco onerosas, tm
a capacidade de gerao de uma grande quantidade de dados em um curto
espao de tempo. Dessa forma, diversas amostras ambientais esto sendo
92
avaliadas atravs do sequenciamento em grande escala: oceanos (Sogin et

al., 2006; Huber et al.; 2007), solos (Leininger et al., 2006; Fierer et al.,
2007), recifes (Wegley et al., 2007), assim como amostras fecais e de biofilmes (Mardis, 2008; Claesson et al., 2010).
A diversidade biolgica de muitos ecossistemas pode ser ameaada por
processos degradativos diversos. Relativamente pouco tem sido feito para
quantificar as relaes benficas entre diversidade microbiana, funcionamento do solo-qualidade vegetal e sustentabilidade do ecossistema (Kennedy; Smith, 1995). Em agroecossistemas, as funes mais importantes so
aquelas envolvidas na ciclagem de nitrognio e carbono, na manuteno da
estrutura do solo, na antibiose etc.
Relata-se que a desertificao do ecossistema terrestre atinge milhes de
hectares anualmente, como resultado dos impactos das atividades degradativas antropognicas, caracterizadas pelo aumento da atividade dos agentes
naturais, ameaando a sustentabilidade dos solos. Distrbios nas comunidades naturais vegetais so os primeiros sintomas visveis desse desequilbrio; porm, frequentemente so acompanhados ou precedidos por perda
das propriedades fsico-qumicas e biolgicas, principalmente, microbiolgicas dos solos (Mder et al., 1996; Requena et al., 2001). Tais propriedades
determinam, decisivamente, a fertilidade e a qualidade dos solos, alterando
diretamente o estabelecimento e a produtividade das plantas.
Desde que apenas uns poucos microrganismos no solo so produtores
primrios, sendo em sua maioria saprfitas ou entidades mutualsticas,
estes, por sua vez, dependem da produo primria das plantas; e, assim,
esses dois sistemas biolgicos esto fundamentalmente interligados (Ohtonen et al., 1997). O funcionamento do ecossistema do solo , portanto, governado, em grande parte, pela dinmica de sua populao microbiana que
fortemente influenciada pelos distrbios aplicados ao solo.
Sistemas convencionais de produo agrcola, baseados em agroqumicos, constituem fontes de poluio que, direta ou indiretamente, contribuem para a degradao do ambiente biolgico do solo, com destruio dos
recursos naturais (Filser et al., 1995). Da mesma forma, o cultivo intensivo
baseado em prticas culturais agressivas altera a biota do solo, causando,
inclusive, eroso excessiva com poluio das guas superficiais e lenis
freticos (Filser et al., 1995; Hassink et al., 1991; Valarini et al., 1998). Des-
93
matamento (Cullen; Hirsch, 1998) e desertificao, em particular, apresentam impacto negativo, reduzindo o potencial de inculo de simbiontes
microbianos mutualsticos os quais constituem fatores essenciais na ciclagem dos principais nutrientes de plantas e, portanto, na sustentabilidade da
cobertura vegetal em habitats naturais (Requena et al., 2001).
O crescimento e desenvolvimento das culturas esto estreitamente relacionados natureza da microbiota do solo. A baixa eficincia de produo
agrcola influenciada por fatores fisiolgicos culturais, pelo ambiente e
por outros fatores biolgicos representados, principalmente, pelos microrganismos do solo. A microbiota do solo e, particularmente, da rizosfera podem acelerar o crescimento das plantas, podendo apresentar efeito primrio
em ambos, qualidade do solo e qualidade do cultivo.
Manejo de associaes simbiticas entre plantas e microrganismos, por
exemplo, pode restaurar ecossistemas desertificados (ibidem). Do ponto de
vista fitossanitrio, as interaes microbianas em alguns solos podem naturalmente prevenir o estabelecimento de patgenos ou inibir suas atividades
patognicas. Tal fenmeno denominado supressividade do solo (Baker;
Cook, 1974), sendo esta relacionada diretamente atividade microbiana do
solo (Rodrguez-Kbana; Calvet, 1994).
A metagenmica uma abordagem promissora que, alm de permitir
estudos da diversidade microbiolgica de um ambiente sem o isolamento
desses, ainda permite acessar o genoma desses organismos incultivveis, e
oferece a oportunidade de recuperao de genes desconhecidos que esto
diretamente envolvidos na biossntese de inmeros compostos de importncia tecnolgica. Essa tecnologia consiste na extrao de DNA diretamente do ambiente e construo de uma biblioteca de grandes fragmentos
desse genoma misto.
Resultados de pesquisas na rea metagenmica

relacionados desconstruo da biomassa para
produo de etanol
A equipe do Laboratrio de Bioqumica de Microrganismos e Plantas
(LBMP) da Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias (Fcav) da Unesp
94
construiu algumas bibliotecas metagenmicas com genes 16SrRNA e

bibliotecas em vetores capazes de receber grandes fragmentos de DNA.
Essas bibliotecas esto sendo usadas para avaliar a diversidade em solos
submetidos aos mais variados manejos agrcolas (Figura 4.4) e para a prospeco de genes de importncia biotecnolgica, incluindo genes envolvidos
na biossntese de compostos antioxidantes, enzimas e antibiticos. A sub-clonagem dos vetores selecionados, contendo os genes de interesse, permite o isolamento, sequenciamento e expresso dos genes de que podero
contribuir para a busca de bioprodutos e inovaes biotecnolgicas.
Figura 4.4 Fotos dos locais de coleta de solos para anlise da diversidade de microrganismos e construo de bibliotecas metagenmicas. Em sentido horrio: rea de solo sob arboreto de eucalipto (Unesp); solo cultivado com hortalias e tomate; rea de solo sob floresta
nativa (Unesp); solo cultivado (milho, feijo, soja)
Os estudos dos microrganismos dos solos por anlise metagenmica

realizados pelo grupo de Pesquisa de Bioqumica de Microrganismos e
Plantas da Fcav/Unesp revelaram a diversidade bacteriana de solos de florestas nativas ou solos submetidos a diversas manipulaes, como o cultivo
intenso de milho e hortalias, reas de pastagens e reas sob eucalipto, alm
do tratamento com lodo de esgoto. Nesses estudos, puderam ser observadas
95
diferenas nas populaes bacterianas e, fundamentalmente, o desaparecimento de determinado grupos conforme a manipulao sofrida pelos solos:
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Nesses trabalhos, a metodologia bsica utilizada consistiu em se isolar o
DNA metagenmico, fazer uma reao de PCR com essas amostras metagenmicas, clonar os fragmentos obtidos, sequenciar e comparar os resultados com o banco de dados, segundo o esquema a seguir.
96
O DNA metagenmico extrado de diferentes solos apresentou fragmentos com alto tamanho molecular (Figura 4.5A), o que pode ser conseguido atravs da utilizao de kits comerciais especficos. Esse material foi,
ento, submetido reao de amplificao com oligonucleotdeos especficos para o gene 16SrRNA (Kuske et al., 1997) gerando, assim, um conjunto
de fragmento com 1500pb (Figura 4.5B). Os fragmentos da PCR foram inseridos em vetor plasmdico, clonados em Escherichia coli, sendo as clulas
transformadas selecionados em meio de cultivo contendo IPTG e X-Gal
(Figura 4.5C). A insero do fragmento de DNA d-se na regio do gene
lacZ responsvel pela sntese de -galactosidase que quebra o substrato
X-gal, originando colorao azul. Por essa metodologia as clulas que receberam o inserto formam colnias brancas uma vez que no so mais capazes de
sintetizar a -galactosidase, e as que no receberam formam colnias azuis.
Figura 4.5 Resultados da metodologia aplicada para anlise da diversidade de microrganismos por abordagem metagenmica. A) eletroforese de DNA metagenmico; B) eletroforese do produto de amplificao do DNA metagenmico com oligonucleotdeos especficos
para o gene 16S rRNA; C) placas contendo clones transformados com plasmdeos contendo
amplicons do gene 16Sr RNA.
97
Os clones obtidos puderam ser utilizados para a anlise da diversidade

das amostras ambientais atravs do sequenciamento dos fragmentos clonados e da tcnica de microarranjo de DNA. Demonstrando, assim, que a
diversidade bacteriana dos solos submetidos a diferentes tratamentos pode
ser alterada, alguns microrganismos desaparecem e outros aumentam sua
populao. Em diversas situaes essa alterao populacional pode significar perda de elementos importantes de um ambiente ou aparecimento de
organismos de modo desequilibrado.
Um aspecto que est sendo estudado atualmente, e tambm com as ferramentas da metagenmica, a avaliao da interferncia da cana de acar
na microbiota dos solos. Assim, essa abordagem foi aplicada para um estudo da diversidade atravs da clonagem e do sequenciamento de fragmentos
16S rDNA de dois sistemas de solo no estado de So Paulo: 1) mata nativa
e 2) cultura da cana. Fragmentos 16S rDNA foram amplificados e clonados
em vetor pGEM-T easy, permitindo o posterior sequenciamento de DNA
e anlise da comunidade do grupo Bacteria.
As sequncias FASTA obtidas foram analisadas e comparadas com o
GenBank do Nacional Center for Biotechnology Information (NCBI), e
anlises filogenticas foram realizadas utilizando o programa Bionumerics (6.0.1 AppliedMaths) baseados em sequncias alinhadas. Os dados
revelaram que, em comunidades do solo da floresta eram predominantes
Acidobacterium, Verrucomicrobium, Proteobacterium, Firmicutes, Actinobacterium, enquanto no solo das culturas de cana foram encontrados
Firmicutes e Proteobacterium.
O uso de ferramenta da metagenmica um avano real para compreender a funo e como interagem os membros de uma comunidade microbiana complexa, assim como isolar genes de interesse biotecnolgico (Streit;
Schmitz, 2004; Handelsman, 2004). As anlises metagenmicas, alm de
possibilitarem a observao dos microrganismos de um habitat que ainda
no se consegue cultivar, possibilitam a obteno de clones com genes codificadores das mais diversas substncias encontradas na natureza.
A metodologia de construo de bibliotecas genmicas, que envolve a
gerao e clonagem de fragmentos de DNA de alto tamanho molecular em
vetores apropriados, e a prospeco de genes de interesse, tem sido utilizada
exaustivamente por mais de trs dcadas. A clonagem de DNA metagenmico, entretanto, foi pela primeira vez reportada na metade da dcada de
98
1990, com a construo de uma biblioteca de metagenoma marinho (Stein

et al., 1996).
Nos ltimos anos, observou-se um progresso significante na metagenmica, que comea a proporcionar um entendimento substancial das funes da comunidade microbiana natural (Ward, 2006), assim como uma
utilizao biotecnolgica para seus resultados.Visto que a ampla diversidade microbiana do solo e de vrias comunidades constitui-se de um enorme
pool gentico e biolgico que pode ser explorado para a descoberta de novos
genes, vias metablicas inteiras e seus produtos (Cowan et al., 2005).
Vrias abordagens do uso de tcnicas moleculares tm sido realizadas
para a utilizao de genes e organismos transformados para a utilizao da
biomassa como fonte de energia. Uma abordagem metagenmica a partir
de DNA metagenmico dos microrganismos de rmem de bovinos identificou mais de 20 mil genes com caractersticas de genes envolvidos no
metabolismo de carboidratos e 90 protenas, sendo 57% delas ativas contra
substratos celulolticos (Hess et al., 2011)
A metagenmica tem sido utilizada com sucesso em todas as escalas: para
anlises filogenticas, para o estudo de genes (Streit; Schmitz, 2004; Voget
et al., 2003; Ferrer et al., 2005), vias biossintticas complexas (Brady et al.,
2001; Gillespie et al., 2002; Courtois et al., 2003; Lim et al., 2003) para a
descrio do metabolismo de bactrias desconhecidas (Tyson et al., 2004)
e para estudo de comunidades microbianas contidas em diversas amostras
especficas como biofilmes e consrcio de bactrias contidas em culturas de
enriquecimento (Tyson et al., 2004; Knietsch et al., 2003). Muitos ambientes so focos da metagenmica, incluindo solos (Rondon et al., 2000; Courtois et al., 2003), cavidade oral (Diaz-Torres et al., 2003), rumem (Ferrer et
al., 2005), habitats aquticos (Kim; Fuerst, 2006), entre outros.
Estratgias diferentes para a construo de bibliotecas metagenmicas
variam conforme a inteno do estudo. Bibliotecas que contm grandes insertos de DNA ambiental so construdas principalmente em vetores cosmdeos (Courtois et al., 2003), fosmdeos (Ginolhac et al., 2004) e BAC
(Rondon et al., 2000), e permitem identificao e explorao de genes e vias
biossintticas complexas. Vetores com alto nmero de cpias e que aceitam insertos pequenos tambm so utilizados pela facilidade de obteno
de DNA plasmidial suficiente para anlises baseadas em sequncia (Tyson
et al., 2004).
99
A pesquisa da biblioteca metagenmica pode ser feita de diversas formas e, tipicamente, envolve hibridizao com uma sonda para o gene de
interesse. O sequenciamento de todos os clones da biblioteca e posterior
anlise genmica ou a anlise da expresso de DNA heterlogo dos clones
da biblioteca so tcnicas eficientes, porm muito trabalhosas.
Recentemente, formatos de microarranjos tm sido desenvolvidos e
avaliados para deteco de genes e anlises da comunidade microbiana em
ambientes complexos. Esses estudos indicam que tecnologias baseadas em
microarranjos genmicos possuem grande especificidade, sensitividade e
potencial quantitativo, tornando-se uma ferramenta paralela de alto rendimento para deteco de genes em amostras ambientais (Wu et al., 2001;
Zhou, 2003).
No LBMP esto sendo pesquisados genes relacionados a diversas reas
de interesse biotecnolgico atravs da construo de bibliotecas metagenmicas. Entre essas pesquisas pode ser citada a prospeco de genes de interesse na produo de etanol a partir da biomassa.
A enzima xilose isomerase catalisa a converso reversvel da D-xilose e
D-glicose para D-xilulose e D-frutose, respectivamente. Xilose o segundo carboidrato mais abundante na natureza, e a fermentao comercial desse composto para a produo de etanol pode representar uma alternativa de
aumento da produtividade para o futuro. Nos processos industriais de fermentao, a levedura Saccharomy cescerevisiae comumente utilizada para
produo de etanol. A levedura selvagem fermenta prontamente glicose,
mas no capaz de metabolizar xilose. Apenas uma pequena parcela de
bactrias, leveduras e fungos filamentosos so naturalmente capazes de fermentar xilose. Neste trabalho foi realizada a prospeco de novos genes de
xilose isomerase em bibliotecas metagenmicas e em isolados de Burkholdrias atravs da tcnica de Reao em Cadeia da Polimerase (PCR).
No foi possvel recuperar genes oriundos das bibliotecas metagenmicas. Dos treze isolados de Burkholdrias testados, seis apresentaram amplificao positiva para o gene de xilose isomerase (Figura 4.6). Os genes
foram completamente sequenciados e as sequncias foram utilizadas em
anlises computacionais, que permitiram estabelecer a identidade entre as
sequncias e a deduo da funo das protenas baseadas em similaridades.
Esses genes esto sendo utilizados em ensaios de expresso, para caracterizao das novas enzimas, considerando que essas sequncias representam
100
protenas que formam um grupo distinto quando comparado com outras

enzimas do banco de dados.
Do mesmo modo, esto sendo analisados nas bibliotecas metagenmicas genes envolvidos na degradao do amido e da celulose. Os genes
envolvidos na degradao do amido esto sendo prospectados a partir de
reao de PCR e os da celulose, pesquisados a partir da anlise funcional
dos clones, duas formas frequentes de se prospectar genes de interesse em
bibliotecas metagenmicas.
Atualmente, a colheita da cana-de-acar sem a utilizao do fogo para
despalha (cana crua) vem crescendo gradualmente devido presso da sociedade contra as queimadas e s vantagens agronmicas da permanncia
da palha no campo. Essa mudana elevou a utilizao de mquinas para a
realizao da colheita, aumentando a quantidade de matria verde (folhas)
que chega indstria. Esse aumento trouxe desvantagens para as usinas,
uma delas a presena do amido no caldo da cana-de-acar, que, em altas
concentraes, pode interferir negativamente no processo de fabricao do
acar, pois as extremidades da cana-de-acar, bem como as folhas, so
ricas em amido.
O amido pode causar vrios problemas durante o refino do acar, interferindo no processo de filtrao e cristalizao, proporcionando turbidez
visvel durante a dissoluo do acar em gua, alm de reduzir drasticamente o rendimento. Esses problemas decorrentes da presena do amido
podem fazer com que a indstria tenha prejuzos durante a produo do
acar. Para eliminao do amido, recomenda-se a aplicao de enzimas
-amilases, essas enzimas agem hidrolisando as ligaes alfa1-4 (presentes
entre as molculas de glicose das cadeias de amido).
As enzimas amilases atualmente disponibilizadas no mercado so comercializadas por um custo elevado e, portanto, precisam ser utilizadas de
forma bem controlada. Desse modo, o desenvolvimento de novos processos
de produo da amilase pode levar tanto diminuio dos custos como
obteno de produtos com caractersticas especiais importantes para o uso
em grande escala.
Considerando-se essa abordagem, a obteno de genes envolvidos na sntese de enzimas degradadoras de amido de grande importncia biotecnolgica na atualidade. No LBMP (Milena Tavares, comunicao pessoal) esto
sendo prospectados genes envolvidos na degradao de amido em bibliote-
101
Figura 4.6 Anlise filogentica da sequncia de aminocidos do gene de xilose isometase. A reconstruo filogentica foi computada pelo mtodo de distncia, utilizando a matriz PAM, e o mtodo neighbor-joining de construo de filogramas, com 1000 bootstraps.
O nmero de substituies de aminocidos proporcional ao comprimento da escala. As
sequncias obtidas neste trabalho esto ilustradas em vermelho. Os nmeros de acesso das
sequncias oriundas dos bancos de dados esto em parnteses ao lado do nome das linhagens. (Viviane Schuk, comunicao pessoal)
102
cas metagenmicas. Na Figura 4.7, pode-se observar a presena de amplificao gnica em biblioteca metagenmica construda a partir de DNA de
solo cultivado com cana-de-acar, esse material esta sendo sequenciado e
a sequncia gnica de interesse dever ser estudada in silico e clonada em
vetores de expresso para a avaliao de suas caractersticas enzimticas.
Figura 4.7 Perfil eletrofortico de uma amplificao por PCR partindo de 70 ng de DNA
Fosmidial obtidos de trinta pools de 96 clones de fosmdeos utilizando primers especficos
para a amilase. As amplificaes intensas correspondem s placas 07 e 17.
Os microrganismos apresentam uma imensa diversidade gentica e desempenham funes nicas e cruciais na manuteno de ecossistemas, uma
dessas funes a produo de enzimas extracelulares que ajudam na mineralizao da matria orgnica, liberao de carbono e nutrientes na forma
em que so assimilados. Devido a esses importantes fatores, que cada vez
mais aumenta a busca por enzimas que possam ser utilizadas nos diversos
setores industriais com maior aproveitamento e baixo custo.
A celulase pertence a essa classe de enzimas, ela formada por um complexo multienzimtico capaz de hidrolisar celulose atravs da quebra da
ligao ,1-4. A partir disso, foi realizada uma busca de gene relacionado
com a hidrlise da celulose em biblioteca metagenmica de DNA extrado
103
de solo de arboreto de eucalipto. Foram realizados testes bioqumicos e moleculares, partindo de um par de oligonucleotdeos iniciadores degenerados
que foi construdo para identificar o gene da glucanase que est ligado
hidrlise da celulose.
Com o teste bioqumico foi possvel selecionar clones que esto relacionados com hidrlise da celulose (Figura 4.8), a confirmao dos clones
positivos foi feita atravs de reaes de PCR. Aps a escolha do clone, foi
feita uma sub-biblioteca, os clones dessa biblioteca foram sequenciados e
atravs desse sequenciamento foi possvel encontrar gene relacionado hidrlise da celulose (Rodrigues, 2009).
Figura 4.8 Placas A, B e C contendo clones da biblioteca metagenmica cultivados em

meio contendo vermelho congo. Resultados positivos para hidrlise da celulose puderam ser
observados atravs da formao do halo amarelo ao redor dos clones que esto indicados
pelas setas. (Rodrigues, 2009)
O sequenciamento dos clones da sub-biblioteca foram feitos para encontrar genes relacionados a hidrlise da celulose, as sequncias foram analisadas
pelo pacote phredPhrap/Consed. Foram sequenciados 864 clones dos 1.344
clones da subbiblioteca, entre os 864 clones, o inserto sequenciado possui
aproximadamente 40.000pb e foram gerados 305 contigs (Rodrigues, 2009).
A anotao dos genes foi realizada de forma manual atravs da utilizao
do programa Artemis Release 10. A sequncia de aminocidos em formato
FASTA foi submetida ao banco de genes do National Center for Biotechnolgy Information (NCBI) (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST), atravs do programa BLASTP, para comparao com sequncias homlogas
de protenas depositadas no banco de dados. Todos os 305 contigs foram
analisados e foi encontrado resultado positivo nos contigs 33,109 e 184 (ibidem). As possveis protenas foram identificadas pelo programa Artemis e
sua provvel classificao funcional est na Tabela 4.1.
104
Tabela 4.1 Relao dos possveis genes relacionados a hidrlise da celulose.

Contigs
Contig 33
Funo proposta de
possveis protenas
similares
Bactria fonte
da protena
similar
no de acesso
Similaridade/
Identidade protena similar
(%)
cellulose synthase
operon protein YhjU
Salmonella
enterica subsp.
80/87
YP_02660285.1|
hypothetical protein
EcolC_0178
Escherichia coli
ATCC 8739
94/95
YP_001723187
Salmonella
Contig 109 PTS system,
95/93
N,N-diacetylchitobiose- enterica subsp.
specific IIC component enterica serovar
Agona str. SL483
YP_02664041.1
Contig 184 PTS system, N,Ndiacetylchitobiosespecific IIC component
YP_02664041.1
Salmonella
95/93
enterica subsp.
enterica serovar
Agona str. SL483
No contig 33, observou-se similaridade da sequncia com a de uma

protena do operon da celulose sintase. O fragmento possui 753 bases e 250
aminocidos e no apresenta domnio conservado, mas sabe-se que dois
genes so codificados e que sua funo atribuda hidrlise de celulose
insolvel, os genes so: celulose 1,4betacellobiosidase (celK) e betaglucosidase (bglH).
Os contigs 109 e 184 apresentaram a formao de dois fragmentos que
se complementam e formam a protena PTS (Figura 4.9), esses fragmentos
tm 705 bases e 234 aminocidos e 679 bases e 226 aminocidos. O sistema
PTS, que uma fosfotransferase, responsvel pelo transporte e fosforilao
de carboidratos, acoplado ao PEP (fosfoenolpiruvato). Tambm responsvel pela quebra de molculas grandes e insolveis em gua como o
caso da celulose. O sistema utiliza parte do carbono liberado pela quebra
dos compostos nas ligaes -1,4.
O sistema PTS bem complexo e conta com auxlio de dois conjuntos
de enzimas, enzima I (EI) e HPr, e enzima II (EII) que formada por trs
domnios A, B e C. Os domnios encontrados no contig 109 e 184 esto
relacionados com II C, essa enzima responsvel pela proteo integral da
membrana. Alm disso, as sequncias encontradas apresentam domnios
relacionados ao sistema PRK e genes cel B e cel D (Figura 4.6). PRK um
domnio no qual o sistema PTS atua, mas nesse caso ele quebra a estrutura da
quitina. Por outro lado, os genes cel B e cel D fazem parte de um operoncel,
105
que composto por cinco genes ce lA, cel B, cel C, celD, e cel F. O gene cel
B codifica um produto que requerido para o transporte e a fosforilao de
celobiosefosfoenolpiruvato-dependente, e cel D codifica um repressor
do transporte (Rodrigues, 2009).
Figura 4.9 Esquema das sequncias do contig 109 aps ser submetido ao BLASTP.
Outra abordagem que se pode ter atravs dos estudos metagenmicos

quando se inicia a pesquisa de genes a partir de uma cultura enriquecida
de microrganismos. Dessa forma, est sendo realizada pesquisa de genes de
interesse na desconstruo de biomassa a partir de consrcios microbianos degradadores de biomassa. Um conjunto de microrganismos (consrcio) foi isolado de solos com resduos de cana. Esse consrcio est sendo
mantido no LBMP, em meios de cultivo contendo bagao de cana ou celulose, como fonte de carbono (Maria Luiza M. de Almeida, comunicao
pessoal).
106
Atravs de anlises metagenmicas os constituintes desse conscio esto sendo estudados, assim como o DNA metagenmico dele possibilitar
o isolamento de um conjunto de genes que permitiro a desconstruo da
biomassa e sua utilizao para a produo de etanol. Observaram-se por
anlises microbiolgicas que esse conjunto bacteriano produz celulase e
amilase (Figura 4.10), dessa forma os genes codificadores dessas enzimas
devero ser isolados e clonados em vetores de expresso para posterior estudo nos sistemas de utilizao da biomassa de diferentes resduos da agroindstria na produo de etanol.
Figura 4.10 Bactrias de consrcio degradador de biomassa cultivadas por cinco dias em
meio de cultivo BHB contendo amido (A) ou carboximetilcelulose (B) coradas com iodo
(A) ou vermelho congo (B). O halo claro ao redor do consrcio revela a degradao dos dois
polissacardeos por esses microrganismos.
Atravs da abordagem metagenmica, pode-se vencer um grande desafio na sntese de biomolculas por processos fermentativos, particularmente de biocombustveis. Alm da possibilidade de seleo de genes
codificadores de enzimas direcionadas diretamente com a desconstruo
da biomassa e disponibilizao dos acares usados nos processos fermentativos, outros aspectos podem ser desenvolvidos. Por essa tcnica, pode-se
obter, por exemplo, microrganismos transgnicos resistentes s condies
adversas que possam ocorrer durante o processo de produo de etanol a
partir da biomassa (baixo pH, alta concentrao alcolica). Por outro lado,
a biologia sinttica, a partir de genes isolados do ambiente, poder criar
tambm microrganismos geneticamente modificados com capacidade de
sntese de hidrocarbonetos mais pesados, que tenham uma maior eficincia
energtica e que se separem mais facilmente da gua.
107
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Modificaes genticas em plantas de
cana-de-acar visando aumento
de produtividade e a utilizao de genes de
Bacillus thuringiensis para o controle
biolgico de insetos praga
Manoel Victor Franco Lemos,
Janete Apparecida Desidrio
Introduo
Os avanos da pesquisa e da tecnologia associados ao adequado emprego das metodologias moleculares dever, em breve, resultar numa forte acelerao do ritmo de obteno de espcies de plantas, de animais ou
mesmo de microrganismos com modificaes genticas (OGMs), que os
tornaro melhor adaptados s necessidades do homem moderno, podendo
contribuir de uma maneira mais intensa na produtividade de insumos importantes na atualidade e ao mesmo tempo causando menos danos ao meio
ambiente (Shimoda, 1998).
Curiosamente, em um estudo relatado por Cohen (2005), as naes que
se encontram agora em desenvolvimento tendem a intensificar a busca por
formas alternativas e mais rpidas de alcanar nveis de produtividade de
suas commodities, justamente utilizando os OGMs. No caso de plantas
de cana-de-acar (Saccharum officinarum L.), tais esforos se iniciaram,
provavelmente, com a mera construo e expresso de um transgene relacionado com um fentipo relativo a cor. Realizou-se a clonagem e a expresso do gene codificador de uma protena especial denominada protena verde fluorescente (GFP), tpica de organismos que vivem em profundidades
abissais e que, portanto, no pode ser considerado um fentipo observvel
em plantas comuns de cana-de-acar (Elliot et al., 1998). Com essa opo,
114
os autores pretenderam apenas abrir caminho, indicando que tanto a canade-acar como outras plantas j exploradas nesse contexto, como a Arabidopsis thaliana (Haseloff et al., 1997) se apresentam como geneticamente
passveis a tais tipos de interferncias em seu genoma.
Houve tambm um relato da tentativa de melhoria de expresso do gene
de sntese de octopina (ocs) com um gene denominado act1 de arroz, sobre a
expresso do gene gusA em clulas eletrotransformadas de S. officinarum L.
(Gonzles-Cabrera et al., 1998). No incio de 2002, Husler e colaboradores, em uma reviso, descreveram uma situao ainda mais intrigante que
foi justamente a modificao gentica de plantas C3, como arroz, trigo, soja
e batata com material gentico de plantas C4, cuja eficincia fotossinttica
reconhecidamente maior, visando melhorar a taxa de fotossntese das primeiras. Nessa publicao os autores mencionam que a sobre-expresso de
algumas das enzimas comuns aos dois tipos de metabolismo (plantas C3 e
plantas C4) e/ou estruturas celulares relacionadas com a fotossntese nem
sempre resultaram em ganhos de acmulo de carboidratos.
Abordagens iniciais visando modificaes genticas

utilizando ferramentas moleculares
Seguindo nesta linha de tentativas de modificaes genticas visando o
aumento da deposio de sacarose em plantas superiores, Roitsch e colaboradores (2003) descreveram vrios experimentos realizados por diferentes autores, nos quais a enzima invertase extracelular foi citada como pea
fundamental nos processos que ocorrem no aparelho apoplstico do floema
durante o transporte de sacarose liberada neste local, interferindo, assim,
na efetiva mobilizao desse carboidrato. Tais autores fazem tambm uma
relao entre a ao de enzimas tais como a invertase extracelular e os mecanismos de defesa de plantas sadias contra agentes biticos, descritos como
atuantes em tais plantas, as chamadas protenas PR ou protenas de defesa
(Ruffner; Geissmann; Rast, 1992).
Somente quase no final da primeira dcada do sculo XXI, McCormick e colaboradores (2008) descreveram alteraes nas taxas de fotossntese
realizada nas folhas com a expresso de alguns genes de cana-de-acar. Os
autores compararam os nveis de expresso gnica por meio de anlises de
MODIFICAES GENTICAS EM PLANTAS DE CANA-DE-ACAR
115
microarranjos de DNA obtidos de plantas mantidas em ciclos de iluminao/obscuridade e com material colhido de plantas transferidas para a obscuridade aps um perodo de crescimento inicial. Entre os genes envolvidos
nessas anlises, pode-se citar os associados com enzimas relacionadas com a
fotossntese (plantas C4), os ligados ao metabolismo mitocondrial e aqueles
envolvidos com o transporte de carboidratos (hexoses). Em particular, h
ainda meno de alterao de atividade das enzimas Rubisco (EC 4.1.139)
e hexoquinase (EC 2.7.1.1).
Posteriormente, em outro trabalho do mesmo grupo (McCormick; Watt;
Cramer, 2009), em que hbridos interespecficos entre Saccharum officinarum L. e Saccharum spontaneum L. foram analisados em relao ao acmulo
de acares nobres no colmo, ficou clara a relao direta entre capacidade
de sntese e estocagem de hexoses com a eficincia de produo desse tipo
de carboidratos. Em outras palavras, os autores indicaram que parece existir um controle fisiolgico do tipo feedback entre as taxas de assimilao/
produo de sacarose medida que mais genes da espcie mais eficiente (S.
officinarum L.) so comparados com essa mesma medida a partir da espcie
menos eficiente (S. spontaneum L.) no tocante ao transporte de sacarose.
Numa reviso mais recente, van Heerden e colaboradores (2010) descrevem os fatores subjacentes ao crescimento reduzido de plantas de canade-acar, o que, sem dvida nenhuma, caracteriza-se como uma situao
desfavorvel, uma vez que determina menos acmulo de biomassa e, consequentemente, baixa produtividade. Segundo os autores, nem sempre h uma
relao direta entre a incidncia de radiao solar (plantio de vero) e acmulo
de biomassa, podendo haver desvios de at 21% da produtividade esperada.
Esta perturbao foi referida como sendo o fenmeno do crescimento reduzido (FCR) e parece estar relacionada com o timing prprio das plantas de
cana-de-acar entre o perodo de plantio e o da colheita. Nesse perodo, em
que a intensa oferta de energia solar deveria propiciar correspondentes recordes de acmulo de biomassa, isso no acontece devido a um descompasso entre a capacidade de gerao dos acares nas folhas (fotossntese) e seu transporte para outras regies da planta, como colmo e mesmo razes, fazendo que
o crescimento e o acmulo final de biomassa seja menor do que o esperado.
Essas situaes j descritas indicaram a necessidade de buscar alternativas determinadoras de modificaes genticas que possam alterar esse
quadro, procurando um ponto de equilbrio entre a produo e o trans-
116
porte de carboidratos de modo que haja energia disponvel para propiciar

o melhor crescimento possvel das plantas e, depois disso, que haja ainda
bastante potencial para acmulo de biomassa, disponvel para ser processada posteriormente.
Melhorias genticas na utilizao da

biomassa acumulada
Sem dvida, aumentar a capacidade de transformao da biomassa acumulada em plantas de cana-de-acar durante seu ciclo produtivo em etanol ou sacarose tem sido descrito na literatura como o desafio dos novos
proprietrios de usinas transformadoras da biomassa. Na atualidade, muitos autores tm se preocupado em encontrar alternativas metablicas para
desencadear tais transformaes. O caminho mais seguro para se atingir
esses objetivos tem sido a busca de enzimas que possam catalisar as transformaes de maneira a aumentar o ndice de utilizao da biomassa produzida em campo por plantas de cana-de-acar. Assim que Harrison e
colaboradores (2011) indicaram como uma dos mais importantes objetivos
nessa linha de ao (aumentar a eficincia de produo de etanol) melhorar
a relao custo/beneficio da degradao da grande quantidade de lignocelulose produzida e armazenada nos colmos de plantas de cana-de-acar.
Existem sistemas de consrcios bacterianos e/ou fngicos j descritos
(Wongwilaiwalin et al., 2010) como produtores das enzimas celulolticas
capazes de promover a transformao da lignocelulose a outros substratos
que posteriormente so transformados em etanol ou em sacarose, porm o
rendimento ainda bastante desfavorvel em termos de produtividade.
Na descrio dos resultados obtidos por Harrison e colaboradores (2011)
houve o detalhamento da construo de plantas transgnicas de cana-de-acar portando trs genes com possibilidades celulolticas de duas diferentes fontes (duas celolohidrolases I e II obtidas de fungos e uma endoglucanase bacteriana) acumulando tais enzimas em suas folhas. Esses resultados
recentes se caracterizam como um dos primeiros passos no sentido de melhorar o ndice de transformao da biomassa acumulada por plantas de cana-de-acar, vindo a possibilitar a transformao do bagao de cana, gerado
nas usinas, em etanol e/ou sacarose conforme a necessidade de mercado.
117
Tambm Siqueira e colaboradores (2011) teceram comentrios sobre o

mesmo assunto e acrescentaram que as clulas vegetais cobertas por paredes de celulose, e por isso recalcitrantes ao ataque das enzimas celulolticas,
precisam ser atingidas por substncias que as tornem permeveis. No caso
desse trabalho, o objetivo foi atingido com tratamento com uma mistura de
cido actico e cido clordrico, permitindo a degradao com um coquetel
de enzimas celulolticas. Houve um aumento considervel na converso da
celulose em outros carboidratos.
Glassop e colaboradores (2007) em uma avaliao metablica em plantas
de cana-de-acar constataram que ao mesmo tempo em que h acmulo de
sacarose nos colmos, ocorre o aumento do espaamento dos interns e que
no material colhido dessas plantas foram identificados por cromatografia
gasosa e espectrometria de massa, um contedo maior de metablitos do
ciclo do cido tricarboxilico e aminocidos, justamente nas regies meristemticas, onde o crescimento celular mais intenso. Alm disso, os autores
detectaram que, concomitante, ao aumento da deposio de sacarose houve
tambm acmulo de trealose e rafinose. Nessa mesma linha de investigao,
Waclawovsky e colaboradeos (2010), em um trabalho de reviso reforam
a indicao da necessidade de melhorias nos mecanismos de degradao de
componentes das paredes celulares das clulas de plantas de cana-de-acar, como a lignocelulose, de modo a aumentar o rendimento bioenergtico
da transformao dos materiais biolgicos de plantas de cana-de-acar em
etanol ou sacarose.
Em concluses sobre a anlise de transcriptoma realizada por Manners
e Casu (2011), h indicaes que apontam que, devido a alta complexidade
do genoma de plantas de cana-de-acar, no se pode delinear um conjunto de genes considerados os mais importantes no tocante deposio de
carboidratos, assim como fica difcil definir quais as condies mnimas a
serem atingidas em termos de programas de melhoramento gentico para se
atingir essas metas. Por isso propem que ser necessrio num futuro no
muito distante que esforos sejam criados para se proceder ao sequenciamento completo do genoma e a correspondente anotao gnica de algumas
espcies do gnero Saccharum. Mencionam tambm a necessidade de se
conhecer o padro de controle metablico exercido em plantas de cana-deacar pelo mecanismo dos microRNAs em que genes podem ser silenciados em situaes particulares.
118
Biocontrole de pragas da cana-de-acar

A utilizao da bactria gram-positiva, aerbica e formadora de esporos
denominada Bacillus thuringiensis como alternativa ou mesmo suplemento ao
controle qumico de pragas de lavouras tem se intensificado nessas duas ltimas dcadas e, exatamente dentro desse cenrio, primeiras experincias relativas construo de plantas transgnicas de cana-de-acar foram iniciadas.
Downing e colaboradores (2000) relataram uma dessas abordagens ao
avaliar o nvel de controle da praga sul-africana Eldana saccharina utilizando o gene cry1Ac7 em associao com o gene codificador da quitinase (chiA)
isolado da bactria Serratia marcescens. Em seus experimentos, houve a
clonagem do gene cry mencionado em vetores apropriados sob o controle
de promotores adequados, oes autores procuraram a introduo de tal gene
para uma bactria tida como endoftica de plantas de cana-de-acar denominada Herbaspirillum seropedica. Em tais condies, relataram um sucesso
com bons nveis de controle de larvas da praga E. saccharina. No entanto,
descreveram tambm que, quando o mesmo gene foi clonado e transferido
para clulas de Pseudomonas fluorescens 14::tox, houve melhor ao de controle quando o gene chiA de S. marcescens foi associado aos bioensaios realizados. Nesse ltimo caso, h menor necessidade de protena Cry para atingir os nveis referidos de controle das larvas da praga mencionada devido a
cooperao entre as molculas de protenas Cry e as da enzima quitinase.
Em trabalho posterior Rosas-Garcia e colaboradores (2004), em um avaliao levada a efeito no Mxico, determinaram que em vrios isolados da
bactria B. thuringiensis foi possvel efetivamente controlar larvas da broca
da denominada Diatraea saccharalis e, inclusive, conseguiram, por meio de
uma abordagem utilizando anticorpos policlonais, determinar quais isolados, dentre os analisados, mostraram significativo nvel de controle e eram
ao mesmo tempo produtores de protenas Cry1A, dado que reagiram com
amostras do anticorpo anti-Cry1A produzido por eles. A definio de quais
isolados efetivamente foram selecionados como efetivos foi baseada nos valores de LC50 obtidos por eles.
Nesse mesmo formato de controle, Rosas-Garcia (2006) relatou a utilizao de uma formulao obtida por suspenses de esporo/cristal processadas pela metodologia spray-dried que determinou um controle de aproximadamente 100% das larvas em bioensaios realizados no laboratrio. Quando
119
os ensaios foram realizados em campo, o nvel de controle caiu para cerca

de 84%. Em abordagem semelhante, um grupo de autores brasileiros relataram experimentos em que isolados de B. thuringiensis tambm puderam ser
caracterizados como efetivos contra larvas de D. saccharalis. Em especial,
um isolado denominado S76 se destacou por exercer um nvel de controle
onze vezes maior do que a linhagem padro de B. thuringiensis denominada
HD-1. Esses autores descreveram esse isolado como um promissor agente a
ser utilizado no controle dessa praga que, segundo eles mesmos vem determinando enormes prejuzos na produtividade de plantas de cana-de-acar
(Gitahy et al., 2007).
Mais recentemente, Silva Ccero e colaboradores (2009) descreveram a
caracterizao inicial de isolados da bactria B. thuringiensis, no controle de
uma das pragas da ordem Coleoptera, que tem sido descrita como bastante devastadora na produo de subprodutos de plantas de cana-de-acar.
Trata-se da espcie Sphenophorus levis conhecida como o bicudo da cana.
Nesse estudo, os autores descreveram a caracterizao de vrios isolados,
utilizando ferramentas moleculares, para avaliao da ao de protenas
Cry produzidas por genes cry3 e cry35. Foram avaliados cerca de 1.163 isolados e foi possvel detectar um grupo de cinco isolados que, ao serem utilizados em bioensaios realizados em laboratrio, determinaram um nvel de
mortalidade de cerca de 70%.
Herana da resistncia protenas Cry de B. thuringiensis

Antes de considerar fatos relativos herana da resistncia s aes de
controle biolgico de pragas, promovidas pelas protenas Cry, faz-se necessrio situar o leitor no tpico relativo resistncia das pragas agrcolas em
si, que surgiu com o uso intenso dos defensivos agrcolas ou inseticidas qumicos. Este um tpico de grande impacto na discusso relativa produtividade agrcola no s do Brasil, mas de todo o mundo (Hall; Menn, 1999).
Como uma alternativa ao problema do relato de um nmero cada vez
maior de pragas resistentes, os biopesticidas, mais seguros do ponto de vista
ambiental, foram lanados no mercado mundial e, desde ento, tem recebido
muita ateno quer por serem realmente uma alternativa, quer por representarem uma forma de diminuio da presso sobre a seleo pragas cada vez
120
mais resistentes aos defensivos qumicos. Entre os biopesticidas utilizados

para o controle de pragas, como j mencionado no inicio deste captulo, destaca-se a bactria B. thuringiensis (Crickmore et al., 1998; Babu et al., 2003).
Pode-se dizer que a principal dificuldade em se obter plantas de canade-acar geneticamente modificadas e expressando nveis satisfatrios de
protenas Cry de modo a efetivamente desencadear um processo de controle biolgico de diferentes pragas, deve-se ao fato de, nas vrias tentativas
de obteno desse tipo de plantas de cana-de-acar resistentes aos insetos
praga, no ter havido adequado processo de clonagem desses genes e, com
isso, houve sempre baixos nveis de expresso dos genes cry que foram utilizados nesse processos de transformao. Em outras plantas, como o algodo, o arroz, a batata, o milho etc., h relatos de sucesso nessa mesma forma
de abordagem gentica (James, 1999; Tu et al., 2000; Bohorova et al., 2003).
Wenge colaboradores (2006) destacam em seu relato acerca de resistncia de plantas de cana-de-acar broca da cana. Em seus experimentos, quando os nveis de produo da protena Cry1Ac produzida a partir
de plantas de cana-de-acar transgnicas portadoras de um gene cry1Ac
sinttico e, portanto, satisfazendo as exigncias relativas preferncia de
cdons tpicas de plantas de cana-de-acar, observaram dois tipos de
comportamentos que so descritos a seguir. Quando ocorreu nveis baixos
de expresso desse gene sinttico, digamos devido a expresso inadequada
do gene sinttico, houve um rpido surgimento de populaes de D. saccharalis resistentes e com elevada taxa de sobrevivncia nos bioensaios.
Entretanto, quando as montagens obtidas produziam nveis adequados da
protena Cry1Ac no foram observadas larvas da broca da cana resistentes
nos ensaios realizados indicando, com isso, que ocorre a seleo de insetos
resistentes quando as condies de seleo no so adequadas.
Em dois relatos apresentados na literatura internacional (Wu et al.,
2009a e WU et al., 2009b) h relativamente pouco tempo atrs, h a meno
da utilizao da protena Cry1Ab frente a ensaios de resistncia por parte de
larvas de D. saccharalis, em que se menciona que a piramidizao, ou seja
o uso de mais de um tipo de genes cry, em plantas transgnicas, em geral,
tende a retardar o surgimento de populaes de insetos praga resistentes.
Na outra publicao, os autores descreveram que foram realizados cruzamentos entre cultivares de cana-de-acar, transgnicos ou no, envolvendo cruzamentos diretos e reversos bem com retrocruzamentos com ge-
121
nitores em que haviam genes de resistncia broca da cana ou no e com

esse tipo de abordagem foi possvel a eles detectar que a resistncia de larvas
de broca da cana parece ser governada por um ou poucos genes autossmicos recessivos herdados num modelo mendeliano de herana.
Consideraes finais
Em um capitulo de livro editado por Tomes, Lekssmanan e Songstad sobre o tema biofuels, Matsuoka e colaboradores (2011) relataram a experincia brasileira relativa indstria do etanol, em que os primeiros esforos
levados a cabo, com plantas de cana-de-acar transgnica, iniciaram-se
no final do sculo passado, totalizando nove experimentos buscando obter
plantas tolerantes a herbicidas (Falco et al. 2000). Esses mesmos autores
comentaram em seu texto que se espera, nos prximos anos, haver a efetiva construo de um cultivar de cana-de-acar transgnico, que possa
ser comercializado ou mesmo ofertado aos produtores de acar e lcool
para combustvel, uma vez que j existem vrias iniciativas em andamento, tanto em instituies financiadas por fundos governamentais como em
projetos da iniciativa privada.
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6
Eucalipto adensado:
manejo para florestas energticas
Saulo Philipe Sebastio Guerra,
Klber Pereira Lanas, der Aparecido Garcia,
Raffaele Spinelli
Introduo
Uma das fontes de energia renovvel mais conhecida e utilizada no
mundo, desde a antiguidade, a madeira biomassa de origem vegetal.
Essa fonte de energia foi largamente empregada, dada a facilidade de acesso, baixo custo de aquisio, no necessidade de beneficiamento pr-uso e a
no explorao de combustveis fsseis.
Com o surgimento dos derivados de petrleo e do carvo mineral, a procura pela madeira, como suprimento energtico, teve sua demanda reduzida. Entretanto, em funo das questes ambientais, polticas e econmicas
atuais, alm de fenmenos climticos inesperados, fizeram com que o uso
da madeira voltasse ao cenrio mundial graas a sua potencialidade de produo energtica com reduzido impacto ambiental.
Diante desse novo paradigma, adicionado da crescente demanda energtica mundial, surge um conceito, que est em uma fase inicial de implantao no mundo e, praticamente incipiente no Brasil, chamado de sistema
florestal de curta rotao para a produo de biomassa, de forma sustentvel, com fins energticos.
Dessa forma, sero apresentados, neste captulo, conceitos, sistemas de
produo e colheita mecanizada de usos nacional e internacional e, dados
tcnicos que possam fomentar o debate, o desenvolvimento e o aprimoramento da silvicultura para gerao de energia limpa.
126
Sistema florestal de curta rotao

Em funo da crescente demanda energtica, surge no cenrio mundial e
nacional um novo conceito que o Sistema Florestal de Curta Rotao para
gerao de energia. Esse novo sistema de produo apresenta uma relao
direta na produo de matria-prima em quantidade e qualidade superior,
obtido num intervalo de tempo reduzido e a custos inferiores, quando comparados aos sistemas silviculturais convencionais.
O sistema florestal de curta rotao, no Brasil, deve ser, inicialmente,
particularizado ao plantio de eucalipto com o intuito de desenvolver um
crescimento natural da planta de forma mais eficiente, sendo que, a renovao do plantio e da matria-prima se tornaro fatores de produo com altas
produtividade por unidade de tempo.
Com isso, os fatores de inovao tecnolgica, pesquisa e desenvolvimento so fundamentais para que os sistemas florestais de curta rotao
produzam energia abundante, renovvel e, ainda, que permitam o transporte a longas distncias de forma sustentvel, econmica e socialmente.
Esse tema tem-se tornado alvo de interesse das principais agncias de
fomento e centros de pesquisa na Europa, Estados Unidos e Austrlia, tais
como: Cost (UTF-8) European Cooperation in Science and Techonology;
IEA International Energy Agency; NREL National Renewable Energy Laboratory (EUA); Federal Aebiom European Biomass Association
(Europe); Ademe Agence de lEnvironnement e de la Maitrise de lEnegie
(Frana); VTT Technical.
No Brasil, agncias de fomento como o CNPq Conselho Nacional de
Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico, Fapesp Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo, Finep Financiadora de Estudos
e Projetos e BNDES Banco Nacional do Desenvolvimento, tem programas especficos para fomentar e fortalecer novas pesquisas, projetos,
equipamentos e sistemas de utilizao da biomassa como fonte de energia
renovvel.
Diante desse desafio, a pesquisa tem gerado inovaes na silvicultura,
nos sistemas de corte, no transporte e na triturao com solues, equipamentos e sistemas para aumentar a eficincia da produo da matria
prima a madeira.
EUCALIPTO ADENSADO
127
No Brasil, os mais recentes plantios baseados no sistema florestal de

curta rotao vm apresentando produtividades elevadas, atingindo nmeros da ordem de 120 m3/hectare (45 toneladas por hectare) em ciclos de
apenas um ano. Os pases lderes na utilizao dessa tecnologia, com mais
de 10 anos de desenvolvimento e aprimoramento, conseguem atingir os ndices de produtividade nacional, porm, no dobro de tempo.
Desta forma, para produzir mais madeira, com menos recursos e menores perdas, diversas investigaes cientficas e prticas devem ser conduzidas para determinar a rotao da cultura ideal para cada local (12, 18, 20, 24
ou 36 meses), em funo do material gentico desenvolvido para ciclos de
curta rotao e com alta capacidade de rebrota.
Alm da silvicultura, sistemas mecanizados de colheita e transporte,
com colhedoras especficas para a funo, so fundamentais e determinantes para garantir a viabilidade econmica dos novos sistemas florestais de
curta rotao.
Portanto, produzir uma matria prima de alta qualidade, buscando o
limite produtivo mximo das florestas, com retornos financeiros significativos para as empresas envolvidas no sistema, est diretamente relacionado
com novas tcnicas silviculturais e eficincia das mquinas no campo.
Energia originada de biomassa florestal

Desde a revoluo industrial, a necessidade incessante por fontes de
energia um tema de discusses por todo o mundo. Com o domnio da
tecnologia de se utilizar os combustveis fsseis como fonte de energia, a
capacidade produtiva mundial foi ampliada, gradativamente, at os dias
atuais. A grande dependncia de fontes energticas provenientes do petrleo considerada, em vrios pases, um dos maiores problemas, sendo que
muitos deles no tm disponibilidade ou capacidade de explorao do combustvel fssil.
A dcada de 1970 ficou marcada pela primeira crise do petrleo e, para
Smith (1989), o consequente aumento do custo desse produto influenciou o
setor florestal, visto que, acelerou a necessidade de substituio do petrleo
por fontes alternativas de energia. Assim, os plantios florestais, com finalidade energtica, tornaram-se uma fonte alternativa para a substituio do
petrleo e seus derivados.
128
Em termos de gerao de energia, a Grfico 6.1 apresenta o volume de

madeira consumido no Brasil, sendo da ordem de 100 milhes de metros cbicos anuais a madeira destinada para fins energticos no pas (MME, 2007).
A energia consumida no Brasil, originada de biomassa, principalmente, direcionada ao setor de transformao, atravs da produo de carvo
vegetal para abastecer as siderrgicas, sendo o Brasil um dos maiores produtores e consumidores de carvo vegetal do mundo. Em 2005, a produo
nacional desse produto foi de 5,5 milhes de toneladas e, desse total, 2,5
milhes de toneladas (46%) foram oriundos de florestas plantadas, sendo
Minas Gerais o principal estado produtor, com 1,74 milhes de toneladas
(IBGE, 2007) e, nesse mesmo ano, foram consumidos 38,05 milhes de
metros cbicos de carvo vegetal. Segundo MME (2007), o setor de transformao seguido pelos setores residencial, industrial, agropecurio e outros usos (Grfico 6.2).
Grfico 6.1 Madeira consumida no Brasil (Brito, 2007).
Grfico 6.2 Utilizao energtica da madeira no Brasil (MME, 2007)
EUCALIPTO ADENSADO
129
Para Brito (2007), a experincia da siderurgia brasileira em carvo vegetal serve de exemplo para que, se as formas renovveis de energia, em larga
escala, se tornarem viveis, evoluiro de uma situao tecnolgica primitiva
e rudimentar - baseada na simples destruio das florestas para a incorporao de tecnologias florestais mais avanadas, de forma a assegurar maior
eficincia e tornarem-se ecolgica e economicamente compatveis.
O eucalipto
De origem australiana, o gnero Eucalyptus composto por, aproximadamente, 600 espcies, onde cerca de 100 delas so utilizadas para fins
comerciais no mundo. A capacidade de adaptao s diversas condies e o
rpido crescimento, faz com que esse gnero seja uma das principais espcies utilizada para os mais diversos fins.
O gnero Eucalyptus foi introduzido no Brasil no sculo XIX, mas os primeiros registros de plantaes comerciais e pesquisas so datados de 1904,
no estado de So Paulo, onde se procurava uma soluo para a produo de
dormentes para ferrovias. Aps esse perodo, foi notada a boa adaptao da
espcie s condies do pas e, de acordo com Chandler & Henson (1998),
na dcada de 1940, foram estabelecidas plantaes em regies de minerao
de ferro, para a produo de carvo vegetal, como uma alternativa energtica para substituir o coque no processo de produo do minrio de ferro na
siderurgia.
De 1910 a 1966 o Brasil tinha, aproximadamente, 470 mil hectares de
plantaes florestais. A partir dessa data, o governo brasileiro criou uma lei
de incentivos fiscais para plantaes florestais e, com isso, a rea de reflorestamento chegou a quase 6 milhes de hectares em 1987, com pequena
reduo na dcada de 90.
Atualmente, no Brasil, segundo a ABRAF (2011), a rea ocupada por
plantios de Eucalyptus e Pinus, totalizou 6,5 milhes de hectares, sendo 73%
correspondente rea de plantios de Eucalyptus e 27% a plantios de Pinus.
No mundo, a rea plantada de Eucalyptus estimada entre 16 e 19 milhes
de hectares, tendo como principais objetivos a produo de celulose e papel,
a fabricao de painis de fibras e partculas, carvo vegetal, madeira rolia
para a utilizao na construo civil e em aplicaes diversas na rea rural.
130
A grande demanda por madeira, nos ltimos anos, fez com que muitos
agricultores investissem nesse tipo de cultura, atrados pelo alto valor da
madeira e, tambm, pelo seu uso mltiplo. Esse gnero tambm se mostra
interessante pela alta produtividade em curtos ciclos, quando comparado a
outras culturas florestais.
Figura 6.1 Colheita de uma plantao de Eucalyptus com manejo tradicional.
O aumento de incremento na produtividade de plantios de eucalipto,

nas ltimas dcadas, deve-se s pesquisas realizadas em relao ao melhoramento gentico e s prticas silviculturais, tais como adubao, irrigao,
tratos culturais, controle de pragas e doenas e espaamento de plantio.
Florestas energticas
As plantaes, com finalidades energticas, so sistemas que visam uma
maior produo de biomassa por unidade de rea e num menor espao de
tempo. Assim, aliado ao conceito de plantaes energticas, surgiu o conceito de plantios de curta rotao (Mller, 2005).
EUCALIPTO ADENSADO
131
O termo florestas energticas apareceu na dcada de 1980 com Magalhes (1982) e foi utilizado para definir as plantaes com grande nmero
de rvores por hectare e, consequentemente, com ciclo curto, que tambm
tinham como finalidade a produo do maior volume de biomassa por rea
em menor espao de tempo. No entanto, essas experincias no apresentaram os resultados esperados, em funo do pouco conhecimento tcnico, da
qualidade do material gentico e do baixo desenvolvimento, no Brasil, da
silvicultura naquela poca. Esse perodo foi marcado, essencialmente, por
uma maioria de plantios com baixa produtividade e grande mortalidade,
alm dos impactos sobre a fertilidade e a umidade do solo (Mller, 2005).
Ainda, de acordo com os autores, o desenvolvimento da silvicultura de
eucalipto, como fonte de insumo energtico, foi fundamentado na produo de carvo vegetal para abastecer a indstria siderrgica.
Para Macedo (2003), as altas produtividades obtidas em plantaes florestais, particularmente do gnero Eucalyptus, tornaram menores os custos
de gerao da eletricidade com madeira de reflorestamento, deixando o investimento mais atrativo.
As caractersticas principais desejveis em uma floresta energtica so a
alta produo de biomassa e ciclos de rotao curtos. Para o aproveitamento total da rea, a tendncia de se reduzir o espaamento de plantio uma
tcnica que est sendo muito estudada e tem demonstrado bons resultados.
Os espaamentos comerciais, mais utilizados no Brasil, para o gnero Eucalyptus so de 3 x 3 m e 3 x 2 m, com densidades populacionais de,
aproximadamente, 1100 e 1700 plantas por hectare, respectivamente. Tcnicas de reduo para 3 x 1 m e 3 x 0,5 m, com densidade populacionais de,
aproximadamente, 3300 e 6700 plantas por hectares, respectivamente,
O ciclo da cultura do eucalipto, comumente adotado no pas, est entre
5 e 7 anos, o que pode ser reduzido para 1 a 2 anos com o uso das tcnicas
de plantio adensado.
A utilizao de plantios com espaamento reduzido deve-se muito s
tcnicas de clonagem e melhoramento gentico. Um fator importante para
que o plantio de eucalipto adensado seja bem sucedido a uniformidade das
plantas, normalmente obtido a partir de clones. Para que ocorra o desenvolvimento homogneo das plantas, baixa mortalidade e alto incremento de
massa so necessrios alm da escolha adequada das mudas (oriundas de viveiros que apresentem programas de melhoramento gentico e matrizes de
alta produtividade), sistemas mecanizados de plantio e tratos silviculturais.
132
Projeto florestas energticas em Botucatu

Em dezembro de 2008, foram plantadas as mudas de clones do hbrido
de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla em uma rea experimental localizada numa altitude aproximada de 875 m e situa-se entre as longitudes
482443 W e 482621 W e entre as latitudes 225810 S e 225925 S.
O clima predominante no municpio de Botucatu, estado de So Paulo,
segundo os critrios adotados por Koppen Cfa, o clima mesotrmico,
com temperaturas mdias superiores a 10C, cuja temperatura do ms mais
quente igual ou superior a 22C e o ndice pluviomtrico anual est em
torno de 1516 mm.
O sistema florestal de curta rotao recebeu as adubaes de plantio e de
cobertura. A aplicao inicial consistiu em NPK (6-30-6), no plantio, nas
doses de (1) 70, (2) 140 e (3) 280 g/planta; na cobertura, a adubao foi feita
com NPK (20-0-20) adicionados os micronutrientes Zn (0,5%) e B (0,3%),
aos 60, 140 e 360 dias de idade. Aos 60 dias as doses foram de (1) 25, (2) 50
e (3) 100 g/planta; aos 140 dias, (1) 35, (2) 70 e (3) 140 g/planta; aos 360
dias, (1) 50, (2) 100 e (3) 200 g/planta. Os cinco espaamentos entre plantas
ficaram nos valores de 0,5 m; 1,0 m; 1,5 m; 2,0 m; 2,5 m e a distncia entre
as linhas de plantio fixadas em 2,80 m para todos os tratamentos.
No experimento conduzido por Garcia e colaboradores (2009), comparando diferentes espaamentos de plantio com Eucalyptus urograndis, foram
observadas diferenas no desenvolvimento do dimetro do colo das plantas.
O espaamento de 2,8 x 0,5m apresentou menores valores de dimetro do
colo em relao aos espaamentos 2,8 x 1,5m e 2,8 x 2,5m. No Grfico 6.3,
podem ser observadas as mdias dos dimetros do colo das plantas aos 90
dias aps o plantio.
Com a altura total das plantas, pode ser observada uma tendncia de
reduo dos valores mdios com o aumento do espaamento (Grfico 6.4).
Embora o espaamento de 2,8 x 0,5 m tenha culminado no maior valor mdio na altura total, no houve diferenas estatsticas entre os tratamentos
aos 90 dias aps o plantio, com base no intervalo de confiana ao nvel 95%.
A princpio foram feitas medies de dimetro, altura e estimativa do
volume atravs da utilizao de um fator de forma. Para as colheitas realizadas aos 18 e 24 meses, perodo em que a floresta estava completamente
EUCALIPTO ADENSADO
133
Grfico 6.3 Dimetros do colo, em mm, das mudas de Eucalyptus urograndis nos trs espaamentos aos 90 dias aps o plantio. As colunas indicam a mdia das repeties, enquanto
as barras verticais apresentam o Intervalo de Confiana o nvel de 95% (Garcia et al., 2009).
Grfico 6.4 Altura total, em cm, das mudas de Eucalyptus urograndis nos trs espaamentos 90 dias aps o plantio. As colunas indicam a mdia das repeties, enquanto as barras
verticais apresentam o Intervalo de Confiana ao nvel de 95% (Garcia et al., 2009).
estabelecida (Figura 6.2), foi adotado o mtodo da cubagem rigorosa para

a obteno do volume com casca, porcentagem de casca e coleta de discos para a determinao da densidade bsica mdia das rvores (Soares et
al., 2006).
O princpio de coleta de rvores-amostra considera a escolha de quatro
rvores-modelo em cada parcela, o que significou colher rvores com DAP
prximo ao dimetro mdio ou quadrtico da populao, conforme explica
Soares e colaboradores (2006). A metade das amostras coletadas na regio
do DAP foi moda para determinao do poder calorfico superior e de algumas caractersticas qumicas da madeira.
134
Figura 6.2 Plantio do clone de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla no espaamento

de 2,8 x 0,5 m.
Os discos foram coletados em porcentagem da altura total (Figura 6.3) e

a biomassa de folhas e galhos no campo, separadamente (Figura 6.4), foram
determinados por meio de balana eletrnica com de preciso 0,1 kg.
Figura 6.3 Discos coletados em porcentagem da altura total para determinao de volume
de madeira com casca e densidade bsica mdia da rvore.
EUCALIPTO ADENSADO
135
Figura 6.4 Processamento para a pesagem da biomassa mida de galhos e folhas no campo.
O clculo de volume com casca foi realizado de acordo com as seguintes

frmulas:
( AS1 + AS2 )
Vi =
* L
2
Vt = Vi
Onde:
Vi: volume da seo (m)
AS: rea seccional (m)
L: comprimento da seo (m)
VT: volume total (m)
O clculo da densidade bsica mdia foi obtido da seguinte maneira:
( DB0% + DB1,3 ) * V1
( DB75% + DB100 ) * V 5
DBM =
++
/ VT
2
2
Onde:
DBM: densidade bsica mdia (kg.m-3)
DBn: densidade bsica no disco na posio n, em porcentagem da altura
total (kg.m-3)
Vn: volume da seo n (m)
VT: volume total da rvore (m)
136
A densidade bsica mdia das rvores de fundamental importncia

para o clculo da biomassa seca de madeira com casca. Nota-se na Tabela
6.1 que, nos resultados obtidos no experimento, a biomassa seca de madeira
com casca foi afetada pelo fatorial triplo adubao x espaamento x idade de
colheita (18 e 24 meses).
Tabela 6.1 Anlise de varincia para a biomassa seca de madeira com casca, em t.ha-1
Fator de Variao
G.L.
S.Q.
Q.M.
p-valor
Idade de Colheita (I)
1204,99
1205,0
39,57
0,00
Espaamento (E)
10755,76
2688,9
88,31
0,00
Nvel de Adubao (A)
3409,13
1704,6
55,98
0,00
IxE
1027,72
256,9
8,44
0,00
IxA
342,17
171,1
5,62
0,01
ExA
4508,34
563,5
18,51
0,00
IxExA
997,60
124,7
4,10
0,00
Resduo
90
2740,38
30,4
Os dados foram submetidos a testes de mdias que resultou na Tabela

6.2, que apresenta os resultados de produtividade em toneladas por hectare.
O melhor resultado foi de 100,8 t.ha-1, obtido no tratamento 2,8 x 0,5 m, no
nvel 3 de adubao, colhido aos 24 meses aps o plantio.
A determinao do poder calorfico superior foi realizada pelo mtodo
da bomba calorimtrica que, basicamente, consiste em medir a variao da
temperatura da gua pela energia emitida na forma de calor pela queima
da madeira com casca. A qualidade de combustvel pode ser rotulada pelo
poder calorfico superior (PCS), que definido como sendo a quantidade
de energia liberada na forma de calor por unidade de massa de combustvel,
quando submetido combusto completa. Para a determinao do PCS foi
utilizado um calormetro e a metodologia adotada foi o Mtodo da Bomba
Calorimtrica. O mtodo consiste em queimar o combustvel, no caso a
madeira, em um sistema aproximadamente adiabtico, e medir a variao
de temperatura proporcionada pela queima da madeira numa certa quantidade de gua com massa pr-estabelecida. A variao de temperatura registrada na gua por um termmetro de mercrio proporcional ao calor
liberado pelo combustvel.
EUCALIPTO ADENSADO
Tabela 6.2 Biomassa de madeira com casca (BMC) em funo da idade de

colheita, do espaamento e do nvel de adubao
Idade (meses)
Espaamento (m)
Nvel de
adubao
BMC
(t.ha-1)
2,8 x 0,5
40,8 c
2,8 x 1,0
2,8 x 1,5
18
2,8 x 2,0
2,8 x 2,5
2,8 x 0,5
2,8 x 1,0
2,8 x 1,5
24
2,8 x 2,0
2,8 x 2,5
51,2 c
66,7 b
41,0 c
47,1 c
47,6 c
38,0 d
41,4 c
42,7 c
30,1 h
34,8 e
34,9 e
22,6 h
29,7 h
32,8 f
46,3 c
55,4 b
100,8 a
38,1 d
39,5 d
47,3 c
44,3 c
45,9 c
48,5 c
35,6 e
40,3 d
46,3 c
31,7 g
35,6 e
41,2 c
Mdias seguidas de letras iguais no diferem entre si pelo teste Tukey ( = 0,05)
137
138
Os componentes de um calormetro so:

a) Bomba calorimtrica: recipiente de ao inox resistente onde efetuada a queima do combustvel.
b) Termmetro de mercrio: utilizado para determinar a temperatura
inicial e final.
c) Sistema de abastecimento de oxignio: necessrio inserir oxignio
na bomba calorimtrica para facilitar a combusto.
d) Recipiente ou vaso calorimtrico: recipiente com uma massa definida de gua (2500 g), que ir trocar calor com a bomba calorimtrica.
e) Sistema de Ignio: um sistema que est ligado rede eltrica por
meio de duas aberturas existentes na bomba calorimtrica, no qual passa a corrente eltrica formando uma resistncia em um fio de nquel-cromo, transpassando a amostra de madeira, que entra em combusto.
O poder calorfico superior determinado pela seguinte equao:
PCS = [(K + M H2O) / (Mc)] * (Tf Ti)
Onde:
K = constante do calormetro determinada previamente, utilizando-se
o cido benzoico com PCS de 6318 cal.g-1; neste trabalho o valor de K foi
de 489.
M H2O = massa de gua pr-estabelecida em gramas (2500 g).
Mc = massa seca da amostra de madeira.
Ti = temperatura da gua antes da combusto.
Tf = temperatura da gua obtida aps a combusto.
Seguindo o procedimento explicado por Vale e colaboradores (2000),
com os valores de poder calorfico (kcal.kg-1) da madeira com casca e a
produo de massa seca (kg) pode-se obter a produo de energia (kcal). A
energia produzida tambm pode ser expressa em termos de produtividade
energtica (Gcal.ha-1) e convertida para tep (tonelada equivalente de petrleo), como ser apresentado mais adiante.
A tonelada equivalente de petrleo o produto de um coeficiente resultante da razo entre o poder calorfico superior da madeira e do petrleo
pela biomassa de madeira, em toneladas por hectare (Patusco, 1998).
Nota-se na Tabela 6.3 o desenvolvimento das rvores em dimetro e em
altura e que essas medidas, principalmente de dimetro, comeam a se diferenciar na idade de 18 meses.
139
EUCALIPTO ADENSADO
Tabela 6.3 Dimetro a altura do peito (DAP) e altura total em funo do espaamento e dos
nveis de adubao nas idades de 12 meses, 18 meses e 24 meses aps o plantio.
Nvel de
adubao
Espaamento rvores/
(m)
ha
DAP (cm)
ALTURA (m)
12
18
24
12
18
24
2,8 x 0,5
7143
6 (1)
6 (2)
11 (2)
10 (2)
2,8 x 1,0
3571
7 (1)
7 (1)
11 (2)
13 (2)
2,8 x 1,5
2381
8 (1)
9 (1)
11 (1)
13 (3)
2,8 x 2,0
1786
9 (1)
9 (1)
11 (1)
13 (2)
2,8 x 2,5
1429
9 (1)
10 (1)
10 (1)
13 (2)
2,8 x 0,5
7143
6 (2)
6 (2)
10 (2)
11 (3)
2,8 x 1,0
3571
7 (1)
8 (1)
12 (2)
13 (2)
2,8 x 1,5
2381
8 (1)
9 (1)
12 (1)
12 (1)
2,8 x 2,0
1786
9 (1)
10 (1)
11 (1)
14 (2)
2,8 x 2,5
1429
9 (1)
10 (1)
11 (1)
11 (1)
2,8 x 0,5
7143
6 (2)
7 (2)
11 (3)
12 (3)
2,8 x 1,0
3571
8 (1)
8 (1)
12 (2)
13 (2)
2,8 x 1,5
2381
8 (1)
9 (1)
11 (2)
13 (2)
2,8 x 2,0
1786
9 (1)
10 (1)
11 (1)
13 (2)
2,8 x 2,5
1429
10 (1)
11 (1)
12 (2)
13 (2)
Na Tabela 6.4, possvel observar o incremento em volume sendo que, na

idade de 12 meses, o volume com casca foi calculado pelo produto resultante
do volume cilndrico por um fator de forma, para as outras idades apresentada a mdia de quatro rvores-amostra cubadas pelo mtodo de Smalian.
A densidade bsica mdia e o poder calorfico superior da madeira com
casca esto apresentados na Tabela 6.5, sendo dados obtidos nas colheitas
dos 18 e 24 meses aps o plantio. A densidade bsica mdia foi obtida pela
mdia ponderada das densidades obtidas em porcentagem de altura total
em que o peso para a mdia foi o volume das sees e o volume total. Na
literatura so encontrados valores de poder calorfico para a madeira semelhantes ou at inferiores aos obtidos no projeto, Lima e colaboradores
(2007) avaliaram o poder calorfico de amostras coletadas na regio do dimetro a altura do peito (DAP) das rvores de Eucalyptus benthamii, aos seis
anos de idade; encontraram poder calorfico mdio de 4681487,6 kcal.kg-1.
Os valores de poder calorfico superior (PCS) de Eucalyptus grandis e Eucalyptus urophylla ficam entre 4501 e 4790 kcal.kg-1 e 4422 e 4595 kcal.kg-1
respectivamente, segundo Quirino e colaboradores (2005).
140
Tabela 6.4 Volume com casca, em m, em funo do espaamento, do nvel de adubao e das
idades de colheita, em meses.
Nvel de
adubao
Espaamento (m) rvores/ha
Volume com casca (m)
2,8 x 0,5
7143
12
18
0,0076 0,0134 (0,0014)
24
0,0155 (0,0023)
2,8 x 1,0
3571
0,0074 0,0246 (0,0009)
0,0250 (0,0053)
2,8 x 1,5
2381
0,0102 0,0319 (0,0025)
0,0422 (0,0050)
2,8 x 2,0
1786
0,0099 0,0348 (0,0003)
0,0427 (0,0049)
2,8 x 2,5
1429
0,0086 0,0323 (0,0013)
0,0476 (0,0044)
2,8 x 0,5
7143
0,0092 0,0166 (0,0021)
0,0200 (0,0023)
2,8 x 1,0
3571
0,0128 0,0286 (0,0039)
0,0242 (0,0024)
2,8 x 1,5
2381
0,0122 0,0368 (0,0026)
0,0392 (0,0072)
2,8 x 2,0
1786
0,0175 0,0396 (0,0053)
0,0563 (0,0080)
2,8 x 2,5
1429
0,0105 0,0417 (0,0038)
0,0523 (0,0033)
2,8 x 0,5
7143
0,0152 0,0213 (0,0026)
0,0336 (0,0025)
2,8 x 1,0
3571
0,0128 0,0287 (0,0028)
0,0321 (0,0012)
2,8 x 1,5
2381
0,0116 0,0370 (0,0056)
0,0464 (0,0035)
2,8 x 2,0
1786
0,0126 0,0406 (0,0043)
0,0508 (0,0057)
2,8 x 2,5
1429
0,0142 0,0457 (0,0031)
0,0625 (0,0047)
Tabela 6.5 Densidade bsica mdia e poder calorfico superior obtidos nas idades de 18 e 24
meses em funo do nvel de adubao e do espaamento
Nvel de
adubao
2,8 x 0,5
DBM (kg.m3)
18
24
423 (53)
418 (14)
PCS (kcal.kg1)
18
24
4735 (73)
4809 (49)
2,8 x 1,0
467 (10)
443 (10)
4784 (52)
4786 (27)
2,8 x 1,5
502 (30)
458 (11)
4784 (38)
4774 (110)
2,8 x 2,0
486 (4)
457 (9)
4822 (48)
4766 (66)
Espaamento (m)
2,8 x 2,5
491 (8)
471 (5)
4863 (86)
4727 (47)
2,8 x 0,5
432 (17)
390 (51)
4753 (60)
4729 (97)
2,8 x 1,0
461 (20)
441 (13)
4824 (47)
4773 (80)
2,8 x 1,5
486 (9)
454 (7)
4825 (26)
4764 (71)
2,8 x 2,0
493 (13)
460 (10)
4808 (25)
4740 (23)
2,8 x 2,5
499 (21)
477 (11)
4897 (88)
4807 (53)
2,8 x 0,5
439 (5)
421 (3)
4742 (88)
4718 (81)
2,8 x 1,0
466 (8)
412 (12)
4775 (32)
4751 (109)
2,8 x 1,5
469 (9)
430 (57)
4718 (62)
4790 (69)
2,8 x 2,0
482 (19)
444 (10)
4804 (33)
4799 (74)
2,8 x 2,5
503 (4)
461 (12)
4781 (98)
4809 (44)
EUCALIPTO ADENSADO
141
A energia da madeira pode ser expressa em toneladas equivalentes de

petrleo, o que d subsidio para interpretaes da rea econmica no que
diz respeito substituio do combustvel fssil pela biomassa florestal. Do
ponto de vista desta medida energtica o tratamento 2,8 x 0,5 m com maior
adubao gerou 88 tep.ha-1, em 24 meses, que foi significativamente maior
que os outros tratamentos (Tabela 6.6).
Tabela 6.6 Tonelada equivalente de petrleo (tep)
Espaamento (m)
2,8 x 0,5
2,8 x 1,0
2,8 x 1,5
2,8 x 2,0
2,8 x 2,5
Nvel de adubao
tep.ha-1
18 meses
24 meses
18
18
23
45
29
88
18
18
21
42
21
63
17
17
19
38
18
54
13
13
15
31
16
47
10
10
13
26
15
44
Outra abordagem importante para os projetos florestais de bioenergia a

avaliao econmica com uso de indicadores. Nesta pesquisa foi utilizado o
mtodo de avaliao econmica do grupo de mtodos nos quais se considera
a variao do capital no tempo (Silva et al., 2005). O VPL (valor presente lquido), o IBC (ndice benefcio/custo) e o CMP (custo mdio de produo,
considerando produo de briquetes) foram calculados, considerando o fluxo de caixa, os custos com insumos, tais como inseticida, herbicida, mudas,
adubo e produo de briquetes. No clculo das receitas foi considerado o
preo de venda do briquete de R$ 380 por tonelada, na qual est instalada a
rea experimental. Os resultados esto apresentados na Tabela 7.
142
O VPL a diferena do valor presente das receitas menos o valor presente dos custos. Os tratamentos que apresentaram o VPL maior do que
zero foram economicamente viveis, sendo considerado o mais vivel aquele que apresentou maior VPL. Foi considerada uma taxa de desconto (i) de
6 % ao ano.
VPL = R(1 + i)j C(1 + i)j
Onde:
R = valor atual das receitas
C = valor atual dos custos
i = taxa de juros
j = perodo em que a receita ou o custo ocorrem
O ndice de relao benefcio custo foi obtido a partir da razo entre o
valor atual das receitas e o valor atual dos custos. O tratamento foi considerado economicamente vivel se o IBC for maior que 1.
IBC = R(1 + i)j / C(1 + i)j
O custo mdio de produo consistiu em dividir o valor atual do custo pela produo total equivalente. Para que o tratamento ou projeto seja
vivel, o valor do CMP deve estar abaixo do preo do briquete no mercado
(R$ 380 por tonelada).
CMP = CT(1 + i)j / PT(1 + i)j
Onde:
CT = custo total atualizado em cada perodo
PT = produo total equivalente em cada perodo que, neste trabalho,
foi considerada a produo de briquetes de madeira, 1,5 e 2,0 anos aps o
plantio. PT a quantidade produzida descontada pela taxa de juros.
Os espaamentos considerados adensados foram 2,8 x 0,5 m, 2,8 x 1,0 m
e 2,8 x 1,5 m, dentre os quais o maior VPL foi de R$ 2494.ha-1 obtido no 2,8
x 1,5 m no nvel 1 de adubao e considerando ciclo de corte de 2 anos (Tabela 6.7). O custo mdio de produo (CMP) deve ser menor que o preo de
venda praticado, que de R$ 380 por tonelada, o referido tratamento apresentou CMP de R$ 213 por tonelada. Outros tratamentos mais adensados,
EUCALIPTO ADENSADO
143
2,8 x 0,5 m e 2,8 x 1,0 m, podem ter seus custos amortizados por meio do
manejo de brotao, por exemplo, um ciclo de corte de 1,5 anos resultaria
em trs colheitas, sendo duas colheitas de biomassa resultante de brotao,
no perodo de 4,5 anos.
Tabela 6.7 Valor presente lquido, R$/ha (VPL), ndice de relao benefcio/custo (IBC) e custo
mdio de produo, R$/tonelada (CMP)
Espaamento (m)
2,8 x 0,5
2,8 x 1,0
2,8 x 1,5
2,8 x 2,0
2,8 x 2,5
Nvel de
Adubao
1,5 anos
VPL
2 anos
IBC
CMP
VPL
IBC
CMP
88
374
540
1,1
347
183
390
587
1,1
352
1190
0,9
431
1902
1,2
327
1539
1,4
265
833
1,3
301
1512
1,3
283
817
1,2
316
382
1,1
356
719
1,1
338
1668
1,6
236
2494
1,8
213
1732
1,5
251
1848
1,5
247
988
1,2
307
1721
1,4
275
1431
1,7
229
1886
1,8
213
1472
1,6
244
2500
1,8
212
969
1,3
292
1565
1,4
264
996
1,6
239
1755
1,8
206
1280
1,6
239
1776
1,7
220
1040
1,4
276
1858
1,6
240
Um experimento de florestas energticas em andamento, em Botucatu-SP, resultou em dados de biomassa da parte area em funo do espaamento, nveis de adubao e idade de corte, verifica-se na Tabela 6.8 que
h maiores porcentagens de madeira com casca em relao a biomassa seca
total nos plantios mais adensados (2,8 x 0,5m, 2,8 x 1,0 m e 2,8 x 1,5 m),
semelhante aos resultados alcanados por Leite e colaboradores (1997) na
Figura 6.2. Por outro lado, espaamentos tradicionais apresentaram porcentagem de galhos superior, o que evidencia haver mais resduos florestais
no ato da colheita.
144
Tabela 6.8 Distribuio da biomassa de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla aos 18 e 24

meses aps o plantio.
18 meses
24 meses
Espaamento Nvel de
(m)
adubao % galhos % folhas % mcc* % galhos % folhas % mcc*
2,8 x 0,5
2,8 x 1,0
2,8 x 1,5
2,8 x 2,0
2,8 x 2,5
18
73
16
76
16
77
17
74
19
73
14
81
16
10
74
20
12
68
20
71
29
11
60
17
73
20
11
69
22
10
67
19
12
69
20
10
70
24
11
65
20
11
69
25
12
64
25
12
63
25
14
61
26
11
63
21
12
67
21
12
67
25
14
61
27
14
59
23
14
62
21
13
66
22
14
64
21
13
66
24
15
61
Outros projetos florestais para fins energticos

Em experimento realizado em Santa Brbara, Minas Gerais, Leite e colaboradores (1997) avaliaram o efeito da densidade populacional sobre o
crescimento de Eucalyptus grandis. O experimento foi conduzido com espaamentos de 4 x 5m, 4 x 4m, 4 x 3m, 4 x 2m, 3 x 3m, 3 x 2m, 2 x 2m e 2 x
1m, sendo que a densidade populacional variou de 500 a 5000 plantas por
hectare. As avaliaes ocorreram aos 31 e 39 meses aps o plantio, sendo
que as diferenas em relao ao peso da biomassa das plantas podem ser
observadas no Grfico 6.5.
De acordo com esse grfico, nota-se que, com a reduo do espaamento
de plantio, foram obtidos valores superiores com relao ao peso da biomassa, sendo que o espaamento de 2 x 2 m apresentou o maior peso. Com
relao distribuio do peso dos componentes da planta, o espaamento
tambm foi um fator relevante, como visto no Grfico 6.6.
EUCALIPTO ADENSADO
145
Grfico 6.5 Peso seco (t/ha) da biomassa de Eucalyptus grandis aos 39 meses aps o plantio.
Os valores so a soma das massas de lenho, casca, galhos e folhas (adaptado de Leite et al., 1997).
Grfico 6.6 Distribuio da biomassa de Eucalyptus grandis aos 39 meses aps o plantio.
(adaptado de Leite et al., 1997).
Com isso, os autores concluram que os aumentos na densidade populacional proporcionaram incrementos de forma linear na produo de biomassa, por rea, de todos os componentes da parte area e redues no
crescimento individual das plantas (Leite et al., 1997).
Em experimento instalado em Itamarandiba-MG, utilizando um clone
hibrido oriundo do cruzamento de Eucalyptus grandis x Eucalyptus camaldulensis, Mller (2005) observou diferentes caractersticas da floresta aos
24 meses, em relao ao espaamento de plantio. Foram analisados os espaamentos de 3,0 x 0,5m, 3,0 x 1,0m, 3,0 x 1,5m, 3,0 x 2,0m e 3,0 x 3,0m.
Com relao ao DAP das plantas, o maior espaamento, apresentou
maior incremento mensal, como pode ser observado no Grfico 6.7.
146
Grfico 6.7 Incremento mdio mensal no DAP das plantas at os 24 meses aps o plantio
nos diferentes espaamentos (Mller, 2005).
Nesse mesmo experimento, com relao rea basal da floresta, os autores observaram diferente comportamento, como apresenta o Grfico 6.8.
Grfico 6.8 Crescimento na rea basal das plantas at os 24 meses aps o plantio nos diferentes espaamentos (Mller, 2005).
A curva de crescimento mais acentuada observada no espaamento

3 x 0,5m e a curva menos acentuada, no espaamento 3 x 3m. Esta tendncia se justifica em funo da maior competio entre as plantas nos espaamentos mais reduzidos, o que proporcionou maior incremento anual
(Mller, 2005).
Ainda, com relao a esse experimento, os autores observaram diferenas no volume e peso da biomassa seca, onde foi observada uma relao
direta com a densidade de plantio, ou seja, nos tratamentos com maiores
densidades de plantio foram observados os maiores volumes de madeira e
peso de biomassa seca, como apresentado nos Grficos 6.9 e 6.10.
EUCALIPTO ADENSADO
147
Grfico 6.9 Volume das plantas aos 24 meses aps o plantio nos diferentes espaamentos
(Mller, 2005).
Grfico 6.10 Peso da biomassa florestal aos 24 meses aps o plantio nos diferentes espaamentos (Mller, 2005).
Com o tempo, a quantidade de madeira estocada em um determinado

stio, tende a se igualar para os diferentes espaamentos, pois nos plantios
mais densos ocorre a estagnao do crescimento das plantas em idades mais
jovens e nos plantios com espaamentos mais amplos a estagnao do crescimento ocorre em idades mais avanadas. Esse fato pode ser muito importante do ponto de vista econmico, visto que possvel economizar no
custo de implantao e na colheita e transporte de madeira, nos espaamentos maiores (Mello et al., 1971; Resende et al., 1983; Klein; FreitaS, 1988;
148
Mora, 1986; Gorgulho et al., 1991; Ferreira et al., 1997; Lisita et al., 1997
citados por Mller, 2005).
A prtica de se plantar eucalipto adensado j realizada por algumas
usinas de cana-de-acar, onde a biomassa utilizada para a gerao de
energia eltrica nos meses em que no realizada a colheita da cana (fora
de safra).
O custo de implantao de florestas adensadas se difere de uma floresta tradicional apenas pelo aumento da quantidade de mudas por hectare,
sendo que, a maioria das prticas silviculturais no sofre alteraes no seu
valor.
As florestas energticas baseadas no sistema florestal de curta rotao,
no Brasil, provavelmente, podero ser conduzidas por pelo menos 2 ou 3
cortes, ou seja, uma ou duas rebrotas e, nesse caso, aumentar significativamente os ganhos e melhorar muito a rentabilidade do sistema.
Como exemplo de implantao bem sucedida de sistemas florestais de
curta rotao para fins energticos, pode-se citar o caso italiano com o manejo de florestas de Populus e Salix.
Florestas energticas de curta rotao na Itlia

Na Itlia, a produo de biomassa florestal muito importante no abastecimento de usinas termoeltricas e centrais de aquecimento, sejam elas
industriais ou residenciais. A dependncia de fontes de energia no renovvel, como petrleo e gs natural, fez com que o pas buscasse cada vez mais,
mudar as suas fontes de energia, devido grande dependncia econmica
de pases produtores de petrleo e pelas altas emisses de gases poluentes,
originadas de combustveis fsseis.
A proposta de se realizar estudos com reas florestais de curta rotao
(short rotation coppice SRC) teve incio ao norte da Itlia, na regio da
Lombardia e Veneto, h mais de 10 anos. Com a liberao de subsdios para
o estabelecimento e gesto desse sistema, em menos de cinco anos, 4.000 ha
foram implantados. Atualmente, conforme o anurio florestal da regio
da Lombardia, esta rea ultrapassa os 10.000 hectares.
As florestas de curta rotao italianas so, basicamente, do gnero Populus e Salix, pelo fato do conhecimento e familiaridade regional com as
EUCALIPTO ADENSADO
149
caractersticas e comportamento destas espcies, do domnio das tcnicas

de clonagem e por apresentarem bom desenvolvimento para o clima local.
Basicamente o sistema florestal de curta rotao italiano dividido em
trs tipos:
1) Sistema muito curto de rotao (very short rotation): a floresta colhida em intervalos de 1 ano. A densidade de plantio adotada de,
aproximadamente, de 10.000 plantas/ha e as estacas (plantio atravs
de propagao vegetativa) so plantadas em linhas duplas (Figura
6.5), com um espaamento de 2,0 a 2,8 m entre as duas fileiras, 0,7 a
1,0 m entre as fileiras, formando um par, e 0,45 a 0,60 m ao longo das
linhas entre as plantas. (Danfors et al., 1998). O dimetro do caule
das plantas na altura de corte atinge 2 a 3 cm no momento da colheita,
com picos de 6 a 8 cm.
Figura 6.5 Sistema muito curto de rotao (Foto: Gianni Picchi).
2) Sistema de curta rotao (short rotation): a colheita realizada com

intervalos de 2 a 3 anos. Nesse caso, as estacas so plantadas em fileiras simples, com um espaamento de 2,5 a 3,0 m entre as linhas
e 0,4 a 0,6 m ao longo das linhas, entre as plantas (Figura 6.6). Isso
resulta em uma densidade populacional de 6.000 a 7.000 plantas/ha
com dimetro do caule de 10 a 12 cm (dimetro na altura de corte).
150
Figura 6.6 Sistema de curta rotao (Foto: Gianni Picchi).
3) Sistema de mdia rotao (medium rotation): a colheita realizada em

intervalos de 5 a 6 anos. As estacas so plantadas em fileiras simples
(Figura 6.7), com um espaamento de 3 m entre as linhas e 2,0 a 2,5 m
ao longo das linhas, entre plantas (1.300 a 1.700 plantas/ha). O dimetro do caule (DAP), no momento da colheita, pode chegar a 15 cm.
Figura 6.7 Sistema de mdia rotao (Foto: Gianni Picchi).
A colheita florestal para esses tipos de conduo da floresta deve ser

realizada com mquinas adaptadas para cada uma destas condies. Para
cada sistema de manejo o corte diferente, como exemplificado nas figuras
6.8, 6.9 e 6.10.
EUCALIPTO ADENSADO
Figura 6.8 Sistema de muito curta e curta rotao.
Figura 6.9 Sistema de curta rotao.
151
152
Figura 6.10 Sistema de mdia rotao.
Nesse tipo de sistema, toda a produo florestal convertida em cavaco

(Figura 6.11) e direcionada para a produo de biomassa diretamente ou
processada na forma de briquetes ou pellets para melhorar suas caractersticas fsicas e energticas.
Figura 6.11 Descarregamento dos cavacos.
Equipamentos mecanizados para a colheita dos SFCR

O desenvolvimento de equipamentos para a colheita de florestas de
curta rotao comeou no incio da dcada de 1990, e tem produzido uma
srie de benefcios econmicos e ambientais para os pases que adotaram
esse novo conceito de produo florestal. Vrios projetos de construo de
EUCALIPTO ADENSADO
153
mquinas e colhedoras simplesmente no evoluram, acabando em poucos

anos, por diferentes motivos tcnicos, econmicos ou comercias. Em outros
casos, o trabalho de desenvolvimento intensivo em vrios pases europeus
(Alemanha, Itlia, Reino Unido e Sucia) e nos Estados Unidos, gerou algumas mquinas que esto trabalhando com sucesso e operam comercialmente nos pases citados.
Ao todo, foram projetadas, produzidas e testadas, at agora, mais de
trinta mquinas, muitas vezes, ainda somente disponveis como prottipos
ou verses no comerciais.
As mquinas que trabalham nas florestas de curta rotao podem e devem colher uma ou duas linhas de plantio ao mesmo tempo. Os sistemas
de corte e recolhimento bifilar linhas duplas - so geralmente projetados
para um espaamento de 75 cm a 100 cm, que foi desenvolvido para as condies de trabalho sueco, onde os plantios so realizados com linhas duplas
de 75 e 125 cm. Na Sucia, o espaamento duplo usado para melhorar a
interceptao da radiao solar e para facilitar a colheita mecanizada e, precisamente, permitir o corte simultneo de dois fustes. Esse sistema , agora,
to generalizado que pode ser chamado, por alguns de sistema europeu,
porque, na verdade - com distncias e objetivos um pouco diferente - amplamente utilizado na Alemanha, Reino Unido e Itlia.
Existem dois sistemas de colheita bem distintos, sendo que um fornece a
biomassa cortada, agrupada e picada em uma operao contnua, impedindo a separao dessas trs fases. Em geral, toda a operao realizada por
uma nica mquina, e o material transferido para as margens da estrada
j na forma de cavacos.
O outro sistema depende da separao das fases de corte, agrupamento e
triturao, que poder ser realizado com mquinas e momentos diferentes.
O primeiro sistema, normalmente, mais produtivo e mais simples em
termos de organizao, porm tem pouca flexibilidade e pode exigir equipamentos de grande porte. O segundo sistema mais flexvel, permite uma
utilizao parcial de equipamentos convencionais e permite que seja planejada a triturao, aguardando que a umidade dos fustes chegue a nveis
timos. H a possibilidade de deixar as plantas para secar por algumas semanas, o que passa a ser a vantagem mais interessante desse sistema, especialmente em climas midos.
Quanto forma organizacional, possvel individualizar quatro esquemas tpicos, com nveis crescentes de complexidade.
154
O primeiro sistema (01) inclui uma mquina de corte, triturao e extrao sobre a linha lateral ou traseira.
O segundo sistema (02) utiliza duas mquinas: uma que corta os fustes,
rene e extrai para linha lateral, enquanto o outra faz a triturao, podendo
ser, talvez, depois de algumas semanas.
O terceiro sistema (03), tambm, baseado em duas mquinas: a primeira corta os fustes e coloca em leiras, enquanto a segunda recolhe os fustes das leiras, pica e carrega o cavaco de madeira para fora talho.
Finalmente, o sistema 04, baseado em trs mquinas: usa uma mquina para cortar e agrupar os fustes, uma segunda mquina para recolher os
feixes e carreg-los fora do campo e uma terceira mquina para picar.
Portanto, a mquina inovadora sempre aquela que colhe, pica e remove o material, ou que os coloca em leiras. Os outros so equipamentos
convencionais, normalmente utilizados na silvicultura e, portanto, j amplamente disponveis.
As mquinas que realizam o corte e a triturao so muito potentes, com
motores entre 450 a 1100 cv e, muitas vezes, so baseadas em uma mquina
de colheita de forragens ou de cana-de-acar auto-propelidas adaptadas
ao processamento de madeira, transformando uma rvore em cavacos ou
lascas, de forma contnua.
Outro tipo de colhedora que pode ser encontrada so as colhedoras
acopladas aos tratores agrcolas no sistema de trs pontos e acionadas pela
tomada de potncia (TDP). As colhedoras acopladas aos tratores agrcolas
so mais baratas, entretanto no podem alcanar a produtividade operacional horria dos modelos auto-propelidos de colheita contnua.
A escolha entre estas opes depende da disponibilidade de recursos
e das caractersticas de campo (topografia, clima, solo) e no apenas dos
aspectos tcnicos da cultura. Onde existe uma boa rede de fornecedores,
fabricantes ou revendas de mquinas e peas, pode ser mais conveniente
o uso de equipamentos auto-propelidos; caso contrrio, melhor utilizar
equipamentos aplicveis a tratores agrcolas, deixando a cada produtor a
liberdade de gerir os seus recursos como lhe convm.
Como forma de ilustrar o grau de desenvolvimento da colheita mecanizada dos sistemas florestais de curta rotao, a Tabela 6.9, apresenta os
mais significativos prottipos e produtos avaliados, na ltima dcada, pelo
CNR IVALSA (Consiglio Nazionale delle Ricerche - Istituto per la Valorizzazione del Legno e delle Specie Arboree).
EUCALIPTO ADENSADO
155
Tabela 6.9 Colhedoras florestais e estgio de desenvolvimento

Modelo
Pas
(*)
Tipo
Produto
Primeira
apario
Estgio de
desenvolvimento
Mquinas para colheita

Saf-Isma
Arrasto
rvore inteira
1990
Terminado, em uso
Frbbesta
Arrasto
rvore inteira
1993
Terminado, em uso
Dansalix
Montada
toras empilhadadas
1993
Terminado, em uso
Berni
Montada
toras empilhadadas
1995
Projeto abandonado
Hvidsted
Auto-propelido
toras empilhadadas
1994
Terminado, em uso
Segersltt
Auto-propelido
toras empilhadadas
1994
Terminado, em uso
Rodster
Montada
toras empilhadadas
1997
Produto comercial
Loughry
RU
Montada
toras em feixe bundle
1992
Projeto abandonado
Montada
toras em feixe bundle
1998
Projeto abandonado
Bundler SM
ESM 901
Auto-propelido toras em feixe bundle
1992
Projeto abandonado
HS Locust
Auto-propelido toras em feixe bundle
2001
Em desenvolvimento
Mquinas para colheita e triturao Sistema de 3 pontos (Montada)

Diemelstadt
Arrasto
Lascas
1994
Projeto abandonado
LWF
Arrasto
Lascas
2002
Em desenvolvimento
ATB-Potsdam
Arrasto
Lascas
2006
Em desenvolvimento
Isma Tanesini
Arrasto
Cavaco
1997
Projeto abandonado
Bodini
Arrasto
Cavaco
2002
Projeto abandonado
Bender SM
Si
Arrasto
Cavaco
1992
Comercial
Gandini Bio93
Arrasto
Cavaco
1993
Projeto abandonado
Pallari
Arrasto
Cavaco
1987
Projeto abandonado
Spapperi
Arrasto
Cavaco
2004
Comercial
Spapperi
Arrasto
Lascas
2006
Em desenvolvimento
Arrasto
Lascas
2005
Em desenvolvimento
Optigep
Mquinas para colheita e triturao Sistema Autopropelido

MBB Biber
JD-Kemper
Austoft 7700
Auto-propelido
RU Auto-propelido
S
Auto-propelido
Cavaco
1994
Projeto abandonado
Cavaco
1995
Projeto abandonado
Cavaco/Lascas
1993
Comercial
Claas HS-1
A-S Auto-propelido
Cavaco
1993
Comercial
CRL
RU Auto-propelido
Cavaco
1999
Comercial
Claas HS-2
A-S Auto-propelido
Cavaco
2001
Comercial
Claas GBE
A-I Auto-propelido
Cavaco
2004
Comercial
Krone
Auto-propelido
Cavaco
2007
Comercial
NH FR 130B
Auto-propelido
Cavaco
2008
Comercial
(*) A Alemanha; B Blgica, D Dinamarca, F Finlndia, H Hungria, I Itlia, RU Reino

Unido, S Sucia, Si Sua
156
Em alguns casos, a mquina descrita na tabela realmente o expoente

de uma gerao inteira de equipamentos similares produzidos em verses
diferentes, dependendo do estgio de desenvolvimento de projeto especfico e, muitas vezes, ainda disponvel em vrias verses.
Esse o caso da colhedora de forragens autopropelida fabricada pela
Claas, produzido em, pelo menos, cinco verses diferentes (modelo Jaguar
695, 840, 860, 880 e 900) e que permite a utilizao de diversos cabealhos
de colheita florestal, tais como: dois modelos alemes (HS1 e HS2), um modelo francs (Cemagref) e dois modelos italianos (GBE e Veneta Maiz)
Colhedora para corte contnuo de floresta no Brasil

No Brasil, a pesquisa e desenvolvimento de colhedoras auto-propelidas
para os sistemas florestais de curta rotao uma novidade e, est se iniciando atravs de uma parceria entre a New Holland (CNH) e a Faculdade
de Cincias Agronmicas da Unesp, campus de Botucatu/SP.
Figura 6.12 Colhedora New Holland FR 9060 Coppice Header 130 FB em operao na
Europa.
EUCALIPTO ADENSADO
157
Esse projeto cooperativo est sendo executado pela FCA/Unesp, atravs do NEMPA (Ncleo de Ensaio de Mquinas e Pneus Agroflorestais),
que responsvel pela conduo do projeto de avaliao do desempenho
operacional de uma colhedora florestal New Holland FR 9060 Coppice
Header 130 FB (Figura 6.12) projetada para colher de forma contnua
toda a biomassa de sistemas florestais de curta rotao (SFCR), avaliando
os parmetros operacionais, econmicos e ambientais desse novo e revolucionrio sistema de produo. O projeto, com durao prevista de trs
anos, tem por objetivo determinar a viabilidade operacional e econmica
desta colhedora, as necessidades de manuteno e a adaptao aos SFCR
nacional.
Produtividade e custos das colhedoras

de corte contnuo de floresta
Atualmente, existem dados confiveis sobre a produtividade da colheita
de muitas das mquinas listadas na Tabela 1. Em geral, os dados disponveis hoje indicam uma relao diretamente proporcional entre a produtividade da mquina, sua potncia e a densidade de biomassa por hectare.
Entre as mquinas que executam o corte, recolhimento e triturao, as
colhedoras de forragens auto-propelidas, adaptadas com cabeotes florestais (sistema industrial), so as mais eficientes que os equipamentos acoplados em tratores agrcolas ou de arrasto (sistema semi-industrial), especialmente porque elas tm uma potncia adequada para uso industrial.
Em um talho com conduo bem planejada, considerando o sistema de
colheita mecanizado, pode-se esperar uma capacidade operacional de mais
de 40 toneladas de cavaco de madeira por hectare (base mida).
O custo horrio desse sistema de colheita e transporte, composto por
uma colhedora de forragens adaptada a colheita florestal mais trs tratores
de apoio para transporte dos cavacos, deve atingir valores de at 500/hora
(quinhentos euros por hora ou, aproximadamente R$ 1.200,00/hora). Nesse
cenrio, a operao destas mquinas apresenta um custo 12,5 por tonelada
de cavaco (doze euros e cinquenta centavos por tonelada ou, aproximadamente R$ 30,00 por tonelada).
Para os equipamentos acoplados (montados) no trator agrcola ou de
arrasto, que apresentam um custo muito mais baixo de aquisio e de ope-
158
rao, pode ser estimado um valor ao redor cerca de 250/hora (duzentos

e trinta euros por hora ou, aproximadamente R$ 600,00/hora), incluindo
dois tratores de apoio para receber os cavacos. No entanto, a produtividade
muito mais modesta e no chega a 10 toneladas de cavaco (base mida)
por hora de trabalho.
O centro de pesquisa italiano CNR Ivalsa avaliou e analisou todas as
mquinas descritas e, pode concluir que, o custo de colheita e transporte com
um sistema semi-industrial custa 25/tonelada (vinte e cinco euros por tonelada ou, aproximadamente R$ 60,00/tonelada), ou seja, quase 13/tonelada (treze euros por tonelada ou, aproximadamente R$ 31,00) a mais do que
com uma colhedora autopropelida.
Desta forma, para que o sistema florestal de curta rotao seja vivel
economicamente, o plantio deve apresentar alto rendimento por hectare e a
colheita deve ser realizada de forma contnua. No entanto, necessrio que
o dimetro das rvores, na altura de corte, seja proporcional capacidade
de cada equipamento.
Sistemas de aquecimento domstico

ou centrais de aquecimento
O consumo de bioenergia est crescendo de maneira consistente na Europa, tanto para gerao de eletricidade como para o aquecimento da gua
ou para centrais de energia. Esse mercado de biomassa, que era puramente
regional, se tornou uma oportunidade de negcios internacional, segundo
a APC (2006), e o desenvolvimento desse mercado deve incorporar novas
polticas energticas, agrcolas, florestais e industriais em todo o mundo.
Diversos pases europeus, tais como, Sua, Alemanha, Frana, ustria e os pases nrdicos utilizam e incentivam, financeiramente, atravs de
programas de fomento e leis, a aquisio e a troca por equipamentos mais
modernos, dos sistemas de aquecimento domstico como fonte de energia limpa, eficiente e segura. A Blgica , segundo Verma e colaboradores
(2009), o pas mais ativo na utilizao de biomassa como fonte de energia
para aquecimento, com 83,5 MW consumidas em 2007. Um estudo tcnico-econmico realizado por Chau e colaboradores (2009) demonstrou que
EUCALIPTO ADENSADO
159
a instalao de aquecedores base de resduos madeireiros ou pellets para

aquecimento de estufas agrcolas, gerando de 40% a 60% da demanda de
calor, se torna mais econmico quando comparado a um aquecedor a gs
natural funcionando a plena carga.
A utilizao da biomassa florestal como combustvel para gerao de
energia ou calor uma cincia bastante complexa e, suas propriedades
fsicas e qumicas, principalmente, o tamanho do cavaco, influenciam diretamente nas caractersticas da queima, de uma forma muito complexa,
conforme relatado por Molcan e colaboradores (2009) e Lu e colaboradores
(2010)
Consideraes finais
Dada a baixa utilizao da biomassa florestal na matriz energtica brasileira, o plantio adensado de eucalipto para a gerao de energia torna-se
uma nova realidade, sendo que algumas empresas j esto adotando esta
prtica para complementar suas demandas energticas.
A tcnica de adensamento dos plantios com eucalipto recente e est
sendo difundida devido os resultados de pesquisas e as avaliaes de campo
realizados por diversas instituies, pesquisadores e empresas. A tendncia
de adensamento dos plantios de eucalipto para produo de biomassa reforada pelo fato da necessidade de reduo do ciclo da cultura, resultando
em ganhos de produtividade, tempo e custo com o manejo florestal.
Em alguns pases como, por exemplo, a Itlia, a tcnica de adensamento
florestal vem sendo utilizada com sucesso para outras espcies florestais,
sendo uma interessante estratgia econmica para a reduo da dependncia energtica do pas com relao a fontes fsseis importadas.
O Brasil, por sua vez, necessita de grandes investimentos em pesquisa
na rea de aproveitamento energtico de biomassa, atravs da utilizao de
tcnicas sustentveis para gerao e cogerao de energia limpa e renovvel.
Dada a complexidade ambiental, social e econmica para a implementao
do sistemas florestais de curta rotao, necessrio o aprimoramento de
diversos setores de sua cadeia florestal, desde o melhoramento gentico,
prticas silviculturais, at os sistemas de corte, transporte e beneficiamento
da biomassa.
160
muito provvel que o Sistema Florestal de Curta Rotao com fins

energticos venham a ser, em pouco tempo, mais uma grande opo brasileira para produo de energia limpa e renovvel!
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Parte II
Produo de biocombustveis
7
A complexidade da produo
do bioetanol em fermentaes abertas
de matrias-primas industriais
Ceclia Laluce, Elson Longo,
Sandra Regina Pombeiro-Sponchiado, Eduardo Maffud Cilli,
Jessica C. Medina Gallardo, Maria Olivia Campos Masiero
Introduo
A levedura Saccharomyces cerevisiae o eucarioto mais conhecido em
funo de sua importncia histrica, sendo o principal agente responsvel
pela fabricao de pes, bebidas e, recentemente, usado para produo de
etanol combustvel. As razes do uso amplo e diversificado dessa levedura
so crescimento rpido, facilidade de manipulao gentica, literatura vasta
e diversificada, disponibilidade de banco de dados cinticos e de sequncias
gnicas. O genoma da S. cerevisiae foi o primeiro a ser completamente sequenciado e contm um total de 12.052 megabases (Mb) distribudos em 16
cromossomos. Mais de 80% deste genoma (cerca de 5.780 genes) encontra-se anotado em bancos de dados internacionais e contribui com informaes
valiosas, tais como microarranjos (microarrays), transcriptoma (expresso
gnica) e genoma funcional (genome-wide function).
A levedura S. cerevisiae utiliza um grande nmero de fontes de carbono para crescer, sendo a glicose (hexose) sua fonte de carbono preferencial.
A utilizao de pentoses (como a xilose) limitada pelo fato de os genes
relacionados com a utilizao destes acares no serem suficientemente
expressos em Saccharomyces cerevisiae (Young et al., 2010). A utilizao de
polissacardeos (amido ou a lignocelulose da parede das clulas vegetais)
pela levedura S. cerevisiae depende da secreo de enzimas como amilases
166
PRODUO DE BIOCOMBUSTVEIS
e hemicelulases, as quais so usualmente produzidas por bactrias e outros

fungos. A biologia molecular tem obtido grande sucesso com a expresso
heterloga de enzimas envolvidas na utilizao de hidrolisados do material
lignocelulsico pela levedura S. cerevisiae. Enzimas da via das pentoses de
outros microrganismos tambm j foram clonadas na levedura Saccharomyces cerevisiae (Bettiga et al., 2008; Bettiga et al., 2009).
A utilizao de uma fonte de carbono rigorosamente regulada e depende da disponibilidade de oxignio molecular no meio. Apesar de possuir
um metabolismo facultativo, a levedura Saccharomyces cerevisiae prefere
obter energia por meio da atividade de fermentao, mesmo em presena
de oxignio (efeito Crabtree). Por outro lado, o etanol consumido por
meio de metabolismo oxidativo (respirao) com formao de biomassa.
O crescimento aerbico (metabolismo oxidativo dependente de oxignio)
favorecido durante o cultivo em quimiostato quando a concentrao de
glicose for baixa (Fiechter; Von Meyenburg, 1968). Assim, o metabolismo
respiratrio predomina em vazes baixas de alimentao. Em meios contendo concentraes altas de glicose, ocorre a represso catablica de diversos genes, que causa alteraes na concentrao intracelular de metabolitos,
modificao na secreo de enzimas e estabilidade dos RNAs mensageiros
(Gancedo, 2008).
Para que se possa entender, controlar e introduzir melhorias na produo de etanol imprescindvel um conhecimento biotecnolgico bastante
amplo e diversificado em relao aos seguintes aspectos:
metabolismo das leveduras;

taxonomia e microbiologia;
identificao de contaminantes microbianos;
controle de contaminantes durante as fermentaes e,
conhecimento sobre a tecnologia das fermentaes.
Nas fermentaes industriais, nas quais os meios no so esterilizados,

as leveduras e contaminantes (bactrias e leveduras selvagens) competem
entre si por nutrientes, sendo que a dominncia e permanncia de um determinado microrganismo no processo dependem de seu grau de crescimento,
das interaes entre os diferentes subprodutos do metabolismo e dos diversos tipos de levedura e contaminantes presentes. A superioridade quanto
A COMPLEXIDADE DA PRODUO DO BIOETANOL EM FERMENTAES ABERTAS...
167
a atividade de crescimento fator determinante para a dominncia da(s)

linhagem(ns) de levedura no processo.
O sucesso da implantao do processo industrial indicado pela manuteno da viabilidade celular e das atividades tanto de fermentao quanto
de crescimento e depende tambm da propagao do inculo e de sua atividade fisiolgica, do nmero de leveduras industriais utilizadas como inculo, da temperatura do meio de fermentao e, por fim, do monitoramento
adequado do processo. A toxidade da matria-prima e a competio entre
as leveduras da biota natural afetam a viabilidade celular, a capacidade de
multiplicao e a produo de etanol.
O uso de leveduras selecionadas e variaes na

populao de clulas ao longo da fermentao
A produo de etanol em nosso pas teve incio com o uso de leveduras
de panificao como inculo. No entanto, os avanos na produo de etanol combustvel foram alcanados com base nos estudos e prticas bem-sucedidas na fabricao de bebidas, sobretudo na produo de vinhos.
A maioria das leveduras comerciais destinadas fabricao de vinhos
apresenta as seguintes caractersticas: desempenho fermentativo, tolerncia ao etanol produzido, nveis reduzidos de metabolitos indesejveis e aumento nos nveis dos metabolitos desejados (Cordero-Bueso et al., 2011).
Uma grande variedade de linhagens de leveduras melhoradas, resultantes
do uso de tcnicas da engenharia gentica, est disponvel para utilizao
industrial, desde que o produtor vislumbre lucros sem nenhum impacto
negativo sobre o ambiente e consumo de produtos por humanos (fonte de
vitaminas) e animais (rao).
Leveduras secas ativas

Atualmente, a maioria das vincolas utiliza leveduras secas ativas que
permitem fermentaes rpidas e reduzem os riscos de ocorrncia de fermentaes lentas (sluggish fermentation) ou interrupo do processo (stuck
fermentation). A dificuldade da implantao de uma levedura seca ativa em
um processo tem sido atribuda etapa de secagem e a longos perodos de
168
reidratao (Henschke, 1991). O tempo necessrio para o incio da fermentao ou partida do processo depender da viabilidade celular e outros fatores, tais como as condies de estocagem do fermento, o estgio da reidratao e caractersticas do mosto (ibidem). Aps os estgios da reidratao
e propagao, nos quais a levedura seca ativa suposta a se recuperar das
perdas ocorridas durante o processo de secagem, fundamental que as clulas reidratadas sejam capazes de fermentar eficientemente.
Leveduras selecionadas para a produo de etanol

combustvel
A partir da dcada de 1990, as destilarias brasileiras passaram a utilizar
linhagens de levedura S. cerevisiae selecionadas entre os isolados, obtidas
ao longo do processo fermentativo. A primeira levedura a ser usada industrialmente como starter foi a linhagem IZ-1904, do Departamento de Biologia da Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz (Esalq/USP),
em Piracicaba (SP).
Um dos primeiros trabalhos exaustivos de isolamento e construo
de linhagens de leveduras utilizando isolados de destilarias foi realizado
em nosso laboratrio nos perodos de 1985 a 1987 (Fundo de Incentivo
Pesquisa Tcnico-Cientfica do Banco do Brasil, Convnio Unesp/Fipec n.1/1377-4) e de 1989 a 1992 (Fundao Banco do Brasil, Convnio
Unesp-FBB n.10/1078-2). Embora o repasse dessas leveduras para a escala
industrial de produo de etanol no tenha ocorrido por falta de interesse
do setor alcooleiro na poca, vrias publicaes resultaram desses trabalhos (Peres et al., 2001; Sousa et al., 2001). Por fim, estas leveduras foram
avaliadas, quanto ao uso em panificao graas ao interesse da produtora de
fermentos Produtos Alimentcios Fleischmann & Royal Ltda.. Leveduras capazes de fermentar dextrina com alto rendimento alcolico e secretar
enzimas com atividade amiloltica tambm foram obtidas (Laluce et al.,
1988) e algumas das leveduras isoladas tambm mostraram alta capacidade
de flotao (Sousa et al., 2001). As leveduras que apresentaram o fenmeno
da flotao mostraram grande atividade fermentativa e suas clulas permaneceram dispersas no meio at o final da produo de etanol. Estas clulas
dispersas no meio de cultivo s foram posteriormente separadas por meio
da injeo de ar na cultura (Palmieri et al.,1996).
169
Outros pesquisadores tambm realizaram trabalhos sobre o isolamento de leveduras e muitas delas tm se mostrado boas leveduras starters no
processo de fermentao do melao ou xarope. Linhagens de leveduras
de diferentes origens (linhagens TA, BG1, CR1, SA1, M26, Y-904, PE2, PE-5, VR-1. BR-1, BR-2, ME-2, VR-2, MA-3, MA-4, CAT-1 CB-1,
NR-1,BT-1, AL-1) foram avaliadas quanto a permanncia (% ou proporo da levedura starter com menor capacidade de competir frente s leveduras selvagens no final da safra de produo de etanol) e prevalncia
ou dominncia (% ou proporo da levedura starter com maior capacidade de competir frente s outras leveduras) em escala industrial, sendo
que a linhagem PE-2 se destacou pelos resultados quanto permanncia
(58% 4,1) e a prevalncia (54% 5,2) no processo (Basso et al., 2008).
A levedura BG-1 apresenta uma prevalncia maior (65% 4,8), mas a sua
permanncia menor (42% 5,1). Por outro lado, a linhagem BG-1 requer mecanismos que reduzem a assimilao de acares quando a temperatura se eleva, evitando perdas em viabilidade (Souza et al., 2007b).
Desta forma, os requisitos de uma boa linhagem industrial para a produo de etanol combustvel so um bom desempenho fermentativo, a manuteno de alta viabilidade, a produo de nveis reduzidos de glicerol
externo e espuma durante ciclos sucessivos de fermentao (Basso et al.,
2008).
Uso de mais de uma levedura como inculo

H controvrsias quanto s vantagens do uso de mais de uma linhagem
de levedura na partida de um processo ou mesmo quando inoculadas em
sequncia durante a fermentao. Experincias tm mostrado que o uso de
leveduras comerciais selecionadas no garante a uniformidade do produto
final (por exemplo, manuteno de sabor e aroma em vinhos) e tambm no
assegura a implantao destas leveduras no processo (Capece et al., 2010).
Em algumas amostras de mosto de uva, estes mesmos autores observaram
que o grau de implantao de duas linhagens selecionadas foi baixo. Isso foi
atribudo a diferenas na capacidade de essas leveduras tornarem-se dominantes na microflora presente no mosto, bem como as flutuaes na diversidade dos contaminantes ao longo do processo.
170
Permanncia e prevalncia de leveduras em um processo

Alguns fatores determinantes da sobrevivncia e predominncia de uma
levedura no incio do processo de fermentao so os seguintes (Barrajn et
al., 2010):
disponibilidade de hidratos de carbono de reserva;

disponibilidade e tipos de fonte de nitrognio;
nvel de leveduras selvagens; e
quantidade da levedura starter utilizada como inculo.
Os teores de trealose indicam o grau de robustez dos inculos. Apesar

da quantidade alta da trealose intracelular das leveduras comerciais, h evidncias de que estas podem apresentar um grau menor de vitalidade (atividade biolgica) no processo e menor grau de implantao (ibidem). Segundo estes autores, a exigncia por aminocidos depende da linhagem de
levedura. Em geral, as leveduras comerciais consomem mais aminocidos
que leveduras recm-propagadas ou selvagens.
O grau de dominncia das leveduras inoculadas depende das condies do processo (variveis fsicas do ambiente e/ou estado nutricional da
matria-prima). A ideia de que a dominncia de uma levedura selvagem
diminui medida que a levedura starter passa a dominar no processo
tambm controversa. O meio diferencial WLN (Wallerstein Laboratories
Nutrient Agar) o mais utilizado para monitorar as variaes que ocorrem na populao de leveduras durante o processo de fermentao, tanto
em fabricao de bebidas (Powell; Diacetis, 2007) quanto em fabricao de
etanol combustvel. A persistncia das leveduras starters selecionadas para
partida de um processo de fermentao (detectada pela anlise dos perfis
cromossmicos e/ou anlise do mtDNA) e a influncia dessas leveduras
sobre a conduo da fermentao tem sido bastante estudada na fabricao de vinhos (Querol et al.,1992; Cordero-Bueso et al., 2011). Em alguns
casos, linhagens de Saccharomyces cerevisiae no so capazes de competir com sucesso frente s leveduras selvagens do mosto de vinho e, assim,
no podem se tornar dominantes em uma populao de leveduras (Querol et al., 1992). Nas fermentaes espontneas, a dominncia da levedura
Saccharomyces cerevisiae na populao varia com a vincola (Santamara et
al., 2005).
171
Dinmica populacional
Independentemente do inculo ou starters usados, outras leveduras
podem se originar de espcies contaminantes presentes no processo de
fermentao, como indicado pela diversidade das linhagens de leveduras
identificadas durante a fermentao de mostos de vinho (Fleet, 2008). Esta
diversidade representa um desafio para a conduo e controle de um processo industrial. A adaptao evolutiva um fator determinante no aparecimento de leveduras diferentes durante o processo de fermentao. Mutantes isolados de mosto de uva mostram alteraes na excreo de metabolitos
secundrios aps 350 geraes (McBryde et al., 2006).
Mudanas ambientais podem reduzir grupos de leveduras em uma populao mista e isso parece acontecer sempre que as velocidades das mudanas
ambientais excedem a capacidade de populaes diferentes persistirem e/
ou manterem graus significativos de dominncia durante o processo (Bell;
Gonzales, 2011). As mutaes dependem do tipo e grau de estresse, bem
como do grau de adaptao das clulas de leveduras. Parece que a evoluo
dinmica afeta tanto a persistncia quanto a diversidade de espcies que
surgem em ambientes desfavorveis. Em condies de estresse, mutaes
benficas podem ocorrer para minimizar os efeitos das condies adversas
do ambiente (ibidem). Usando-se a tcnica do PCR-fingerprinting, isolados
obtidos durante a operao do processo, ao longo de meses de fermentao
do melao, foram identificados como variantes genticos que dominaram
a populao de leveduras por terem adquirido um nvel mais elevado de
adaptao ao processo (Da Silva Filho et al., 2005).
A teoria da renovao genmica foi proposta para explicar os aumentos na diversidade de linhagens de levedura que surgem durante o processo
de fermentao, sendo estes aumentos atribudos evoluo dinmica da
populao de leveduras. A diversidade populacional depende da proporo dos microrganismos, da converso de heterozigoto em homozigoto e da
formao de haploides que do origem a hbridos intra- e interespecficos
(Mortimer, 2000). Uma levedura hbrida foi inoculada em um fermentador
contnuo de cinco estgios operando em temperaturas crescentes (Souza
et al., 2007a). Os seguintes tipos de isolados foram obtidos deste sistema
quando o mesmo encontrava-se em operao na faixa de 39C a 47C:
172
isolados haploides com ou sem marcas de auxotrofia da levedura starter ou marcas de auxotrofia novas;
isolados, mostrando reaes de cruzamento positivas ou negativas
(mating type), com ou sem marcas de auxotrofia da levedura hbrida
usada como inculo. As caractersticas genticas destes isolados indicam a ocorrncia da renovao genmica induzida por temperaturas
altas neste tipo de sistema de fermentao. Por outro lado, a utilizao de uma levedura, cujo carter killer foi codificado por dois genes
dominantes localizados em cromossomos diferentes, foi usada como
starter e dominou no mosto de uva at o final da fermentao (Goto et
al., 1992).
Populaes microbianas diferentes desenvolvem-se ao longo de fermentaes abertas industriais. Os mtodos moleculares de acompanhamento
da dinmica populacional so dispendiosos, requerem tempos longos e
tcnicos especializados, mesmo quando a tcnica da PFGE (Pulsed Field
Gel Electrophoresis) usada (Ivey; Phister, 2011). Os mtodos moleculares
diretos (anlise dos cidos nucleicos totais das amostras) so recomendados
para identificao do perfil das populaes mistas. No entanto, as tcnicas
diretas so mais rpidas e podem identificar organismos em nvel de gnero
e, eventualmente, em nvel de espcie (ibidem). Os mtodos diretos (identificao de colnias isoladas) parecem interessantes para a identificao de
espcies de leveduras em populaes mistas.
Os estados fisiolgicos e a atividade fermentativa

das leveduras
O conceito de estado fisiolgico em fermentao foi definido por Konstantinov e Yoshida (1989), como uma caracterstica fisiolgica de uma
populao de clulas decorrente de mudanas ocorridas nas condies de
cultivo. Em cultivos em batelada ou contnuos, o estado fisiolgico da populao de clulas no uma caracterstica constante e deve refletir mudanas esperadas e no esperadas no comportamento da planta industrial,
tal que pequenas alteraes na estratgia do processo possam contornar os
eventuais problemas. A caracterizao do estado fisiolgico das clulas dos
microrganismos deveria ser mais bem explorada em biotecnologia, uma vez
173
que a velocidade e eficincia dos processos dependem do estado fisiolgico

das clulas. Variveis intracelulares como concentraes de NADH, ATP,
nvel de enzimas chaves das vias metablicas e metabolitos esto relacionados com as atividades de crescimento e formao de produtos e poderiam
ser usados como indicadores de estados fisiolgicos. Dessa forma, medidas
desses indicadores poderiam ser usadas como uma forma de diagnstico
sobre o andamento do processo, tal que aes preventivas pudessem ser tomadas para evitar perdas durante o processo de produo do etanol.
As oscilaes em estados fisiolgicos das clulas

Durante fermentaes destinadas produo de etanol combustvel em
bateladas alimentadas sucessivas, a levedura fica exposta a estresses sucessivos diversos, sobretudo em escala industrial. Assim, o estado fisiolgico
do fermento varia entre ciclos de fermentao. A levedura tambm fica
exposta a estresses durante as paradas do processo que ocorrem nas destilarias, sobretudo por problemas relacionados com o corte e transporte da
cana-de-acar em perodos de chuva contnua. desejvel que o estado
fisiolgico das clulas possa ser mantido de forma econmica e eficiente.
Para tal, necessrio que se disponha de mtodos de avaliao da vitalidade ou atividade metablica antes do uso do fermento, bem como definir
formas de condicionar o fermento, tal que as clulas possam desenvolver
resistncia a essas formas de estresses. Diversos eventos ocorrem durante
a interrupo da atividade fermentativa, causando as seguintes alteraes
(Gabier et al., 2005):
na capacidade de cultivo (cultivability);
na viabilidade (indicativa da capacidade de reoxidar o NADH) que
diminui, embora lentamente, com as perdas em trealose;
a vitalidade ou a atividade metablica reduz a capacidade de crescimento e o teor de trealose;;
no potencial de membrana, pois a despolarizao da membrana causa
quedas no pH intracelular e prejuzo no cultivo das clulas;
no pH intracelular;
na quantidade de produtos inibitrios produzidos (por exemplo, etanol, acetaldedo, cido actico);
no estgio das clulas no ciclo de diviso celular.
174
Clulas de levedura em fase lag ou estacionria apresentam limitaes

quanto ao crescimento, enquanto que em fase logartmica a predominncia
das atividades de crescimento ou fermentao depende da densidade das
clulas no processo e da aerao (efeitos Pasteur e Crabtree).
Estgio das clulas da levedura no ciclo de diviso celular

e atividade de crescimento
As caractersticas das clulas variam com o estgio do ciclo de diviso
celular. Parte das clulas da populao de leveduras pode no apresentar
brotos em fase logartmica. Na ausncia de brotos, as clulas apresentam
maiores resistncias ao choque trmico, nveis de transcrio e traduo reduzidos e maior resistncia a diversos estresses (Plesset et al., 1987).
Muitos microrganismos sobrevivem em fase estacionria induzida por
ambientes pobres em nutrientes. Conforme j descrito (Werner-Washburne et al., 1993), clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae em fase estacionria so fisiolgica e bioquimicamente distintas de clulas em fase
exponencial. Na fase estacionria, a parede celular torna-se mais rgida,
menos porosa, enquanto as mitocndrias esto em maior nmero e so mais
arredondadas. Ao aproximarem-se da fase estacionria, as clulas passam
a sintetizar proteases (Jones, 1984) que se acumulam em vrias incluses
celulares, enquanto carboidratos de reserva, como glicognio e trealose, se
acumulam no citoplasma. Outra caracterstica das clulas em fase estacionria consiste na capacidade de estas sobreviverem por longos perodos em
gua sem adio de nutriente. A fase estacionria caracterizada por diminuio da velocidade de crescimento e diminuio progressiva na sntese de
protenas (diminuio de at 95%), bem como acmulo de RNAs (Boucherie, 1985) e, por fim, o ciclo celular totalmente interrompido.
O crescimento afetado por condies de operao do processo (temperatura, pH) e por propriedades intrnsecas, tais como o tipo de linhagem,
meio de cultura, estado fisiolgico do inculo e design do processo. Os parmetros relacionados com as diferenas em estado fisiolgico do inculo
so independentes do tipo de linhagem e meios de cultura utilizados (Di
Serio et al., 2003). O aumento do volume das clulas e a proliferao so
processos altamente regulados, e perdas em atividade de regulao causam
a inviabilidade celular (Granot; Snyder, 1991).
175
O controle da atividade da levedura (crescimento e fermentao em produo de etanol combustvel) e sua viabilidade so parmetros crticos na
otimizao de um processo industrial. Os microrganismos adaptam-se aos
diversos ambientes para sobreviver e multiplicar-se. No entanto, poucos
estudos descrevem a adaptao da levedura ou recuperao da atividade
fermentativa e crescimento frente a estresses fsicos e qumicos durante a
fermentao (Sanchez-Gonzales et al., 2009).
Variaes em sntese de protenas

A sntese de protena ocorre durante o ciclo de diviso celular e crescimento das clulas filhas ou brotos. Na fase lag, o metabolismo celular est
ativado para a progresso no ciclo, passando pelas fases S e G2, fase mittica
e, por fim, a formao da clula broto. A velocidade de sntese de protenas
aumenta muito rapidamente (20 minutos) quando as clulas do Saccharomyces cerevisiae esto em fase lag (Brejning; Jespersen, 2002). Neste perodo de sntese intensa de protenas, os brotos so liberados das clulas. Como
descrito por esses autores, a velocidade de sntese de protenas tambm aumenta quando as clulas so transferidas de um meio pobre para um meio
rico, sendo isso acompanhado por aumento das protenas totais, sobretudo
as protenas ribossomais. O acompanhamento da expresso de protenas induzidas na fase lag poderia ser til no controle e otimizao de fermentaes
industriais.
Variaes em nveis de trealose

Glicognio e trealose esto relacionados com o aumento da viabilidade
e vitalidade por serem fontes intracelulares de energia. A manuteno de
funes celulares essenciais e a sobrevivncia das clulas durante a estocagem dependem do nvel de trealose interna (Franois; Parrou, 2001).
A perda de viabilidade est relacionada com o decrscimo da reserva de
carboidratos das clulas, e a queda em teores de trealose induz deteriorao
no processo de polarizao da membrana. Estudos anteriores mostraram
que a reteno de um nvel alto de trealose durante a fermentao no evita
as perdas na capacidade fermentativa, quando a levedura utilizada para
176
fermentar massas congeladas de pes. Isso indica que o incio da fermentao desencadeia uma rpida mobilizao da trealose com consequente
diminuio da resistncia a estresses, mesmo quando os teores iniciais
de trealose so altos (Van Dijck et al.,1995). Quando as clulas perdem a
polaridade, o pH interno cai e a viabilidade diminui lentamente (Gabier
et al., 2005). A trealose tambm atua como um protetor contra o estresse
oxidativo produzido durante o processo fermentativo (Saharan; Sharma,
2010). A mobilizao da trealose observada quando as clulas em fase estacionria passam a se multiplicar com mudanas na atividade das enzimas
essenciais, tais como glutationa redutase que est envolvida com a sobrevivncia e recuperao das clulas frente a estresses (Sebollela et al., 2004).
A atividade destas enzimas praticamente abolida a 40C, uma temperatura que induz resposta fisiolgica para acmulo de trealose. A inibio
da glutationa redutase pela trealose aumenta em presena de etanol, indicando que a atividade enzimtica drasticamente afetada pelo etanol. A
inibio enzimtica pode ocorrer mesmo aps um estresse, caso a trealose
acumulada no seja prontamente degradada (ibidem). Um estudo recente mostrou que as leveduras selvagens acumulam menos trealose do que
as comerciais (Barrajn et al., 2011).
Variaes em nveis de glicerol

O glicerol sintetizado em resposta a diversas situaes de estresse. A
sntese do glicerol depende de vrios fatores, tais como a linhagem selecionada, quantidades de clulas no inculo, concentrao de ons bissulfito
presente no mosto, concentrao de acares, estresse osmtico, tipo de
fonte de nitrognio e sua concentrao, pH e condies de aerao (Ough et
al., 1972; Gardner et al., 1993; Albers et al., 1996; Ribreau-Gayon et al.,
2000; Carrasco et al., 2001; Torija et al., 2002). No entanto, quantidades
pequenas de dixido de enxofre ou SO2 (100 ppm) diminuem significativamente a sntese de glicerol (Rankine; Bridson, 1971). O acmulo de glicerol
interno est inversamente correlacionado com a temperatura de fermentao na fabricao de vinhos. As clulas que no conseguem sintetizar ou
reter glicerol interno fermentam lentamente ou deixam de fermentar em
baixas temperaturas.
177
Durante o crescimento anaerbico, o NADH formado no pode ser oxidado pelo oxignio, sendo reoxidado via formao de glicerol. O acmulo de
glicerol causado pela necessidade de as clulas manterem um balano redox favorvel (Berovic et al., 2007). As interaes das linhagens de levedura
entre si, a temperatura e a agitao tambm afetam a produo de glicerol
(Remize et al., 2000). Portanto, o glicerol interno, alm de atuar como um
protetor osmtico, tambm contribui com a manuteno do balano redox
das clulas, em caso de estresse osmtico. A produo elevada de glicerol
est relacionada com o aumento na expresso de duas isoformas da enzima
glicerol-3-fosfato desidrogenase Gpd1p e Gpd2p (Pigeau; Inglis, 2005).
Variaes em nveis de acetaldedo e acetato

bem conhecido que o acmulo de produtos inibitrios durante a fermentao tais como etanol, cido actico e acetaldedo afetam o crescimento e a viabilidade, bem como a estrutura e funo das membranas celulares
que, por sua vez, regulam o transporte de nutrientes. O acetaldedo altamente reativo e biologicamente txico alm de ser muito polar e isso pode
causar estresse aquoso (Hallsworth, 1998). A produo de acetaldedo varia
nas diferentes linhagens de levedura, na faixa de 0,5 mg L-1 a 700 mg L-1
(Liu; Pillone, 2000).
A adaptao a um meio acidificado com cido actico protege as clulas
da levedura Saccharomyces cerevisiae contra a morte celular programada ou
apoptose induzida por este cido (Giannattasio et al., 2005). Alm disso, a
formao de aldedos e cido actico diminui com a elevao na quantidade
do inculo em fermentaes realizadas na presena de concentraes altas
de acar (Arshad et al., 2008). Em mostos fermentados de vinho, as concentraes de acetaldedo variam normalmente entre 0,3 g.L-1 a 0,4 g.L-1
(Martinez et al., 1997). Concentraes altas de acetaldedo adicionado (
400mg L-1) reduzem a durao da fase lag e a velocidade especfica de crescimento (Stanley et al., 1997). Por outro lado, em concentraes menores
de acetaldedo ( 580mg L-1), a fase lag e a velocidade especfica de crescimento aumentaram tanto em condies aerbicas quanto anaerbicas, mas
somente em presena de 3% a 6% de etanol (idem, 1993). Por fim, sugere-se
que o acetaldedo inicialmente produzido poderia ser utilizado como um
marcador da atividade fermentativa em processos industriais, uma vez que
varia com a linhagem da levedura (Cheraiti et al., 2010).
178
O bissulfito: preservativo qumico

Outros produtos inibitrios esto presentes no melao a ser fermentado. Um deles o bissulfito de sdio que usado como agente antioxidante
e tambm como antimicrobiano na fabricao de vinhos penetrando nas
clulas de levedura por difuso simples. No entanto, o bissulfito formado em pequenas quantidades pelas clulas de levedura a partir do nion
sulfato, sendo um precursor da sntese de aminocidos sulfurados. Dentro das clulas, o dixido de enxofre (SO2) dissociado em SO32- e HSO3-,
causando reduo no pH intracelular e consequentemente perda de viabilidade (Walker, 1998). Embora S. cerevisiae tolere nveis mais altos de sulfito
(2,0% a 3,1% em p/v) do que as bactrias e leveduras selvagens, nveis elevados causam fermentaes lentas (sluggish) e at a interrupo prematura
da fermentao (stuck fermentations) como j descrito (Boulton, 1996; Freeman; Donald, 1957).
Os efeitos txicos do etanol produzido

Concentraes de etanol acima de 4%-6% (v/v) podem afetar seriamente
os processos celulares. Entre as estratgias usadas para aumentar a sobrevivncia das clulas na presena de altas concentraes de etanol esto a induo de alteraes na composio e fluidez (ex., aumento nos nveis de cidos
graxos, aminocidos e ergosterol) das membranas, bem como o aumento da
expresso de protenas de choque trmico (Ding et al., 2009). Na verdade,
o efeito inibitrio do etanol e de outros produtos metablicos torna-se evidente durante ciclos sucessivos de fermentao com reutilizao de clulas,
ao longo dos quais ocorre o acmulo intracelular e gradual dos subprodutos
txicos nas clulas (Marques; Serra, 2004).
Variaes nos nveis das espcies reativas

do oxignio molecular
bem conhecido que as mitocndrias geram espcies reativas do oxignio molecular (ROS) durante a respirao celular. Estas espcies reativas so degradadas pelo sistema enzimtico de defesa das mitocndrias
179
medida que so formadas. Temperaturas elevadas estimulam o acmulo

de espcies reativas do oxignio na mitocndria das leveduras (Davidson;
Schiestl, 2001). A expresso de genes que codificam enzimas que destroem
perxidos (superxido dismutase e catlase) foram observados em leveduras (Zhang et al., 2003). Radicais livres tambm so gerados durante congelamento e desgelo das clulas de levedura (Park et al., 1998).
Nutrientes e seus efeitos sobre atividade fisiolgica

das clulas
Para manter as atividades fisiolgicas em um nvel favorvel, as clulas
das leveduras necessitam de uma fonte de carbono, prtons dissociados no
meio (pH baixo), oxignio, nitrognio (sal de amnia, ureia, aminocidos),
fsforo, potssio, magnsio, fonte de enxofre, ctions inorgnicos e fatores
de crescimento (como as vitaminas exigidas em nveis de moles) (Walker,
1998; Walker, 2004). Embora a matria-prima comercial seja rica em nutrientes necessrios ao crescimento das leveduras, suplementaes nutricionais com fosfato e nitrognio so necessrias para aumentar o acmulo
de biomassa e produo de etanol. As necessidades de suplementao nutricional dependem da linhagem de levedura, nmero de clulas presentes no
inculo e a composio da matria-prima (Arshad et al., 2008; Mukhtar et
al., 2010). O catabolismo das clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae
muito mais preservado durante a privao de uma fonte de carbono do
que uma fonte de nitrognio (Nilsson et al., 2001). Assim, altos nveis de
fontes de carbono associados a baixos nveis de fontes de nitrognio so as
causas mais comuns do desempenho pobre das fermentaes (Pretorius,
2000).
Exigncias por fontes de nitrognio e fosfato

Nitrognio e fsforo constituem as principais exigncias nutricionais
para o crescimento e eficincia da produo de etanol, pois esto presentes nos cidos nucleicos e fosfolipdios. A suplementao com DAP (di-amnio-fosfato) tem sido usada como fontes de fosfato e nitrognio. A
180
suplementao com DAP apresenta um timo entre 32 a 54 ppm dependendo da matria-prima. Em concentrao tima de DAP, a quantidade
de cido actico produzido diminui com ganhos em rendimentos de etanol
(Mukhtar et al., 2010). Por outro lado, quando o DAP adicionado ao melao em concentraes maiores que 150 ppm, a ureia reduz a formao de
etanol (ibidem).
Quando as clulas so submetidas ao estresse osmtico, alguns aminocidos (histidina, leucina, lisina, arginina, alanina, asprtico, triptofano)
intracelulares diminuem nas primeiras horas de fase logartmica em meio
contendo 20g.L-1 de glicose. Isso sugere que a adio de aminocidos induz a sntese de protenas em altas concentraes de acar no meio. Na
fase estacionria, a disponibilidade de aminocidos internos diminui ainda
mais em funo da falta de nutrientes (Pham; Wright, 2008). A elevao
nos nveis de viabilidade e proliferao celular, bem como a ativao da via
glicoltica podem ser conseguidas com a suplementao do meio com um
coquetel de aminocidos (Pham; Wright, 2008).
Em condio de exausto da fonte de carbono, a maior perda das clulas consiste na reduo do nvel de energia disponvel (Thomsson et al.,
2003). A falta da fonte de carbono reduz o pool de ATP das clulas a valores
inferiores a 0,1 mol.g-1, enquanto as clulas em estado de jejum por falta de
nitrognio apresentam um pool de ATP elevado a 6 mol.g-1. Adio de pequenas concentraes de glicose (0,1g.L-1 para 1,0g.L-1 de clulas iniciais)
a uma cultura, no incio do estado de jejum ou mesmo em sua fase estacionria mais avanada, permite s clulas preservarem sua atividade fermentativa. A adaptao ao estado de jejum nutricional pode ser conseguida por
meio de uma diminuio gradual de nutrientes (ibidem).
A adaptao ao etanol produzido

As clulas da levedura S. cerevisiae, adaptadas ao crescimento em meios
contendo concentraes crescentes de etanol, no perdem atividade de
crescimento em um meio contendo uma concentrao alta de etanol (Dinh
et al., 2008). No entanto, o teor de lipdios das membranas dessas clulas
adaptadas bem como seus volumes (clulas maiores) so diferentes das clulas no adaptadas. Isso sugere que a adaptao ao etanol est relacionada
com o ciclo de diviso celular.
181
Necessidades de ctions inorgnicos

As necessidades nutricionais das leveduras por minerais so bastante
conhecidas e foram extensivamente revisadas. O papel dos minerais est
descrito em detalhes abaixo (Walker, 1998; Walker, 2004).
Potssio: constitui 1% a 12% da massa seca da levedura. O potssio atua
como o cofator principal de enzimas envolvidas com a fosforilao oxidativa, sntese de protenas e catabolismo de hidratos de carbono.
Sdio: concentraes elevadas de ons de sdio so prejudiciais s funes
celulares, mas as clulas dispem de mecanismos de extruso de ctions.
Clcio: este ction desempenha um papel fundamental como mensageiro
secundrio na transmisso de estmulos externos em clulas de eucariotos.
Alm disso, o clcio se liga parede das clulas participando da floculao
e apresentando uma ao antagnica quanto ao consumo de magnsio, bloqueando processos metablicos essenciais. No entanto, quando utilizado
em quantidades apropriadas (0,5 mmol.L-1 a 1,5 mmol.L-1), ocorrem aumentos na velocidade da fermentao e do crescimento da clula. O clcio
est relacionado com o aumento da atividade da ATPase das membranas e
nveis de protena (Li et al., 2010).
Magnsio: o metal mais abundante das clulas dos seres vivos, sendo
essencial para a multiplicao celular. Constitui 0,3% da clula viva em peso
seco e atua como um cofator essencial para cerca de 300 enzimas envolvidas
com as vias metablicas. Apesar de sua importncia, o conhecimento das
funes deste on e da regulao dos seus transportadores ainda limitado
em Saccharomyces cerevisiae (Pisat et al., 2009).
Zinco: estes ons podem ser txicos, pois afetam a permeabilidade das
membranas quanto a entrada de potssio, causando diminuio na atividade
de fermentao. Em concentraes de zinco acima de 3,0 mg.L-1, a concentrao de etanol produzido diminui (Tosun; Ergun, 2007). So necessrios
aproximadamente 7 x 108 tomos de zinco/clulas para o crescimento timo
(Simm et al., 2007). Nas clulas crescidas em meio contendo zinco, este metal se acumula nos vacolos por muitas divises celulares consecutivas, mesmo quando o meio passa a se tornar pobre em relao a este on (ibidem).
Nquel: este ction no um nutriente essencial, mas pode se acumular
nas clulas da levedura Saccharomyces cerevisiae. Porm, o crescimento e os
teores de protena interna diminuem quando a concentrao de nquel no
meio for superior a 20 mg.mL-1 (Neelam; Sood, 2008).
182
Interaes entre leveduras

A grande diversidade de microrganismos e de suas atividades metablicas so as razes de os microrganismos estarem envolvidos em tantos processos industriais. A compreenso dos efeitos das interaes entre os microrganismos essencial para o melhoramento de um processo industrial.
A convivncia de leveduras diferentes em culturas mistas depende dos seguintes fatores (De Almeida, 2011):
interao entre elas (gnero e espcie);
condies de fermentao (tipo de processo, alimentao, temperatura, aerao);
seu genoma e sua atividade metablica;
resistncia a estresses (trmico, alcolico);
falta de nutrientes e presena de inibidores.
As interaes entre os organismos podem ser do tipo:
predador/presa;
competio;
inquilinismo;
simbiose;
neutralismo;
comensalismo;
protocooperao;
amensalismo ou antagonismo.
Fatores determinantes da convivncia entre leveduras

Diferentes espcies de leveduras provenientes da matria-prima e/ou
do prprio ambiente podem ser encontradas em um processo de fermentao. As variaes em disponibilidade de oxignio, temperatura e nveis
de etanol produzido, bem como a acidez so fatores ambientais que determinam variaes nas propores das leveduras nos diferentes estgios do
processo. As leveduras do gnero Hanseniaspora, Candida, Metschnikowia,
Pichia, Kluyveromyces, Issatchenkia, Dekerae e Schizosaccharomyces, podem
sobreviver juntamente com a levedura Saccharomyces no mesmo ambiente
183
por serem tolerantes ao etanol (Fleet; Heard, 1993). Leveduras do gnero

Hansienospora, Candida, Picchia e Metschnikowia predominam no incio
do mesmo processo de fermentao, mas logo deixam de predominar em
funo da capacidade de propagao maior da levedura Saccharomyces cerevisiae em fermentaes espontneas (ibidem).
As leveduras no Saccharomyces so, em geral, menos tolerantes a baixas concentraes de oxignio. A multiplicao celular com consumo de
oxignio pela levedura Saccharomyces cerevisiae nos primeiros estgios da
fermentao pode contribuir para letalidade precoce das leveduras selvagens (Fleet, 2003).
A maioria de leveduras no Saccharomyces no tolera concentraes de
etanol superiores a 5-7% (v/v) e isso explica o fato de perderem viabilidade
quando a fermentao prossegue atingindo concentraes superiores de etanol (Heard; Fleet, 1988). No entanto, leveduras como Kloeckera apiculata,
Candida stellata, Candida cruzei, Candida pulcherima e Hansenula anomal
tm sido encontradas em mosto de uva contendo at 15% (v/v) de etanol
na faixa de 10C a 15C, mas redues na viabilidade ocorrem quando a
temperatura eleva-se a 30C (Gao; Fleet, 1988; Heard; Fleet, 1988). Em
fermentaes a baixas temperaturas, algumas leveduras no Saccharomyces
no perdem viabilidade quando o nmero de clulas permanece alto at o
final do processo (Heard; Fleet, 1988).
Alguns estudos tm demonstrado que as linhagens comerciais competem
com as selvagens, mas sem elimin-las completamente e que a escolha da levedura starter gera populaes diferenciadas de leveduras selvagens no meio
(Egli et al., 1998). Em baixas temperaturas, algumas espcies de leveduras
no Saccharomyces persistem no processo em proporo significante durante a fermentao (Heard; Fleet, 1988). Na verdade, a competio entre leveduras depende das linhagens, das condies de implantao do processo
e da matria-prima utilizada, dependendo da presena de contaminantes e
da disponibilidade de nutrientes. O uso de leveduras selecionadas seria bastante beneficiado com o desenvolvimento de tcnicas genticas e fisiolgicas
que pudessem claramente identificar os graus de dominncia e permanncia
de leveduras diferentes e seus desempenhos fermentativos na populao microbiana. Isso possibilitaria o monitoramento do processo fermentativo em
condies industriais e realizao de intervenes quando necessrias.
184
Interaes metablicas entre leveduras

Os metabolitos excretados pelas leveduras parecem ser os principais
determinantes das interaes entre microrganismos, quer seja pelo aumento na concentrao de um determinado produto (por exemplo, glicerol
externo, acetaldedo e etanol) ou assimilao do produto de um microrganismo por outros como o caso da assimilao e metabolizao de cidos
orgnicos fracos. Interaes podem ocorrer entre diversos tipos de levedura
ou entre bactrias e leveduras (Fleet, 2008). As interaes mais conhecidas
entre leveduras so aquelas relacionadas com a diminuio ou aumento de
acidez, aumentos em glicerol externo e modulao de sabores em bebidas
fermentadas (ibidem). A interao entre Turulaspora delbrueckii e Saccharomyces cerevisiae reduz a acidez voltil e os nveis de acetaldedo em vinhos
(Bely et al., 2008). J a levedura Schizosaccharomyces pombe reduz a acidez
mlica em culturas mistas quando convive com a levedura Saccharomyces
cerevisiae (Snow; Gallander, 1979). Em culturas mistas de Saccharomyces
cerevisiae e Issatchenkia orientalis, a diminuio da acidez mlica tambm
foi observada. Concentraes de 15-16 mg.mL-1 de cido mlico podem ser
detectadas em mosto de uva (Kim et al., 2008). O aumento do glicerol foi
observado em coculturas de Candida cantarelli e Saccharomyces cerevisiae
(Toro; Vazquez, 2002).
As leveduras Saccharomyces cerevisiae e Candida tropicalis tm sido usadas como starters na produo de tchapalo, um tipo de cerveja produzida a
partir de mosto de sorgo, em cuja fermentao as duas leveduras interagem
por meio de sinergismo (NGuessan et al., 2010). A cultura pura de S. cerevisiae produziu menos etanol que a cultura mista (1 parte de Saccharomyces
cerevisiae: 2 partes de Candida tropicalis) em fermentao a 35C para a
produo de tchapalo. Isso indica que ocorreu um sinergismo entre as duas
leveduras em relao produo de etanol. Interaes entre bactrias e Saccharomyces cerevisiae tambm ocorrem em fermentaes abertas ou realizadas em ambientes no esterilizados (Temudo; Mato, 2009).
Em uma cocultura de Lactobacillus kefiranofaciens e S. cerevisiae, as clulas de levedura consomem cido ltico, reduzindo sua concentrao, enquanto a velocidade de produo do kefir pelo Lactobacillus kefiranofaciens
aumenta (Cheirsilp et al., 2003). Este polissacardeo, constitudo por unidades de galactose e glicose, tem sido empregado como espessante, estabi-
185
lizante, emulsificante e, em funo de sua atividade antitumoral, tem sido

utilizado no combate a tumores. A quantidade de polissacardeo secretado
maior em cultura mista indicando que o Saccharomyces cerevisiae estimula
o crescimento da bactria e a produo do polissacardeo. Assim, durante a formao de kefir um sinergismo em relao ao crescimento tem sido
observado.
As interaes metablicas entre leveduras em fabricao de etanol combustvel so pouco conhecidas. Efeito sinergstico da temperatura e do etanol produzido (Aldiguier et al., 2004), bem como o sinergismo entre o pH
e componentes do meio (por exemplo, sulfito e cido ltico) com efeitos
sobre a produo de etanol esto descritos na literatura. No entanto, as interaes entre linhagens diferentes de levedura durante a produo de etanol
combustvel so ainda pouco conhecidas (Dorta et al., 2006).
Numa cocultura de Saccharomyces uvarum e uma linhagem hbrida natural (hbrido entre segregantes do Saccharomyces cerevisiae e Saccharomyces
uvarum, proporo 1:1 no inculo) observou-se alteraes na velocidade especfica da produo de etanol, biomassa e formao de acetaldedo,
quando comparadas com os dados obtidos em monoculturas (Cheraiti et
al., 2005). A cultura pura da levedura hbrida Saccharomyces uvarum produziu uma maior quantidade de acetaldedo e tudo indica que a associao
entre o acetaldedo produzido pelas duas leveduras pode ter causado um
aumento na velocidade especfica da produo de etanol como observado
na cultura mista. Apesar de txico, um nvel baixo de acetaldedo estimula
o crescimento de leveduras com reduo da fase logartmica de crescimento
(Stanley et al., 1993). Em outra cultura mista contendo Saccharomyces cerevisiae e Saccharomyces uvarum em meio sinttico (Favale et al., 2007), o
Saccharomyces uvarum tornou-se dominante na populao de clulas em
funo de seu maior grau de multiplicao, bem como a excreo de nveis
superiores de metabolitos secundrios (por exemplo, glicerol e acetato). Os
nveis de cido pirvico excretados tambm so uma caracterstica da linhagem de levedura e podem dar informaes que indicam o andamento
do processo. Em produo de vinho, o nvel de pirvico alcana seu valor
mximo no incio da fermentao, enquanto o acetaldedo aumenta durante
todo tempo e atinge seu valor mximo no final do processo fermentativo
(Morata et al., 2003).
186
Inibio da atividade das clulas de levedura e seus

mecanismos de defesa em hidrolisados de materiais
celulsicos
Os hidrolisados lignocelulsicos contm uma grande variedade de compostos txicos constitudos por cidos orgnicos fracos, aldedos furnicos
e compostos fenlicos que exercem efeitos negativos sobre o metabolismo
relacionado com o crescimento e a fermentao da levedura Saccharomyces
cerevisiae (Almeida et al., 2007).
Estratgias baseadas em adaptao (modulao da expresso gnica)
podem ser utilizadas para aumentar a tolerncia aos inibidores (Parawira;
Tekere, 2011; Almeida et al., 2009). Uma estratgia simples de adaptao
seria a exposio das clulas de levedura a concentraes crescentes de inibidores em processo de batelada alimentada ou em processo contnuo. Nestas condies, a produo de enzimas capazes de metabolizar os inibidores
se eleva com diminuio da fase lag (Heer; Sauer, 2008).
O cido actico o cido orgnico fraco mais abundante em hidrolisados de bagao de cana-de-acar, sendo este tambm um subproduto da
fermentao alcolica em baixas concentraes de acar (Almeida et al.,
2007). O efeito inibitrio deste cido sobre a levedura Saccharomyces cerevisiae pode ser reduzido pelo aumento do pH do meio. O cido frmico
um agente inibitrio de maior efeito sobre a levedura do que o cido actico,
pois apresenta um pKa menor que o do cido actico (Almeida et al., 2007)
e induz apoptose (Du et al., 2008).
Os derivados furnicos resultantes de uma reao de desidratao das
hexoses e pentoses (Almeida et al., 2009) induzem apoptose (Perrone et al.,
2008). A reduo dos nveis dos inibidores (derivados de hexoses e pentoses) resulta da formao dos respectivos lcoois pela prpria levedura,
como uma resposta de defesa das clulas (Heer et al., 2009).
Os compostos aromticos derivados da lignina afetam o crescimento e a
fermentao, sendo seus efeitos inibitrios dependentes das estruturas dos
aromticos (Larsson et al., 2000). A lacase uma enzima produzida por
fungos que reduz a toxidade dos hidrolisados por transformar o coniferilaldedo no lcool correspondente (ibidem). A vanilina outro derivado
da hidrlise que atua em concentraes muito baixas e seu efeito inibitrio
est relacionado com o metabolismo do ergosterol (Endo et al., 2008; 2009).
187
As leveduras contendo teores maiores de ergosterol so mais tolerantes

vanilina.
Concluses e perspectivas
A levedura Saccharomyces cerevisiae um organismo robusto quanto
sobrevivncia em condies de estresses fsicos e capacidade de tolerar o
etanol. O uso de altas quantidades de clulas (high cell density fermentations) minimiza os efeitos da evoluo populacional e propicia aumentos
em rendimento alcolico em curtos perodos de tempo. Elevaes na diversidade dos contaminantes e o aparecimento de variantes fenotpicas so
observados durante processos de longa durao com reutilizao de clulas.
No entanto, a dinmica populacional deve ocorrer com uma velocidade inferior ao surgimento de variaes populacionais no benficas ao processo.
Leveduras no Saccharomyces, vindas junto com a matria-prima e sua propagao, podem passar a constituir uma parte significativa da populao de
leveduras que possam ser prejudiciais ao processo. Outro fator que afeta o
processo consiste no uso de volumes grandes de trabalho (large working volumes) nos biorreatores. Quanto maior o volume do biorreator, mais difcil
ser a manuteno de temperaturas favorveis e a homogeneidade da suspenso de clulas. A falta de homogeneidade leva formao de gradientes
de concentrao de nutrientes e de clulas, os quais afetam tanto a dinmica
populacional quanto os parmetros cinticos do processo.
Pouco se sabe sobre as interaes que ocorrem entre produtos metablicos
produzidos por leveduras diferentes durante o processo de produo do bioetanol. fundamental conhecer quais os tipos de interaes que contribuem
para aumentar o nvel de subprodutos que afetam de forma negativa a cintica do processo. Por outro lado, o desenvolvimento de leveduras que expressem genes para a secreo de agentes antibacterianos (lisozima), tolerantes
a preservativos qumicos (bissulfito) e a metabolitos txicos (lcoois, cido
actico, acetaldedo e cido dodecanoico) so desejveis (Pretorius, 2000).
Quanto fermentao de hidrolisados celulsicos, fundamental o isolamento e/ou desenvolvimento de leveduras capazes de secretar altas quantidades de celulases e que sejam tolerantes aos inibidores resultantes da hidrlise. As enzimas devem ser tolerantes a pHs cidos e apresentarem boa
188
atividade de hidrlise na faixa de temperatura de 34C a 37C (temperaturas da fermentao alcolica). Os maiores desafios na produo do etanol
celulsico consistem nos altos custos das enzimas comerciais e a necessidade
de uma quantidade grande destas enzimas. Assim, pesquisas so necessrias
para melhorar o processo de hidrlise enzimtica, reduzir tempos de hidrlise e minimizar a inibio por produtos da reao enzimtica. Tambm
importante desenvolver pr-tratamentos para material celulsico que sejam
rpidos, eficientes e de baixo custo (Van de Vyver et al., 2011).
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8
Produo de etanol por Zymomonas mobilis
CCT 4494 utilizando substratos
no convencionais como alternativa
produo convencional
Fernanda Maria Pagane Guereschi Ernandes,
Crispin Humberto Garcia-Cruz1
Consideraes gerais
A crise do petrleo de 1973 gerou grande interesse na busca de recursos
energticos renovveis, assim como em encontrar fontes de recursos orgnicos capazes de substituir os atuais produtos petroqumicos. At a dcada
de 1970, o etanol no Brasil era apenas um simples subproduto da indstria
canavieira, contudo esta situao mudou por completo a partir da crise do
petrleo. O governo brasileiro promoveu a busca de uma fonte alternativa
de combustvel e retomou as pesquisas e os investimentos para o desenvolvimento do lcool como combustvel. O grande momento deste perodo se
deu em 1975 com a criao do Programa Nacional do lcool (Prolcool).
Dessa forma, por um lado, realizaram-se esforos para melhorar a rentabilidade dos processos de obteno de biolcool, e por outro lado, tratou-se
de substituir os processos do tipo qumico por outros do tipo biolgico. Em
funo da queda no preo do petrleo no incio da dcada de 1980, estes
estudos perderam impulso durante certo tempo; contudo, a conscincia de
que os combustveis fsseis vo se esgotar e que necessrio utilizar tecnologias menos poluentes fez renascer o interesse nesses processos biolgicos.
Desde aquela data, toda a produo industrial de lcool realizada utilizando leveduras, como microrganismo da fermentao, e pouco se conhece
1 Os autores agradecem Fundao de Amparo Pesquisa (Fapesp).
196
de outros microrganismos que produzam lcool em escala industrial. Em

virtude da situao mundial de destaque que se encontra o Brasil no setor energtico, algumas instituies vm selecionando microrganismos
eficientes para produo de lcool como alternativa futura.
Nos ltimos 15 anos, a bactria Zymomonas mobilis vem despertando
muito interesse por seu potencial na produo de etanol, produzindo aproximadamente 1,9 mol de etanol por mol de glicose, com velocidade trs a
quatro vezes maior que a Saccharomyces cerevisiae.
Zymomonas mobilis uma bactria gram-negativa, que utiliza sacarose,
glicose e frutose como fonte de carbono e energia, produzindo quantidades
equimolares de etanol e CO2. Essa bactria tem sido alvo de pesquisas por
causa de seu alto potencial fermentativo, do qual resulta em uma produo de
etanol comparvel, ou at mesmo superior, a obtida por leveduras. Segundo
a literatura, estudos observaram uma srie de vantagens na fermentao com
Zymomonas em relao levedura Saccharomyces, tradicionalmente utilizada em fermentaes etanlicas. Esta bactria apresenta aproximadamente o
dobro de velocidade de crescimento, produz etanol numa velocidade seis a
sete vezes maior e o fator de converso de glicose em etanol 5% maior.
Ainda que a importncia da produo de etanol como energia renovvel
para o Brasil e gerao de empregos seja inegvel, a elaborao de meios de
cultivo de baixo custo um fator importante em processos fermentativos
industriais. O aproveitamento de subprodutos da indstria do acar contendo alta concentrao de sacarose como substratos no processo biotecnolgico uma alternativa atrativa e promissora, uma vez que, os substratos
utilizados so caros o que inviabiliza o custo do produto final. Isso poderia
ser melhorado com a utilizao de matrias-primas regionais.
Reviso bibliogrfica
Histrico da produo e uso de etanol no Brasil
Em 1903, foi proposto pelo 1 Congresso Nacional de Aplicao Industrial do lcool que se estabelecesse infraestrutura para promover a produo e o uso de lcool; e, de fato, durante a Primeira Guerra Mundial seu uso
foi compulsrio em muitas reas do pas.
PRODUO DE ETANOL POR ZYMOMONAS MOBILIS CCT 4494
197
O Brasil, desde a dcada de 1920, j estudava e testava combustveis alternativos e renovveis, tais como o lcool de cana-de-acar. Um Decreto Federal promulgado em 1931 estabelecia as orientaes de transporte e
comercializao do etanol e decretava que at 5% (por volume) fosse adicionado gasolina. At 1941, a produo de etanol atingiu um patamar de 650
milhes de litros por ano (Campos, 2003; Negro; Urban, 2005).
A deciso poltica e econmica envolvendo investimentos adicionais,
do uso da cana-de-acar para produzir etanol, em adio ao acar, foi
tomada pelo Governo Federal, com o Prolcool, implementado em escala comercial nos anos 1970 (Moreira; Goldemberg, 1999). Esta deciso foi
tomada em 1975, quando a economia brasileira foi bastante afetada pela
crise mundial do petrleo ao mesmo tempo que, no mercado internacional,
o preo do acar declinava rapidamente, tornando atrativa a produo de
lcool. Como resposta direta a este abalo econmico, criou-se o programa
de incentivo produo de etanol, com o intuito de futuramente substituir
a gasolina por este biocombustvel (Goldemberg et al., 2004). Embora o
programa mostrasse autossuficincia para sua implementao, a queda nos
preos do petrleo faria que o Prolcool passasse por anos de dificuldade.
Assim, a perspectiva da produo no s de lcool e acar, mas tambm de
explorar ao mximo os subprodutos gerados durante o processo de obteno do lcool caiu no esquecimento governamental, sendo posteriormente
retomada por esforo prprio de usinas e destilarias.
A produo de cana-de-acar e lcool no Brasil entre 1975 e 1985 quadruplicou e, o etanol tornou-se o mais importante combustvel. Contudo, a
dinmica que sustentava a oferta e consumo brasileiro do etanol carburante
continuamente esteve pressionada pela competio dos preos oscilantes
do petrleo no mercado internacional e, sobretudo, pela maior atratividade
da commodity acar, o que culminou com a desacelerao do programa na
dcada de 1990 acarretando uma marcante diminuio da frota de carros
100% movidos a lcool e a desestabilizao conjuntural do modelo (Negro; Urban, 2005).
A competitividade estabelecida entre os preos do petrleo e dos leos
vegetais e visando atender s preocupaes ambientais existentes, a dcada
de 1990 caracterizou-se pela produo comercial e instalao de plantas de
produo de bicombustvel em escala industrial (Campos, 2003).
As principais etapas podem ser observadas na Figura 8.1, esta ilustra a
evoluo dos biocombustveis no Brasil.
198
Figura 8.1 Evoluo dos biocombustveis no Brasil

Fonte: Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis ANP, 2010.
Para a Unio da Agroindstria Canavieira de So Paulo nica (2010)

em seu site, a produo mundial de cana-de-acar totaliza quase 1,5 bilho
de toneladas e est localizada predominantemente na faixa tropical do planeta, nos pases em desenvolvimento da Amrica Latina, frica e Sudeste
Asitico. O Brasil lder mundial na produo de cana-de-acar, com 90%
na regio Centro-Sul e 10% no Nordeste.
Segundo a Associao Nacional dos Fabricantes de Veculos Automotores (Anfavea) (2010), a quantidade de vendas internas no atacado por
tipo de combustvel de veculos automotores, considerando automveis e
comerciais leves, entre nacionais e importados, no ano de 2003 foram (em
199
unidades): 36,4 mil a lcool, 48,2 mil flex-fuel, 1,16 milhes a gasolina e
54,5 mil a diesel, com participao de mercado, respectivamente, iguais a
2,8; 3,7; 89,2 e 4,2%. Em 2009, os nmeros se apresentaram, segundo a Anfavea (2010), em 70 mil unidades a lcool, 2,65 milhes flex-fuel, 221,7 mil
a gasolina e 3,0 milhes a diesel, com uma participao de 88,2% flex-fuel,
7,4% a gasolina e 4,5% a diesel nos comerciais leves.
Importncia de Zymomonas mobilis no contexto histrico
da produo de etanol no Brasil
As leveduras vm sendo utilizadas pelo homem h pelo menos 8 mil

anos e sua manipulao promoveu grande impacto na produo de alimentos, tendo-se o po, a cerveja, o vinho e o saqu como os produtos mais
representativos desses processos milenares de manipulao.
O considervel progresso na rea da biotecnologia permite a utilizao
de tcnicas fermentativas j bem estabelecidas, para produo de vrias
substncias ou mesmo produtos, tais como: etanol, cido ctrico, corantes,
enzimas e vitaminas entre outros; oriundos da ao de bactrias, fungos filamentosos e leveduras. O domnio destas tcnicas permite a especificidade
de ao em relao ao substrato utilizado (Sandes; Di Blasi, 2000).
As leveduras tm representado importante papel como organismo-modelo em estudos bioqumicos, genticos e de biologia molecular (Torres;
Moraes, 2000; Akada, 2002). Cerca de 500 espcies de leveduras so conhecidas pelo homem e, dentre as produtoras de etanol destacam-se, espcies do gnero Saccharomyces, Schizosaccharamyces, Pichia e outras. A
espcie mais importante de levedura alcolica a Saccharomyces cerevisiae,
que possui largo espectro de utilizao, sendo empregada na produo de
pes, bebidas alcolicas, etanol e muitos outros produtos.
Quanto tecnologia necessria produo de lcool, utilizando a canade-acar e seus resduos, estudos vm sendo realizados por pesquisadores
para diminuir seu custo econmico de produo, otimizar as condies de
bioconverso etanlica, e selecionar os microrganismos com maior produtividade em etanol (Tauk, 1976; Pereira Jr.; Bulock, 1994; Menezes et al., 1998;
Venturini-Filho; Cereda, 1998; Cabrini; Gallo, 1999; Ribeiro; Horii, 1999;
Dutra et al., 2001; Laluce et al., 2002; Ernandes; Garcia-Cruz, 2011a, b).
Entre as bactrias produtoras de etanol, a espcie Zymomonas mobilis
apresenta atributos tecnolgicos que potencializam seu emprego na fer-
200
mentao alcolica em escala industrial, pois possui habilidade de transformar acares em etanol e gs carbnico em condies comparveis quelas
exigidas pelas leveduras. Sua produtividade de etanol a partir de glicose
ultrapassa 97% do valor terico mximo (Sprenger, 1996).
Gibbs e DeMoss (1954) demonstraram que essa bactria utiliza, para
o catabolismo anaerbio desses carboidratos, uma modificao da via de
Entner-Duodoroff, podendo produzir mais de 1,9 mol de etanol por mol
de glicose fermentada e pequena quantidade de lactato, de acordo com a
seguinte reao:
1 glicose
1,93 etanol + 1,8 CO2+ 0,053 lactato
Em 1984, Rogers e colaboradores fizeram estudos comparativos entre

a bactria Zymomonas mobilis e a levedura Saccharomyces carlsbergensis em
relao produo de etanol. Nestes estudos, os autores observaram uma
srie de vantagens na fermentao com Zymomonas em relao levedura.
Esta bactria apresenta aproximadamente o dobro de velocidade de crescimento, produz etanol numa velocidade seis a sete vezes maior e o fator de
converso de glicose em etanol 5% maior. Alm disso, a Zymomonas mobilis no requer controle adicional de oxignio para manter sua viabilidade
em altas concentraes de clulas (Rogers et al., 1980).
A capacidade de crescer rapidamente na ausncia de oxignio sugere
seu uso em processos contnuos de fermentao para a produo comercial
de etanol. Maiores detalhes desses resultados podem ser observados na
Tabela 8.1.
Tabela 8.1 Estudo comparativo entre a bactria Zymomonas mobilis e a levedura Saccharomyces
carlsbergensis utilizando meio de cultura com concentrao inicial de glicose de 100,0 g/L com
relao produo de etanol
Zymomonas mobilis
Saccharomyces carlsbergensis
Tempo de processo (h)
2,51
5,64
p (h-1)
5,44
0,82
Yx/s
0,028
0,043
Yp/s
0,465
0,460
Velocidade especfica de produo de etanol (p), fator de converso de glicose em clulas (Yx/s) e em
etanol (Yp/s). Fonte: Rogers e colaboradores (1984).
201
Segundo Lyness e Doelle (1980), a fermentao quantitativa de glicose,

frutose ou sacarose a etanol e dixido de carbono considerada uma caracterstica importante do gnero Zymomonas. Quando glicose e frutose so
utilizadas como fonte de carbono, obtido rendimento superior a 95% em
relao ao rendimento terico, pois a fermentao produz quase exclusivamente etanol e CO2. Quando sacarose, um substrato industrialmente
disponvel e de baixo custo, utilizado, o rendimento de etanol representa
75-80% do valor terico, em funo da formao de subprodutos como levana e sorbitol.
O microrganismo Zymomonas mobilis

Histrico do microrganismo
O uso de microrganismos com a finalidade de obter produtos que venham beneficiar e melhorar o estilo de vida do homem faz parte da civilizao desde o incio dos tempos. O aguamiel (seiva fermentada naturalmente por Zymomonas mobilis) foi utilizado pelos astecas na preveno e no
tratamento de infeces intestinais, ainda quando no se conhecia o efeito
benfico dos microrganismos. Em 1911, Barker e Hillier apud Swings e De
Ley (1977) foram os primeiros a estudar a bactria responsvel pela deteriorao do flavour de bebidas fermentadas, sendo a eles atribuda a real
descoberta desse gnero. Estes, como no atriburam um binmio latino ao
nome de Zymomonas mobilis, em 1928, foi creditada a Lindner apud Swings
e De Ley (ibidem) a descoberta dessa bactria, por ocasio do seu isolamento no Mxico, a partir da seiva fermentada de Agave atroveriens, o qual
constitui uma bebida regional muito popular chamada pulque (Gonalves de Lima et al., 1970).
Logo aps o isolamento da bactria Zymomonas mobilis, em 1931, Lindner, estudando as propriedades antagonistas dessa bactria verificou, aps
ingerir o filtrado, timos resultados quando o mesmo era utilizado no tratamento de certas infeces entricas e deu o nome a ela de Termobacterium mobile sendo muito semelhante de Barker e Hillier (Falco de Morais, 1993).
Em 1936, Kluyver e Van Niel reconhecem-na como gnero Zymomonas,
202
considerando uma s espcie Zymomonas mobilis com duas subespcies:

Zymomonas mobilis subsp. mobilis e a Zymomonas mobilis subsp. pomacii
(Swings; De Ley, 1977, Falco de Morais, 1983 a, b).
A dcada de 1970 caracterizou-se por apresentar diversos esforos no
sentido de melhorar e buscar novas fontes para a produo de etanol. Dentro deste contexto, a bactria Zymomonas mobilis revelou-se um microrganismo promissor. Durante a fermentao da sacarose para sua converso
em etanol, no entanto, surgiu como uma das razes do baixo rendimento,
um polissacardeo, a princpio de alto peso molecular, formado a partir da
hidrlise da sacarose, denominado ento de levana (Jerez, 1993; Ernandes;
Garcia-Cruz, 2009, 2011). Segundo Garcia-Cruz (1997), a levana produzida a partir da sacarose e no da glicose e frutose ou mistura de ambas
e, sendo um anidrofructosilfructosdio solvel em gua, pode ser tambm
chamado de polifrutana pelo fato de ser constitudo de molculas de frutose. Na indstria de alimentos, a levana tem vrios usos potenciais: agente
espessante, fixador de cores e sabores e em produtos dietticos. Alm disso,
sua hidrlise produz frutose que tem poder adoante superior sacarose
(Ernandes; Garcia-Cruz, 2005).
A ocorrncia da bactria Zymomonas mobilis foi verificada em vrias
partes do mundo e em diversos meios aucarados (Dadds; Martin, 1973;
Swings; De Ley, 1977). Na Europa, em vinhos de mas e de peras (Millis,
1956), em polpa de ma (Carr; Passmore, 1971) e como contaminante em
indstrias de cerveja (Dadds; Martin, 1973). No Mxico, na fermentao
da seiva do agave (Carr, 1974); na frica, sia e Amricas, fermentando
vinhos de seiva de palmas diversas (Dadds; Martin, 1973).
No Brasil, especificamente em Pernambuco (nordeste brasileiro), Gonalves de Lima isolou diversas linhagens de Zymomonas a partir de caldo de
cana-de-acar fermentado, bebida popularmente conhecida como caldo
de cana picado, e que atravs de estudos taxonmicos foi denominada de
Zymomonas mobilis variedade recifensis (Gonalves de Lima et al., 1970;
Falco de Morais, 1983; Falco de Morais et al., 1993).
Desde a dcada de 1950, o Departamento de Antibiticos da Universidade Federal de Pernambuco (DAUFPE) vem estudando a atividade antagonista de Zymomonas mobilis em infeces entricas causadas por Salmonella, Shigella e Escherichia coli. Os resultados obtidos indicaram o uso
203
desta bactria como agente teraputico no combate a enterocolite e cistite,

sendo obtida a regresso dos sintomas em todos os casos (Gonalves de
Lima et al., 1970).
Swings e De Ley (1977) descrevem em seu trabalho as diferentes linhagens de Zymomonas mobilis encontradas em vrios pases e o pesquisador
responsvel por seu isolamento (Tabela 8.2).
Tabela 8.2 Diferentes linhagens de Zymomonas mobilis encontradas em vrios pases e o pesquisador responsvel por seu isolamento
Linhagem
N de
linhagem
Fonte
Local
Data de
publicao
Isolado por
Zymomonas mobilis
ATCC
10988,
NCIB 8938,
NRRL
B-806
Agave
Mxico
1924
Lindner
Zymomonas mobilis
subsp. pomaceae
Cidra
Bristol, U.K.
1950
Millis
Zymomonas mobilis
subsp. pomaceae
Cidra
Bristol, U.K.
1950
Millis
Zymomonas mobilis
AG 11
Agave
Mxico
1950
Gonalves de
Lima et al.
Zymomonas mobilis
subsp. pomaceae
NCIB 8777,
ATCC
29192
Agave
Bristol, U.K.
antes 1951
Carr
D-364
Cerveja
Bristol, U.K.
1966
Shimwell
Zymomonas mobilis
VP1, VP2,
VP3, VP4
Elaeis sap
Kinshasa,
Zaire
1969
Swings e De
Ley
Zymomonas mobilis
7.4
Elaeis sap
Kinshasa,
Zaire
1969
Swings e De
Ley
70.1, 70.2,
70.3, 70.7,
Zymomonas mobilis 70.8, 70.9, Elaeis sap
70.10, 70.11,
70.12,70.14
Kinshasa,
Zaire
1970
Swings e De
Ley
Zymomonas
anaerbia
Zymomonas mobilis
CP1, CP2,
CP4
caldo de
cana-de-acar
Recife, Brasil
1970
Gonalves de
Lima et al.
Zymomonas mobilis
var. recifensis
CP4
caldo de
cana-de-acar
Recife, Brasil
1970
Gonalves de
Lima et al.
Fonte: Swings; De Ley (1977).
204
Caractersticas fisiolgicas do microrganismo

A bactria Zymomonas mobilis gram-negativa, no esporulante e mvel,
anaerbia facultativa, sendo que, algumas linhagens so obrigatoriamente
anaerbias. Morfologicamente, apresenta-se na forma de bastonete curto e
grosso medindo de 2,0 a 6,0 m de comprimento e 1,0 a 1,4 m de largura. Quando apresenta mobilidade, possui de um a quatro flagelos polares
(Falco de Morais, 1983). So encontradas geralmente em pares, embora
tambm apaream isoladas. Possuem rotas catablicas comparativamente
simples e no tm a variedade de alternativas metablicas encontradas em
outros microrganismos. De forma a gerar energia suficiente para o crescimento, a Zymomonas mobilis deve catabolizar substratos com altas taxas
especficas de carbono, resultando em baixos rendimentos de biomassa,
uma vez que, a maior parte deste substrato incorporado no catabolismo
do produto final, o etanol (Toma et al., 2003).
Em meios com altas concentraes de acar (melao com mais de 15
Brix), estas bactrias ocorrem como longos filamentos de extremidades dilatadas. Em meio slido base de glicose, as colnias apresentam-se lenticulares de bordas regulares, de colorao branca ou creme e com 1,0 a 2,0
mm de dimetro aps 2 dias de incubao a 30C (Swings; De Ley, 1977).
Acares fermentveis com glicose, frutose e, em alguns casos, sacarose,
so indispensveis na composio do meio de cultura de Zymomonas mobilis. Esta fermenta glicose e frutose gerando quantidades praticamente equimolares de etanol e CO2, formando colnias de colorao branca ou creme.
A fermentao de 1 mol de glicose d origem a 1,6 de etanol, 1,8 moles
de CO2 e pequena quantidade de outros subprodutos com lactato, acetaldedo, cido actico, glicerol, acetona, di-hidroxicetona, sorbitol, manitol,
levana e cido glicnico.
As condies ideais para o crescimento desta bactria so intervalos de
temperatura de 30C a 36C e intervalos de pH entre 5 e 7. Cultivadas
em meio complexo, podem converter 98% da glicose presente em etanol,
CO2, lactato e outros, seguindo um balano metablico simples. Apenas
2% da glicose so utilizados para formar biomassa. As tabelas 8.3 e 8.4 mostram a porcentagem de crescimento de linhagens de Zymomonas mobilis
em diferentes valores de pH e temperatura de incubao, respectivamente
(ibidem).
205
Tabela 8.3 Porcentagem de crescimento de linhagens de Zymomonas mobilis

em diferentes valores de pH
pH inicial
% de crescimento de linhagens
3,05
3,5
43
3,7
71
3,85
90
5,7
100
4,5
87
8,0
Tabela 8.4 Porcentagem de crescimento de linhagens de Zymomonas mobilis

em diferentes valores de temperatura de incubao (C)
Temperatura de incubao (C)
% de crescimento de linhagens
30
100
34
97
36
97
38
74
40
Na hidrlise da sacarose, ou de misturas de glicose e frutose, os subprodutos da formao de etanol so principalmente a levana e o sorbitol. A
frutose, formada da hidrlise da sacarose, no primariamente transportada para o interior das clulas, mas sim utilizada na formao de levana
e fruto-oligmeros pela ao da enzima levanasacarase (Loos et al., 1994).
A maioria das cepas requer cido pantotnico, biotina e, ocasionalmente, alguns outros fatores de crescimento como vitamina B12, riboflavina, tiamina, cido lipoico e cido flico. Alm disso, altas quantidades de extrato
de levedura aumentam a produo de clulas, mas no necessariamente a
produtividade de etanol, levana ou sorbitol (Cromie; Doelle, 1980).
Belaich e Senez (1965) estudaram o efeito de pantotenato no crescimento
de Zymomonas mobilis e observaram que a limitao desta substncia resulta na reduo da velocidade especfica de crescimento da bactria. Os auto-
206
res citam que o pantotenato uma vitamina essencial produo de etanol

porque a bactria no sintetiza pantotenato, mas necessita desta substncia
para produzir compostos orgnicos essenciais para o crescimento celular,
produzindo, consequentemente, etanol.
Nas fermentaes com Zymomonas mobilis em meio de cultivo contendo
glicose, extrato de levedura, sulfato de amnio, fosfato de potssio e sulfato de magnsio, quando a glicose exaurida, cessa a utilizao da fonte
inorgnica de nitrognio (NH4) e a bactria comea a metabolizar os aminocidos do meio como fonte de carbono, com liberao do nitrognio na
forma de amnia, resultando num aumento do pH do meio. Caso o meio de
cultivo seja alimentado novamente com glicose, o pH deste meio diminui
gradualmente. Isto se deve a que o mecanismo que gera o potencial eletroqumico, e direciona o processo de transporte de entrada de glicose, opera
via excreo de prtons com os produtos metablicos por ao da enzima
prton-translocante ATPase localizada na membrana celular (Ishizaki et
al., 1994).
Aspectos bioqumicos de Zymomonas mobilis

O processo bioqumico da fermentao alcolica caracteriza-se como
uma via catablica na qual h a degradao de molculas de acar (glicose
ou frutose) no interior da clula de microrganismos (leveduras ou bactrias)
at a formao de etanol e CO2, havendo liberao de energia qumica e
trmica. A gliclise a via central do catabolismo da glicose, sendo que o
piruvato o produto final desse processo, o qual pode seguir diferentes vias
metablicas: fermentao alcolica; ltica, ciclo de Krebs e cadeia respiratria (Figura 8.2).
Na fermentao alcolica por leveduras, o piruvato descarboxilado,
formando acetaldedo e, posteriormente, reduzido a etanol. A equao da
fermentao alcolica apresenta-se da seguinte maneira:
C6H1206 + 2 Pi + 2ADP
2C2H50H + 2CO2 + 2ATP + 2H2O
O metabolismo de acares por Zymomonas mobilis, ilustrado na Figura 8.3, aparece como uma via metablica com algumas ramificaes. A
207
Figura 8.2 Catabolismo da glicose pelas diferentes vias.

Fonte: Lehninger, 2002
sacarose metabolizada a glicose e frutose pela ao das enzimas invertase

(INV B) e levanasacarase (LEV U). As duas hexoses entram na clula via
sistema de difuso facilitada (GLF) ou so convertidas pela GFOR (glicose-frutose oxirredutase), uma enzima contendo NADP (nicotinamida-adenina-dinucleotdeo-fosfato) que existe apenas na bactria Zymomonas
mobilis. A enzima GFOR madura est localizada no periplasma, oxida
glicose a gliconolactona e reduz frutose a sorbitol. Gliconolactona , ento,
convertida pela gliconolactonase (GL), outra enzima periplasmtica, em
cido glicnico (gliconato). Ambas as enzimas so os principais constituintes do periplasma, formando aproximadamente 20% a 30% das protenas
deste compartimento. O cido glicnico consumido pelas clulas e pode
ser completamente degradado (como um cossubstrato) a etanol e cido actico. O sorbitol produzido para neutralizar o efeito prejudicial de estresse
osmtico (Sprenger, 1996).
208
Legendas: INV B: invertase; LEV U: levanasacarase; GFOR: glicose-frutose oxidorredutase; GNL:

gliconolactonase; FRK: frutoquinase; GLK: glicoquinase; PGI: fosfoglicose isomerase; ZWF: glicose-6-fosfato desidrogenase; GNTK: gliconatoquinase; TKT: transquetolase; PGL: 6-fosfogliconolactonase;
EDO: 6-fosfogliconato desidrogenase; GAP: gliceraldeido 3-fosfato desidrogenase; EDA: 2-ceto 3-dioxi
6-fosfogliconato aldolase; PGK: fosfoglicerato quinase; PGM: fosfoglicerato mutase; ENO: enolase;
PYK: piruvato quinase; PPC: fosfoenolpiruvato carboxilase; PDHC: piruvato desidrogenase; ADH:
piruvato descarboxilase lcool deidrogenase; PDC: fosfatase
Figura 8.3 Metabolismo dos carboidratos em Zymomonas mobilis.

Fonte: Sprenger (1996)
209
Tecnologia da produo de etanol por Zymomonas mobilis

Em vrios pases tm sido realizados estudos de fermentao que incluem o uso de bactrias em vez de leveduras para reduzir o tempo de fermentao. No Brasil, toda a produo industrial de lcool realizada utilizando leveduras como microrganismo da fermentao e pouco se conhece
de outros microrganismos que produzam lcool em escala industrial.
Vrios autores consideram ser Zymomonas mobilis um excelente produtor de etanol, uma vez que possui vrias vantagens perante as leveduras.
Zymomonas mobilis so mais termotolerantes, mais osmotolerantes, mais
tolerantes a altas concentraes de lcool e capazes de converter mais rapidamente o substrato em etanol (Rogers et al., 1982, Lawford et al., 1982).
Alm disso, Zymomonas mobilis tem resistncia natural a vrios antibiticos
e no requer oxignio para a sntese de lipdeos (Ingram et al., 1984). Apresenta um ciclo de fermentao rpida e com elevada eficincia; apresenta tolerncia a elevadas concentraes de glicose, de sacarose e de etanol no meio
de cultura; tolera pH entre 2,5 e 7,5 e apresenta bom rendimento em etanol.
Esta produo de etanol favorecida numa faixa de pH entre 4,5 e 7,0, pois
o pH ideal para o crescimento da bactria varia de acordo com a cepa utilizada (Swings; De Ley, 1977; Viikari; Gisler, 1986; Calazans et al., 1989).
Em 1979, Rogers e colaboradores estudaram a cintica de produo de
etanol por Zymomonas mobilis ATCC 10988 e Saccharomyces carlsbergensis
(uvarum), em altas concentraes de acar, e observaram que ambos os
microrganismos fermentaram completamente 250 g/L de glicose, produzindo etanol, em 30 a 40 horas, com concentrao final de etanol superior
a 100 g/L. Alm disso, a concentrao de biomassa de Zymomonas mobilis
foi consideravelmente menor que a massa obtida pela levedura, indicando
maior velocidade especfica de consumo de acar e de produo de etanol
para Zymomonas.
Aps a descoberta da capacidade de Zymomonas mobilis de produzir etanol, atravs das observaes feitas em fermentaes de bebidas alcolicas,
iniciou-se o estudo de uma possvel utilizao dessa bactria para produo
de etanol em larga escala. Neste caso, a Zymomonas torna-se concorrente do
principal microrganismo responsvel pela produo de etanol: o Saccharomyces cerevisiae (Swings, De Ley, 1977; Viikari, 1988, Ernandes; Garcia-Cruz, 2009, 2010).
210
Fatores que influenciam a fermentao alcolica

por Zymomonas mobilis
muito importante considerar que diversos fatores fsicos (temperatura e presso osmtica), qumicos (pH, oxigenao, inibidores, nutrientes
minerais e orgnicos) e microbiolgicos (espcie, linhagem e concentrao
da levedura e contaminao bacteriana) afetam o rendimento da fermentao, ou seja, a eficincia da converso de acares em etanol. Geralmente
as quedas na eficincia fermentativa decorrem de uma alterao na estequiometria do processo, levando maior formao de produtos secundrios
(especialmente glicerol e cidos orgnicos) e biomassa (Braga, 2006; Shreve; Brink, 1997; Lima et al., 2001).
Nutrientes
A composio do meio de cultura afeta significativamente o consumo de

glicose, o crescimento celular e a produo de etanol pela bactria Zymomonas mobilis (Cromie; Doelle, 1981).
A presena de magnsio muito importante na fermentao por Zymomonas, desde que ons magnsio so requeridos como cofatores de vrias
enzimas da via Entner Doudoroff, incluindo glucoquinase, glicose 6-fosfato desidrogenase, fosfoglicerato quinase e enolase (Millar et al., 1982, Sols
et al., 1971). Hoppner e Doelle (1983) reportaram que o clcio e o magnsio
ativam a enzima piruvato descarboxilase em Zymomonas, enquanto Bekers
e colaboradores (2000) observaram que o potssio ativa a enzima piruvato
quinase. Segundo Dawes e Large (1970), o on magnsio tem um papel importante na preveno da degradao do RNA prolongando a sobrevivncia das Zymomonas.
Vrios trabalhos descrevem que a taxa de desenvolvimento celular de
Zymomonas mobilis pode ser influenciada de acordo com as concentraes
usadas de ons potssio, magnsio, clcio, sdio e cloro. A presena dos sais
minerais, quando interagem com outra varivel do meio de fermentao
contendo sacarose comercial, tambm influenciam significativamente no
crescimento de Zymomonas mobilis.
Segundo Lawford e colaboradores (1982), a presena de biotina (1,0 mg/L)
e pantotenato de clcio (1,5 mg/L) favorecem um melhor crescimento desta bactria. A incluso de extrato de levedura no meio de cultivo fornece
211
as vitaminas necessrias ao crescimento de Zymomonas mobilis, conforme

Fein e colaboradores (1983). Ernandes (2006) obteve concentrao celular
de 2,0 g/L com a ausncia de extrato de levedura no meio de produo, mas
esta foi proporcional ao aumento do extrato no meio obtendo concentrao
de 12,6 g/L de biomassa com 10,0 g/L de extrato. O mesmo autor relatou
que, para a sntese de levana, h necessidade de adio do extrato de levedura ao meio de cultura, porm em quantidades adequadas, evitando assim
a influncia negativa deste na produo de levana.
Observa-se haver um consenso de que o meio de cultivo para Zymomonas mobilis requer diferentes sais, tais como sulfato de amnio, sulfato de
magnsio, fosfato de potssio, citrato de sdio, traos de Fe+2 e, ainda, vitaminas como biotina e pantotenato de sdio (Nipkow et al., 1985).
Ernandes (2006) observou em sua pesquisa que a alta concentrao de
potssio proporcionou maior taxa de desenvolvimento de duas linhagens
de Zymomonas mobilis (CCT 4494 e CP4) e de Bacillus subtilis. Jerez (1993)
estudou o efeito da variao da concentrao de potssio e verificou que a
taxa de desenvolvimento foi proporcional ao aumento da concentrao de
potssio at a concentrao de 10,0 g/L. O mesmo autor, entretanto, verificou que KCl, em concentraes superiores inibidor da produo etanol
e do crescimento de Zymomonas.
Diez e Mancilha (1990) mostraram que, utilizando caldo de beterraba
aucareira, a presena ou ausncia MgSO4.7H20 no afetou os rendimentos
fermentativos nem apresentou efeito inibidor da Zymomonas mobilis CP4.
Entretanto, so contraditrios aos reportados por Skotnicki e colaboradores
(1981), que indicaram que o Mg+ pode ter efeito inibidor da fermentao
por Zymomonas, e aos resultados obtidos por Cromie e Doelle (1981), os
quais observaram incremento na taxa especfica de consumo de substrato
e de produo de etanol com o aumento da concentrao de magnsio at a
concentrao de 3,0 g/L. A concentrao de etanol tambm foi aumentada
com o aumento da concentrao de magnsio at 3,0, diminuindo levemente quando a concentrao aumentou para 4,5 g/L.
Presso osmtica
Zymomonas mobilis pode crescer em concentraes relativamente elevadas de acar (Park; Baratti, 1993). Segundo Belaich e Senez (1965) e
212
DiMarco e Romano (1985), a glicose transportada em alta velocidade,

atravs da membrana plasmtica, sendo sua conduo facilitada pelo sistema de difuso. Assim, a concentrao intracelular rapidamente alcana um
nvel limite em relao s concentraes externas de glicose. Outros autores
(Algar; Scopes, 1985) verificaram que a presso osmtica extracelular pode
ser rapidamente balanceada pela concentrao intracelular de acares e
que a reduo da atividade de gua parece exercer pequeno efeito sobre as
enzimas da via de Entner-Doudoroff.
Na literatura, so encontrados alguns trabalhos que buscam elucidar
o fato de esta bactria tolerar concentraes elevadas de acar. Struch e
colaboradores (1991) observaram que a cepa ATCC 29191 de Zymomonas
mobilis apresenta alta tolerncia a elevadas concentraes de acares por
causa de sua elevada capacidade de regulao osmtica e do eficiente sistema de transporte de glicose. Estudos comparativos realizados por Swings
e De Ley (1977) com quarenta diferentes cepas de Zymomonas mobilis observaram que a maioria apresenta capacidade de crescer em meio contendo
30% a 40% (p/v) de glicose.
A cintica de produo de etanol por Zymomonas, em altas concentraes de acar, foi estudada por Rogers e colaboradores (1979). Resultados
revelaram que 100 a 250 g/L de acar podem ser rpida e eficientemente
convertidos em etanol. Comparando Zymomonas mobilis ATCC 10988 e
Saccharomyces carlsbergensus (uvarum) ATCC 26602, esses autores encontraram que ambos os microrganismos fermentam completamente 250 g/L
de glicose, produzindo etanol, em 30 a 40 horas, com concentrao final de
etanol superior a 100 g/L. A concentrao de biomassa de Zymomonas mobilis foi consideravelmente menor que a massa obtida por S. uvarum, indicando maior velocidade especfica de consumo de acar e de produo de
etanol par Zymomonas.
Lyness e Doelle (1983) determinaram a glicose livre no meio, a fim de
estabelecer a correlao entre hidrlise de sacarose, formao de glicose e
utilizao de glicose em duas cepas de Zymomonas. As duas cepas estudadas, Z7 e Z10, apresentaram respostas diferentes. A cepa Z7 apresentou
alta atividade de invertase acompanhada da no utilizao de glicose, e
significativo acmulo de glicose no fermentador. Os autores concluram
que o incremento no acmulo de glicose em consequncia do aumento
213
da concentrao de sacarose pode indicar limitado sistema metablico ou

progressiva inibio pelos dois carboidratos monomricos sobre o sistema
enzimtico catablico.
Loos e colaboradores (1994) relataram em sua pesquisa que, em seu
habitat natural, Zymomonas se encontra exposta a altas concentraes de
sacarose. Neste caso, o sorbitol produzido e acumulado pelas clulas, pela
ao das enzimas periplasmtica glicose-frutose oxidorredutase (GFOR).
A funo fisiolgica da formao de sorbitol , portanto, proteger as clulas
do stress osmtico causado pelas altas concentraes de acar.
Presena de etanol
O etanol tem um efeito prejudicial sobre a membrana celular de Zymomonas, diminuindo sua eficcia como barreira semipermevel e permitindo a sada de cofatores e coenzimas essenciais (Viikari, 1984). Ainda segundo Ingram (1984), altas concentraes de etanol geralmente destroem
a estrutura e as funes da membrana celular. De acordo com Bringer e
colaboradores (1985), a membrana precisa permitir uma alta velocidade
de difuso para fora do citoplasma e, ao mesmo tempo, necessita opor-se
a suas propriedades solventes. Viikari (ibidem) afirmou que, em geral, o
efeito inibidor do etanol pode estar relacionado desregulao da funo
da membrana inibio das enzimas glicolticas. Em clulas de Zymomonas
mobilis, entretanto, as enzimas glicolticas no so inibidas pela presena de
etanol e a via metablica indiretamente inibida pela perda de cofatores e
coenzimas, provavelmente por causa da ao do etanol sobre a membrana
celular (Buchholz et al., 1987).
Segundo Rowe (1983), em baixas concentraes (menores que 25 g/L),
o etanol diminui a temperatura de transio e, portanto, fluidiza a membrana. Sob altas concentraes (maiores que 25 g/L), ocorre o chamado efeito
freezing, no qual se verifica um simultneo aumento de temperatura de
transio e cooperatividade do processo de transio.
Em Zymomonas mobilis, tanto a boa capacidade de difuso de sua parede
celular quanto sua resistncia ao prejudicial do etanol se devem grande
quantidade de cido cis-vacnio presente na parede (cerca de 70%). Por possui alta fluidez, esse cido graxo , provavelmente, o responsvel pela alta
velocidade de difuso do etanol pela membrana citoplasmtica (ibidem).
214
A presena de hopanoides como 1, 2, 3, 4-tetra hidroxipentano 29-hopeno (THBH), principalmente, parece ser a causa da considervel estabilidade da membrana plasmtica sob altas concentraes de etanol (Schmidt
et al., 1986).
Altas concentraes de THBH, assim como hopeno e hopanol, foram
verificadas em Zymomonas mobilis. Essas substncias foram primeiramente encontradas em vrias fraes de leo minerais (Ourisson et al., 1985).
Laudrin e Goma (1982) observaram, em fermentao por Zymomonas mobilis, um aumento significativo de THBH durante a fase exponencial de
crescimento. Este aumento ocorreu no momento em que o etanol intracelular era acumulado. Por essa razo, a formao destes lipdeos parece ter
correlao primria com o etanol intracelular, cuja concentrao maior
que aquela medida no meio de cultura.
O THBH contido nas clulas bacterianas aumenta consideravelmente
com o acmulo de etanol intracelular. Isso indica que a tolerncia ao etanol
est provavelmente correlacionada com a presena de hopanoides nas clulas. Zymomonas mobilis reage ao solvente do etanol com o aumento da
biossntese e incorporao de hopanoides. Os hopanoides tm, nas bactrias, uma funo aparentemente similar aos esteroides nas leveduras. Estes
compostos estabilizam a membrana, fazendo que os microrganismos resistam ao etanol. A formao dos hopanoides est diretamente correlacionada
com a diminuio da proporo de fosfolopdeos/protenas na membrana
de Zymomonas mobilis, aumentando a estabilidade da membrana plasmtica pelo aumento da hidrofobicidade. Os hopanoides so sintetizados nas
clulas bacterianas, tanto em condies de aerobiose como anaerobiose. J
os esteroides nas leveduras so sintetizados apenas em aerobiose (Carey,
Ingram, 1983).
Erzinger (1996) estudou, em regime descontnuo e descontnuo alimentado, a influncia da concentrao inicial de glicose e do etanol formado sobre a atividade da GFOR em clulas ntegras de Zymomonas mobilis ATCC
29191. A GFOR a mais importante enzima envolvida na converso de
glicose e frutose em cido glucnico e sorbitol, respectivamente. Neste estudo, o crescimento celular e a produo de etanol foram tambm considerados. Adicionalmente, ensaios de biotransformao, para a produo de
sorbitol e cido glucnico, foram realizados. Com concentraes iniciais
de glicose (G0) entre 40 e 100 g/L foram medidas as mximas velocidades
215
especficas de crescimento (X,M = 0,48 h-1). Acima desta faixa, a concentrao de glicose inibiu, progressivamente, o crescimento de Z. mobilis.
Com G0 = 230 g/L, o valor de X,M foi de, apenas, 0,17 h-1. Com concentraes de etanol maiores que 35 g/L, observa-se uma diminuio da
velocidade especfica de crescimento (X), indicando um efeito inibidor
deste produto sobre o crescimento celular. O fator de converso de glicose
em clulas (Yx/s) mximo obtido foi de, aproximadamente, 0,042, com G0
at 100 g/L. Os valores de G0 maiores que 100 g/L levaram, reduo de
Yx/s. As mximas velocidades especficas de formao de etanol (Et,m)
se mantiveram, aproximadamente, constantes entre 4,3 e 4,9 h-1, com G0
entre 40 e 210 g/L. O valor de Et,m (3,4 h-1), entretanto, diminui com
G0 = 230 g/L. Com relao converso em produto (YEt/S), foram obtidos
valores, aproximadamente, constantes (YEt/S ~ 0,49), at G0 de 150 g/L.
Concentraes iniciais de glicose maiores que 210 g/L resultam em diminuio de YEt/S. Tal como descrito por Zachariou e Scopes (1986) para a
enzima livre, a atividade de GFOR (A) em clulas ntegras de Z. mobilis,
mostrou ser dependente da concentrao de glicose utilizada no cultivo da
bactria. Valores crescentes de atividade foram medidos at G0 = 150 g/L,
condio na qual se verificou o mais alto valor de A (~12,5 U/g de clulas).
Com G0 = 230 g/L, A (3,6 U/L) foi drasticamente reduzido. As menores
atividades de GFOR em clulas ntegras, com G0 >150 g/L, so decorrentes das concentraes elevadas de etanol alcanadas nestes casos (Ex.: G0 ~
210 g/L, Et ~ 94 g/L). Este efeito se deve, provavelmente, a alteraes na
interao enzima/substrato, relacionadas com a formao de hopanoides,
cidos graxos produzidos por Z. mobilis na presena de altas concentraes
intracelulares de etanol, cuja funo a impermeabilizao da parede celular, a fim de proteger o microrganismo da ao solvente do etanol. O processo de biotransformao de glicose e frutose em cido glucnico e sorbitol
foi realizado utilizando clulas provenientes de diferentes condies de cultivo. Nos ensaios com clulas ntegras que apresentavam alta atividade em
GFOR.
Temperatura
Segundo Doelle e colaboradores (1989), a temperatura utilizada para o

crescimento diferente da requerida para a produo de etanol. Zymomonas
216
mobilis apresenta melhor crescimento em temperatura entre 25C e 37C.

A temperatura tima em meios contendo sacarose como fonte de carbono
de 35C, porm a 38C, ocorre uma diminuio de aproximadamente
26% do crescimento e, em temperaturas prximas de 40C, o crescimento
raro, dificultado ou inibindo a produo de etanol (Lee et al., 1989). Quando exposta temperatura da ordem de 60C por 5 minutos, Zymomonas
mobilis sofre inativao irreversvel (Viikari, 1984).
Lee e colaboradores (1989) verificaram o comportamento de duas diferentes cepas de Zymomonas mobilis (ZM1 e ZM4) com relao sensibilidade temperatura de 25C a 40C e observaram que, em temperaturas mais
altas, os rendimentos da biomassa e de etanol decresciam. Porm as velocidades especficas de crescimento, de consumo de substrato e de formao
de produtos no foram afetadas pela temperatura na faixa de pH estudada.
Em estudos feitos por Fieschko e Humphrey (1983), a respeito do efeito
da temperatura sobre o coeficiente de manuteno de Zymomonas mobilis
ATCC 10988, cultivada em processo contnuo com glicose como fonte de
carbono, foi observado que, entre 23C e 33C o coeficiente de manuteno se manteve constante. Com o aumento da temperatura de 30C para
35C foi verificado que o fator real de converso de substrato em clulas
apresentava pouca variao, enquanto o coeficiente de manuteno era sensivelmente afetado.
Borrego e colaboradores (1987) estudaram o efeito da temperatura nos
parmetros cinticos de fermentao por Zymomonas e encontraram, na faixa de temperatura de 25,0C a 35,0C, que a produtividade de etanol permaneceu constante, em aproximadamente 49,0 g/L.h, e que estes valores
diminuram em temperatura menores que 25,0C. Lyness e Doelle (1980)
tambm observaram variao na produo de etanol na faixa de 30,0 a 42,5
g/L, em funo da variao da temperatura em meio utilizando sacarose
(200,0 g/L), sendo que para faixa de temperatura entre 30,0C e 35,0C
encontraram concentraes de etanol de 69,5 g/L para Zymomonas mobilis
Z7 e de 66,1 g/L para Zymomonas mobilis Z10.
Ananthalakshmy e Gunasekaran (1999) produziram etanol com cepas
de Zymomonas mobilis B4286 e dois mutantes (ZML1 e ZML2) obtidos por
meio do tratamento com NTG (N-metil Nnitroso guanidina) e atingiram
a produo mxima de etanol de 55,1; 41,0 e 44,2 g/L, respectivamente em
217
24 horas de fermentao a 30C com sacarose na concentrao de 150,0

g/L, e observaram que os mutantes ZML1 e ZML2 possuem taxas de produo de etanol significativamente menores que a cepa natural.
pH
O pH ideal para o crescimento varia de acordo com a cepa utilizada (Calazans et al., 1989). Estudos ressaltam a importncia do controle de alguns
parmetros de fermentao na formao dos subprodutos para aumentar o
rendimento alcolico (Diez et al., 1991). De modo geral, na literatura consta que a produo de etanol favorecida em valores de pH entre 4,5 e 7,0
e que o controle do pH inicial importante para que se possa maximizar a
produo de etanol e reduzir a formao de outros subprodutos, como biopolmeros e sorbitol (Kannan et al., 1997). Relao similar foi descrita por
Diez e colaboradores (1991), os quais relataram que o controle do pH foi
um fator muito importante na hidrlise da sacarose e, portanto, na formao de etanol, concluindo ainda que os rendimentos fermentativos foram
superiores na fermentao com controle de pH.
Doelle e colaboradores (1989) relataram que o pH, dentro de certos limites (6,5 a 8,0), tem pouca influncia na taxa de desenvolvimento, mas
pode influenciar o nmero total de bactrias, no entanto, valores de pH
extremamente baixos (menores que 4,5) podem levar o microrganismo rapidamente morte.
Lawford e colaboradores (1988) observaram que os maiores valores
de velocidade especfica de crescimento com Zymomonas mobilis ATCC
29191 so obtidos com pH entre 5,5 e 6,5, sendo o pH 6,0, aparentemente,
o timo. King e Houssain (1982), trabalhando com uma cepa diferente Zymomonas mobilis ATCC 10988, concluram que, na faixa de pH 6,0 a 7,5, a
bactria tem um melhor crescimento.
Trabalhos realizados por Calazans e colaboradores (1990) indicaram
que fermentaes em meio de glicose iniciadas em pH no controlado na
faixa de 5,3-6,6 apresentaram bons resultados em termos de rendimento e
produtividade de etanol; porm, os valores obtidos nesses parmetros foram reduzidos drasticamente em pH 4,2.
Na Tabela 8.5, observa-se o efeito da variao do pH sobre alguns parmetros de fermentao para a produo de etanol por 4 linhagens de Zymomonas mobilis (ATCC 10988, ATCC 12526, NRRL B 4286 e IFO 13756).
218
Tabela 8.5 Efeito do pH inicial sobre a produo de etanol por vrias linhagens de Zymomonas
mobilis
pH
Parmetros
fermentativos
4,0
Linhagens
ATCC
10988
ATCC
12526
NRRL B
4286
IFO
13756
P
Su
g/gs
E
2-7
74-4
26-37
0-18
2-2
68-1
21-48
0-16
4-0
85-6
0-23
39-06
3-5
75-0
0-23
34-18
5,0
P
Su
g/gs
E
2-9
ND
ND
28-32
3-2
ND
ND
31-25
4-2
87-5
0-24
41-02
4-4
81-3
0-27
42-97
6,0
P
E
g/gs
Su
3-9
80-6
38-09
0-24
4-0
81-2
0-25
39-06
4-3
0-25
87-5
41-99
4-7
88-1
0-27
45-9
7,0
P
E
g/gs
Su
6-6
82-77
0-40
64-45
6-3
79-0
0-40
64-51
5-2
88-1
0-30
50-29
6-4
92-5
0-35
62-5
P produtividade de lcool % (v/v); Su substrato utilizado % (v/v); g/gs gramas de lcool produzido/
g de substrato utilizado; E porcentagem terico de rendimento; ND no determinado.
Fonte: Gunasekaran; Karanakaran; Kasthuribai (1986)
Oxignio
A habilidade de Zymomonas crescer em presena de oxignio foi observada por Lindner (1977). Portanto, Zymomonas no pode ser considerada
uma bactria anaerbia estrita.
Bringer e colaboradores (1985) investigaram os efeitos do oxignio no
crescimento e metabolismo de Zymomonas mobilis ATCC 29191. Estes autores verificaram que, de fato, a inibio do crescimento celular em culturas
aeradas foi maior com o aumento da concentrao de acar, pelo acmulo
de acetaldedo formado. Estes autores observaram tambm que as velocidades especficas de produo de etanol e do consumo de substrato foram 25%
a 40% menores na presena de oxignio do que em condio de anaerobiose.
Pankova e colaboradores (1985) comprovaram que o declnio da atividade metablica de Zymomonas mobilis em regime descontnuo com alto
suprimento de oxignio foi resultante do acmulo de acetaldedo formado.
A formao de acetaldedo leva a uma diminuio da velocidade mxima
de crescimento e do rendimento em clulas. Ainda, segundo estes autores,
219
a converso do acetaldedo em etanol, pela enzima lcool desidrogenase

(ADH), prejudicada em presena de oxignio. Isso se deve ao fato da
ADH necessitar NADH como cofator, e ao fato de Zymomonas, em aerobiose, priorizar a remoo de oxignio por meio de enzimas protetoras
como NADH oxidase e NADHP oxidase. Estas enzimas, alm de tambm
usarem NADH como cofator, apresentam maior atividade que ADH, acarretando num acmulo do acetaldedo formado.
Concentrao de acar
Zymomonas mobilis precisa de um acar fermentvel no meio de cultura

para o crescimento, podendo ser glicose ou frutose ou ainda, para algumas
linhagens, sacarose (Dadds; Martin, 1973), entretanto, uma maior desvantagem da aplicao da Zymomonas foi apresentada por Stokes e colaboradores (1981) com respeito restrita utilizao dos acares como substrato.
Emprega-se a bactria Zymomonas mobilis, geralmente para produo de
etanol a partir da sacarose, frutose e glicose (Falco de Morais et al., 1993).
Na fermentao em alta concentrao inicial de sacarose, porm, a taxa de
hidrlise deste dissacardeo maior do que o consumo de seus monossacardeos (Parker et al., 1997; Tano et al., 2000). Consequentemente, os monossacardeos acumulam-se no caldo de fermentao e favorecem a formao de subprodutos, como levana, polmero de frutose, que torna o meio
turvo (Ribbons et al., 1962) e sorbitol (Barrow et al., 1984) o que reduz
o rendimento em etanol (Kannan et al., 1997; Parker et al., 1997). Alm
disso, tambm capaz de produzir outros metabolitos em altas concentraes sob condies de cultura adequadas como, por exemplo, acetaldedo,
cido glucnico e cido actico (Belaich; Senez, 1965), gluconato e fructooligossacardeos e pequenas quantidades de alguns lcoois superiores e fenol
(Bekers et al., 1999).
Esta bactria que utiliza a via metablica de Entner Doudoroff fermenta
glicose, frutose e sacarose. Por esta via metablica, a bactria obtm 1 mol de
ATP por mol de glicose, consequentemente deve minimizar os requerimentos energticos de crescimento e manuteno, de modo a conduzir o mximo
de glicose possvel para a produo de etanol (Cromie, Doelle, 1980). Quando glicose e frutose so utilizadas como fonte de carbono, obtido um rendimento superior a 95% em relao ao rendimento terico (Lee et al., 1989),
j que a fermentao produz quase exclusivamente etanol e CO2 (Swings;
220
Deley, 1977). Quando sacarose, um substrato industrialmente disponvel

e de baixo custo, utilizado, o rendimento de etanol representa 75-80% do
valor terico, em funo da formao dos subprodutos (Viikari, 1984).
Dawes e colaboradores (1966) observaram, no meio contendo frutose,
rendimento de massa celular relativamente baixo e crescimento lento. No
meio contendo sacarose, a reduo observada no rendimento da massa celular comparando-se ao crescimento em glicose tem sido atribuda formao de levana (Lee et al., 1989; Ribbons et al., 1962).
Skotnicki e colaboradores (1981) estudaram as velocidades de crescimento e produo de etanol de 11 diferentes cepas de Zymomonas. Os resultados
revelaram que algumas cepas so mais tolerantes a altas concentraes de
acar e de etanol que outras. Das duas cepas selecionadas a CP4 foi superior
ATCC 10988 em todas as condies de crescimento em meio contendo glicose, enquanto no meio preparado com sacarose, o crescimento e a produo
de etanol das duas cepas foram similares, embora a CP4 seja menos produtiva em meio com sacarose e mutaes provocadas no tenham melhorado
significativamente a produo de etanol a partir deste carboidrato.
Lyness e Doelle (1983) estudaram a fermentao descontnua da sacarose com duas linhagens de Zymomonas mobilis e observaram que um aumento na concentrao de sacarose afetou a velocidade especfica de crescimento na linhagem Z10, bem como a atividade hidrolisante da sacarose
para a linhagem Z7, mas no influenciou significativamente a formao de
biomassa. Demonstraram que a hidrlise da sacarose pode ser independente da utilizao da glicose, que, de acordo com a linhagem usada, a hidrlise
da sacarose pode levar ao acmulo de glicose no meio e que a velocidade de
produo de etanol e o tempo de fermentao dependem da velocidade de
catabolismo dos produtos de hidrlise da sacarose.
Viikari e Gisler (1986) observaram baixa velocidade de hidrlise da
sacarose, a qual parece estar associada com a formao de levana, pois Zymomonas mobilis utilizou o substrato inicial para seu crescimento e para favorecer, possivelmente, a atividade da enzima levanasacarase extracelular
(SacB), que converte a sacarose em frutanas com pontes (2-6), formando a
cadeia de levana (Kannan et al., 1993). Essa distribuio da fonte de carbono para o crescimento celular e formao de frutanas tambm foi observada
por Dawes e Ribbons (1966), os quais acompanharam a formao de levana
durante o crescimento da bactria Zymomonas mobilis N.C.I.B. 8938.
221
Wisbeck e colaboradores (1997), em trabalhos realizados com diferentes linhagens desta bactria, relatam rendimentos em etanol superiores a
90%. Estes autores descrevem, entretanto, que altas concentraes iniciais
de glicose, em processo em batelada, levam a significativa reduo da produtividade por causa da inibio pelo substrato.
Na Tabela 8.6, observa-se o efeito da concentrao inicial de acar
sobre alguns parmetros de fermentao para a produo de etanol por 4
linhagens de Zymomonas mobilis (ATCC 10988, ATCC 12526, NRRL B
4286 e IFO 13756).
Tabela 8.6 Efeito da concentrao inicial de acar sobre a produo de etanol por vrias linhagens de Zymomonas mobilis
Acar inicial
% v/v
Parmetros
fermentativos
Linhagens
ATCC
10988
ATCC
12526
NRRL B
4286
IFO
13756
15
P
Su
g/gs
E
6-6
82-77
0-43
68-75
6-3
79-0
65-63
0-44
5-1
88-0
0-31
53-13
6-1
93-3
0-33
63-54
20
P
Su
g/gs
E
5-9
73-0
46-09
0-32
6-1
0-33
75-0
47-65
10-15
89-0
0-46
79-29
8-85
91-0
0-39
69-14
25
P
E
g/gs
Su
5-2
76-0
0-22
32-05
5-5
78-0
0-23
34-38
7-9
84-8
49-38
0-30
7-2
75-6
0-30
45-0
P produtividade de lcool % (v/v); Su substrato utilizado % (v/v); g/gs gramas de lcool produzido/
g de substrato utilizado; E porcentagem terico de rendimento.
Fonte: Gunasekaran; Karanakaran; Kasthuribai (1986)
Bioprocessos fermentativos empregados na

fermentao alcolica por Zymomonas mobilis
Bioprocessos so um conjunto de operaes que vo desde o tratamento da matria-prima, passando pela transformao do substrato em
produto(s), at a separao e purificao do produto obtido; e nesta categoria esto includas as produes industriais do lcool para fins de consumo
humano e combustvel (Pereira Jr., 1999).
222
A importncia deste tipo de processo tem relao direta com os diversos setores da agroindstria, destacando-se entre estas a alcooleira (Belluco,
2001). Segundo Robinson, (1980), a fermentao, em termos gerais, um
processo de transformao bioqumica em que se potencializa deliberadamente o crescimento dos microrganismos que consomem certa quantidade
de substrato e enriquecem o meio de cultivo com os produtos de seu metabolismo. A fermentao tem como efeitos principais o aumento do valor
nutricional e modificaes desejveis na textura e aroma das matrias-primas e dos alimentos produzidos por este tipo de biotecnologia.
Quanto disponibilidade de gua presente no meio, os processos fermentativos podem ser classificados em fermentao submersa e semisslida. Dependendo do tipo de produto a ser obtido, a fermentao pode ser
realizada com ou sem aerao (Pereira Jr., 1999; Bertolin et al., 1998a). Na
fermentao alcolica, o processo acontece em anaerobiose, podendo ser
submerso como ocorre industrialmente na produo de lcool de cana-de-acar ou semisslida, como no processamento artesanal e tradicional de
algumas bebidas fermentadas (Maccari Jr., 1997).
Na produo de materiais via fermentao submersa ou semisslida,
dependendo da natureza do produto a ser obtido, existe a necessidade do
conhecimento e otimizao dos seguintes parmetros: composio do meio
de cultivo, temperatura, pH, condies de aerao e agitao, a presena de
indutores e repressores; alm claro da escolha adequada do microrganismo a ser usado (Bertolin et al., 1998a).
Em relao escolha do mtodo de fermentao, estudos como o de
Bertolin e colaboradores (1998b), que investigaram a hidrlise do amido
de farelo de trigo via sistema submerso e semisslido; indicam haver equivalncia de resultados para os dois tipos de tcnicas, ficando a definio
por conta de critrios referentes aos menores custos de produo e maior
qualidade do produto formado a ser obtido, conforme o sistema escolhido.
Quanto conduo dos processos, estes podem ser: em batelada, simples e alimentada e, sistema contnuo. No sistema em batelada, o substrato
disponibilizado em sua totalidade no incio do processo (simples) ou ao
longo deste (alimentada), sem haver retirada do produto. Enquanto no contnuo, ocorre uma oferta gradativa de substratos e h retiradas peridicas do
produto formado (Pereira Jr. 1999).
223
Os processos de fermentao alcolica so frequentemente conduzidos pelo sistema em batelada, onde no tipo submerso as clulas ficam em
suspenso (Kaseno; Kokugan, 1997). A fermentao em batelada, na qual
a formao do produto est diretamente relacionada ao microrganismo
biocatalisador, tem como principal desvantagem, a forte inibio de grande nmero de linhagens dos microrganismos pelo produto e mesmo pelo
substrato. Enquanto no processo de fermentao contnuo, usando-se clulas de leveduras imobilizadas, tem-se como vantagem a reduo de custos
operacionais e de capital, alm da alta produtividade em etanol em longos
perodos de fermentao (Tosta, 2004).
Uma estratgia eficiente para evitar a inibio da atividade metablica
pelo produto formado, no caso de bioprocessos para produo de lcool,
onde o acmulo de etanol durante longo perodo acarreta progressivos decrscimos do crescimento celular e produtividade, a contnua remoo do
lcool produzido; o que pode ser conseguido ao usar o sistema semicontnuo (Kaseno; Kokugan, 1997).
Os processos contnuos so favorecidos, em muitos aspectos, na indstria de fermentao por muitas razes, incluindo as vantagens econmicas
de ter operaes ininterruptas por longos perodos. Estes processos promovem substanciais melhorias na eficincia do processo fermentativo alcolico e subsequente aumento da produtividade e menores custos operacionais
(Kourkoutas et al., 2005).
Tipos de bioprocesso fermentativo empregados

na fermentao alcolica por Zymomonas mobilis
Pesquisadores vm realizando estudos da tecnologia necessria para produo de lcool utilizando a cana-de-acar e seus resduos, visando diminuir o custo de produo, otimizar as condies de bioconverso etanlica,
e selecionar os microrganismos com maior produtividade de etanol (Tauk,
1976; Pereira Jr.; Menezes et al., 1998; Venturini-Filho; Cereda, 1998; Cabrini; Gallo, 1999; Ribeiro; Horii, 1999; Dutra et al., 2001; Ludwig; Oliva-Neto, 2001; Laluce et al., 2002).
A produo de etanol pela bactria Zymomonas mobilis por meio de diferentes regimes de cultivo tem sido descrita na literatura. Sem dvida, os
regimes de cultivo mais estudados so o descontnuo e o contnuo.
224
Regime descontnuo
Os principais resultados em regime descontnuo encontrados na literatura, utilizando glicose como fonte de carbono, demonstram que, neste
tipo de processo, apesar da inibio causada pela concentrao de substrato,
altas concentraes de etanol podem ser obtidas com Zymomonas mobilis.
Lee e colaboradores (1989) e Rogers e colaboradores (1982) em trabalho
realizado com Zymomonas mobilis ZM4, utilizando diferentes concentraes iniciais de glicose, em regime descontnuo, observaram que a mxima
velocidade especfica de crescimento foi significativamente afetada pelo
aumento da concentrao de glicose. Nestes trabalhos, foi observado que
concentraes iniciais de glicose maiores que 100 g/L reduziram consideravelmente a velocidade mxima especfica de crescimento. No entanto,
estes autores no observaram alterao das velocidades especficas de consumo de substrato ( 10 h-1) e de produo de etanol ( 5 h-1). Foi verificada
ainda uma diminuio do fator de converso de glicose em biomassa com o
aumento da concentrao inicial de glicose, mas este aumento no alterou
o rendimento em etanol ( 95%)
Segundo Rogers e colaboradores (1982), o rendimento em etanol normalmente maior que 95%; o fator de converso de glicose em biomassa
varia de 0,015 a 0,050, dependendo da concentrao inicial de substrato e a
produtividade em torno de 5 a 7 g/L.h.
Silman (1984), trabalhando com fermentao em regime descontnuo
alimentado, com a linhagem CP1, verificou que diferentes velocidades de
alimentao do meio no influenciam significativamente o rendimento, a
produtividade volumtrica e a concentrao final de etanol. Este autor observou que, para a linhagem CP1, concentraes maiores que 8% (p/p) de
glicose inicial resultaram em inibio pelo substrato. O processo foi, ento,
iniciado com 8% de glicose e o incio da alimentao se deu aps 4 horas, com
o volume de alimentao correspondente a 36% do volume total do fermentador. A concentrao de clulas obtida ao final do processo (21 a 29 horas)
ficou em torno de 4,0 g/L e a produtividade em etanol de 4,6 a 5,2 g/L.h.
Regime contnuo
Estudos conduzidos usando duas tcnicas para o processo contnuo: o

reciclo de clulas (Lawford; Rousseau, 2003) e o uso de clulas imobilizadas
225
(Amin; Khalaf; Allah, 1992) apresentaram excelentes resultados em laboratrio, entretanto os mesmos autores observaram que o custo excessivamente elevado para o uso em processos industriais.
Lawford e Rousseau (2003) demonstraram que, em cultivo contnuo
de Zymomonas mobilis linhagem ATCC 39676, medida que os valores de
velocidade de duplicao foram elevados de 0,05 a 0,20 h-1, os valores
de biomassa e etanol tambm aumentaram.
Hermans (1992), trabalhando com fermentao em regime contnuo,
com a linhagem Zymomonas mobilis ATCC 29191, utilizando concentraes de glicose (150,0 170,0 e 200,0 g/L) obteve uma produtividade mdia
de 4 g/L.h, com rendimentos em etanol em torno de 98% e velocidade especfica de produo de aproximadamente 1,1 h-1.
Costa e colaboradores (2001) estudaram a fermentao contnua por
Zymomonas mobilis ATCC 29191 em concentraes elevadas de sacarose
e concluram que a melhor condio para fermentao de sacarose a 10%
(p/v) mostrou ser na taxa de diluio de 0,21 h-1. Entretanto, para a fermentao de sacarose a 20% (p/v), mesmo em taxa de diluio baixa, a cultura
mostrou um perodo prolongado de oscilaes, indicando dificuldades, seno impossibilidade, em atingir o estado estacionrio.
Segundo Ingram (1984), no Canad, no Biohol, existe em funcionamento uma planta-piloto para a produo de etanol utilizando serragem hidrolisada por via cida e fermentao por Zymomonas mobilis e no Japo, Austrlia e Nova Zelndia existem vrias plantas-piloto operando em sistema
contnuo utilizando diferentes linhagens de Zymomonas para a produo de
etanol. Segundo esses autores, este microrganismo pode ser especialmente
til em pases como o Brasil e a ndia, levando em considerao a caracterstica termotolerante de Zymomonas mobilis.
Fermentao alcolica utilizando substratos alternativos

de baixo custo comercial
A matria-prima utilizada na fermentao alcolica
Qualquer material vegetal que contenha acar ou carboidratos, de forma direta ou indireta, pode ser matria-prima para obteno de etanol, mas
226
para que haja viabilidade econmica preciso considerar-se seu volume de

produo, o rendimento industrial e o custo de fabricao; assim sendo, um
substrato ou matria-prima considerada apropriada quando nestas estiverem includas nutrientes economicamente atraentes, no apenas do ponto
de vista do valor comercial como um todo, mas tambm quanto aos custos de
seu armazenamento, pr-tratamento, esterilizao, processamento, entre
outros (Aquarone et al., 1987; Greasham; Inamine, 1986).
Dada a importncia dos carboidratos no metabolismo de qualquer via
celular, no por acaso que eles so a principal matria-prima nas fermentaes. Devem estar presentes compostos nitrogenados, alm de pr-biticos (fatores de crescimento), como vitaminas e coenzimas. Tambm
indispensvel presena de fsforo, sob a forma de fosfatos, o qual costuma ser adicionado aos meios, onde exerce ao tamponante ou inibidora de
flutuaes de pH (Tano; Buzato, 2003).
Recentes dados mostram que, atualmente, a produo fermentativa
de etanol, a partir de recursos renovveis, tem recebido maior ateno por
causa do aumento da escassez e elevados preos de mercado do petrleo
(Gokhale; Sivaramakrishnan, 1986; Nigam, 1999; Amutha, Gunasekaran,
2001). O elemento chave no custo dominante da produo fermentativa de
etanol combustvel o substrato/matria-prima, embora alguns amidos
fermentveis e sacarose sejam facilmente obtidos de produtos agrcolas tais
como mandioca e cana-de-acar, respectivamente.
A expanso de alternativas de uso de substratos de baixo valor oferece
uma excelente perspectiva para a reduo dos custos de produo e aumento da utilizao do bioetanol, quer como aditivo ou combustvel propriamente dito (Lee, 1997; Amutha; Gunasekaran, 2001).
Na obteno de um produto biotecnolgico, a matria-prima pode representar at 75% do custo total de produo, o que tem determinado um
crescente interesse no aproveitamento de resduos agroindustriais e seus
subprodutos como: o bagao, melao e vinhoto da cana-de-acar, o sabugo de milho, o farelo de trigo e a palha de arroz. O interesse decorre do
fato destas matrias-primas no possurem custos de produo associados
diretamente; sendo uma forma de agregar valor a resduos que se formam
em abundncia, alm de solucionar um srio problema ambiental para
as indstrias que o acmulo desses resduos (Cereda, 1994; Pereira Jr,
1999).
227
Fermentao alcolica utilizando substratos alternativos

de baixo custo comercial por Zymomonas mobilis
Neste novo milnio, a sociedade tem se tornado mais consciente da necessidade de implementar tecnologias baseadas em matrias-primas renovveis e adequadas, tanto sob o ponto de vista energtico, quanto o de preservao do meio ambiente. O domnio tecnolgico na fabricao de produtos
de baixo custo provenientes de matrias-primas e resduos da agroindstria,
com alto valor agregado como o lcool, determinante para insero de nosso pas numa parcela significativa do mundo dos agronegcios.
Apesar dos inmeros trabalhos realizados utilizando glicose como matria-prima para a fermentao com Zymomonas, evidente que a glicose
como matria-prima representa um custo muito elevado para fermentaes
industriais, tornando-se assim, importante investigar a produo de etanol
por Zymomonas mobilis a partir de substratos baratos e disponveis em grandes quantidades (Ernandes; Garcia-Cruz, 2011b).
Vrias pesquisas esto sendo desenvolvidas para aumentar o rendimento de etanol juntamente com o emprego de tcnicas mais econmicas de
produo, recuperao e purificao, visando diminuir o custo total do
processo. Em nvel experimental, o uso de diversas matrias-primas como
substratos de baixo custo tais como sacarose, amido, amido hidrolisado, xarope de milho e melaos residuais da indstria aucareira tm sido pesquisadas para a produo de etanol por Zymomonas mobilis.
Millichip e Doelle (1989) utilizaram sorgo modo a seco como substrato
para Zymomonas produzir lcool em larga escala (586.000 litros), obtendo 13% (v/v) de etanol. Alm do sorgo, o milho e outras matrias-primas
amilceas foram testadas por Doelle e colaboradores (1989) para a fermentao em escala industrial (64.000 litros), utilizando um sistema de inculo
em cascata que substitui o sistema de recirculao de biomassa e, portanto,
reduz os custos envolvidos em centrifugao e reciclo de clulas de Zymomonas mobilis.
Amin e Khalaf Allah (1992) testaram Zymomonas mobilis ATCC 396769
para fermentar pedaos de beterraba aucareira (185 g/L) em fermentao
em estado slido obtendo produtividade de 12 g/L.h e concentrao de etanol de 130 g/L.
Park e Baratti (1993) utilizaram uma cepa osmotolerante (Zymomonas mobilis SBE15), mutante de Zymomonas mobilis ATCC 32821, para
228
fermentao de melao de beterraba aucareira previamente hidrolisado

enzimaticamente, em processo contnuo de dois estgios. O fermentador
operou 18 dias, obtendo-se concentrao de etanol de 60 g/L e 97% de converso de acar.
Abaixo, segue-se uma descrio dos principais substratos que podem
ser utilizados para a fermentao alcolica por Zymomonas mobilis.
Cana-de-acar como matria-prima na fermentao alcolica por
Zymomonas mobilis
Numa avaliao global do setor sucroalcooleiro brasileiro, verifica-se um subaproveitamento dos potenciais da cana-de-acar. A cana-de-acar uma planta da famlia das gramneas (Saccharum officinarum L.)
cultivada nas regies tropicais e subtropicais e no Brasil, ela a base para a
produo de acar, lcool e outros subprodutos.
Seus principais constituintes esto indicados na Tabela 8.7. Entre as
substncias encontradas na cana-de-acar, a mais importante a sacarose, que um dissacardeo formado por uma molcula de glicose e uma de
frutose. Alm de etanol, da sacarose podem tambm ser produzidos, por
rota qumica ou bioqumica, poliis, cidos orgnicos, steres de sacarose,
enzimas, biopolmeros, dentre outros.
Tabela 8.7 Constituintes da cana-de-acar

Constituintes
Slidos solveis ( %)
Acares
75-93
Sacarose
70-91
Glicose
02-04
Frutose
02-04
Sais
03-05
cidos orgnicos
1,5-4,5
cidos inorgnicos
1,0-3,0
Protenas
Amido
Canas
Ceras e graxas
Corantes
Fonte: Caderno Copersucar (1988).
0,5-0,6
0,001-0,05
0,3-0,6
0,05-0,15
03-05
229
O mercado sucroalcooleiro movimentou cerca de R$ 36 bilhes anualmente (Tabela 8.8), correspondendo ao notvel valor de 3,5% do PIB brasileiro, com faturamentos diretos e indiretos nas 302 unidades produtoras
(128 no estado de So Paulo), no ano de 2003 (Jornal da Cana, janeiro 2004).
Este setor faz do Brasil o maior produtor mundial de cana-de-acar, e o
nico pas do mundo a implementar, em larga escala a produo de um
combustvel alternativo ao petrleo.
Atualmente, o lcool reconhecido mundialmente por suas vantagens
ambientais, sociais e econmicas, e os pases desenvolvidos vm investindo
maciamente na produo deste biocombustvel, como o caso dos Estados
Unidos da Amrica do Norte, Sucia e Canad.
No Brasil, os estados de So Paulo, Alagoas, Pernambuco e Rio de Janeiro so os que mais se beneficiaram. O agronegcio brasileiro responsvel por 20,6% do Produto Interno Bruto (PIB) brasileiro e gera 14% dos
empregos totais do pas. Aqui, destaca-se o agronegcio da cana-de-acar,
que rene 6% dos empregos agroindustriais brasileiros e responsvel por
35% do PIB e do emprego rural do estado de So Paulo.
De acordo com o Relatrio de Produo Agrcola do Instituto Brasileiro
de Geografia e Estatstica (IBGE), em 2007 a cultura da cana-de-acar
cresceu 7% em relao ao ano anterior. Esse crescimento informa o IBGE,
resultado do surgimento de novas reas plantadas. O estado de So Paulo,
onde a produo de cana mais relevante, responde por aproximadamente
57% de toda a produo nacional. De acordo com o relatrio, em 2007, So
Paulo dever crescer 5,3% em relao ao obtido em 2006. Justifica-se esse
incremento, sobretudo, pelo lado do consumo interno e pelas expectativas
do crescimento da demanda do mercado mundial.
Uma vantagem importante do Brasil em relao s diversas economias
mundiais a abundncia de terra agriculturvel. So poucos os pases em
desenvolvimento que ainda possuem territrio rural a ser aproveitado
em larga escala. Segundo os dados obtidos pela Unica, (Unio da Agroindstria Canavieira de So Paulo), a agricultura brasileira utiliza menos de
10% da superfcie do pas. A maior parte do territrio ocupada por pastagens e engorda de animais (35%). As florestas correspondem a 55% e a
cana-de-acar a 0,7%, com produo de 455 milhes de toneladas na safra
em curso de 2006 e 2007, sendo recorde histrico.
A cana-de-acar pode ser uma fonte alternativa para a produo de
etanol a um baixo custo por ser considerada abundante e de fcil disponibi-
230
lidade no pas. Cada hectare de cana plantada produz de 50 a 100 toneladas

de cana. A proporo do caldo de cana produzido de 500 a 1.000 litros/
tonelada de cana, mdia de 850 litros/ tonelada de cana, dependendo da
embebio na moenda; 25 a 40 litros de melao por tonelada de cana. Cada
tonelada de cana produz cerca de 130 kg a 140 kg de acar (Unica).
A expanso da rea plantada de cana-de-acar, entre 2000 e 2005, cresceu 14%, passando de 49 mil km para 56 mil km2. Apesar de ainda estar
concentrada no estado de So Paulo, a produo de cana-de-acar e lcool
cresce rapidamente em outros estados. Em Minas Gerais, por exemplo, a
produo de cana cresceu de 21,6 para 24,5 milhes de toneladas ou 13,5%
entre as safras de 2005 e 2004 e de 2006 e 2005. De acordo com informaes do Sindicato da Indstria do Acar (Sindacar), em Minas Gerais,
espera-se que a produo de cana-de-acar atinja 28,7 milhes de toneladas na safra de 2006 e 2007. Projeta-se que, at 2007, mais quatro usinas
de acar, com investimentos estimados de R$ 500 milhes, entraro em
operao no estado.
Pelas estimativas da Unica, a produo de cana-de-acar na Regio
Centro-Sul do pas dever atingir 375 milhes de toneladas na safra de
2006 e 2007, com crescimento de 11,3% em relao aos 336,8 milhes da
safra de 2005 e 2006. Sero produzidas 25,5 milhes de toneladas de acar
equivalente, com um aumento de 15,8% em comparao aos 22 milhes alcanados na safra do ano anterior. A produo de lcool anidro e hidratado
dever chegar a 15,6 bilhes no Centro-Sul do pas, com uma elevao de
8,9% em relao safra de 2005 e 2006.
O Brasil e os Estados Unidos so os lderes mundiais na produo de
etanol, utilizando como matria-prima o acar e milho, respectivamente.
Apesar do incentivo produo de etanol de milho nos EUA, apoiado por
foras polticas, algumas associaes de classe e inclusive o USDA (United
States Depatment of Agriculture), cientistas da Universidade de Cornell e
de Berkeley tm demonstrado que, tanto do aspecto energtico como ambiental, a produo de etanol-milho no racional. Alm disso, importante ressalvar para o fato que os custos de produo do lcool de cana so
muito mais baratos do que os de milho (Andreoli, Souza, 2006). Na Tabela
8.8, encontram-se alguns parmetros comparativos dos custos estimados
de produo de etanol de milho nos Estados Unidos e de cana-de-acar
no Brasil.
231
Tabela 8.8 Sumrio dos custos estimados de produo de etanol (U$/ galo)
Item de custos
EUA
EUA
EUA EUA
EUA
EUA
Brasil Europa
Acar Acar
Milho Cana Beterraba Melao
Cana Beterraba
cru refinado
Matria-prima
0,53
1,48
1,58
0,91
3,12
3,61
0,30
0,97
Processamento
0,52
0,92
0,77
0,36
0,36
0,36
0,51
1,92
Custo Total
1,05
2,40
1,35
1,27
3,48
3,97
0,81
2,89
Alm dos fatores geogrficos vantajosos para o plantio da cana-de-acar no Brasil, importante ressaltar ainda que, por causa de sua composio qumica (compostos nitrogenados, vitaminas, coenzimas e acares
fermentescveis), alguns autores consideram-na como matria-prima adequada para a fermentao alcolica a partir de Zymomonas mobilis (Borsari
et al., 2003).
Caldo de cana-de-acar
Diante dos fatores geogrficos vantajosos para o plantio da cana-deacar no Brasil, justifica-se que o caldo da cana, obtido da cana-de-acar,
destaca-se como uma fonte alternativa para a produo de etanol a um baixo custo por ser abundante e de fcil disponibilidade no s no pas como na
regio de So Jos do Rio Preto, pertencente ao estado de So Paulo, e ainda,
considerada uma matria-prima adequada para as fermentaes com Zymomonas mobilis em virtude de sua composio qumica (alto teor de acares, nitrognio, vitaminas e sais minerais) (Ernandes; Garcia-Cruz, 2010).
Conforme Luiz da Cmara Cascudo (1971), o caldo de cana (garapa)
um refresco cujo consumo h muito se universalizou no pas, particularmente nas pocas de vero, fazendo parte tambm de uma diversidade de
prescries na medicina popular, como, por exemplo, acontece no Nordeste, onde se acredita que possua qualidade hemosttica e cicatrizante e excelente galactognio.
O caldo de cana uma suspenso coloidal cuja cor, que varia de verde-escuro a marrom, resulta da presena de substncias diversas, como clorofila, antocianinas, xantofilas e carotenos. Sua opacidade causada por
coloides, protenas, pentosanas e sais inorgnicos como fosfatos, xidos de
clcio, ferro e magnsio. Contm ainda terra, bagacilho e goma (Fioravanti,
2000; Kitoko et al., 2004).
232
O caldo de cana-de-acar comercial uma matria-prima consumida

in natura no Brasil e considerado de baixo custo comercial. Soccol e colaboradores (1990) relataram que a composio qumica do caldo de canade-acar apresenta: 74,5% a 82,0% de gua; 14,0% de hidratos de carbono;
10,0% de fibras; 0,4% de substncias nitrogenadas. As substncias slidas
representam 18,0 a 25,0% do total de sua composio. A composio do
caldo de cana-de-acar pode ser visualizada na Tabela 8.9.
Gunasekaran e colaboradores (1986) estudaram o efeito de diferentes
meios (sinttico, caldo e melao de cana-de-acar) para a produo de etanol, com diferentes linhagens Zymomonas mobilis e os resultados obtidos esto representados na Tabela 8.10, onde pode ser observado que os melhores
rendimentos foram obtidos com o caldo de cana-de-acar. Das linhagens
testadas, apenas a NRRL B 4286 produziu mais etanol quando foi usado o
meio sinttico. Com Zymomonas mobilis ATTCC 10988, o rendimento de
etanol foi 82-94%, aps 48 horas de fermentao.
Duarte (1995) analisou o efeito da lecitina de soja e do destilado do desodorizado do leo de soja (DDOS) na fermentao da sacarose e do caldo de cana por Saccharomyces cerevisiae e por Zymomonas mobilis CP4 em
cultura de batelada. Com o acar redutor total em valor nominal de 15%
Tabela 8.9 Composio do caldo de cana-de-acar

Composio centesimal do caldo de cana-de-acar
Elementos (%)
Percentagem dos componentes
74,50
Slica (SiO2)
Potssio (K2O)
Sdio (Na2O)
Clcio (CaO)
Magnsio (MgO)
Ferro (Fe2O3)
0,25
0,12
0,01
0,02
0,01
traos
Cinzas
0,50
Fsforo (P2O5)
Sulfatos (SO3)
Cloretos (Cl)
Celulose
0,07
0,02
traos
5,50
Fibra
10,0
Sacarose
12,50
Matrias nitrogenadas
0,40
cido asprtico
cido ntrico
0,20
0,01
0,06%
Amonaco
Corpos xnticos
traos
traos
gua
Nitrognio total
Fonte: Soccol e colaboradores (1990).
233
Tabela 8.10 Efeito da concentrao inicial de acar sobre a produo de etanol por vrias linhagens de Zymomonas mobilis
Substrato
Linhagens
Parmetros
fermentativos
ATCC
10988
ATCC
12526
NRRL B
4286
IFO
13756
Meio
sinttico
P
Acar inicial
Su
g/gs
E
5-9
46-09
0-32
73-0
20-0
6-1
20-0
75-0
47-65
0-33
10-15
89-0
20-0
79-29
0-46
8-85
20-0
69-14
0-39
91-0
Cana-de-acar
P
Acar inicial
Su
g/gs
E
10-3
18-0
89-4
0-48
95-0
10-3
18-0
89-4
0-48
95-0
9-2
18-0
79-86
0-42
97-2
10-3
89-4
97-2
0-47
18-0
Melao
P
Acar inicial
Su
g/gs
E
3-05
10-0
ND
47-66
ND
2-9
10-0
45-31
ND
ND
3-29
10-0
ND
51-41
ND
1-97
10-0
ND
30-78
ND
P produtividade de lcool % (v/v); Su substrato utilizado % (v/v); g/gs gramas de lcool produzido/ g de substrato utilizado; E porcentagem terico de rendimento; ND no determinado. Fonte:
Gunasekaran e colaboradores (1986).
(p/v) e sem adio de suplemento lipdico, os acares no foram eficientemente utilizados e os resultados para Saccharomyces e Zymomonas, num
meio contendo sacarose e caldo de cana foram, em mdia, respectivamente:
eficincia de converso (YE con.) 12,55 e 20,54%; taxa especfica de crescimento mximo (Mmax.) 0,25 e 0,20 h-1. Com adio de lecitina de soja ou
DDOS a 0,01% (v/v) em sacarose e caldo de cana-de-acar os resultados
para Saccharomyces ou Zymomonas foram, em mdia, respectivamente: YE
con. 13,69 e 26,15%, enquanto os valores de Mmax. foram: 0,24 e 0,22 h-1
e Yx/s: 0,025 e 0,012.
Cao (1999) realizou um estudo utilizando o planejamento fatorial de 2
nveis equidistantes de 3 variveis 23 para determinar as melhores condies
de cultivo quanto a temperatura (25 e 35C), agitao (0 e 150 rpm) e concentrao de acares redutores totais no caldo de cana (100,0 e 200,0 g/L)
e, 3 repeties no ponto central, onde a temperatura foi de 30C, agitao
de 150 rpm e concentrao de acar redutor total no caldo de cana, usado
como substrato para a produo de sorbitol e etanol, foi de 150,0 g/L. Observou-se que altas concentraes de acar no caldo de cana estimularam
234
a produo de sorbitol e etanol. Os cultivos estticos proporcionaram os

melhores valores de produo de sorbitol, porm, os melhores valores de
etanol foram encontrados em cultivos com agitao de 150 rpm. Em relao s temperaturas testadas verificou que estas no foram uma varivel
significativa para a produo de sorbitol e etanol.
Tano e Buzato (2003) avaliaram a produo de etanol em caldo de cana
fermentado por Zymomonas mobilis com alta concentrao inicial de acar
(150,0 g/L), rico em sais minerais, adicionado de 5,0 g de extrato de levedura e incubado a 28C, durante 48 horas a 180 rpm, num pH de 5,4. Neste
meio, observou-se a presena de etanol e foi constado que este reduziu a
formao de mais etanol, porm no afetou a produo de levana nem o
coeficiente de produtividade, quando relacionado biomassa (g biomassa/
g acar consumido). Estes mesmos pesquisadores observaram que alguns
dos componentes presentes no caldo de cana-de-acar inibem o crescimento e a fermentao por Zymomonas mobilis. Os nveis relativamente elevados de alguns sais inorgnicos, especialmente cloreto de potssio e alguns
ons como clcio e magnsio, apresentam um efeito inibidor significativo
na fermentao, alm da competio de outros microrganismos que progrediram nele.
Borsari (2004) estudou diferentes condies de fermentao por Zymomonas mobilis CP4, por meio de delineamentos estatsticos variando a concentrao e tipo de substrato, forma de cultivo, suplementao com cido
pantotnico, extrato de levedura, cloreto de sdio e a tcnica de permeabilizao celular e observou que o caldo de cana-de-acar estimulou a produo de biomassa, sorbitol e etanol.
Melaos de cana-de-acar
Segundo Resoluo n.12 D.O. de 24/07/1978 do CNNPA (Comisso

Nacional de Normas e Padres para Alimentos) que estabeleceu os padres de identidade e qualidade para os alimentos (e bebidas) em todo o
territrio brasileiro, melao o lquido que se obtm como resduo de fabricao do acar cristalizado, do melado ou do refino do acar bruto e
deve ser designado com a denominao de melao seguido do nome da
substncia de origem, como por exemplo, melao de cana.
No Brasil, so produzidos cerca de 17,9 milhes de toneladas de melao
de cana-de-acar por ano durante a fabricao do acar. Por causa de sua
235
composio rica em acares fermentescveis, seu baixo custo (R$ 0,15/kg)

e alta disponibilidade no territrio brasileiro, o melao de cana-de-acar
tem sido sugerido como substrato para melhorar e reduzir custos na produo de diversos produtos, como por exemplo, de cido ltico pelo Lactobacillus curvatus e para produo de etanol a partir de Zymomonas mobilis
(Lima, 1975).
O melao um subproduto do processo de extrao e refinao de sacarose, quer seja de cana ou beterraba, o qual pode ser utilizado como matria-prima para a produo de etanol por fermentao. O melao de cana-de-acar caracteriza-se por apresentar maior contedo de vitaminas, ao
passo que o melao de beterraba mais rico em nitrognio e minerais. Ambos contm aproximadamente 50% de acar, sendo a maior parte sacarose.
A composio mdia do melao de cana-de-acar corresponde a 20%
de gua; 72% de constituintes orgnicos dos quais 62% correspondem aos
acares (sacarose, glicose, frutose, ou acar invertido e rafinose), 10% de
no acares (material nitrogenado, cidos livres e combinados e substncias gomosas solveis) e 6% de constituintes inorgnicos (xidos de silcio,
potssio, clcio, magnsio, sdio, ferro, fsforo e alumnio, alm de resduos de soda, carbonatos, sulfatos e cloretos) (Soccol et al.,1990).
A composio do melao depende da variedade de cana-de-acar utilizada, portanto, fatores como: idade, limpeza, maturao, sistema de cultivo, adubao, tratos culturais e condies climticas, alm dos processos
de fabricao normais utilizados nas diversas usinas conforme pode ser observado na Tabela 8.11.
Doelle e Greenfield (1985) detalharam ainda mais estes fatores que
influenciam a composio do melao, aos quais acrescentaram: natureza
da matria-prima (cana de acar, beterraba etc.); processo de extrao do
caldo; sistema de clarificao, evaporao e cozimento; sistema de resfriamento; sistema de turbinagem; tipo de acar e condies tcnico-econmicas da regio aucareira.
Segundo Kaseno e Kokugan, (1997), o melao resultante da fabricao
de lcool pode conter uma srie de impurezas advindas de processos de caliao, sulfitao e fosfatao aplicados ao caldo de cana, os quais promovem a formao de um grupo (floco) de precipitados de impurezas, estando
neste includos os agentes de colorao (corantes) e ao se adotar este tipo
de tratamento tm-se como resultado um licor negro (black strap) conten-
236
Tabela 8.11 Variabilidade de composio do melao em Usinas de Acar

Valores observados
Elemento
So Paulo
Mdio
Mnimo
Alagoas
Mximo
Mdio
Mnimo
Mximo
gua (%)
17,3
8,2
26,8
Slidos totais (%)
82,7
73,2
91,8
Brix (%)
80,0
65,0
88,0
78,61
76,77
83,30
Pureza (%)
65,0
56,0
76,0
46,54
40,41
55,67
Sacarose (%)
52,0
47,0
64,0
Glicose (%)
12,0
6,0
20,0
Frutose (%)
9,0
5,0
17,0
Acares redutores (%)
6,0
4,0
12,0
16,20
14,45
18,03
Acares totais (%)
65,6
52,1
72,1
54,73
51,11
61,09
0,0
2000
Gomas (ppm)
Ph
Cinzas (%)
6,3
5,0
6,8
3,5
7,0
P2O5
0,05
0,01
0,15
0,07
0,02
0,14
K2O
2,1
1,23
2,68
3,51
2,93
4,52
CaO
0,36
0,14
0,73
1,36
0,93
2,03
MgO
0,12
0,03
0,60
1,03
0,60
1,31
SiO2
0,58
0,56
0,62
F2O3
0,32
0,28
0,56
SO3
1,17
1,0
1,19
Cl
0,18
0,14
0,28
Na2O
0,12
0,11
0,19
Varivel
Varivel
Varivel
Vitaminas A1, B1 e B2
Fonte: Copersucar (1988).
do impurezas como sais inorgnicos, acares no fermentveis, cinzas de

sulfatos e corantes.
O melao contm uma srie de impurezas como sais inorgnicos, cdmio, acares no fermentveis e resduos sulfatados, incluindo substncias corantes; oriundas entre outros, do prprio tratamento aplicado
cana-de-acar na produo do acar e do solo onde esta foi cultivada e
que interferem na produtividade em etanol e viabilidade celular dentro do
bioprocesso (Prado-Filho et al., 1998).
237
Alm do melao de cana-de-acar existe tambm o melao de alta qualidade (HTM) que pode ser usado como substrato para produo de etanol.
HTM definido como um xarope clarificado, parcialmente invertido para
evitar a cristalizao e evaporado a 85 Brix. A composio do melao de alta
qualidade difere notavelmente da composio do melao tradicional. Possui
alto contedo de acares o que o faz muito interessante para a produo
de lcool. O contedo de P2O5, K2O, MgO, CaO e nitrognio mnimo
comparado com a do melao de cana e de beterraba (Cromie; Doelle, 1980).
Gunasekaran e colaboradores (1986) estudaram o efeito da adio de
melao de cana-de-acar em meios de cultivo para a produo de etanol,
com diferentes linhagens Zymomonas mobilis. As linhagens ATCC 10988 e
(3,05% v/v) a NRRL B 4286 (3,29% v/v) mostraram mxima produtividade enquanto IFO 13756, mnima produtividade (1,97% v/v). A partir desses resultados, a performance de Zymomonas mobilis ATCC 10988 foi mais
bem estudada em diferentes concentraes de acares presentes no melao
de cana-de-acar. A mxima produo de etanol (3,35% v/v) foi com 15%
de concentrao inicial de acar e abaixo dessa concentrao, a produo
de etanol diminuiu significativamente. Em geral, os autores concluram
que a habilidade das linhagens de Zymomonas mobilis produzirem etanol
a partir de melaos foi menor quando comparada com os outros substratos
(meio sinttico e cana-de-acar).
Resduos lignocelulsicos como matria-prima na fermentao
alcolica por Zymomonas mobilis
Devemos lembrar que a produo mundial de etanol no realizada com

a mesma matria-prima; para cada regio existem peculiaridades geogrficas a serem observadas, como o caso do milho nos EUA, beterraba na
Europa e a cana-de-acar no Brasil, Mxico e ndia.
H que se ressaltar que as matrias-primas de natureza lignocelulsica
vm ganhando cada vez mais ateno dos pases avanados, verificando-se fortes investimentos em desenvolvimento tecnolgico para o aproveitamento integral desses recursos abundantes em nosso planeta.
A importncia do aproveitamento de resduos lignocelulsicos (agroindustriais e florestais) se revela ainda quando identificamos grandes centros
de pesquisa internacionais de elevada reputao dedicando-se exclusivamente ao tema (Chum; Overend, 2001; Mielenz, 2001; Pereira Jr., 2005).
238
Os resduos lignocelulsicos so os materiais orgnicos mais abundantes da biosfera, representando aproximadamente 50% da biomassa vegetal
e podem ser usados como matria-prima em processos industriais para a
produo de alimentos, combustveis insumos qumicos, enzimas e bens de
consumo diversos (Kadam; Forrest; Jacobson, 2000).
O Brasil, com sua grande extenso territorial, apresenta alto potencial
de explorao de recursos renovveis para a gerao de diversos insumos.
Um resduo abundante no pas e proveniente de material renovvel o bagao de cana-de-acar, pois o Brasil o maior produtor de cana-de-acar
do mundo com uma produo estimada de aproximadamente de 570 milhes de toneladas referentes safra dos anos 2008-2009, segundo dados da
Unio da Indstria de Cana-de-acar (Unica) e Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (Mapa).
Uma indstria sucroalcooleira produz cerca de 280 kg de bagao por
tonelada de cana moda (Molina et al., 1995) o que corresponde a uma produo de bagao de aproximadamente 100 milhes de toneladas por ano.
Grande parte deste resduo, tambm considerado por muitos como subproduto, utilizada pela prpria usina como fonte de energia.
Embora o bagao possa ser utilizado para gerao de energia ou como
suplemento em rao animal, ainda h um grande excedente que poder utilizado para produo de diversos bens sociedade. Algumas alternativas
para sua utilizao como matria-prima so a produo de etanol, hidroximetilfurfural, papel e celulose, revestimentos acsticos, madeira prensada,
lcool, alcaloides, enzimas e xilitol (Cunha et al., 2005).
Segundo Takahashi (1998), o etanol pode ser produzido a partir de resduos lignocelulsicos. A hidrlise destes resduos proporciona uma mistura de pentoses e hexoses, e a converso completa destes acares em etanol
fundamental para que o preo do etanol produzido seja competitivo com
o da gasolina. Escherichia coli KO11, possuindo os genes PDC (piruvato
descarboxilase) e ADH (lcool desidrogenase) de Zymomonas mobilis inseridos em seu cromossomo, mostrou-se capaz de fermentar eficientemente
pentoses e hexoses a etanol, em condies anaerbicas. Em meio LB (Luria-Bertani), contendo extrato de levedura, peptona e NaCl, acrescido de
50 g/L de glicose, a bactria produziu 21,1 g/L de etanol, equivalente a
82,2% do rendimento terico mximo. Em meio LB acrescido de 40 g/L
de xilose, produziu 16,3 g/L de etanol, o que corresponde a uma eficincia
239
de converso de 80,2%. Em uma mistura de 10 g/L de glicose e 40 g/L de

xilose, a bactria recombinante produziu 24,5 g/L de etanol, com eficincia de 96,4%. No hidrolisado de bagao de cana-de-acar, os acares foram completamente consumidos em 48 horas e a eficincia de converso foi
de 95%. O meio corn steep powder (CSP), na concentrao de 12,5 g/L,
substituiu eficientemente o meio LB como fonte de nutrientes. O acetato,
potencial inibidor do crescimento e do metabolismo de E. coli, est presente nos hidrolisados hemicelulsicos numa faixa de concentraes de 2,0 a
15,0 g/L. E. coli KO11 mostrou-se extremamente tolerante ao acetato. Em
meio LB acrescido de glicose ou xilose mais acetato, foi observado que concentraes de 2,0 a 12,0 g/L no afetaram o desempenho fermentativo da
bactria. No entanto, foi verificado que todas as concentraes de acetato
testadas (2,0 a 12,0 g/L) tiveram um efeito inibitrio sobre o crescimento
bacteriano. Nos valores de pH mais baixos (5,5 e 6,0), a inibio foi exacerbada em funo de maior concentrao da forma protonada do cido
actico.
O cenrio futuro
Inquestionavelmente, o lcool a melhor alternativa para substituir o
petrleo nas prximas dcadas em veculos automotores. A era do petrleo
no vai se encerrar por falta de petrleo, mas porque o preo subir tanto
que ser necessrio desenvolver fontes alternativas, dentre elas, o etanol do
milho ou da cana-de-acar.
O cenrio futuro mostra que somente os maiores pases consumidores
de energia, Estados Unidos, Japo e Europa, vo precisar importar mais de
10 bilhes de litros de etanol at 2012. A Etanol-frica anunciou o investimento de US$ 1 bilho para a produo de etanol na frica do Sul. Se uma
tonelada de cana produz 88 litros de etanol, seriam necessrios mais de 110
milhes de toneladas de cana para atender o mercado futuro, o que acrescentaria mais 1,2 milhes de hectares a serem cultivados.
Em conjunto com o grande avano da produo convencional de lcool
no Brasil, conforme relatado anteriormente, a biotecnologia tem sido uma
ferramenta bastante explorada para a obteno de inmeros produtos de interesse econmico e social. Os processos biotecnolgicos tm se mostrados
240
promissores e com inmeras vantagens em relao aos processos convencionais. Tal interesse pode ser justificado pelas condies de operaes mais
brandas empregadas na biossntese, que reduzem o consumo de energia e
aumentam a segurana do processo, pela alta especificidade das enzimas,
que minimiza a formao de subprodutos e pelo menor impacto ambiental.
A crescente importncia industrial dos mtodos biolgicos de produo
deve, entretanto, ser acompanhada durante a produo de compostos. Assim, uma intensa e constante pesquisa visando entender melhor as vias metablicas de sntese e a funo fisiolgica dos microrganismos produtores
necessria para regular a otimizao do processo de fermentao alcolica
em escala industrial.
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9
Hidrlise enzimtica na cadeia produtiva
do bioetanol e uso de enzimas para
diagnsticos de produtos da fermentao
Edwil Aparecida de Lucca Gatts,
Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro
Introduo
A Biotecnologia vem rompendo fronteiras propiciando grandes avanos em muitas reas do conhecimento cientfico que tem se traduzido na
melhoria da qualidade de vida da populao. Entretanto, a utilizao de
tcnicas que fazem parte desta rea no nova e vem sendo utilizada h
muito tempo pela humanidade. Entre as inmeras vantagens e tecnologias
originadas nesse campo, podemos chamar ateno para a gerao de produtos nas reas farmacutica, alimentar, ambiental, qumica e energtica
(Higgins, 1985). Sua importncia vem sendo alicerada desde seu incio
emprico, no qual o homem conseguia produzir por meio da fermentao
produtos como po, vinho, cerveja e mesmo pela modificao de alimentos
como vinagre e queijos. A Biotecnologia ganhou sua magnitude quando os
processos complexos comearam a assumir grande significado comercial,
iniciado com a contribuio de Pasteur, no desenvolvimento da produo
de diferentes solventes como etanol, acetona, butanol e na produo da penicilina pelo fungo Penicillium chrysogenum (Demain, 2007). De modo significante nesse avano, a produo de clulas de levedura tambm assumiu
grande importncia ao lado de sua inerente capacidade fermentativa para a
produo de etanol. Em todas as fases desta evoluo, muitos processos e
procedimentos assumiram papel definitivo e, aliado principalmente s no-
252
vas tecnologias que surgiram na dcada de 1970, a Biotecnologia se consolidou utilizando o conhecimento acumulado e sendo capaz de gerar enorme
riqueza e influncia em cada setor da economia com destaque para a sade,
produo e processamento de alimentos, proteo ambiental e produo de
materiais (Gavrilescu; Chisti, 2005). Dentro deste panorama, o Brasil tem
adquirido competncia indiscutvel na rea de produo de energia renovvel como no caso do etanol a partir de cana-de-acar (Goldemberg, 2008).
A cana-de-acar (Saccharum officinarum) representa alimento e energia para o setor industrial; e a gerao de bioetanol tem avanado produzindo conhecimento em reas diversas (DeVries et al., 2010; Glvez, 2000).
Hoje a produo de bioetanol est operando com leveduras selecionadas
que imprimem rendimento na fermentao de 91,5% e viabilidade final da
ordem de 97%. Estes nmeros representam aumentos de 37% em relao
manuteno da viabilidade e, da ordem de 4% em relao ao rendimento, quando comparados com processos de produo de etanol combustvel,
que utilizavam leveduras de panificao. Atualmente, o Brasil o maior
detentor de conhecimento e tecnologia na gerao de etanol combustvel a
partir da cana-de-acar. O etanol, um combustvel menos poluente que os
derivados de petrleo, assume importante papel no processo de conteno
do aquecimento do planeta. A otimizao de seu processo de produo, o
desenvolvimento de novas variedades de leveduras e o aproveitamento de
outros materiais para gerao de fontes alternativas de carbono, constitui
alvo para diversos estudos (Amorin, 2005).
Na produo de etanol, o bagao da cana-de-acar vem sendo utilizado para gerao de vapor e eletricidade. O resduo queimado representa
um processo tradicional de baixa eficincia quanto quantidade de energia gerada e, portanto tm sido buscadas novas aplicaes j que ele possui
alto teor de carboidrato e relativamente baixo teor de lignina. Esta tcnica
da produo de etanol utilizando-se de subprodutos industriais que contm lignocelulose como bagao de cana-de-acar vem sendo explorada
h algum tempo (Dale et al., 1984; Wright, 1998; Azzam, 1989; Cadoche;
Lopez, 1989; Reshamwala et al., 1995; Bjerre et al., 1996; Duff; Murray,
1996; Martn, 2002; Sun; Cheng, 2002; Vasques et al. 2007; Ojeda; Kafarov, 2009; Balat, 2011; El-Zawawy et al., 2011). Nesse processo, o bagao
submetido a um tratamento cido, que aps a prensagem, segue duas rotas:
a parte lquida vai para a fermentao gerando etanol e a slida deve ser
HIDRLISE ENZIMTICA NA CADEIA PRODUTIVA DO BIOETANOL
253
submetida deslignificao. Aps a remoo da lignina, a parte celulsica restante pode ser fermentada com enzimas celulolticas, que iro liberar
acares, dos quais a levedura produzir etanol. O etanol celulsico, que
pode ser considerado como aquele obtido a partir da quebra de resduos
celulsicos como bagao de cana, bagao e palha de milho, atravs de diferentes tecnologias incluindo enzimas, tem um impacto positivo sobre o
meio ambiente no sentido de reduo de CO2 gerado em torno de 65-95%
em comparao ao uso de gasolina como combustvel. Assim, podemos
considerar como um dos pontos importantes a hidrlise enzimtica, uma
tecnologia que resulta na utilizao destes substratos ricos em celulose que
ir contribuir para utilizao de uma fonte de energia mais limpa em relao
ao meio ambiente (Solomon et al., 2007).
No Brasil, as fontes de matria-prima de celulose so os subprodutos da
produo de cana-de-acar: a palha, que fica no campo aps a colheita, e
o bagao da cana, resultante do processo convencional de produo de acar e etanol nas usinas (Bastos, 2007). A quebra da celulose realizada por
enzimas como celulases, xilanases e enzimas acessrias produzidas durante
a fermentao nos processos de fermentao desses microrganismos, que
podem auxiliar a degradao de fibras celulsicas presentes no bagao de
cana podendo gerar, deste modo, etanol. Uma grande atrao para a utilizao de enzimas em processos biotecnolgicos reside no fato de que enzimas
so macromolculas catalisadoras de reaes qumicas, presentes em todos
os seres vivos, dos quais podem ser extradas e aplicadas, livres ou imobilizadas, em sistemas diferentes daqueles que as originou (Said; Pietro, 2004).
Na hidrlise enzimtica da celulose, as enzimas celulolticas assumem
grande importncia e muitos microrganismos so capazes de produzir
enzimas celulolticas entre os quais podemos citar as bactrias aerbicas,
nas quais encontramos o gnero dos Actinomicetos e dentro destes especialmente Streptomyces sp. Ainda so consideradas boas produtoras de
enzimas celulolticas Celulomonas sp. e Bacillus sp. Entre as bactrias anaerbicas so encontrados Clostridium e Bacterioides. Numerosos fungos so
considerados bons produtores de enzimas celulolticas como, por exemplo,
Trichoderma, Aspergillus e Penicillium (Bisaria, 1991; Sternberg, 1976; Fan
et al., 1987; Pentilla et al., 1987; Duff; Murray, 1996).
A celulase, ou complexo celuloltico secretado por fungos filamentosos, formada por trs componentes enzimticos majoritrios, as endo-
254
glucanases (EG; EC 3.2.1.4), as celobioidrolases (CBH; EC 3.2.1.91) e

as -glicosidases (EC 3.2.1.21). Essas enzimas atuam em cooperao, ou
seja, as endoglucanases (EG) clivam randomicamente ao longo da cadeia
de celulose, produzindo novos stios de ataque para as celobioidrolases; as
celobioidrolases (CBH) agem como exoenzimas, isto , nas extremidades
das cadeias, e liberam celobiose como produto principal; e as -glicosidases
completam o processo pela hidrlise da celobiose e de outros oligossacardeos at a gerao final de glicose (Whitaker, 1971; Pentilla et al., 1987;
Beguin; Aubert, 1994; Persson et al., 1991; Jiang et al., 2011; Chandra et
al., 2009).
As celulases quebram a celulose em acares simples, que servem como
fonte de carbono e energia para os microrganismos. A busca atual da cincia est em encontrar e desenvolver enzimas que possam atender s necessidades industriais, isto , enzimas estveis e que no sejam inibidas pelos
produtos de hidrlise. Muitas tentativas foram feitas para determinar a natureza das caractersticas do substrato, que levam diminuio da taxa de
hidrlise da celulose (Mooney et al., 1998; Ramos et al., 1993; Grethlein,
1985). A hidrlise enzimtica da celulose em acares solveis tem sido
estudada extensivamente para utilizao de parede celular vegetal como
substrato nos processos de produo de bioenergia (Tomme et al., 1995;
Duff; Murray, 1996). De interesse central atualmente o desenvolvimento
de um processo eficaz para converso da celulose em etanol para uso como
combustvel. No entanto, apesar dos esforos de pesquisa intensiva, a converso rpida de substratos de celulose por hidrlise enzimtica ainda de
difcil obteno.
Diversos fatores impedem a utilizao eficaz de matrias-primas de
lignocelulose em processo de gerao de bioetanol. A velocidade de reao diminui rapidamente durante a realizao da hidrlise, e pode levar
a uma diminuio da produo e nos longos tempos de processo (Gregg;
Saddler 1996). Altas concentraes de enzimas so necessrias para atingir
a converso de celulose, e a reciclagem das mesmas difcil por causa da
adsoro na lignocelulose residual (Gregg; Saddler 1996). Alguns estudos
tm demonstrado que a superfcie da celulose tem importncia na velocidade inicial de hidrlise (Grethlein, 1985; Thompson; Chen H-C, 1992).
A celulose apresenta regies cristalinas com cadeias paralelas firmemente
unidas por ligaes de hidrognio. Tem sido sugerido que as partes cris-
255
talinas do substrato devem tornar a celulose menos acessvel s enzimas,

o que poderia explicar a observao de que substratos cristalinos so mais
resistentes degradao enzimtica em comparao com substratos mais
amorfos (Fan et al., 1980). No entanto, h tambm relatos de que o grau
de cristalinidade no significativamente alterado ao longo do tempo de
hidrlise prolongada (Lenz et al., 1990). Alguns estudos fornecem como
sugesto que a lignina presente em substratos complexos, tais como madeira, especialmente madeiras macias, tratada por exploso a vapor poderiam
ter um efeito negativo sobre a reao de hidrlise (Mooney et al., 1998).
Tratamentos qumicos seguidos pela utilizao de enzimas celulolticas
encarecem a produo de etanol em at 40% por causa do alto preo dessas
protenas. Uma soluo para a viabilidade da realizao da tcnica em escala industrial seria a produo dessas enzimas com custo relativamente mais
baixo (Gabhane et al., 2011).
Estudos de otimizao na produo e utilizao de enzimas celulolticas
produzidas a partir de Trichoderma reesei e Aspergillus niger mostraram resultados satisfatrios, com custos mdios de produo at 200% menores
que as disponveis no mercado. Quando essas enzimas so utilizadas na etapa de produo de acares a partir dos resduos de celulose, implicar-se-
uma diminuio significativa do custo final do etanol (Pal; Khanum, 2011;
Ahamed; Vermette, 2008; Fang et al., 2010; Mekala et al., 2008).
O aumento de estudos nestas reas tem gerado maior conhecimento
sobre a atuao das enzimas e, consequentemente, pode determinar efetivamente sua utilizao. Assim, por exemplo, os estudos de processos de
fermentao para produo de enzimas tm fornecido cada vez maior quantidade dessas protenas por meio de processos biotecnolgicos. Alm do conhecimento adquirido, estes estudos devem levar a diversas aplicaes, por
exemplo, na extrao de leos essenciais que so utilizados pela indstria
farmacutica e/ou de alimentos.
Neste sentido, experimentos de aumento do rendimento de extrao de
leos essenciais de Melampodium divaricatum e Mentha spicata realizados
com as enzimas celulolticas e xilanoltcas produzidas por fungos como Trichoderma reesei e Aspergillus niger demonstraram a eficcia da utilizao
destas enzimas, com um aumento mdio de 60% da produo de leo para
M. divaricatum e 55% para a M. spicata, em relao extrao sem a aplicao das enzimas (Santos, 2008).
256
A anlise por cromatografia gasosa dos leos extrados de M. spicata na

presena ou ausncia de enzimas mostrou, para esta espcie, que a carvona
foi o composto majoritrio com uma concentrao de 59,12% do leo extrado sem tratamento enzimtico e 55,36% no leo extrado com tratamento enzimtico. Para a M. divaricatum, o composto majoritrio foi o transcariofileno, contribuindo com 48,59% do leo nas partes areas secas. No
leo extrado das partes areas frescas, com e sem tratamento enzimtico,
este composto contribuiu com valores menores: 36,78 e 39,94%, respectivamente. Os leos obtidos, avaliados por cromatografia gasosa no demonstraram alteraes significativas no teor de seus componentes com o uso de
enzimas sugerindo que sua aplicao pode auxiliar nos rendimentos de extrao. Isso pode representar um grande aliado para obteno de maiores
rendimentos de leos que possam estar presentes em algumas espcies vegetais em baixas concentraes, mas que representem importante matria-prima para a indstria farmacutica ou de alimentos (Santos, 2008). Outra
aplicao vivel das enzimas seria na gerao de kits enzimticos para determinao de produtos e subprodutos de fermentao.
A produo de biodiesel, alternativa de combustvel renovvel, tem
mostrado preocupao com a gerao de subprodutos, principalmente o
glicerol bruto (Lin et al., 2009). Estratgias biotecnolgicas visando utilizao do glicerol como fonte de carbono para obteno de produtos de
maior valor agregado tm estimulado pesquisas na rea. A dosagem da concentrao de glicerol uma importante ferramenta para o acompanhamento do rendimento na produo de biodiesel. O glicerol, tambm conhecido
como glicerina, resultante da reao de transesterificao de leos vegetais,
apresenta concentrao muito varivel conforme a eficincia da reao. Sua
determinao por meio de um mtodo econmico e rpido de interesse
para as indstrias de bioetanol e biodiesel.
Outras aplicaes industriais de leveduras incluem a produo de protenas, nucleotdeos, vitaminas, glicoprotenas, coenzimas, lipdeos etc. Com
o desenvolvimento das novas tcnicas moleculares, principalmente aquelas
relativas engenharia gentica, as leveduras, em especial a do gnero Picchia
pastoris foram transformadas e utilizadas como produtoras de protenas heterlogas (Creeg et al., 1993) e utilizada tambm, por meio da engenharia
metablica, para melhorar a eficincia de converso de substratos em produtos de interesse biotecnolgico (Ostergaard et al., 2000).
257
A utilizao de enzimas em mtodos analticos para anlises tem como

resultados economia, preciso, facilidade de manuseio e rapidez nas respostas. Os kits enzimticos tm aplicaes no controle de qualidade na indstria de bebidas e combustveis (bioetanol e biodiesel).
Utilizao de enzimas em mtodos analticos

Alguns mtodos para anlises em laboratrios clnicos compreendem
reaes de oxidao, esterificao, formao de ter, desidratao e procedimentos cromatogrficos. As determinaes enzimticas, utilizando as oxidorredutases so as que apresentam maior sensibilidade e especificidade.
As oxidorredutases, segundo a Unio Internacional de Bioqumica e
Biologia Celular (IUBMB) so uma categoria de enzimas responsveis pela
catlise de reaes de oxidao e/ou reduo de substratos, ou seja, participam de reaes em que h transferncia de eltrons entre espcies qumicas.
O substrato oxidado (agente redutor) considerado doador de hidrognio
ou eltron, enquanto aquele que foi reduzido (agente oxidante) denominado receptor (IUBMB, 1992; Devaux-Bassguy et al., 1997).
A nomenclatura adotada para as oxidorredutases baseia-se na estrutura: doador: receptor oxidorredutase (nome sistemtico). As oxidorredutases
so subdivididas em quatro tipos principais (Dixon; Webb, 1979; IUBMB,
1992):
Desidrogenases: catalisam a transferncia de hidrognio do substrato
ao cofator nicotinamida adenina dinucleotdio (NAD+);
Oxidases: catalisam a transferncia de hidrognio do substrato para o
oxignio molecular (espcie receptora) produzindo perxido de hidrognio como subproduto;
Peroxidases: catalisam a oxidao do substrato pelo perxido de
hidrognio;
Oxigenases: catalisam a oxidao do substrato pelo oxignio molecular, produzindo gua como produto reduzido.
A utilizao de diferentes oxidorredutases em mtodos analticos e ensaios de validao dos mesmos so descritos neste captulo.
258
A validao de um mtodo analtico de dosagem deve atingir alguns

critrios que so descritos como especificidade, seletividade, preciso, repetibilidade, reprodutibilidade, exatido, linearidade, limite de deteco
etc. (Anderson; Ngeh-Ngwinbi, 1995).
A seletividade e a especificidade de um mtodo esto relacionadas com
a capacidade de realizar o teste na presena de interferentes. Os kits comerciais utilizam enzimas altamente purificadas, fato que exclui a ocorrncia
das reaes paralelas dos interferentes, presentes nas amostras biolgicas
(Boehringer Mannheim, 1997). Diluies das preparaes enzimticas parcialmente purificadas possibilitam o uso de enzimas em mtodos analticos
de dosagens, e a ao dos interferentes minimizada pelas diluies tanto
da preparao enzimtica como da amostra a ser quantificada. A preciso
em um mtodo analtico se mede pela concordncia entre muitas determinaes analisadas e expressa pelo desvio padro. A preciso varivel
conforme a amostra. Para amostras de alimentos pode ser considerado o
intervalo compreendido entre 2 - 20% no desvio padro.
Quando se deseja comprovar a repetibilidade de um mtodo, realiza-se
um grande nmero de anlises num nico laboratrio, j a reprodutibilidade, necessita que as anlises sejam feitas em diferentes laboratrios.
Estudo de recuperao de algum componente da amostra est relacionado com a acuidade do mtodo. Estes estudos so realizados comparativamente, analisando-se a amostra-teste e uma soluo-padro contendo
a substncia de concentrao conhecida. A soluo original utilizada para
preparo do padro no necessariamente deve apresentar grau extremo de
pureza (Zanon, 2007). Portanto, exatido e a recuperao podem ser analisadas conjuntamente, uma vez que a exatido medida pela concordncia com os valores da referncia, podendo ser recuperada com a adio de
quantidade da substncia conhecida e analisada na amostra.
A resposta de um mtodo pode ser medida como funo do aumento da
concentrao da substncia analisada. Na menor concentrao da substncia, as leituras das anlises podem conter o rudo do aparelho de quantificao, ao passo que, no outro extremo, pode haver fuga da linearidade na
curva analtica. O intervalo linear, compreendido entre o limite mximo e o
mnimo considerado para efeito dos clculos de concentrao.
A linearidade da curva de calibrao possibilita o clculo direto da
quantidade da substncia na amostra, naquele intervalo, com aplicao
259
da equao de regresso linear e seu intercepto prximo do zero. A faixa de

dosagem indica o intervalo entre os nveis superior e inferior que tenha preciso, exatido e linearidade do mtodo, j o limite de deteco e o limite de
quantificao dependem do equipamento usado e das condies dos clculos (Camargo et al., 2007). A revalidao do mtodo tambm citada por
alguns autores (Driffield et al., 2007; Zanon, 2007) e as faixas operacionais
devem ser definidas para cada mtodo, baseadas na comparao com outros
mtodos semelhantes.
A dosagem do etanol e glicerol durante a produo de combustveis
tem se mostrado importante para o aumento de rendimento do processo
e qualidade do produto. Embora existam vrios mtodos de dosagens, os
enzimticos so os mais interessantes por serem rpidos, precisos, de fcil
manuseio e baixo custo.
Ensaio de produtos e subprodutos de fermentao, utilizando enzimas,
podem derivar para diversas leituras, tais como: bioluminescncia (Eggstein; Kuhlmann, 1962; Kahle; Tesarich, 1980), cromatogrficas (Pecina et
al., 1984; Prablu; Baldwin, 1990; Hamano et al., 1991; Kobasyashi; Kawai,
1982), fluorimtricas (Carlson; Wadstrom, 1959; Compton; Purdy, 1980;
Bergmeyer, 1983; Wang et al., 1993; Fossati et al., 1992; Wimmer et al.,
1986), amperomtricas (Wimmer, et al.,1985) etc. Os mtodos enzimticos,
com leituras espectrofotomtricas na regio do visvel so os menos complexos no preparo das amostras e utilizao do equipamento. Vrias citaes na literatura utilizam reaes de formao de gua oxigenada acoplada
reao com peroxidase e determinadas por diferentes tcnicas (Ince et al.,
1987; Laurell; Tibbling, 1966; Lric et al., 1970; Lim; Buttery, 1977).
Alguns exemplos de aplicaes das enzimas na montagem

de mtodos analticos
Enzimas extradas de Saccharomyces cerevisiae
A levedura Saccharomyces cerevisiae vendida no comrcio como fermento de po e comercializada de duas formas: mida e seca. Na primeira,
a torta de leveduras, procedente do filtro rotatrio empacotada, e sua preservao necessita de refrigerao. A vida til deste produto de aproximadamente trs semanas. Na segunda, a secagem da levedura feita a vcuo
260
numa temperatura de 55C, e permanece ativa por um ano temperatura

ambiente. Mtodos analticos de dosagens podem ser desenvolvidos usando levedura seca comercial como fonte de glicerol 3 fosfato desidrogenase
e glicerol quinase, necessitando tratamento prvio de ruptura das clulas
para extrao das enzimas.
As desidrogenases so amplamente utilizadas nos ensaios analticos de
compostos de interesse industrial, incluindo glicerol e etanol. So enzimas
que necessitam da coenzima NAD+ na reao e podem ser acompanhadas
pela quantidade de NADH gerado, pela leitura espectrofomtrica a 340 nm
(leitura na regio do ultravioleta). Outro mtodo analtico de dosagem de
glicerol, envolvendo as enzimas, glicerol quinase e glicerol 3-fosfato oxidase, (GPO; EC 1.1.3.21) alm das peroxidases (PO; EC 1.11.1.7) utiliza
leitura espectrofotomtrica a 540 nm (leitura na regio do visvel).
Tininis (2000) estudando uma preparao enzimtica, obtida a partir de levedura de panificao contendo as enzimas glicerol quinase (GK)
e glicerol-3-fosfato desidrogenase (GPDH), determinou a concentrao
de glicerol em diferentes amostras. O mtodo de dosagem de glicerol foi
sensvel na faixa de 6,64 a 27,02 x 10-3 g/l de glicerol presente em bebidas
e caldos fermentados de destilaria, mostrando reprodutibilidade analtica e
baixo custo (Tininis, 2000).
A dosagem enzimtica do glicerol, por meio das leituras a 340 nm foi
descrita por Wieland (1962), e envolve duas reaes: na primeira, o substrato glicerol fosforilado a glicerol fosfato na presena de ATP e glicerol
quinase (EC 2.7.1.30). Na segunda reao, glicerol fosfato transformado em diidroxicetona fosfato por ao da glicerol-3-fosfato desidrogenase
(EC 1.1.1.8) na presena de NAD+ e hidrato de hidrazina, em condies de
pH bsico, conforme as reaes:
GK
Glicerol + ATP
Glicerol-P + ADP+ (reao 1)
GPDH
Dihidroxicetona-P + NADH + H+ (reao 2)
Glicerol-P + NAD+
Outro mtodo analtico de dosagem com leitura na regio do ultravioleta objetiva o ensaio do etanol. O ensaio enzimtico do etanol utiliza lcool
261
desidrogenase (ADH; EC 1.1.1.1). lcool desidrogenase, uma oxidorredutase, presente em tecido animal, plantas e microrganismos, acelera a reao
de xido-reduo de transformao do etanol em acetaldedo na presena de
NAD+, descrita por Bonnischsen (1965). A reao ocorre em pH 8,8 com o
equilbrio deslocado para a formao do acetaldedo pela reao com semicarbazida, conforme:
ADH
Etanol + NAD +
Acetaldedo + NADH + H+
O mtodo apresenta sensibilidade na faixa de 5 M a 20 M no tubo de

dosagem, o que equivale a solues-padro do etanol na faixa de 74,54 x
10-4 g/L a 298,08 x 10-4 g/L. A concentrao do etanol foi determinada
em amostras de diferentes bebidas comerciais (Zanon, 2006). A anlise
de etanol pelas leituras espectrofotomtricas na regio do visvel necessita de
reao prvia com reagente que confere cor, como sal de tetrazlio. A curva analtica de dosagem do etanol apresentou linearidade e coeficiente de
correlao no valor de 0,998. A enzima mostrou estabilidade em diferentes
temperaturas por at 12 meses. Ensaios de estocagem da ADH demonstraram que, na presena de 15% (p/v) de polietilenoglicol (peso molecular
3350), ou 1,0 mM de azida de sdio, a atividade da enzima foi mais estvel
por maior perodo de tempo (Zanon et al., 2007).
O mtodo colorimtrico para determinao de etanol, baseado na reduo do sal de tetrazlio e leituras espectrofotomtricas, mostrou eficincia
em termos de rapidez, simplicidade, sensibilidade e baixo custo e sensibilidade na faixa compreendida entre 4,6 x 10-2 - 23,0 x 10-2 g/L de etanol.
As determinaes do contedo alcolico de diversas bebidas fermentadas
(Tabela 9.1) foram examinadas utilizando o mtodo padronizado.
Tabela 9.1 Ensaio de etanol em bebidas utilizando metodologia colorimtrica
Amostra
Referncia
(% vol.)
Analisado
(% vol.)
Usque
40,0
37,6 1,0 (94,0 %)
Aguardente
39,0
36,3 0,5 (93,1%)
Rum
38,0
36,3 0,5 (95,5%)
Vinho branco
10,2
10,7 0,4 (104,9%)
Vinho do Porto
19,5
19,2 1,0 (98,5%)
262
Enzimas glicerol quinase e glicerol fosfato desidrogenase

de Saccharomyces cerevisiae expressas na levedura
Pichia pastoris
A levedura Pichia pastoris vem sendo largamente utilizada como um

eficiente sistema de expresso para a produo de protenas heterlogas,
pois um sistema seguro, fcil e gera altos nveis de expresso proteica.1
A levedura P. pastoris apresenta duas caractersticas que a tornam uma
hospedeira ideal para a produo de protenas heterlogas. A primeira o
forte promotor usado para transcrever genes heterlogos, o qual derivado
do gene da enzima lcool oxidase (AOX1). Esse promotor regulado transcricionalmente por metanol, um indutor relativamente barato. Em clulas
expostas a metanol como nica fonte de carbono, o incio da transcrio
no promotor AOX1 altamente eficiente e comparvel aos promotores
derivados dos genes altamente expressos da via glicoltica. No entanto, ao
contrrio dos promotores glicolticos, o promotor AOX1 firmemente regulado e reprimido sob condies de crescimento sem metanol. A maioria
das protenas heterlogas deletria para a clula, quando expressas em
altos nveis, portanto, a habilidade de manter a cultura em um estado reprimido ou desligado altamente desejvel. Alm de metanol, o sistema
AOX1 necessita da ausncia de glicose para ser plenamente ativado. Uma
vez que o promotor AOX1 controlado pela manipulao da fonte de carbono adicionado ao meio de cultura, o crescimento e a induo de cepas de
P. pastoris, que expressam protenas heterlogas, so facilmente obtidos em
todas as escalas, desde frascos at grandes fermentadores.
A segunda caracterstica importante da P. pastoris que esta levedura
no realiza fermentao como S. cerevisiae (Cregg, 1993; Cregg 2011). Estas duas caractersticas da levedura P. pastoris possibilitou sua utilizao na
expresso de duas enzimas usadas no mtodo de dosagem de glicerol. Para
tal, os genes GUT1 e GPD2 de Saccharomyces cerevisiae foram inseridos na
levedura P. pastoris a fim de produzir, no meio de cultivo, a glicerol quinase
e glicerol-3-fosfato desidrogenase, segundo Peres et al. (2010). Resultados
de dosagens de glicerol em bebidas mostram a validao do mtodo (Tabela
9.2) e possibilidade de aplicao no acompanhamento de fermentaes.
1 Ver: <http://www.pichia.com/pichia_system.pdf>.
263
Tabela 9.2 Comparao de dosagem de glicerol utilizando kit comercial e GK e GPD recombinantes de P. pastoris.
Amostra
Caldo fermentado por S.
cerevisiae
Caldo fermentado por S.
cerevisiae contendo 5,7 mg
L-1 de glicerol adicionado
de 2,8 mg L-1 de glicerol
Tempo de
cultivo (h)
Concentrao de glicerol (g.L-1)

Kit
comercial
GK e GPD
recombinantes de P. pastoris
12
4,2 0,3
4,7 0,3
8,3 0,0
(97,6%)
8,2 0,1
(96,4%)
Enzima lcool desidrogenase de Saccharomyces cerevisiae

expressa em E. coli
O gene codificador da enzima lcool desidrogenase (ADH1) de S. cerevisiae foi clonado no vetor pET28a para expresso em E. coli (BL21) e a
ADH utilizada num kit de dosagem de etanol. A produo e solubilidade
da enzima lcool desidrogenase foi determinada. A purificao da protena
recombinante foi realizada por cromatografia de afinidade.
A atividade enzimtica de lcool desidrogenase purificada foi determinada por meio de ensaios para leituras no UV, bem como sua estabilidade
em diversas condies de tempo e temperatura. Os resultados demonstraram que a enzima obtida apresentou boa atividade biolgica in vitro, com
sensibilidade na deteco de, no mnimo, 2,3 x 104 g/L de etanol em 2
minutos. Alm disso, a protena purificada teve sua atividade preservada
quando estocada a -20C durante quatro meses. A quantificao enzimtica de etanol em diferentes bebidas, utilizando lcool desidrogenase de S.
cerevisiae, purificada a partir da bactria E. coli mostrou valores de desvio
padro inferiores a 10% (Tabela 9.3).
Tabela 9.3 Valor esperado e valor encontrado de etanol em bebidas utilizando ADH de S. cerevisiae clonada em E. coli.
Valor esperado
(% Vol.)
Valor encontrado
(% Vol.)
Cerveja 1
4,8
4,8 0,2
Cerveja 2
4,6
4,6 0,3
Usque
40
39,5 0,4
Aguardente
39
41 0,3
Amostra
264
Consideraes finais
Estudos das enzimas podero servir de base para aplicaes industriais na
quantificao de produtos em processos de obteno de energia renovvel. O
custo de produo das enzimas , juntamente com a etapa de pr-tratamento da biomassa, um dos principais entraves na comercializao tecnolgica
da hidrlise enzimtica. A aplicao de celulases na converso de biomassa celuloltica em acares para a fermentao de etanol e outros produtos
pode prover grandes benefcios ambientais e econmicos. A utilizao de
enzimas estveis temperatura ambiente tem potencial aplicao em kits de
quantificao de concentraes de etanol e glicerol, produto e subproduto de
fermentao alcolica que so determinados pelos mtodos rpidos, precisos
e de baixo custo, ferramenta importante na indstria cosmtica, alimentcia
e de combustvel. Clonagens de genes codificadores de enzimas da classe
das oxidorredutases em diferentes microrganismos e visando secreo destas no meio de cultivo constituem procedimentos promissores para novos
mtodos analticos de dosagens de produtos e subprodutos do metabolismo
celular na obteno industrial do etanol de segunda gerao.
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10
Resduos agrcolas e agroindustriais:
potencialidades de uso na produo
de etanol
Eleni Gomes, Joo Cludio Thomo,
Heloiza Ferreira Alves Prado, Daniela Alonso Bocchini Martins,
Roberto da Silva, Maurcio Boscolo
Introduo
A crescente demanda energtica, principalmente a de combustveis
para motores, associada a problemas relacionados ao petrleo e ao meio
ambiente tem direcionado o foco para a bioenergia e principalmente para
os biocombustveis. Diversos estudos tm mostrado que a mistura de 10%
de etanol a gasolina poderia reduzir em 3-6% a emisso de CO2, alm de ser
fonte renovvel alternativa ao petrleo em todo o mundo.
Por outro lado, o aumento previsto no consumo de etanol e a consequente necessidade de aumentar sua produo geram preocupaes com uma
possvel competio dos canaviais por terras agriculturveis prejudicando
uma produo agrcola mais diversificada. Assim, passou-se a considerar
o uso de resduos lignocelulsicos, que so matrias-primas renovveis e
residuais da cadeia produtiva, como fonte de acares fermentescveis para
produo do etanol.
A oferta de resduos lignocelulsicos em todo o mundo corresponde a
aproximadamente 2,9 x 103 milhes de toneladas produzidas em culturas de
cereais, 3x103 na produo de sementes e 5,4x102 de outros tipos de cultura.
Cerca de 50% dessa biomassa seria disponvel para produo de etanol.
272
A economia brasileira est baseada na produo agrcola e agroindustrial,

tendo como principais produtos a soja e outros gros, a cana-de-acar, o
caf, mandioca e frutas. Essas atividades geram milhares de toneladas de
subprodutos como o bagao de cana-de-acar, bagao de laranja, casca de
frutas, farelo de trigo, palha e sabugo de milho etc., os quais correspondem
a uma quantidade estimada de 1.000 t/ano. As principais culturas produzidas no Brasil e o tipo de subproduto que estas podem gerar so relacionados
na Tabela 10.1.
O bagao de cana-de-acar, ou bagao como normalmente chamado, um material fibroso resultante da prensagem da cana para extrao
do suco. O Brasil produziu na safra 2009/2010 cerca de 600 milhes de
toneladas de cana-de-acar que, processadas, geraram em torno de 180
milhes de toneladas de bagao. Parte desse material est sendo usada para
gerar energia eltrica ou para aquecimento de caldeiras, porm o excedente
encontra-se nos ptios das usinas.
A composio do bagao varia de 9-10% de umidade, 2-2,7% de cinzas,
32-55% de celulose, 16-25% de hemicelulose, 23-32% de lignina dependendo da variedade da cana e das condies climticas durante o cultivo.
Embora cerca de 80% de materiais lignocelulsicos possam corresponder a
acares, sua complexidade exige uma tecnologia ainda no disponvel para
sua converso a etanol de alta eficincia e rendimento. Na Tabela 10.2, so
apresentadas as composies de outros resduos agrcolas.
Tabela 10.1 Porcentagem de produo de subprodutos de algumas culturas cultivadas no Brasil

e respectivos componentes.
Cultura
Componentes do subproduto
Subproduto (%)
Algodo
53,0
Caroo, farelo, lnter, borra e estearina
Amendoim
74,5
Farelo, casca e borra
Soja
75,0
Farelo e borra
Arroz
55,7
Palha e farelo
Trigo
47,5
Palha e farelo
Cevada
49,2
Palha e farelo
Cana-de-acar
10,0*
Ponta de cana
Milho
50,0
Colmo, folha, sabugo e brcteas.
*10% do total de cana-de-acar colhida para industrializao.

Fonte: Peixoto et al., 1995.
RESDUOS AGRCOLAS E AGROINDUSTRIAIS
273
Tabela 10.2 Composies qumicas das paredes celulares de alguns resduos

agrcolas
C Cultura
Celulose
(%MS)
Hemicelulose
(%MS)
Lignina
(%MS)
Palha milho
33.5
24.9
7.8
Colmo milho
33.6
23.7
8.7
Folha milho
24.5
27.3
5.4
Sabugo milho
37.7
39.6
7.3
Fibra de coco
36.0-43.0
0.15-0.25
41.0-45.0
Palha de trigo
33-38
26-32
17-19
Farelo de trigo
30.0
50.0
15.0
28.0-36.0
23.0-28.0
12.0-14.0
32.0-47.0
19.0-27.0
5.0-24.0
Palha de arroz
Colmo de sorgo
Palha de cevada
35.2
22.1
4.3
27.0
25.0
11.0
31.0-45.0
27.0-38.0
14.0-19.0
31.6
25.4
11.0
Palha de aveia
30.0
22.0
8.5
Semente de uva
7.10
31.1
43.5
Grape stalk
29.9
35.3
22.9
Fonte: Graminha et al. (2008).
Composio qumica e estrutural dos constituintes

da parede celular vegetal
A parede celular das plantas uma estrutura biolgica complexa que
contm polmeros e outras molculas, cujas propores e organizao estrutural dependem do tipo e idade da planta. O crescimento da parede primria se d quando a clula vegetal est em fase de alongamento e, durante
esta fase, composta por polissacardeos como pectinas, xilanas e celulose,
por protenas e cidos fenlicos, porm, no h deposio de lignina. Quando o alongamento cessa, a clula da planta passa para a fase de formao da
parede secundria. Nessa fase, a parede celular comea a engrossar crescendo da poro interior da parede primria em direo ao centro da clula da
planta (Jung et al., 1992).
274
Durante o engrossamento progressivo da parede secundria, h maior

depsito de celulose do que xilana, e pectina e cido ferlico no so mais
adicionados, iniciando-se a deposio de lignina (Jung; Allen, 1995). A incluso da lignina na parede celular comea na lamela mdia (espao entre
as clulas do tecido da planta e a parede primria) e continua em direo
parede secundria. Esse padro de deposio de lignina faz que os polissacardeos mais recentemente depositados na parede secundria no estejam
lignificados enquanto o centro da lamela, regio original da parede primria, mais intensamente lignificado (Dey; Brinson, 1984).
Dessa forma, para que a celulose e a hemicelulose, que constituem a base
de fornecimento de carboidratos, possam ser totalmente utilizadas, suas ligaes com a matriz de lignina precisam ser quebradas. Para um entendimento
da recalcitrncia dessa estrutura e das limitaes da ao das enzimas e de outros mecanismos usados na hidrlise, ser feita uma descrio dos componentes e da forma de organizao dos polmeros que compem esses materiais.
Celulose
A celulose o principal componente de diversos tipos de material vegetal; encontrada tambm em clulas procariotas (Acetobacter xylinum,
Agrobacterium tumefaciens, Rhizobium spp., Escherichia coli, Klebsiella
pneumoniae, Salmonella typhimurium, Sarcina ventriculi) e em eucariotos
tunicados (Ascite), algas (Valonia e Microdicyon), fungos (Oomycetes).
As cadeias de celulose esto organizadas dentro de microfibrilas que so
a base da estrutura da parede celular. Essas microfibrilas constituem cerca
de 20%-30% e 15% do peso seco e volume da parede celular, respectivamente. Nas paredes secundrias, a celulose chega a 40%-90% da biomassa. As
fibrilas de celulose da parede encontram-se em uma matriz entrelaada de
polissacardeos hemicelulsicos os quais se ligam por pontes de hidrognio
a mais de uma fibrila, alm disso, interaes inicas e pontes de sais entre os
polissacardeos e protenas so observadas (Prado et al., 2010)
A estrutura bsica de celulose uma cadeia linear de resduos de D-glicose ligados por ligao glicosdica -(1,4) e com terminaes quimicamente diferentes, sendo uma com grupo D-glicopiranosil com o carbono
anomrico envolvido na ligao glicosdica e outra, com resduo D-glicopiranose, com o carbono anomrico livre. Esse hemiacetal cclico promove
275
um equilbrio anomrico , via uma pequena proporo de aldedo livre

e d as propriedades da terminao da cadeia (Figura 10.1). O grau de polimerizao varia de centenas a milhares de unidades de glicose, dependendo
da fonte de origem (Prez; Somain, 2010).
As cadeias de glicose so alinhadas em estrutura mais ou menos organizadas denominadas regies cristalinas e amorfas. As regies cristalinas so
formadas por pontes de hidrognio entre os grupos de hidroxilas livres na
molcula e obedecem a vrios ordenamentos de arranjos e, em geral, correspondem a 70% da estrutura.
Na conformao cristalina, cada glicose est torcida em 180 em relao anterior e a seus anis subsequentes, de forma tal que os grupos
exocclicos alcolicos primrios apontam alternadamente para a direita e
para esquerda da direo da cadeia. A cadeia estabilizada por ligaes de
hidrognio que ajudam a manter e reforar a conformao linear e plana da
cadeia. Em funo dos tomos de hidrognio alifticos em posies axiais
e todos os grupos polares de hidroxilas em posies equatoriais, as partes
superior e inferior das cadeias de celulose so hidrofbicas, enquanto as laterais das cadeias so hidroflicas e capazes de fazer ligaes de hidrognio
(Ogeda; Petri, 2010).
Figura 10.1 Estrutura bsica e de polarizao qumica da cadeia de celulose

n = nmero de unidades de dissacardeos
Fontes: Atala; Isogai, 2010; Perez; Samin, 2010.
276
Em funo da cristalinidade, as celuloses so divididas em famlia alomrficas I, II, III e IV as quais, por difrao de raios x, podem ser diferenciadas em sete formas (I, I, II, IIII, IIIII, IVI e IVII) com caractersticas
fsicas e qumicas prprias, como solubilidade, densidade, ponto de fuso,
forma do cristal, alm de propriedades pticas e eltricas as quais so interconversveis (Ogeda; Petri, 2010).
A celulose I ou celulose nativa a mais abundante e complexa com regies cristalinas I e I. Celulose I a alomorfa majoritria em bactrias e
fungos com um resduo de celobiose por cela unitria e pode ser convertida
forma mais estvel I por aquecimento a 270C. Celulose I a forma
cristalina mais comum em plantas superiores e tem duas metades de celobiose por cela unitria.
A celulose II formada a partir de regenerao (mistura da celulose em
solvente adequado seguida de coagulao e recristalizao) ou mercerizao
(tratamento com NaOH concentrado) da celulose I e o polimorfo mais
adequado para produo de tecidos por ser termodinamicamente mais estvel (Prez; Samain, 2010).
A celulose III obtida a partir da celulose I (celulose IIII) ou II (celulose
IIIII) tratadas com 1,2-diaminoetano. Essas celuloses tratadas com glicerol
em alta temperatura formam as celuloses IVI ou IVII. As formas da celulose
e suas interconverses so mostradas na Figura 10.2.
Figura 10.2 Esquema da conversibilidade entre os tipos de celulose

Fonte: Ogeda, Petri 2010
277
As celuloses com grau de polimerizao (DP) de 200-300 so solveis

em NaOH a 6-9%, enquanto aquelas com DP maiores que 500 so solubilizadas apenas em NaOH quando associado a exploso de vapor. Vrios solventes tambm so capazes de solubilizar a celulose como dimetilsulfxido
(DMSO), N,N-dimetilacetamida (DMAc) cido tricloroactico (TCA).
Os grupos acetal das ligaes -(1,4) so instveis em meio cido, o que torna a celulose mais suscetvel a hidrlise cida, porm, essa suscetibilidade
maior nas regies amorfas, permitindo uma hidrlise sequencial da celulose
(amorfa/cristalina) (Abeer et al., 2010).
Hemiceluloses
A hemicelulose representa de 15% a 35% da biomassa vegetal e, diferentemente da celulose, no quimicamente homognea, sendo formada
por pentoses (-D-xilose, -L-arabinose), hexoses (-D-manose, -Dglicose, -D-galactose) e cidos urnicos (-D-glicurnico, -D-4-Ometilgalacturnico e cido -D-galacturnico). Pode ainda aparecer acares como -L-raminose e -L-fucose, alm de acares com grupos
hidroxilas substitudos com grupo acetil. As xilanas, que so polmeros
lineares de xilose, podem corresponder de 20%-30% da hemicelulose de
plantas herbceas e 50% em capins e cereais (Glazer; Nikaido, 2007).
As hemiceluloses so formadas por diferentes propores e combinaes dos acares relacionados acima em funo das quais so classificadas. A seguir so descritos os tipos de hemiceluloses de acordo com Girio
et al. (2010).
As glicuronoxilanas (O-acetil-4-O-metil glicuronoxilana) consistem
de polmero de -D-xilopiranosil ligados por ligaes glicosdicas -(1,4).
Algumas unidades de xilose so acetiladas nos carbonos 2 e/ou 3, alm de
algumas fazerem ligao -(1,2) com cido O-metil glicurnico. Essas hemiceluloses podem conter glicomananas, L-raminose e cido galacturnico e aparecem em madeiras duras nas quais representam de 15%-30% da
biomassa.
As galactoglicomananas (O-acetil galactoglicomanana) possuem cadeia linear central formada por resduos de -D-glicopiranosil e -Dmanopiranosil unidas por ligaes glicosdicas -(1,4). Esses resduos podem ser acetilados nos C2 ou C3 e substitudos pelo -D-galactopiranosil
278
ligado a glicose ou manose por ligaes tipo -1,6. Essas hemiceluloses so

tpicas de madeiras moles e podem corresponder a 20%-25% da biomassa.
As arabinoglucuronoxilanas (arabino-4-O-metil glicuronoxilanas) consistem de uma cadeia central linear de -(1,4)-D-xilopiranose contendo
ligaes glicosdicas laterais tipo -(1,3) e -(1,2) com 4-O-metil--Dglicopiranosil cido urnico e -L-arabinofuranosil. So as principais hemiceluloses de tecidos no lenhosos, como os resduos agrcolas, e aparecem em menor proporo em madeiras moles.
As xiloglicanas consistem de cadeia central de unidades de D-glicose
ligadas por ligao -1,4. A maior parte dos resduos (75%) tem xilose substituintes em O-6. Resduos de L-arabinose e D-galactose podem aparecer
ligados aos resduos de xilose formando sequncias de di ou triglicosil, alm
de grupos acetilas. Essas hemiceluloses ligam-se s microfibrilas de celulose por pontes de hidrognio e contribuem para a formao da estrutura do
material. So mais frequentes na parede primria de madeiras moles dicotiledneas e aparecem tambm em pequenas quantidades, nas gramneas.
As arabinoxilanas so cadeias lineares de -(1,4)-D-xilopiranosdeo
com unidades de -L-arabinofuranosil como substituintes nas posies
2-O e/ou 3-O e de -D-glicopiranosil urnico ou seu derivado 4-O-metil
na posio 2-O. Os resduos arabinofuranosil podem estar esterificados
com cidos ferlico e p-cumrico. Essas xilanas so comuns na parede celular de gros de cereais.
As heteroxilanas complexas so cadeias de -(1,4)-D-xilopiranose
com cadeias laterais mono e oligoglicosil, alm de resduos de cido urnico e arabinosil. Aparecem em cereais, sementes, gomas e mucilagens
(Figura 10.3).
O tipo de hemicelulose interfere nos processos de hidrlise do material lignocelulsico. Por exemplo, nas glicuronoxilanas, os grupos laterais
4-O-metil glicurnicos so mais resistentes ao tratamento cido do que as
pores acetiladas, enquanto as fraes ligadas a L-raminose e cido galacturnico so resistentes aos agentes alcalinos. As galactoglucumananas
com maiores contedos de galactose so mais solveis em gua. A esterificao das arabinoxilanas com os cidos fenlicos podem formar ligaes
cruzadas de xilanas (intra e intermolecular) o que reduz a extratibilidade da
mesma (Prez; Samain, 2010).
279
Figura 10.3 Tipos de hemicelulose de paredes secundrias

Fonte: <http://bioenergy.ccrc.uga.edu>
Ligninas
A lignina um heteropolmero amorfo, tridimensional e de alta massa molecular, formada via polimerizao oxidativa de monmeros de fenil
propano com os derivados dos lcoois coniferlicos, sinaplicos e p-cumarlicos. Esse polmero atua como material incrustante, conferindo rigidez
s paredes celulares, resistncia ao ataque da maioria dos microrganismos
clula vegetal, refora a parede dos vasos condutores e reduz o acesso da
gua aos polissacardeos.
A lignificao (polimerizao da lignina) iniciada pela oxidao de grupos hidroxilfenlicos, catalisada pelas peroxidases e lacases ligadas parede
celular das plantas, para formar radical fenoxila mesomrico e s ento ocorre a polimerizao. Os radicais monolignis formados so ligados de forma
aleatria formando um composto intermedirio altamente reativo com estrutura de quinona, os quais so convertidos em diferentes dilignis por ataque nucleoflico intramolecular no carbono benzlico, efetuado por grupos
hidroxila de lcool primrio ou por grupo quinona (Figura 10.4a). A seguir,
os dilignis so desidrogenados enzimaticamente a seus respectivos radicais.
A polimerizao posterior envolve a ligao dos monolignis com os grupos
fenlicos terminais de dilignis ou de oligolignis ou pelo acoplamento de
280
dois radicais terminais, resultando em um polmero ramificado atravs

de formao tri, tetra, penta e oligolignis (Jung; Himmelsbach, 1989).
Em gimnospermas, a lignina formada principalmente pela polimerizao de lcool coniferlico e nas angiospermas, pela polimerizao de mistura
de lcoois coniferlico e sinaplico. A lignina de gramneas formada por
uma mistura dos lcoois coniferlico, sinaplico e p-cumarlico. Esses componentes so ligados ao acaso, sendo a ligao mais abundante na lignina a
aril-glicerol--eter (-O-4) porm, outros tipos de ligao como fenilcumarana (-5), diaril propano (-1), pinoresinol (-), difenil (5-5) e difenil
ter (4-0-5) so encontrados (Da-Silva; Gomes, 2004).
A lignina sempre associada com carboidratos, principalmente com as
hemiceluloses, via ligao covalente nos carbonos e C-4 do anel benznico, sendo essa associao chamada complexo lignina-carboidrato. Em
plantas herbceas, como no bagao de cana, os cidos p-cumrico e ferlico
fazem uma ponte entre a lignina e a hemicelulose por ligaes ster ou ter,
formando o complexo lignina/fenlicos-carboidrato (Figura 10.4b).
O aproveitamento de polissacardeos de materiais lignocelulsicos depende da extrao da lignina, cuja eficincia dos mtodos est diretamente
relacionada com a quebra das ligaes ster e ter entre a lignina e os polissacardeos. Tratamento cido quebra as ligaes -aril ter do complexo lignina/carboidrato mais rpido do que as -aril ter, enquanto em meio alcalino
essas ltimas so mais rapidamente quebradas (Buranov; Mazza, 2010).
Figura 10.4 Estrutura de lignina de gramneas. a = estrutura proposta para lignina de gramneas;
b = complexo lignina/fenlicos-carboidratos
Fontes: Sun et al., 1997; Anvar; Mazza, 2008.
281
Hidrlise do bagao de cana para produo de etanol

A converso de materiais lignocelulsicos a etanol implica duas etapas
fundamentais: a sacarificao em acares fermentescveis e a subsequente fermentao alcolica. Atualmente, existem muitas patentes e trabalhos
cientficos publicados sobre a produo de acares para produo de etanol tendo como material de partida materiais residuais como o bagao de
cana-de-acar. No entanto, as poucas plantas industriais de etanol celulsico existentes sobrevivem com subsdios estatais, indicando que um longo
caminho ainda deve ser percorrido para alcanar um processo econmico e
tecnicamente vivel.
A hidrlise dos materiais lignocelulsicos para produo de acares pode ser alcanada por mtodos qumicos e/ou enzimticos. Existem
processos patenteados para hidrlise qumica de bagao de cana em meios
cidos e alcalinos com temperaturas acima de 180C e altas presses, produzindo hidrolisados ricos em acares fermentescveis (glicose e xilose).
Entretanto, so geradores de situao de riscos na planta industrial e propiciam a liberao de muitos compostos inibidores do processo de fermentao alcolica subsequente, pois podem transformar a glicose liberada em
hidroxifurfural, cido levulnico, cido frmico (Figura 10.5) que so txicos para a levedura Saccharomyces cerevisiae.
Figura 10.5 Efeitos dos tratamentos trmico e cido sobre a gerao de produtos secundrios/txicos no tratamento do bagao
Fonte: Atalla; Isogai, 2010.
282
A hidrlise enzimtica, que desejvel por ser especfica, no gerando produtos txicos e por ser ambientalmente segura, porm, encontra um
enorme obstculo que a estrutura altamente organizada desse material
conferindo grande recalcitrncia ao mesmo.
Hidrlise enzimtica dos materiais lignocelulsicos

Na natureza, a degradao da biomassa por microrganismos realizada
por uma mistura complexa de enzimas, dentre as quais se destacam as celulases, hemicelulases e ligninases, cujas aes resultam em carboidratos que
podem ser hidrolisados a sacardeos solveis e metabolizveis, alm dos
produtos de despolimerizao da lignina que podem ter ampla aplicao
tecnolgica (Sandgren et al., 2005). No processo de produo de etanol celulsico, a ao dessas enzimas fundamental, em funo da especificidade.
Uma descrio geral do modo de ao e produtos das principais enzimas
degradadoras da biomassa ser apresentada a seguir.
Celulases
A produo de celulases microbianas ocorre, principalmente, por bactrias e fungos filamentosos, havendo poucos relatos de produo significativa
por leveduras. Os ascomicetos e os fungos anamrficos tm grande importncia como decompositores de celulose dos resduos vegetais no solo, sendo conhecidos como fungo de podrido marrom (Sandgren; Hiberg, 2005).
Um sistema celuloltico baseado em enzimas livres, as quais agem
sinergisticamente para a degradao completa da celulose (Figura 10.6),
normalmente produzido por fungos e bactrias aerbicos. Este sistema enzimtico inclui pelo menos trs tipos de celulase (Alves-Prado et al., 2010).
Dois tipos de celulase so distinguidos em funo da capacidade de reconhecer ou no a poro terminal da cadeia de glicose: as exocelulases ou
celobiohidrolases (CBH) e as endocelulases ou endoglucanases (EG). As
endoglucanases ou endo--1,4-glucanase (EC 3.2.1.4) reconhecem e hidrolisam o polmero internamente nas regies amorfas de forma aleatria,
resultando na reduo do grau de polimerizao da molcula e, ao mesmo
tempo, fornecendo substrato para as celobiohidrolases para agirem. As exoglucanases ou celobiohidrolases (EC 3.2.1.91) reconhecem as extremidades
da cadeia e atuam removendo unidades de celobiose. So distinguidos dois
283
tipos de CBH, as que atuam a partir da extremidade redutora (CBHI) e as

que quebram a partir da extremidade no redutora (CBH II).
Alguns estudos, entretanto, questionam a existncia dos tipos exo e endo
e sugerem que todas as celulases so tipo endo. Desse modo, tem sido sugerida a classificao usada para as hidrolases de glicosdeos (Davies, Henrissat, 1995) que agruparia as celulases em processivas (ao continuada) e
no processivas (ao no continuada) com base no modelo de hidrlise da
cadeia. O tipo processivo pode hidrolisar sucessivamente a celulose at a
formao da celobiose, por deslizamento ao longo da cadeia, sem separao
do stio de ligao da cadeia de celulose. Na celulase no processiva, o stio
ativo desligado da celulose aps cada hidrlise. Com base nessa classificao, a CHB poderia ser classificada como tipo endoprocessiva, enquanto a
EG seria uma endo no processiva (Figura 10.6).
Figura 10.6 Modelo de ao endoprocessivo e endo no processivo das celulases

Fonte Davies, Henrissat, 1995; Atalla; Isogai, 2010.
O terceiro componente do sistema as -glicosidases (celobiases) ou

-1,4-glicosidase (EC 3.2.1.21) que hidrolisam a celobiose e outros celo-oligossacardeos curtos liberando glicose. Algumas delas tambm esto
envolvidas nas reaes de transglicosilaes de ligaes -glicosdicas de
glicoses conjugados.
284
As enzimas do complexo celuloltico esto sujeitas represso catablica pelo produto final de hidrlise. Por prevenir o acmulo de celobiose, a
-glicosidase responsvel pelo controle da velocidade global da reao de
hidrlise celuloltica, desempenhando, assim, um efeito crucial na degradao enzimtica do polmero (Leite et al., 2008).
Alm das celulases clssicas, a Figura 10.7 mostra tambm a ao da
suolenina (wollenins em ingls, sinnimo de inchamento, expanso, intumescimento), a qual desempenha papel importante na degradao da celulose cristalina. Ela uma protena com similaridade de aminocidos da
expansina (expansin), uma protena de plantas que regula o alargamento
da parede celular de clulas em crescimento. Expansinas foram primeiramente isoladas do Trichoderma reesei em 1992, e acredita-se que estejam
envolvidas no rompimento de ligaes de hidrognio entre as microfibrilas
de celuloses ou entre celuloses e outros polissacardeos da parede celular
sem hidrolis-los, mas causando o deslizamento de fibras de celulose ou
de expanso da parede celular (Whitney et al., 2000). Tem sido relatado
que a ao da suolenina ajuda a degradao enzimtica de celulose, uma
vez que causa um dano parcial e afrouxa a estrutura da celulose, semelhante
causada pelo tratamento com ultrassom, em liberar acares redutores
(Saloheimo et al., 2002).
Figura 10.7 Representao esquemtica do sistema celuloltico. Os stios de maiores atividades das enzimas celulolticas so mostrados, alm de um caminho alternativo de formao
de soforose pela atividade de transglicosilao de -glicosidase
Fonte: Aro et al., 2005.
285
A maioria das hidrolases de carboidratos so protenas modulares que,

alm do stio cataltico, contm tambm, um mdulo de ligao ao carboidrato (CBM) (Jrgensen; 2007). Estes mdulos foram inicialmente descobertos em celulases, mas agora evidente que muitas outras hidrolases de
carboidratos agem tanto em polissacardeos solveis quanto insolveis, e
a funo deles tanto trazer o stio cataltico mais prximo ao substrato,
quanto tambm garantir sua orientao correta. Alm disso, j foi notado
que alguns CBMs apresentaram um efeito rompedor de fibras de celulose
(Boraston et al., 2004).
Nas celulases, o domnio de ligao celulose formado de aminocidos
hidrofbicos como a fenilalanina, triptofano e tirosina, os quais se ligam
superfcie hidrofbica da celulose por fora de Van der Waals. Essa interao facilita a associao da enzima com seu substrato, aumenta a concentrao e a atividade da enzima no ponto de atuao e ainda auxilia diretamente
na hidrlise da celulose por rompimento da estrutura cristalina. Os CBMs
so classificados em 33 famlias em funo de suas sequncias peptdicas.
Alguns CBMs, alm de ligao a celulose, podem tambm apresentar afinidade por mananas, glicanas, xilanas. Alm disso, um linker entre os dois
domnios tem sido descrito (Flint et al., 2004).
O domnio cataltico contm o stio ativo para hidrlise da celulose e o
substio que interage com a cadeia de celulose prxima ao centro ativo. Esse
substio estressa mecanicamente a cadeia de celulose e um dos resduos de
glicose forado a assumir a forma de barco instvel, levando a reduo
da energia de ativao para a reao de hidrlise e o stio ativo do domnio
cataltico pode ento atacar a cadeia de celulose.
Alm das celulases hidrolticas, enzima com atividade de oxidao de
celodextrinas, denominada celobiose desidrogenase (CDH), atua de forma
importante na degradao da celulose. Essa enzima, quando descoberta foi
denominada celobiose quinona redutase (CBQ), posteriormente chamada
de celobiose oxidase (CBO) e, finalmente, identificada como CDH (Wood;
Wood, 1992). Essa enzima, com grupo prosttico heme, atua como uma
desidrogenase tpica com ao de oxidao e reduo. Na reao de oxidao, o hemiacetal do C1 livre da celobiose convertido a lactona que sofre
hidrlise espontnea a cido carboxlico formando o cido celobionico. Os
dois eltrons liberados nessa reao so transferidos para receptor de dois
eltrons ou para dois receptores de um eltron. Como receptor intermedirio de eltrons tem sido indicado o FAD, que reduzido a FDH2 poderia
286
transferir esses eltrons a um aceptor final. Embora os substratos especficos das CDH sejam di ou trissacardeos com ligaes -1,4 e com resduos
de glicose ou manose na extremidade redutora, essa enzima pode tambm
oxidar celodextrinas, lactose, manobiose e galactosilmanose. Semelhante ao
modelo das celulases, essas enzimas tambm possuem stio cataltico separado do stio de ligao celulose. Este ltimo, com propriedade hidrofbica, diferencia-se dos stios de ligao de celulose das celulases por serem
altamente especficos para a regio amorfa da celulose e no se ligam em
xilanas, manana, amido ou quitina.
Outro sistema importante de degradao natural de celulose diz respeito
ao sistema de celulossomas. Celulases sintetizadas por bactrias anaerbias,
particularmente do gnero Clostridium e microrganismos do rmen, frequentemente se agrupam em um grande complexo multienzimtico (peso
molecular >3MDa) denominado celulossomo e identificado pela primeira
vez em 1983 a partir do Clostridium thermocellum esporulante (Lamed et
al., 1983). Este celulossomo bacteriano apresenta atividade muito elevada
sobre celulose cristalina (a verdadeira atividade celulase ou avicelase) que
no comumente observada entre celulases fngicas (Johnson et al., 1981).
Em C. thermocellum, as enzimas celulolticas esto normalmente distribudas tanto na fase lquida quanto na superfcie das clulas. No entanto,
vrias espcies anaerbias que degradam celulose no liberam quantidades
mensurveis de celulases extracelulares, ficando os complexos localizados
diretamente na superfcie da clula ou no glicoclice da clula (Lynd et al.,
2002). Alm de Clostridium e outras bactrias anaerbias, h evidncias da
presena de celulossoma em pelo menos uma bactria aerbia e alguns fungos
anaerbios, como Neocallimastix, Piromycese Orpinomyces (Li et al., 1997).
Alm de celulases, o complexo de celulossomas tambm inclui enzimas
como xilanases, mananases, arabinofuranosidases, liquenases e pectina liases (Bayer et al., 2004). Todos os celulossomas descritos compartilham algumas caractersticas (Figura 10.8). Suas enzimas esto ligadas a mdulos
no catalticos (domnio de peptdeo repetido-DPR) ou domnios chamados
doquerinas (dockerins, com significado em ingls de ancorar, neste texto
traduzido para doquerina), por meio dos mdulos de ligao ao carboidrato
(CBMs). Doquerinas se ligam, por meio de interaes clcio-dependentes, aos mdulos coesinas (coesin com significado em ingls de protena de integrao, neste texto traduzido para coesina) localizadas em uma
grande protena no cataltica que atua como um escafolde (scaffoldin,
287
com significado em ingls de matriz de suporte, neste texto traduzido para

escafolde). Em geral, o escafolde que uma protena grande e distinta, permite a ligao do complexo inteiro parede celular da planta, por meio de
uma CBM celulose-especfica famlia3 (CBM3a), e clula bacteriana por
meio de um dockerin divergente C-terminal (Bayer et al., 1998; Nordon et
al., 2009; Maki; Leung, 2009; Fontes Gilbert, 2010).
Figura 10.8 Mecanismo de agrupamento do celulossoma

Fontes; Gilbert, 2010, Bocchini, 2011.
A recalcitrncia e complexidade qumica de alguns polmeros representam um obstculo para a degradao enzimtica do material lignocelulsico,
portanto, sistemas enzimticos mais eficientes so necessrios. Os celulossomas destacam-se como uma das nanomquinas mais elaborada da natureza e o arranjo das enzimas degradadoras de parede celular de planta neste
complexo tem vantagens sobre os sistemas de enzimas livres. Menos protena
total se torna necessrio para a solubilizao da celulose, incluindo a celulose cristalina, o que sugere que a atividade especfica do celulossoma para
tais substratos maior do que a de sistemas de enzimas livres (Johnson et
al., 1982; Boisset et al., 1999). Pode-se dizer que as enzimas do celulossoma
esto concentradas e posicionadas em uma orientao adequada, tanto com
288
relao umas s outras quanto ao substrato celulsico, facilitando assim o sinergismo entre as unidades catalticas e evitando a adsoro no produtiva.
Estando o celulossoma prximo superfcie celular dos microrganismos, os
produtos de hidrlise inibidores no se acumulam, e so mantidos em concentraes adequadas para o uso mais eficiente da clula (Shohan et al., 1999).
Hemicelulases
Em funo da heterogeneidade da hemicelulose, sua hidrlise requer um

amplo complexo enzimtico formado por (Sunna, Antranikian, 1997): Endo-1,4--D-xilanases (EC 3.2.1.8) que hidrolisam ligaes glicosdicas -1,4
entre resduos de xilose da cadeia central de xilana; 1,4--D-xilosidases (EC
3.2.1.37) que liberam resduos de -D-xilose a partir da extremidade no
redutora da xilobiose e de 4--D-xilooligossacardeos curtos; -L-arabinofuranosidases (EC 3.2.1.55) que removem cadeias laterais de L-arabinose ligadas xilose da cadeia central de arabinoglicuronoxilana; -glicuronidases
(EC 3.2.1.1) que hidrolisam ligaes glicosdicas -1,2 entre resduos de
cido glicurnico e de -D-xilopiranosil das glicuronoxilanas (Figura 10.9).
Figura 10.9 Representao esquemtica de uma molcula de xilana e as respectivas aes

das enzimas do sistema xilanoltico. 1 endoxilanases; 2 -L-arabinofuranosidases; 3
glucuronidases; 4 feruloil e cumaril esterases; 5 acetil xilana esterases; 6 -xilosidases
Fonte: Chvez et al., 2006.
289
As endoxilanases, por atuarem internamente na xilana reduzindo o grau

de polimerizao, representam um papel crucial na decomposio das hemiceluloses. Xilanases com as protenas em diferentes formas, mecanismos
catalticos, propriedades fsico-qumicas e especificidades para substratos
(sua preferncia para degradar substratos com diferentes DP, DS e padro
de substituio) so produzidos por uma grande variedade de organismos
pro-e eucariotos (Iembo et al., 2002; Da-Silva et al., 2005; Bocchini et
al., 2005).
A maioria das xilanases classificada em famlia glicosilhidrolase (GH)
10 e GH11, enquanto uma minoria pertencente s famlias GH5 e GH8
(Pollet et al., 2010). As xilanases pertencentes famlia glicosilhidrolase10
(GH10) apresentam maior versatilidade cataltica ou menor especificidade
ao substrato do que aquelas pertencentes famlia 11 (Biely et al., 1997).
As xilanases da famlia 11 (GH11) clivam preferencialmente nas regies
no substitudas do esqueleto AX, enquanto a GH10 tem preferncia pela
regio mais substituda, sendo, portanto, menos prejudicada pela presena
de substituintes 4-O-metil-D-glucuronato, acetato e -L-arabinofuranosil
ao longo da cadeia principal de xilana (Biely et al. 1997).
Geralmente, um alto grau de ramificao na cadeia principal considerado um empecilho na degradao da xilana (Pollet et al. 2010), por
obstruir a formao do complexo enzima-substrato. A degradao hemicelulose envolve tambm esterases como as acetil xilano esterases (AcXEs) e
ferruloil esterases ou esterases de cidos p-cumrico e ferlico (EC 3.1.1.1). As
primeiras, acetil xilana esterases (EC 3.1.1.72), removem grupos O-acetil
das posies 2 e/ou 3 de resduos -D-xilopiranosil de xilanas acetiladas,
enquanto as segundas representam uma subclasse das hidrolases de ster
carboxlicos, as quais liberam cidos fenlicos (cidos ferlico e p-cumrico) de ligaes steres entre esses grupos fenlicos e grupos carboxlicos de
acares de hemicelulose e pectina (complexo lignina/fenlico-carboidrato, mencionado anteriormente).
A determinao das atividades dessas enzimas pode ser feita usando
substratos sintticos de steres metlicos e etlicos de cido hidroxicinmico (cido trans-ferlico) ou cido ferlico esterificado com oligossacardeos
como metil 5-O-transferruloil--L-arabino-furanosdeo.
O crescente interesse pelas EAF deve-se principalmente por estas enzimas facilitarem a desestruturao do material lignocelulsico, promovendo
290
a separao dos polmeros de acar da lignina. Essas enzimas de procariotos e eucariotos pertenciam originalmente famlia 1 das carboidrato-esterases e sugere uma relao evolutiva entre a EAF, as xilano acetil-esterases
e certas lipases. Recentemente, as EAF foram organizadas em 4 classes
(A-D), levando-se em conta a especificidade por substratos sintticos de
steres metlicos de cido hidroxicinmico, especificidade para mono e diferulatos, atividade sobre substratos com substituies no anel aromtico
do fenol e a sequncia primria da protena. As EAF do tipo A mostram
preferncia por substratos contendo uma ou duas hidroxilas substitudas
de cidos p-cumrico ou cafeico; as do tipo B atuam mais eficientemente
sobre substratos hidrofbicos como derivados de benzeno; os tipos C e D
exibem alta atividade sobre cidos hidroxicinmico como cidos ferlico,
p-cumrico, cafeico e sinapinico (Topakas et al., 2007).
Outro interesse na ao das FAE tem a ver com a qumica fina. A hidrlise especfica da ligao ster entre a poro do cido fenlico e o acar resulta na produo de um cido fenlico livre, que pode ser usado na
produo de outros compostos de importncia comercial, como o cido p-cumrico, que utilizado como ingrediente fotoativo em filtros solares, ou
a biotransformao adicional que dar origem a vanilina natural.
Ligninases
A decomposio de lignina indispensvel para a reciclagem do carbono, uma vez que esse polmero a mais abundante fonte renovvel de compostos aromticos na natureza. Por causa de sua estrutura complexa e heterognea, a lignina quimicamente recalcitrante degradao pela maioria
dos organismos. Os basidiomicetos, chamados fungos da podrido branca,
so os fungos que degradam a lignina de forma mais eficiente (Abraho
et al., 2008). Entre as enzimas envolvidas na biodegradao da lignina, as
principais so as lacases, as lignina peroxidases e mangans peroxidases
(Gomes et al., 2009; Wong, 2009).
Lacases
As lacases (benzenediol: oxignio oxirredutase, EC 1.10.3.2) fazem parte de um grupo de enzimas com funes de degradao e polimerizao.
Em plantas, essas enzimas exercem funes como cicatrizao do tecido
vegetal, biossntese e degradao da lignina e, em fungos, participam, alm
291
da biodecomposio da lignina, de processos fisiolgicos vegetativos e reprodutivos, como pigmentao do conidiforo e sntese de melanina para
composio da parede das hifas.
A lacase classificada como fenol oxidase e catalisa a oxidao de vrios
compostos aromticos e inorgnicos (particularmente fenis) com concomitante reduo de oxignio a gua. Entre os substratos oxidados por essa
enzima encontram-se: corantes fenlicos, fenis, clorofenis, alguns difenilmetanos e benzopirenos (Duran; Esposito, 2000). A lacase pode degradar lignina mesmo na ausncia de outras ligninases, como a mangans
peroxidase e a lignina peroxidase (Mayer; Staples, 2002).
Essas enzimas pertencem ao grupo das enzimas cobre oxidases (ou oxidases de cobre) e de acordo com a ligao dos ons de cobre em seus stios
ativos, as enzimas de cobre so divididas em oxidases que possuem stio
mononuclear de cobre (um cento de cobre), como as amino oxidases, e as
oxidases com stio multinuclear de cobre (mais de um cento de cobre), como
a tirosinase, ascorbato oxidase, ceruloplasmina e lacases.
As lacases, portanto, so protenas multicobre pertencentes famlia das
enzimas oxidases azuis e geralmente contm quatro ons cobre, agrupados
em trs grupos: T1, formado por um on e encarregado da oxidao do
substrato e pela transferncia de eltrons; T2, tambm formado por um on
e, juntamente com o grupo T3, que contm dois ons, constitui o centro
trinuclear de cobre, envolvido na reduo do oxignio e liberao de gua
(Torres et al., 2003). O cobre localizado no stio T1 o responsvel pela
forte absoro da enzima na faixa dos 600nm; no entanto j foram descritas
lacases deficientes de cobre em T1, chamadas de lacases brancas, por causa
da ausncia da absorbncia caracterstica na faixa do azul (Baldrian, 2010).
O mecanismo de catlise est fundamentado na reduo do oxignio
molecular formando gua, custa de sucessivas oxidaes monoeletrnicas do substrato. O ciclo cataltico das lacases inicia-se com a ligao de um
substrato redutor em T1, no stio ativo da enzima. O cobre ligado a T1 extrai eltrons do substrato e os transfere para o domnio trinuclear T2/T3,
que reduz o O2 a H2O, ao mesmo tempo que libera o substrato oxidado (Figura 10.10). Os radicais formados deflagram reaes no enzimticas que
envolvem quebras alquil-arlicas, polimerizao de compostos fenlicos e
anilinas, oxidaes nos C e desmetilaes (Duran et al. 2002; Baldrian,
2010)
292
Figura 10.10 Mecanismo de ao da lacase. esquerda, o stio cataltico das lacases, onde
se pode observar a lacase nativa, constituda de seus 4 tomos de cobre com estado de oxidao 2+. direita, o ciclo cataltico das lacases, o qual envolve sucessivas transferncias de
eltrons entre os tomos de cobre. medida que a enzima vai promovendo a oxidao de
seus substratos, iniciado pelo stio T1 que se reduz, os tomos de Cu2+ vo se reduzindo e
transferindo seus eltrons, de forma que o stio 1 sempre esteja pronto para promover a oxidao de um substrato, at a completa reduo de todos os stios e sua reoxidao formando
gua para retomar novamente o ciclo.
Fonte: Duran et al. 2002; Villela, 2006.
As lacases podem interagir diretamente com substratos fenlicos e oxid-los. Porm, em funo do baixo potencial de oxidorreduo, estas enzimas
so incapazes de atuar diretamente sobre molculas aromticas no fenlicas,
havendo ento a necessidade de uma molcula mediadora para a degradao
de tais compostos. Nesse mecanismo lacase-mediador, os mediadores oxidam substratos de alta massa molecular (Torres et al., 2003; Moreira Neto
et al., 2009). Os mediadores so, de modo geral, substncias de baixo peso
molecular, secretadas pelo prprio fungo que, quando oxidados pelas lacases, so capazes de oxidar compostos que no seriam alvos diretos da enzima.
O fenmeno da mediao amplia significativamente a gama de substratos
destas enzimas (Leonowicz et al., 1999; Da Silva, Gomes, 2004). Entre os
mediadores descritos esto os metabolitos de fungos como lcool veratrlico,
cido fenilactico, benzaldedo, anisaldedo, hidroxibenzaldedo 4-hidrobenzil lcool, aminocidos e derivados (metionina, cistena, tirosina e glutationa) e sintticos como o 2,2-azino-bis-(3-etilbenzotiazolina-6-cido sulfnico) (ABTS), 1-hidroxibenzotriazol (HBT epolioxometalatos PMO).
Peroxidases
As peroxidases so um grupo de enzimas oxirredutases que oxidam

substratos orgnicos, tendo o perxido de hidrognio como molcula aceptora de eltrons. Essas enzimas apresentam stios ativos contendo gru-
293
pos prostticos como ferriprotoporfirina IX. Na degradao da lignina,

duas peroxidases so muito importantes: A lignina peroxidase (LiP; EC
1.11.1.14) e mangans peroxidase (MnP; EC 1.11.1.13), ambas so glicoprotenas globulares formadas por 11%-12% de -hlice com dois domnios
delimitando uma cavidade central que abriga o grupo heme. Seus mecanismos de ao so apresentados a seguir.
Lignina peroxidases (LiP)
A lignina peroxidase (LiP) (E. C. 1.11.1.14) uma glicoprotena com

grupo prosttico constitudo de ferro protoporfirina IX cuja atividade cataltica depende de H2O2 O H2O2 necessrio atividade da LiP origina-se
de diferentes vias bioqumicas, expressas diferencialmente de acordo com
fatores nutricionais e condies de crescimento do microrganismo (Evans
et al., 1994; Pointing, 2001). LiP uma enzima capaz de oxidar vrios compostos aromticos no fenlicos como o lcool benzlico, clivar cadeias laterais desses compostos, catalisar reaes de abertura de anis aromticos,
desmetoxilao e desclorinao oxidativa (Conessa et al., 2002).
A Figura 10.11 mostra o ciclo cataltico das LiP. O primeiro passo da
catlise a formao do composto I pela reao do perxido de hidrognio com o on frrico da forma de repouso da enzima. Nesse mecanismo, o
perxido liga-se ao ferro do grupo heme com concomitante doao de um
prton para o resduo de histidina distal do tomo de oxignio ligado ao
ferro heme (-oxignio), enquanto o resduo de arginina distal o estabilizador de cargas. A transferncia do prton da histidina para o tomo de
-oxignio resulta na clivagem heteroltica da ligao O-O do H2O2 e na
formao de H2O e composto I. O composto I com dois eltrons oxidados
sofre duas redues sucessivas, via formao de composto II, com um eltron oxidado at retornar ao estado nativo de Ferro III.
O lcool veratrlico pode induzir a ao da enzima, proteg-la contra
ativao por altos nveis de H2O2, alm de atuar como cossubstrato, conduzindo as oxidaes de compostos aromticos no fenlicos (Mesteret al.,
1995; Pointing, 2001).
O perxido de hidrognio o aceptor natural de dois eltrons, entretanto, nas peroxidases ligninolticas diferem em seus substratos redutores que
so oxidados por um eltron pelo composto I e II, respectivamente.
A LiP difere das demais peroxidases pelo fato de terem substratos aromticos no fenlicos como preferenciais. Enquanto radicais fenoxilas so
294
os primeiros produtos de oxidao de substratos fenlicos pelas peroxidases em geral, os ctions aromticos so formados aps a oxidao de anis
aromticos no fenlicos pela LiP.
Figura 10.11 Ciclo cataltico da lignina peroxidase (LiP). Inicialmente, a enzima e o Fe3+
contido no stio ativo so oxidados pelo H2O2, gerando gua e um intermedirio com dois
eltrons oxidados, denominado Composto I. Este composto oxida o lcool veratrlico ou
outro substrato, gerando um substrato-radical livre e o Composto II, no qual o ferro ainda
est presente como Fe4+. O Composto II oxida um segundo substrato (que pode ser outra
molcula de lcool veratrlico), originando outro substrato-radical livre, e a enzima volta a
sua conformao original.
Fonte: Hammel; Cullen, 2008.
Mangans peroxidase (MnP)
A mangans peroxidase (MnP, E. C. 1.11.1.13) uma enzima extracelular glicosilada com grupo prosttico heme, encontrada apenas em
basidiomicetos.
De modo geral, a MnP no desencadeia transformaes diretas em seus
substratos por ser uma oxidorredutase no especfica. Com mecanismo cataltico da MnP muito semelhante quele descrito para a LiP e inclui uma
enzima com on frrico, bem como, compostos intermedirios I e II. Porm,
em contraste com a LiP, a MnP usa apenas o Mn2+ como substrato doador
de eltrons, oxidando-o a Mn3+ que o responsvel pelo desencadeamento de
reaes de oxidao de outras molculas orgnicas.
295
O ciclo cataltico inicia-se com a ligao de H2O2 ou um outro perxido

orgnico ao on frrico da enzima, formando um complexo ferro-perxido.
A subsequente clivagem da ligao O-O do perxido requer a transferncia
de dois eltrons do grupo heme, resultando na formao do Composto I da
MnP, o qual um complexo Fe4+-oxo-porfirina. Em seguida, a ligao dioxignio quebrada heteroliticamente e uma molcula de gua liberada. A
reduo subsequente prossegue atravs do Composto II de MnP (complexo Fe+4-oxo-porfirina). Um on Mn+2 atua como doador de 1 eltron para
essa porfirina, sendo oxidado a Mn+3. A reduo do Composto II gera um
outro Mn+3 a partir de um segundo Mn+2 levando regenerao da enzima
nativa e liberando uma segunda molcula de gua (Figura 10.11).
Enquanto o composto I da MnP, semelhante ao da LiP, pode ser reduzido por Mn2+ e tambm por outros diferentes doadores de eltrons, tais
como compostos ferrocianidas e fenlicos, o Composto II MnP produzido muito lentamente por outras substncias e requer Mn+2 para completar o
ciclo cataltico. As transferncias de eltrons envolvendo o mangans ocorrem na presena de radicais dicarboxlicos, como oxalato, malato, fumarato
e malonato (Leonowicz et al., 1999). Esses radicais so agentes quelantes
de Mn3+. Ao se complexarem, aparentemente, atuam como medidores de
baixo peso molecular que efetivamente oxidaro os compostos fenlicos da
lignina (Higuchi, 2004; Conessa et al., 2002).
O mecanismo de reao da MnP similar ao de outras peroxidases,
como a lignina peroxidase, mas nesse caso, os compostos I e II da MnP
oxidam Mn2+ (Conessa et al., 2002).
Quelatos de Mn+3 com cidos carboxlicos podem ainda reagir um com
o outro e se converterem em radicais alquila, com subsequente reao espontnea com dioxignio, resultando na formao de radicais superxidos,
que podem ser utilizados pela MnP em ausncia de H2O2 externo. Compostos aromticos no fenlicos, com baixo potencial redox, como tetrametoxibenzeno ou antraceno so sujeitos oxidao pelo Mn+3 via retirada de
um eltron do anel aromtico, originando radicais ctions arila.
Algumas MnP, alm do Mn2++, oxidam tambm compostos aromticos fenlicos e no fenlicos (vermelho fenol, lcool veratrlico) sendo
consideradas formas hbridas de LiP e MnP. Ainda no clara a forma
como atuam, a despeito do fato de LiP e MnP serem enzimas intimamente
relacionadas.
296
Figura 10.12 Ciclo cataltico de mangans peroxidases. O ciclo cataltico da MnP inicia-se
pela transferncia de dois eltrons do stio ativo da enzima para o H2O2, gerando o Composto I oxidado denominado Complexo Fe4+-oxoporfirina, com liberao de gua. A seguir, o
Mn2+ reduz o Composto I a composto II, e liberado na forma de Mn3+. Uma segunda reduo do composto II por outro tomo de Mn2+ restitui a enzima a sua configurao nativa.
Fonte: Hofrichter, 2002
Hidrlise do material lignocelulsico por mtodos fsicos

e qumicos
Apesar da disponibilidade de complexos enzimticos potencialmente capazes de hidrolisar materiais lignocelulsicos, a recalcitrncia dos mesmos,
em funo da baixa porosidade desse material, da cristalinidade da celulose
e da presena de hemicelulose e ligninas, dificulta o acesso das enzimas a
seus substratos. Desse modo, tratamentos fsicos e/ou qumicos anteriores
hidrlise enzimtica como diferentes formas de energias de alta frequncia como micro-ondas, ultrassom, radiao ionizante e exploso de vapor,
assim como diferentes combinaes com cidos ou lcalis so propostos.
Exploso a vapor
A exploso a vapor foi desenvolvida em 1925 por W. H. Mason para

a produo de madeira compensada. Desde ento, o uso do processo tem
sido expandido para outras aplicaes como a produo de alimentos para
ruminantes e polpao de madeira. O uso de exploso a vapor, para tratamento da biomassa vegetal, foi introduzido no incio de 1980 (Fody, 1980).
Neste trabalho foram descritos vrios tempos de residncia e presses no
297
rendimento de xilose e glicose. Desde ento, vrios estudos aplicando exploso com vapor para pr-tratamento de vrios materiais lignocelulsicos
foram relatados. Schultz et al. (1984) avaliou a eficincia da exploso com
vapor para pr-tratamento de misturas de cavacos de Madeira, casca de arroz, talos de milho e bagao de cana-de-acar. Esses materiais, submetidos exploso com vapor a 240C-250C por 1 minuto, apresentaram taxa
de hidrlise enzimtica semelhante quelas obtidas com papel de filtro.
O mecanismo de exploso com vapor foi descrito por Chornet e Overend
(1988) como um processo termomecanoqumico que leva a um desarranjo
dos componentes estruturais dos materiais lignocelulsicos pelo calor na
forma de vapor (termo), por foras de atrito, por causa da expanso de umidade (mecnico) e por hidrlise de ligaes glicosdicas (qumicos).
No reator, vapor sob alta presso penetra a estrutura lignocelulsica por
difuso e condensa-se, sob a alta presso, molhando o material. A umidade
na biomassa hidrolisa os grupos acetis da frao hemicelulsica, formando
cidos orgnicos como acticos e urnicos. Os cidos, por sua vez catalisam
a despolimerizao da hemicelulose, liberando xilana e pequena quantidade
de glicanas. Sob condies extremas, as regies amorfas da celulose podem
ser hidrolisadas em algum grau. Condies excessivas, isto , temperaturas e
presses altas, porm, podem tambm promover a degradao da xilose para
furfural e glicose para 5-hidroximetil furfural, os quais inibem crescimento
microbiano, sendo ento indesejvel em uma fermentao. A biomassa molhada explodida quando a presso dentro do reator liberada subitamente. O material expulso do reator pela ao da fora induzida. Vrios
fenmenos acontecem neste momento. Primeiro, a umidade condensada
dentro da estrutura evapora instantaneamente em funo da diminuio sbita da presso. A expanso do vapor da gua exerce uma fora de atrito na estrutura circundante. Se esta fora alta o suficiente, o vapor causar o desarranjo mecnico da estrutura lignocelulsica. A descrio do processo destaca
a importncia de aperfeioar os dois fatores governantes: tempo de reteno e
temperatura. A quantidade de tempo que a biomassa passa no reator ajuda
a determinar a extenso de hidrlise da hemicelulose pelos cidos orgnicos.
Tanahashi (1990) estudou os efeitos de exploso com vapor na morfologia
e propriedades fsicas da madeira. Foi mostrado que, em presses maiores que
28 kg/cm2 (230C) e 16 minutos como tempo de residncia, as microfibrilas da madeira tornaram-se completamente separadas umas das outras, alm
disso, ficaram mais finas e curtas com o aumento do tempo de exposio ao
298
vapor. A cristalinidade aumentou 1,5 vezes, e a largura da micela aumentou

2 vezes. Isso levou os pesquisadores a concluir que a celulose amorfa se torna
cristalina durante o processo de exploso com vapor. Deste modo, o ndice
de cristalinidade e a largura da micela aumentam na madeira explodida com
vapor. Uma anlise trmica (baseada em temperatura de transio vtrea, Tg)
tambm foi realizada na madeira explodida, a qual demonstrou que a exploso
com vapor, com moderada severidade, promove a deslignificao. Entretanto, os mesmos autores encontraram que, com tempos de tratamentos prolongados, pode ocorrer a repolimerizao da lignina. Os efeitos de exploso com
vapor em material lignocelulsico de madeira, divulgados na literatura, podem ser resumidos: 1) aumento da cristalinidade da celulose promovido pela
cristalizao da frao amorfa; 2) aumento da hidrlise da frao hemicelulose;
3) aumento de deslignificao; 4) tanto a deslignificao quanto a hidrlise da
hemicelulose aumentam o volume dos poros das clulas na planta, e so ento
benficas para a subsequente hidrlise da celulose; 5) o aumento de cristalinidade de celulose, porm, uma desvantagem, pois reduz a hidrlise da celulose.
Micro-ondas
A ao das micro-ondas sobre molculas de gua provoca um intenso

movimento rotacional que, por atrito, gera aquecimento. Os choques provocados por este movimento rotacional podem ser teis para promover a
desestruturao do complexo ligno-hemicelulsico. Pr-tratamentos de biomassa com a aplicao de micro-ondas em meio alcalino reduziram em 50% o
tempo para obteno da mesma quantidade de acares redutores por hidrlise enzimtica da palha de arroz quando comparado ao processo sem micro-ondas, e foi verificado um aumento de 5% no etanol obtido a partir de palha
de trigo (Zhu et al., 2006). Dessa forma, a tecnologia na hidrlise de bagao
de cana-de-acar parece ser promissora principalmente pelo fato de poder
ser aplicada sobre o bagao em leito mvel, o que possibilita automao.
O uso de micro-ondas com pr-tratamento de bagao de cana, associado
com glicerol e H2SO4 demonstrou ser eficiente para liberao de componentes fenlicos a partir da lignina, assim como promoveu maior hidrlise enzimtica (Magalhes, 2011; Moretti et al., 2011, submetido) (Tabela 10.3).
Ultrassom
A utilizao de ultrassom em processos qumicos vem se tornando mais

frequente nos ltimos anos. As ondas de choque ultrassnicas geradas em
299
meio lquido concentram alta energia e do origem ao fenmeno da cavitao acstica, podendo romper paredes celulares o que favorece a ao
enzimtica. A irradiao ultrassnica tem sido usada para acelerar processos qumicos e biolgicos como a solubilizao da lignina e da hemicelulose
de bagao de cana (Sun et al., 2004). A irradiao de ultrassom durante o
processo enzimtico de sacarificao de resduos de papis tem um efeito
significativo na cintica do processo e no teor de acares solveis totais. A
utilizao de ultrassom em ciclos intermitentes pode aumentar a produo
e a liberao de glicose a partir da celulose (Wood et al.,1997).
Tabela 10.3 Efeitos do tratamento com micro-ondas associado a cido e glicerol
Solues de
glicerol
Soluo aps pr-tratamento com

micro-ondas (2 min.)
Hidrolisado enzimtico
(Power cell-prozin)
Compostos fenlicos
(mg/g bagao)
Acares redutores
(m/g bagao)
Acares redutores
(mg/g bagao)
Glicerol 100% +
H2SO4 0,01M
33,0 + 2,0
4,9 + 0,9
512,9 + 7,0
Glicerol 70% +
H2SO4 0,01M
17 + 0,4
11,7 + 0,8
356,9 + 6,0
Glicerol 30% +
H2SO4 0,01M
0,95 + 0,8
2,2 + 0,2
195,6 + 4,0
Glicerol 10% +
H2SO4 0,01M
0,74 + 0,1
1,5 + 0,1
234,2 + 2,0
Glicerol 100% +
H2SO4 0,05M
62,4 + 0,3
16,2 + 0,9
377,3 + 10,0
Glicerol 70% +
H2SO4 0,05M
23,3 + 0,2
20,91 + 0,8
256 + 5,3
Glicerol 30% +
H2SO4 0,05M
5,5 + 0,5
195,4 + 6,0
Glicerol 10% +
H2SO4 0,05M
1,41 + 0,4
9,09 + 1,0
176,9 + 5,0
Fonte: Magalhes, 2011.
Radiao ionizante
A radiao ionizante (raios gama) provm do decaimento espontneo

por emisso beta de radionucldeos, como, por exemplo, o Cobalto-60, e
considerada segura, uma vez que alimentos so irradiados com esta forma
de energia para aumentar seu tempo de prateleira bem como instrumentos
mdicos so esterilizados sob seus efeitos. uma via muito promissora para
300
degradao da celulose em carboidratos mais susceptveis ao microbiolgica e pode ser tambm aplicada sobre leito mvel o que permite processos em fluxo contnuo.
O bagao de cana submetido radiao ionizante em meio alcalino
apresentou uma solubilidade em gua de 79% e um teor total de acares
solveis de 46%, sendo 78% de trissacardeos, 16% dissacardeos e 6% monossacardeos, contrastando com a amostra-controle que teve apenas 7% de
sua massa solubilizada e 0,4% de acares solveis. Tambm foram observadas alteraes qumicas na estrutura de materiais celulsicos submetidos
radiao ionizante como escurecimento e aumento da higroscopicidade.
Estas alteraes esto mais relacionadas a um efeito ionizante diretamente
na fibra e no gerao de radicais hidroxilas provenientes da gua (Bouchard et al., 2006).
Ozonlise
O oznio pode ser empregado como promotor de solvncia de lignina

com liberao de compostos fenlicos de baixo peso molecular. Dentre os
polmeros constituintes dos materiais lignocelulsicos, a lignina a mais
susceptvel solubilizao por ozonlise (Quesada et al., 1999). Em estudo
realizado com resduos de algodo foi provado que os teores de compostos
fenlicos monomricos solveis aumentaram em 100% com a utilizao de
oznio e que o teor de glicose aumentou de 3,0 para 10,0 g/100g de matria
seca aps a aplicao de celulases. O tratamento com oznio aumentou em
54% o teor de acares fermentescveis aps ao enzimtica sobre a palha
de arroz (Yosef et al., 1994).
Produo de enzimas para aplicao na sacarificao

de material lignocelulsico: aspectos gerais da
fermentao em estado slido (FES) e a produo
de enzimas em biorreatores
O uso de enzimas despolimerizantes na sacarificao de resduos agroindustriais para produo de etanol celulsico leva a duas questes importantes: a necessidade de desenvolver a tecnologia de produo de enzimas no
Brasil e reduo dos custos das mesmas.
301
Nesse aspecto, dentre os processos usados para a produo de enzimas, a

fermentao em estado slido (FES) atrativa principalmente pela possibilidade do uso de meio base de resduos slidos agrcolas e agroindustriais
para crescimento do microrganismo (Gomes et al., 2005, Silva et al., 2005).
Tais resduos tm mostrado bons resultados na produo de enzimas como
pectinases (Martins et al., 2002), celulases, xilanases (Leite et al. 2007;
2008), amilases (Ramalho, 2002), ligninases (Xavier-Santos, 2003), inulinases (Bender et al., 2005), quitinases (Binod et al., 2006) e fitases (Roopesh, 2006).
Esta tcnica pode tornar-se economicamente vantajosa para os pases
subdesenvolvidos, ou em fase de crescimento, onde a dificuldade econmica atual e a globalizao da economia mundial no permitem que todo
o setor agropecurio acompanhe evoluo biotecnolgica. Estes processos
seriam uma oportunidade mpar se for considerada a possibilidade de se
acoplar a produo de enzimas ao sistema de produo de etanol de cana
e celulsico, de modo que os resduos gerados na produo da cana e na
indstria possam ser utilizados como substratos.
A FES pode ser definida como um processo que ocorre na ausncia, ou
prximo da ausncia, de lquido nos espaos entre as partculas (Lonsane et
al., 1985). Neste sistema, a gua pode estar adsorvida sobre a superfcie do
slido e/ou estar retida por capilaridade entre as partculas, mas no pode
preencher totalmente os poros. As caractersticas higroscpicas do slido,
as propriedades da soluo aquosa, a geometria das partculas e a porosidade do meio definem a capacidade de reteno de lquido no meio slido.
Estudos FES em reator de coluna realizados por Zanelato (2011) demonstraram que farelo de trigo adsorve mais gua a uma taxa mais elevada do
que bagao de cana. Desse modo, a adio de gua ao meio a ser fermentado
deve levar em considerao o tipo do material que est sendo hidratado. Na
fermentao submersa (FSM), os slidos, fase dispersa, esto em soluo
no lquido, fase contnua, sendo que as reaes ocorrem nesta ltima fase.
Em geral, o crescimento e o metabolismo microbianos dependem de altas quantidades de gua para a dissoluo e difuso de solutos, substratos e
metabolitos, enquanto as trocas gasosas, basicamente de O2 e CO2, podem
ocorrer tanto na fase lquida como na gasosa, sendo mais eficientes nesta ltima. Portanto, h um equilbrio delicado entre as pores slida, lquida e
gasosa para atender aos requisitos metablicos do microrganismo, de modo
302
que estudos extensivos devem ser realizados para encontrar a proporo

tima de cada uma das fases (Gervais et al., 1996).
Na FSM, h maior homogeneidade dos constituintes do processo (microrganismo, nutrientes e metabolitos) e, consequentemente, o controle dos
parmetros de fermentao mais simples e direto, resultando em maior
padronizao dos produtos (Gomes et al., 2009). Por outro lado, na FES h
heterogeneidade do meio de cultivo e o controle de processo deficiente,
resultando em grande variabilidade de concentrao de produtos, o que
representa o maior entrave aplicao industrial desta tcnica. Para minimizar tal heterogeneidade, podem-se usar sistemas de mistura do meio de
cultivo, microrganismos com maior capacidade de colonizao do meio poroso, como fungos filamentosos, e aerao forada, para prover O2, remover CO2 e dissipar calor (Gervais; Molin, 2003).
De um modo geral, fungos filamentosos adaptam-se melhor FES do
que bactrias ou leveduras. Por causa de sua estrutura em filamentos, esses
microrganismos penetram por entre e/ou dentro das partculas por eroso
do substrato slido, causada pela liberao de enzimas fibrolticas pela ponta da hifa. Alm disso, podem crescer em menor atividade de gua (aw).
Entretanto, trabalhos tm mostrado resultados satisfatrios de obteno de
diferentes produtos utilizando culturas bacterianas (Soares et al., 1999).
O material slido usado na FES pode ser inerte, servindo de suporte
soluo nutriente e/ou como fontes de carbono e nutrientes. Neste ltimo caso, na medida em que o slido consumido, o miclio fngico adquire a funo de estruturar o meio e evitar o colapso da matriz porosa.
Eventualmente, um suporte inerte pode ser empregado em conjunto com
substratos slidos para evitar aglomerao das partculas e consequente reduo de aerao e dificuldade de remoo de calor metablico conforme
demonstrado por Silva et al. (2002) e por Martins et al. (2002). Em geral,
os materiais slidos empregados em FES so compostos naturais, tais como
resduos agrcolas, agroindustriais e de atividade urbana, agregando valor a
materiais que frequentemente so descartados inadequadamente (Pandey,
2003; Economou et al., 2010).
A inexistncia de gua nos poros entre as partculas influencia todos
os aspectos da fisiologia do microrganismo, como crescimento vegetativo,
esporulao e germinao de esporos, alm da produo e caractersticas
dos metabolitos. Esporos de fungos produzidos em FES so mais estveis,
303
mais resistentes desidratao e tm maior taxa de germinao aps longos perodos de congelamento do que os obtidos em FSM (Hlker; Lenz,
2005). Essas propriedades so atribudas ao fato de os conidiforos obtidos
em FES terem maior hidrofobicidade, parede celular mais rgida e menor
volume (Munoz et al., 1995; Pascual et al., 2000).
Fungos cultivados em FES tendem a acumular poliis em suas clulas,
como glicerol, manitol, eritrol e arabitol, sendo a composio desta mistura
dependente das condies de cultivo (Adler et al. 1985; Ruijter et al., 2004;
Arakaki et al., 2011). A produo destes metabolitos o resultado de um
mecanismo desenvolvido para manter a presso de turgor das clulas, demonstrando a adaptao do microrganismo ao acesso limitado gua.
Outro fator importante a ser considerado em FES a aerao, que assume vrias funes: oxigenao, remoo do CO2, disperso de calor e distribuio de componentes volteis metabolizados. No entanto, a remoo
de umidade do meio um aspecto deletrio da aerao, pois, mesmo que o
ar entre saturado no sistema, a elevao de temperatura decorrente da gerao de calor metablico torna-o insaturado, causando um desequilbrio termodinmico que restaurado pela remoo de gua das partculas slidas
(Umza-Guez et al., 2009).
A taxa de aerao depende dos requisitos de O2 do microrganismo para
a metabolizao de determinado produto e da remoo de CO2, da taxa
dissipao de calor metablico gerado, do ressecamento da fase slida e da
estrutura fsica do meio poroso, devendo ser otimizada para cada tipo
de meio, microrganismo e processo (Chahal, 1987). Restries na oferta de
O2 podem afetar a morfologia de fungos e a produo de metabolitos. O
crescimento das hifas individuais de A. oryzae no foi influenciado para
concentraes de O2 de at 0,25%, mas a taxa de crescimento especfico total decresceu, bem como a produo de -amilase (Rahardjo et al., 2005).
Por outro lado, a produo de flavorizantes por Kluveromyces marxianus
foi relacionada baixa disponibilidade de oxignio, resultando na produo de aromas variados, tais como lcoois, aldedos e cetonas (Medeiros et
al., 2001).
Uma grande limitao da FES a dificuldade de remoo do calor gerado pelo metabolismo do microrganismo em funo da baixa condutividade
trmica efetiva do meio poroso. Na prtica, a FES necessita mais de aerao
como veculo de dissipao de calor do que para suprimento de O2 (Vies-
304
turs et al., 1981). O aumento excessivo da temperatura em um biorreator

provoca alteraes nos mecanismos fisiolgicos dos microrganismos, podendo levar queda no rendimento dos produtos almejados e at morte
das clulas. Eventualmente, pode ocorrer a desnaturao do produto, principalmente de substncias termolbeis. Esses problemas podem ser contornados com uso de microrganismos termoflicos. Na produo de pectinases por Thermomucor indicae-seudaticae em FES usando fermentador de
coluna Umza-Guez (2009) demonstrou-se que o aumento da temperatura
decorrente do calor gerado pelo metabolismo do fungo no interferiu nas
taxas de crescimento e de produo da enzima, no requerendo, portanto, sistema de resfriamento. Esse dado importante do ponto de vista de
escalonamento, visto que contorna um dos grandes problemas da FES com
microrganismos mesoflicos.
De um modo geral, a concentrao de enzimas em FES maior do que
em FSM (Aguilar et al., 2004). A produo mxima de poligalacturonase e
xilanase por Trichoderma viridae ocorreu a aw de 0,99, enquanto a sntese de
-glicosidase foi aumentada em aw de 0,96 a 0,98 (Grajek, Gervais, 1987).
Esse perfil tem sido relatado para a produo de diferentes grupos de enzimas e microrganismos. Xilanases, celulases e pectinases foram produzidas
em maior quantidade em FES do que em FSM por Curvularia inaequalis
(Gomes et al., 2001), Penicillium spp. (Silva et al. 2002, Martin et al., 2004,
Ferreira et al., 2010) Thermoascus auraniacus (Martins et al., 2002, Marchione et al., 2007) e Aspergillus sp. (Freitas et al., 2006). Embora vrios
autores tenham relatado menor produo de protease em FES, uma enzima
frequentemente associada ao decaimento da produo de outras enzimas
em FSM (Auria et al., 1990; Viniegra-Gonzlez et al., 2003) Zanphorlin et
al. (2010), demonstraram que o fungo termoflico Myceliophthora sp. produziu maior quantidade de protease em FES do que em FSM.
Contudo, necessrio ter cautela quanto aos estudos comparativos entre FES e FSM, para que concluses parciais no sejam aceitas como absolutas. Estudos da produo de invertase e pectinase por A. niger mostraram
que o fungo cresceu mais eficientemente e produziu mais enzimas em FES
do que em FSM; apenas nesta ltima havia alta concentrao de sacarose,
indicando que a produo de enzimas mais sensvel represso catablica
em FSM (Aguilat et al., 2001; Viniegra-Gonzlez et al., 2003). Entretanto,
a represso catablica tambm pode ser exercida em FES. Dados de Silva et
305
al. (2002) demonstraram que o uso de cascas de frutas contendo altos teores
de acares na produo de pectinases em FES resultou em forte represso
da produo da enzima quando comparado a meio contendo acares em
baixas concentraes.
As caractersticas fsico-qumicas de enzimas tambm podem ser afetadas pela forma de cultivo microbiano. Acun-Argelles et al. (1994) compararam as propriedades de endo e exo-PG produzidas por A. niger em FES
e verificaram que estas enzimas foram acentuadamente mais termoestveis
do que as similares produzidas em FSM. A endo-PG mostrou-se mais estvel em faixas mais amplas de pH do que enzima de FSM. Da mesma forma, exo-PG produzida por Penicillium veiridicatum RFC3 em FES foi mais
termoestvel do que a equivalente produzida em FSM (Silva et al., 2007).
Entretanto, estudos com fungos termoflicos levaram a resultados opostos.
Martins et al. (2007) demonstraram que PG de Thermoascus auranticaus
CBMAI-756 produzida em FES foi menos termoestvel que a obtida por
FSM. Os mesmos resultados foram descritos por Martins et al. (2010) e
Gomes et al. (2011), dados ainda no publicados) para PG de Thermomucor
indicae-seudaticae e Rhizomucor pussilus. O maior nvel de glicosilao determinado para as enzimas produzidas em FSM foi considerado um fator
provvel da maior termoestabilidade dessas enzimas.
Vrias outras vantagens da FES podem ser citadas em relao convencional FSM, tais como: maior produtividade; semelhana com o habitat
natural dos fungos filamentosos, que se adaptam mais facilmente ao meio
de cultivo, permitindo o uso de microrganismos selvagens, que apresentam
melhor performance do que cepas geneticamente modificadas; etapas posteriores mais simples em funo da maior concentrao do produto; menor
gasto energtico; e menores requisitos de tratamentos de resduos. Algumas desvantagens so: problemas com aumento de escala; as dificuldades
no controle de parmetros do processo, como pH, temperatura, fornecimento de nutrientes e umidade; alta impureza do produto, uma vez que a
degradao do material slido e a atividade microbiana podem gerar metabolitos indesejados de difcil separao e que podem provocar dificuldades
nos procedimentos posteriores fermentao. Deste modo, a FES, a despeito de sua grande potencialidade, necessita de estudos microbiolgicos,
bioqumicos e de engenharia mais profundos para que possa ser aplicada
em larga escala industrial (Saiz-Jimenez, 1995).
306
Como anteriormente mencionado, a FES particularmente atrativa pela

possibilidade do uso de resduos slidos agrcolas e agroindustriais de baixo
valor. Tais resduos tm mostrado bons resultados na produo de enzimas
como descrito anteriormente. No cenrio de produo de biocombustveis,
a FES economicamente vantajosa para produo de enzimas despolimerizantes de materiais lignocelulsicos (Hsieh, Yang, 2004; Ito et al., 2011).
A grande maioria dos trabalhos publicados sobre FES trata de aspectos microbiolgicos e/ou bioqumicos, sendo os experimentos realizados
em frascos de vidro ou sacos plsticos. A transposio dos resultados obtidos nestes trabalhos para a escala de biorreatores no trivial e requer
experimentos especficos, uma vez que nos frascos de vidro as condies
de temperatura, umidade e pH so homogneas e facilmente controladas,
enquanto nos biorreatores o controle muito mais complexo.
Os fermentadores para FES podem ser divididos em duas classes bsicas: os de leito fixo e os de leito mvel. Os primeiros podem ser subdivididos em de bandeja e os de colunas de leito empacotado, enquanto os de leito
mvel, em de leito fluidizado e rotativos. Para a escolha do projeto ideal
devem ser considerados os objetivos da fermentao, custos envolvidos no
processo, facilidade de carga e descarga, limpeza e manuteno, possibilidade de monitoramento e controle dos parmetros do processo, caractersticas do microrganismo empregado e necessidade ou no de sistema estril.
importante que o reator seja construdo com material incuo, resistente
corroso e no txico para os organismos. Alm disso, deve promover
aerao eficiente e manter a uniformidade e integridade do substrato (Raghavarao et al., 2003). Ao contrrio da FSM, poucos so os fabricantes que
dispem de fermentadores para FES em linha, sendo os projetos quase customizados para o trinmio substrato-microrganismo-produto.
Nos biorreatores de bandeja, o ar escoa paralelamente superfcie do
meio fermentativo, enquanto nos de leito empacotado, o ar percola a matriz
porosa. A camada de slidos nas bandejas no pode ultrapassar alguns poucos centmetros para evitar o acmulo de energia trmica, que insuficientemente removida pelo ar que escoa na superfcie (Sato; Sudo, 1999). Desse
modo, sistemas industriais que empregam esta alternativa de cultivo, tais
como a de produo de koji no Japo, requerem grandes reas e mo de obra
extensiva, de modo que os custos de instalao e operacionais so elevados.
Um caso particular dos biorreatores em leitos estticos o da produo de
307
esporos de fungos entomopatognicos, como Metarhizium anisopliae, que

ocorre industrialmente em sacos plsticos com at 1 kg de substrato. Neste
processo, o meio de cultivo, em geral arroz, inoculado com a suspenso
fngica, acondicionado em sacos plsticos e mantido em salas com temperatura, umidade e luminosidade controladas. Estas so tcnicas muito artesanais e aspectos de engenharia so relegados a plano secundrio.
Os fermentadores de leito empacotado tm projeto simples, so de fcil operao, requerem pouco espao e baixo consumo de mo de obra. Os
controles das variveis de processo so mais eficientes do que no fermentador de bandejas (Ashley et al., 1999). Estes biorreatores so tubos verticais
encamisados, por onde circula gua temperatura desejada; o meio poroso
previamente inoculado acomodado no interior da coluna e ar percola longitudinalmente o sistema. So particularmente recomendados a microrganismos intolerantes agitao, como fungos de hifas cenocticas e mesmo
alguns de hifas septadas.
Nesta classe de biorreatores, o oxignio no fator limitante, por causa
da aerao forada, desde que no haja colapso e aglomerao do meio poroso ao longo da fermentao. Para os casos onde aglomerao previsvel,
um material fibroso inerte pode ser empregado para estruturar a matriz porosa, como fez Umsza-Guez (2009) no cultivo de Thermomucor indicae-sedaticae N31 nos substratos farelo de trigo e bagao de laranja, tendo bagao
de cana-de-acar como inerte.
A grande desvantagem deste projeto a remoo deficiente de calor metablico gerado pelo microrganismo, que provoca ressecamento do meio e
heterogeneidade na produo dos metabolitos (Rahardjo et al., 2006). As
taxas de reao e os equilbrios qumicos no fermentador so fortemente dependentes da temperatura do sistema. Assim, experimentos que se
desenvolvem satisfatoriamente em escala de frascos podem no ser bem-sucedidos neste biorreatores. Nos perodos de maior atividade metablica,
o aumento de temperatura pode superar em 10C a temperatura tima da
fermentao (Lonsane et al., 1992; Khanahmadi et al., 2006).
O controle da temperatura em leitos empacotados fica restrito a aes
sobre a velocidade e a temperatura do ar e sobre a temperatura da camisa.
Ambas alternativas so pouco eficientes, uma vez que o ar tem baixa capacidade calorfica e a disperso condutiva de calor deficiente em funo
da baixa condutividade trmica efetiva do substrato slido. O mecanismo
308
mais efetivo de controle de temperatura seria a remoo de calor evaporativo (Gutierres-Rojas et al., 1996). Para tanto, ar com umidade abaixo da
saturao poderia ser empregado e, para restabelecer o equilbrio termodinmico, gua seria vaporizada do material slido, um processo endotrmico. No entanto, apor conta da impossibilidade de repor a gua evaporada do
meio, esta alternativa leva ao ressecamento do substrato e a todos os efeitos
deletrios a ele associados.
Alguns autores observaram um perfil de umidade no interior da coluna,
crescente da base para o topo do leito (Lonsane et al., 1992; Umsza-Guez,
2009). Nas proximidades da entrada do ar no leito houve ressecamento e
nas proximidades da sada houve inundao, e ambos os fenmenos afetaram negativamente a produo de enzimas, uma vez que nas pores mais
centrais do biorreator a produo de enzimas foi maior do que nas extremidades. A queda de umidade na entrada deve-se ao efeito da remoo de
calor evaporativo j comentado, e a inundao na sada ao fato de o ar sair
saturado do fermentador e deparar-se com o ambiente a uma temperatura mais baixa, condensando o excesso de umidade, que retorna ao leito. A
gua ento ocupa os poros e dificulta as trocas gasosas, afetando o metabolismo microbiano.
Em reatores de leito fixo de grande porte, a tendncia que estas heterogeneidades de processo e de produtos se acentuem, sendo necessrias
alternativas tecnolgicas para super-las.
O fermentador de leito mvel mais pesquisado na literatura o de tambor rotativo, pois apresenta boas alternativas de controle de temperatura
e de umidade do meio. Neste projeto, o contato fluido-partcula intenso, conferindo grande homogeneidade trmica ao sistema, favorecendo a
padronizao das condies de processo e dos produtos. O projeto deste
sistema mais complexo do que o dos reatores de leito empacotado, assim
como os requisitos de manuteno, resultando em custos mais elevados de
execuo e de operao.
A operao destes biorreatores no implica rotao contnua do tambor,
que normalmente tem rotao intermitente. Quando estacionrio, este sistema assemelha-se ao reator de bandejas, pois ar introduzido no equipamento no sobre-espao acima do material slido e nesta alternativa de operao a remoo de calor metablico limitada (Mitchell et al., 2000). No
entanto, enquanto o meio slido revolvido, gua pode ser aspergida sobre
309
o mesmo, de modo que ar pode ser empregado com umidades relativas moderadamente baixas, removendo calor evaporativo, sem que o meio torne-se
ressecado. Evidentemente, a tolerncia do microrganismo ao cisalhamento
deve ser testada a priori, antes do projeto definitivo do equipamento, o que
pode ser feito em frascos de vidros aerados a serem girados periodicamente
ao longo da fermentao, comparando-se o resultado final com colunas estticas assumidas como controle (Van de Lagemaat; Pyle, 2001).
Vrios produtos tm sido obtidos com sucesso em fermentadores de
tambor rotativos, principalmente enzimas, tais como celulases e hemicelulases por Thermoascus auranticus em palha de trigo, celulases por Trichoderma harzianum em fibras de palma, xilanase e exo-PG por A. awamori em
polpa de uvas e amilases por A. awamori, em torta de babau (Kalogeris et
al.,1999; Daz et al., 2009). No entanto, alguns produtos, como pigmentos
por Monascus sp. em arroz e tanases por Penicillium glabrum em fibra sinttica embebida em soluo inoculante, no deram resultados satisfatrios
(Van de Lagemaat; Pyle, 2001; Eduardo, 2010). Na produo de pigmentos, o processo foi muito longo, cerca de doze dias, levando desestruturao do meio e aerao inadequada do sistema, enquanto na produo das
enzimas, o sistema projetado implicava rotao contnua, causando srios
danos ao miclio fngico.
Concluso
Existem ainda muitos obstculos a serem vencidos para conseguir altos rendimentos no processo de obteno de acares fermentescveis por
hidrlise enzimtica, como o custo das enzimas e a recalcitrncia do bagao. A cristalinidade da celulose e a lignina, que dificultam o acesso das
enzimas s fibras celulsicas, so obstculos que podem ser superados com
pr-tratamentos fsicos e/ou qumicos do bagao. Entretanto, alguns fatores devem ser considerados para a escolha do tratamento ao qual o bagao
ser submetido: rendimento econmico, segurana operacional, consumo
energtico e gerao de resduos.
O custo das enzimas pode ser reduzido com processos de produo alternativos, como a fermentao em estado slido usando resduos agrcolas
ou agroindustriais como substratos para cultivo dos fungos produtores.
310
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11
Utilizao de enzimas lipolticas
na produo de biodiesel
Mariana R. Pereira,
Thas C. Maester, Lcia M. Carareto Alves,
Eliana G. M. Lemos
Introduo
As enzimas catalisam processos biotecnolgicos e tm sido usadas por
dcadas, como por exemplo, na aplicao de leveduras para a fermentao
do acar a lcool; na produo de vinhos e pes; em processos enzimticos
na indstria txtil e alimentcia etc. (Aehle, 2004).
Recentemente, as propriedades catalisadoras destas enzimas esto sendo
compreendidas corretamente e uma nova fase comeou, na qual h a fuso
de ideias de qumica proteica, biofsica molecular e biologia molecular. Contribuies sobre a bioqumica enzimtica, cintica, estudos estruturais e potenciais biotecnolgicos podem ser encontrados em livros, artigos e enciclopdias (ibidem). Neste captulo, ser discutida a nomenclatura das enzimas
e suas relaes, dando um enfoque aplicao das enzimas lipolticas para
a produo de biodiesel, visto que o uso do biodiesel no Brasil tem atrado
ateno por ser um combustvel renovvel, biodegradvel e atxico, propiciando o desenvolvimento de uma fonte energtica sustentvel. O biodiesel
composto de alquil steres de cidos graxos e pode ser sintetizado por catlise qumica ou enzimtica, principalmente a partir de fontes renovveis.
Dentro deste contexto, o uso de enzimas para produo de biodiesel tem
recebido muita ateno uma vez que apresenta muitas vantagens sobre os
mtodos qumicos: realizado em condies de reao moderada, utiliza
pouca quantidade de lcool, a recuperao do produto mais fcil e o processo gera menor interferncia ambiental (Kourist; Brundiek; Bornscheuer,
320
2010). Dentre estas enzimas, a aplicao de lipases para produo de biodiesel, a partir de leos vegetais brutos, possibilita produzir um produto de
alta pureza, proveniente de gorduras descartadas, pois atuam sobre cidos
graxos tanto livres quanto ligados acilgliceris.
Em funo da intensa utilizao de lipases na produo de biodiesel necessria a identificao de novas enzimas lipolticas que aumentem sua produo, sem resultar no custo elevado do produto final. Tambm necessrio
que estas enzimas no sejam inativadas pela concentrao do lcool, possuam
elevada atividade, entre outras caractersticas. Vrias propostas so viveis
para a busca de novas enzimas, sendo uma delas a abordagem metagenmica.
Esta abordagem foi proposta em 1998 e envolve a extrao direta do
DNA genmico de amostras do ambiente e clonagem do material obtido,
resultando em complexas bibliotecas que apresentam vrias aplicaes
como analisar a diversidade microbiana e identificar genes codificadores de
protenas de interesse biotecnolgico (Chu et al., 2008; Couto et al., 2010;
Lee et al., 2004; Ranjan et al., 2005; Rhee et al., 2005; Wu; Sun, 2009). Diversos estudos tm demonstrado que a anlise metagenmica propicia uma
combinao quase ilimitada para encontrar novos genes codificadores de
lipases, como por exemplo, os genes que foram prospectados em bibliotecas metagenmicas advindas de diferentes amostras ambientais como: solo
(Lee et al., 2004), gua de lagoa e lago (Ranjan et al., 2005), de mar (Chu et
al., 2008), de rio (Wu; Sun, 2009), sedimento de manguezais (Couto et al.,
2010) e campos termais (Rhee et al., 2005).
Segundo Ranjan e colaboradores (2005), a busca incessante por lipases
ir aumentar a diversidade desta enzima e, consequentemente, o nmero de famlias as quais esto classificadas. Por serem enzimas versteis e
amplamente utilizadas, a expectativa que as lipases futuramente sejam
to importantes como catalisadores industriais, o quanto so atualmente as
proteases e carboidrases (Trevisan, 2004). Como exemplo disso, a grande ateno destinada a esta enzima para a produo de biodiesel, por meio
da transesterificao de gorduras, uma alternativa do combustvel petrleo
para os problemas ambientais (Kourist; Brundiek; Bornscheuer, 2010).
Diversidade de enzimas
Enzimas de diferentes organismos so usadas para aplicao industrial,
tanto de sistema procaritico quanto de eucaritico. O primeiro abrange
UTILIZAO DE ENZIMAS LIPOLTICAS NA PRODUO DE BIODIESEL
321
famlias gram-negativas e gram-positivas. J o segundo, inclui leveduras e

fungos, assim como clulas de mamferos e insetos, cujas enzimas so usadas em produtos biofarmacuticos (Aehle, 2004).
Para vrios casos envolvendo explorao de novas enzimas ocorre o estudo das estirpes para produzir enzimas de interesse, fato conciliado com a
variedade de microrganismos existentes. Como exemplo, a bactria Bacillus
licheniformis, que secreta naturalmente protease alcalina, foi selecionada
para produzir uma das primeiras enzimas comerciais, Subtilisin Carlsberg,
para uso em detergentes. Vrias outras estirpes produtoras de altos nveis
de protease tambm foram selecionadas para aplicao industrial (ibidem).
Do fungo Trichoderma foi descoberto um complexo enzimtico de celulase cida que capaz de decompor substrato de celulose em glicose, e esta
aplicao est sendo utilizada no tratamento de matrias txteis. Estudos
constantes com este complexo enzimtico so realizados a fim de verificar
o potencial para degradao de celulose, e assim como para outros sistemas
j descritos, novas estirpes so isoladas (ibidem).
Nestes exemplos, os microrganismos podem ser vistos como sistemas
metablicos que convertem substratos em massa celular e bioprodutos, e
as enzimas atuam nestes sistemas a fim de catalisar diferentes reaes (ibidem). Cada clula possui mecanismos regulatrios que atuam na sntese
e atividade enzimtica, permitindo clula responder adequadamente a
mudanas ambientais.
O processo bsico de sntese enzimtica envolve transcrio, traduo e
processos ps-traducionais, este em organismos eucariticos. Vrias diferenas existem entre as vrias classes de organismos, principalmente entre
os procariontes e eucariontes. As enzimas diferem enormemente entre si
quanto massa celular, nmero de cadeias polipeptdicas, ponto isoeltrico
e grau de glicosilao. E esta variedade na produo de enzimas ocorre entre
as diferentes espcies (ibidem).
Classificao enzimtica
Na dcada de 1950, houve um crescimento rpido no nmero de enzimas conhecidas e a nomenclatura ficou inapropriada e confusa para abrang-las. Assim, para algumas enzimas que desempenham diferentes reaes,
o nome frequentemente mencionava pouco ou quase nada sobre a natureza
322
da reao catalisada, alm do que nomes similares foram dados a enzimas de

tipos completamente diferentes.
Tendo em vista esta situao, no terceiro Congresso Internacional de
Bioqumica, em Bruxelas em 1955, a Unio Internacional de Bioqumica
e Biologia Molecular (IUBMB) decidiu criar o Comit Internacional de
Enzimas (Enzyme Committee E. C.), sob orientao da Unio Internacional de Qumica Pura e Aplicada (IUPAC). Por esta razo, cada enzima
recebe ento uma nomenclatura no formato EC X.Y.W.Z.
Como princpios gerais da nomenclatura, o primeiro consiste que a terminao ase deve ser usada em enzimas nicas e no deve ser aplicada em
sistemas que usam mais de uma enzima. Portanto, quando desejar nomear
um sistema em funo da reao total catalisada por ele, a palavra sistema
deve ser includa no nome. O segundo princpio menciona que as enzimas
devem ser nomeadas e classificadas de acordo com as reaes que catalisam.
Isto se refere a mudanas qumicas resultantes da atuao da enzima e que
so representadas em equaes qumicas, normalmente o mecanismo de ao
e os cofatores intermedirios no so includos no nome. Assim, a enzima
no pode ser sistematicamente nomeada at que as propriedades da catlise sejam identificadas. Quanto ao terceiro princpio geral, adota-se que as
enzimas devem ser divididas em grupos com base no tipo de reao que catalisam, em funo do substrato, que a base para a classificao individual
da enzima. Isso fornece base para a classificao em nmeros (cdigos), de
acordo com o Comit Internacional de Enzimas (E. C.).
Em 1961, este Comit sugeriu a classificao das enzimas em seis classes, usando os nmeros (cdigos) com o prefixo E. C. seguido de quatro
nmeros separados por pontos, que representam:
1.
2.
3.
4.
O primeiro nmero indica qual das seis classes a enzima pertence;

O segundo indica qual a subclasse;
O terceiro indica a sub-subclasse;
O quarto especfico reao que a enzima catalisa.
As seis classes propostas so:1

Classe 1. Oxidorredutases: esta classe compreende todas as enzimas
que catalisam reaes de oxirreduo, ou seja, reaes de transferncia
1 Mais informaes sobre a classificao enzimtica esto disponveis em <http://www.
chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/>, que propicia dados constantemente atualizados.
323
de eltrons. O nome recomendado dehidrogenase sempre que possvel, no entanto, redutase pode ser tambm utilizado. Quando o O2 o
aceptor da reduo usa-se oxidase.
Classe 2. Transferases: enzimas que transferem um grupo especfico
como metil, acil, amino, glicosil ou fosfato, de uma substncia para
outra.
Classe 3. Hidrolases: enzimas que hidrolisam ligaes C C, C O,
C N, e outras pontes incluindo fosfrico e anidrido. O nome sistemtico sempre inclui hidrolase.
Classe 4. Liases: enzimas que quebram ligaes C C, C O, C N
e outras pontes, atuando em duplas ligaes ou anis. Inversamente,
tambm adicionam grupos em duplas ligaes. O nome sistemtico
de acordo com o grupo substrato liase.
Classe 5. Isomerases: enzimas que catalisam mudanas geomtricas
ou estruturais em uma molcula. Dependendo do tipo de isomerismo
podem ser chamadas de racemases, epimerases, cis-trans-isomerases,
isomerases, tautomerases, mutases ou cicloisomerases.
Classe 6. Ligases: enzimas que catalisam a unio de duas molculas,
em conjunto com a ponte pirofosfato do ATP ou outro nucleosdeo.
At 1983, o nome recomendado era sintetase, no entanto, na recomendao atual, o nome X - Y ligase, a fim de evitar confuso com o nome
sintase que no faz parte de enzimas da classe 6. O nome sistemtico
formado de acordo com X:Y ligase.
Enzimas lipolticas
As enzimas lipolticas esto atualmente atraindo enorme ateno por
causa de seu potencial biotecnolgico (Trevisan, 2004), como por exemplo, na indstria alimentcia e na rea dos detergentes e, recentemente, na
produo de biodiesel, por meio da transesterificao de gorduras, uma alternativa do combustvel petrleo para os problemas ambientais (Kourist;
Brundiek; Bornscheuer, 2010).
A maioria das enzimas lipolticas industriais de origem microbiana,
bacteriana ou fngica. As lipases (EC 3.1.1.3) e esterases (EC 3.1.1.1) so
enzimas representantes da classe 3, que hidrolisam cadeia longa ( 10 tomos de carbono) e cadeia pequena (< 10 tomos de carbono).
324
Nos procariotos, as enzimas lipolticas podem ser classificadas em

oito famlias diferentes, de acordo com os pesquisadores Arpigny e Jaeger
(1999). Esta classificao est baseada nas sequncias conservadas, motivos
e propriedades biolgicas, denominadas: verdadeiras lipases, GDSL, lipase
hormnio-sensitiva (HSL) e as famlias III, V-VIII.
A famlia I (verdadeiras lipases) constituda de seis subfamlias, que
possuem em sua maioria a presena do pentapeptdeo conservado <Gly-Xaa-Ser-Xaa-Gly>. As subfamlias I.1 e I.2 da famlia I compartilham
homologia na posio de dois resduos de aspartato e dois de cistena, que
esto envolvidos na formao do stio de ligao ao Ca+2 e pontes dissulfeto,
respectivamente. Por estes resduos estarem perto dos stios catalticos da
histidina e aspartato, acredita-se que eles estejam envolvidos na estabilizao do centro ativo das enzimas (Figura 11.1).
Figura 11.1 Alinhamento de sequncias de aminocido de representantes da famlia I.

possvel verificar nos blocos conservados os stios catalticos ( ).
A famlia II apresenta o motivo <Gly-Asp-Ser-(Leu)> sendo, por isso,

conhecida como famlia GDSL (Figura 11.2). Os membros da famlia III
possuem o dobramento regular alfa/beta hidrolase e a tpica trade cataltica, alm de exibirem 20% de identidade com sequncias de aminocidos do
PAF-AH humano (Acetil-hidrolase do fator ativador de plaquetas).
Figura 11.2 Alinhamento de sequncias de aminocido de representantes da famlia II,

sendo possvel visualizar a presena do bloco conservado GDSL, caracterstico desta famlia.
325
A famlia IV apresenta similaridade com as Lipases Hormnio-Sensitiva de mamferos, sendo conhecidas como HSL. Nesta famlia, verifica-se o
stio conservado HGGG e logo aps, o pentapeptdeo GDSAG localizado
no N-terminal da protena (Figura 11.3).
Figura 11.3 Alinhamento de sequncias de aminocido de representantes da famlia IV.

Presena do bloco conservado HGGG e GDSAG; e da trade cataltica ( ).
A famlia V possui membros com estruturas similares dehalogenases, haloperoxidases e epoxide hidrolases, e folha alfa/beta hidrolase como
caracterstica da estrutura terciria. Nesta famlia, possvel verificar os
blocos conservados GXSMGG, PTLV e GH, que so caractersticos dos
membros desta famlia (Figura 11.4).
Figura 11.4 Alinhamento de sequncias de aminocido de representantes da famlia V.

Presena do bloco conservado GXSMGG e PTLV; e da trade cataltica ( ).
As enzimas lipolticas da famlia VI esto entre as menores esterases conhecidas, com massa molecular entre 23-26 kDa. O stio ativo destas enzimas um dmero, e a subunidade possui dobramento alfa/beta hidrolase e
a clssica trade cataltica <Ser-Asp-His>.
326
Na famlia VII, grande parte das enzimas bacterianas divide homologia

com sequncias de aminocidos de acetilcolina esterases de eucariotos e
com carboxilesterases de intestino e fgado. J a famlia VIII constituda
por enzimas com 380 resduos de aminocidos, as quais compartilham similaridade com vrias -lactamases da classe C, sendo o motivo <Ser-Xaa-Xaa-Gly>. No entanto, para outros autores este motivo conservado que
as caracteriza outro, sendo necessrio mais informao sobre esta famlia.
Embora em 1999 tenha sido proposta esta classificao abrangente (Arpigny; Jaeger, 1999), novas lipases e esterases esto sendo identificadas no
decorrer dos anos (Chu et al., 2008; Couto et al., 2010; Lee et al., 2004,
Ranjan et al., 2005, Rhee et al., 2005, Wu; Sun, 2009). Com o advento da
tecnologia do DNA recombinante e construo de complexas bibliotecas
metagenmicas, diferentes amostras ambientais esto sendo estudadas e,
consequentemente, novas enzimas lipolticas foram identificadas, como
por exemplo: a LipEH166 (Kim et al., 2009) e EstY (Wu; Sun, 2009). Segundo pesquisadores da rea, a busca incessante por lipases e esterases em
diferentes ecossistemas ir aumentar a diversidade das enzimas lipolticas
e, provavelmente, o nmero de famlias (Ranjan et al., 2005).
Tipos de reao catalisada pelas lipases

Como mencionado anteriormente, as lipases (E. C. 3.1.1.3), denominadas lipases verdadeiras, esto dentro da classe 3 da classificao enzimtica
e catalisam a hidrlise total ou parcial de triacilglicerol para liberar diacilglicerol, monoacilglicerol, cidos orgnicos e glicerol (Carvalho et al., 2003).
Elas possuem uma capacidade peculiar de atuar apenas na interface leo/
gua, o que exclui as enzimas que agem em steres solveis em gua (esterases) ou que hidrolisam outros lipdeos (acilidrolases, colesterolesterases,
tioesterases e outras).
A partir do estudo destas enzimas, foi comprovado que elas podem reverter a hidrlise do triacilglicerol no sentido da reao de esterificao, por
meio da quantidade de gua presente, portanto, a reao reversa (sntese)
tambm pode ocorrer quando h baixa concentrao de gua. Este conhecimento tornou possvel o uso da lipase como biocatalisador da interesterificao de leos e gorduras, como consequncia, sua aplicao na produo
de biodiesel.
327
A reao de interesterificao traz alteraes na composio e distribuio dos cidos graxos da molcula de triacilglicerol e est relacionada com
a troca de radicais acil entre um ster e um cido (acidlise), um ster e um
lcool (alcolise), ou de um ster e outro ster, na forma de glicerdeos ou de
monoster, reao esta denominada de transesterificao por alguns autores.
Dentro deste contexto, as diferentes reaes desempenhadas pelas lipases so: hidrlise, esterificao e interesterificao (acidlise, alcolise e
glicerlise) (Figura 11.5).
Figura 11.5 Esquema representando as reaes catalisadas por lipases: hidrlise, esterificao e interesterificao.
328
Biodiesel
Estima-se que os recursos fsseis no renovveis usados como fonte
de energia sero suficientes apenas por um curto perodo de tempo. Alm
disso, emisses macias dos gases responsveis pelo efeito estufa por causa
da utilizao desses combustveis causam mudanas irreversveis no clima
global. Dessa forma, faz-se necessrio solucionar a dependncia ao petrleo
bruto e estabelecer uma alternativa, que pode ser baseada em energias renovveis e matrias-primas abundantes, como a biomassa de vegetais (Rttig
et al., 2010). O mercado de biocombustveis representado pelo bioetanol
e biodiesel, utilizados para substituir os combustveis de primeira gerao,
gasolina e diesel, em larga escala.
A desvantagem associada produo do biodiesel est ligada a seu preo
final e a problemas ticos, como concorrncia com a produo mundial de
alimentos. Porm, existe uma compensao quando se utilizam matrias-primas de menor valor ou resduos, como leo de cozinha que seria descartado. O biodiesel considerado extremamente competitivo em relao
ao combustvel derivado do petrleo, pois alm de ter qualidade similar
possui caractersticas vantajosas, como a dependncia de fontes renovveis,
muitas vezes domsticas, ser biodegradvel e emitir baixa concentrao de
poluentes (Knothe; Krahl; Gerpen, 2005).
Gorduras animais, leos descartados e resduos de gordura so alternativas de substratos frente aos leos vegetais. No entanto, por conta do
alto grau de saturao que os cidos graxos de animais possuem, seus steres no so recomendados para o uso em baixas temperaturas. Produtos
de descarte contm um alto ndice de cidos graxos livres, precisando de
um pr-tratamento para posterior aproveitamento. Outra possibilidade
a utilizao de cidos graxos formados como subprodutos da produo de
celulose (tall oil). A produo de uma tonelada de celulose resulta em 30 kg
a 40 kg desse leo, que contm uma mistura de cidos graxos (42%-55%),
resina (33%-47%), esteris e outros componentes. Este leo considerado
um dos leos mais baratos do mercado.
A substituio dos combustveis fsseis deve atender alguns requisitos
para que esta ao seja vantajosa e, em muitos aspectos, o biodiesel tem
se mostrado um excelente combustvel de segunda gerao. Ele menos
txico e mais facilmente degradado (Rttig et al., 2010). A composio do
diesel quimicamente mais complexa e sua biodegradao requer mais
329
energia. Finalmente, alguns compostos do diesel comum so txicos para

os microrganismos, o que contribui para uma menor biodegradabilidade.
leos vegetais e gordura animal despertaram interesse a partir de 1970,
por causa da crise de energia que ocorreu nessa dcada, sendo investigados
como fontes possveis de combustveis alternativos por Rudolf Diesel (18581913). Como estes compostos apresentam elevada viscosidade em comparao aos combustveis derivados de petrleo, o que acarreta problemas aos
motores automotivos, quatro solues foram encontradas para resolver o
problema: microemulsificao, pirlise, diluio com combustveis convencionais derivados de petrleo e transesterificao (Knothe; Krahl; Gerpen,
2005). A ltima a metodologia utilizada para a produo de biodiesel.
Reao de transesterificao
O biodiesel formado pela reao de transesterificao de leos vegetais ou
gordura animal, que possuem em sua composio principalmente triacilgliceris, tambm denominados triglicerdeos. Nessa reao, os triacilgliceris
reagem com lcool na presena de um catalisador, formando alquil steres
(biodiesel) e glicerol (Figura 11.6). A constituio do produto corresponde ao
tipo de triacilglicerol utilizado na reao, mas os componentes mais comuns
so cido palmtico (C16:0), cido esterico (C18:0), cido oleico (C18:1),
cido linoleico (C18:2) e cido linolnico (C18:3) em diferentes propores
(Rttig et al., 2010).
Figura 11.6 Esquema da reao de transesterificao. R uma mistura de vrias cadeias

de cidos graxos.
Fonte: Knothe; Gerpen; Krahl, 2004.
330
Os produtos mais comuns so os metil steres, visto que o metanol o

lcool com menor custo em diversos pases. No Brasil, no entanto, o etanol
utilizado mais frequentemente, por ser o lcool menos oneroso em sua
produo em funo da fermentao da cana-de-acar, resultando em etil
steres. Estes, por sua vez, possuem numerosas vantagens em comparao
aos metil steres, desde sua eficincia at sua taxa reduzida de emisso de
poluentes. Porm, o desempenho mximo de ambos menor em comparao com o combustvel de origem fssil (Knothe; Krahl; Gerpen, 2005).
A reao de transesterificao ocorre por catlise cida ou bsica. Comumente, a forma bsica a mais utilizada por ser um processo mais rpido de catlise, menos corrosiva e tem uma taxa de eficincia 4 mil vezes
maior. Porm, a principal dificuldade relacionada catlise bsica a saponificao que ocorre quando esto presentes gua e cidos graxos livres
na amostra (Rttig et al., 2010). Para que a reao ocorra resultando em
mxima produo, o lcool precisa ser puro, e o leo utilizado deve conter
uma porcentagem menor que 0,5% de cidos graxos livres.
O rendimento final da formao de etil steres no influenciado pelo
tipo de lcool, mas lcoois de cadeias mais longas so mais solveis em leo e
permitem que sejam utilizadas altas temperaturas, acelerando a velocidade
de reao. O mesmo no ocorre com relao proporo entre lcool e leo.
Para deslocar o equilbrio no sentido da formao do produto, a relao molar ideal de 3:1 para catlise bsica e at 30:1 na catlise cida. Parmetros
de temperatura foram estabelecidos, sendo 60C, em uma proporo de
6:1 de lcool: leo, para o metanol, 75C para o etanol e 114C para o butanol, nesta mesma proporo (Knothe; Krahl; Gerpen, 2005).
Na reao de transesterificao, alcxidos em soluo com o lcool correspondente impedem que ocorra a formao de gua e resultam na formao de glicerol com maior pureza. Em princpio, a reao de transesterificao reversvel, porm, para a produo de biodiesel, o mesmo no ocorre,
pois o glicerol formado no miscvel com o produto, resultando em um
sistema de duas fases.
Nessa reao, ocorre a formao de di e monoacilgliceris como produtos intermedirios, que podem variar de acordo com as condies aplicadas.
A formao de glicerol a partir de triacilgliceris ocorre por etapas atravs
de di e monoacilgliceris, com uma molcula de alquil ster sendo formada
em cada passo. Sabe-se que diacilgliceris atingem mxima concentrao
331
antes dos monoacilgliceris, ento, no ltimo passo, a formao do glicerol

a partir deste ocorre mais rapidamente em relao a sua formao por diacilgliceris. A adio de solventes pode acelerar a reao, j que supera a
limitao envolvendo a miscibilidade do lcool com o leo ou gordura utilizada. Outras alternativas para acelerar o processo envolvem a utilizao
de micro-ondas ou irradiao ultrassnica (Knothe; Krahl; Gerpen, 2005).
Os processos qumicos descritos acima englobam a base da produo
industrial de biodiesel, que est intimamente relacionada com sua qualidade. As etapas realizadas para refinar a matria-prima utilizada determinam
se o combustvel atingir as especificaes para sua aplicao industrial.
Embora catalisadores qumicos sejam relativamente baratos e ofeream
elevada taxa de reao, estes compostos apresentam inconvenientes, como
consumo de energia, necessidade de neutralizao do catalisador e vrias
etapas de purificao final por causa da complicada remoo do catalisador
e do glicerol. Alm disso, a catlise alcalina industrial exige alta qualidade
de reagentes, matrias-primas ausentes de gua e cidos graxos livres (Bisen et al., 2010). Entretanto, outra forma vivel de produo de biodiesel
realizada pela catlise enzimtica, que possui vantagens em relao ao mtodo qumico, visto que menos prejudicial ao ambiente e resulta em um
produto com elevada pureza.
Tabela 11.1 Propriedade dos lcoois contendo de 1 a 4 carbonos.

Frmula
Metanol
Etanol
Peso
Temperatura de Temperatura
molecular ebulio (C) de fuso (C)
CH3OH
32,042
65
-93,9
C2H5OH
46,069
78,5
-117,3
1-Propanol
CH2OH-CH2-CH3
60,096
97,4
-126,5
2-Propanol
(iso-Propanol)
CH3-CHOH-CH3
60,096
82,4
-89,5
CH3-CH2-CH2-CH2OH
74,123
117,2
-89,5
CH3-CHOH-CH2-CH3
74,123
99,5
2-Metil-1-Propanol CH2OH-CH-CH2-CH3
|
(iso-butanol)
CH3
74,123
108
74,123
82,3
25,5
1-Butanol
(n-Butanol)
2-Butanol
2-Metil-2-propanol
CH3-CHOH-CH3
|
CH3
332
Transesterificao por enzimas

A transesterificao realizada por enzimas permite o uso de leos e gorduras com menor qualidade, isto , contendo cidos graxos livres (o que
facilita a separao do produto), utiliza condies moderadas de reao;
no necessita de grande quantidade de lcool, levando a um menor gasto
de energia e custos de produo reduzidos. Atualmente, este processo
quase exclusivamente feito em escala laboratorial e suas principais desvantagens so o elevado custo das enzimas e sua possvel inativao por lcoois
de cadeia curta, como metanol, ou outros componentes do leo (Bisen et
al., 2010).
A produo de biodiesel pela catlise enzimtica depende, do mesmo
modo que a catlise qumica, de fatores como temperatura, relao taxa de
lcool: leo e teor de gua na reao. No entanto, neste caso, outros fatores
influenciam o processo de reao, como o tipo de lcool, o uso de solventes
e as propriedades das enzimas utilizadas (Rttig et al., 2010). Essa reao
realizada pelas lipases, anteriormente descritas neste captulo.
Para a produo deste combustvel, podem ser utilizadas tanto lipases em
sua forma livre como imobilizadas. Embora os custos do processo de preparo das lipases livres sejam reduzidos, o custo da produo do biodiesel aumenta, pois as enzimas no podem ser reutilizadas. Alm disso, elas exigem
longo tempo de reao para atingir rendimentos elevados. Por outro lado, a
imobilizao das enzimas tem um efeito estabilizador sobre ela, e permite
a aplicao no sistema de elevadas temperaturas, que levam a uma taxa de
converso mais rpida e com menor tempo de reao (Bisen et al., 2010).
Entre as vantagens do uso de lipases na produo de biodiesel (ibidem)
esto:
possibilidade de regenerao e reutilizao dos resduos imobilizados,
j que eles podem ser mantidos no reator sem sofrer alteraes;
utilizao de enzimas em reatores, o que permite seu uso em alta concentrao e contribui para uma ativao das lipases por maior perodo
de tempo;
maior estabilidade trmica da enzima, por estar em seu estado nativo;
a imobilizao de lipases as protege do solvente que pode ser necessrio para a reao;
a separao do produto facilitada ao utilizar este biocatalisador.
333
As lipases mais frequentemente utilizadas so isoladas de microrganismos do gnero Candida, como C. rugosa e C. antarctica. Diferentemente
da catlise qumica, que geralmente ocorre em temperaturas ligeiramente
abaixo do ponto de ebulio do lcool (> 60C), a temperatura ideal para
a catlise enzimtica depende da lipase utilizada, mas , geralmente, entre
30C e 45C (Rttig et al., 2010).
Quase todos os tipos de lcool podem ser usados, embora lcoois de
cadeia curta, como o metanol (Tabela 11.1) possam inativar a lipase. Esta
inativao atribuda baixa solubilidade dos lcoois de cadeia curta no
leo ou gordura. Dessa forma, o metanol menos adequado do que o etanol
tambm para a catlise enzimtica (Bisen et al., 2010, Rttig et al., 2010).
Embora a produo com lcoois de cadeia longas seja geralmente maior,
o rendimento de alquil steres depende da especificidade do substrato da
lipase utilizada. Algumas lipases tambm so capazes de agir com presena
de at 20% de gua.
Alm das enzimas em sua forma purificada ou imobilizada, pode ser
aplicada toda a clula atuando como biocatalisador, o que reduz significativamente os custos, uma vez que no so necessrios isolamento, purificao e imobilizao da lipase. Esse tipo de imobilizao de toda a clula no
s permite seu uso por repetidas vezes, mas tambm aumenta a atividade
especfica da lipase intracelular de quatro a sete vezes (Bisen et al., 2010).
Tcnicas de Engenharia Gentica, envolvendo a produo de protenas
podem ser teis para melhorar a eficincia cataltica de lipases. O uso da
tecnologia do DNA recombinante para produzir grandes quantidades de lipases e a utilizao das enzimas ou clulas imobilizadas so uma abordagem
para estimular a produo de biodiesel. Alm disso, a transesterificao enzimtica considerada melhor para o ambiente, e precisa ser explorada para
a produo industrial deste biocombustvel.
Apesar de inmeras lipases serem usadas atualmente, muitas vezes os
biocatalisadores precisam ser mais bem estudados para mostrar a especificidade desejada, estabilidade, propriedades operacionais, entre outras
caractersticas. A criao de enzimas consideradas personalizadas para
uma reao de interesse, mtodos clssicos, como variao de solventes e
metodologias de imobilizao so complementados com o uso de mtodos
da engenharia de protenas (Kourist; Brundiek; Bornscheuer, 2010). Adicionalmente, o isolamento eficaz de novas lipases obtidas pela abordagem
334
metagenmica pode ser um caminho para a obteno de enzimas mais eficientes na produo do biodiesel.
Metagenoma e lipases
A metagenmica uma abordagem recente e que tem possibilitado a
descoberta de uma infinidade de novas enzimas, como por exemplo, as diversas enzimas lipolticas que puderam ser isoladas de diferentes fontes,
como a gua de lagoas, sedimento marinho, microflora do rmen de bovinos, do solo, entre outros.
Elend e colaboradores (2006) isolaram, entre vrias esterases, uma lipase ativa em baixas temperaturas oriunda de uma biblioteca metagenmica
de solo contaminado com leo. A lipase foi purificada e teve alta similaridade com lipase de Pseudomonas fluorescens. Outra lipase ativa em baixas
temperaturas foi isolada de uma amostra de sedimento marinho por Jeon
e colaboradores (2009). A enzima encontrada possuiu similaridade muito
baixa com protenas caracterizadas at a data, com exceo de uma lipase de
um microrganismo no cultivado.
Dentro deste contexto, no Laboratrio de Bioqumica de Microrganismos e Plantas, da Unesp de Jaboticabal, foram prospectados genes para a
codificao de enzimas lipolticas em 4,5 mil clones de uma biblioteca metagenmica fosmidial construda a partir de DNA de um consrcio microbiano degradador de leo diesel. A seleo foi feita pela atividade lipoltica
por meio do cultivo dos clones em placa de petri, contendo o meio Luria-Bertani (LB) suplementado de 1% de tributirina (v/v), 1% de goma arbica
(p/v), 0,00125% de cloranfenicol (v/v) e 0,001% arabinose (v/v). As clulas
ficaram em cultivo a 37C por 48 horas e depois foram transferidas a 4C.
A avaliao foi realizada pela observao de um de halo ao redor da colnia,
sendo positiva para 30 clones dentre os quais trs se destacaram (Figura
11.7). Estes trs clones que apresentaram halos maiores foram selecionados, e tiveram seu DNA subclonado em vetor pUC19.
Os DNAs das sub-bibliotecas foram sequenciados no ABI 3100 (Applied Biosystems), gerando um contig completo para cada clone, que foram
comparados com as sequncias do genbank hospedadas no banco National
Center for Biotechnology Information (NCBI), por meio do programa
ORF Finder. Uma ORF de 322 aminocidos com 76% de identidade para
335
Figura 11.7 Anlise in vitro em placa de petri dos 30 clones da biblioteca metagenmica,
previamente selecionados, em meio LB suplementado com 1% de tributirina (v/v); 1% de
goma arbica (p/v); 0,001% de arabinose (v/v); 0,00125% de cloranfenicol (v/v); e 0,001%
de Rhodamine-B (v/v). A Clone Pl17.E10; B Clone Pl32.D09; C Clone PL28.H10;
D Controle negativo.
Fonte: Pereira, 2011 (modificado).
uma possvel esterase/lipase foi identificada em um dos contigs analisados. Por outro lado, quatro ORFs relacionadas a esterase/lipase puderam
ser identificadas no segundo clone analisado, dentre as quais uma alcanou 58% de identidade com uma possvel esterase/lipase de bactria no
cultivvel. No terceiro contig, foi encontrada outra ORF codificadora de
esterase/lipase de 303 aminocidos e 61% de identidade com microrganismo no cultivvel. Foram feitos alinhamentos com o programa Clustal W e
construo de rvores filogenticas pelo MEGA 4.0.2, mtodo de neighbor-joining com mil bootstrap, para comparao entre as ORFs encontradas e
sequncias depositadas. As rvores indicam que o primeiro clone apresenta
a ORF similar famlia IV das enzimas lipolticas; o segundo possui trs
ORFs pertencentes famlia V e uma famlia IV; e o terceiro apresenta
uma ORF similar famlia IV; no entanto, esta ORF est localizada em
um ramo nico, diferenciando-se dos outros representantes desta famlia.
336
Atravs dos alinhamentos, foi possvel identificar os stios ativos representativos de cada famlia, confirmando o resultado das rvores filogenticas.
Quando a mesma anlise foi realizada com sequncias j patenteadas,
algumas ORFs mostraram baixa similaridade com sequncias pertencentes
Bayer Chemicals, Monsanto e BASF, fato este concordante com a anlise
do dendrograma, no qual possvel verificar o isolamento em ramos das
ORFs identificadas neste estudo (Figura 11.8).
Tais descobertas enfatizam que a abordagem metagenmica oferece
acesso s enzimas que, dificilmente, estariam disponveis por meio das tcnicas tradicionais de cultivo, tornando possvel a busca e compreenso de
novas enzimas assim como o estudo da diversidade gentica de microrganismos em determinado ambiente.
Figura 11.8 Dendrograma do agrupamento hierrquico baseado nas 11 sequncias patenteadas e extradas do NCBI, com as ORFs encontradas nos clones Pl17.E10 e Pl32.D09.
Construo da rvore filogentica pelo MEGA 4.0.2, mtodo neighbor-joining com mil
bootstrap.
Fonte: Maester, 2011; Pereira, 2011 (modificado).
Biodiesel no Brasil
Em 2008, a produo global de biodiesel foi de 12,2 milhes de toneladas, sendo 7,7 milhes produzidos na Europa, dos quais 2,8 milhes somen-
337
te na Alemanha. No Brasil, a entrada do biodiesel no mercado nacional vai

gerar uma expressiva economia reduzindo as importaes do diesel de petrleo, alm de contribuir para a preservao do meio ambiente. Esse combustvel substitui total ou parcialmente o diesel de petrleo em motores de
caminhes, tratores e automveis e tambm pode ser utilizado para gerao
de energia e calor. Pode ser usado puro ou misturado ao diesel em diversas
propores. A mistura de 2% de biodiesel ao diesel de petrleo chamada de
B2 e assim sucessivamente, at o biodiesel puro, denominado B100.
De acordo com Governo Federal, o Brasil importa, atualmente, 10% do
diesel que consome. Este, por seu uso em transportes de cargas e passageiros, o combustvel mais utilizado no pas (57,7% dos combustveis lquidos), o que representa um consumo anual de 38,2 bilhes de litros. Segundo
dados da ANP (Agncia Nacional de Petrleo), aproximadamente 45% da
energia e 18% dos combustveis consumidos no Brasil j so renovveis e,
no restante do mundo, 86% da energia vm de fontes energticas no renovveis. Desde 1 de janeiro de 2010, o leo diesel comercializado em todo
o Brasil contm 5% de biodiesel. Esta regra foi estabelecida pela Resoluo
n 6/2009 do Conselho Nacional de Poltica Energtica (CNPE), que aumentou de 4% para 5% o percentual obrigatrio de mistura de biodiesel ao
leo diesel.
O Brasil rene condies ideais para tornar-se um grande produtor
mundial de biodiesel, pois dispe de extensas reas agricultveis, parte delas no propcias ao cultivo de gneros alimentcios, mas com solo e clima
favorveis ao plantio de inmeras oleaginosas. Pode ser produzido a partir
de gorduras animais ou de leos vegetais, existindo dezenas de espcies vegetais no pas que podem ser utilizadas, tais como mamona, dend (palma),
girassol, babau, amendoim, pinho manso, soja, dentre outras. Dessa forma, estudar as formas de obteno do biodiesel, envolvendo aspectos ticos
e favorveis para o meio ambiente contribuir com a economia e desenvolvimento do pas.
Perspectivas
Muitos desafios precisam ser transpostos na tecnologia atual de produo de biodiesel e estes incluem o desenvolvimento de catalisadores melho-
338
res e mais baratos, resultando em produtos de alta qualidade, utilizao de

solventes no fsseis e a converso dos subprodutos, como o glicerol, em
produtos teis.
O custo de produo do biodiesel pela catlise enzimtica o principal obstculo para a comercializao deste produto. Vrias tentativas tm
sido feitas para desenvolver sistemas de baixo custo usando as ferramentas
da tecnologia do DNA recombinante. possvel aumentar a eficincia das
lipases por meio da caracterizao enzimtica e Engenharia de Protenas
(Kourist; Brundiek; Bornscheuer, 2010).
Resultados obtidos pelo grupo do Laboratrio de Bioqumica de Microrganismos e Plantas, da Unesp de Jaboticabal, so promissores nesta
busca por novos biocatalisadores. Aps a caracterizao das ORFs encontradas ser possvel inferir se resultaro em enzimas lipolticas com elevada
especificidade com o substrato, se possuem estereoespecificidade e termoestabilidade suficientes para beneficiar a produo de biodiesel e reduzir os
custos de todo o processo.
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12
Estressores biticos em cana-de-acar:
reflexos quali-quantitativos na matria-prima
e no processamento industrial
Mrcia Justino Rossini Mutton, Miguel Angelo Mutton,
Leonardo Lucas Madaleno, Jos Antonio de Souza Rossato Jnior,
Eduardo Rossini Guimares, Gisele Cristina Ravaneli,
Maria Ins Tiraboschi Ferro, Odair Aparecido Fernandes
Introduo
A cana-de-acar (Saccharum spp.) uma planta C4 e apresenta uma
das maiores eficincias fotossintticas encontradas em culturas agrcolas
(Cock, 2003) e potencial geneticamente favorvel para acmulo de acares
na forma de sacarose (Mutton, 2008). Quanto habilidade para transformar e fixar energia, verifica-se que, para a cana-de-acar, a relao entre a
energia consumida e a energia produzida da ordem de 1:8, enquanto para
a cultura do milho a relao de 1:1,4 e para a beterraba de 1:2,5.
Encontra-se amplamente distribuda entre os pases tropicais e subtropicais, ocupando 1% de rea entre as 18 culturas mais cultivadas (Leff et al.,
2004). Os pases que cultivam a cana-de-acar produziram 1,66 bilho de
toneladas de colmos e o Brasil participou com 40,4% deste total numa rea
de 8.514.370 ha no ano de 2009 (Faostat, 2011).
A cana-de-acar ocupa atualmente 8,4 milhes de hectares ou aproximadamente 2% da terra agricultvel do Brasil (394 milhes de ha). O pas
apresenta a regio Centro-Sul como principal produtora de matria-prima
para a indstria sucroenergtica, sendo que a produo do estado de So Paulo representa 61% da produo nacional (Unica, 2011). Em mdia, a produtividade anual brasileira est entre 70 a 80 t/ha, enquanto que, para o estado
342
de So Paulo, principal produtor (21% da produo mundial), os valores so

de 80 t/ha a 85 t/ha (Conab, 2011).
A cana-de-acar vem passando, nos ltimos anos, por mudanas profundas de mbito tecnolgico e social, para adaptar-se s demandas de produo com alta produtividade, competitividade, respeito ao meio ambiente
e sustentabilidade. O aumento da rea colhida mecanicamente e a restrio
queima da cana-de-acar tm ocasionado mudanas significativas no
manejo dessa cultura (Almeida et al., 2004).
Esta mudana no sistema de produo ocorreu especialmente por causa
do aspecto da preservao do meio ambiente para atender legislao ambiental. Alm disso, h outras vantagens do sistema de colheita denominado cana crua, tais como: proteo do solo contra eroso, reduo dos custos
com os tratos culturais (menor incidncia de plantas daninhas), maior longevidade da cultura e ainda a possibilidade de aproveitamento energtico
da palha (Souza et al., 2005).
No sistema de colheita mecnica da cana-de-acar, a quantidade de
palha que deixa de ser queimada e depositada sobre o solo pode variar
de 10 a 20 t/ha de massa seca, em funo da variedade, estdio fenolgico
e da produtividade agrcola. Essa mudana no manejo da colheita teve reflexos imediatos nas caractersticas do agroecossistema da cana-de-acar,
resultando em alteraes no perfil da entomofauna, principalmente no que
se refere composio das diferentes espcies de pragas e respectivas densidades populacionais (Garcia; Sverzut Jnior, 2008). Alm deste aspecto,
a expanso da cultura para novas reas e a no utilizao de cuidados fitossanitrios adequados na implementao e nos tratos culturais proporcionaram condies para a expanso da rea de ocorrncia e de danos de
algumas pragas.
Estressores biticos e fisiologia da planta

O conceito de estresse como fenmeno surpreendentemente recente.
Originalmente, o termo estresse foi associado ao conceito mecnico em que
uma fora aplicada a um corpo. A seguir, o conceito de estresse foi aplicado aos seres humanos e definido como resposta a vrias condies fsicas e
fisiolgicas (Seyle, 1973). Neste mesmo contexto, o estresse de uma planta
ESTRESSORES BITICOS EM CANA-DE-ACAR
343
est envolvido por uma reao adversa aos fatores do ambiente, podendo
ser bitico e/ou abitico (Higley et al., 1993).
A produtividade da cana-de-acar regulada por diversos fatores de
produo, dentre os quais se destacam: o potencial gentico da variedade, o
ambiente de produo (solo e clima), as prticas culturais adotadas, a qualidade da colheita, incluindo a qualidade da matria-prima e o controle fitossanitrio de patgenos, plantas invasoras e insetos-pragas. Vrios insetos-pragas podem estar presentes no sistema de produo de cana-de-acar,
atacando o sistema radicular ou a parte area da planta. Dentre estes, destacam-se trs importantes estressores biticos: a broca-do-colmo, Diatraea
saccharalis (Lepidoptera: Crambidae), a cigarrinha-das-razes, Mahanarva
fimbriolata (Hemiptera: Cercopidae) e o bicudo-da-cana, Sphenophorus levis
(Coleoptera: Curculionidae).
A broca-do-colmo e a cigarrinha-das-razes esto presentes em todas as
regies de produo de cana-de-acar do pas. A primeira uma praga
que ataca as plantas de cana-de-acar durante todo o desenvolvimento da
cultura em qualquer poca do ano e pode apresentar quatro a cinco geraes por ano. O adulto uma mariposa com as asas anteriores de colorao amarelo-palha. As posturas se assemelham a escamas de peixe e so
realizadas geralmente na face adaxial das folhas da cana-de-acar ou em
outras plantas hospedeiras. A longevidade dos adultos de dois a nove
dias. Neste perodo, a fmea pode ovipositar de 300 a 600 ovos, os quais
invariavelmente, esto agrupados em massas imbricadas contendo de 5 a
50 ovos cada uma. A durao do perodo embrionrio de 4 a 12 dias. De
colorao branco-amarelada e cabea marrom-escura, a lagarta pode atingir
at 2,5cm de comprimento e a fase larval tem durao entre 20 e 79 dias.
Este inseto, na forma jovem, responsvel pelo estresse s plantas, uma vez
que as larvas de primeiro instar iniciam a alimentao no parnquima das
folhas. No segundo ou terceiro instar realizam injria na planta por meio
da construo de galerias ascendentes no interior dos colmos (Figura 12.1).
O ataque da broca-do-colmo pode causar a morte da gema apical e consequente secamento de folhas novas (sintoma conhecido como corao-morto), enraizamento areo, brotao das gemas laterais, encurtamento
dos entrens e perda de peso. As galerias construdas pela praga tambm
podem ser colonizadas por microrganismos oportunistas (Colletotrichum
falcatum e Fusarium moniliforme) que podem potencializar os prejuzos
344
Figura 12.1 A broca-do-colmo, Diatraea saccharalis, um importante estressor bitico,

abrindo orifcio de entrada no colmo para, posteriormente, perfurar galeria em cana-de-acar.
causados, caracterizando o chamado complexo broca-podrido. Estes microrganismos causam a inverso da sacarose armazenada na planta. Esse
processo afeta consideravelmente a qualidade da matria-prima e dos produtos obtidos, uma vez que interfere na cristalizao do acar, promovendo a contaminao do caldo e causando perdas da eficincia industrial (Gagliumi, 1973; Parra, 1993).
Outro estressor bitico extremamente relevante nos sistemas de produo de cana-de-acar a cigarrinha-das-razes (M. fimbriolata). Trata-se
345
de inseto sugador, que, at a dcada de 1990, se mostrava de importncia

econmica restrita apenas a algumas regies do Nordeste brasileiro, sendo
praga secundria no Centro-Sul do Brasil (Mendona et al., 1996). Entretanto, com o incio da mudana do sistema de colheita da cana-de-acar
sem a utilizao prvia de fogo para queima da palha (cana crua), a infestao desta praga atingiu grande importncia. A prtica de colheita da cana
crua passou a deixar sobre o solo uma cobertura vegetal abundante, que
favorece a manuteno de alta umidade e menor oscilao de temperatura,
que so extremamente favorveis ao desenvolvimento da praga (ibidem;
Dinardo-Miranda et al., 2001a). Somado a isso, o controle fsico com o uso
do fogo que indiretamente destrua todos os estgios de desenvolvimento
da praga, especialmente os ovos em diapausa, passaram a no mais ocorrer
e, com isso, houve favorecimento do potencial bitico dessa praga.
Com potencial para injuriar as plantas de cana-de-acar em qualquer
estdio fenolgico, a cigarrinha-das-razes tem seu perodo de infestao
restrito estao chuvosa, haja vista a dependncia do inseto por nveis
elevados de umidade e temperatura. As fmeas do inseto realizam postura
no solo, na regio do colo da planta, nas proximidades dos perfilhos, em
nmero mdio de 50 a 80 ovos. O desenvolvimento embrionrio do inseto
ocorre em torno de 21 dias em condies de temperatura favorvel e alta
umidade no solo (Mendona et al., 1996). Desde a ecloso, as ninfas, que
passam por cinco ecdises, permanecem durante todo o perodo de desenvolvimento alimentando-se no sistema radicular do hospedeiro (Stingel,
2005). As ninfas produzem espuma caracterstica (Figura 12.2) formada
de lquidos eliminados pelo nus que so formados pelo volume de seiva
sugado e de substncia muscilaginosa excretada pelas glndulas epidrmicas do stimo e oitavo segmentos abdominais, denominadas glndulas de
Batelli.
A espuma protege a forma jovem do inseto contra dessecao (Garcia, 2002) e inimigos naturais (Macedo et al., 1997). Ao alimentarem-se,
ocasionam desordem fisiolgica na planta em decorrncia do ato de sugar,
atingindo os vasos lenhosos da raiz, deteriorando-os e impedindo ou dificultando o fluxo de gua e nutrientes. Isso constitui a fase mais prejudicial
da praga, e a necrose das razes permite a entrada de fungos patognicos na
planta (Macedo, 2005).
346
Figura 12.2 Ninfas da cigarrinha-das-razes encontradas na base da planta e sempre envolvidas por espuma. No detalhe, a forma adulta do inseto.
Os adultos apresentam longevidade de aproximadamente 20 dias (Garcia; Sverzut Junior, 2008) e vivem sobre a parte area da planta sugando as
folhas ao mesmo tempo que injetam toxinas que produzem manchas longitudinais. Esses adultos medem aproximadamente 12 mm de comprimento
e 5 mm a 6,5 mm de largura (Macedo, 2005; Stingel, 2005).
A magnitude dos danos provocados pelo ataque de cigarrinhas-das-razes varia com diversos fatores, entre os quais a poca de colheita da cultura e
a variedade cultivada (Dinardo-Miranda, 2008). Os danos provocados pela
praga sobre o crescimento da cana-de-acar podem ser observados quando se verifica o aparecimento da praga e a cultura se encontra desenvolvida
347
e quando o canavial ainda est em incio de crescimento e ser colhido no

meio e final de safra (Dinardo-Miranda et al., 1999).
O ataque de ninfas e adultos de M. fimbriolata resulta em colmos menores e mais finos (Dinardo-Miranda et al., 2000a), que leva a reduo do
teor de sacarose (Mendona et al., 1996). Segundo Dinardo-Miranda et al.
(2006a), reduo de 25% na produtividade foi observada para a variedade
SP80-1842 quando a praga no foi controlada. Alm da reduo da produtividade de colmos, quando em elevadas populaes, a planta atacada
apresenta menores teores de Brix e Pol do caldo e aumento do teor de fibra
dos colmos (Gonalves et al., 2003).
O outro inseto em importncia para a cultura da cana-de-acar, o
bicudo-da-cana (Sphenophorus levis) teve seu primeiro relato em cana-deacar no final da dcada de 1970, tendo sido detectado inicialmente em 14
municpios na regio de Piracicaba, SP (Precetti; Arrigoni, 1990). Ao longo
dos anos, S. levis migrou para regies em que no havia registros de sua presena, atingindo cerca de cinquenta municpios no ano de 2006. Nos trs
anos seguintes, atingiu uma centena de municpios, incluindo deteco nos
estados do Paran, Minas Gerais e Mato Grosso do Sul. Esse aumento da
praga na ltima dcada foi influenciado, principalmente, pela expanso da
rea cultivada de cana-de-acar, alm de uma diminuio no rigor da qualidade fitossanitria das mudas transportadas para as novas reas de plantio. As formas biolgicas do inseto acompanharam os colmos utilizados, o
que explica a rpida disseminao. O manejo de S. levis tem sido o desafio
nas reas de produo de cana-de-acar, pois se trata de praga de solo que
permanece protegida durante a maior parte do ciclo biolgico.
Os adultos possuem cerca de 10 mm a 15 mm de comprimento (Figura
12.3). As fmeas perfuram a base das plantas e realizam a postura endoftica, colocando de 60 a 70 ovos/fmea. No prazo de 7 a 12 dias, eclodem as
larvas, responsveis pela injria s plantas. As larvas escavam galerias no
interior dos caules subterrneos (rizomas), nos interndios basais e, aps
o perodo de 30 a 60 dias transformam-se em pupas no interior do colmo.
Aps 7 a 15 dias aparecem os adultos, que possuem longevidade em torno
de 200 dias (Precetti; Tern, 1983; Almeida et al., 2008).
A alimentao das larvas de S. levis causa diminuio na translocao
da seiva das plantas, originando sintomas de amarelecimento de folhas, podendo evoluir para necrose, morte de perfilhos e at da touceira sob infesta-
348
Figura 12.3 Cana-de-acar com sintoma tpico do ataque da larva de Sphenophorus levis.
No detalhe, os estgios da larva e adulto.
Foto: Enrico de Beni Arrigoni
es severas. Como consequncia, verificam-se falhas na rebrota, diminuio na produtividade e possvel inviabilidade da manuteno do canavial
com baixa produtividade. Este fato pode provocar a reforma antecipada do
canavial, diminuindo a longevidade do ciclo de explorao da cultura, que
resulta em maiores custos de produo. Alm das perdas econmicas, esse
inseto-praga pode ocasionar perdas na qualidade da matria-prima, com
consequncias no rendimento industrial e na qualidade do acar e etanol
produzidos.
O conceito de que o rendimento de uma planta progressivamente reduzido por adversidades biticas e abiticas (estressores) amplamente conhecido. No entanto, pouco se sabe sobre o que acontece entre a ao dos
estressores na planta e o rendimento (Peterson; Higley, 2001).
349
Condies ambientais provavelmente influenciam o nmero de pragas

(e/ou comportamento), a resposta da planta ao ataque da praga, ou ambos
(Higley; Peterson, 1996). Isto ocorre porque os insetos-pragas e as culturas
so sistemas biolgicos independentes e os estressores externos (abiticos
ou biticos) tero influncia ou efeito em cada um, enfraquecendo ou fortalecendo uma posio biolgica.
A resposta de uma planta injria de um inseto-praga, ou seja, ao
de um estressor, dependente do estdio fenolgico em que se encontram
as plantas (Peterson et al., 1998) e do nmero de indivduos, ou seja, da populao de insetos-pragas que est atacando esta planta (Peterson; Higley,
2001). Partindo-se do princpio de que as plantas esto expostas aos fatores
biticos, um determinado estressor em potencial pode atuar isoladamente ou em conjunto com outro estressor, numa ao combinada, perfazendo
uma interao de estressores. O significado cientfico do termo interao
o da dependncia de um fator sobre outro (Sokal; Rohlf, 1981). Nesta
perspectiva, qualquer fator que altera a resposta da planta frente a um estressor representa uma interao. A resposta da planta ao ataque de dois ou
mais estressores combinados pode ser maior ou menor do que a soma das
respostas aos mesmos estressores quando estes ocorrerem individualmente
(Peterson: Higley, 2001).
Objetivando conhecer a resposta da cana-de-acar sob o ataque combinado de dois estressores biticos: broca-do-colmo e a cigarrinha-das-razes, estudos tm sido realizados. Neste contexto, a avaliao da capacidade
fotossinttica da planta se apresenta como importante ferramenta para elucidar os mecanismos envolvidos durante o ataque destas pragas. A taxa fotossinttica da cana-de-acar reduzida sob a presena e ao destes dois
estressores biticos, combinados ou isolados. Aps o final da infestao das
duas pragas, a taxa fotossinttica das plantas restabelecida (Grfico 12.1).
No caso especfico da broca-do-colmo, a formao de galerias decorrentes da alimentao do contedo interno do colmo pela praga pode causar
estresse na planta por causa da interrupo dos feixes vasculares. Segundo
Culy (2001), o impacto fisiolgico desta perturbao vascular na planta
similar aos efeitos do estresse hdrico, pois h reduo no transporte de gua
e de nutrientes para a expanso das folhas responsveis pela fotossntese.
Com isso, h diminuio no desenvolvimento e reduo do acmulo de
massa seca (Vaadia, 1985).
350
Grfico 12.1 Taxa fotossinttica das plantas de cana-de-acar sob ataque dos estressores broca-do-colmo e cigarrinha-das-razes, isolados ou combinados. As letras maisculas
comparam pocas e as minsculas os tratamentos.
Fonte: Rossato Junior et al., 2010
As ninfas da cigarrinha-das-razes, ao sugarem os vasos condutores de

seiva, principalmente o xilema radicular, provocam fechamento desses vasos condutores de seiva e desencadeiam a morte de razes. Isso decorre tanto
pelo hbito alimentar como por danos mecnicos provocados pelo estilete
do inseto na alimentao (Garcia, et al., 2007). Como consequncia, ocorre
a reduo da taxa fotossinttica das plantas. Os insetos sugadores de seiva
das plantas, de um modo geral, podem remover tecidos vegetais e interromper processos fisiolgicos normais das plantas (Haile, 2001). Pode ocorrer a
liberao de saliva rica em enzimas e aminocidos que auxiliam no processo
digestivo, porm de natureza txica para a planta, que resulta na morte de
tecidos radiculares, comumente conhecido por necrose (Fewkes, 1969).
A injria promovida pelo ataque de cigarrinha-das-razes resulta em
perda de rendimento por causa do impacto na fisiologia da planta, com a
reduo na fotossntese por unidade de rea foliar, e possvel interrupo
do fluxo de gua e seiva e/ou a diminuio da absoro de gua do solo.
Consequentemente, este tipo de injria pode reduzir o tamanho do dossel
das plantas, indiretamente, em funo de alteraes na fisiologia da planta
(Haile, 2001).
Dependendo do hbito alimentar do inseto, tem-se um determinado impacto na fotossntese das plantas. No caso de insetos desfolhadores, comumente no ocorre declnio na taxa fotossinttica das folhas remanescentes,
351
podendo, inclusive, levar a uma compensao, estimulando o crescimento

das plantas (Welter, 1993; Peterson; Higley, 1998), ou ser prejudicial s
mesmas resultando em reduo da rea foliar e do tecido remanescente
(Macedo et al., 2003). No entanto, para insetos sugadores com ataque restrito parte area das plantas, a injria e/ou remoo de clorofila, a taxa
de fotossntese pode ser reduzida (Youngman; Barnes, 1986; Welter, 1993).
Este mesmo prejuzo pode ser observado para o estressor bitico cigarrinha-das-razes em cana-de-acar, em que as ninfas atacam o sistema radicular
das plantas e prejudicam drasticamente a taxa fotossinttica das plantas.
Esse conhecimento da resposta fisiolgica das plantas aos estressores
fundamental para o entendimento dos mecanismos de perda de rendimento. Embora a taxa fotossinttica das plantas se restabelea ao final das infestaes das pragas, no suficiente para compensar a perda sofrida sob os
estressores e acaba invariavelmente afetando negativamente os parmetros
biomtricos dos colmos (Rossato Junior et al., 2010).
As plantas atacadas por cigarrinha-das-razes, isoladamente ou associada broca-do-colmo, sofreram redues de 10% e 8,9% no comprimento
e 7,2% e 5,6% no dimetro de colmos, respectivamente (Rossato Junior et
al., 2011). A alimentao das ninfas provoca a desidratao e desnutrio
dos colmos da cana-de-acar (Dinardo-Miranda, 2003). De modo semelhante, a fotossntese contribui diretamente para o acmulo de biomassa da
planta, sendo que maiores taxas de fotossntese nas folhas resultaram em
maiores ganhos de produtividade (Haile, 2001). Desta forma, o ataque da
cigarrinha-das-razes influenciou negativamente no desenvolvimento da
planta, com reflexos diretos na produtividade da matria-prima. A reduo de produtividade de colmos pelo ataque da cigarrinha-das-razes foi de
17,6%, e pelo ataque da broca-do-colmo foi de 6,9%, enquanto a combinao dos dois estressores biticos resultou na reduo de 15,5% de colmos
(Rossato Junior et al., 2011).
Colmos desidratados e secos so comumente encontrados em reas de
cana-de-acar sob o estressor cigarrinha-das-razes (Figura 12.4). Esses
danos so considerados extremamente severos e so consequncia do reduzido armazenamento de acares nas folhas, provocado pela elevada demanda de gua e acares requeridos pela fase jovem do inseto (Mendona
et al., 1996).
352
Figura 12.4 Colmo seco entre colmos aparentemente sadios em funo do ataque de ninfas
de cigarrinha-das-razes envolvidas pela espuma produzida.
Qualidade da matria-prima
A cana-de-acar manifesta a expresso de suas caractersticas genticas, durante seu desenvolvimento, em funo das condies ambientais
disponveis, tais como radiao solar, temperatura, umidade e fertilidade
dos solos. De acordo com Stupiello (1989), o conceito de cana-de-acar
com qualidade refere-se a colmos maduros, recm-cortados, sadios e livres
de impurezas. Entretanto, considerando-se as transformaes que esto
ocorrendo nos processos de corte-carregamento e transporte, atualmente
a conceituao de qualidade deve ser readequada agroindstria da cana.
Sob esta tica, a qualidade pode ser conceituada como convencional ou
motivadora. No conceito convencional, a matria-prima avaliada a partir de caractersticas mnimas (Pol, Brix, Pureza, Fibra da cana, Umidade
do Bagao etc.) que possibilitem a melhoria e aproveitamento de recursos
disponveis, sem custos. Para o conceito motivador, a matria-prima deve
apresentar um conjunto de caractersticas que atendam ao processamento
353
sob dimenso mais ampla, estando diretamente ligada ao planejamento, incorporando servios e custos.
A qualidade motivadora a mais importante na busca de parmetros
que realmente contribuam para a melhoria da qualidade da matria-prima,
diminuindo custos, aumentando os rendimentos, as eficincias e, consequentemente, a rentabilidade da empresa (Stupiello, 1993). Os parmetros
utilizados so de determinao mais complexa, entretanto possibilitam
diagnstico mais seguro da qualidade da matria-prima ou do estgio de
deteriorao. Dentre estes podem se destacar os teores de impurezas presentes na matria-prima, acidez voltil, acar total e chochamento.
A qualidade tecnolgica do caldo de cana avaliada pela composio,
que depende de fatores genticos e ambientais, dos tratos culturais, estgio
de maturao, sistema de colheita, processo de extrao do caldo, dentre
outros (Stupiello, 2001). A utilizao de matria-prima de qualidade favorece o processamento rpido com elevado rendimento de acar. A situao
inversa tambm pode ser observada.
A incidncia de estresses biticos na cana-de-acar e seus efeitos sobre
a qualidade da matria-prima foram relatados em pesquisas realizadas por
Blumer (1992), avaliando matria-prima submetida ao ataque de D. saccharalis. Dinardo-Miranda et al. (1999), Gonalves et al. (2003) e Ravaneli
et al. (2006) verificaram comprometimento da matria-prima atacada por
M. fimbriolata.
Segundo Mutton (2003), em resposta ao ataque de insetos e patgenos
podem ocorrer reaes bioqumicas nas plantas, que desdobram os acares
produzindo lignina, polissacardeos e compostos fenlicos, com o objetivo
de proteg-las do estresse bitico. Taiz e Zeiger (2004) relatam que os compostos fenlicos so as mais importantes substncias de defesa produzidas
pelas plantas contra o ataque de pragas e doenas. Destacam ainda que os
principais compostos envolvidos com o mecanismo de resistncia planta-praga so os taninos, flavonoides, isoflavonoides e lignina. Bi et al. (1997)
citam o cido clorognico e a rutina como modelos de compostos fenlicos
utilizados em estudos envolvendo defesa anti-herbivoria em plantas.
Fontaniella et al. (2003) encontraram elevada quantidade dos cidos ferlico, sirngico e clorognico em caldo de cana-de-acar infestado pela
sndrome da folha amarela (YLF). Phelps e Young (1996) enfatizam que
o cido ferlico e seus derivados conferem proteo s plantas contra o ata-
354
que de insetos, fungos e vrus. Esses compostos podem influenciar negativamente a qualidade da matria-prima uma vez que so responsveis pelo
escurecimento do caldo e produo de acar com maior cor (Godshall,
1999), ou ainda atuar como inibidor da fermentao alcolica, por meio da
inibio da atividade enzimtica das invertases (Polakovic et al., 1992).
Buscando avaliar os reflexos provocados pelo ataque de cigarrinha-das-razes sobre colmos de cana-de-acar, diversos estudos foram realizados,
evidenciando significativas redues na qualidade tecnolgica da cana. Estudos de Ravaneli (2010) confirmaram que os valores de Brix, Pol, Pureza e
Acares Redutores Totais foram significativamente menores enquanto os
teores de Acares Redutores e Compostos fenlicos aumentaram sempre
que a cigarrinha-das-razes danificou as plantas (Grficos 12.2 e 12.3). Esse
comportamento ocorre tanto em funo do comprometimento do processo
fotossinttico, com reduo do acmulo de sacarose (Dinardo-Miranda et
al., 2000a; Gonalves et al., 2003; Ravaneli et al., 2006; Madaleno et al.,
2008), quanto ao consumo dos acares armazenados para produzir molculas de defesa contra o ataque da praga.
Os compostos fenlicos podem influenciar negativamente a qualidade
da matria-prima destinada ao processamento industrial, uma vez que so
responsveis pelo escurecimento do caldo e produo de acar com maior
cor (Godshall, 1999), por atuar como inibidores da fermentao alcolica
(Polakovic et al., 1992), alm de comprometer a produo de etanol. Semelhantemente, Ravaneli et al. (2006) verificaram aumento significativo
nesses compostos quando os nveis de infestao de cigarrinha-das-razes
foi superior a duas ninfas/m. Resultados similares foram obtidos com
outras variedades de cana-de-acar, tais como IAC83-2396, RB825336
(Dinardo-Miranda et al., 2001a); IAC82-2045 (Gonalves et al., 2003) e
SP80-1816 (Ravaneli et al., 2006).
Redues significativas tambm foram verificadas para o pH do caldo
para os diversos nveis de danos (Grficos 12.4 e 12.5). Embora este parmetro seja pouco sensvel para avaliar a deteriorao da cana, apresenta-se
mais representativo quando combinado a acidez total, voltil e cido ltico.
De modo semelhante, a dextrana e o manitol so compostos produzidos
por bactrias lticas, principalmente do gnero Leuconostoc, a partir do desdobramento da sacarose presente no caldo de cana (Eggleston, 2002; Eggleston; Harper, 2006). Como produtos dessa degradao tambm se podem
355
citar o cido ltico e actico (Eggleston et al., 2004). Eggleston et al. (2007)
relatam que o manitol indicador de deteriorao mais sensvel que a dextrana e tambm pode ser produzido por outras espcies de bactrias lticas.
Grfico 12.2 Efeito dos danos causados por M. fimbriolata sobre parmetros tecnolgicos
da matria-prima em duas pocas de colheita na safra 2007/2008.
Fonte: Ravaneli, 2010
356
Grfico 12.3 Efeito dos danos causados por M. fimbriolata sobre parmetros tecnolgicos
da matria-prima nas duas pocas de colheita na safra 2007/2008.
Sob esse enfoque, o aumento da acidez do caldo indicativo de deteriorao microbiolgica, em decorrncia da contaminao bacteriana. Entretanto, convm ressaltar que a relao entre nmero de bactrias e produo
de cidos pode no ser direta, uma vez que a produo desses compostos
ocorre em funo da concentrao e espcies de bactrias presentes no substrato (Ventura, 2007).
O ataque de cigarrinha-das-razes provoca tambm aumento do teor de
fibra da cana, resultante do estresse hdrico causado pela ao sugadora do
inseto. Este efeito mais expressivo quando se utiliza o clculo da fibra por
meio da metodologia proposta por Tanimoto (1964) (Grfico 12.6).
357
Grfico 12.4 Efeito dos danos causados por M. fimbriolata sobre pH, acidez total, voltil e
cido ltico no caldo, nas duas pocas de colheita, safra 2007/08.
Grfico 12.5 Interao entre os fatores com nveis de infestao x pocas de colheita, para
pH do caldo, safra 2007/2008. Letras maisculas comparam nveis de danos dentro de pocas de colheita. Letras minsculas comparam pocas de colheita dentro de nveis de danos.
358
Grfico 12.6 Efeito dos danos causados por M. fimbriolata sobre a fibra da cana, nas duas
pocas de colheita, safra 2007/2008.
Reflexos sobre a produo de acar Fluxograma e

qualidade do acar
O processamento dos colmos de cana-de-acar para a produo de
acar atende a uma sequncia de operaes, denominada fluxograma
de produo. Os colmos maduros devem ser colhidos com os teores mximos de sacarose. Aps o corte so transportados, pesados e avaliados
quanto aos parmetros de qualidade: Brix (teor de slidos solveis), Pol
(teor aparente de sacarose), teor de fibra e acares totais recuperveis
(ATR, kg/t). Os colmos acrescidos de impurezas, denominados matria-
359
-prima industrial, so encaminhados para o processo de extrao do caldo

por moendas ou difusores.
O caldo extrado direcionado ao processo de clarificao para retirada
das impurezas fsicas e qumicas, resultando no caldo clarificado com 16 a
18 Brix. A seguir, este encaminhado ao setor de evaporao, para retirada
de parte da gua do caldo num evaporador de mltiplo efeito, dando origem
ao xarope (soluo saturada de acar de concentrao 60-65 Brix).
O xarope ser encaminhado ao cozimento resultando em uma soluo
supersaturada de acar denominada massa cozida, que formada por uma
mistura de cristais e mel. O cozimento a etapa na qual so produzidos
os cristais, por diversos mtodos de nucleao, sendo o mais utilizado o de
sementes. Aps a etapa de cristalizao realiza-se a centrifugao da massa
cozida, para separar os cristais do mel residual.
Aps a centrifugao, o acar enviado aos processos finais de produo que consistem na secagem, classificao, embalagem e armazenamento
do produto final. A qualidade do acar aferida por alguns parmetros de
qualidade que so realizados constantemente pela fbrica e que definem as
caractersticas do produto. Dentre esses se analisa a Pol, cor, cinzas, umidade, quantidade de amido e outros.
Clarificao do caldo de cana

Estudos realizados por Madaleno (2010), avaliando os efeitos dos danos
provocados pela cigarrinha-das-razes na cana-de-acar, sobre a clarificao do caldo e reflexos sobre o acar produzido em duas pocas de colheita
da safra 2007/2008, evidenciaram que o aumento dos nveis de danos promovidos pela cigarrinha-das-razes no afetou a turbidez, velocidade de decantao e volume de clcio utilizado para clarificao do caldo. Entretanto,
quando se avaliou pocas (maio-junho e outubro da safra 2007/2008), verificou-se aumento na velocidade de decantao, no pH tratado, no volume
de clcio utilizado, no pH do caldo clarificado e na turbidez do caldo para a
segunda poca, pela melhor qualidade da matria-prima. O caldo de cana
apresentou reduo na acidez na colheita realizada em outubro, houve aumento na formao de coloides mais densos, que se precipitaram com maior
velocidade, proporcionando caldos com maior transparncia.
Naturalmente, o aumento dos cidos orgnicos ocorre da base para o
pice do colmo, onde h elevada atividade metablica pelo crescimento de
360
tecidos imaturos, os quais decrescem quando a planta entra em estado de

maturao (Celestine-Myrtil-Marlin, 1990). A precipitao do fosfato
de clcio pode ser influenciada negativamente pela presena de elevada
quantidade do cido acontico, o qual possui preferncia pelo clcio disponvel em relao ao cido fosfrico (Pandey; Srinivasan, 1972), quando h
formao dos flocos primrios de decantao.
Qualidade do acar produzido

Estudos de Madaleno (2010) evidenciaram que o aumento dos danos
provocados pela cigarrinha-das-razes reduziu a qualidade do acar. Houve elevao da cor e do teor de compostos fenlicos totais, cinzas e umidade
dos cristais com a diminuio na qualidade da matria-prima que entrou no
processo de produo. Considerando-se as pocas de colheita dos colmos,
observou-se a maior cor, teor de fenis, cinzas, umidade e fator de segurana quando os colmos eram processados em maio-junho, enquanto a Pol foi
maior na colheita de outubro. Esses resultados podem estar relacionados
com a melhor clarificao ocorrida na segunda poca quando o caldo apresentava caractersticas que facilitaram este processo. A melhor remoo de
compostos fenlicos resultou em cristais de acar com menor colorao,
com teores de Pol mais elevados, resultando em produto final com melhores caractersticas, possibilitando maior preo de comercializao.
O aumento da cor pode estar relacionado com o incremento nos compostos fenlicos totais (Grfico 12.7). A etapa fundamental para a formao de cor a partir dos compostos fenlicos a oxidao de monofenis para
difenis e de o-difenis para quinonas, pelas enzimas fenoloxidases, cujo
principal substrato o cido clorognico (Chen; Chou, 1993).
O processamento de colmos maduros na colheita realizada em outubro
resultou em menor cor do acar e reduzido teor de compostos fenlicos
totais em relao colheita de maio, medida que incrementaram os danos
promovidos pela praga. A clarificao em outubro removeu a maioria dos
fenis presentes no caldo. Em maio/junho, como a acidez do caldo estava
mais elevada, houve dificuldade para obter a formao de complexos coloidais mais densos, o que deixou o caldo clarificado com turbidez mais elevada.
Os compostos fenlicos remanescentes, aps o cozimento, provavelmente
permaneceram includos no cristal de acar alterando negativamente a cor,
pois tornou-os mais escuros (Grficos 12.8 e 12.9 e Figura 12.5).
361
Grfico 12.7 Correlao entre a Cor do acar (ICUMSA 420nm) e o teor de compostos
fenlicos totais (mg kg-1) a partir de cana com danos promovidos pela cigarrinha-das-razes
em diferentes pocas de colheita, (safra 2007/2008).
Fonte: Madaleno, 2010
A clarificao do caldo na primeira poca no foi adequada quando se

utilizou colmos com 30% de danos (Madaleno, 2010). Foi observado aumento de 41% nos teores de compostos fenlicos no acar que, consequentemente, elevaram a cor do produto final em 39%. Sendo esse acar
comercializado, sofreria reduo acentuada no preo em comparao ao
tratamento com 0% de danos. Segundo Chen e Chou (1993), os contratos
para comercializao penalizam o preo do acar em funo de aumento
de umidade, cinzas, dextrana e cor do produto.
Grfico 12.8 Variao no teor de Compostos fenlicos totais (mg kg-1) do acar produzido
em funo da percentagem de danos promovidos pela cigarrinha-das-razes, em duas pocas
de colheita (safra 2007/2008).
362
Grfico 12.9 Variao na Cor do acar (ICUMSA 420nm) produzido em funo da

percentagem de danos promovidos pela cigarrinha-das-razes, em duas pocas de colheita
(safra 2007/2008).
Figura 12.5 Cor do acar produzido em funo da percentagem de danos promovidos

pela cigarrinha-das-razes, em duas pocas de colheita (safra 2007/2008).
A presena de maior nvel de danos de cigarrinha-das-razes resultou

na produo de cristal com maior teor de cinzas (Madaleno, 2010), sendo
esse efeito menor em outubro, em razo do melhor desempenho da clarificao do caldo nessa poca (Grfico 12.10). O teor de cinza elevado no a-
363
car VHP, que destinado ao refino, aumenta o efeito melassignico se seu

constituinte principal for o potssio, implicando em perda de sacarose no
mel final, porm, se a maior quantidade for de on clcio poder haver tendncia de aumento de incrustaes nos aparelhos que realizam o cozimento
do acar refinado. A partir de 30% de danos nos colmos houve incremento de 29% nas cinzas no acar da cana colhida em maio-junho (Grfico
12.10). Estas cinzas podem ser originadas de traos de fosfatos de clcio
e magnsio, slica, sesquixidos, Ca-organatos e outros, em suspenso no
caldo clarificado e no xarope (Chen; Chou, 1993). A maior acidez do caldo
extrado na primeira poca pode ter interferido negativamente na formao
e precipitao dos coloides, resultando em resduos do on Ca que permaneceram no caldo clarificado e, posteriormente, no acar.
Grfico 12.10 Variao para o teor de Cinzas (% m v-1) do acar produzido em funo da
percentagem de danos promovidos pela cigarrinha-das-razes, em duas pocas de colheita
(safra 2007/2008).
Os danos promovidos pelas cigarrinha-das-razes em 30% resultaram em

aumento na umidade final do acar em 22% na poca maio-junho (Grfico
12.11). Entretanto, para o armazenamento tambm deve ser considerado o
teor de Pol nesse acar. A umidade o fator que determina a velocidade
de deteriorao do acar, principalmente no armazenamento do produto.
O aumento do teor de gua, que envolve os cristais de sacarose, pode ser
apropriado para o crescimento da contaminao microbiolgica. Sob estas
condies de armazenamento, os cristais apresentam aumento de cor, de
duas a trs vezes do que quando submetido a secagem (Chen; Chou, 1993).
364
Apesar da umidade do acar ter variado entre a composio de danos,

o fator de segurana permaneceu em valor mdio de 0,17 abaixo do exigido
para o armazenamento do acar, que de 0,25 para as indstrias brasileiras. O fator de segurana utilizado pela indstria para determinar a relao de no acares (no Pol) e a umidade no filme de mel que envolve os
cristais e no pode exceder um tero dos no Pol, sendo que nesses valores a
presso osmtica elevada e h inibio na propagao de microrganismos
que deterioram os cristais (ibidem).
Os teores de amido no acar no foram alterados pelos danos promovidos pela cigarrinha-das-razes ou pelas pocas de colheita. Provavelmente,
esse polissacardeo, que responsvel pela diminuio da cristalizao no
xarope e perda na remoo de sacarose do mel, caracterize melhor as diferenas entre variedades de cana-de-acar, como relatam Simioni et. al.
(2006), do que a alterao pelo aumento de danos nos colmos promovidos
por insetos.
Os resultados indicaram que o controle eficiente desse inseto, alm de
proporcionar maior produtividade ao canavial, pode facilitar a recuperao do acar produzido durante o processamento industrial, com reflexos positivos na qualidade do produto. A poca de colheita tambm deve
ser observada, pois o estdio de maturao da planta influi diretamente na
qualidade da clarificao, que, se no for realizada em condies adequadas
de amadurecimento, pode evidenciar os danos promovidos pelo inseto no
produto final.
Grfico 12.11 Variao no teor de Umidade (%) do acar produzido em funo da percentagem de danos promovidos pela cigarrinha-das-razes, em duas pocas de colheita (safra
2007/2008).
365
Reflexos sobre o processo fermentativo e produo

de etanol Caractersticas importantes para o processo
fermentativo
A fermentao alcolica a principal etapa do processo de produo de
lcool, pois nela o acar e outros componentes do mosto so transformados
em lcool etlico, gs carbnico e compostos secundrios. Participam desse
processo, alm da levedura, que o principal agente, outros microrganismos
que so introduzidos involuntariamente no sistema. Tais microrganismos so
indesejveis e responsveis pela reduo do rendimento alcolico e depreciao na qualidade do produto final. Sendo um organismo vivo, a levedura
apresenta, para seu desempenho, certas exigncias que lhe permitem desenvolver o metabolismo de maneira adequada e, consequentemente, a obteno
de produto final com caractersticas que atendam s exigncias do mercado
(Novaes, 1992).
As leveduras de panificao possuem baixa taxa de permanncia nas
fermentaes industriais (Basso et al., 1993). Sendo assim, a matria-prima
e as condies operacionais podem influenciar sensivelmente a estabilidade
e o desempenho das leveduras durante a fermentao. Mutton e Mutton
(2002) ressaltam a importncia do estudo do comportamento da microbiota
fermentativa frente ao mosto proveniente de cana danificada, uma vez que
a eficincia do processo fermentativo pode ser diretamente influenciada
pelos componentes do caldo. Alm da qualidade da matria-prima, outros
fatores afetam o processo fermentativo, tais como pH, acidez, temperatura,
concentrao de acares do meio, etanol, disponibilidade de nutrientes e
presena de microrganismos contaminantes.
As leveduras so clulas eucariticas altamente tolerantes s variaes do
pH do meio, sendo por isso denominadas acidfilas. Contudo, o pH ideal
para um eficiente desempenho fermentativo est na faixa de 4,0 a 4,5. A correo do pH importante tanto para a multiplicao como para o processo
fermentativo e, na prtica, feita com a aplicao de cido sulfrico (Angelis, 1992). Chaves e Pvoa (1992) afirmam que a acidez natural verificada
no caldo de cana praticamente suficiente quando consideramos os valores
requeridos para a fermentao adequada. Embora algumas vezes o tratamento cido se mostre estressante para a levedura, esse fator reduz a multiplicao das bactrias minimizando a contaminao (Amorim et al., 1996).
366
Segundo Narendranath et al. (2001), os principais cidos encontrados

na fermentao alcolica so o actico e o ltico, inibidores do crescimento
das leveduras. O cido actico formado em pequenas quantidades na fermentao, enquanto o cido ltico o principal metablito produzido pelas
bactrias lticas. A presena de cidos orgnicos, como o actico e ltico,
resultam em aumento no consumo de ATP pela levedura. Nessas condies, parte do ATP que seria utilizado para crescimento ou fermentao
desviado para manuteno do pH interno.
Ao mesmo tempo, a temperatura ideal para o metabolismo das leveduras durante a fermentao deve estar entre 28C e 34C. As temperaturas inferiores a 30C-32C prolongam o tempo de fermentao, enquanto
temperaturas elevadas inibem o crescimento celular, especialmente na presena de elevados teores de etanol (Stupiello; Horii, 1981). De acordo com
Angelis (1992), sob temperaturas abaixo da faixa ideal, as leveduras gastam mais energia para completar o ciclo celular, enquanto em temperaturas
muito elevadas, acima de 40C, a maioria deixa de se multiplicar, perde a
viabilidade, favorecendo o desenvolvimento de bactrias.
Segundo Stokes (1971), o etanol tem efeito inibidor sobre as leveduras,
paralisando o crescimento celular quando em concentraes relativamente
baixas e a fermentao quando em concentraes mais elevadas. Hallsworth (1998) relata que concentraes de etanol prximas a 5% limitam o
crescimento e as atividades metablicas das leveduras, afetando o controle
osmtico, induzindo o estresse hdrico.
A concentrao de acares pode afetar tanto a produo da biomassa
celular da levedura como o processo fermentativo (Angelis, 1992). Segundo Stupiello e Horii (1981), as clulas de leveduras em presena de teores
elevados de acares, mesmo na presena de oxignio, tm a respirao reprimida e tendem a fermentar pela inibio da atividade de enzimas respiratrias e consequente inatividade das mitocndrias, no chamado efeito
Crabtree.
Elevadas concentraes de acares nos mostos resultam em elevados
teores alcolicos, podendo comprometer a viabilidade das clulas ou ainda
favorecer fermentaes lentas e incompletas, com formao de subprodutos, reduzindo o rendimento alcolico e a viabilidade celular da levedura,
favorecendo as contaminaes (Angelis, 1992). Neste contexto, o preparo
do mosto, a concentrao de acar total deve ser compatvel com a na-
367
tureza e composio da matria-prima, levedura empregada e processo de

conduo da fermentao (Stupiello; Horii, 1981).
Do ponto de vista nutricional, o nitrognio, fsforo, potssio, enxofre,
magnsio, mangans, zinco e o clcio so elementos considerados fundamentais para as leveduras, considerando-se sua estrutura celular, o desdobramento de acares e os processos metablicos vitais (Amorim, 1985). A
exigncia nutricional depende da concentrao desses elementos no meio,
estando diretamente ligados linhagem da levedura utilizada no processo.
O enxofre, potssio, mangans e cobalto so especialmente importantes por
facilitarem as atividades enzimticas (Amorim et al., 1996).
O caldo de cana constitui um timo substrato para o crescimento de
microrganismos, graas aos elevados teores de nutrientes, de gua, pH e
temperatura favorveis (Gallo, 1992). A presena de microrganismos contaminantes, carreados com a matria-prima do campo, por ocasio das operaes de corte-carregamento-transporte e o processo de extrao podem
apresentar-se muito elevados, resultando em infeces da fermentao
(Stupiello; Horii, 1981).
Dentre os microrganismos responsveis pela reduo no rendimento
da fermentao alcolica destacam-se as bactrias pertencentes aos gneros Acetobacter, Clostridium, Aerobacter, Streptococus (Amorim; Oliveira,
1982), Pseudomonas, Enterobacter, Klebsiella, Micrococcus, Arthrobacter,
Corynebacterium, Streptomices, Actinomyces, Leuconostoc, Bacillus e Lactobacillus (Bevan; Bond, 1971) e os fungos (leveduras e bolores) como Saccharomyces, Torula, Pichia, Penicillium, Aspergillus, Cladosporium (ibidem) e
Candida (Cabrini; Gallo, 1999).
As bactrias deterioram rapidamente a cana colhida e provocam alteraes desfavorveis s leveduras durante o processo fermentativo, tais como
floculao e perda do fermento, consumo de sacarose e outros nutrientes do
mosto, comprometendo o rendimento alcolico (Gallo, 1992).
Segundo Amorim e Oliveira (1982), bactrias do gnero Leuconostoc e
Bacillus quebram a sacarose, formando polmeros de alto peso molecular,
que so constitudos por resduos de glicose ou frutose. Estes polmeros
entopem trocadores de calor e canalizaes, aumentando a viscosidade do
vinho, entupindo as centrfugas. As bactrias do gnero Acetobacter e Gluconobacter oxidam o lcool etlico em cido actico, aumentando a acidez
368
voltil e fixa nos vinhos. As dos gneros Lactobacillus, Leuconostoc, Lactococcus e Pediococcus produzem grande quantidade de cido ltico a partir da
glicose, enquanto as do gnero Clostridium so responsveis pela formao
dos cidos butrico, frmico e actico (Yokoya, 1995).
Influncias sobre o mosto e processo fermentativo

Estudos realizados tm confirmado reduo significativa nos teores
de Acares Redutores Totais (ART) presentes no mosto com o aumento de danos causados pela cigarrinha-das-razes (Tabela 12.1 e Grfico
12.12). Com relao s pocas de avaliao (maio/junho e outubro da safra
2007/2008), Ravaneli (2010) verificou aumento nos teores de ART e reduo da acidez total quando a colheita dos colmos foi realizada no final de safra.
Os compostos fenlicos atuam como inibidores do metabolismo das leveduras (Polakovic et al., 1992; Stupiello, 2002), refletindo em significativas perdas no rendimento alcolico e alteraes na composio do destilado
(Ravaneli, 2005). Com o maior nvel de danos promovidos por M. fimbriolata verificou-se discreto aumento nos compostos fenlicos totais no mosto
(Tabela 12.1), principalmente a partir de 30% de dano nos colmos. Estes
resultados corroboram observaes de Godshall (1999), relatando que o
processo de clarificao do caldo no remove o excesso dessas biomolculas. Em muitas unidades produtoras para o preparo do mosto realizado
o processo de clarificao branda (at pH 6, no processo de caleagem) no
caldo, com o objetivo de retirar impurezas na matria-prima utilizada para
a produo do mosto.
Avaliao dos nutrientes do caldo e do mosto

Garcia et al. (2007) relataram que as ninfas da M. fimbriolata sugam
as razes da cana-de-acar afetando o xilema e o floema da planta. Garcia (2009) observou que o ataque da praga no afetou as quantidades de
nutrientes absorvidos pela planta e presentes na massa seca do colmo, no
caldo e no mosto (Tabelas 12.2, 12.3 e 12.4). Verificou-se que grande parte
do fsforo, potssio, magnsio, clcio, mangans, ferro e zinco contidos na
massa seca, apenas o nitrognio e o enxofre foram exportados em maiores
quantidades para o caldo extrado.
369
Tabela 12.1 Resultado da anlise de varincia (teste de F) e comparao de mdias pelo teste de
Tukey (5% de probabilidade) para parmetros tecnolgicos do mosto: acares redutores totais
(ART), acidez total e compostos fenlicos totais
ART
Acidez total
Comp. Fenlicos Totais
gH2SO4/L
g/mL
0%
12,71A
1,39A
230,01A
15%
12,47A
1,36A
233,41A
30%
12,39AB
1,43A
249,74A
60%
11,94B
1,48A
254,52A
Teste F (A)
6,09**
1,16
3,21*
DMS (Tukey)
0,48
0,17
24,79
maio/junho
11,55B
1,73A
245,96A
Outubro
13,20A
1,10B
237,88A
Teste F (B)
164,61**
181,08**
1,44ns
DMS (Tukey)
0,25
0,09
13,29
Teste F (A x B)
1,24
0,39
ns
0,06ns
CV (%)
5,71
17,94
15,19
Causas de variao
Nveis de danos (A)
pocas (B)
ns
ns
Mdias seguidas de letras iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.
ns = no significativo; * = significativo ao nvel de 5%; ** = significativo ao nvel de 1%
Fonte: Garcia, 2009
Grfico 12.12 Efeito dos danos causados por M. fimbriolata sobre os acares redutores
totais do mosto (%), nas duas pocas de colheita.
11,051
CV (%)
20,195
0,547ns
0,079
158,558**
0,721B
1,227A
0,148
0,095ns
0,973A
0,978A
0,958A
0,987A
30,885
0,438ns
0,869
229,70**
3,624B
10,253A
1,622
1,499ns
7,617A
7,108A
6,598A
6,437A
g/kg
30,423
0,161ns
0,009
38,181**
0,061B
0,090A
0,017
2,876ns
0,087A
0,074A
0,0712A
0,070A
g/kg
Fonte: Garcia, 2009
Ca
0,434ns
34,634
32,051
0,125
34,621**
0,702B
1,072A
0,232
2,522ns
1,024A
0,895A
0,832A
0,798A
g/kg
0,399ns
0,104
29,410**
0,658B
0,942A
0,194
2,150ns
0,899A
0,821A
0,754A
0,727A
g/kg
Mg
Massa seca
0,314
0,443ns
AxB
DMS (Tukey)
6,636B
20,683**
outubro
1,446ns
0,585
6,857A
60%
7,3544A
7,198A
30%
maio/junho
6,812A
15%
DMS (Tukey)
7,114A
g/kg
mg/kg
0%
Causas de
variao
Tabela 12.2 Valores mdios dos nutrientes presentes na massa seca da cana
Nveis de danos (A)
pocas (B)
Mn
31,109
0,245ns
3,105
0,449ns
25,132A
24,083A
5,794
0,444ns
25,916A
24,887A
23,501A
24,125A
mg/kg
Fe
49,765
0,717ns
44,097
10,163**
183,042B
253,771A
82,27
0,472ns
232,292A
197,375A
217,708A
226,250A
mg/kg
Zn
48,817
1,780ns
0,845
7,406**
3,687B
4,844A
1,576
2,554ns
5,258A
4,001A
4,083A
3,722A
mg/kg
370
1,929
0,074
0,569A
0,803B
136,535
DMS (Tukey)
maio/junho
outubro
0,039
0,342ns
14,257
DMS (Tukey)
AxB
CV (%)
**
ns
0,687A
0,6960A
60%
0,714A
30%
0,648A
15%
1,219
64,873
6,955
47,654
0,883ns
54,019
0,455ns
0,276
**
54,613
**
0,701B
1,819A
0,515
23,042B
48,902A
12,975
ns
0,308
ns
1,407A
1,321A
1,047A
1,263A
g/L
36,922A
36,751A
33,321A
37,896A
mg/L
g/L
0%
Causas de
variao
S
46,596
0,348ns
0,026
8,672
**
0,120B
0,159A
0,049
0,451
ns
0,150A
0,144A
0,132A
0,132A
g/L
54,853
0,458ns
0,031
16,236
**
0,106B
0,168A
0,057
1,152
ns
0,152A
0,146A
0,114A
0,1379A
g/L
Mg
Caldo
Fonte: Garcia, 2009
pocas (B)
Nveis de danos (A)
Tabela 12.3 Valores mdios dos nutrientes presentes no caldo extrado

Ca
Mn
0,189ns
44,346
58,775
0,564
2,093
ns
3,344A
2,933A
1,053
0,114
ns
3,150A
3,229A
3,004A
3,172A
mg/L
0,026ns
0,025
3,272
ns
0,095B
0,118A
0,047
0,799
ns
1,120A
0,106A
0,092A
0,108A
g/L
Fe
75,571
0,216ns
4,586
21,548
**
9,602B
20,312A
8,555
0,348
ns
16,779A
15,062A
13,558A
14,429A
mg/L
Zn
39,855
1,569ns
0,118
1,860ns
0,692B
0,773A
0,221
0,526ns
0,795A
0,720A
0,701A
0,712A
mg/L
371
16,362
CV (%)
34,714
1,040
1,014
144,112**
16,378B
40,621A
7,488
0,985ns
28,844A
29,264A
25,628A
30,261A
28,814
0,130ns
0,194
149,912**
1,064B
2,261A
0,362
2,210ns
1,7812A
1,775A
1,478A
1,613A
g/L
27,413
0,848ns
0,056
0,912ns
0,489B
0,517A
0,104
0,135ns
0,512A
0,498A
0,510A
0,490A
g/L
Mg
Fonte: Garcia, 2009
Ca
1,877ns
29,051
36,179
0,035
12,116**
0,268B
0,329A
0,066
1,846ns
0,319A
0,315A
0,266A
0,295A
g/L
1,644ns
0,023
1,778ns
0,166B
0,151A
0,043
0,391ns
0,167A
0,160A
0,149A
0,156A
g/L
0,191
0,759ns
AxB
DMS (Tukey)
0,264B
24,468**
outubro
0,159ns
0,036
0,283A
60%
0,311A
0,288A
30%
maio/junho
0,286A
15%
DMS (Tukey)
0,292A
P
mg/L
g/L
0%
Causas de variao
Mosto
Tabela 12.4 Valores mdios dos nutrientes presentes no mosto utilizado para a fermentao
Nveis de danos (A)
pocas (B)
Mn
40,802
0,691ns
0,042
0,012ns
0,254A
0,252A
0,078
1,325ns
0,283A
0,263A
0,233A
0,233A
mg/L
Fe
61,627
0,323ns
0,329
4,073*
0,967B
1,299A
0,615
1,429ns
1,352A
1,228A
1,050A
0,904A
mg/L
Zn
59,317
1,168ns
0,062
5,973*
0,219B
0,295A
0,115
0,825ns
0,298A
0,245A
0,235A
0,250A
mg/L
372
373
O caldo extrado foi submetido ao processo de clarificao com a finalidade de remover impurezas; entretanto, constatou-se que houve remoo
de alguns nutrientes, como nitrognio, fsforo, mangans, ferro e zinco que
apresentaram menores quantidades no mosto (Tabelas 12.3 e 12.4), corroborando informaes de Amorim (2005). Os teores de magnsio e clcio
aumentaram em funo da utilizao de hidrxido de clcio na forma de
leite de cal para a clarificao, com a funo de corrigir o pH. Ocorreu tambm aumento do enxofre como resultado do uso do cido sulfrico para
ajustar o pH do mosto.
Considerando-se que a clarificao remove nutrientes, deve-se realizar suplementao de fsforo mangans e zinco no mosto a ser utilizado
para que o processo fermentativo seja otimizado. Stupiello e Horil (1981)
e Amorim (2005) recomendam valores entre 125 ppm a 150 ppm de P2O5 e
de 1 a 5 mg/L de mangans e zinco no mosto.
As quantidades de nutrientes presentes nos colmos, no caldo e no mosto, no final da safra, foram significativamente menores em relao ao do
incio da safra (Tabelas 12.2, 12.3 e 12.4). Entre o incio e o final da safra,
a cultura passou por um perodo de estresse hdrico, que interferiu na taxa
de absoro de gua e de nutrientes. Deve-se considerar ainda que a planta
apresentou consumo para manuteno de suas atividades fisiolgicas.
Comportamento microbiolgico
A microbiota presente no caldo apresenta caractersticas bastante variadas, uma vez que a cana-de-acar abriga em seu ecossistema elevada
diversidade de microrganismos prprios, que constituem fonte natural de
contaminantes no momento em que as operaes de colheita e processamento so realizadas. Segundo Mutton e Mutton (2002), o reflexo direto da
qualidade da matria-prima pode ser observado no processo fermentativo,
uma vez que diretamente afetado pelos componentes do caldo. Portanto,
de grande importncia o conhecimento do comportamento das leveduras
fermentadoras quando inoculadas em mosto proveniente de canas estressadas ou injuriadas.
Ravaneli (2005), estudando diferentes nveis de infestao de M. fimbriolata, observou maior nmero de colnias de leveduras selvagens no
374
caldo e mosto com o aumento dos danos, o que tambm foi observado por
Ravaneli (2010), conforme Grfico 12.13.
No caldo foi observado aumento no nmero de colnias de bactrias lticas com o aumento dos danos causados pela praga (Grfico 12.14). Este
resultado pode ser confirmado por meio do aumento na acidez voltil do
caldo, indicando que as bactrias presentes nos tratamentos com maiores
danos consumiram parte da sacarose presente, produzindo cidos orgnicos. Pde-se observar que, apesar das fermentaes terem iniciado com
inculo prensado, houve o desenvolvimento de outras leveduras, em funo da microbiota presente na cana.
Grfico 12.13 Contagem de colnias de leveduras no caldo e mosto nas duas pocas de
colheita, safra 2007/2008. (A) colheita de maio/junho; (B) colheita de outubro.
375
Grfico 12.14 Contagem de colnias de bactrias no caldo e mosto nas duas pocas de
colheita, safra 2007/2008. A: colheita de maio/junho; B: colheita de outubro.
A microbiota fermentadora foi influenciada diretamente pela presena

de biomolculas de defesa, tais como os compostos fenlicos. Segundo Ravaneli (2010), estes so proporcionais ao aumento dos nveis de danos causados por M. fimbriolata, independentemente da poca de colheita realizada.
De modo semelhante, Ravaneli et al. (2011) observaram reduo da
viabilidade de brotos viveis das leveduras de 98,9% (na inoculao), para
93,4% aps 50 minutos de processo. Ao final da fermentao observou-se
reduo da viabilidade celular que foi proporcional ao nvel de dano sofrido pela matria-prima (Grfico 12.15). A queda na viabilidade celular
est associada a diversos fatores, tais como disponibilidade de nutrientes
e presena de contaminantes, decorrentes da matria-prima deteriorada.
Resultados semelhantes foram observados em estudos desenvolvidos por
Gonalves (2003) e Ravaneli et al.(2006).
376
Grfico 12.15 Interao entre nveis de danos e pocas de colheita para viabilidade celular
de leveduras no final da fermentao. Letras maisculas comparam nveis de danos dentro
de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de nveis de danos. Os resultados
correspondem s mdias de dez ciclos fermentativos.
Fonte: Ravaneli et al., 2011
Deve-se considerar ainda que a conduo do processo fermentativo

realizada de modo contnuo, por ciclos sucessivos, com a reutilizao do
inculo. Quando a matria-prima empregada para a composio do mosto
est comprometida, verifica-se reduo da viabilidade celular no decorrer
dos ciclos fermentativos, tanto no incio quanto no final do processo (Grficos 12.16 e 12.17). A queda na viabilidade ao longo dos ciclos decorrente
do estresse acumulado pela levedura, em funo da presena das biomolculas inibidoras do processo fermentativo, tais como compostos fenlicos e
cidos, alm da presena dos contaminantes.
A porcentagem de clulas e brotos viveis durante a fermentao de
extrema importncia para a manuteno da populao de leveduras, sendo
o monitoramento peridico imprescindvel. Alm de metablitos indesejveis contidos na matria-prima, deve-se considerar ainda a presena de
compostos txicos s leveduras que so produzidos durante a fermentao
acarretando perdas da viabilidade, com consequente reduo da eficincia
industrial (Okolo et al., 1987). Ravaneli (2010) observou diferena significativa na viabilidade de brotos para nveis de infestao no incio da
fermentao (t = 50 minutos), com tendncia similar no final do processo
(Grfico 12.18), e maior porcentagem de brotos viveis foi observado para
a colheita realizada no final de safra.
377
Grfico 12.16 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para viabilidade
celular de leveduras no incio da fermentao. Letras maisculas comparam ciclos fermentativos dentro de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos fermentativos.
Os resultados correspondem s mdias dos quatro nveis de danos causados pela M. fimbriolata, na safra 2007/2008.
Grfico 12.17 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para viabilidade
celular de leveduras no final da fermentao. Letras maisculas comparam ciclos fermentativos dentro de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos fermentativos.
Os resultados correspondem s mdias dos quatro nveis de danos causados pela M. fimbriolata, na safra 2007/2008.
378
Grfico 12.18 Interao entre nveis de danos e pocas de colheita para viabilidade de brotos de leveduras no final da fermentao, na safra 2007/2008. Letras maisculas comparam
nveis de danos dentro de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de nveis de
danos.
De maneira geral, os maiores ndices de viabilidade celular e de brotos

de leveduras so observados no incio da fermentao. A reduo no nmero de clulas vivas no final do processo est relacionada ao aumento na concentrao de metablitos como etanol, CO2 e cidos e reduo na quantidade de acar e nutrientes do substrato (Stokes, 1971; Hallsworth, 1998).
Considerando-se que as leveduras so reutilizadas em ciclos fermentativos
posteriores, de extrema importncia a presena de clulas e brotos viveis
ao final da fermentao para manter a porcentagem de fermento estvel na
dorna (Amorim et al., 1996).
Quanto presena de contaminantes, nas fermentaes verificou-se aumento significativo na concentrao de bactrias com a elevao dos nveis
de dano (Grfico 12.19), indicando que a qualidade da matria-prima empregada no processo contribuiu para o incremento da populao de contaminantes na fermentao.
As bactrias contaminantes da fermentao alcolica competem com
as leveduras pelo mesmo substrato, consomem acares e etanol, produzem cidos e gomas, diminuindo a viabilidade de leveduras e rendimento do processo (Amorim; Oliveira, 1982). As bactrias lticas dos gneros
379
Lactobacillus e Leuconostoc so os principais contaminantes da fermentao

alcolica (Narendranath, 2003), sendo que Lactobacillus adaptada s condies de fermentao, enquanto Leuconostoc mais sensvel ao etanol e geralmente no persiste por longo perodo no processo fermentativo (Oliva-Neto; Yokoya, 2001). As bactrias lticas tambm so responsveis pela
floculao das leveduras (Yokoya; Oliva-Neto, 1991), levando ao assentamento das leveduras no fundo das dornas, o que dificulta a converso do
acar em etanol (Rose et al., 1980, citado por Ludwig et al., 2001).
Grfico 12.19 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para concentrao
de bactrias contaminantes no incio e final da fermentao. Letras maisculas comparam
ciclos fermentativos dentro de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos
fermentativos. Os resultados correspondem s mdias dos quatro nveis de danos causados
pela M. fimbriolata, safra 2007/2008.
380
Avaliao do vinho
O aumento da populao de bactrias contaminantes ao final da fermentao resultou em reduo no pH dos vinhos (Grfico 12.20). Constatou-se tambm aumento dos Acares Redutores Residuais Totais nos vinhos,
quando houve maior comprometimento dos colmos pelo ataque da praga
(Grfico 12.21), em virtude de a matria-prima empregada apresentar elevada acidez e maiores teores de compostos fenlicos. Ravaneli (2005) verificou interferncia destes compostos sobre o metabolismo das leveduras,
com redues de 7,2% no teor alcolico dos vinhos quando o nvel de infestao da cigarrinha-das-razes era superior a 2,5 ninfas/m. De acordo com
Narendranath et al. (2001) e Polakovic et al. (1992), os compostos fenlicos
atuam como inibidores do metabolismo das leveduras, comprometendo o
processo de degradao dos acares e produo de etanol, aumentando o
tempo de fermentao, reduzindo o consumo de acares do mosto.
Grfico 12.20 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para pH dos vinhos. Letras maisculas comparam ciclos fermentativos dentro de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos fermentativos. Os resultados correspondem s mdias
dos quatro nveis de danos causados pela M. fimbriolata, safra 2007/2008.
381
Grfico 12.21 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para acares redutores residuais totais. Letras maisculas comparam ciclos fermentativos dentro de pocas.
Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos fermentativos. Os resultados correspondem s mdias dos quatro nveis de danos causados pela M. fimbriolata, safra 2007/2008.
Neste contexto, os resultados obtidos por Ravaneli (2010) para teor

alcolico e eficincia fermentativa (Grfico 12.22) indicam redues de
13,82% no teor alcolico dos vinhos e 8,4% na eficincia da fermentao
quando colmos com 60% de danos causados pelo ataque de cigarrinha-das-razes foram utilizados. Verificou-se ainda que as redues foram maiores
ao longo dos ciclos fermentativos, utilizando-se da mesma matria-prima,
sobretudo nos tratamentos com maior porcentagem de danos (Grficos
12.23, 12.24 e 12.25). Resultados semelhantes foram relatados por Gonalves (2003), destacando que menores danos na matria-prima proporcionam maiores teores de acares, melhorando a eficincia fermentativa.
As fermentaes realizadas no incio da safra apresentaram menor teor
alcolico do vinho, embora com maior eficincia da fermentao (Grfico
12.22). Nessa poca, os colmos foram caracterizados com danos menos evi-
382
denciados, menores nveis de contaminantes e maiores nveis de leveduras

selvagens e teores de compostos fenlicos. Sob estas condies o mosto obtido continha os constituintes necessrios, possibilitando que as leveduras
metabolizassem maior quantidade de acar para produzir etanol.
Grfico 12.22 Efeito dos danos causados por M. fimbriolata sobre teor alcolico dos vinhos
e eficincia da fermentao nas duas pocas de colheita, safra 2007/2008. Os resultados correspondem s mdias dos dez ciclos fermentativos.
383
Grfico 12.23 Interao entre nveis de danos e ciclos fermentativos para teor alcolico
dos vinhos. Letras maisculas comparam nveis de danos dentro de ciclos fermentativos.
Letras minsculas comparam ciclos fermentativos dentro de nveis de danos. Os resultados correspondem s mdias dos quatro nveis de danos causados pela M. fimbriolata, safra
2007/2008.
Grfico 12.24 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para teor alcolico
dos vinhos, safra 2007/2008. Letras maisculas comparam ciclos fermentativos dentro de
pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos fermentativos.
384
Considerando-se a realizao de ciclos fermentativos, as duas pocas

apresentaram comportamento semelhante (Grfico 12.25), reduzindo os
teores alcolicos medida que se reutilizou o fermento e mosto proveniente
de matria-prima danificada. Para a colheita realizada em final de safra, o
teor alcolico do vinho foi maior e a eficincia da fermentao foi menor,
confirmando que o comprometimento da matria-prima favoreceu a inibio das leveduras, que apesar de terem apresentado maior viabilidade nessa
poca, no foram capazes de metabolizar parte dos acares para produzir
lcool.
Grfico 12.25 Interao entre nveis de danos e ciclos fermentativos para eficincia da
fermentao. Letras maisculas comparam nveis de danos dentro de ciclos fermentativos.
Letras minsculas comparam ciclos fermentativos dentro de nveis de danos. Os resultados
correspondem s mdias das duas pocas de colheita, safra 2007/2008.
Nem todo acar presente no mosto transformado em lcool e gs carbnico. Parte utilizada para a multiplicao do fermento na dorna, bem
como para a formao de carboidratos como a trealose e produtos secundrios, como glicerol, cidos, aldedos, steres, lcoois superiores, dentre
outros (Amorim, 2005).
Segundo Yokoya (1995), a formao de lcoois superiores maior quando o fermento apresenta atividade fraca, ocasionando demora no processo fermentativo. Os resultados obtidos por Ravaneli (2010) indicam que
385
no houve alteraes nas concentraes de acetaldedo, lcool isobutlico e

isoamlico nos destilados (Grficos 12.26, 12.27 e 12.28, respectivamente).
Considerando-se a formao dos lcoois superiores, este comportamento
pode ser decorrente do processo de clarificao do caldo, pela remoo dos
aminocidos, precursores desses compostos.
Grfico 12.26 Interao entre nveis de danos e pocas de colheita para acetaldedo nos
destilados, safra 2007/2008. Letras maisculas comparam nveis de danos dentro de pocas.
Letras minsculas comparam pocas dentro de nveis de danos.
Grfico 12.27 Interao entre nveis de danos e pocas de colheita para lcool isobutlico
nos destilados, safra 2007/2008. Letras maisculas comparam nveis de danos dentro de
pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de nveis de danos.
386
Grfico 12.28 Interao entre ciclos fermentativos e pocas de colheita para lcool isoamlico nos destilados, safra 2007/2008. Letras maisculas comparam ciclos fermentativos
dentro de pocas. Letras minsculas comparam pocas dentro de ciclos fermentativos.
Quanto aos compostos secundrios formados durante a fermentao, o

glicerol o mais abundante. Sua formao decorrente da competio pela
utilizao do poder redutor do NADH na via de obteno do etanol, sendo
inversamente proporcional a sua produo (Amorim et al., 1996). A produo de glicerol est relacionada ao tipo de levedura utilizada e ao ambiente
de fermentao (Amorim, 2005).
Resultados obtidos por Garcia (2009) no evidenciaram diferenas significativas para produo de glicerol em relao aos nveis de danos, da
mesma forma, para os ciclos fermentativos (Grfico 12.29).
Nas leveduras do gnero Saccharomyces, a trealose acumulada durante
perodos de crescimento reduzido como, por exemplo, na falta de nitrognio, enxofre e fsforo, assim como durante a fase estacionria de crescimento em glicose (Lillie; Pringle, 1980; Franis et al., 1991).
A trealose um carboidrato de reserva produzido pelas leveduras principalmente em situaes de estresses, garantindo reservas para sobrevivncia (Alcarde; Basso, 1997). Quando se analisam os dados em funo dos
danos, verifica-se que no houve diferenas no acmulo de trealose em relao aos nveis de comprometimento dos colmos (Grfico 12.29). Isso sugere que a cigarrinha-das-razes no induz a levedura a acumular trealose,
mas observando-se os valores obtidos com a anlise dos ciclos, nota-se que,
ao longo da reutilizao destes, a levedura acumula mais trealose tanto no
incio quanto no final da fermentao (Grfico 12.30).
387
Grfico 12.29 Teores de glicerol nos vinhos: nveis de danos, ciclos fermentativos e pocas,
safra 2007/2008. Mdias iguais no diferem entre si pelo teste de Tukey (P0,05).
Fonte: Garcia, 2009
O estresse causado pela reciclagem do fermento juntamente com os compostos e metablitos liberados pelos processos promovem o acmulo deste
carboidrato na clula de levedura. Com relao a pocas, somente se observou resultado significativo no incio da fermentao na qual a primeira poca
de avaliao apresentou maior quantidade de trealose acumulada. Ao final do
processo fermentativo observou-se que a quantidade de trealose era menor,
pois o meio no qual se encontra a levedura est pobre em substratos, principalmente os acares, ento esta mobiliza suas reservas (trealose) iniciando
a degradao do carboidrato de reserva. Esta degradao to maior quanto
maior for a temperatura e o teor alcolico do meio (Amorim et al., 1996).
Estudos avaliando a fermentao endgena de S. cereviseae demonstraram
a reduo nos valores de trealose quando a levedura foi exposta a meio com
altos teores alcolicos e temperaturas elevadas (Ferreira et al., 1999).
388
Grfico 12.30 Valores de trealose no incio e final da fermentao: nveis de danos, ciclos
fermentativos e pocas, safra 2007/2008. Mdias iguais no diferem entre si pelo teste de
Tukey (P=0,05).
Fonte: Garcia, 2009
389
A presena de contaminantes na matria-prima prejudica o processo

fermentativo pelo consumo de acares e nutrientes presentes no meio,
liberando compostos. Este fato pode estar relacionado com o acmulo de
trealose pela levedura em funo do estresse causado.
Identificao de genes relacionados resistncia varietal

O ataque de cigarrinha-das-razes reduz a produtividade de colmos e a
qualidade da cana, entretanto poucas pesquisas tm sido dedicadas interao pragacana-de-acar, alm da resistncia varietal de cana-de-acar
s cigarrinhas. Diversos estudos abordaram os controles qumico (Dinardo-Miranda et al., 2000b; 2001a; 2001b; 2002; 2006a), biolgico (idem,
2000b; Garcia et al., 2006) e cultural (idem, 2000b).
Guimares (2007) avaliou a resistncia varietal da cana-de-acar M.
fimbriolata em trs gentipos, dois dos quais j relatados como suscetveis
(Dinardo-Miranda et al., 1999; Dinardo-Miranda, 2004; Silva et al., 2005), e
um que tem apresentado baixos nveis de infestao no campo (Dinardo-Miranda, 2003). Alm disso, comparou-se os perfis de expresso gnica de gentipos de cana-de-acar com diferentes reaes M. fimbriolata por meio
de um experimento de cDNA-AFLP. A identificao de genes envolvidos
na interao da cana-de-acar com a cigarrinha-das-razes pode permitir a
caracterizao de mecanismos de defesa que seriam teis ao desenvolvimento de novas estratgias de controle e ao melhoramento gentico da cultura.
A durao da fase ninfal (Grfico 12.31A) foi significativamente maior
para a variedade SP83-5073. A literatura evidencia que a durao da fase
ninfal ou adulta maior em gentipos resistentes, possivelmente por mecanismos de antibiose ou deterrncia alimentar (Boia Jr. et al., 1999; Gervsio
et al., 1999; Caetano; Boia Jr., 2000; Suinaga et al., 2004). Os resultados
da taxa de mortalidade das ninfas (Grfico 12.31B) reforam essa hiptese,
uma vez que a variedade SP83-5073 apresentou mdias significativamente
maiores.
Diversas substncias txicas ou que causam deterrncia alimentar, tais
como inibidores de proteinase, compostos fenlicos e terpenos esto envolvidos nos mecanismos de defesa das plantas. Alguns desses compostos so
constitutivos, enquanto outros necessitam de estmulos externos para serem produzidos (Buchanan et al., 2000).
390
Grfico 12.31 Taxa de mortalidade de ninfas e durao da fase ninfal em trs variedades. Mdias seguidas por diferentes letras diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.
Fonte: Guimares, 2007
Frana et al. (2001) identificaram genes relacionados ao metabolismo

secundrio na cana-de-acar e o padro de expresso de enzimas regulatrias. Relataram que as vias de metabolismo de isopropanoides e fenilpropanoides foram ativadas em diferentes estgios de desenvolvimento, tecidos e
situaes de estresse.
391
As principais vias envolvidas na sntese de compostos de defesa so a

do cido chiqumico, responsvel pela produo de compostos fenlicos
e indiretamente pela produo de compostos secundrios nitrogenados,
a do cido mevalnico, produtora de alguns compostos fenlicos e terpenos, e a do metil-D-eritritol 4-P (MEP), produtora de terpenos (Taiz;
Zeiger, 2004).
A infestao de cigarrinhas afetou a massa seca e fresca de colmos, o dimetro e altura de colmos (Tabelas 12.5 e 12.6; Grficos 12.32C e 12.32D).
Este resultado corrobora trabalhos anteriores (Dinardo-Miranda et al.,
1999; Dinardo-Miranda et al., 2002; De La Cruz Llanas et al., 2005; Dinardo-Miranda et al., 2006a) que relatam perdas significativas de produtividade de colmos em cana-de-acar atacada por cigarrinhas. As ninfas
de cigarrinha-das-razes alimentam-se principalmente de seiva do xilema,
o que possivelmente resulta em deficincia hdrica e de nutrientes e consequentemente, em distrbios metablicos generalizados (Fewkes, 1969;
Gallo et al., 2002; Dinardo-Miranda et al., 2004). Alm disso, sob dficit
hdrico, a taxa fotossinttica reduzida dramaticamente, comprometendo
o crescimento e desenvolvimento da planta (Taiz; Zeiger, 2004). Com a infestao, as plantas secam e morrem (Gallo et al., 2002).
A anlise de crescimento demonstrou diferenas varietais. As menores mdias para massa fresca e altura de colmos foram encontrados na
variedade RB72454 e colmos mais finos foram encontrados na variedade
SP80-1816.
Todos os parmetros de crescimento apresentaram aumento ao longo
do tempo, que uma consequncia do crescimento das plantas. No foi
detectada variao no dimetro de colmos ao longo das pocas, provavelmente porque a primeira coleta foi realizada quando as plantas j tinham
quase 100 dias de idade. Embora no haja interao significativa entre a
infestao de M. fimbriolata e as pocas de coleta, a reduo na massa fresca
e seca de folhas aos 68 DAI pode ser por causa do estresse hdrico causado
pela alimentao das ninfas, limitando a taxa fotossinttica.
As menores mdias de massa fresca e seca de razes observadas na variedade SP83-5073 (Tabelas 12.5 e 12.6) provavelmente no esto envolvidas
na maior durao da fase ninfal e taxa de mortalidade nessa variedade, uma
vez que, no momento da infestao, quando a massa fresca de razes era em
mdia 114 g, as ninfas foram capazes de alimentar-se e desenvolver-se.
392
Silva et al. (2005) demonstraram que as ninfas foram capazes de desenvolver-se normalmente e produzir fortes sintomas em plantas mais jovens,
as quais provavelmente possuam menor massa de razes. Entretanto, a
existncia de diferenas morfolgicas nessa variedade que possa afetar
a alimentao de M. fimbriolata no pode ser descartada. Apesar das evidncias de mecanismos de antibiose da SP83-5073 contra a cigarrinha-das-razes, pode existir uma combinao com a morfologia das razes que
refora a resistncia.
Tabela 12.5 Teste de Tukey para massa fresca (g) de colmos, folhas e razes e dimetro de colmos
(mm)
pocas de amostragem (E)
Nveis de
infestao (I)
Variedades (V)
Causas da variao
1. SP80-1816
Massa fresca (g)
Dimetro de colmos (mm)
Colmos
Folhas
Razes
111,50 AB
58,53 A
191,37 A
15,64 B
2. RB72454
103,40 B
63,32 A
189,85 A
15,85 AB
3. SP83-5073
122,53 A
61,60 A
145,27 B
16,95 A
Teste F (V)
5,89
1,57
7,16
**
4,11*
DMS Tukey 5%
13,53
6,64
33,47
1,18
1. Testemunha
122,53 A
62,31 A
165,89 A
16,82 A
2. 10 ninfas por planta
102,42 B
59,98 A
185,11 A
15,48 B
19,40
1,08
2,89
11,25**
9,19
4,50
22,73
0,80
1. 8 DAI
51,37 C
58,24 BC
113,92 C
16,50 A
2. 17 DAI
111,30 B
69,44 A
124,60 C
16,45 A
3. 39 DAI
138,43 A
62,93 AB
176,99 B
15,60 A
4. 68 DAI
148,80 A
53,98 C
286,48 A
16,03 A
Teste F (E)
91,57
8,75
48,81
1,13ns
DMS Tukey 5%
17,19
8,43
42,55
1,50
VxI
4,27*
1,37ns
0,69ns
1,67ns
VxE
6,31**
0,81ns
1,16ns
2,69*
IxE
13,09**
1,15ns
0,35ns
5,69**
VxIxE
4,25
0,25
ns
1,06
1,08ns
CV %
17,23
27,32
10,50
Teste F (I)
DMS Tukey 5%
**
**
**
**
ns
ns
**
ns
15,55
ns
**
DAI = Dias aps a infestao; Letras maisculas comparam medias verticalmente pelo teste de Tukey;
* = p < 0,05; ** = p < 0,01; ns = no significativo.
393
Tabela 12.6 Resultado e teste de Tukey para massa seca (g) de colmos, folhas e razes e altura
de colmos (cm)
pocas de amostragem (E)
Nveis de
infestao (I)
Variedades (V)
Causas de variao
Massa seca (g)
Altura de Colmos (cm)
Colmos
Folhas
Razes
1. SP80-1816
12,83 A
14,35 A
47,61 A
69,31 A
2. RB72454
14,06 A
15,96 A
47,30 A
63,11 B
3. SP83-5073
12,67 A
14,47 A
33,75 B
73,33 A
0,95ns
1,62ns
6,42**
9,99**
Teste F (V)
DMS Tukey 5%
2,66
2,41
10,68
5,57
1. testemunha
14,66 A
16,11 A
41,47 A
71,81 A
2. 10 ninfas por planta
11,71 B
13,74 B
44,30 A
65,35 B
Teste F (I)
10,84**
8,51**
0,61ns
11,83**
DMS Tukey 5%
1,80
1,63
7,25
3,78
1. 8 DAI
5,87 C
15,96 A
40,55 B
58,15 C
2. 17 DAI
12,60 B
17,07 A
40,04 B
63,94 BC
3. 39 DAI
14,39 B
15,20 A
39,76 B
67,64 B
4. 68 DAI
19,89A
11,48 B
67,19 A
84,61 A
Teste (E)
41,54**
8,88**
24,87**
36,60**
DMS Tukey 5%
3,38
3,06
13,57
7,07
VxI
3,08ns
3,62*
0,08ns
1,43ns
VxE
1,29ns
1,42ns
1,99ns
5,38**
IxE
4,03
0,57
0,29
ns
6,71**
VxIxE
1,48ns
0,91ns
0,73ns
3,19*
CV (%)
28,86
23,10
35,66
11,63
ns
DAI = Dias aps a infestao; Letras maisculas comparam medias verticalmente pelo teste de Tukey;
* = p < 0,05; ** = p < 0,01; ns = no significativo.
A menor massa fresca de colmos das variedades SP80-1816 e RB72454

pode ser decorrente do ataque da praga (Figura 12.37A), uma vez que essas variedades j foram relatadas como suscetveis (Dinardo-Miranda et al.,
1999; Dinardo-Miranda, 2004; Silva et al., 2005). O Grfico 12.32A tambm
indica que o ataque de M. fimbriolata no teve efeito sobre a massa fresca de
colmos na variedade SP83-5073, corroborando os indcios de resistncia fornecidos pela mortalidade de ninfas e durao da fase ninfal (Grfico 12.30).
Dinardo-Miranda (2004) relata que, em condies de campo, a variedade RB72454 apresenta menor infestao que a SP80-1816. Essa menor
infestao pode ser devida a no preferncia da cigarrinha por esse gen-
394
Grfico 12.32 Massa fresca e seca de colmos. A Efeito dos nveis de infestao dentro de
variedades; B Efeito de variedades dentro das pocas; C, D Efeito dos nveis de infestao dentro das pocas. Mdias seguidas por diferentes letras diferem entre si pelo teste de
Tukey a 5% de probabilidade. Letras maisculas comparam medias dentro dos tratamentos
e letras minsculas comparam mdias dentro de tratamentos.
tipo. Experimentos com chance de escolha so necessrios para confirmar

essa hiptese.
O Grfico 12.32B mostra que a massa fresca da variedade SP83-5073
superou as demais ao longo do tempo quando submetida infestao de
M. fimbriolata, o que pode ser resultado de mecanismos de antibiose ou
morfologia de razes, que inibiram a alimentao e crescimento das ninfas.
Houve uma tendncia de diminuio da altura e dimetro de colmos na
SP80-1816 e RB72454 ao longo do tempo, provavelmente por causa da infestao de M. fimbriolata, enquanto o oposto foi observado para a SP835073 (Grficos 12.33A e 12.33B), o que tambm caracteriza que essa variedade resistente cigarrinha-das-razes.
Ao longo do tempo, a altura e dimetro de colmos foram significativamente afetados pela praga, corroborando com os sintomas de desidratao,
colmos finos e chochos e morte da planta descritos por Macedo e Macedo
(2004) e Gallo et al. (2002).
395
Guimares (2007) utilizou cDNA-AFLP (Bachen et al., 1998), para

estudar a expresso gnica diferencial por sua simplicidade e custo relativamente baixo, se comparada a microarranjos de cDNA. Das 64 combinaes possveis de iniciadores, utilizaram-se oito que apresentavam maior
polimorfismo para cana-de-acar em ensaios anteriores, das quais quatro
foram escolhidas (Tabela 12.7).
Grfico 12.33 Altura e dimetro de colmos. A, B Efeito da poca dentro de variedades;

C, D efeito dos nveis de infestao dentro de pocas. Letras maisculas comparam mdias
dentro dos tratamentos e letras minsculas comparam mdias entre os tratamentos.
Tabela 12.7 Combinaes de iniciadores selecionadas (LI-COR)

Combinao
Iniciador MseI
Iniciador marcado IRDye (TaqI)
GAT GAG TCC TGA GTA ACA
GAT GAG TCC TGA CCG AGA
II
GAT GAG TCC TGA GTA ACT
GAT GAG TCC TGA CCG AGA
III
GAT GAG TCC TGA GTA AAC
GAT GAG TCC TGA CCG AGT
IV
GAT GAG TCC TGA GTA AAG
GAT GAG TCC TGA CCG AGT
Poucos fragmentos diferencialmente expressos foram observados, mas,

na Figura 12.6, podem ser observadas bandas de aproximadamente 389 pb
que foram expressas no gentipo resistente (combinao de iniciadores I)
quando submetido infestao de cigarrinha (poos 5 e 6, setas vermelhas).
396
Essas bandas foram expressas somente na variedade SP83-5073, 24 e 48

horas aps a infestao, o que indica que esses fragmentos podem estar envolvidos em mecanismos de defesa do gentipo resistente. Uma vez que
foram expressos pouco tempo aps a infestao, possvel que esses fragmentos codifiquem protenas relacionadas patognese. Essas protenas
esto relacionadas com mecanismos de interao planta-praga, e muitas
vezes produzem resposta de defesa na planta hospedeira.
Figura 12.6 Foto do gel de cDNA-AFLP (combinao de iniciadores I) mostrando

fragmentos (setas vermelhas) de 389 pb que foram diferencialmente expressos na variedade
SP83-5073 atacada pela cigarrinha-das-razes aos 24 e 48 horas aps a infestao.
Descrio: 1 SP80-1816 antes da infestao; 2 SP80-1816 1 dia aps a infestao (testemunha); 3 SP80-1816 1 dia aps a infestao (infestada); 4 SP83-5073 antes da infestao; 5 SP83-5073 1 dia aps a infestao (infestada); 6 SP83-5073 2 dias aps a infestao
(infestada).
397
Parece improvvel que o fragmento de aproximadamente 389 pb identificado neste experimento seja um falso positivo, uma vez que duas plantas
foram utilizadas para cada condio, e cada reao foi corrida ao menos oito
vezes para confirmar a expresso. Entretanto, outros estudos so necessrios para confirmar/validar este resultado.
Em funo dos fortes indcios de resistncia observados na anlise de
crescimento, mortalidade do inseto e longevidade de ninfas, h a possibilidade de que este fragmento possa de fato estar envolvido com a resistncia
gentica, ainda que outros mecanismos possam estar envolvidos na resistncia como, por exemplo, a morfologia das razes.
A sequncia de nucleotdeos do fragmento poderia fornecer alguma informao sobre a provvel funo da protena codificada pelo mesmo, visto
que foi proveniente de sequncia gnica expressa (cDNA). Quando 96 clones recombinantes provenientes da ligao do fragmento isolado do gel de
agarose foram clonados e sequenciados, obtiveram-se 93 sequncias vlidas
(de boa qualidade), as quais foram ento analisadas por meio do programa
phredPhrap aps a remoo das sequncias do vetor e as sequncias Fasta
foram clusterizadas pelo programa crossmatch. O resultado da clusterizao foi a obteno de 2 Contigs, um com duas sequncias e contendo 363
nucleotdeos (Contig1 Figura 12.7) e outro com 91 sequncias e contendo
355 nucleotdeos (Contig2 Figura 12.8). Aps o alinhamento das sequncias consenso dos dois Contigs usando o programa Clustalw,1 verificou-se que os dois Contigs apresentaram homologia total de 71%, sendo que
a homologia nas pores 3 e 5 de 100%, estando a diferena na poro
intermediria (Figura 12.9). Portanto, parece tratar-se de duas isoformas, e
a do Contig2 predominante (91 sequncias versus 2).
Aps utilizar a ferramenta Blastn do banco de dados do NCBI e fazer
pesquisa contra o banco de sequncias EST (dbEST) utilizando-se das
sequncias apresentadas nas Figuras 12.7 e 12.8, verificou-se que as mesmas apresentam alta homologia com sequncias de outras espcies vegetais
associadas com mecanismos de defesa e associao simbitica.
O primeiro hit (e-28) foi com uma sequncia de cDNA encontrada
em uma cultivar de soja, Sinpaldalkong 2, e que estaria relacionado com a
via de transduo de sinais relacionada simbiose de plantas de soja com
1 Ver: <http://www.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html>
398
Figura 12.7 Sequncia Fasta consenso do Contig1, o qual composto por 2 sequncias. A
sequncia sombreada em amarelo foi utilizada nas anlises feitas com a ferramenta Blast do
NCBI. As letras minsculas representam bases sem qualidade.
Figura 12.8 Sequncia Fasta consenso do Contig2, o qual composto por 91 sequncias. A
sequncia sombreada em amarelo foi utilizada nas anlises feitas com a ferramenta Blast do
NCBI. As letras minsculas representam bases sem qualidade.
bactrias do gnero Rhizobium nas razes (Lestari et al., 2006). possvel

que, na presente pesquisa, o fragmento encontrado tenha algum papel na
interao da cana-de-acar com a cigarrinha-das-razes, talvez no reconhecimento da praga pela planta.
O segundo hit (e-27) foi uma sequncia de cDNA encontrada em
plantas de arroz submetidas a estresse por frio. Apesar de o trabalho ainda
no ter sido publicado, os responsveis pelo depsito da sequncia (Morsy
399
Figura 12.9 Resultado do alinhamento dos Contigs 1 e 2, demonstrando a homologia entre

os mesmos. As pores 5 e 3 apresentam a mesma sequncia de nucleotdeos.
et al., University of Arkansas) relatam que a sequncia semelhante a uma

quitinase da classe III presente em Sphenostylis stenocarpa. A quitinase est
relacionada resistncia de plantas a pragas e algumas doenas, uma vez que
degrada o exoesqueleto de insetos e a quitina produzida por alguns fungos.
Outra sequncia que tambm apresentou alta similaridade com as deste
estudo (e-27) est envolvida com a resposta de plantas de nabo injria
mecnica. Uma anlise com a ferramenta Genevestigator indicou que esse
fragmento de 228 pb tambm seria induzido por patgenos e insetos em um
fragmento homlogo de Arabidopsis. De acordo com os autores da pesquisa
(Sarosh; Meijer, 2007), a sequncia que corresponde desse estudo apresentou baixa homologia com outras presentes em bancos de dados.
No trabalho de Sarosh e Meijer (2007), de modo geral os genes de resposta a patgenos foram elicitados em perodos maiores aps a injria mecnica
ou infestao da traa. E diversos genes envolvidos em vias de resistncia
a doenas mostraram ser induzidos tambm em Arabidopsis submetida a
ferimentos (Cheong et al., 2002). O aumento na expresso de possveis me-
400
canismos de resistncia durante a infestao do inseto e injria mecnica

indica a ampla existncia de cross-talk em diversas formas de estresses biticos em que aes antagonistas aos cidos jasmnico e saliclico foram descritas. Alm disso, genes induzidos pela infestao de nematoides e afdeos foram identificados entre os ortlogos induzidos por estresses biticos.
Os resultados do confronto do fragmento encontrado nesse estudo com
o banco de dados do NCBI por meio da ferramenta Blastn indicam que
a sequncia pode estar relacionada com algum mecanismo de defesa. No
entanto, foi encontrada alta homologia com fragmentos que foram identificados recentemente e que apresentariam diferentes funes. Ser necessrio
comparar as sequncias genmicas de arroz, milho e sorgo e verificar a existncia de isoformas/splincing alternativo destas sequncias.
Com os resultados obtidos at o momento no possvel afirmar que a
sequncia identificada est realmente correlacionada com a maior resistncia da variedade SP83-5073 cigarrinha M. fimbriolata. Estudos adicionais
so necessrios para confirmar ou no essa associao.
Alm disso, estudos morfolgicos so necessrios para apontar se a antibiose o nico fator de resistncia na variedade SP83-5073, uma vez que pode
haver uma combinao com a morfologia das razes que refora a resistncia.
Os resultados obtidos confirmam a suscetibilidade das variedades
SP80-1816 e RB72454 M. fimbriolata, e fornecem fortes indcios de que
a variedade SP83-5073 resistente praga por meio de um mecanismo de
antibiose. A banda diferencialmente expressa na variedade SP83-5073,
identificada por cDNA-AFLP, pode estar relacionada com a defesa cigarrinha-das-razes. A clonagem e o sequenciamento do DNA presente nesta
banda revelou a presena de duas sequncias, possivelmente isoformas, que
possuem homologia com sequncia de cDNAs de outras plantas e que parecem estar relacionadas com mecanismos de defesa contra estresse bitico
e abitico e com associao simbitica.
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13
Produo, caracterizao e utilizao
do biodiesel de tucum originrio
da regio amaznica
Wanderley J. Melo, Afonso Lopes, Marcelo F. de Oliveira,
Adelir A. Saczk, Zuy M. Magriotis, Marco A. Modenes Jr,
Hideko Yamanaka, Maria V. B. Zanoni, Nelson R. Stradiotto1
Introduo
No incio da dcada de 1970, ocorreu a crise do petrleo, provocada por
fatores polticos e econmicos. Consequentemente, muitos pases importadores desse produto foram afetados, inclusive o Brasil. Desde ento, foi
necessria a busca por novas fontes alternativas de energia, motivando a
classe cientfica a desenvolver tecnologias as quais permitiriam substituir
gradualmente o combustvel fssil por fontes energticas renovveis.
No Brasil, o biodiesel foi lanado aps a realizao de inmeros testes de
aplicabilidade, realizados entre 1979 e 1980 pela Nutec Fundao Ncleo
de Tecnologia Industrial, pelo Centro de Tecnologia da Universidade Federal do Cear, pelo Departamento de Transporte da Coelce (Companhia de
Eletricidade do Cear) e pelo CTA (Centro Tcnico Aeroespacial do Ministrio da Aeronutica).
1 Os autores agradecem a colaborao prestada na produo deste trabalho pelos pesquisadores: Maristela T. Silva, Luis G. Vieira, Carolina S. Nascimento, Rean A. Zaninnetti,
Luma S. Torres, Thaisa M. Cantele (FCAV/Unesp); Andressa T. Vieira (FFCLRP/USP);
Sara S. Vieira, Nadiene A. V. Santos, Robson A. Pereira, Guilherme T. A. Fassio (DQI/
UFLA); Marcelo B. Garcia, Diana M. Serafim, Fabiana M. M. Paschoal, Paula G. Fenga (IQ/Unesp); Leomar P. Lima (Ifet/Triangulo Mineiro); Antonio C. F. Batista, Hugo S.
Rodrigues (Facip/UFU); Gilberto H. A. Koike.
410
Atualmente, estas pesquisas tomaram uma proporo ainda maior por

causa de razes econmicas, sociais e ambientais. Do ponto de vista econmico, sua justificativa est ligada diretamente substituio das importaes do diesel mineral, o que acarretar maior sustentabilidade econmica
para o pas. A questo ambiental fica atendida com a significativa reduo
na emisso dos gases causadores do efeito estufa, enquadrando, por exemplo, o biodiesel nos acordos do Protocolo de Kyoto e nas diretrizes dos Mecanismos de Desenvolvimento Limpo (MDL), alm da possibilidade de
venda de cotas de carbono (Holanda, 2004). Na parte social, a utilizao das
fontes energticas renovveis aumentar a gerao de empregos no campo, principalmente nas regies pouco privilegiadas, alm de proporcionar
maior oferta de insumos para a indstria de alimentos.
Frente aos atuais acontecimentos polticos, marcados pela adoo das
fontes renovveis de energia, o biodiesel tem sido um dos principais combustveis estudados, pois a diversidade de biomassa existente para sua produo muito grande.
Inicialmente, a biomassa tem atrado muita ateno nestas ltimas dcadas por se tratar de uma fonte de energia renovvel e em funo de seu uso
sustentado no provocar danos ao meio ambiente. A mesma compreende
todo material orgnico, no fssil, que tenha contedo de energia qumica
em seu interior, o que inclui todas as vegetaes aquticas ou terrestres, lixo
orgnico, resduo de agricultura e outros tipos de restos industriais (Omachi et al., 2004). Entre as fontes de biomassa consideradas adequadas e disponveis para a consolidao de programas de energia renovvel, os leos
vegetais tm tido prioridade por apresentarem grande biodiversidade em
todo mundo (Demirbas, 2003).
Os leos so substncias de origem vegetal, animal ou microbiana, insolveis em gua e solveis em solventes orgnicos apolares. Compostos,
principalmente, por triglicerdeos. Os cidos graxos presentes nos leos so
constitudos, geralmente, por cidos carboxlicos, contendo de 4 a 30 tomos de carbono em sua cadeia, podendo ser saturada ou insaturada.
Os cidos graxos saturados organizam-se com facilidade em cristais, o
que resulta no aumento das foras de Van der Waals e, consequentemente,
pontos de fuso relativamente elevados, j que o ponto de fuso aumenta
em funo do aumento do peso molecular. Para os cidos graxos insaturados, a formao de ismeros cis em sua estrutura causa interferncia na or-
PRODUO, CARACTERIZAO E UTILIZAO DO BIODIESEL DE TUCUM
411
ganizao cristalina de seu composto, resultando na reduo da atrao de

Van der Waals entre as molculas. Desta forma, cidos graxos insaturados
possuem pontos de fuso mais baixos.
Entre as inmeras espcies oleaginosas de que se tem conhecimento na
literatura, as mais conhecidas so: soja, canola, colza, mamona, girassol,
amendoim, algodo, palma, babau, entre muitos outros vegetais em forma de sementes, amndoas ou polpas. Muitas outras oleaginosas podem
ser encontradas na regio amaznica, a qual apresenta grande biodiversidade, j que esta ocupa mais de 50% do territrio brasileiro (Pereira-Junior
et al., 2008).
O fato de a Amaznia ser uma regio muito extensa e pouco desenvolvida leva a muitos problemas, um deles a falta de acesso energia eltrica,
especialmente nas comunidades isoladas. Um exemplo a ser citado, que,
em 2005, apenas 32 das mais de 4.600 comunidades isoladas (0,7%) eram
supridas por energia eltrica por meio de uma concessionria responsvel
(Correia, 2005).
A falta de acesso energia eltrica est diretamente relacionada com
baixo ndice de desenvolvimento social das populaes residentes nas comunidades isoladas localizadas na Amaznia, pois, segundo o Ministrio
de Minas e Energia (2003), a falta do atendimento em energia eltrica no
Brasil, em especial na Amaznia, uma das causas do aumento do nvel de
desigualdade social e regional do pas.
A principal dificuldade para estender o acesso energia eltrica est ligada ao tamanho do territrio, fato esse que impede a extenso das redes de
eletrificao, como ocorre no restante do pas.
A alternativa atualmente empregada para viabilizar a gerao de energia
eltrica nessas comunidades isoladas foi a instalao de pequenos sistemas
geradores eltricos a diesel. Contudo, sob o ponto de vista econmico, esta
soluo no favorvel por causa dos custos de transporte do combustvel
(Correia, 2005).
Assim, o emprego de recursos naturais de forma manejada na gerao
local de energia eltrica vem sendo considerado uma das alternativas mais
promissoras, em especial o biodiesel produzido a partir de leos vegetais
extrados de espcies oleaginosas nativas.
Os leos vegetais (triacilglicerdeos) podem ser convertidos em biodiesel
a partir de reaes de transesterificao, conforme a Figura 13.1, com um
412
lcool de cadeia curta como, por exemplo, metanol ou etanol, na presena

de um catalisador, resultando como produto final o biodiesel (mistura de
steres) e o subproduto glicerina (Schuchardt et al., 1998)
Figura 13.1 Reao de transesterificao de triglicerdeos para produo de biodiesel.

Fonte: Lbo et al., 2009
Nessa reao, so necessrios trs mols de lcool para cada mol de triglicerdeo. Na prtica, sempre utilizado um excesso de lcool, de modo a aumentar o rendimento em steres (deslocar a reao para lado dos produtos)
e permitir a separao do glicerol formado.
Sendo assim, o biodiesel pode ser uma energia alternativa e renovvel,
em especial na regio amaznica, em funo da grande biodiversidade de
espcies oleaginosas, alm de gerar um desenvolvimento socioeconmico
para as comunidades (Quadrelli; Peterson, 2007).
Diante de toda essa biodiversidade de oleaginosas promissoras para
a produo do biodiesel no Brasil, o tucum (Astrocaryum aculeatum) foi a
escolhida para este estudo, que tem por finalidade produzir biodiesel a partir de seu fruto.
O tucum uma espcie de palmeira da famlia Arecaceae, tpica da Floresta Amaznica, Figura 13.2, com at 2,5 metros de altura e caule com
espinhos nos entrens, medindo 25 cm de dimetro, nmero de pinas est
entre 100 e 130 por cacho, regularmente agrupadas e dispostas em diferentes planos. Frutifica o ano todo, porm o pico da produo ocorre nos meses
de janeiro a junho (ibidem).
413
Figura 13.2 Palmeira de tucum da famlia Arecaceae (Astrocaryum aculeatum).
O fruto do tucum composto de um caroo lenhoso quase preto, que

contm uma amndoa de massa branca oleaginosa, bastante dura, recoberta
de uma pelcula de cor parda. A polpa apresenta cerca de 47,50% de leo,
enquanto a amndoa apresenta de 32,50% a 43,50% de leo (Pesce, 2009).
Segundo Lorenzi et al. (2004), o tucumanzeiro uma espcie amplamente utilizada pela populao local, desde as folhas at os frutos, pois so
ricos em vitamina A, cido oleico (insaturado) e palmtico (saturado).
Embora ainda no existam projetos de desenvolvimento para o tucum,
a cadeia de produo est comeando a ser estudada para orientar trabalhos
futuros, pois a planta produtiva (Tabela 13.1) e as sementes apresentam
grande percentual oleaginoso, tornando-a uma nova fonte renovvel de
energia para produo do biodiesel.
Tabela 13.1 Produtividade de oleaginosas
Espcie
Produtividade (kg de fruto/ ha)
Andiroba
180 200
Castanha
200 400
Tucum
500
Cacau
500 1.500
Dend
3.500
*Fonte: Ministrio de Minas e Energia, 2008
414
Coleta dos frutos do tucum e extrao do leo

Neste item, so descritos os processos de amostragem e extrao do leo
de tucum para avaliao das caractersticas fsicas e qumicas e as relaes
com a fertilidade do solo.
Com o objetivo de avaliar o potencial do tucum para produo de leo
para sntese de biodiesel, considerando a existncia de pelo menos duas variedades da espcie na Amaznia (Astrocaryum aculeatum e Astocaryum vulgare, conhecidos como tucum-do-amazonas e tucum-do-par, respectivamente), foi feita uma avaliao exploratria de sua disperso no estado do
Acre a relao entre a fertilidade do solo e a produtividade.
Primeiramente, a rea foi georreferenciada por meio de um receptor de
GPS. No ms de julho quando os frutos de tucum estavam verdes, foram
identificadas plantas ao longo das BR-364 e BR-317 numa faixa de 100 metros direita ou esquerda destas rodovias, at aproximadamente 150 km
de Rio Branco (AC). Em cada uma das 22 reas selecionadas, foi feita uma
amostragem de solo para avaliao do nvel de fertilidade.
A colheita dos frutos foi realizada entre o final do ms de outubro e o
comeo do ms de dezembro, quando metade dos frutos de pelo menos um
dos cachos estava maduro. Nessas reas, foram coletados todos os cachos
de tucum, que foram pesados (balana com capacidade 50 kg x 500 g).
Destes, foram selecionados 30 frutos maduros e as amostras que continham
frutos totalmente maduros foram imediatamente processadas, enquanto as
contendo frutos no maduros foram acondicionados em cestos plsticos,
que foram mantidos em temperatura ambiente (35C 3C) e sombra
para complementar a maturao (Figura 13.3).
Figura 13.3 Frutos de tucum. A e B so frutos em fase de maturao; C o fruto totalmente maduro.
415
Os frutos foram despolpados manualmente e separados em: polpa (epicarpo + mesocarpo), castanha ou caroo (endocarpo) e amndoas (sementes
retiradas do interior do endocarpo), cujas massas foram determinadas. Os
caroos foram descartados e as amndoas foram secas em estufa com circulao forada de ar e mantida a 65C, modas em moinho de faca, com
peneira de malha de 2 mm, e usadas para extrao da frao lipdica por
solvente.
Metade das amostras de polpa foi processada conforme metodologia
descrita para as amndoas, e a outra metade foi extrada por prensagem
mecnica, que indicada para materiais com teor de leo maior que 25%
(Parente, 2006). Para materiais com baixo teor de leo (< 25%), indicada a
extrao qumica por solventes. A prensa contnua utilizada foi uma miniprensa Ercitec Modelo MPE-40.
As amostras de polpa foram colocadas em estufa a 38C por 48 horas
para que atingissem teor de umidade entre 5% e 8%, e ento foram aquecidas em banho-maria a 70C e transferidas para o alimentador mecnico da
prensa de forma contnua e constante. Os produtos da prensagem foram o
leo bruto e a torta.
A determinao do teor de lipdeo total nas amostras de amndoas, polpa e torta foi realizada no leo obtido por extrao com hexano. As amostras
foram previamente trituradas. Cerca de 5 g, secos a 65C, foram acondicionados em cartucho de celulose, que foi coberto com algodo desengordurado e colocado no extrator de Soxhlet, ao qual se adicionou hexano de modo
a cobrir o cartucho com 2 vezes seu volume. Aps um perodo de 6 horas de
extrao, o balo com a soluo leo hexano, previamente seco e pesado,
foi colocado em estufa mantida a 105C at obteno de massa constante.
Por diferena de massas, calculou-se a porcentagem de leo extrada.
A porcentagem de amndoas nos frutos de tucum variou de 20,6% a
27,1% e foi afetada pelo local de amostragem (Grfico 13.1). O teor de umidade das amndoas variou de 38,0% a 45,0%, enquanto o teor de lipdeos
totais variou de 21,0% a 22,8%, com um valor mdio de 22,1%. Os resultados obtidos para umidade e lipdeos nas amndoas de tucum tm sido
reportados por diferentes autores (Castro et al., 2006; Figliuolo et al., 2007;
Nascimento et al., 2007; Pantoja et al., 2006) sendo os valores bastante variados, o que pode ser causado pela diversidade gentica das plantas e pelo
estgio de maturao dos frutos no momento da amostragem.
416
Grfico 13.1 Porcentagem de amndoas nos frutos de tucum (AF), teor de umidade (U)
e de lipdeos totais (LT).
O rendimento aparente da prensa oscilou na faixa de 70% a 73%, variao esta que pode ter ocorrido por causa de os frutos das diferentes reas
no terem sido colhidos no mesmo estgio de maturao.
A porcentagem de polpa no fruto (RP) variou de 38,6% a 59,0%, valores
estes prximos aos encontrados por Ferreira et al. (2005) e Nascimento et
al. (2007), que foram de 54,4% e 47,0%, respectivamente (Grfico 13.2). O
teor de umidade na polpa variou de 43,4% a 47,4%, valores superiores aos
obtidos por Figliuolo et al. (2007), que foi de 38,4%. O teor de lipdeos na
polpa de tucum variou de 30,6% a 35,0%, acima do obtido por Pantoja et
al. (2006), que foi de 6,4%.
Grfico 13.2 Porcentagem de polpa (RP), teor de umidade (U), lipdeos totais (LT) e rendimento de extrao do leo (RE) da polpa de sementes de tucum.
417
Por meio da anlise multivariada, a variabilidade retida nos componentes principais CP1 e CP2 explicou 60,3% da variabilidade original, e CP1 e
CP2 retiveram 37,7% e 22,6%, respectivamente (Grfico 13.3). A variabilidade retida nos componentes principais CP1 e CP3 explicou 52,1% da variabilidade original, e CP1 e CP3 retiveram 37,7% e 14,4%, respectivamente.
Grfico 13.3 Grfico bidimensional dos componentes principais; (A) CP1-CP2 e (B)
CP1-CP3.
418
Em CP1, as variveis com maior poder discriminatrio foram: H+Al

(-0,93), Al (-0,87), V (0,85), pH (0,81) e T (-0,67), e em CP2, fruto (0,79),
T (-0,70) e P (-0,63). Em CP3, as variveis com maior poder discriminatrio foram lipdeos na polpa (Lip_pol = -0,80), polpa por fruto (Pol_fruto = -0,67).
O comportamento das plantas amostradas variou em funo do local
de amostragem, da fertilidade do solo e, provavelmente, pelo estgio de
maturao dos frutos. Algumas plantas apresentaram maior quantidade
de amndoas nos frutos, porm tenderam a apresentar menor produtividade, enquanto outras apresentaram boa produtividade em solo com elevada
capacidade de troca catinica, elevada saturao por Al e elevada acidez.
Houve plantas que apresentaram boa produtividade, mesmo em solos cidos e de baixa fertilidade, comprovando que o tucumanzeiro cresce em solo
com baixa fertilidade. Algumas plantas apresentaram maior produtividade
de leo por possurem maior quantidade de polpa nos frutos ou por apresentarem maior quantidade de lipdeos na polpa. Os resultados deixaram
claro a variabilidade na produo de lipdeos pelas plantas de tucum.
Os locais de amostragem influenciaram na quantidade de lipdeos totais
na amndoa e na polpa do tucum, assim como no rendimento aparente
da prensa. O tucum possui uma boa produo de leo, apresentando um
elevado potencial para produo de biodiesel.
Caracterizao fsico-qumica do leo de tucum

Para a produo do biodiesel, foi necessria a avaliao das caractersticas fsico-qumicas do leo de tucum, matria-prima do processo, pois a
reao de transesterificao poderia ser influenciada pelas propriedades do
leo, sendo algumas indesejveis para o processo de obteno do biodiesel,
podendo gerar produto de m qualidade.
Os resultados obtidos referentes s anlises fsico-qumicas do leo de
tucum so mostrados na Tabela 13.2. Todas as anlises foram realizadas de
acordo com os procedimentos experimentais descritos na A.O.A.C. (1984).
A anlise do ndice de acidez, determinada experimentalmente, mostra
que a mdia das anlises para o ndice de acidez do leo de tucum foi 6,52
0,27 mg KOH g-1. A alta acidez encontrada para o leo de tucum pode
419
Tabela 13.2 Atributos fsico-qumicos do leo de Tucum

ndices
Densidade
Unidades
-1
mg KOH g
-1
g I 100 g
2
-1
meq 1000 g
-1
mg KOH g
-3
g cm
0,9041 0,0046
Viscosidade
rpm
67,70
Acidez
Iodo
Perxido
Saponificao
Resultados
6,52 0,27
113,53 3,60
30,97 1,73
213,0 11,00
ser atribuda a seu estado de conservao, que est relacionado com a natureza e qualidade da matria-prima, a escolha de sementes de baixa qualidade, aumento da perda da neutralizao, armazenamento imprprio e/ou
processamento insatisfatrio, que acompanhada da formao de cidos
graxos livres.
O leo de tucum analisado apresentava boa aparncia, mas com partculas em suspenso. Tendo em vista que o referido leo possui um ndice de
acidez alto, segundo Santos et al. (2001) um leo com acidez inferior a 1%
classificado comercialmente como leo industrial do tipo 1. Logo, o leo de
tucum analisado no pode ser classificado nesta categoria.
A qualidade das sementes utilizadas foi um fator preponderante para
o elevado ndice de acidez apresentado pelo leo de tucum, visto que a
elevada acidez pode dificultar processos de transesterificao em virtude
da formao de sabo, pois a acidez decorrente da hidrlise parcial dos
glicerdeos, razo pela qual no uma constante ou caracterstica, mas sim
uma varivel intimamente ligada natureza e qualidade do leo.
Outro atributo analisado foi o ndice de iodo presente na amostra, o qual
apresentou um valor de 113,53 3,60 g I2 100 g-1. O nmero de gramas de
iodo absorvido por 100 g de leo indica o grau de insaturao das gorduras
ou a medida do grau de insaturao dos cidos graxos presentes. Sob determinadas condies, o iodo introduzido nas duplas ligaes dos cidos graxos insaturados e triglicerdeos. Assim, quanto maior a insaturao de um
cido graxo, maior ser sua capacidade de absoro de iodo e, consequentemente, maior tambm ser o ndice. O leo de tucum apresenta muitas
insaturaes por causa da grande quantidade de cidos graxos insaturados,
principalmente oleico e linoleico. Estes so facilmente oxidados em virtude
420
das duplas ligaes nas cadeias de carbono de sua estrutura qumica, resultando em maior capacidade para absoro do iodo.
O ndice de saponificao obtido para o tucum foi de 213,31 11,0
mg KOH g-1. De acordo com o padro britnico (Freire, 2001), o leo de
primeira qualidade deve apresentar ndice de saponificao entre 177 e
187 mg KOH g-1, mas esses valores so estabelecidos para leos refinados,
o que no o caso do leo analisado neste trabalho.
O ndice de saponificao estabelece o grau de deteriorao e estabilidade, e est relacionado com o peso molecular dos cidos graxos. Quanto
menor o peso molecular maior ser o ndice de saponificao. Este ndice
tambm pode garantir a qualidade do leo, indicando possveis adulteraes pela adio de outros leos, quando este difere muito do padro de
referncia.
Pelos resultados obtidos, o leo de tucum apresenta grande quantidade
de cidos graxos insaturados em sua estrutura, e estes so facilmente oxidados em virtude das duplas ligaes nas cadeias de carbono de sua estrutura.
Segundo Moretto e Fett (1998), este ndice inversamente proporcional
ao peso molecular mdio dos cidos graxos que compem os triglicerdeos.
Desta forma, o leo de tucum deve possuir alta proporo de cidos graxos
de baixo peso molecular presentes em sua cadeia.
O resultado obtido para o ndice de perxido foi de 30,97 1,73 meq
-3 -1
10 g . Este resultado indica que o leo de tucum encontra-se parcialmente oxidado, pois segundo Malacrida (2003) este ndice no deve ultrapassar
o valor de 10 meq 10-3 g-1.
Isso pode ter ocorrido em funo de um fenmeno qumico bastante
complexo, envolvendo reaes radicalares capazes de autopropagao, e
que dependem do tipo de ao cataltica (temperatura, ons metlicos, radicais livres, pH). No decurso da sequncia reacional, classicamente dividida em iniciao, propagao e terminao, possvel distinguir trs etapas de evoluo oxidativa: a) Desaparecimento dos substratos de oxidao
(oxignio, lipdio insaturado); b) Aparecimento dos produtos primrios de
oxidao (perxidos e hidroperxidos), cuja estrutura depende da natureza
dos cidos graxos presentes; c) Aparecimento dos produtos secundrios de
oxidao, obtidos por ciso e rearranjo dos perxidos (epxidos, compostos
volteis e no volteis), cuja natureza e proporo dependem de diversos
fatores (Silva et al., 1999).
421
Pode ocorrer tambm a oxidao enzimtica por ao da lipoxigenase. Esta enzima atua sobre os cidos graxos poli-insaturados (cidos linoleico, linolnico e seus steres), catalisando a adio de oxignio cadeia
hidrocarbonada poli-insaturada. O resultado a formao de perxidos e
hidroperxidos com duplas ligaes conjugadas, os quais podem envolver-se em diferentes reaes degradativas, semelhantes aos processos de auto-oxidao, originando diversos produtos. O processo de catlise enzimtica
decorre com maior especificidade, em termos de substrato e de produtos
finais, do que o processo de auto-oxidao (ibidem). Um aspecto importante da atuao da lipoxigenase o que se relaciona com sua capacidade para
co-oxidar substratos (carotenoides, tocoferis, clorofila, protenas etc.),
sendo responsvel pela iniciao de novos processos oxidativos.
Assim, os cidos graxos do leo de tucum podem favorecer o desenvolvimento da rancidez oxidativa por causa da grande quantidade de cidos
graxos insaturados, principalmente oleico e linoleico. Estes so facilmente
oxidados em virtude das duplas ligaes nas cadeias de carbono de sua estrutura qumica. O processo de oxidao a principal causa da perda da
qualidade do produto e da reao, afetando seu sabor, aroma, cor e textura
alm de resultar na formao de compostos txicos e um alto decrscimo
em seu valor nutritivo.
A densidade do leo de tucum, realizada experimentalmente, foi de
0,9041 0,0046 g cm-3. Esse ndice indica que o leo de tucum apresenta
alto grau de insaturao, pois para os triglicerdeos, quanto menor for seu
peso molecular mais alto ser seu grau de insaturao. Portanto, o leo de
tucum deve possuir muitas insaturaes em sua molcula e possuir cidos
com baixo peso molecular.
As medidas de viscosidade do leo de tucum para as frequncias de 30
rpm e 40 rpm encontradas foram de 67,4 cp e 66,4 cp, respectivamente na
temperatura de 24,6C. Segundo Moretto e Fett (1998), a viscosidade aumenta com o comprimento das cadeias dos cidos graxos dos triglicerdeos
e diminui quando aumenta a insaturao.
A viscosidade dos leos relativamente alta, superior da gua, em
funo das atraes intermoleculares das cadeias dos cidos graxos, que
constituem os triglicerdeos. Em geral, a viscosidade dos leos decresce ligeiramente com o aumento da insaturao. Logo, o fato de o leo de tucum
apresentar baixa viscosidade pode ser decorrncia de este possuir muitas
422
insaturaes em virtude das duplas ligaes nas cadeias de carbono de sua

estrutura.
Assim, para um controle efetivo da extrao do leo importante conhecer todas as etapas do processamento, bem como as possveis alteraes que
podem ocorrer durante o processo, j que o leo, assim como todo produto de origem vegetal, passvel de modificaes nas caractersticas fsico-qumicas. O conhecimento das anlises a serem realizadas e os parmetros
usados para ajustar o processo de extrao de leo so fundamentais para
um melhor acompanhamento de todo o processo, desde a matria-prima,
at produto final.
Portanto, as anlises fsico-qumicas mostraram que o leo de tucum
apresenta caractersticas que comprovam que este possui grande potencial
energtico para a produo do biodiesel, quando comparado com outros
leos vegetais. A substituio parcial do leo diesel pelo biodiesel de tucum pode apresentar grande viabilidade socioeconmica tanto na produo,
quanto na utilizao deste leo transesterificado em diferentes segmentos
da sociedade.
Os cidos graxos contidos no leo de tucum foram determinados na
forma de seus respectivos steres metlicos, utilizando a tcnica de cromatografia gasosa com deteco de massas.
Os steres metlicos foram preparados usando o mtodo descrito no International Olive Oil Council (2001). Esse mtodo descreve a obteno dos
steres metlicos a partir da transesterificao a frio do leo de tucum com
uma soluo metanlica na presena hidrxido de potssio. As amostras
de leo foram usadas sem qualquer tratamento, a no ser a dissoluo em
hexano. Os reagentes utilizados para a extrao do leo foram hexano com
grau cromatogrfico e hidrxido de potssio 0,2 mol L-1.
Em um tubo de ensaio, pesou-se aproximadamente, 0,1 g do leo. Adicionaram-se 2,0 mL de hexano e 0,2 mL da soluo de KOH 0,2 mol L-1
em metanol. A mistura foi agitada vigorosamente, seguida por repouso e
separao. Aps separao, uma alquota de 1,0 mL da fase hexnica foi
removida e dissolvida em 1,0 mL de hexano. Aps este tratamento, a amostra encontra-se apta para anlise por cromatografia a gs, sendo que essa
determinao tem de ser feita dentro de um perodo mximo de 15 horas.
A separao dos steres dos cidos graxos foi feita em um cromatgrafo
a gs da Varian 3800 com uma coluna capilar da Supelco SPB-5 (60 m x 0,25
423
mm dimetro interno x 0,2 m filme) e injetor automtico Varian 8200. A

temperatura da coluna foi programada em 165C por 10 minutos, ento
aumentada para 200C em 2C por minuto com um perodo de isoterma
final de 13 min. Hlio foi usado como gs de arraste com fluxo constante
de 1,2 mL min-1. A temperatura do injetor foi fixada em 245C, com uma
razo de 1:50. Utilizou-se modo de ionizao positivo com energia de 70
eV em full scan e intervalo de aquisio de massas de 35 a 650 dltons. As
anlises dos dados foram feitas usando Star Workstation Chromatography
software verso 4.51.
A identificao dos steres dos cidos graxos foi feita pela comparao
dos espectros obtidos com aqueles contidos no banco de dados do equipamento, NIST 98, e foram considerados apenas aqueles que possuam um
ndice de similaridade maior ou igual a 95%. Os erros relativos foram menores do que 1% em todos os nveis de concentrao (Haiyan et al., 2007;
Torres; Maestri, 2006).
As amostras dos frutos de tucum foram coletadas como descrito anteriormente e destes foram selecionados, ao acaso, trinta frutos em estgio de
amadurecimento e/ou maduros. Os trinta frutos foram separados em oito
grupos, com o intuito de verificar se a provvel diferena dos elementos
qumicos presentes no solo de cada rea na qual os frutos do tucum foram coletados iria resultar em diferentes cidos graxos e/ou quantidades
de cidos graxos presentes no leo do fruto. Os oito grupos foram nomeados A1A2A9; A6A8A10; A12A17; A19A11A8; A19A21A23A25; A26A29A30; A28A27;
A31,A32A34A35.
As oito amostras dos leos de tucum foram submetidas, individualmente, ao processo de extrao para posterior anlise dos cidos graxos
contidos em cada leo, por cromatografia a gs com detector de massas.
A extrao dos cidos graxos foi realizada seguindo procedimento descrito
pelo International Olive Oil Council (2001).
A Figura 13.4 mostra o cromatograma obtido aps 40 minutos referente
amostra A12A17, uma das oito amostras do leo de tucum. Observa-se a
presena de onze cidos graxos de acordo com o tempo de reteno de cada
um deles. Ainda nessa figura, possvel observar que tambm existem trs
picos prioritrios nos tempos de reteno de 16,414 minutos, 24,215 minutos e 25,338 minutos. A identificao de cada pico, de acordo com seu
respectivo tempo de reteno, pode ser visualizada na Tabela 13.3.
424
Figura 13.4 Cromatograma da amostra A12A17 utilizando uma coluna capilar da Supelco
SPB-5 e um detector de espectrmetro de massas.
Tabela 13.3 Identificao dos steres correspondentes aos cidos graxos presentes no leo de Tucum
Tempo de reteno
steres correspondentes aos cidos graxos
7,544
ster metlico do cido hexadecadienoico
8,392
ster metlico do cido nonadecanoico
15,252
ster metlico do cido-(Z)-hexadec-7-enoico
16,428
ster metlico do cido hexadecanoico
20,889
ster metlico-15-metil do cido hexadecanoico
23,787
ster metlico do cido-octadeca-8,11-dienlico
24,296
ster metlico do cido-octadec-8-enoico
25,338
ster metlico do cido 14-metil-heptadecanoico
26,873
ster metlico do cido octadeca-9,12,15-trienoico
33,925
ster metlico do cido eicos-11-enoico
35,849
ster metlico do cido eicosenoico
O Grfico 13.4 mostra a rea do pico para as oito amostras dos leos
de tucum, bem como os correspondentes steres metlicos, determinados
atravs do tempo de reteno dos cromatogramas e correspondentes espectros de massas. Nesse grfico, possvel observar que o leo do tucum possui trs steres predominantes, nas oito amostras estudadas, o ster metlico
425
do cido hexadecanoico, o ster metlico do cido-octadec-8-enoico e o ster metlico do cido 14-metil-heptadecanoico. Os demais steres metlicos
presentes nas oito amostras estudadas aparecem em quantidades menores.
Grfico 13.4 Grfico da rea do pico para as oito amostras dos leos de Tucum.
Efetuando-se o clculo da correlao das oito amostras, utilizando como

variveis os tempos de reteno e as reas de cada um dos steres metlicos,
o Software Statistica e, de acordo com os resultados, concluiu-se que as oito
amostras so estatisticamente idnticas, pois possuem um grau de correlao maior que 0,85 numa escala de 0 a 1.
426
Realizou-se, tambm, anlise hierrquica por cluster (HCA), a qual

estabeleceu quais as localidades possuam maior similaridade, e de acordo com a Figura 13.5, nota-se que, apesar da grande correlao existente entre os locais de coleta pela anlise de HCA, foi possvel realizar uma
diferenciao mais sensvel das amostras e percebe-se a formao de dois
grupos distintos, em vermelho e amarelo, sendo notrio que as amostras em
amarelo diferenciaram-se principalmente pela presena de maiores concentraes do ster metlico do cido 14-metil-heptadecanoico, o que pode ser
evidenciado ao realizar a anlise do Grfico 13.4. Porm, tal diferena no
contribui significativamente para discriminar as amostras, portanto as oito
amostras so consideradas similares.
Figura 13.5 Correlao para as oito amostras dos leos de Tucum coletadas em diferentes
regies.
A anlise dos cromatogramas e de seus respectivos espectros de massas

obtidos para as oito amostras estudadas mostraram que, independente do
ponto de coleta, os leos obtidos a partir dos frutos do tucum apresentaram similaridade com relao aos quimiotipos.
427
Produo de biodiesel metlico e etlico

do leo de tucum
Neste item, ser descrita a transesterificao do leo de tucum pela rota
etlica e metlica, utilizando-se como catalisador KOH, com o objetivo de
desenvolver um meio simples para a produo do biodiesel.
O leo de tucum foi obtido pela prensagem do fruto inteiro (polpa e
amndoa) em uma prensa mecnica convencional, sendo filtrado atravs
de um tubo de vidro de 1 cm de dimetro, preenchido com algodo em sua
extremidade, para atuar como filtro. As formas metxido de potssio e etxido de potssio foram preparadas utilizando hidrxido de potssio p.a.,
bem como metanol e etanol p.a., da Sinth, respectivamente, seguindo um
processo experimental semelhante descrito na literatura (Lima et al., 2008).
A forma de metxido foi obtida aps a adio de 9,5 g de KOH em 120 ml
de metanol sob agitao at a dissoluo completa (reao exotrmica). A
forma de etxido tambm foi obtida aps a adio de 9,5 g de KOH em 150
ml de etanol sob agitao at a completa dissoluo.
Cada alquota da mistura do leo com o respectivo alcxido (forma metlica e etlica) foi mantida sob agitao a 40C por 40 minutos. O processo
de transesterificao foi monitorado por cromatografia em camada delgada: o desenvolvimento da separao em hexano/acetato de etila (95% / 5%)
provoca diminuio da banda do leo e aumento das faixas de biodiesel com
o passar do tempo.
A separao ocorre espontaneamente, aps repouso em funil de vidro.
Depois da etapa de decantao, cada forma de biodiesel foi separada da frao contendo glicerina e lavada com soluo de HCl 0,1 mol L-1. A destilao simples a 100C foi realizada, a fim de remover a gua e o lcool a partir
de amostras de biodiesel.
As medidas de estabilidade oxidativa foram realizadas utilizando um
equipamento Rancimat 873 da Metrohm. O leo de tucum e as amostras
de biodiesel metlico e etlico foram submetidos a um fluxo de gs de ar 10
L h-1, sob um aquecimento contnuo at 110C 0,3C.
A anlise cromatogrfica das amostras de biodiesel, leo original e da
glicerina obtidos durante o processo de transesterificao foi realizada utilizando um cromatgrafo a gs HP, modelo CG 5890, srie II, equipado com
uma coluna HP1 (100 dimetilpolissiloxano) com 30 m de comprimento e
428
dimetro interno de 0,2 mm. A fase mvel consistiu de H2 e N2 (30 L min-1)

e ar (300 L min-1). O volume da injeo de 0,5 mL foi utilizado em todas as
medies. Foi utilizada temperatura do injetor de 200C, sendo a anlise
realizada usando uma rampa de temperatura de 80 a 200C. Os espectros
de massa dos principais picos cromatogrficos foram monitorados em um
espectrmetro de massas modelo HP 5988A, acoplado ao cromatgrafo.
As medies espectroscpicas (FT-IR) para todas as espcies estudadas
foram registradas em um espectrofotmetro de infravermelho Perkin Elmer, modelo 1430, na faixa espectral de trabalho 4500 - 450 cm-1.
A rota metlica foi mais eficiente para a produo de biodiesel (75,1%)
do que a rota etlica (66,7%). Ambos os resultados permitiram propor esta
metodologia como uma rota alternativa para a produo de biodiesel. Os
cidos lurico, mirstico, palmtico e oleico apresentam-se como os principais componentes do leo de tucum, no qual foram detectados em um
tempo de reteno que varia de 12 a 23 minutos, utilizando a tcnica de
CG MS. Os resultados apresentaram valores semelhantes aos relatados
na literatura (Oboh, 2009; Lima et al., 2008; Batista et al., 2011).
A produo de biodiesel tambm foi confirmada pela tcnica de FT-IR.
Neste caso, foi possvel verificar a localizao das bandas das carbonilas
dos leos em relao s do biodiesel, da substituio do glicerol pelo radical
metoxlico (Lima et al., 2008).
Os estudos do ndice de estabilidade oxidativa indicaram perda de estabilidade qumica para o biodiesel em relao ao leo original.
Enquanto foi possvel observar um tempo de estabilidade 6,13 horas
para as amostras de leo, apenas de 2,90 horas e de 2,80 horas foram observados para o biodiesel metlico e etlico, respectivamente. De acordo com
as leis brasileiras (EN 14112, 2003), os ndices obtidos para biodiesel neste
trabalho esto abaixo dos valores recomendados (6 horas a 110C). A forma de leo mais estvel, pois rica em carotenoides.
O tempo de armazenamento difere dos valores da estabilidade oxidativa
obtidos, uma vez que no foi produzida etapa de oxidao induzida ou acelerada s amostras, consistindo to somente no tempo de armazenamento a
20C. Neste caso, foi possvel observar um tempo de armazenamento de 35
dias para o leo de tucum, provavelmente por causa da presena de gua
na amostra.
429
Portanto, este trabalho mostrou que a metodologia executada foi bem-sucedida na produo de biodiesel metlico e etlico do leo de tucum,
utilizando KOH como reagente para a produo de alcxido. Apesar de ser
usado de vrias maneiras pelas comunidades locais da Amaznia, o leo de
tucum tambm pode ser convertido em sua forma de biodiesel, que consiste em uma rota interessante de produo para o biocombustvel e, portanto,
contribuindo para a explorao sustentvel dessa espcie. Os valores pertinentes aos ndices de estabilidade oxidativa e tempo de armazenamento
deste leo indicaram um bom precursor para a produo de biodiesel local.
Caracterizao fsico-qumica do biodiesel de tucum

As anlises do biodiesel de tucum produzido segundo item descrito
anteriormente foram realizadas de acordo com os procedimentos descritos
na A.O.A.C. (1984). Os valores das propriedades fsico-qumicas deste
biodiesel so mostrados na Tabela 13.4.
Tabela 13.4 Atributos fsico-qumicos do biodiesel de tucum
ndices
Acidez
Iodo
Unidades
Valores
mg KOH g
-1
g I2 100 g-1
1,41 0,04
98,3 2,47
Perxido
meq 1000 g
Saponificao
mg KOH g-1
208,6 0,12
Densidade
g cm-3
0,86 0,00064
Viscosidade
mm s
4,56 0,014
-1
-1
20,5 1,73
A anlise do ndice de acidez do biodiesel determinado experimentalmente foi de 1,41 0,04 mg KOH g-1. O elevado ndice de acidez pode estar relacionado com seu estado de conservao. O armazenamento imprprio e processamento insatisfatrio so causas da formao de cidos livres
com aumento na acidez do biocombustvel.
O biodiesel de tucum apresentou um ndice de iodo, cujo valor foi de
98,3 2,47 g I2 10-2 g-1. Esse comportamento pode ser atribudo s insaturaes na cadeia carbnica, resultado da presena de cidos graxos insatura-
430
dos, principalmente oleico e linoleico. Estes, em virtude das duplas ligaes

nas cadeias de carbono, so facilmente oxidados, assim sendo, maior a capacidade de absoro do iodo.
O ndice de saponificao foi de 208,6 0,12 mg KOH g-1. Pelo resultado obtido, o biodiesel de tucum pode apresentar insaturaes, pois o
grau de deteriorao e estabilidade do biodiesel pode ser afetado e este est
relacionado com o peso molecular dos cidos graxos, uma vez que quanto
menor o peso molecular, maior ser o ndice de saponificao. Dessa forma,
o biodiesel de tucum pode possuir alta proporo de cidos graxos de baixo peso molecular em sua cadeia.
O resultado obtido para o ndice de perxido foi de 20,5 1,73 meq 10-3 g-1,
o que indica que este pode apresentar-se oxidado. Isso pode ter ocorrido
em funo de reaes radicalares capazes de autopropagao, e que dependem do tipo de ao cataltica (temperatura, ons metlicos, radicais livres,
pH). No entanto, o biodiesel de tucum apresentou rancidez oxidativa em
funo das insaturaes em sua cadeia, principalmente cidos oleico e linoleico, que so facilmente oxidados.
A densidade do biodiesel de tucum foi de 0,86 0,00064 g cm-3. Esse
ndice indica que o biodiesel de tucum apresenta insaturaes, pois quanto
menor for seu peso molecular, mais alto ser seu grau de insaturao.
Os valores das medidas de viscosidade do biodiesel de tucum foram de
4,56 0,014 na temperatura de 24,6C. Como a viscosidade aumenta com
o comprimento das cadeias e com o aumento da insaturao, o biodiesel de
tucum apresentou baixa viscosidade por causa de insaturaes presentes
nas ligaes de carbono de sua estrutura.
A comparao dos valores obtidos para os atributos fsico-qumicos
adotados pela ANP, a EN e a ASTM no documento intitulado White Paper on Internationally Compatible Biofuel Standards para a padronizao
internacional da qualidade do biodiesel, permite concluir que o biodiesel de
tucum encontra-se, em geral, dentro das especificaes preconizadas por
estas agncias.
Os cidos graxos do biodiesel de tucum foram determinados na forma
de steres, utilizando a tcnica de cromatografia a gs com detector de ionizao de chama (GC-FID).
431
A separao dos steres dos cidos graxos foi feita em um cromatgrafo

a gs com detector de ionizao de chama da Shimadzu GC 17 A, com um
autoinjetor AOC 20i e coluna capilar da Restec Stabilwax (30 m de comprimento x 0,25 mm dimetro externo x 0,25 m dimetro interno). O nitrognio foi usado como gs de arraste com fluxo constante de 1 mL min-1 e
a proporo entre nitrognio, ar sinttico e hidrognio foi de 1:1:10. A temperatura do detector foi de 260C e a temperatura do injetor foi de 240C. A
razo de split foi de 1:100 e o volume de injeo foi de 1 L. A rampa de aquecimento da coluna teve incio na temperatura de 140C (5 min.) com rampa de
4C min-1 at 240C com isoterma a 240C por 10 min.
A identificao dos steres dos cidos graxos foi feita pela comparao
dos cromatogramas obtidos com o cromatograma do padro C4:C24 da Supelco Analytical.
A Figura 13.6 mostra o cromatograma obtido para o biodiesel de tucum, utilizando a tcnica GC-FID. A identificao dos steres dos cidos
graxos, que foi feita por comparao dos respectivos tempos de reteno e
a porcentagem de steres dos cidos graxos que esto presentes na amostra
podem ser visualizados na Tabela 13.5.
Figura 13.6 Cromatograma do biodiesel etlico de tucum, utilizando coluna da Restec

Stabilwax e detector de ionizao de chama.
432
Tabela 13.5
tucum
Porcentagem dos steres dos cidos graxos presentes no biodiesel etlico de
ster etlico do cido graxo correspondente

Butrico
Nmero de carbonos e
duplas ligaes
Tempo de
reteno (min.)
C4:0
0,08
1,646
*N.I.
18,34
17,478
*N.I.
0,27
17,729
Heptadecanoico
C17:0
0,26
19,693
Oleico
C18:1n:9c
51,01
22,376
Linoleico
C18:2n:6t
25,89
23,693
Cis 11 Eicosenoico
0,84
26,438
cis-11,14,17-eicosatrienoico
0,47
29,582
Arquidnico
1,33
30,648
C22:6n:3
1,50
36,479
Cis 4,7,10,13,16,19 - Docosahexaenoico

* No Identificado
Na Tabela 13.5, observa-se que o biodiesel composto de steres de cadeia longa, variando de C4 a C22, sendo que os steres etlicos dos cidos
oleico e linoleico representaram as maiores propores, 51,01%, 25,89%,
respectivamente. O biodiesel de tucum apresentou uma composio de
steres semelhante aos perfis apresentados em trabalhos descritos na literatura (Zaninetti, 2009; Bittencourt, 2009). As variaes percentuais nos teores das amostras podem ser atribudas a diferentes meios de sua obteno e
de efeitos sazonais e circadianos de diferentes regies.
A anlise cromatogrfica do biodiesel de tucum mostrou que o combustvel produzido desta palmcea apresenta-se rico em steres etlicos de
cadeia longa, podendo ser uma fonte energtica vivel.
Utilizao do biodiesel de tucum

em trator agrcola
Os ensaios de desempenho foram realizados utilizando-se um trator
marca Valtra, modelo BM 125I, 4 x 2 com trao auxiliar (TDA), potncia
de 91,9 kW (125 cv) no motor a 2.300 rpm (ISO 1585). Neste ensaio, o
433
trator mostrado na Figura 13.7 foi instrumentado com medidor de combustvel conforme descrito por Lopes (2006): clula de carga para medio
de fora na barra, radar para medir velocidade de deslocamento e sensor de
rotao de patinagem das rodas.
Figura 13.7 Vista geral do trator de ensaio com instrumentao completa

Fonte: Lopes, 2006
Os resultados de desempenho do trator esto apresentados na forma de

equaes, figuras e tabelas. A sntese da anlise estatstica foi apresentada
para grupos de variveis nas tabelas 13.6 e 13.7. Nessas tabelas, os dados
referentes s misturas representam mdias de vinte e quatro observaes.
434
Tabela 13.6 Sntese da anlise de varincia e teste de mdias para as variveis de patinagem
mdia dos rodados, velocidade de deslocamento (V) e potncia na barra de trao (PB)
Proporo de biodiesel (%)
Patinagem (%)
V (km h-1)
PB (kW)
B0
9,20 a
5,34 a
37,77 a
B5
9,25 a
5,35 a
38,37 a
B25
9,27 a
5,35 a
39,08 a
B50
9,25 a
5,35 a
38,02 a
B75
9,27 a
5,37 a
37,85 a
B100
9,25 a
5,37 a
38,62 a
C.V.%
0,52
0,21
3,62
Mdia
9,24
5,35
38,28
*Mdias seguidas pela mesma letra minscula na coluna no diferem entre si pelo teste de Tukey, a 5%
de probabilidade. C.V.: coeficiente de variao.
Verifica-se, na Tabela 13.6, que o fator misturas de biodiesel de tucum

no diesel no influenciou na patinagem dos rodados. Registra-se que o valor
mdio de 9,24% encontra-se dentro dos limites recomendados pela American Society of Agricultural Engineers (1989). Na referida recomendao,
previsto que, se a patinagem for muito baixa, pode ser indcio de lastragem
excessiva do trator ou exigncia de fora abaixo do ideal. Da mesma forma,
quando a patinagem alm da recomendada, pode ser falta de lastragem ou
exigncia de fora acima da prevista para o trator. importante destacar
que a ocorrncia de ambos os casos se constitui em fator negativo, pois, no
primeiro caso, o trator subutilizado; e no segundo, ocorre desgaste acelerado do conjunto, levando a quebras prematuras, principalmente em funo dos picos de fora frequentes em operaes agrcolas.
As propores de mistura no influenciaram a velocidade de deslocamento do trator. Estes resultados so semelhantes aos encontrados por Soranso et al. (2008), trabalhando com biodiesel de leo residual, com fora
mdia na barra de trao de 20 kN.
As propores de mistura de biodiesel de tucum no diesel no influenciaram a potncia na barra de trao, cuja mdia foi de 38,28 kW. Esse
comportamento explicado em funo de a referida varivel ser o produto
da fora mantida prxima a 25 kN com a velocidade que, no caso concreto, tambm no apresentou variao disponvel na barra de trao, pois a
forma de compensao do menor poder calorfico do biodiesel o aumento
435
no consumo de combustvel para que a potncia na barra de trao no seja

comprometida.
Na Tabela 13.7, encontram-se a sntese da anlise de varincia e o teste
de mdias para as variveis consumo horrio volumtrico, consumo horrio
ponderal e consumo especfico.
Tabela 13.7 Sntese da anlise de varincia e teste de mdias para as variveis de consumo horrio volumtrico (Chv), consumo horrio ponderal (Chp), consumo especfico (Ce) e opacidade
da fumaa
Proporo de biodiesel (%)
Chv (L h-1)
Chp (kg h-1)
Ce (g kWh-1)
Opacidade (m-1)
B0
13,0 a
10,9 a
291,6 a
1,35 a
B5
13,3 a
11,1 a
288,6 a
1,22 b
B25
13,7 ab
11,5 ab
287,8 a
1,17 b
B50
14,1 bc
11,8 bc
314,6 b
1,07 c
B75
14,6 cd
12,4 cd
330,2 c
0,86 d
B100
15,0 d
12,9 d
340,3 c
0,54 e
C.V.%
2,43
2,51
1,75
5,50
Mdia
13,95
11,7
308,8
1,03
*Mdias seguidas pela mesma letra minscula na coluna no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5%
de probabilidade. C.V.: coeficiente de variao.
Na Tabela 13.6, observa-se que a proporo de biodiesel de tucum misturado ao diesel, ao comparar B0 e B100, aumentou o consumo em 15,4%.
Esse aumento funo do menor poder calorfico do biodiesel em relao
ao diesel, tornando-se necessrio utilizar maior quantidade de combustvel
para realizar a mesma quantidade de trabalho. Nota-se ainda que, a partir
de B25, ocorre acrscimo no consumo volumtrico, com este sendo semelhante ao B5 e B0, sendo B25 semelhante ao B50 e esse inferior ao B100. Os
resultados do presente trabalho condizem com os encontrados por Camara
(2009), ressaltando que esse funcionou o trator com biodiesel de leo residual. A importncia de apresentar o consumo horrio na forma volumtrica
que tal informao atende diretamente os agricultores, assim como todos
aqueles sem acesso s medidas obtidas de formas mais precisas.
Em relao ao consumo horrio ponderal, nota-se que o consumo ponderal foi semelhante entre as propores B0 e B5, com B5 sendo semelhante
ao B25, enquanto o B25 tambm foi semelhante ao B50, sendo B75 e B100
436
os que proporcionaram maior consumo. Comparando-se B0 a B100, observa-se acrscimo de 18,3% no consumo. Destaca-se que o consumo ponderal
a forma mais utilizada pelas distribuidoras de combustveis lquidos, pois
assim considerado o efeito da temperatura na variao do volume.
Verifica-se que para o consumo especfico no ocorreu diferena significativa at a adio de 50% de biodiesel (B50). Todavia, comparando
o B0 com o B100, o consumo aumentou 16,7%. Esse aumento deve-se ao
menor poder calorfico do biodiesel em relao ao diesel. A importncia
de expressar o consumo de combustvel na forma de especfico atender
comunidade cientfica e tambm a fabricantes de tratores e motores, pois,
na referida modalidade, leva-se em considerao o volume de combustvel,
sua densidade e a potncia aproveitada na barra de trao. Por este motivo,
tal forma a maneira mais recomendada para comparar tratamentos.
O comportamento do consumo especfico em funo da proporo de
mistura de biodiesel de tucum no diesel foi ajustado a um modelo linear de
regresso e est ilustrado no Grfico 13.5.
Grfico 13.5 Ajuste de modelo linear de regresso que explica o consumo especfico em
funo da proporo da mistura de biodiesel de tucum e diesel.
Os ensaios de opacidade da fumaa foram realizados em condio esttica, utilizando-se um trator marca Valtra, modelo BM 100, 4 x 2 com trao
auxiliar (TDA), potncia de 73,6 kW (100 cv) no motor a 2.300 rpm (ISO
1585). Neste ensaio, o referido trator foi instrumentado com opacmetro
437
TM 133 para medir opacidade, tacmetro universal TM 525/2 para aferir

a rotao do motor, sonda coletora de fumaa e controlador serial TM 616
que serve como interface entre sensores e trator. Neste ensaio, utilizou-se
de biodiesel etlico filtrado de tucum. A ilustrao do trator instrumentado para o ensaio de opacidade encontra-se na Figura 13.8.
Figura 13.8 Vista geral do trator instrumentado para o ensaio de opacidade da fumaa.
Na Tabela 13.7, encontram-se os resultados da opacidade da fumaa.

Verifica-se que, em funo da proporo de mistura, houve reduo significativa da opacidade da fumaa com o acrscimo de biodiesel mistura, mesmo em pequenas quantidades, conforme observado na proporo
B5, atingindo melhoria de 60%, comparando B100 com B0. Esse fato em
funo de menor emisso de material particulado, quando se utiliza biodiesel. Resultados semelhantes tambm foram observados por Mazziero
et al. (2006) e Camara (2009). O comportamento da opacidade da fumaa
em funo da proporo de mistura foi linear, conforme mostrado no
Grfico 13.6.
438
Grfico 13.6 Ajuste de modelo de regresso que explica a opacidade da fumaa em funo
da proporo da mistura de biodiesel de tucum e diesel.
Os dados obtidos experimentalmente indicam que o consumo de combustvel aumenta quando comparado o biodiesel de tucum com o diesel
de petrleo, e isso se d por causa de menor poder calorfico do tucum.
No entanto, o biodiesel de tucum apresentou menor opacidade na fumaa,
consequentemente menor emisso de material particulado.
Produo de bio-leo da torta de tucum

por pirlise rpida
A produo do biodiesel inicia-se com a prensagem da matria-prima
para a obteno do leo bruto, tendo como rejeito a torta. Hoje, um dos
grandes desafios do Sistema Agroindustrial do biodiesel a agregao de
valor aos resduos.
Atualmente, as tortas provenientes do processo de produo do biodiesel so empregadas como adubo ou complemento alimentar de animais
(rao). A alternativa energtica hoje existente para esse resduo a queima
(combusto). Assim, estudos visando novas utilizaes dessas tortas contribuiro para a sustentabilidade do processo produtivo de biocombustveis.
A composio qumica da torta de tucum foi determinada, utilizando
um equipamento Elementar Vario Micro Cube. Para esta anlise, foi utilizado o mtodo de combusto para converter os elementos da amostra em
439
gases simples como CO2, H2O e N2, em que a amostra foi oxidada em uma
atmosfera de oxignio puro. Os gases foram separados, detectados em funo de sua condutividade trmica e convertidos em porcentagem de C, H
e N na amostra. O teor de oxignio foi obtido por diferena. Os resultados
encontram-se na Tabela 13.8.
Tabela 13.8 Composio elementar da torta de tucum
Constituintes
Composio elementar (%)
Carbono
51,87
Oxignio
38,86*
Hidrognio
6,86
Nitrognio
1,92
Enxofre
0,49
*Valor obtido por diferena
Os dados apresentados na Tabela 13.8 mostram que a torta de tucum

possui um alto teor de oxignio em sua composio e um baixo teor de enxofre. Estes valores esto de acordo com os encontrados para biomassas
(Raveendran et al., 1996).
O bio-leo da torta de tucum foi produzido por meio de pirlise rpida,
utilizando-se um reator de leito fluidizado, com os seguintes parmetros de
operao: temperatura de pirlise (600C e 700C), taxa de aquecimento
(10C min-1), tamanho de partcula (35-60 mesh), taxa de alimentao do
reator (1,50 g min-1), vazo do gs de arraste (170 mL min-1).
O lquido obtido a partir da pirlise era composto de uma fase aquosa e
uma fase orgnica. A fase aquosa foi fracionada em trs grupos: extrativos,
compostos polares de baixo peso molecular e subfraes e compostos apolares de alto peso molecular. A quantidade de extrativos foi determinada por
solubilidade em hexano. A mistura leo e hexano (1:5) foi agitada por 10
minutos e separada por decantao.
A frao insolvel em hexano foi esterificada, seguindo o mtodo descrito por Hartman e Lago, 1973. Aps a esterificao, foram obtidas as fraes de compostos solveis em metanol, referentes a molculas polares de
baixo peso molecular e subfraes e as insolveis em metanol, referentes
aos compostos apolares de alto peso molecular.
As fraes obtidas foram analisadas e identificadas por cromatografia
a gs acoplada ao espectrmetro de massa (GC-MS) em um equipamento
Shimadzu CG-2010.
440
Para anlise das fraes solveis em hexano, utilizou-se de uma coluna

capilar DB5 (30 m x 0,25 mm x 0,25 m) nas seguintes condies: temperatura inicial de 40C (3 min), aquecimento a uma taxa de 7C min-1 at
180C e de 15C min-1 at 270C, permanecendo nesta temperatura por
1 minuto (tempo total de corrida 30 min); temperatura do injetor: 220C;
temperatura da interface: 240C; temperatura da fonte de ons: 200C; gs
carreador hlio (1,21 mL min-1); taxa de split 1:10 e volume injetado de 1 L.
Para a anlise das fraes solveis em metanol, utilizou-se da coluna capilar DB5 (30 m x 0,25 mm x 0,25 m) nas seguintes condies: temperatura inicial 35C (4 min); aquecimento a uma taxa de 5C min-1 at 60C
(2 min), 6C min-1 at 240C e 10C min-1 at 270C (5 min) com tempo
total da corrida de 49 minutos; temperatura do injetor: 270C; temperatura
da interface: 240C; temperatura da fonte de ons: 200C; gs carreador
hlio (1,19 mL min-1); taxa de split 1:10 e volume injetado de 1 L.
O detector de massas, para ambas as fraes, operou com ionizao por
impacto de eltrons de 70 eV e varredura de massas entre os intervalos de
45 a 500 Da. A identificao dos compostos foi feita com biblioteca especializada, contendo mais de 240 mil espectros (Wiley).
Um dos parmetros mais importante na pirlise a temperatura. Assim
testaram-se duas temperaturas, 600C e 700C. Em temperaturas inferiores a 600C, a quantidade de alcatro (molculas pesadas) superior a 90%,
e em temperaturas superiores a 700C, aumenta a frao gasosa e reduz o
rendimento de bio-leo.
Os balanos de massa dos produtos obtidos da pirlise rpida da torta de
tucum encontram-se na Tabela 13.9.
Tabela 13.9 Balano de massa dos produtos obtidos pela pirlise rpida da torta de tucum.
Temperatura
600C
700C
Massa total de biomassa (g)
150,00
150,00
Massa total de carvo produzido (g)
37,00
29,00
Massa total de lquido produzido (g)*
18,70
14,05
0,5 hora
1,77
3,79
1 hora
3,79
1,11
2 horas
3,62
3,33
3 horas
9,50
5,76
Massa total de gases produzidos (g)*
94,30
107,00
*teor de gs obtido por diferena
441
Nota-se que a influncia da temperatura final sobre o rendimento de todos os produtos da pirlise da torta de tucum variou significativamente. A
600C, obteve-se um rendimento maior de lquido e um menor rendimento de gs. A produo de slidos diminuiu com o aumento da temperatura.
Dessa forma, a melhor temperatura de pirlise para produo de bio-leo
de torta de tucum foi 600C.
A caracterizao qumica completa do bio-leo difcil, por se tratar de
uma mistura complexa de diversos compostos, frequentemente em pequenas quantidades, e de conter compostos de alto peso molecular resultantes
da decomposio da celulose, hemiceluloses e lignina. Cerca de 40% do bio-leo pode ser detectado via GC-MS e os compostos polares e no volteis
podem ser analisados por cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC)
(Moham et al., 2006).
Os compostos constituintes da frao aquosa do bio-leo foram identificados e quantificados por GC-MS. Foram avaliadas as fraes solveis em
hexano e as fraes esterificadas. Os resultados para o bio-leo produzido a
600C e 700C encontram-se nas Tabelas 13.10 e 13.11, respectivamente.
Os resultados das Tabelas 13.10 e 13.11 mostram que as fraes solveis em hexano das fraes aquosas dos bio-leos obtidas a 600C e 700C
apresentaram composies significativamente diferentes: a primeira rica
em hidrocarbonetos, enquanto a segunda, em compostos oxigenados. J as
Tabela 13.10
a 600C
Composio da frao aquosa do bio-leo da torta de tucum obtido por pirlise
Grupo
Frao solvel em
hexano (%)
Frao esterificada
solvel em hexano (%)
Frao esterificada
solvel em metanol (%)
Parafina
64,41
55,64
8,48
Olefina
1,60
0,89
0,20
Aromtico
14,44
37,09
< LD**
Acetona
1,55
< LD**
< LD**
cido
3,16
< LD**
1,70
lcool
5,53
0,38
5,59
Aldedo
0,09
< LD**
31,37
ster
1,15
2,61
34,36
ter
0,25
3,11
< LD**
NI*
7,62
0,28
18,30
* No identificado
** Menor que o limite de deteco
442
Tabela 13.11
a 700C
Composio da frao aquosa do bio-leo da torta de tucum obtido por pirlise
Grupo
Parafina
Frao solvel em
hexano (%)
Frao esterificada
solvel em hexano (%)
Frao esterificada
solvel em metanol (%)
10,29
56,82
0,41
Olefina
0,18
0,10
0,89
Aromtico
4,75
33,51
0,40
cido
2,77
< LD**
22,08
lcool
2,27
1,29
< LD**
ster
53,53
1,17
67,86
ter
13,72
1,44
< LD**
NI*
12,49
5,67
8,36
* No identificado
** Menor que o limite de deteco
fraes esterificadas apresentaram composies semelhantes: as solveis

em hexano eram ricas em hidrocarbonetos, e as solveis em metanol, ricas
em compostos oxigenados.
O bio-leo produzido a partir da pirlise rpida da torta de tucum mostrou-se uma alternativa energtica vivel, uma vez que a biomassa vegetal
a nica fonte de combustvel alternativa aos combustveis fsseis.
Concluses
Os resultados apresentados neste trabalho mostram a coleta manual dos
frutos de tucum, a extrao mecnica do respectivo leo, a caracterizao
fsico-qumica do leo extrado, a produo do biodiesel de tucum, utilizando reao de transesterificao com etanol e metanol, a caracterizao
fsico-qumica do biodiesel produzido e a utilizao deste biodiesel em tratores agrcolas.
Os estudos da coleta dos frutos e da extrao do leo de tucum mostraram que os locais de amostragem influenciaram na quantidade de lipdeos
totais na amndoa e na polpa do tucum, assim como no rendimento aparente da prensa.
As anlises fsico-qumicas mostraram que o leo de tucum apresenta
caractersticas que comprovaram que o mesmo possui um grande potencial
443
energtico para a produo do biodiesel quando comparados com leos

extrados de outras espcies oleaginosas.
A metodologia proposta para a produo de biodiesel etlico a partir do
leo de tucum, utilizando KOH como reagente para a produo de alcxido, foi bem sucedida. Os valores pertinentes aos ndices de estabilidade
oxidativa e tempo de armazenamento deste leo indicaram ser o mesmo
bom precursor para a produo de biodiesel.
As anlises fsico-qumicas do biodiesel de tucum mostraram que o
combustvel produzido desta oleaginosa apresenta-se rico em steres metlicos de cadeia longa, podendo ser uma fonte energtica vivel.
A utilizao do biodiesel de tucum em tratores agrcolas mostrou que,
apesar do consumo ser maior, quando comparado ao diesel de petrleo, o
biodiesel de tucum apresenta menor opacidade na fumaa e, consequentemente, menor emisso de material particulado.
O bio-leo produzido a partir da pirlise rpida da torta de tucum
mostrou-se uma alternativa energtica vivel, pois apresenta-se rico em
hidrocarbonetos e compostos oxigenados, agregando valor ao coproduto
gerado no processo produtivo do biodiesel, o que pode tornar o processo
mais sustentvel.
Os resultados obtidos nas diversas etapas desta pesquisa mostraram a
viabilidade tcnica para gerao de uma cadeia produtiva de biodiesel de
tucum, a qual apresenta um meio sustentvel de suprir as necessidades
energticas alm de um crescimento socioeconmico.
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Unesp.
14
Contaminao microbiana na fermentao
alcolica para produo de etanol carburante
Pedro de Oliva-Neto, Karin M. Ludwig,
Claudia Dorta, Ana Flavia A. Carvalho,
Douglas F. da Silva, Valria M. G. Lima
Introduo
O processo de produo de etanol carburante no Brasil feito pela fermentao alcolica de caldo de cana e/ou derivados por meio da levedura
Saccharomyces cerevisiae, por uma derivao do processo Melle Boinot.
Este processo caracteriza-se pelo reciclo de altas concentraes de clulas de levedura, por meio de centrfugas, onde a fermentao processada mais rapidamente e de forma mais eficiente do que nos processos mais
antigos utilizados no Brasil. Tal processo no assptico e com o reciclo
das leveduras, ocorre tambm o reciclo de microrganismos contaminantes,
destacando-se leveduras inclusive de outros gneros, e bactrias, as quais
podem causar prejuzos com maiores gastos de insumos e queda na eficincia alcolica. Neste captulo, discutida a microbiota da fermentao, os
tipos de contaminantes bacterianos e fngicos, os prejuzos e problemas
causados por estes contaminantes, o efeito inibidor de diferentes fatores
sobre o metabolismo de S. cerevisiae e a relao ecolgica entre S. cerevisiae e os contaminantes. Finalmente, so abordados os mtodos de controle
dos contaminantes biolgicos da fermentao, desde os mais antigos at os
mais atuais.
448
Microrganismos contaminantes e sua importncia na

indstria sucroalcooleira
Microbiota das destilarias produtoras de etanol
As leveduras e bactrias so os contaminantes mais importantes na cadeia produtiva da produo de etanol carburante, causando perdas de acar, produo de cidos orgnicos e biopolmeros indesejveis, floculao
do fermento, Entre outros problemas, desde a cana cortada at o caldo de
cana sendo fermentado.
Dependendo das condies climticas e do tempo em que a cana fica
cortada no campo, exposta ao ataque de insetos e microrganismos, esta contaminao pode atingir nveis de at 109 UFC/ml (unidades formadoras de
colnias/ml de caldo). Segundo Ducan e Colmer (1964), canas saudveis
podem conter 104 a 108 bactrias/g, e 103 a 104 bolores e leveduras/g. O
nmero de espcies da microbiota contaminante vai sendo restrita, quando
se analisa desde a cana intacta at o caldo fermentado, por causa dos fatores
limitantes intrnsecos ao processo de produo de etanol.
Contaminao bacteriana nas destilarias produtoras de etanol
Da cana verde at o caldo de cana fermentado j foram encontradas

bactrias dos gneros Flavobacterium, Xanthomonas, Pseudomonas, Enterobacter, Erwinia, Leuconostoc, Bacillus, Corynebacterium, Aerobacter,
Streptococcus, Clostridium, Acetobacter, Enterobacter, Sporolactobacillus,
Micrococcus, Staphylococcus, Citrobacter, Escherichia e um dos gneros
mais importantes que se mantm ao longo de todo o processo, o Lactobacillus (Almeida, 1940; Galli, 1961; Ducan; Colmer, 1964; Bevan; Bond,
1971; Lima et al., 1974; Tilbury, 1975; Rosales, 1989, Gallo, 1989; Oliva-Neto, 1990).
Os primeiros relatos do mapeamento das contaminaes da fermentao
alcolica no Brasil foram feitos por Neves (1938), Almeida (1940) e Galli
(1961). Estes autores identificaram fermentaes paralelas fermentao
alcolica como responsveis por muitos transtornos no processamento. Entre elas, destacaram-se: a fermentao actica (Acetobacter e Pseudomonas), a
fermentao butrica (Clostridium), e a produo dos biopolmeros dextrana
(Leuconostoc mesenteroides) e a levana (Bacillus, Aerobacter e Streptococcus).
CONTAMINAO MICROBIANA NA FERMENTAO ALCOLICA
449
A partir da cana-de-acar, Duncan e Colmer (1964) isolaram os seguintes microrganismos: Leuconostoc, Bacillus subtilis, Aerobacter cloacae,
Aerobacter aerogenes, Escherichia coli e Lactobacillus plantarum, Leuconostoc mesenteroides, Bacillus cereus e Pseudomonas que foram identificados na
cana-de-acar intacta. Alm disso, Leuconostoc, Xanthomonas e Aerobacter estavam presentes aps duas horas do corte mecanizado (Bevan; Bond,
1971). Lima et al. (1974) identificaram em caldo bruto, misto e gua de
embebio as seguintes bactrias: Leuconostoc dextranicum, Leuconostoc
mesenteroides, Aerobacter aerogenes, Bacillus coagulans, B. circulans, B. megaterium e Pseudomonas incognita. Estudando a deteriorao do caldo de
cana, Tilbury (1975) encontrou: Leuconostoc mesenteroides, L. dextranicum
e Lactobacillus plantarum.
Segundo Silva (1988), em caldo de cana clarificado e pasteurizado houve um predomnio de Lactobacillus (38%), heterofermentativas (98%) e termodricas (79%). As espcies mais frequentes eram L. fermentum/reuteri
(47%) seguidas de bactrias pertencentes famlia Micrococcaceae (23%),
Leuconostoc (12%), leveduras (12%), Bacillus (3%) e membros da famlia
Enterobacteriaceae. As espcies mais frequentes de lactobacilos foram: L.
fermentum/reuteri (47%), L. confusus (18%), L. viridescens (11%), L. brevis/
buchneri (4%) e L. plantarum (2%).
Rosales (1989) determinou que 45% das bactrias encontradas nas destilarias de etanol (caldo fermentado, mosto e fermento) eram do gnero Lactobacillus, seguido de Leuconostoc mesenteroides (14,4%).
Gallo (1989) tambm identificou uma flora predominantemente gram-positiva (98,5%), em forma de bastonetes (85,3%) e no esporulante
(73,9%), sendo os gneros mais frequentes Lactobacillus (59,7%) e Bacillus
(26,6%). Entre as espcies predominantes estavam L. fermentum (15%), B.
coagulans, (15%), Lactobacillus helveticus (14%), B. stearothermophilus (7%),
L. plantarum (5,7%), L. animalis (4,5%) e L. buchneri (3,8%). Sporolactobacillus inullinus causou uma grave infeco bacteriana por causa de sua
resistncia ao tratamento com cido sulfrico utilizado no preparo do p-de-cuba (Serra et al., 1979).
Oliva-Neto (1990) isolou e identificou a microflora bacteriana de caldo fermentado em usinas paulistas com srios problemas de contaminao
bacteriana. Entre os isolados do caldo fermentado pelo menos 91% das culturas eram do gnero Lactobacillus. Destas havia um predomnio de 85% de
450
heterofermentativas do grupo III (classificao de Orla-Jansen, 1919 cit.

em Oliva-Neto, 1990), 64% eram resistentes a 10% de etanol (v/v) e 67%
eram indutoras da floculao de leveduras no floculentas. Houve um predomnio de Lactobacillus fermentum (62%), sendo encontrados numa mesma proporo L. vaccinostercus e L. murinus (9%) e, em menor quantia, L.
plantarum (2 a 4%) e Leuconostoc (2%).
A bactria L. fermentum recebe este nome por sua associao s leveduras em processos fermentativos de vegetais, mas tambm j foi encontrada em produtos lcteos, silagens, esgoto e em humanos (Kandler; Weiss,
1986).
Contaminao por leveduras nas destilarias produtoras de etanol
Entre as leveduras contaminantes mais importantes esto, sem dvida,

outras linhagens da prpria espcie Saccharomyces cerevisiae. Estas rapidamente dominavam o processo industrial logo no incio da safra. Esta
a razo pela qual a seleo de linhagens fermentativas no Brasil, para produo de etanol, foi feita a partir do isolamento das prprias usinas, com
um bom perfil fermentativo e sem caracterstica floculante, indesejvel ao
processo. Porm outros gneros j foram encontrados e que so prejudiciais
ao processo: Candida, Hansenula, Kloeckera, Kluyveromyces, Oidium, Pichia, Rhodotorula, Schizosaccharomyces, Schwanniomyces, Torula, Torulopsis, Trichosporon, Cryptococcus, Dekkera, Brettanomyces (Ducan; Colmer,
1964; Bevan; Bond, 1971, Oliveira, 1987; Lima et al., 1974; Tilbury et al.,
1977, Silva, 1994).
As linhagens Candida diddensii, C. tabiani, C. intermedia, C. santamarine, Cryptococcus kvetzingii, Hansenula polymorpha, Kloeckera cortticis,
Rhodotorula pallida, R. rubra, Saccharomyces uvarum, Torulopsis norvegica
e Trichosporon cutaneum foram encontradas na moenda de usina de canade-acar (Lima et al., 1974).
A levedura Dekkera bruxellensis (fase assexuada de Brettanomyces bruxellensis) foi identificada como a responsvel por uma grave contaminao
de destilaria de etanol no estado de So Paulo (Silva, 1994). Esta mesma
levedura dominou o processo de outra destilaria de produo de etanol no
estado da Paraba, a qual s foi controlada quando houve reduo de oxignio no processo e elevou-se a concentrao de etanol para 9% (Guerra,
451
1988). Esta levedura pode apresentar-se em elevado grau de contaminao

em fermentaes etanlicas pelo processo contnuo a baixas temperaturas,
em funo de maior taxa de multiplicao em relao S. cerevisiae (Victor, 1996).
Importncia da contaminao microbiana na estabilidade da

fermentao alcolica
Efeito no rendimento e produtividade alcolica
O processo fermentativo de produo de etanol precisa manter-se estvel para que seja vivel economicamente. Grandes variaes, seja na quantidade de clulas, na viabilidade celular, na homogeneizao das clulas,
nas perdas de fermento, ou na diminuio da velocidade de fermentao
pelo catalisador do processo, a levedura, resultaro em perdas considerveis
em toda a cadeia produtiva, com aumento dos gastos com insumos, queda
na eficincia alcolica e produtividade do processo.
Os microrganismos contaminantes so os principais agentes que alteram a estabilidade do processo. Resumidamente, entre os problemas destacam-se:
a) os contaminantes provocam uma competio pelo consumo de acar, desviando da produo de etanol para outros produtos, tais
como: a biomassa, a produo de cidos orgnicos (cido actico e
principalmente o cido ltico), e a produo de biopolmeros (levana,
xantana e principalmente dextrana);
b) a inibio ou morte da levedura por influncia dos cidos orgnicos,
diminuindo a produo de etanol e aumentando o gasto com reposio celular;
c) a floculao das clulas de S. cerevisiae por causa do contato fsico
com os contaminantes (leveduras e bactrias indutoras da floculao), os quais acarretam prejuzo no processo em funo do aumento
da contaminao microbiana e maior consumo de acar para produo de biomassa, via perda de fermento na centrfuga, fundo de
dornas etc.;
d) aumento de gasto com insumos tais como cido sulfrico, antibiticos,
antiespulmantes e dispersantes, encarecendo o custo de produo.
452
Se a deteriorao da cana cortada e depositada no solo espera do

processamento pode levar a perdas de 4,75% a 11% (Egan, 1968, Tilbury,
1975); quando a contaminao ocorre na fermentao alcolica tais perdas
podem ser ainda mais significativas. Serra et al. (1979) relataram perdas
de 15% no rendimento fermentativo. Amorim e Oliveira (1981) relataram
uma correlao inversa entre acidez fixa do vinho e rendimento alcolico
sendo encontrados os piores valores (60%) para uma acidez expressa em
cido sulfrico entre 5 a 6 g/l. Alterthum et al. (1984) relataram queda
no rendimento fermentativo na faixa de 14-90% do terico quando a concentrao de bactrias atingiu nveis de 108 a 109 cel/ml. Cruz et al. (1985)
verificaram quedas de 10-40% no rendimento, com altas concentraes de
bactrias. Oliva-Neto e Yokoya (1994) avaliaram uma fermentao mista em laboratrio com processo de batelada alimentada e reciclo de clulas de S. cerevisiae e L. fermentum. Estes pesquisadores constataram que
L. fermentum dominaram o processo aps o 8o ciclo chegando a nveis de
109 cel/ml, quando nenhum processo de controle foi usado. Houve uma
diminuio acentuada do rendimento fermentativo chegando at a 46,7%
em relao ao terico, e houve uma queda de 53,5% da produtividade de
etanol, com nveis de acidez superiores a 6,0 g/l expressos em cido ltico.
Em outro trabalho realizado com cultura mista com L. fermentum com reciclo de clulas, tambm foi verificado decrscimo no rendimento alcolico
(Thomas et al., 2001). Estes trabalhos vm demonstrando a necessidade de
um controle eficiente destes contaminantes na fermentao alcolica para
produo de etanol carburante.
Floculao celular
A floculao celular consiste numa agregao de clulas individuais,

quando em suspenso, formando flocos (peletes ou agregados) que, logo
em seguida, sofrem sedimentao ou flotao. A autofloculao denominada quando envolve as clulas de uma nica linhagem que se agregam, e a
cofloculao consiste no fenmeno de agregaes ocorrendo entre diferentes linhagens (Stewart et al., 1975; Esser; Kues, 1983). A floculao difere
do crescimento em grupos e formao de cadeias onde no h separao de
clulas-filhas da clula-me durante o crescimento. Crescimento na forma
de pseudomiclio ou pseudo-hifa pode agravar o tipo de floculao e isso
muito comum em destilarias de lcool.
453
A floculao do fermento usado nas indstrias produtoras de etanol

geralmente uma cofloculao entre S. cerevisiae com crescimento homogneo e outra linhagem que pode ser outro S. cerevisiae ou, mais comumente,
bactrias lticas indutoras da floculao. Este fenmeno causa vrios distrbios, entre eles: a) o assentamento das leveduras nos fundo das dornas,
o que dificulta a converso do acar em etanol b) perda de clulas na etapa
de centrifugao e o consequente gasto de substrato para a reposio celular, c) acidez do vinho (mosto fermentado e centrifugado), causada por
bactrias produtoras de cidos orgnicos, que comprovadamente aumentada com o aumento da floculao, causando uma significativa queda no
rendimento alcolico e viabilidade de leveduras (Alterthum et al., 1984;
Cruz et al., 1985; Oliva-Neto, 1990, 1994; Rose, 1980).
Diferentes fatores esto envolvidos na floculao celular da fermentao
alcolica, destacando-se: leveduras indutoras da floculao, biopolmeros
tais como dextrana e, principalmente, bactrias indutoras que revestem a
parede da levedura e so a mais comum causa deste fenmeno. ons ferro e
clcio tambm provocam floculao sendo este ltimo muito associado s
leveduras e bactrias indutoras da floculao.
Diversos autores (Serra et al., 1979; Yokoya; Oliva-Neto, 1991; Oliva-Neto; Yokoya, 1994) demonstraram que a floculao do fermento nas destilarias produtoras de etanol pode estar intimamente associada ao tipo e grau
de infeco no processo. Contaminantes da fermentao alcolica com capacidade infectante so restritos a poucos gneros, porque este ambiente altamente seletivo, permitindo apenas o desenvolvimento de microrganismos
resistentes ao etanol e a pH baixo. Leuconostoc, alm de contaminar a fermentao alcolica, provoca entupimento de tubulaes, centrfugas e peneiras, por causa da floculao pela produo da goma dextrana, mas raramente
chega a causar grandes infeces por causa de sua baixa resistncia ao etanol.
Floculao por leveduras
A floculao por leveduras depende diretamente das propriedades da

parede celular, que, mesmo isolada, apresenta um comportamento semelhante s clulas intactas (Figura 14.1), determinadas por genes do locus
FLO (Miki et al., 1982) e fatores como tratamento com manose, presena ou ausncia de clcio. Apesar disso, sabe-se que a floculao ocorre por
meio de interaes envolvendo a parede celular de clulas vizinhas (Eddy;
Phil, 1955a; Stewart et al., 1975).
454
Figura 14.1 Fotomicrografia para exemplificar a floculao entre leveduras.

Fonte: Fermentec
O mecanismo de agregao entre as clulas pode ser explicado de diversas formas, e, muitas vezes, os autores em busca da melhor explicao para
este fenmeno apresentam hipteses que se contradizem. Mas o envolvimento de protenas da superfcie celular certo, pois o tratamento com
proteases leva perda irreversvel da floculao (Calleja, 1974; Stratford;
Brundish, 1990; Bowen et al., 1992). Na verdade, para explicar o processo
de agregao entre as leveduras existem duas hipteses bsicas que devem
ser levadas em considerao.
Na primeira hiptese, os autores assumem que as clulas de levedura se
ligam atravs de pontes de hidrognio formadas entre os grupos carboxlicos das protenas da parede celular de um grupo de leveduras e os fosfatos
das fosfomananas das clulas adjacentes. O clcio atuaria induzindo a ligao e provocando a adeso celular (Masschelen et al., 1963; Lyons; Hough,
1971; Mill, 1964; Stewart et al., 1975).
Na segunda hiptese, diferentes autores assumem um modelo proposto,
que recebeu o nome de Modelo das Lectinas, em que estas lectinas (glicoprotenas) da superfcie celular podem mediar a interao clula-clula
por ocorrer a combinao com carboidratos complementares de clulas adjacentes (Sharon; Lis, 1989).
455
A floculao de certas linhagens de leveduras pode ser inibida na presena de manose, maltose, glicose e sacarose. Sendo que isso sugere que
os acares livres inibem a floculao por competio com os resduos de
acares das mananas da parede celular, por stios ativos das lectinas-protenas, causando o enfraquecimento das pontes entre as clulas, que se quebram por causa da agitao (Eddy; Phil, 1955b; Mill, 1964; Stratford, 1989;
Taylor; Orton, 1978).
A ao de enzimas que destituem as paredes celulares de sua capacidade de formao de flocos tambm foi mostrada em diversos trabalhos
desenvolvidos por Nishihara et al. (1977 e 1982) e Eddy et al. (1957). A
importncia da presena de estruturas proteicas na induo da floculao
foi tambm evidenciada por Kamata; Murata (1984). Estes autores verificaram que a aglutinao das clulas foi diminuda com tratamento com
enzimas proteolticas (pepsina e pronase), enquanto as demais enzimas testadas (manase, lisozima, zimoliase, fosfatase cida, lipase e ribonuclease)
no tiveram o mesmo efeito.
Oliveira-Freguglia e Horii (1998) tambm observaram o papel de enzimas com ao desfloculante. Utilizaram enzimas do grupo peptidohidrolases (papana, bromelina e ficina) e mostraram que as mesmas tm uma boa
ao sobre o componente causal da floculao de Saccharomyces cerevisiae
por Lactobacillus fermentum.
O clcio hbil na induo da floculao em pH 2,2 e 8,0, e a desfloculao pode ocorrer em pH extremamente baixo ou por lavagem com agentes
como cido etileno diamino tetractico (EDTA), ou mesmo com gua deionizada. Este fenmeno pode ser reversvel a partir da adio de CaCl2 (Mill,
1964b; Stratford, 1989).
A presena de ons clcio nas suspenses se faz necessria para induzir
a floculao numa concentrao de 200 mM na forma de cloreto clcio, e
outros ons como sdio, potssio, estrncio e brio tm efeito contrrio, no
induzindo a floculao (Kihn et al., 1988a; Mill, 1964b; Nishihara et al.,
1982; Stratford; Brundish, 1990).
Em um estudo realizado por Castellon-Vogel e Menawat (1990) que tinham por objetivo principal desenvolver uma tcnica rpida de anlise fotomtrica da floculao mediante solues homogneas de leveduras, foi observado que solues de 10 mM e 1 M de sais monovalentes de sdio provocam
a disperso das clulas. Assim, pode-se dizer que os ons sdio so responsveis pela desfloculao e se comportam como antagonistas aos ons clcio.
456
Outros autores confirmaram que o pH do meio em que as clulas de

levedura se encontram muito importante para o desenvolvimento do fenmeno da floculao (favorecendo ou no), sendo que em pHs baixos o
fenmeno no ocorre, mas aumentando esta faixa acontece a refloculao
(Calleja, 1974). Os estudos de Porter e Macaulay (1965) com leveduras floculantes cultivadas em meio semissinttico em diferentes pHs revelaram
que as clulas em nveis de pHs muito baixos no flocularam, enquanto em
pHs mais elevados estas clulas tornaram-se hbeis na floculao, confirmando a afirmao acima.
O valor de pH est diretamente ligado induo ou no da floculao de
leveduras. Segundo Stratford (1996), que testou diferentes linhagens de leveduras e a capacidade de formao de flocos em relao ao pH, a concluso
de que a floculao se desenvolve bem em faixas de 4,5 a 6,3, enquanto em
pH abaixo desta faixa a floculao praticamente no aparece. Isso justifica
o tratamento com cido sulfrico, atualmente desenvolvido nas indstrias
alcooleiras, para determinar a desfloculao das leveduras.
A agitao tambm importante para que ocorra o mecanismo de floculao na indstria. A agitao natural que pode ser causada pela passagem de bolhas de gs durante a fermentao poderia determinar um
aumento no grau de floculao, alcanando o equilbrio dinmico entre as
clulas floculantes e clulas livres (Stratford; Keenan, 1988).
Floculao por bactrias
No caso da participao de bactrias para a formao dos flocos com

leveduras, os fatores que mais se destacam so: gomas excretadas por bactrias, que provocam uma adeso entre as clulas de levedura (Serra et al.,
1976), e interao direta de parede-parede, bactria - levedura, que tambm
levaria formao de flocos. Yokoya e Oliva-Neto (1991) comprovaram a
capacidade de floculao do fermento por certas linhagens de Lactobacillus
fermentum. O tratamento trmico ou por proteases causou a destruio da
propriedade floculadora da bactria. A faixa de pH necessria para ocorrer
a floculao foi por eles determinada como uma faixa prxima de pH 3,0 a
3,5, pois em pH superior a 12 e inferior a 2,5, a desfloculao j podia ser
observada (Grfico 14.1). Na indstria, a presena de ons clcio tambm
se faz necessria para que ocorra a floculao. Este on j existe no processo
advindo das clulas de levedura e tambm do mosto de fermentao.
457
Grfico 14.1 Efeito do pH sobre a capacidade de Lactobacillus fermentum flocular Saccharomyces cerevisiae avaliada pela queda da absorbncia no incio e aps 175 minutos de contato.
Fonte: Ludwig, 2005
Mecanismo de floculao entre bactrias e leveduras
O mecanismo de floculao entre as clulas de bactrias contaminantes

e as leveduras est associado ao contato fsico entre a parede celular dos dois
microrganismos (Figura 14.2), e existe uma relao tima entre a quantidade de clulas de bactria e levedura para causar a floculao (Figura 14.3).
Segundo Yokoya e Oliva-Neto (1991), por contagem microscpica essa relao de 4,8 (bactria/levedura), o que explica a apario repentina de floculao em indstrias de produo de etanol, quando ocorre um aumento
da contaminao bacteriana principalmente por Lactobacillus fermentum.
Segundo Bromberg e Yokoya (1995), resduos de aminocidos da superfcie de Lactobacillus fermentum e resduos de carboidratos das leveduras so
responsveis pelo desenvolvimento do fenmeno da floculao. As reaes
com vrios reagentes de modificao proteica indicaram que o grupo indol
do triptofano e o grupo hidroxil fenlico da tirosina devem estar presentes
na superfcie celular bacteriana para a floculao ocorrer. Os resduos de
carboidratos na superfcie celular de leveduras, que responsvel pela ligao, provavelmente manana que tem sido demonstrado por experimentos
de inibio por acares (Santos; Yokoya, 1993).
Os estudos sobre formao de flocos entre tipos celulares diferentes,
como a floculao em usinas que pode ocorrer entre a levedura do processo e contaminantes como bactrias do gnero Lactobacillus j provocaram
muitos questionamentos, mas j certo que as estruturas qumicas compo-
458
Figura 14.2 Fotomicrografia para exemplificar a floculao entre leveduras e bactrias.

Fonte: Fermentec (Piracicaba SP)
Figura 14.3. Efeito da concentrao de bactrias (L. fermentum CCT 1396) na induo da
floculao de Saccharomyces cerevisiae 20 minutos aps adio da bactria.
Fonte: Ludwig et al., 2001
459
nentes das paredes celulares esto envolvidas neste mecanismo de adeso

(Ngondi-Ekome et al., 2003).
O mecanismo de adeso de uma linhagem de Lactobacillus fermentum
(737) ao epitlio estomacal de camundongos foi estudado e os autores
concluram que o fator promotor da adeso das clulas se encontrava no
sobrenadante do meio de cultura, pois as clulas bacterianas lavadas tiveram sua capacidade adesiva reduzida. Os fatores promotores da adeso so
especficos do hospedeiro, estando intimamente ligados s superfcies das
clulas bacterianas e epitelial, no tendo a capacidade de promover a adeso
de duas outras linhagens de Lactobacillus fermentum. A adesina mostrou-se
sensvel ao tratamento trmico e enzimtico com pronase E, indicando
sua natureza proteica (Conway; Kjelleberg, 1989).
Controle de floculao
O tratamento convencional com cido sulfrico sob agitao (Bovi; Marques, 1983) apesar de eficaz na desfloculao, no duradouro para combater a floculao do fermento causada por contaminantes da fermentao,
permitindo a volta do fenmeno em funo da alterao de pH, quando o
inculo tratado retornado dorna de fermentao. A faixa de pH utilizada
no tratamento do fermento (2,0 - 2,5) pode afet-lo, tendo como consequncia uma diminuio da viabilidade celular. O tempo de permanncia do fermento durante o tratamento 0,5 a 2 horas, e quanto maior for esse tempo e
menor o pH, maior ser o impacto prejudicial ao metabolismo da levedura.
Efeito do tratamento com cido sulfrico
A lavagem do fermento com cido sulfrico, alm de contribuir para o

controle dos contaminantes da fermentao alcolica, o principal mtodo
de controle da floculao do fermento (Oliva-Neto, 1995).
O tratamento com cido sulfrico feito diminuindo o pH do fermento,
diludo em gua, a uma faixa de 2,0 a 3,0. Ao fermento mantido na cuba,
so adicionados cido sulfrico e gua e mantidos em constante agitao. O
tempo de tratamento varivel (at 3 horas), quanto maior for este tempo,
menor a viabilidade celular. As clulas de levedura mais jovens e as mais
velhas so menos resistentes ao tratamento (Bovi; Marques, 1983).
O uso excessivo do cido sulfrico para o controle do contaminante
uma prtica danosa s clulas de levedura num processo de fermentao
alcolica (Rodine, 1985; Dorta et al., 2006). O tratamento cido excessivo
460
pode ter efeito abrasivo sobre a parede da levedura, que essencial para sua
viabilidade e produo de etanol; assim, segundo Paterson et al. (1988), a
intensidade do tratamento deve variar de acordo com o ndice de contaminao do meio. Entretanto Gomes (1988) no observou nenhuma ao
drstica sobre a viabilidade celular em experimentos de laboratrio utilizando S. cerevisiae quando o leite da levedura foi tratado em trs nveis de
pH (2,0; 2,5 e 3,0) ajustados com cido sulfrico, obtendo maiores rendimentos em relao aos controles. Foi observada a reduo de 44,3% da microbiota contaminante, em funo do vigor e tempo de tratamento (Gallo;
Canhos, 1991).
Alves da Silva (1993) mostrou por seus experimentos que o uso do cido sulfrico como agente de desinfeco do leite de leveduras constitui-se
numa das prticas mais eficientes e econmicas para a fermentao alcolica. Entretanto, seu uso no deve ser indiscriminado, mas baseado num
rigoroso acompanhamento dos parmetros fsico-qumicos e microbiolgicos do processo fermentativo.
Embora muitos pesquisadores defendam o uso do cido sulfrico como
descontaminante do processo de fermentao alcolica, para outros sua
prtica no eficiente, elevando o custo com este reagente, alm do perigo
do transporte, manipulao e danos ao meio ambiente quando o vinho delevurado (com o cido) despejado ao solo (Otenio, 1998). Para Nunes et
al. (1991), o uso do cido sulfrico inadequado, porque o tratamento cido no funciona como descontaminante. Estes pesquisadores defendem o
ajuste dos processos de centrifugao, alimentao e nutrio, como a soluo para um bom processo fermentativo. A adio de cido sulfrico e de
bactericidas, seja qual for a quantidade, inadequada e inoportuna passando, ento, a ter a funo de destruidor de leveduras e enzimas. Esta adio
causa muitas reaes qumicas resultando no desequilbrio do importante
sistema de enzima-substrato no meio de fermentao. Ainda, o tratamento cido da levedura quando floculada induz a disperso do fermento e das
bactrias, mas no sua total eliminao (Guerra; Angelis, 1998). Apesar
da eficcia do tratamento na desfloculao do fermento, esta no duradoura, sendo revertida em funo do pH quando o inculo tratado retornado dorna fermentativa (Bovi; Marques, 1983). Alm disso, a utilizao
do pH baixo (2,0-2,5) pode afetar o metabolismo da levedura (Ludwig et
al., 2001).
461
Otnio (1998) mostrou que o tratamento cido no foi eficiente para o

aumento do teor alcolico da dorna, volume do fermento da dorna, acidez
fixa, tempo de fermentao, viabilidade e brotamento da levedura na Usina
de Bandeirantes/ PR.
Um tratamento alternativo, com o uso de enzimas foi proposto por Ludwig (1998). Foram testadas duas enzimas: uma proteoltica (Novozyme
642) e uma carboidrase (SP 299), ambas da Novo Nordisk, que se mostraram eficazes na desfloculao do fermento e, ainda mais, no alteraram a
viabilidade das clulas e seu efeito foi irreversvel. Mas como enzimas no
se apresentam viveis economicamente por causa de dosagens relativamente altas, a aplicao industrial ainda no possvel. Assim, tecnologias que
possam ser estudas visando diminuio do custo de aplicao de enzimas
podem viabiliz-las para o uso industrial. Entre estas tcnicas esto sendo
estudados processos de imobilizao de proteases em quitina (Rosa, 2008;
Oliva-Neto et al. 2009), quitosana (Carignatto et al. 2010) e agarose-glioxil
e sabugo de milho glioxil (Silva et al., 2010) visando desfloculao celular de S. cerevisiae de destilarias de etanol.
Relao antagnica entre S. cerevisiae e bactrias contaminantes
Fatores que afetam o metabolismo de Saccharomyces cerevisiae
Para entender as relaes ecolgicas entre o agente catalisador do processo de produo de etanol carburante e os contaminantes envolvidos,
necessrio primeiro conhecer os fatores que afetam o metabolismo de S. cerevisiae tanto de forma isolada, como principalmente de forma sinergstica,
na qual a inibio potencializada. Entre os fatores importantes destaca-se: a) concentrao de sacarose que influi na presso osmtica do meio e
no teor de etanol via fermentao, que, em condies elevadas, pode ser
inibidor; b) pH e acidez, que afetam respectivamente a bomba de prtons e
outras funes celulares, tais como o consumo de nutrientes; c) sulfito, que
pode ter efeito inibidor no metabolismo de consumo de acar.
Inibio pelo substrato
A sacarose, principal substrato utilizado na produo etanlica no Brasil, hidrolisada primeiramente em glicose e frutose pela invertase periplas-
462
mtica (-D-fructofuranoside fructohydrolase, E.C.3.2.1.26) (Zech; Grish,

1995) produzida pela prpria levedura. Por meio do processo de difuso
facilitada da membrana do microrganismo por permeases (Cartwright et
al., 1989), tais acares fosforilados podem fazer parte da via Glicoltica.
Segundo Chapman e Bartley (1968), as enzimas respiratrias das leveduras so inibidas a partir de 2 g/l de glicose no meio, o que torna a fermentao a principal via de degradao do acar, mesmo em condies aerbias. Tal inibio denominada Efeito Crabtree (Weusthuis et al., 1994).
A fermentao etanlica com acares em concentraes excedentes a
27% (p:v) lenta e poucos sacardeos so convertidos em acares (Bafrncov et al., 1999). Altas concentraes de acares no mosto fermentativo
so responsveis pela parada ou diminuio da fermentao por causa do
aumento da presso osmtica e da alta toxicidade do etanol para as clulas
de leveduras (Bisson; Butzke, 2000; Malacrin et al., 2005). Segundo Oliva-Neto (1990), a conduo pelo processo de batelada alimentada permite
evitar o efeito inibidor do acar na fase inicial da fermentao.
Efeito protetor da trealose
A trealose um dissacardeo constitudo por duas unidades de glicose

com ligao no carbono anomrico, dessa maneira, no redutora (Leloir; Cabib, 1953, apud Panek, 1991). Segundo a literatura, a trealose um
carboidrato de reserva e de proteo das leveduras em situao de estresse
como temperatura elevada, toxicidade do etanol, desidratao celular e aumento da presso osmtica; sendo esta acumulada em presena de oxignio,
em baixas concentraes de acares, como quando h exausto da glicose
no meio durante a fase de diauxia (Panek, 1975; Crowe et al., 1984; Thevelein, 1984; Hottinger et al., 1987; Panek et al., 1990; Alcarde; Basso, 1997).
De acordo com Mackenzie et al. (1988), a resistncia de leveduras
presso osmtica foi acompanhada por acmulo de trealose. Sharma (1997)
mostrou que a exposio de Saccharomyces cerevisiae a concentraes estressantes de NaCl estimulou o acmulo de trealose na levedura e aumentou sua resistncia ao etanol.
Leveduras provenientes de trs destilarias de produo artesanal de cachaa revelaram capacidade de produzir invertase e acumular trealose na
presena de glicose, alm disso, foi observada uma forte relao entre o
463
acmulo de trealose intracelular e a viabilidade celular (Pataro, 2002). A

anlise do teor da trealose produzida pela levedura mostra ser um eficiente
parmetro para verificao do nvel de estresse em que esta submetida.
Efeito antagnico do cido ltico
Segundo Oliva-Neto (1995), a ao inibitria de cidos orgnicos sobre

as leveduras depende da concentrao do cido e da levedura usada no processo fermentativo, do sinergismo com outros produtos e a presso osmtica do meio. Existe uma ampla classe de cidos que causa danos fermentao etanlica, como cido actico, propinico, butrico, isobutrico, valrico
(Samsom et al., 1955), frmico, ltico (Maiorella et al., 1983), octanoico e
decanoico (Lafon-Lafourcade et al., 1984; Viegas et al., 1989; Viegas; S-Correia,1997). Entretanto, o cido ltico destaca-se frente aos outros cidos durante a contaminao pelas bactrias lticas que so muito frequentes
nos processos fermentativos industriais (Oliva-Neto, 1990; Halm, 1993;
Hynes et al., 1997; Nobre, 2005).
Segundo Maiorella et al. (1983), os cidos actico, frmico e ltico tm
o efeito inibitrio por interferncia qumica das funes de manuteno
das clulas. O cido ltico possui uma hidroxila extra, caracterizando-se
assim por uma menor solubilidade aos lipdeos em relao aos outros dois
citados, e sua propriedade inibitria ocorre em concentraes mais elevadas, na faixa de 10-40 g/l. Daeschel et al. (1988), utilizando espcies de
Saccharomyces cerevisiae e Saccharomyces rosei junto a Lactobacillus plantarum como contaminante, durante uma fermentao com suco de repolho,
estabeleceram concentraes inibitrias de cido ltico para o crescimento
celular a partir de 2g/l. Oliva-Neto e Yokoya (1994) constataram que aps
o 15 ciclo de um processo fermentativo, a eficincia alcolica sofreu uma
marcante inibio quando o cido ltico ultrapassou 6 g/l e o nmero de
bactrias contaminantes tornou-se maior que 1,2 x 109/ ml.
Cassio et al. (1987) demonstraram o processo ativo simultneo do prton-lactato para o acmulo de lactato no interior da clula de S. cerevisiae,
na proporo 1:1. Segundo os mesmos autores, a taxa de acmulo do referido nion no interior da clula depende da oscilao do pH fora e dentro da
clula. Permeases tambm foram citadas como envolvidas no processo de
transporte ativo do lactato (Cassio et al., 1987; Narendranath et al., 2001).
464
Contrariamente, a forma no dissociada do cido ltico atravessa a membrana plasmtica por difuso passiva. No interior da clula, a forma no
dissociada do cido ltico se ioniza, pois o pH intracelular em torno de
6,0 a 7,0 e o pKa do cido ltico igual a 3,86 causando, assim, a acidificao do citosol. Com o acmulo de H+ intracelular, a H+ -ATPase intensifica sua atividade para expulsar estes prtons (Holyoak et al., 1996).
O aumento da atividade de H+-ATPase, em funo da acidificao interna, resultar em uma significante diminuio da energia necessria para
o crescimento da levedura e outras funes metablicas essenciais (Brul;
Coote, 1999) e com o tempo no ser possvel a manuteno do pH intracelular levando a diminuio do crescimento e, finalmente, a morte celular
(Halm et al., 2004).
De acordo com Essia-Ngang et al. (1989), a presso osmtica do meio
e a quantidade do inculo exerceram influncia no grau de toxicidade do
cido ltico, durante o cultivo em melao de beterraba para a produo
de lcool. Nos testes em que havia maior presso osmtica, 2,5 g/l foram
suficientes para causar uma inibio na taxa especfica de produo de etanol. Entretanto, em mostos com baixa presso osmtica, com at 10 g/l
de cido ltico houve aumento da taxa especfica de produo do lcool. O
aumento do inculo de levedura amenizou o efeito txico do referido cido.
Efeito txico do etanol
O etanol pode tornar-se txico para a clula de levedura (Ghoose; Tyagi,

1979; Beaven, 1982; Leo; van Uden, 1982). A tolerncia a altas concentraes de etanol dependente da linhagem, e, para a maioria das linhagens
tolerantes, a concentrao mxima de etanol que no inibe o crescimento
de 10% (p:v) (Jones et al., 1981).
As enzimas hexoquinase e a lcool desidrogenase so mais sensveis a
grandes concentraes de etanol (Casey; Ingledew, 1976; Sharma; Tauro,
1987). Millar et al. (1982) consideraram a invertase, frutose-1,6-bifosfato
aldolase e piruvato descarboxilase as mais sensveis enzimas. Segundo Zech;
Grisch (1995), a invertase de Saccharomyces cerevisiae sofre inativao de
at 100% quando submetida a altas concentraes de lcool (acima de 8%
v:v) e concentraes de NaCl ocorrida no meio industrial com o melao,
sendo esta condio reversvel quando tais inibidores tm sua concentrao
diminuda.
465
O etanol no se concentra no interior da clula de Saccharomyces cerevisiae (Guijarro; Lagunas, 1984, apud Cartwright, 1989). Segundo a literatura, o lugar de ao do etanol na parte fosfolipdica das membranas, onde se
liga no interior hidrofbico causando enrijecimento e, consequentemente,
acarretando distrbios dos sistemas de transportes (Loureiro-Dias; Peinado, 1982; Leo; van Uden, 1982; Ingram, 1985). Alm disso, diminui a
capacidade de seletividade da membrana plasmtica, permitindo a sada de
constituintes celulares e a entrada passiva de prtons, reduzindo, assim, o
potencial de membrana e, por fim, interferindo em todos os sistemas que
requeiram fora protomotiva. Tal descontrole celular acaba resultando em
deficincias nutricionais, o que intensifica a inibio alcolica (Casey et al.,
1984; Dombek; Ingram, 1986).
O etanol inibiu de forma no competitiva o transporte de maltose e glicose atravs da membrana plasmtica (Leo; van Uden, 1982; Loureiro-Dias; Peinado, 1982) de Saccharomyces cerevisiae.
Oxignio molecular (Andreason; Stier, 1954, Buttke et al., 1980, Buttke; Pyle, 1982) e lipdeos tm sido acrescentados em processos fermentativos para a manuteno da atividade de altas taxas de rendimento alcolico,
uma vez que a produo de cidos graxos insaturados fica comprometida
em anaerobiose (Thomas et al., 1978, Beavan et al., 1982, Casey et al.,
1984). Foi observada uma melhora do metabolismo da levedura durante a
fermentao quando se adicionou colesterol de membranas de mamferos
(Chin et al., 1984).
Efeito inibitrio do sulfito
O sulfito de sdio no processo industrial incorporado no melao de

cana na faixa de 200 a 700 mg/l (Oliva-Neto; Yokoya, 2001), formando algumas vezes mostos com at 300 mg SO2/L, especialmente quando envolve a presena de caldo sulfitado da fbrica de acar.
Segundo a literatura, o dixido de enxofre uma substncia muito reativa e sua ao inibitria est diretamente relacionada com o pH, j que se
caracteriza por duas constantes de dissociao. Entre os valores de pH mais
baixos, coexistem as formas bissulfito (HSO3-) e dixido de enxofre (SO2),
com pK1 = 1,77, enquanto entre valores de pH 5,0 e 9,0, h uma composio mista de bissulfito e sulfito (SO3-2), sendo o pK2 = 6,9. Uma vez que o
466
pH da fermentao baixo (ambiente cido), parte do sulfito encontra-se

na forma mais txica (SO2) na ausncia de oxignio. O SO2 transportado
para o interior da clula, entretanto, converte-se nas outras duas formas,
por causa de o ambiente ser caracterizado pelo valor de pH prximo a 6
(Carr et al., 1976; Anacleto; van Uden; 1982, Cartwright et al., 1989).
O bissulfito pode formar cidos hidroxisulfnicos pela reao com grupos carbonlicos de aldedos, cidos orgnicos e outros. Compostos como
acetaldedo-bissulfito so bactericidas. O bissulfito ao reagir com o acetaldedo bloqueia a regenerao do NAD requerido pela gliclise em leveduras (Harada et al. cit. Warth, 1985).
Segundo Alves (1994), Basso (1991) constatou que, na adio de 100 mg
SO2/l na forma de NaHSO3, 40% de tal substncia reage com componentes
do mosto e apenas 45% do acetaldedo terico pode ser detectado. Em tal
experimento, ocorreram uma diminuio da eficincia fermentativa e do
crescimento celular. Brechot et al. (1969) verificaram a inibio de 30% a
40% na fermentao e de 40% a 80% na respirao por adio de sulfito no
mosto. Maiores teores de metabissulfito, na produo de etanol combustvel a partir da beterraba, foram responsveis por diminuio na produtividade alcolica e queda na viabilidade celular (Gibbons; Westby, 1987).
Gutierrez (1988), entretanto, verificou que na presena de 219 mg de
SO2/l de meio de melao no alterou a produo de etanol a pH 4,0, havendo diminuio de lcoois superiores e elevao no teor de acetaldedo. Alves
(1994) chegou concluso que a presena de sulfito no mosto fermentativo
pode ser benfica se este atuar como bactericida, pois, segundo tal autora, a
contaminao pelo microrganismo causa maiores danos ao rendimento alcolico. Oliva-Neto e Yokoya (2001) concluram que o CMI (Concentrao
Mnima Inibitria) para o sulfito de sdio, em pH 4,5, foi na faixa de 1040 mg/l para bactrias lticas, j para a levedura o CMI foi de 5000 mg/l,
nas mesmas condies. Em pH 6,5 o valor do CMI para a levedura foi o
mesmo; entretanto, para as bactrias lticas, este ficou na faixa de 312-625
mg/l, mostrando ser mais eficiente para estas na faixa de pH 4,5.
Anacleto e Van Uden (1982) estudaram a cintica de morte celular em
funo da elevao da concentrao do sulfito e da temperatura. Tais pesquisadores propuseram, por meio de um modelo cintico da morte celular,
que existem dois stios na superfcie da membrana que esto envolvidos
com o grau de toxicidade do sulfito. O primeiro SDD (provavelmente uma
467
protena) teria alta afinidade pelo SO2, funcionando como um catalisador e

diminuindo a energia de ativao para a termodesnaturao ou ativao da
ATPase. O segundo stio de ligao seria o EM que, em presena do dixido
de enxofre, aumentaria a entropia do processo, induzido pela ocupao do
primeiro stio. A morte celular ocorre quando h a saturao dos dois stios.
Os nveis de ribonucleosdeos fosfatos de leveduras sofrem um drstico
decrscimo na presena de 2mM de SO2 a pH 3,6. A atividade de ATPase
aumentada com 1mM de SO2 (Maier et al., 1986).
pH e a atividade de H+-ATPase
Um fator muito importante para a produo etanlica o potencial hidrogeninico do meio, tanto para o crescimento da levedura, taxa de fermentao e formao de produtos, quanto para o controle da contaminao
bacteriana (Alves, 1994). As bactrias so menos resistentes ao pH baixo
e tm menor velocidade de crescimento que as leveduras em tal situao.
Enquanto para as bactrias lticas o pH ideal na faixa de 6,0, a levedura
S. cerevisiae apresenta um bom rendimento na produo alcolica em pH
acima de 3,8 (Kandler; Weiss, 1986).
Segundo Souza et al. (2001), a enzima H+-ATPase da membrana plasmtica de S. cerevisiae controla um importante processo fisiolgico. Por meio
da Bomba de prtons, tal enzima regula o pH intracelular (pHi) e promove
a fora motora para a elevao de nutriente. Uma marcante caracterstica
desta enzima o fato de esta ser ativada em presena de glicose que causa a
acidificao interna aumentando o nvel de sua atividade em clulas de leveduras (Becher dos Passos et al., 1992; Souza et al., 2001). A levedura para
evitar que seu pHi se torne muito cido, libera H+ para o meio externo por
meio da ativao de H+-ATPase, alm de absorver K+ e aminocidos bsicos, excretar cidos orgnicos e liberar gs carbnico (Coote; Kirsop, 1976).
A H+-ATPase plasmtica sofre alteraes conformacionais em funo
de H+ (Blanpain et al., 1992), assim em pH igual a 4,0 triplica sua atividade,
dobrando a afinidade por ATP, sem, porm, causar mudanas no pH timo
(6,0) (Eraso; Gancedo, 1987). Quando o pH diminui de 6 para 3, existe um
aumento da sensibilidade da levedura ao etanol (Gao; Fleet, 1988), dissipando a fora prton motiva da membrana.
Quando a clula sofre um dano metablico a H+-ATPase presumivelmente a ajuda ativando a fora protonmotiva por meio da membrana plas-
468
mtica com o gasto de ATP. A acidificao intracelular ocorre na presena

de estressores que afetam a organizao da membrana plasmtica (Viegas;
S-Correia, 1991; Alexandre et al., 1996; Carmelo et al., 1997; Viegas et
al., 1998; Fernandes et al., 1998). Etanol (Rosa; S-Correia, 1991), cidos
octanoico, decanoico (Viegas; S-Correia, 1997), succnico, actico (Carmelo et al., 1997), cinmico (Chambel et al., 1999), pH cido (Eraso; Gancedo, 1987), escassez de fonte de nitrognio (Benito et al., 1992) e temperaturas supratimas (Viegas et al., 1995) estimulam in vivo a atividade de
H+-ATPase da levedura.
Segundo alguns pesquisadores, a ativao desta enzima no pode ser
atribuda a sua sntese, e sim a alteraes ps-traduo desta protena, uma
vez que o nmero total de enzima diminui em condies de estresse e sua
atividade aumentada. Esta ativao de ATPase pode ser causada, ao menos em parte, pela alterao na poro lipdica da membrana plasmtica
que modifica a disposio de suas enzimas contribuindo para o maior contato com seu substrato (Viegas et al., 1995; Carmelo et al., 1997). Chang e
Slaman (1991) mostraram uma correlao entre a fosforilao da glicose e a
ativao de H+-ATPase.
Na Figura 14.4, est esquematizado o mecanismo de acidificao intracelular de S. cerevisiae quando a bomba de prtons j no consegue mais
responder ao excesso de H+ do meio, resultando na morte celular.
Figura 14.4 Fluxograma explicativo da inibio da fora prton motiva e pelo excesso de
acidificao do meio.
469
O estudo (Dorta et al., 2006) avaliando o sinergismo entre cido ltico,

sulfito, pH e etanol como inibidores da fermentao alcolica de mosto de caldo de cana foi realizado com dois S. cerevisiae de uso industrial
(Pe-2 e M-26). Entre as linhagens foram submetidas adio de 200 mg/l
de NaHSO3, 6 g/l de cido ltico, 7,5% at 9,5% de etanol e pH 3,6 e 4,5.
Entre estes fatores, o pH baixo (3,6) seguido do etanol a 9,5% foram os
maiores fatores de estresse para as leveduras durante a fermentao. Na
Figura 14.5, so demonstradas as diferenas na morfologia das leveduras
submetidas aos fatores de estresse em S. cerevisiae Pe-2, em que o pH 4,5
protegeu a levedura demonstrada pelo maior nmero, tamanho e forma
ovalada (A) em relao s leveduras inibidas, mais estreitas e em menor
nmero.
O trabalho apresenta tambm, no meio com pH 4,5 (meio 5,0) em relao ao meio 1 (com todos os inibidores), os seguintes resultados: maior
viabilidade celular (Grfico 14.2), ndice de brotamento (Grfico 14.3),
rendimento e produtividade etanlica, consumo de acar, e maior teor de
trealose, bem como menor teor de protena solvel (Grfico 14.4), este ltimo indicando a autlise das clulas no meio mais cido. Os autores concluem que muito importante que o pH do meio no seja excessivamente
acidificado, para preservar a bomba de prtons da levedura, e assim proteger o metabolismo dos vrios fatores de estresse aos quais a levedura
submetida em condies industriais (Dorta et al., 2006).
Figura 14.5 Fotomicroscopia (1000 x) do efeito morfolgico de S. cerevisiae Pe-2 submetida a uma fermentao num meio contendo diversos fatores inibidores (cido ltico, sulfito,
etanol), em pH 4,5 Meio 5 (A) e pH 3,6 Meio 1(B).
Fonte: Dorta, 2006
470
Grfico 14.2 Viabilidade das clulas de leveduras aps fermentao em diferentes condies de estresse fisiolgico. Meio 1 (todos inibidores), Meio 2 (todos menos sulfito), Meio 3
(todos menos acidez ltica), Meio 4 (todos menos etanol), Meio 5 (todos menos pH baixo),
Meio 6 (controle sem inibidores). PE- 2 ( ) e M-26 ( ).
Fonte: Dorta et al., 2006
Grfico 14.3 Brotamento das clulas de leveduras aps fermentao em diferentes condies de estresse fisiolgico. Meio 1 (todos inibidores), Meio 2 (todos menos sulfito), Meio 3
(todos menos acidez ltica), Meio 4 (todos menos etanol), Meio 5 (todos menos pH baixo),
Meio 6 (controle sem inibidores). Linhagens PE- 2 ( ) e M-26 ( ).
Fonte: Dorta et al., 2006
471
Grfico 14.4 Protena solvel no meio aps fermentao de S. cerevisiae em diferentes

condies de estresse fisiolgico. Meio 1 (todos inibidores), Meio 2 (todos menos sulfito),
Meio 3 (todos menos acidez ltica), Meio 4 (todos menos etanol), Meio 5 (todos menos pH
baixo), Meio 6 (controle sem inibidores). Linhagens PE- 2 ( ) e M-26 ( ). Fonte: Dorta et
al., 2006
Relao ecolgica entre S. cerevisiae e Lactobacillus sp durante a

fermentao para produo de etanol carburante
Os Lactobacillus tm ampla distribuio, so espcies principalmente

acidfilas e tolerantes ao etanol, vulgarmente denominadas de bactrias lticas, so sacarolticas (Tilbury, 1975; Priest, 1981; apud Alves, 1994), sendo
exigentes em termos nutricionais, principalmente quanto aos aminocidos
(Oliva-Neto; Yokoya, 1997). Segundo Hynes et al. (1997), a contaminao
por bactrias lticas o maior problema da fermentao industrial de lcool. O crescimento das referidas bactrias reduz o rendimento alcolico
por causa do consumo de glicose que seria destinada sntese etanlica,
alm da competio dos nutrientes do meio e do efeito txico do cido ltico
(Yokoya, 1991, Hynes et al., 1997).
Walksman, segundo Alves (1994), em 1945 concluiu que as relaes antagnicas entre as leveduras e as bactrias lticas so marcadas por um amplo nmero de substncias txicas, abrangendo desde compostos simples
como cidos orgnicos, lcoois, at polipeptdeos, protenas e derivados do
metabolismo secundrio.
472
Alguns nutrientes tm sido propostos como estimulantes do crescimento de bactrias lticas durante a fermentao. Aminocidos liberados pela
autlise das leveduras, monossacardeos pela hidrlise da sacarose pela levedura e concentraes de etanol abaixo de 2% tm sido detectadas como
estimulantes do crescimento bacteriano em cultura mista com leveduras
durante a fermentao (Essia-Ngang et al., 1992; King; Beelman, 1986;
Selby-Smith et al., 1975).
O comportamento de fermentao alcolica (batelada alimentada) em
cultivo misto de leveduras (Saccharomyces cerevisiae) e bactrias (Lactobacillus fermentum) foi estudado por Oliva-Neto e Yokoya (1996) que observaram que as leveduras foram inibidas, provocando uma reduo de 14,4% na
eficincia alcolica por causa da acidez produzida pela bactria quando 10 g/l
de extrato de levedura foram adicionados ao meio, e o decrscimo na produo alcolica bastante significativo quando a acidez total expressa em cido
ltico/litro de 6,0g no meio. Segundo os autores, a infeco bacteriana
estimulada pelos nutrientes (aminocidos) que so liberados pela autlise das
leveduras. Este fato se desenvolve especificamente em destilarias que operam com elevada concentrao de clulas e baixa viabilidade das leveduras.
Um estudo realizado para avaliar quais so os nutrientes faltantes no caldo
de cana que so os determinantes do crescimento de bactrias lticas na fermentao alcolica, revelou que o estmulo do crescimento de Lactobacillus
fermentum na fermentao alcolica por Saccharomyces cerevisiae em processo com reciclo de clulas se deve a: a) existncia de competio entre estes
microrganismos; b) inibio do crescimento das leveduras pela acidez produzida pelas bactrias; c) nutrientes liberados pelas leveduras aps alguns ciclos
estimulam o crescimento das bactrias; d) os aminocidos so estes nutrientes (Tabela 14.1 e Grfico 14.5), e leucina, isoleucina e valina adicionados
no meio formulado com caldo de cana reidratado so fundamentais para o
desenvolvimento desta bactria, sem eles o crescimento nulo; e) fenilalanina, alanina, cido glutmico, triptofano, serina e metionina estimulam o crescimento destas bactrias; f) tirosina, cido asprtico e lisina no so essenciais
e nem estimulantes. Pode-se afirmar que os aminocidos so os principais
nutrientes necessrios para estimular o crescimento de Lactobacillus durante
a fermentao alcolica. A inibio e morte das leveduras levam a um estmulo do crescimento das bactrias contaminantes, as quais causam inmeros
prejuzos ao processo, se no forem controladas (Oliva-Neto; Yokoya, 1997)
473
Tabela 14.1 Efeito da suplementao de 17 aminocidos e excluso de um deles no meio de

cultura contendo caldo de cana desidratado no crescimento de Lactobacillus fermentum a 30C
Classe*
Aminocido excludo
1a
2a
3a
aa1
Tyr
Asp
Lys
Ile
Val
Leu
Phe
Ala
Glu
Pro
His
Arg
Thr
Trp
Ser
Met
Cys
Lactobacillus fermentum linhagens

CCT 1400
CCT 1407
CCT 0559
18h.
48h.
18 h.
48h.
18 h.
48 h.
+++
+++
++
+++
+++
+++
+++
+++
++
+++
+++
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++
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++
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++
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+++
++
+++
++
+++
++
+++
++
+++
+++
+++
* classe: 1a: a retirada de um aa no provoca nenhum efeito no crescimento; 2a: provoca ausncia completa
de crescimento, 3a: provoca efeito inibitrio parcial no crescimento bacteriano.
Legenda: ausncia de turbidez (crescimento); ++ turbidez 0.10-0.18;
+++ acima de 0.19; aa1, conjunto de 17 aminocidos puros conforme siglas.
Grfico 14.5 Efeito de 17 aminocidos adicionados no mosto de caldo de cana, durante a

fermentao alcolica em cultivo misto S. cerevisiae e Lactobacillus fermentum.
Fonte: Oliva-Neto, 1995
474
Outro estudo mais recente foi realizado para avaliar o antagonismo entre
S. cerevisiae utilizado em fermentaes industriais (BG-1, CAT-1, PE-2
e Fleischmann) e as bactrias contaminantes L. fermentum, L. fructosus,
L. plantarum, em fermentaes com 5 reciclos de clulas. A presena das
bactrias praticamente no afetou a viabilidade das leveduras industriais
durante os reciclos. No entanto, as linhagens bacterianas heterofermentativas (L. fermentum e L. fructosus) apresentaram melhor crescimento e maior
viabilidade em cocultivo com as leveduras do que L. plantarum. Tambm
na presena de L. fermentum, L. fructosus observou-se uma significativa
reduo no rendimento alcolico. A produo de lactato por tais linhagens
foi muito prxima e, em alguns ciclos, at maior que a produo pela linhagem L. plantarum FT025B. No entanto, num experimento apenas com
cada uma das bactrias e uma levedura, verificou-se que, nos tratamentos
com L. plantarum FT025B, a produo de glicerol foi menor at mesmo
em relao ao controle. O autor sugere que o cido ltico e o actico, juntamente com o etanol, podem ter agido sinergisticamente no metabolismo e
crescimento das leveduras, resultando principalmente em uma diminuio
do rendimento alcolico. tambm provvel que as linhagens bacterianas
heterofermentativas tenham sido capazes de resistir melhor aos elevados
teores de etanol excretados pelas leveduras e encontrados no processo industrial, uma vez que tambm so capazes de produzir tal composto (Gomes, 2009).
Controle dos microrganismos contaminantes

O controle dos microrganismos contaminantes da fermentao a melhor maneira de evitar a floculao do fermento, j que este fenmeno est
associado ao tipo e ao grau de contaminao. Entretanto este controle no
facilmente conduzido nas destilarias, o que torna comum o elevado nvel
de contaminaes microbianas. Entre as dificuldades esto a pouca oferta de
produtos que seletivamente atuem com eficincia apenas nos contaminantes,
sendo incuos para o crescimento de S. cerevisiae. Outra dificuldade est diretamente associada impossibilidade de trabalhar em condies asspticas,
ainda que seja feita a esterilizao do mosto.
Para combater as infeces microbianas na fermentao alcolica, faz-se
necessrio o uso de produtos qumicos antimicrobianos na moenda e na fer-
475
mentao. Entre os produtos mais usados na moenda esto os biocidas quaternrios de amnia e organossulfurados. Tais produtos so de uso exclusivo para a moenda, pois afetam a levedura. Para a fermentao, atualmente
so usados os antibiticos monesina (Kamoran) e virginiamicina (incuos
levedura), e o biocida dixido de cloro que afeta S. cerevisiae em dosagens
superiores a 50 mg/l, porm nesta dosagem a inibio de L. fermentum
parcial (Meneghin et al., 2008).
Alm destes, j foram testados no passado inmeros outros produtos.
A penicilina foi estudada no passado como desinfetante na fermentao
alcolica de mosto de milho, promovendo um aumento de 17,5% no etanol produzido, e uma reduo de 65% na acidez total do mosto fermentado
(Borzani, 1957), e Aquarone (1959) verificou que 500 U/l de penicilina no
mosto de melao de cana originava vinhos mais ricos em etanol e menos
cidos. Porm com o passar do tempo, o uso da penicilina contnuo em escala industrial levou a uma adaptao biolgica dos contaminantes, alm
do fato de tratar-se de produtos muito especficos, o que limita a ao na
fermentao alcolica mista. Cruz et al. (1985) demonstraram que a adio
de penicilina (500 U/L.) no mosto no foi suficiente para o controle de uma
das linhagens de bactrias gram-positivas testadas por causa de alteraes
no equilbrio natural da microflora contaminante.
Antibiticos e biocidas: penicilina V potssica, virgiamicina, nisina,
sanicol, nasaquat, busan 881, busan 1001, busan 1212, busan 1202 foram
testados em diferentes bactrias indutoras de floculao e quando aplicados isoladamente mostraram-se ineficientes no controle destas bactrias
(Guerra, 1995).
A determinao da Concentrao Mnima Inibitria (CMI) para antibiticos de uso para bactrias mostrou que a penicilina V cida contra Lactobacillus fermentum e Leuconostoc mesenteroides, tanto os isolados de destilarias
produtoras de etanol, como as linhagens tipo (ATCC) foi de 0,1 a 0,2 mg/l.
Cefamandole apresentou uma CMI de 0,26-0,36 mg/l para L. fermentum,
mas foi menos eficaz para L. mesenteroides (0,36-1,45 mg/l). Clindamicina foi o antibitico mais eficaz para L. fermentum (0,05-0,10 mg/l), porm
menos eficaz contra L. mesenteroides, com CMI de 0,05-0,40 mg/l (Oliva-Neto; Yokoya, 2001).
Rosales (1989 apud Oliva-Neto, 1995) demonstrou que a utilizao de
quaternrios de amnia tem efeito positivo no controle bacteriano da fer-
476
mentao e ainda detectou diminuio nas contagens de Bacillus subtilis,

por meio da combinao de penicilina e quaternrios de amnia.
Num estudo de biocidas (Oliva-Neto; Yokoya, 2001) de uso industrial,
foram determinadas as CMI para S. cerevisiae, L. fementum e L. mesenteroides, onde foram avaliados: etilenobisditiocarbamato de zinco e mangans,
metilditiocarbamato, dimetilditiocarbamato, 3 metil 4clorofenol, 2 benzil
4clorofenol, o-fenilfenol, bromofenato, 2 cloro acetamida, benzil lcool
formaldedo, tiocianato, n alquildimetilbenzil cloreto de amnio, formaldedo e glutaraldedo. Destes, os que mais se destacaram por ser efetivos
contra as bactrias sem que afetassem a levedura foram o metilditiocarbamato que foi eficiente contra L. fermentum (CMI= 2,5 mg/l) e menos contra S. cerevisiae (CMI= 5,0 mg/l); e o formaldedo (CMI para L. fermentum
e L. mesenteroides de 11,5-23 mg/l) e 46,3 mg/l para S. cerevisiae. Tiocianato (CMI = 1,5-5,0 mg/l), metilditiocarbamato (2,5 mg/l), bromofenato
(CMI 11,5-23 mg/l) foram eficientes contra as bactrias e as leveduras, o
que limita a possibilidade para uso apenas na moenda.
Oliveira et al. (1982) estudaram o desempenho do biocida de marca
busan 881 (Buckmann lab.) como controlador da infeco bacteriana na
fermentao em mosto de cana. Eles verificaram que este produto mais
eficiente quando colocado na fase inicial do processo, obtendo maior teor
alcolico e menor acidez em relao ao controle.
O composto 3,4,4 triclorocarbanilida (TCC) combinado com dodecilsulfato de sdio (DDS) numa taxa 1:4 (m/m) em meio aquoso um dos
poucos biocidas que inibe seletivamente Lactobacillus fermentum e Leuconostoc mesenteroides (CMI <0,125-1,0 mg/l), sem inibir S. cerevisiae, tendo
em vista que a CMI para a levedura foi muito maior (16 mg/l). 1,8 g/l de
TCC foi imobilizado em alginato de sdio, e aplicado na fermentao alcolica com ndice elevado de L. fermentum como contaminante. Houve inibio da bactria, controle da acidez, aumento da viabilidade da levedura e
at 20,8% de aumento na eficincia alcolica durante 8 ciclos fermentativos
(Oliva-Neto; Yokoya, 1998). Estes mesmos autores realizaram outro experimento com 0,075 g/l de TCC em alginato e 1,67 mg/l DDS no mosto e
no s inibiu L. fermentum inoculado no incio do processo, como manteve
estvel por 24 reciclos fermentativos com o mesmo produto imobilizado
(Grfico 14.6).
477
Alguns estudos foram realizados no intuito de obter linhagens de leveduras que naturalmente inibam as bactrias lticas. O estudo comparativo
entre a linhagem S. cerevisiae M26, isolada de destilarias de etanol numa seleo de linhagens capazes de inibir L. fermentum (Oliva-Neto et al., 2004)
produziu maior acidez que a Pe-2, com maior produo de cido succnico,
um importante inibidor de bactrias lticas (Dorta et al., 2006).
Grfico 14.6 Efeito da aplicao do 3,4,4 triclorocarbanilida (TCC) com 1,67 mg/l DDS
no mosto de caldo de cana na reduo da acidez ltica provocada por Lactobacillus fermentum
em fermentao mista com S. cerevisiae.
O efeito de vrios agentes antimicrobianos foi estudado contra L. fermentum isolado de destilarias de etanol lcool, e constatou-se que os agentes
do grupo das sulfonamidas, gentamicina e polimixina no so efetivos contra esta bactria. Os antimicrobianos cido nalidxico, sulfalazina, gentamicina, sulfacetamida, sulfametoxazol e trimetropim, sulfadiazina, e polimixina B apresentaram CMI superior a 40 mg/l. Nitrofurantona foi efetiva
contra L. fermentum com CMI = 15 mg/l e mais altas concentraes para
S. cerevisiae (CMI >40 mg/l). O antibitico monensina (HJ Kamoran)
amplamente e comumente usado no pas para controle da fermentao alcolica foi o antibitico de maior destaque contra L. fermentum (CMI 0,32
mg/l). Infelizmente, este produto tem sido detectado pelos compradores da
farinha de levedura exportada como subproduto pelas destilarias de etanol,
o que est limitando o uso da monensina e exigindo que alternativas sejam
criadas. Os biocidas testados com maior xito foram o TCC (3,12 mg/l),
as combinaes TCC com cloreto de benzetnio (3,12 mg/l) e o TCC com
cloreto de benzalcnio numa proporo 1:1 que inibiu seletivamente L. fer-
478
mentum (CMI = 1,53 mg/l) em relao ao S. cerevisiae (CMI = 12,5 mg/l),

o que pode ser estudado para uso tanto na moenda como na fermentao
industrial para obteno do bioetanol (Oliva-Neto et al. 2009).
O efeito de diferentes concentraes de etanol (15 a 35% v/v) foi estudado como uma alternativa ao tratamento cido do fermento de destilarias de
etanol, visando inibio de Lactobacillus contaminantes do processo. As
leveduras foram contaminadas com sete diferentes espcies de Lactobacillus
para verificao de sua sensibilidade ao etanol. Nos tempos (0, 30, 60, 90
e 120 minutos), foram retiradas amostras para contagens. Os Lactobacillus
se mostraram sensveis ao etanol, sendo mais evidentes as concentraes
maiores que 20% (v/v). A autora ainda testou a termolabilidade de Lactobacillus que no sobreviveu a temperaturas de fervura do caldo de cana
por mais do que 4 minutos indicando que as contaminaes no processo
ps-tratamento trmico se devem a novas contaminaes (Ceballos-Schiavone, 2009).
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Parte III
Utilizao de bioenergia
15
Combustvel renovvel em trator agrcola:
experincias na utilizao de biodiesel1
Afonso Lopes, Gilberto Hirotsugu Azevedo Koike,
Leomar Paulo de Lima, Miguel Joaquim Dabdoub,
Felipe Thomaz da Cmara, Melina Cais Jejcic de Oliveira,
Murilo Coelho Theodoro Neves
Introduo
Este captulo apresenta uma introduo sobre motores de combusto
interna, biodiesel em geral e biodiesel em aplicao direta em motores de
ignio por compresso.
Histrico da evoluo dos motores

de combusto interna
Segundo Martins (2006), os primeiros trabalhos visando ao desenvolvimento de veculos automotores foram realizados no sculo XVIII simultaneamente por vrias pessoas em diversos pases. Credita-se, no entanto, ao
francs Nicolas Cugnot o primeiro veculo a andar por meio de sua prpria
energia, em 1769.
Em 1860, o francs Etienne Lenoir construiu o primeiro motor de combusto interna importante. Esse motor era constitudo de um s cilindro, no
qual era injetado gs primeiro em uma extremidade e depois na outra. O mbolo era jogado de uma extremidade para a outra pelas exploses provocadas
por centelha eltrica. Uma haste articulada no mbolo em um volante fazia
1 Os autores agradecem Fapesp e ao CNPq.
492
UTILIZAO DE BIOENERGIA
este ltimo girar. Em 1862, outro francs, Alphonse Beau de Rochas, publicou a anlise termodinmica do novo motor, estabelecendo o princpio do
ciclo de quatro tempos. Em 1876, os alemes N. A. Otto e Eugen Langen
aplicaram com sucesso esse princpio, vendendo cerca de 35 mil motores por
todo o mundo para instalao em pequenas fbricas. O ciclo de quatro tempos, ainda hoje, o principio bsico da maioria dos motores de combusto interna sendo empregado na quase totalidade dos veculos automotores atuais.
Em 1885, o alemo Karl Benz colocou pela primeira vez na estrada um
veculo equipado com motor de combusto interna de razovel segurana e
por isso alguns o consideraram o pai do automvel.
Foi, porm, em 1886, com o alemo Gottlieb Daimler, patenteando um
motor de combusto interna de alta rotao, que o automvel se mostrou
realmente vivel.
Em 1893, os irmos Charles e Frank Duryea, dos Estados Unidos,
construram uma carruagem com motor a gasolina de 4 cv e velocidade
de 15 km/h. Levassor Krebs revolucionou o desenho do automvel, em
1894, projetando o Panhard com motor vertical, montado na dianteira e
protegido por um capuz sobre um quadro de chassi que se tornou clssico.
O outro tipo importante de mquina trmica o motor diesel, inventado por Rudolf Diesel e patenteado em 1892. A atividade do mecanismo
originada pela compresso do ar e do combustvel at ao ponto em que a
mistura, no interior da cmara de combusto, atinge uma presso e uma
temperatura suficientes para provocar a exploso. Uma vez que o arranque
se processe, o motor continua a rodar por si prprio, desde que o fluxo de
ar e de combustvel no seja interrompido. O diesel um leo derivado do
petrleo e mais pesado quando comparado com a gasolina.
Importncia dos motores de ignio por compresso

(ciclo diesel)
Em relao aos meios mecnicos de grande envergadura, a opo pelos
motores diesel inevitvel. Os grandes construtores dedicam-se ao desenvolvimento desses mecanismos, tentando sempre combater os nveis de
poluio.
No mar, de prever que o diesel continue a ser utilizado, porque para
obter grandes potncias, s recorrendo a combustveis alternativos, como a
energia nuclear, o que iria trazer problemas adicionais.
COMBUSTVEL RENOVVEL EM TRATOR AGRCOLA
493
Tambm o transporte ferrovirio no pode passar sem as histricas locomotivas a diesel. No h dvida de que os comboios eltricos so silenciosos e no poluentes, representando a soluo ideal para percursos urbanos
ou em zonas altamente povoadas, mas os elevados custos da eletrificao
das vias levantam a questo de que as longas distncias a serem percorridas
podem ser mais facilmente vencidas com as locomotivas a diesel.
Poluio atmosfrica gerada por motores

de combusto interna
Juntamente com as mquinas trmicas vieram os problemas com a poluio atmosfrica. Segundo Macedo (2005), o suprimento mundial de
energia baseado em combustveis fsseis (75%); a escala de uso leva rapidamente ao esgotamento das fontes, deixando uma pesada carga adicional
para as geraes futuras. Adicionalmente, o uso de combustveis fsseis
responsvel por grande carga de poluio local e pela maior parte da emisso de gases de efeito estufa. O desafio atual a busca de fontes renovveis
de energia e de aumento na eficincia de gerao e uso.
A mudana global do clima um dos mais graves problemas ambientais
do sculo, que traz consequncias possivelmente catastrficas. Esse problema vem sendo causado pela intensificao do efeito estufa, que por sua vez
est relacionado ao aumento da concentrao, na atmosfera da terra, de gases que possuem caractersticas especficas. Esses gases permitem a entrada
da luz solar, mas impedem que parte do calor no qual a luz se transforma
volte para o espao. Esse processo de aprisionamento do calor anlogo ao
que ocorre em uma estufa, da o nome atribudo a esse fenmeno e tambm
aos gases que possuem essa propriedade de aprisionamento parcial de calor,
chamados de Gases de Efeito Estufa (GEE), dentre os quais se destaca o
dixido de carbono (CO2) (Pereira, 2003). Na Figura 15.1, esquematiza-se
o efeito estufa.
Segundo Pereira (2003), importante notar que o CO2, bem como os
outros GEE em geral (vapor dgua, por exemplo) no possuem as caractersticas bsicas de um poluente. Deve-se ressaltar tambm que o efeito
estufa um fenmeno natural e bem-vindo, pois sem ele o Sol no conseguiria aquecer a Terra o suficiente para que ela fosse habitvel. No entanto,
a intensificao desse efeito de fato um problema, e sua principal causa
494
Figura 15.1 Efeito estufa

Fonte: Mossmann, 2003
a queima de combustveis fsseis. Com a Revoluo Industrial e o advento

do motor de combusto interna, as emisses de GEE decorrentes da queima desses combustveis vm aumentando de forma abrupta. justamente esse aumento da concentrao de GEE na atmosfera que vem causando
a intensificao do efeito estufa. Esse calor adicional tem uma influncia
determinante sobre o funcionamento do clima do planeta, j que essa energia responsvel pela circulao dos ventos e dos oceanos, pela evaporao
e pela precipitao.
Na Figura 15.2, ilustra-se o comportamento do efeito estufa com a emisso de gases provocada por motores que utilizam combustveis fsseis.
Uma maneira de se neutralizar o efeito estufa a utilizao de combustveis renovveis, tais como o etanol e o biodiesel. O CO2 gerado na combusto
seria consumido na fotossntese da planta que daria origem ao combustvel.
Na Figura 15.3, ilustra-se o comportamento do efeito estufa com a emisso de gases provocada por motores que utilizam combustveis renovveis.
Em motores de ignio por centelha existem tecnologias que vm sendo
desenvolvidas h dcadas, e desde o final dos anos 1970 j so comercializados automveis movidos a etanol.
Para motores de ignio por compresso, no h ainda sistemas eficazes
para a utilizao de combustveis alternativos que auxiliariam na diminuio do efeito estufa e na emisso de poluentes.

Fonte: Joseph Jr., 2003

Fonte: Joseph Jr, 2003
495
496
Biodiesel em motores
Especificamente para o motor diesel, na Europa e nos Estados Unidos,
o combustvel alternativo foi denominado como diesel vegetal ou simplesmente biodiesel, definido pela National Biodiesel Board como uma mistura de monoalquil steres de cidos graxos de cadeia longa, proveniente
de fontes renovveis, como leos vegetais ou gordura animal, utilizado em
substituio, parcial ou totalmente, aos combustveis fsseis em motores do
ciclo diesel (NBB, 2002).
No Brasil, a literatura retrata o assunto biodiesel, oriundo da iniciativa
de instituies de ensino e/ou pesquisa, como o caso do grupo da Universidade Federal do Cear (UFC) que, entre outros fatos, relata a organizao
de um Seminrio Internacional de Biomassa, realizado em Fortaleza, em
1978, e o depsito da primeira patente brasileira de biodiesel denominada
PI-8007957 de 1980 (Parente, 2003). Outros grupos, igualmente importantes, surgiram em vrias instituies, como o caso de Ufla, Embrapa,
Coppe-UFRJ, UFPR e a parceria entre a USP de Ribeiro Preto e a Unesp
de Jaboticabal, alm de outros centros, por ora no citados, como o caso
da iniciativa privada. Com o avano tecnolgico relacionado ao processo
de produo do biodiesel e a macia cobertura da imprensa, os diversos
segmentos polticos ficaram atentos, at mesmo demonstrando apoio e tratando da parte de legislao. A exemplo disso, em 2004, o governo federal anunciou o Polo de Biocombustvel para Pesquisa e Desenvolvimento,
na cidade de Piracicaba (SP), assim como, no dia 29 de junho de 2004, a
Secretaria da Agricultura do Estado de So Paulo, por meio da Resoluo
SAA-13, designou os membros da Cmara Setorial de Biocombustveis
(So Paulo, 2004).
Dabdoub (2004) ressaltou a importncia dos vrios centros envolvidos
no Programa Biodiesel, bem como afirmou que a adoo do biodiesel resultaria no aumento da rea plantada e, consequentemente, na criao de
novos postos de trabalho. A explorao de plantas oleaginosas com o objetivo de produzir combustveis questionada em pases de pequena extenso territorial, por causa da concorrncia com o cultivo destinado aos
alimentos. Tal fato no se constitui em problema para a agricultura brasileira, pois o pas tem 851,4 milhes de hectares de extenso territorial, com
aproximadamente 500 milhes potenciais e apenas 58 milhes de hectares
497
ocupados para fins agrcolas, destacando-se que as condies climticas so

favorveis para essa finalidade (IBGE, 2006).
Dentre as vantagens do biodiesel, destaca-se o fato de que as propriedades fsico-qumicas so semelhantes s do diesel mineral, podendo substitu-lo sem exigir alteraes no motor ou outro tipo de adaptao, alm de
reduzir a emisso de poluentes para a atmosfera (Santos et al., 2004). Os autores mencionaram que a grande desvantagem do biodiesel o preo, uma
vez que o diesel mineral ainda mais barato, talvez por questo de escala de
produo ou por deciso poltica, lembrando-se de que, no Brasil, o diesel
tem incentivo financeiro governamental. Visto isso, Lopes et al. (2004b)
ressaltaram que o xito do Programa Biodiesel dependia do macio apoio
governamental e privado.
De acordo com o Programa Nacional de Produo e Uso do Biodiesel,
alm da relevncia econmica e ambiental, esse biocombustvel abrange o
aspecto social, pois a cadeia produtiva do biodiesel tem grande potencial de
gerao de empregos, podendo promover, dessa forma, a incluso social,
especialmente quando se considera o amplo potencial produtivo da agricultura familiar.
A implementao do biodiesel no Brasil vem ao encontro de outra tecnologia bem-sucedida, o lcool combustvel produzido com cana-de-acar,
o etanol. Destaca-se, tambm, que para a produo de biodiesel necessita-se de grande quantidade de lcool (uma das matrias-primas) e, para produzir esse lcool, utiliza-se grande quantidade de diesel, o qual est diretamente relacionado ao funcionamento dos equipamentos e ao transporte
que engloba uma cadeia produtiva que pode ser substituda por biodiesel.
Alm disso, o uso dessa alternativa energtica aponta para um importante
crescimento do agronegcio brasileiro em decorrncia do aumento da rea
plantada e da gerao de empregos. Outro ponto importante relacionado ao
biodiesel a reduo da emisso de poluentes para a atmosfera, assim como
a transformao de leo residual de frituras em combustvel, minimizando
o efeito desse sobre o solo e os cursos dgua (Lopes, 2004a).
Dois biocombustveis de relevada importncia para o pas so o biodiesel de soja e o de amendoim.
A soja (Glycine max (L.) Merrill), apesar de conhecida e explorada h
mais de cinco mil anos, teve o seu cultivo ignorado no Ocidente at a segun-
498
da dcada do sculo XX, quando os Estados Unidos iniciaram a explorao

comercial, primeiro como forrageira e, posteriormente, como gros. O pico
do cultivo como forrageira aconteceu em 1940, alcanando, naquele pas,
cerca de dois milhes de hectares, sendo reduzido rapidamente a partir de
1941, at desaparecer em meados da dcada de 1960. Da mesma forma que
diminuiu o cultivo forrageiro, a rea cultivada para a produo de gros
cresceu de forma exponencial, no apenas nos Estados Unidos, como tambm na Amrica do Sul, destacando-se o Brasil e a Argentina. Em 2003, o
Brasil j era o segundo maior produtor mundial, somando 52 (26,6%) das
194 milhes de toneladas da safra mundial (Embrapa, 2003).
De acordo com o Agrianual (2006), at 2014, previsto o crescimento da
produo mundial, sustentado especialmente pelo aumento da produo no
continente sul-americano, em especial no Brasil e na Argentina.
O Brasil o pas que apresenta as melhores condies para expandir a
produo e prover o esperado aumento da demanda mundial, pois detm,
apenas no ecossistema dos cerrados, mais de 50 milhes de hectares de terras no utilizadas e aptas para o processo produtivo da soja. Com exceo
da Argentina, que ainda poder crescer at o limite de 10 milhes de hectares, a rea cultivada com soja nos Estados Unidos, na China e na ndia s
aumentar se reduzir a rea de outros cultivos. Embora o Brasil seja considerado o segundo maior produtor, o custo mdio de transporte alto, pois
se baseia no sistema rodovirio, sendo ele mais oneroso se comparado ao
ferrovirio, e esse, maior que o hidrovirio. Como comparao, 16% da soja
americana so transportados por rodovias, contra 67% da brasileira. Em
contrapartida, 61% da soja americana viajam por hidrovias, contra 5% da
brasileira (Embrapa, 1999).
O preo da soja controlado pela bolsa de valores de Chicago (Estados
Unidos), destacando que a China, maior consumidora mundial, tem os Estados Unidos como maior fornecedor; e em virtude de aquele pas escoar a
produo pelo Pacfico, tal procedimento resulta em economia de R$ 13,2
(US$ 6,0) por tonelada, comparado ao produto importado da Amrica do
Sul (Agrianual, 2006).
No sistema de produo da cana-de-acar em So Paulo, preconizado, por ocasio da renovao dos canaviais, o cultivo de culturas granferas
leguminosas (soja e amendoim) com o objetivo de gerar receita e propor-
499
cionar os benefcios da rotao de culturas. Considerando que a cana-deacar nesse estado ocupa rea em torno de 2,8 milhes de hectares e que,
geralmente, 350 mil hectares so destinados renovao, a cultura da soja
surge como expressiva alternativa (Tanimoto, 2002).
Os gros de soja contm de 13% a 22% de leo, sendo a mdia aproximada de 18%, por isso a planta se destaca como relevante oleaginosa, cujo
leo tem colorao amarelo-urea (Gomes, 1990). Alm do uso culinrio,
o leo da soja tem novo uso industrial, que a produo de biodiesel (Embrapa, 2003).
O amendoim (Arachis hypogaea L.), da famlia Fabaceae, planta originria da Amrica do Sul, na regio compreendida entre o Amazonas e
a Argentina, entre as latitudes de 10 e 30 sul, com provvel centro de
origem na regio de Gran Chaco (Argentina), incluindo-se os vales dos
Rios Paran e Paraguai (Centurion; Centurion, 1998). Ressalta-se, tambm, que tal oleaginosa cultivada em larga escala na ndia, na China,
na frica, no sul dos Estados Unidos, na Indonsia e em diversos pases
da Amrica Latina, entre os quais se destaca o Brasil. No pas, So Paulo
produz 90% do amendoim consumido, utilizando recursos tecnolgicos
comparados s regies do Primeiro Mundo. Nesse estado, a produtividade mdia do cultivo de primavera-vero ultrapassa 2.000 kg ha-1, podendo ser encontrada produtividade entre 3.000 e 4.000 kg ha-1. Em So
Paulo, os autores afirmam, ainda, que as regies de Ribeiro Preto e de
Marlia se destacam como as maiores produtoras, evidenciando-se que, na
regio de Ribeiro Preto, o amendoim assume especial importncia, em
razo do ciclo curto, constituindo-se na principal alternativa na reforma
dos canaviais.
Cerca de oito milhes de toneladas anuais de gros de amendoim destinam-se ao consumo como alimento in natura ou industrializado, e 15 a 18
milhes so esmagados para fabricao de leo (Godoy, 2001).
Aproximadamente 10% da produo mundial de leo comestvel so extrados do amendoim. O leo, refinado e purificado, largamente utilizado
tambm na indstria farmacutica, como diluente para diversos tipos de
medicamentos. O leo no refinado serve como combustvel para lmpadas
dos operrios de minas e matria-prima para a indstria de sabes e de
lubrificantes. Com a extrao do leo, que representa 45% a 50% dos gros,
500
o bagao tambm aproveitado na forma de torta (Martin, 1987). O autor

esclarece a importncia de conhecer o ponto exato de maturao da espcie,
pois, quando o ciclo completo, coincide com a maior quantidade de leo,
caracterstica importante para a indicao da oleaginosa para a produo de
biodiesel.
Existe relevante importncia econmica do amendoim no mundo contemporneo; sendo assim, o preo do leo regulado pela demanda do mercado internacional, sendo a Cooperativa de Plantadores de Cana da Regio
de Guariba, So Paulo (Coplana), responsvel por 40% das exportaes
nacionais (Globo Rural, 2004).
Resultados de ensaios de motores de ignio

por compresso utilizando biodiesel de soja:
recuperao de potncia com etanol hidratado
Koike (2008) efetuou medies de potncia, consumo e emisses em um
motor do ciclo diesel utilizando diesel, biodiesel etlico de soja e etanol hidratado em conjunto com biodiesel etlico de soja. A cronologia efetuada
foi: levantamento das curvas de torque, de potncia e de consumo especfico a plena carga, utilizando diesel e biodiesel de soja. Depois, injetou-se
etanol hidratado em paralelo com biodiesel at o motor atingir a potncia
semelhante quela quando movido a diesel.
Em seguida, realizaram-se os testes de emisses utilizando-se o diesel
como combustvel, depois biodiesel e, por ltimo, etanol em conjunto com
biodiesel.
O passo seguinte foi a medio da opacidade, utilizando-se de diesel e
injeo de etanol hidratado em conjunto com diesel.
O esquema do experimento est ilustrado na Figura 15.4.
O ensaio foi efetuado com um motor gerenciado eletronicamente, marca
Mercedes Benz, modelo OM-924 LA, ciclo diesel de injeo direta, turbocooler, quatro cilindros verticais em linha, potncia mxima lquida de
160 kW (218 cv) a 2.200 rpm, 4.800 cm3 de cilindrada total, torque mximo
de 810 Nm (83 mkgf) de 1.400 a 1.600 rpm, e consumo especfico mnimo de
202 g/kWh (149 g/cvh) a 1.600 rpm.
501
O dinammetro utilizado foi da marca Nabla, modelo 450 SP, com escala de 0 a 450 kgf e resoluo de 1 kgf. O tacmetro apresenta escala de 0 a
4.000 rpm e resoluo de 100 rpm. O referido equipamento est ilustrado
na Figura 15.5.
Figura 15.4 Sistema montado para realizao do experimento.
Figura 15.5 Dinammetro acoplado ao motor MB OM 924 LA.
502
Medies de potncia, torque e consumo com leo diesel

como combustvel
Realizaram-se medies de potncia e de consumo, utilizando-se o leo
diesel como combustvel, com o motor a plena carga. Mediram-se, tambm, a presso atmosfrica, a temperatura de bulbo mido e a temperatura
de bulbo seco para realizar a correo de potncia, cujos valores encontrados foram 95,5 kPa, 24 C e 31 C, respectivamente. Efetuando-se as contas pela ISO 1585, o fator de correo de potncia foi 1,060711 para aquelas
condies. Os resultados obtidos esto mostrados na Tabela 15.1.
Tabela 15.1 Medio de torque utilizando diesel como combustvel
Rotao
(rpm)
Torque
lido (Nm)
Potncia
(cv)
Potncia
corrigida
(cv)
Potncia
corrigida
(kW)
Consumo
de diesel
(kg/h)
Consumo
especfico
(g/kWh)
1.000
343
35
37
27
8,42
309
1.100
588
66
70
51
14,70
286
1.300
981
130
138
101
25,04
247
1.500
1.010
158
167
123
27,62
225
1.700
1.049
179
189
139
31,34
226
1.900
971
190
202
148
33,97
230
2.000
932
190
202
148
35,88
243
2.200
843
187
198
146
37,01
254
2.300
735
173
183
134
35,99
268
2.400
588
144
153
112
32,66
291
2.500
294
75
80
58
18,00
308
Medies de potncia, torque e consumo com biodiesel

etlico de soja
Realizaram-se medies de potncia e de consumo, utilizando-se o biodiesel etlico de soja como combustvel, com o motor a plena carga. Mediram-se, tambm, a presso atmosfrica, a temperatura de bulbo mido e a
temperatura de bulbo seco para realizar correo de potncia, cujos valores
encontrados foram 95,5 kPa, 23 C e 30 C, respectivamente. Efetuando-se as contas pela ISO 1585, o fator de correo de potncia foi 1,055691
para essas condies. Os resultados esto na Tabela 15.2.
503
Tabela 15.2 Resultados do ensaio utilizando biodiesel etlico de soja

Rotao
(rpm)
Torque
lido (Nm)
Potncia
(cv)
Potncia
corrigida
(cv)
Potncia
corrigida
(kW)
1.000
314
32
34
1.100
549
62
65
1.300
912
121
1.500
981
150
1.700
961
1.900
883
2.000
2.200
Consumo
de diesel
(kg/h)
Consumo
especfico
(g/kWh)
25
9,07
366
48
15,50
325
128
94
26,00
278
158
116
26,91
232
167
176
129
31,22
242
171
181
132
34,48
260
863
176
186
136
38,68
284
765
172
181
133
40,41
304
2.300
677
159
168
123
39,99
325
2.400
549
134
142
104
36,27
348
2.500
275
70
74
54
20,09
370
Comparaes grficas entre potncia e consumo especfico

utilizando diesel e posteriormente biodiesel como
combustvel
No Grfico 15.1, apresenta-se a potncia obtida tendo diesel e depois
biodiesel como combustvel.
Grfico 15.1 Grfico comparando potncias do motor movido a diesel e biodiesel.
Quando o motor est funcionando com biodiesel, a potncia menor em

todas as rotaes (a plena carga), comparando-se quando est funcionando
com diesel.
Isso explicado pelo menor poder calorfico do biodiesel em comparao com o diesel (considerando-se que no houve ajustes no sistema de
injeo).
504
No Grfico 15.2, compara-se o consumo especfico obtido tendo diesel

e depois biodiesel como combustvel, no teste a plena carga.
Grfico 15.2 Grfico comparando consumos especficos do motor movido a diesel e biodiesel
Nesse caso, o consumo especfico do biodiesel maior que o do diesel

em todas as rotaes. A explicao para o ocorrido se deve ao menor poder
calorfico do biodiesel etlico de soja em relao ao diesel fssil.
Medies de consumo quando da injeo de etanol

hidratado em conjunto com biodiesel de soja
Realizou-se a injeo de etanol em paralelo com o biodiesel de soja para
que o motor atingisse, nas mesmas faixas de carga e de rotao, o mesmo
torque de quando movido a diesel. Mediram-se, tambm, a presso atmosfrica, a temperatura de bulbo mido e a temperatura de bulbo seco para
realizar a correo de potncia, cujos valores encontrados foram 95,5 kPa,
24C e 31C, respectivamente. Efetuando-se as contas pela ISO 1585, o
fator de correo de potncia foi 1,060711 para aquelas condies. Os resultados obtidos esto apresentados na Tabela 15.3.
Independentemente da rotao, o consumo de etanol foi constante para
cada torque que deveria ser acrescentado ao motor. Os valores repetidos
foram 4 e 7 kgf, e os volumes de etanol necessrios para produzir essa fora
foram 0,50 e 0,80 g/s. Pode-se explicar o fato em razo de o motor trabalhar
com mistura pobre, em todas as faixas de rotao, na carga testada. O etanol
hidratado foi completamente consumido nessa situao.
Observou-se, tambm, que a relao de torque pretendido e o consumo
de etanol linear.
No Grfico 15.3, apresenta-se a relao entre consumo de etanol (kg/h)
e torque pretendido (kgf). A linha de tendncia est pontilhada e linear.
505
Tabela 15.3 Medio de consumo na adio de etanol hidratado em conjunto com biodiesel de soja
Rotao
(rpm)
Torque
biodiesel
(kgf)
Torque
pretendido
(kgf)
Diferena
de torque
(kgf)
Consumo de
etanol (g/s)
Consumo
de etanol
(kg/h)
1.000
32
35
0,37
1,32
1.100
56
60
0,50
1,80
1.300
93
100
0,89
3,20
1.500
100
105
0,67
2,40
1.700
98
105
0,89
3,20
1.900
90
100
10
1,28
4,60
2.000
88
95
0,89
3,20
2.200
78
85
0,89
3,20
2.300
69
75
0,81
2,90
2.400
56
60
0,50
1,80
2.500
28
30
0,23
0,84
Grfico 15.3 Grfico de consumo de etanol (kg/h) x torque (kgf).
Medies de emisses
Emisses de CO2, HC e NOx
Efetuaram-se as medies de emisses utilizando-se os trs combustveis: diesel, biodiesel etlico de soja e etanol em conjunto com biodiesel
etlico de soja. Foram realizadas trs medies para cada combustvel. A
Norma adotada para as medies foi a NBR 14489.
506
Medies de emisses utilizando diesel como combustvel
Os valores mdios obtidos de emisses com o leo diesel como combustvel esto apresentados na Tabela 15.4.
Tabela 15.4 Medio de emisses de poluentes no motor quando movido a diesel
Ponto
CO
HC (ppm)
NOx (ppm)
0,01%
19
2,05
0,01%
16
5,36
0,01%
15
10,19
0,02%
19
14,76
0,03%
43
9,71
0,05%
21
7,46
0,01%
27
2,29
0,00%
17
7,57
0,00%
17
6,91
10
0,00%
11
6,07
11
0,01%
4,71
12
0,01%
10
4,33
13
0,01%
10
2,07
Mdia
0,02%
20
6,80
Como os valores medidos de CO ficaram prximos da resoluo do aparelho (0,01%) em vrias medies, descartaram-se as medidas realizadas.
Medies de emisses utilizando biodiesel etlico de soja
como combustvel
Na Tabela 15.5, apresentam-se os valores mdios de emisses obtidas

com biodiesel etlico de soja.
Tabela 15.5 Medio de emisses de poluentes no motor quando movido a biodiesel etlico de soja
Ponto
CO
HC (ppm)
NOx (ppm)
0,00%
1,29
0,00%
5,27
0,00%
11,06
0,01%
17,66
0,02%
11,97
0,01%
7,32
Continua
507
Tabela 15.5 Continuao
Ponto
CO
HC (ppm)
NOx (ppm)
0,00%
1,61
0,00%
7,94
0,00%
7,48
10
0,00%
6,40
11
0,00%
5,53
12
0,01%
4,41
13
0,00%
0,94
Mdia
0,01%
7,10
Medies de emisses utilizando biodiesel etlico de soja
como combustvel e injeo suplementar de etanol hidratado
Efetuou-se a medio de emisses na injeo de etanol hidratado em

conjunto com o biodiesel etlico de soja. Os resultados esto na Tabela 15.6.
Tabela 15.6 Medio de emisses de poluentes no motor quando movido a biodiesel de soja,
com injeo suplementar de etanol hidratado
Ponto
CO
HC (ppm)
NOx (ppm)
0,00%
16
0,88
0,05%
63
4,49
0,03%
29
9,78
0,03%
27
16,10
0,03%
14
10,24
0,03%
6,97
0,01%
24
1,43
0,05%
34
7,18
0,06%
41
6,24
10
0,06%
53
5,31
11
0,00%
5,64
12
0,01%
4,66
13
0,00%
1,28
Mdia
0,03%
21
6,45
508
Comparao das medies realizadas de emisses
Na Tabela 15.7, apresenta-se a comparao das emisses de HC e NOx

entre os ensaios utilizando-se diesel e biodiesel. Houve reduo de emisso
de HC e aumento na emisso de NOx quando se utilizou o biodiesel etlico
de soja como combustvel, em comparao com o diesel. Leal (2007), efetuando substituio total de diesel por biodiesel de soja, em um motor gerenciado eletronicamente, marca Mercedes Benz, modelo OM-904 LA, ciclo diesel de injeo direta, obteve reduo de cerca de 32% nas emisses de
CO; 18% nas emisses de HC; e aumento de cerca de 23% nas emisses
de NOx. Os resultados foram diferentes, pois as condies de medies
tambm foram diferentes, incluindo as normas de medies adotadas. Os
combustveis usados tambm foram diferentes (biodiesel metlico de soja x
biodiesel etlico de soja).
Tabela 15.7 Comparao de emisses utilizando-se como combustvel diesel e depois biodiesel
etlico de soja
Combustvel
Diesel
Biodiesel
Diferena (%)
HC (ppm)
NOx (ppm)
20
6,80
7,10
90,00%
-4,41%
Na Tabela 15.8, apresentam-se as emisses medidas utilizando-se diesel

e depois etanol hidratado em conjunto com biodiesel etlico de soja como
combustvel.
Houve aumento na emisso de HC, com diminuio na emisso de
NOx, quando se utilizou o etanol hidratado em conjunto com biodiesel de
soja como combustvel, em comparao com o diesel.
Tabela 15.8 Comparao de emisses utilizando-se como combustvel diesel e depois biodiesel
etlico de soja
Combustvel
HC (ppm)
NOx (ppm)
Diesel
20
6,80
Biodiesel e lcool
21
6,45
-5,00%
5,15%
Diferena (%)
509
Chen et al. (1981), Broukhiyan e Lestz (1981) e Odaka (1992) obtiveram reduo na emisso de NOx quando injetaram lcool juntamente com
diesel em motor de ignio por compresso. Heisey e Lestz (1981) e Odaka
(1992) obtiveram reduo na emisso de NOx e aumento na emisso de
CO na injeo de etanol em motor do ciclo diesel. Odaka (1992) observou
aumento na emisso de HC.
Os autores, com exceo de Odaka, que no explica os motivos, atribuem a diminuio de NOx queda na temperatura de combusto.
Heisey e Lestz (1981) atribuem o aumento na emisso de CO ao alto calor
latente de vaporizao do lcool e a uma possvel diminuio na temperatura
na cmara de combusto. Odaka (1992) no explica o motivo da alterao.
Medio de opacidade
Os resultados de opacidade da fumaa esto apresentados na Tabela

15.9, na qual se encontram as leituras mdias de cada tratamento e as mdias das quatro ltimas medidas, conforme metodologia proposta. Para verificar a influncia da injeo de lcool na opacidade, realizaram-se os testes
com diesel, injetando-se a quantidade que seria introduzida no biodiesel.
De acordo com a Tabela 15.9, quando se injetou lcool no diesel, a opacidade da fumaa reduziu 17,4% em virtude da maior eficincia da combusto, confirmando a afirmao de Lestz (1984). Para os tratamentos biodiesel
e biodiesel com injeo de lcool, a opacidade teve reduo a ponto de as medidas serem menores do que o limite de sensibilidade do equipamento. Estes
ltimos resultados esto de acordo com os encontrados por Lopes (2006).
Tabela 15.9 Opacidade da fumaa diesel e diesel com injeo de lcool
Leitura
Rotao (rpm)
Opacidade
Lenta
Corte
Diesel
Diesel injeo de lcool
Limite
800
2.500
0,40
0,36
2,00
800
2.500
0,39
0,33
2,00
800
2.500
0,41
0,38
2,00
800
2.500
0,45
0,35
2,00
800
2.500
0,43
0,37
2,00
800
2.500
0,44
0,38
2,00
800
2.500
Mdia geral
0,50
0,41
2,00
0,46 (m-1)
0,38 (m-1)
2,00 (m-1)
510
Utilizao de biodiesel de amendoim em trator agrcola

Os ensaios de desempenho foram realizados no Laboratrio de Mquinas e Mecanizao Agrcola do Departamento de Engenharia Rural da
Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, campus de Jaboticabal (SP). Utilizou-se um trator marca Valtra,
modelo BM100, 4x2 com trao auxiliar (TDA), potncia de 73,6 kW (100
cv) no motor a 2.300 rpm (ISO 1585). Nesse ensaio, o referido trator foi
instrumentado com medidor de combustvel (conforme descrito por Lopes, 2006), clula de carga para medio de fora na barra, radar para medir
velocidade de deslocamento e sensor de rotao de patinagem das rodas.
Utilizaram-se dois tipos de biodiesel de amendoim etlico, um filtrado e
outro destilado.
Figura 15.6 Vista geral do trator de ensaio com instrumentao completa.

Fonte: Lopes, 2006
511
Principais resultados do biodiesel de amendoim

Os resultados esto apresentados na forma de tabelas, figuras e equaes, seguindo a ordem de modelagem da densidade do combustvel em razo da temperatura, do consumo de combustvel e da opacidade da fumaa.
Densidade do biodiesel de amendoim
Os resultados deste ensaio permitem determinar a variao da densidade

do biodiesel em razo da temperatura e da proporo de mistura (biodiesel
e diesel), e com isso possibilitar a obteno do consumo especfico de combustvel, ou seja, unidade de massa por unidade de potncia aproveitada na
barra de trao do trator. O modelo de ajuste selecionado para as densidades foi o de maior grau, cujo teste F da anlise de varincia foi significativo
para explicar as diferenas da densidade no fator proporo para cada tipo
de biodiesel.
Tabela 15.10 Densidade do biodiesel etlico filtrado de amendoim variando em razo da temperatura (T de 10 a 70C) e proporo de mistura com diesel (B0 a B100)
TC
B0
B5
B15
B25
B50
B75
B100
10
840
842
846
850
860
870
880
15
838
840
843
848
857
867
876
20
837
837
839
845
853
865
875
25
832
832
833
840
846
858
871
30
827
827
829
835
843
853
864
35
824
824
828
832
841
850
861
40
822
822
825
830
838
848
858
45
819
817
820
828
837
845
854
50
816
814
817
825
833
838
851
55
811
811
813
824
830
837
848
60
808
810
812
820
827
833
846
65
806
807
809
817
825
832
843
70
805
803
806
814
824
830
838
512
Grfico 15.4 Superfcie de resposta de segunda ordem ajustada densidade do biodiesel

etlico filtrado de amendoim.
Tabela 15.11 Densidade do biodiesel etlico destilado de amendoim variando em funo da

temperatura (T de 10 a 70C) e proporo de mistura com diesel (B0 a B100)
TC
B0
B5
B15
B25
B50
B75
B100
10
840
842
845
848
855
863
870
15
838
840
841
844
852
859
867
20
837
836
838
839
850
857
863
25
832
833
833
834
845
854
860
30
827
828
830
831
840
849
855
35
824
825
826
829
838
846
851
40
822
822
823
826
837
842
848
45
819
820
820
821
830
837
845
50
816
815
817
818
827
834
841
55
811
812
814
815
824
829
838
60
808
809
812
813
822
826
835
65
806
806
809
810
819
825
832
70
805
804
804
806
814
821
829
513
Grfico 15.5 Superfcie de resposta de segunda ordem ajustada densidade do biodiesel

etlico destilado de amendoim.
Patinagem
Observou-se que a patinagem mdia foi em torno de 12%, no sendo

alterada pelos tratamentos. Tal comportamento deu-se em razo da uniformidade da fora na barra de trao, bem como da regularidade da condio de superfcie do solo. Ressalta-se que o tipo de biodiesel etlico de
amendoim, filtrado ou destilado, no influenciou na patinagem do trator.
Consumo de combustvel do trator em razo do tipo de biodiesel
Os resultados de consumo de combustvel so apresentados na forma

horria volumtrica (L/h), horria ponderal (kg/h) e especfica (unidade
de massa de combustvel por unidade de potncia aproveitada na barra
de trao). O primeiro uma informao mais utilizada por agricultores;
o segundo mais utilizado por distribuidores de combustvel ou aqueles
preocupados com a interferncia da temperatura na variao do volume;
e o terceiro a informao mais confivel para se comparar tratamentos,
especialmente no meio cientfico.
514
Tabela 15.12 Mdias para as variveis consumo horrio volumtrico (Chv), consumo horrio
ponderal (Chp) e consumo especfico (Ce) para o biodiesel etlico filtrado de amendoim
Proporo
de biodiesel %
Chv
L h-1
Chp
kg h-1
Ce
g kWh-1
B0
12,5
10,6
328
B5
12,9
10,7
336
B15
13,0
10,9
339
B25
13,3
11,2
351
B50
13,5
11,5
356
B75
13,8
11,8
365
B100
14,2
12,2
385
Tabela 15.13 Mdias para as variveis consumo horrio volumtrico (Chv), consumo horrio
ponderal (Chp) e consumo especfico (Ce) para o biodiesel etlico destilado de amendoim
Proporo
de biodiesel %
Chv
L h-1
Chp
kg h-1
Ce
g kWh-1
B0
12,5
10,6
328
B5
12,8
10,7
333
B15
13,0
10,9
341
B25
13,3
11,2
349
B50
14,0
11,8
371
B75
14,2
12,0
382
B100
14,6
12,4
390
Analisando as Tabelas 15.12 e 15.13, verifica-se que no houve diferena entre o biodiesel filtrado e destilado, porm todas as modalidades do
consumo aumentaram de B0 para B100. Nessa avaliao, foi selecionado
para discusso mais acurada o consumo especfico de combustvel por se
tratar da varivel mais importante do desempenho do trator, pois abrange
o consumo horrio, a densidade do combustvel, a velocidade do trator e a
fora mdia na barra de trao. A sntese da anlise estatstica do consumo
especfico est apresentada na Tabela 15.14.
De acordo com a Tabela 15.14, no houve interao significativa entre
os fatores tipo de biodiesel (filtrado e destilado) e proporo. Quando se
515
comparou o biodiesel etlico filtrado com o destilado, no houve diferena

significativa, ou seja, o trator consumiu a mesma quantidade com os dois
tipos de biodiesel, sendo esse fato relacionado qualidade do biocombustvel utilizado nos ensaios. Entretanto, quando se comparou o consumo nas
propores, foi semelhante em B0, B5, B15 e B25. Diante disso, pode-se recomendar a adio de biodiesel de amendoim at o limite de 25% sem se
preocupar com a alterao de consumo do trator. Observaram-se, tambm,
semelhanas de B15 a B50 e de B50 a B100. Tal comportamento mostrou que
o trator abastecido somente com biodiesel etlico de amendoim (B100) teve o
consumo aumentado, em mdia, 18% quando comparado ao diesel (B0). O
comportamento desse consumo encontra-se ilustrado no Grfico 15.6.
Tabela 15.14 Sntese da anlise de varincia e do teste de mdias para o consumo especfico de
combustvel referente ao biodiesel de amendoim
Fatores
Consumo especfico
g kWh-1
TIPO DE BIODIESEL (TB)

Amendoim etlico filtrado
351 a
Amendoim etlico destilado
356 a
PROPORO (Bn)
B0
328 a
B5
335 a
B15
340 ab
B25
350 abc
B50
364 bcd
B75
373 cd
B100
387 d
TESTE F
TB
1,24 NS
Bn
14,17 **
TBxBn
0,57 NS
C.V.%
4,00
Mdias seguidas de mesma letra minscula na coluna no diferem entre si, pelo teste de Tukey, a 5% de
probabilidade; NS: no significativo (P > 0,05); **: significativo (P < 0,01); C.V.: coeficiente de variao.
516
Grfico 15.6 Representao grfica do consumo especfico de combustvel para o biodiesel

de amendoim.
Opacidade da fumaa do trator utilizando biodiesel de amendoim
Os ensaios de opacidade da fumaa foram realizados, em condio esttica, no Laboratrio de Mquinas e Mecanizao Agrcola do Departamento de Engenharia Rural da Universidade Estadual Paulista, Faculdade
de Cincias Agrrias e Veterinrias, campus de Jaboticabal (SP). Utilizou-se
um trator marca Valtra, modelo BM100, 4x2 com trao auxiliar (TDA),
potncia de 73,6 kW (100 cv) no motor a 2.300 rpm (ISO 1585). Nesse
ensaio, o referido trator foi instrumentado com opacmetro TM133 para
medir opacidade, tacmetro universal TM525/2 para aferir a rotao do
motor, sonda coletora de fumaa e controlador serial TM616 que serve
como interface entre sensores e trator. No referido ensaio utilizaram-se dois
tipos de biodiesel de amendoim etlico, um filtrado e outro destilado. A
ilustrao do trator instrumentado para o ensaio de opacidade encontra-se
na Figura 15.7.
517
Figura 15.7 Vista geral do trator instrumentado para o ensaio de opacidade da fumaa.
Tabela 15.15 Sntese da anlise de varincia e do teste de mdias para a opacidade da fumaa do
trator utilizando biodiesel de amendoim
TIPO DE BIODIESEL (TB)
OPACIDADE (m-1)
Amendoim etlico filtrado
1,23 a
Amendoim etlico destilado
1,22 a
PROPORO (Bn)
B0
1,50 a
B5
1,43 b
B15
1,33 c
B25
0,97 d
B50
0,89 e
B75
0,83 f
B100
0,76 g
TESTE F
TB
26,5 **
Bn
697,5 **
TBxBn
0,81 NS
C.V.%
2,42
Mdias seguidas de mesma letra minscula no diferem entre si, pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade; NS: no significativo (P > 0,05); *: significativo (P < 0,05); **: significativo (P < 0,01); C.V.:
coeficiente de variao.
518
De acordo com a Tabela 15.15, no ocorreu interao entre os fatores

tipo de biodiesel e proporo para a opacidade da fumaa. Comparando
o biodiesel de amendoim etlico, no houve diferena entre o filtrado e o
destilado. Analisando-se essa varivel no fator proporo, observaram-se
diferenas significativas em B0, B5, B15, B25, B50, B75 e B100, evidenciando-se
reduo da opacidade medida que aumentou a quantidade de biodiesel,
destacando-se que a reduo mdia foi 49% de B0 para B100, sendo tal caracterstica grande atrativo para o uso do biodiesel. Pressupe-se que esse fato
esteja relacionado com a maior eficincia da combusto do biodiesel em relao ao diesel de petrleo. O comportamento da opacidade da fumaa, de
acordo com a proporo, ilustrado no Grfico 15.7.
Grfico 15.7 Representao grfica da opacidade da fumaa em razo da proporo de

mistura biodiesel.
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16
Efeitos da utilizao do biodiesel em motores
de combusto interna
Aparecido C. Gonalves,
Maria da Consolao Fonseca de Albuquerque,
Rogrio Katsume Kimura1
Introduo
Com a notoriedade que o biodiesel vem ganhando nos ltimos anos,
vm se abrindo linhas de pesquisas antes no existentes. As consequncias
e efeitos da utilizao do biodiesel so mais importantes que a sua prpria
fabricao. A possvel contaminao dos lubrificantes com o biodiesel, por
exemplo, ainda merece estudos no tocante modificao do poder de lubrificao ou alterao das propriedades do leo utilizado.
Neste captulo feita uma rpida reviso sobre biodiesel, lubrificantes e
tcnicas de anlise de leo lubrificante empregadas nos ensaios de motores.
O captulo ilustrado com resultados obtidos pelo Grupo de Tribologia
do Departamento de Engenharia Mecnica da Faculdade de Engenharia de
Ilha Solteira (DEM-Feis).
Tais ilustraes so segmentos de um estudo que consistiu na utilizao
de trs motores idnticos, com ignio por compresso, da marca Toyama.
1 Os autores agradecem ao CNPq, Finep, Fapesp e Fundunesp o contnuo apoio aos projetos de pesquisas, bolsas de estudos e auxlio para participao em congressos aprovados.
Sem esses financiamentos as pesquisas desenvolvidas no Laboratrio de Anlise de Partculas em leos Lubrificantes (Lapo) do Departamento de Engenharia Mecnica da Faculdade
de Engenharia campus Ilha Solteira (Feis) no existiriam.
522
No primeiro banco de ensaios (motor M1), utilizou-se biodiesel de origem animal; no segundo (motor M2) utilizou-se o diesel comercial B3; e
no terceiro (motor M3) utilizou-se uma mistura de biodiesel com 90% de
origem vegetal acrescido de 10% de origem animal.
Todos os motores funcionaram durante um perodo de 20 horas antes de
se executar os ensaios. Esse perodo foi estabelecido segundo o fabricante
dos motores como sendo o perodo de amaciamento.
Para cada banco de ensaios (motor) foram realizados cinco ensaios. Um
ensaio no amaciamento, um ensaio sem contaminao do lubrificante, e
trs ensaios com contaminao lquida com o prprio combustvel (1%, 2%
e 3 % em volume do crter do motor).
O biodiesel
Histrico
Em 1900, Rudolph Diesel apresentou um prottipo de motor na Exposio Universal de Paris, o qual foi acionado com leo de amendoim, cultura que era muito difundida nas colnias francesas na frica.
Na dcada de 1930, a patente Belga 422.877, concedida ao pesquisador
G. Chavanne da Universidade de Bruxelas, apresentou o primeiro relato
do que atualmente conhecido como biodiesel. Na patente, o uso de steres
etlicos de leo de palma foi obtido a partir do processo de transesterificao
por meio cido. Logo depois, em 1938, uma linha de nibus entre Bruxelas
e Louvain utilizou steres etlicos, obtendo resultados satisfatrios na poca
(Knothe et al., 2006).
Com o surgimento da Segunda Guerra Mundial, as linhas de abastecimento de petrleo foram cortadas, causando, assim, a escassez de combustveis fsseis. Com isso, ocasionou-se o estmulo busca de fontes alternativas.
Durante a Segunda Guerra Mundial, o combustvel de origem vegetal foi utilizado extensamente em vrios pases, dentre eles China, ndia e
Blgica. Porm, o desenvolvimento dos combustveis de origem vegetal foi
praticamente abandonado quando o fornecimento de petrleo foi restabelecido com o final da guerra e o preo do petrleo tornou-se novamente
atrativo.
EFEITOS DA UTILIZAO DO BIODIESEL EM MOTORES DE COMBUSTO INTERNA
523
Atualmente, sabe-se que os motores a diesel podem ser adaptados para

utilizar como combustvel os leos vegetais in natura (sistema Elsbett2). No
entanto, o mtodo belga de transformao dos leos parece mais adequado
para resolver o problema do transporte, j que no requer nenhuma modificao nos motores.
Em 1991, foi produzido o primeiro lote de dez toneladas de biodiesel
na Alemanha, a partir de leo de canola, sendo distribudo de forma pura,
isento de mistura ou aditivos, para a rede de abastecimento de combustveis
composta por cerca de 1.700 postos.
A Alemanha estabeleceu um expressivo programa de produo de biodiesel a partir da canola, sendo, em 2007, o maior produtor e consumidor
europeu de biodiesel, com capacidade de um milho de toneladas por ano.
A maior usina de biodiesel do mundo fica em Hamburgo, com capacidade
para 600 milhes de litros por ano. A Alemanha conta com centenas de
postos que vendem o biodiesel puro (B100), com garantia assegurada dos
fabricantes de veculos. O produto comercializado a preos competitivos
se comparado ao leo diesel, pois existe a iseno dos tributos na cadeia
produtiva desse biocombustvel.
A Itlia vem produzindo biodiesel desde meados da dcada de 1990 a
partir da canola e do girassol, e parte do produto destinada para o aquecimento das residncias, em que pode ser usado na proporo de at 100%
(B100), e para o sistema de transportes, cuja proporo de mistura varia
entre 5% e 25%. Grande parte do biodiesel produzido na Itlia consumida
pelo setor de transportes pblicos (cerca de 80%).
No caso da Frana, com a produo derivada da canola e do girassol, o
uso de biodiesel vem se disseminando desde 1991. Porm, diferentemente
da Alemanha, nesse pas o biodiesel utilizado somente de forma misturada ao leo diesel derivado do petrleo, e as propores variam muito em
cada setor. Por exemplo, os nibus que fazem o transporte urbano trafegam
com uma mistura que varia entre 5% e 30%, enquanto nas refinarias de petrleo esto sendo adicionados 5% de biodiesel ao leo diesel normal.
2 Elsbett um motor multicombustvel que pode usar tanto leo diesel como leos vegetais naturais. conhecido no Brasil como Motor Elko, que utiliza preferencialmente leos vegetais
em seu funcionamento.
524
A China, segundo maior importador de petrleo do planeta, comeou a

utilizar biodiesel para o abastecimento de veculos em 2007, na tentativa de
diminuir a dependncia do combustvel fssil. Ela possui cinco unidades
transesterificadoras de leo de canola e leo de fritura usado que produzem
um volume de biodiesel superior produo americana, mas inferior produo europeia. O governo chins estimula o desenvolvimento do biodiesel
e pretende possuir uma capacidade de produo de dez milhes de toneladas anuais at 2020, em substituio do petrleo (Penteado et al., 2007).
Merece destaque tambm o papel dos Estados Unidos na rea de biodiesel, uma vez que vrias iniciativas esto sendo desenvolvidas por esse pas
no sentido de preservar o meio ambiente. Em 2002 foi promulgada a Lei
n.517/2002, que criou o programa biodiesel norte-americano, cuja meta de
produo foi fixada ao redor de vinte bilhes de litros ao ano. Para tanto,
a proporo inicial de adio do biodiesel ao leo diesel tradicional foi de
20%, sendo o leo popularmente chamado de EcoDiesel B20. Essa lei prev
o uso crescente de biodiesel pelo sistema de transportes e tambm pela frota
de automveis particulares. Institucionalmente tambm foi criado o National Biodiesel Board, com a funo de coordenar todas as aes e polticas
nesse campo energtico especfico.
Na Amrica Latina destaca-se, alm do Brasil, a produo de biodiesel
na Argentina, que desde 2001 vem incentivando a expanso desse produto.
Por meio do Decreto n.1.396 (novembro de 2001) instituiu-se o Plano de
Competitividade do Combustvel Biodiesel com a finalidade de incentivar investimentos (externos e internos) na produo do combustvel, cuja
matria-prima bsica a soja e, com menor expresso, o girassol. Nesse
mesmo ano, tambm foram institudas normas de controle de qualidade do
produto, sobretudo em termos dos testes exigidos e das regras de comercializao do produto (Mattei, 2009).
O biodiesel no Brasil
O combustvel normalmente utilizado para o transporte de cargas e passageiros no Brasil o diesel de petrleo, que era importado em elevada proporo, em razo das limitaes da capacidade de refino. O aproveitamento
dos leos vegetais transesterificados como combustveis permitiria evitar a
importao de leo diesel, fortalecendo a independncia energtica do pas.
525
O meio de transporte que mais expandiu no Brasil foi o rodovirio, erroneamente privilegiado como escolha estratgica, pois do ponto de vista
da eficincia energtica, esse tipo de transporte no o mais aconselhvel.
No entanto, os outros modos de transporte alternativos, como o ferrovirio
e o hidrovirio, tambm utilizam atualmente o leo diesel como principal
combustvel (Gonalves; Padovese, 2010).
A utilizao de combustveis lquidos obtidos de vegetais cultivados foi
novamente lembrada como alternativa interessante para o Brasil nas crises
do petrleo de 1973 a 1974 e, especialmente, de 1979 a 1980. Vrias universidades brasileiras se dedicaram a estudar a produo de combustveis
substitutivos do leo diesel, que aproveitassem diversas matrias primas de
origem vegetal (Parente, 2003).
A prioridade poltica, no entanto, foi concedida, naquele momento, para
o desenvolvimento do programa do lcool (Prolcool), que teve seu auge em
meados da dcada de 1980. A complexidade de montar um programa de
produo, processamento e distribuio do combustvel alternativo, sem o
apoio oficial, determinou que a crise transcorresse sem que o programa de
combustveis alternativos para o diesel fosse implantado.
Goldemberg (1988) sinalizou para as vantagens de instalar uma indstria de combustveis derivados dos leos vegetais. No entanto, ele alertou
para a necessidade da obteno de bons rendimentos agrcolas, j que, de
outra forma, o gasto de energia nas operaes de colheita e de transporte da
matria-prima seria muito elevado.
Vantagens do biodiesel
Sendo esse tipo de combustvel no poluente, traz-se assim um grande
benefcio para o meio ambiente. A emisso de CO2, um dos principais gases
causadores do efeito estufa, reduzida em 7% na utilizao de B5, 9% na utilizao de B20 e 46% no caso do uso de biodiesel puro (B100). As emisses
de materiais particulados e fuligens so reduzidas em at 68% e h queda
de 36% dos hidrocarbonetos no queimados. Extremamente significativa
tambm a reduo nos gases de enxofre (causadores da chuva cida), de
17% para o B5, 25% para o B20 e 100% para o biodiesel puro, uma vez que,
diferentemente do diesel de petrleo, o biodiesel no contm enxofre (MB
do Brasil, 2009).
526
As vantagens econmicas passam pela reduo das importaes de petrleo e de diesel, alm disso, proporciona o incentivo a agricultura familiar
nas regies mais carentes do pas.
Em 2008, o Brasil deixou de gastar com importaes de leo diesel o
equivalente a US$ 976 milhes (ANP, 2009).
Comparativo diesel x biodiesel

O Quadro 16.1 compara as principais caractersticas entre o biodiesel e
o diesel comum; vale ressaltar no biodiesel a ausncia dos nveis de enxofre
e a biodegradabilidade muito alta quando comparada com o diesel comum.
O ponto de fulgor do diesel inferior ao do biodiesel, sendo assim um
fator de segurana para o manuseio e armazenagem do combustvel.
Quadro 16.1 Quadro comparativo das propriedades do diesel com o biodiesel

Propriedades
Biodiesel
Diesel
Cetanagem
51-62
44-47
Lubricidade
Maior que o diesel
Baixo fator de lubricidade
Biodegradabilidade
Alta
Muito baixa
Toxicidade
No txico
Altamente txico
Oxignio
11 % de oxignio livre
Muito baixo
Aromticos
No possui
18%-22%
0,05%
Enxofre
Nenhum
Ponto de nvoa
Prximo ao do diesel
Contaminao por
derramamento
Baixo
Muito alto
Ponto de ignio
148-204C
52C
Compatibilidade com outros

materiais
Degradao natural de
polmeros butlicos
Efeito no natural em
polmeros butlicos
Transferncia e estocagem
Nenhum risco em nenhuma

das atividades
Altamente perigoso
Valor calorfico
2 % maior que o diesel
Suprimento
Renovvel
No renovvel
Combustvel alternativo
Sim
No
Processo produtivo
Reao qumica
Reao qumica e
fracionamento
Fonte: Adaptada de Dabdoub (2008).
527
Lubrificantes e tcnicas de anlise de leo lubrificante

Lubrificantes
Quando ocorre um movimento relativo entre superfcies, normalmente desejvel minimizar a frico e o desgaste. Qualquer substncia interposta que reduz a frico e desgaste um lubrificante (Cunha, 2005).
A lubrificao pode ser feita de muitas formas diferentes, dependendo
da geometria dos corpos em contato, da aspereza e textura das superfcies deslizantes, da carga, da presso, da temperatura, das velocidades de
rolamento e escorregamento, das condies ambientais, das propriedades
fsicas e qumicas do lubrificante, da composio do material e das propriedades das camadas superficiais das peas. Duas outras funes importantes dos lubrificantes so proteo contra corroso e auxlio vedao
(ibidem).
As funes bsicas de um lubrificante em um motor consistem em:
Reduo do atrito: A funo primria do lubrificante formar uma
pelcula delgada entre duas superfcies mveis, reduzindo o atrito e
suas consequncias, que podem levar quebra dos componentes.
Refrigerao: O leo lubrificante representa um meio de transferncia
de calor. Nos motores de combusto interna, o calor transferido para
o leo atravs de contatos com vrios componentes, e ento para o sistema de arrefecimento de leo.
Limpeza: Em motores de combusto interna especialmente, uma das
principais funes do lubrificante retirar as partculas resultantes
do processo de combusto e manter essas partculas em suspenso
no leo, evitando que se depositem no fundo do crter e provoquem
incrustaes.
Proteo contra a corroso: A corroso e o desgaste podem resultar na
remoo de metais do motor, por isso a importncia dos aditivos anticorrosivo e antidesgaste.
Vedao da cmara de combusto: O lubrificante, ao mesmo tempo
que lubrifica e refrigera, tambm age como agente de vedao, impedindo a sada de lubrificante e a entrada de contaminantes externos ao
compartimento.
528
Dentre os vrios tipos de lubrificantes ser dada nfase aos lubrificantes

lquidos utilizados em motores a combusto interna de ciclo diesel.
Uma maneira de caracterizar os lubrificantes lquidos por meio de sua
viscosidade, e, no caso de lubrificantes para motores, caracterizam-se tambm pelo nvel de aditivos utilizados para melhorar seu desempenho. Os
lubrificantes so subdivididos de acordo com a sua base de formulao, ou
seja, so definidos como (Petrobras, 1999):
Minerais: So leos obtidos a partir da destilao do petrleo. Suas
propriedades dependem da natureza do leo cru, cuja composio,
muito variada, formada por grande nmero de hidrocarbonetos, pertencentes a trs classes: parafnicos, naftnicos e aromticos. Os leos
minerais so os mais utilizados e importantes em lubrificao.
Graxos: So leos de origem vegetal ou animal. Foram os primeiros lubrificantes a serem utilizados, e satisfaziam as modestas necessidades
da poca em que predominava a trao animal. Atualmente so pouco recomendados, especialmente por no suportarem temperaturas
elevadas, oxidando-se facilmente, tornando-se ranosos e formando
cidos.
Aditivados: Os leos aditivados so leos minerais puros ou sintticos, aos quais foram adicionados substncias comumente chamadas
de aditivos, com o fim de reforar ou acrescentar determinadas propriedades.
Compostos: So misturas de leos minerais e graxos. Certas aplicaes
especiais requerem muitas vezes o uso de leos compostos, que conferem ao produto obtido maior oleosidade e maior facilidade de emulso
na presena de vapor. Geralmente so utilizados em equipamentos
como perfuratrizes e cilindros a vapor.
Sintticos: So lubrificantes desenvolvidos em laboratrio por processo de polimerizao, especialmente para oferecer caractersticas
especiais de viscosidade e resistncia a temperaturas elevadas ou
muito baixas, de forma a atender aplicaes especiais em algumas indstrias. Esses lubrificantes so de custo elevado, devendo, portanto,
serem empregados apenas em casos especficos que no possam ser
atendidos.
529
Tcnicas de anlise de lubrificantes usados

Espectrometria
Tendo em vista a gama de materiais que compem um equipamento, a
espectrometria surge com uma das tcnicas que auxiliam no monitoramento das partculas presentes no lubrificante, uma ferramenta que proporciona o melhor momento para a manuteno do equipamento (Gonalves
et al., 2007).
Os Programas de Anlise de leo por Espectrografia (Spectrometric Oil
Analysis Program Soap) comearam a ser utilizados nos anos 1940 pela indstria da estrada de ferro para teste de desgaste a partir de amostras de lubrificante. Com o advento do espectrmetro de emisso atmica os mtodos
Soap passaram a ser utilizados em avies militares e em alguns veculos militares com motores a diesel. Os mtodos incluem a absoro atmica (AA),
espectrografia de emisso atmica (AES), plasma induzido por emisso
(ICPE), Raio X por fluorescncia (XRF). Desses mtodos, AES e ICPE se
baseiam na deteco da luz emitida pelos elementos, so os mais populares por
causa do custo, da velocidade e de outros fatores (Lockwood; Dalley, 1992).
A Figura 16.1 mostra o principio de funcionamento de um espectrmetro.
Figura 16.1 Esquema de funcionamento de um espectrgrafo.

Fonte: Adaptado de Silva Jr. et al. (2006).
530
A maioria dos equipamentos modernos de espectrometria atmica capaz de medir tanto a radiao absorvida por uma espcie atmica quanto a
sua emisso. Dessa forma, muito importante para o operador compreender os processos que ocorrem em cada uma das tcnicas.
Cada elemento tem um nmero especfico de eltrons associados com
seu ncleo. A configurao mais estvel de um tomo denominada estado fundamental e representa a forma como esse comumente encontrado
no estado gasoso.
Se uma determinada quantidade de energia aplicada sobre o tomo e
essa absorvida, um dos eltrons mais externos ser promovido a um nvel
energtico superior, levando o tomo a uma configurao energtica menos
estvel denominada estado excitado. Uma vez que essa configurao
instvel, o tomo retorna imediatamente para o estado fundamental, liberando a energia absorvida sob a forma de luz.
A Tabela 16.1 apresenta os valores das partculas para trs motores analisados no Laboratrio de Tribologia do DEM da Feis.
Tabela 16.1 Valores da absoro atmica da amostra de lubrificante
Nvel de
contaminao
por combustvel
Amaciamento
0% de
contaminao
1 % de
contaminao
2% de
contaminao
3% de
contaminao
Motores
Cu
Si
Al
Fe
Pb
Cr
Ni
(ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm)
Motor M1(1)
17
35
33
Motor M2(2)
21
35
22
Motor M3(3)
16
24
37
Motor M1
(1)
13
25
25
Motor M2(2)
16
25
Motor M3
(3)
19
22
34
Motor M1(1)
18
20
18
Motor M2(2)
17
26
Motor M3
(3)
14
18
29
Motor M1(1)
14
20
15
Motor M2
(2)
16
25
Motor M3(3)
13
17
29
Motor M1
(1)
13
19
12
Motor M2(2)
21
29
Motor M3(3)
14
17
30
Motor operando com biodiesel B100 de origem animal;

Motor operando com diesel comercial B3;
(3)
Motor operando com biodiesel B100 (90% origem vegetal, 10% animal).
(1)
(2)
531
Analisando a Tabela 16.1, nota-se um maior desgaste dos componentes,

expresso pelos teores de Fe e Cu nas suas composies, durante o perodo
de amaciamento em relao aos demais perodos ensaiados.
Ferrografia
O termo ferrografia foi introduzido na dcada de 1970 pelos inventores
Seiffert e Westcott, que necessitavam na poca de uma melhoria da anlise
de leo lubrificante dos motores aeronavais. At ento, usava-se o mtodo
usual de quantificar a concentrao de material particulado, no qual as partculas eram depositadas em filtro de papel e observadas em microscpio.
Assim, tornava-se difcil observar a morfologia e as dimenses das partculas (Gonalves; Campos-Silva, 2011).
A ferrografia uma tcnica de monitoramento e diagnose que auxilia na
determinao da severidade, nos modos e tipos de desgastes em maquinas,
que influenciam na tomada de decises quanto ao tipo e a urgncia de interveno da manuteno.
Essa tcnica baseia-se em algumas premissas, as quais podem ser
destacadas:
Toda mquina desgasta-se antes de falhar;
O desgaste gera partculas;
A quantidade e o tamanho das partculas so diretamente proporcionais
severidade do desgaste que pode ser constatado mesmo a olho nu;
Os componentes de mquinas que sofrem atrito geralmente so lubrificados e as partculas permanecem em suspenso durante certo tempo;
Considerando que as mquinas e seus elementos so constitudos basicamente de ligas de ferro, a maior parte das partculas provm dessas
ligas.
A Figura 16.2 demonstra o esquema de um ferrgrafo, equipamento desenvolvido na poca por Westcott que separava as partculas presentes no
leo de acordo com o seu tamanho.
Existem dois tipos de anlise ferrogrfica: uma quantitativa que consiste em avaliar as condies de desgaste dos componentes de uma mquina
ou equipamento por meio da quantificao das partculas em suspenso no
532
leo, e outra do tipo analtica, que observa a morfologia das partculas no

lubrificante.
A Figura 16.4 ilustra um exemplo de ferrografia utilizada em um motor
operando com biodiesel B100 que operou sem carga acoplada.
Figura 16.2 Esquema de ferrgrafo.
Figura 16.3 Ferrgrafo analtico FM III, juntamente com seu princpio de funcionamento.
Fonte: Adaptado de Lago (2007).
533
Figura 16.4 Imagens dos ferrogramas das amostras sem contaminantes lquidos do motor
M1 (B100 Animal) obtidas via microscpio com aumento de 500x e 1000x.
As imagens da Figura 16.4 no apresentaram indcio de desgaste anormal ou severo. Todas as lminas fotografadas apresentaram desgastes conhecidos como benigno, isto , desgaste natural dos componentes.
Viscosidade
a propriedade mais importante dos leos lubrificantes, podendo ser
definida como a tenso de cisalhamento em um plano no fluido por unidade de gradiente de velocidade normal ao plano. A viscosidade pode ser expressa em termos de viscosidade cinemtica (mm2/s ou cSt) ou viscosidade
absoluta ou dinmica (Pa.s).
Sir George Gabriel Stokes (1819-1903) foi um matemtico e fsico irlands, que fez importantes descobertas para a mecnica dos fluidos, fsica,
matemtica e ptica. Ele encontrou uma expresso para a fora friccional
em objetos esfricos com pequenos nmeros de Reynolds. Seu trabalho em
movimentos de fluidos e viscosidade resultou no clculo da velocidade terminal de uma esfera caindo em um meio viscoso, o que ficou conhecido
como Lei de Stokes. Mais tarde, a unidade de viscosidade foi denominada
Stokes em homenagem ao seu trabalho.
Hutchings (1992) define a viscosidade de fluidos newtonianos, em termos da deformao por cisalhamento g, conforme representado na Equao (16.1).
534
(16.1)
onde:
t = tenso de cisalhamento (Pa);
h = viscosidade dinmica (Pa.s);
= taxa de deformao por cisalhamento.

t
A viscosidade cinemtica definida conforme Equao (16.2).
Z=
(16.2)
onde:
Z = viscosidade em cSt ou mm2/s;
r = massa especfica.
Os resultados apresentados na Tabela 16.2, para trs motores, foram
obtidos seguindo a norma ASTM D445, utilizando-se portanto um viscosmetro cinemtico de numero 350.
Tabela 16.2 Viscosidades dos ensaios realizados
Nvel de
contaminao por
combustvel
Motores
Viscosidade cinemtica Viscosidade cinemtica

a 40C (cSt)
a 100C (cSt)
147,98
14,50
(2)
147,07
15,32
Motor M3(3)
140,09
14,46
(1)
Motor M1
115,90
13,40
3% de contaminao Motor M2(2)
135,99
14,56
107,18
12,75
Motor M1(1)
0% de contaminao Motor M2
Motor M3
(3)

(2)
(3)
(1)
Se observado cada motor individualmente, verifica-se que a viscosidade

a 40C diminui com o aumento do teor de contaminao, reduo essa um
pouco mais acentuada com o uso de biodiesel.
535
Densidade
A densidade pode ser definida como o nmero que determina o peso de
certo volume de uma substncia quando ela estiver submetida a uma determinada temperatura. Assim, se um leo possui densidade de 0,8 g/cm3 a
25C, significa que, nessa temperatura, 1 cm3 do leo pesa 0,8 g.
O mtodo usual para sua determinao mergulhar no leo um densmetro, que fica em equilbrio a certa profundidade. Nessa haste graduada
l-se, ao nvel da superfcie, a valor da densidade.
Ponto de fulgor
Caracteriza-se como sendo a menor temperatura de um leo na qual o
vapor liberado na atmosfera inflama-se momentaneamente com a aplicao
de uma chama, formando assim um lampejo ou flash.
A determinao do ponto de fulgor mais empregada feita seguindo a
norma ASTM D92-52, por meio do aparelho Cleveland. Quando a temperatura chega prxima do ponto de fulgor previsto, usa-se uma chama esfrica sob o leo que est sendo aquecido no aparelho.
Um detalhe importante distinguir o ponto de fulgor do ponto de combusto que a temperatura na qual os vapores de leo queimam de modo
contnuo, durante um mnimo de 5 segundos. Normalmente o ponto de
combusto , em mdia 22 a 28C acima do ponto de fulgor. Outro ponto a
ser esclarecido a diferena do ponto de fulgor e de combusto com o ponto
de autoinflamao do lubrificante, que a temperatura na qual o leo se
inflama espontaneamente, sem o contato com a chama.
O conhecimento do ponto de fulgor permite avaliar as temperaturas de
servios que um leo lubrificante pode suportar com absoluta segurana.
leos com ponto de fulgor inferior a 150C no devem ser empregados
para fins de lubrificao. Esse um tipo de teste que avalia o nvel de contaminao por combustvel no leo (Moura; Carreteiro, 1978).
A Tabela 16.3 apresenta o resultado do ensaio de ponto de fulgor nos
trs motores para as amostras com maiores nveis de contaminao.
Houve apenas uma ligeira diminuio do ponto de fulgor em relao ao
lubrificante no contaminado em todos os motores analisados. Os valores
so to pequenos que no representam informaes precisas em razo da
resoluo do termmetro utilizado.
536
Tabela 16.3 Ponto de fulgor obtido das amostras com 3% de contaminao

Grau contaminao
lubrificante
3%
Motor
Temperatura (C)
Motor M1(1)
214
Motor M2
(2)
210
Motor M3(3)
208
Novo
215 (valor medido),

262 (valor de catlogo)

(3)
(1)
(2)
Concentrao de partculas
Atualmente existem vrios testadores automticos de partculas, alguns
podem relacionar a quantidade de partculas no ferrosas, partculas ferrosas ou o nmero de partculas totais. Por exemplo, o Contameter Toshiba
foi concebido no s para fornecer um exame visual para o microscpio,
como tambm pode detectar partculas pela absoro de raios infravermelhos (independentemente da colorao do lubrificante), sendo seu principio
de funcionamento mostrado na Figura 16.5.
Figura 16.5 Principio de funcionamento equipamento Contameter Toshiba (Roylance;

Hunt, 1999).
537
Outro tipo de equipamento comumente usado o monitor automtico de

partculas (PQA). Ele examina a amostra por meio de um campo indutivo,
que ao detectar a presena de materiais magnticos apresenta o resultado na
forma de um ndice adimensional chamando ndice PQ. Esse ndice diretamente relacionado com a quantidade de materiais ferromagnticos contidos no leo, informao muito til na construo dos grficos de tendncias.
O tamanho de influncia de alguns microns a cerca de 1 mm, e, portanto, abrange tamanhos de partculas de desgaste normais.
Na Figura 16.6 mostrado um monitor automtico de partculas (PQA),
juntamente com o seu diagrama de funcionamento.
Figura 16.6 Monitor automtico de partculas e diagrama de funcionamento.

Fonte: Disponvel em: <http://www.kittiwake.com/ANALEXrpD.htm>.
538
A Tabela 16.4 indica os nveis da concentrao dos materiais magnticos

contidos nas amostras coletadas nos motores a cada estgio de contaminao.
Tabela 16.4 ndice PQ das amostras dos motores
Grau de contaminao
do lubrificante
Amaciamento
0% de contaminao
1% de contaminao
2% de contaminao
3% de contaminao
Motores
ndice PQ (mdia)
Motor M1(1)
19
Motor M2(2)
23
Motor M3
(3)
19
Motor M1(1)
15
Motor M2
(2)
15
Motor M3(3)
16
Motor M1(1)
17
Motor M2
(2)
16
Motor M3(3)
15
Motor M1(1)
15
Motor M2
(2)
16
Motor M3(3)
15
Motor M1
(1)
15
Motor M2(2)
17
Motor M3(3)
15

(3)
(1)
(2)
Nota-se uma presena maior de partculas magnticas no perodo de

amaciamento. Esse comportamento explicado pelo fato de as partes mveis ainda estarem sem o assentamento correto, e ainda por possurem um
resduo de material do processo de usinagem.
Filtragem por membrana

Com a operao normal do equipamento, gera-se uma variedade de
contaminantes, como metais de desgaste, oxidao e outros subprodutos,
que devem ser levados pelo lubrificante para assegurar o funcionamento
adequado; alm disso, o leo tambm exposto a contaminantes externos, tais como gua, sujeira e/ou combustvel. Lubrificantes e sistemas
hidrulicos contm filtros para reduzir ou eliminar e/ou reduzir os nveis
de contaminao.
539
A limpeza do leo de extrema importncia em todas as mquinas lubrificadas, e em particular em equipamentos de folgas ultrafinas, como o
rolamento antiatrito em motores de avies e servo-vlvulas em sistemas
hidrulicos. Na verdade, as partculas de desgaste, na faixa de tamanho
de 2 a 10 m, so responsveis por at 80% de falhas no sistema hidrulico. Consequentemente, a filtrao de leo um aspecto importante de
lubrificao de equipamentos e de particular interesse para o analista de
petrleo.
Para avaliar o estado do leo lubrificante, a tcnica da filtragem por
membrana retm os particulados atravs de elemento filtrante de alta preciso com mesh de 5 m, e, com a anlise em microscpio, permite a visualizao das partculas e a contagem comparativa dos elementos presentes
na amostra.
O mtodo padro para quantificar a limpeza do lubrificante tem sido
publicado pela ISO (International Standards Organization). A ISO estabeleceu a norma ISO 4406 para relacionar a contagem de partculas em nveis
de limpeza do fluido que permite o estabelecimento de limites e alarmes
para avisar quando a contaminao excessiva. A norma ISO representada por um sistema de dois ou trs dgitos, a saber:
Sistemas de dois dgitos: So utilizados para quantificar partculas em
sistemas de limpeza em lubrificantes e sistemas hidrulicos usados
em geral na indstria. O primeiro dgito indica a contagem de partculas acima de 5 m, e o segundo digito indica a contagem de partculas
superiores a 15 m. O nvel de contaminao indicado pelos desvios
dos valores do sistema normal.
Sistemas de trs dgitos: O sistema foi proposto pela corporao Pall
e Vickers Inc. como um meio para proteger e monitorar sistemas de
servovlvulas ou sistemas hidrulicos de alto desempenho. O primeiro dgito indica a contagem de partculas acima de 2 m, o segundo
indica o numero de partculas acima de 5 m, e o terceiro digito representa a contagem de partculas acima de 15 m.
Sucintamente, o cdigo ISO de classificao de contagem de partculas
representado na Figura 16.7.
540
Figura 16.7 Representao classificao ISO 4406 para contagem de partculas.
A nova ISO 11171 substituiu a ISO 4406 em aceitao da ISO MTD

(Medium Test Dust) como uma substituio da ACFTD (Air Cleaner Fire
Test Dust). A maioria das verses extensamente usadas dessa norma tcnica refere-se ao nmero de partculas maiores que 4, 6, e 14 m em 1 mL
de fluido. O nmero de partculas 4+ e 6+ usado como um ponto de referncia de partculas. O tamanho 14+ indica a quantidade de partculas
grandes presentes, as quais contribuem grandemente para a possvel falha
catastrfica da mquina.
A Tabela 16.5 apresenta os valores do sistema ISO para determinao da
quantidade de partculas.
Tabela 16.5 Sistema de classificao ISO para partculas
CDIGO ISO
Quantidade de
partculas por mL
Mnimo
0,01
0,02
0,04
0,08
0,16
0,32
0,64
1,3
2,5
10
11
10
12
20
13
40,0
14
80
Fonte: Adaptado de Malpica (2007).
Mximo
0,02
0,04
0,08
0,16
0,32
0,64
1,3
2,5
5
10
20
40
80
160
CDIGO ISO
Quantidade de
partculas por mL
Mnimo
15
160
16
320
17
640
18
1300
19
2500
20
5000
21
10000
22
20000
23
40000
24
80000
25
160000
26
320000
27
640000
28
1300000
Mximo
320
640
1300
2500
5000
10000
20000
40000
80000
160000
320000
640000
1300000
25000000
541
A contagem de partculas usada extensamente para monitorar os sistemas hidrulicos, onde as partculas de desgaste so maiores que 10 m
(alm dos limites da espectrografia normal). Muitas indstrias publicam
nveis recomendados de contagem de partculas. A contagem de partcula
mais apropriada quando os mecanismos de fadiga so meios preliminares
da falha ou quando as partculas de contaminantes causam abraso (Lago,
2007).
Visualmente, a Figura 16.8 indica as diferenas entre as membranas de
filtragem dos leos coletados nos motores em cada nvel de contaminao.
Figura 16.8 Comparativo visual das membranas de filtragem.
Pela Figura 16.8 observa-se que a utilizao do diesel comercial B3 formou maior quantidade de fuligem. Isso mais bem caracterizado por meio
das membranas localizadas horizontalmente na linha do meio da figura,
isto , motor M2.
As Figuras 16.9 e 16.10 mostram as partculas obtidas das membranas
de celulose e fotografadas em microscpio com um aumento de 500 e 1.000
vezes em dois nveis de contaminao.
542
Figura 16.9 Partculas das membranas de celulose obtidas em microscpio do motor M1,
com 3% de contaminante lquido e com aumento de 500x e 1000x
Figura 16.10 Partculas das membranas de celulose obtidas em microscpio do motor M2,
com 3% de contaminante lquido e com aumento de 500x e 1000x.
As Figuras 16.9 e 16.10 confirmam o fato apontado no comentrio sobre a Figura 16.8, de que as membranas ensaiadas com os lubrificantes dos
motores a diesel comercial B3 apresentaram maior quantidade de fuligem.
Segundo Van Gerpen (apud Silva, 2006), o processo de combusto cujo
resultado a produo de partculas de fuligem um dos maiores desafios
dos projetistas. Tais partculas so formadas em regies de alta temperatura na cmara de combusto. Com o uso do biodiesel, os nveis de fuligem
produzida so reduzidos, e a causa est associada quantidade de oxignio
presente no combustvel.
543
Concluses
Em relao ao ilustrado no captulo, pode-se concluir que as imagens
obtidas na ferrografia analtica indicaram que as partculas de desgaste possuem dimenses e morfologias normais para o regime de trabalho adotado.
As dimenses em sua maioria no ultrapassaram 10 m, tamanhos esses
considerados como um desgaste normal.
Os valores encontrados mediante a absoro atmica indicam a presena normal dentre os valores obtidos dos elementos. A avaliao para determinar se os nveis de partculas encontrados esto dentro da normalidade
baseiam-se no monitoramento contnuo do equipamento. Uma alterao
brusca nas quantidades dos elementos presentes no leo pode indicar uma
falha ou uma possvel interferncia externa (desalinhamento, desbalanceamento, sobrecarga) sobre o equipamento.
Em relao viscosidade, os valores obtidos indicam que uma contaminao com o biodiesel B100 afeta o equipamento de maneira considervel,
quando comparados com a contaminao com o diesel comercial. Essa alterao foi mais observada para o lubrificante do motor com os nveis de 3%
de contaminao.
Os valores da viscosidade dos lubrificantes analisados tambm diminuram com o teor de contaminao lquida para os lubrificantes contaminados com diesel comercial. A diminuio foi pequena, porm confirma a
necessidade de se monitorar a viscosidade de um lubrificante automotivo
em um programa de manuteno preditiva. Caso uma diminuio da viscosidade acontea em um monitoramento contnuo e peridico, pode ser um
indicativo de contaminao do lubrificante pelo combustvel utilizado e, se
em quantidades anormais, apontar para uma interveno no motor.
Tambm se conclui que, se analisada apenas uma tcnica de Anlise de
Lubrificantes em separado, pode-se incorrer em erros. Se fossem analisadas apenas as membranas celulsicas, por exemplo, seria deduzido que o
motor M2 apresentou maior desgaste, pois as membranas relativas a esse
motor estavam mais sujas. Observando essas membranas juntamente com
os resultados PQA e valores de absoro atmica combinados, conclui-se
que essas sujeiras no so sinnimas de desgastes, e sim de fuligem, pois
os valores dos metais presentes na absoro atmica e os valores obtidos nos
ensaios PQA no foram maiores, para o motor M2, considerando o mesmo
nvel de contaminao do lubrificante pelo combustvel.
544
Analisando os valores obtidos via PQA, observa-se que os nveis mantiveram-se superiores nos perodos de amaciamento e com posterior decrscimo e estabilizao nos demais estgios do teste para cada nvel de contaminao. O lubrificante Novo foi o que apresentou o menor valor PQA.
A visualizao das membranas via microscpio ptico demonstra que
com o uso do diesel comercial o nvel de particulados e fuligem aumentou
substancialmente, comprovando assim o aumento da emisso de fuligem e
emisso de carbono que se traduz em vantagens ambientais para a utilizao do biodiesel.
Por fim se conclui que cada tipo de biodiesel tem um efeito nos motores de combusto interna, que a provvel contaminao desse biodiesel no
sistema de lubrificao altera as propriedades dos lubrificantes e, por conseguinte, o funcionamento dos motores, e que o estudo desses efeitos de
fundamental importncia para validao dos biodiesel existentes.
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17
Uso de etanol para a produo
de hidrognio e acionamento de motor
aeronutico flex
Jos Luz Silveira, Wendell de Queirz Lamas,
Mrcio Evaristo da Silva, Lcia Bollini Braga,
Adriana Aparecida dos Santos Costa, Cristiane Aparecida Martins
Anlise experimental da reforma a vapor de etanol:

aspectos tcnicos, econmicos e ecolgicos
A substituio de derivados de petrleo por biocombustveis positiva
para a qualidade do ar local. Os biocombustveis so menos txicos que
os combustveis fsseis e seus processos produtivos so menos agressivos
ao meio ambiente, alm disso, os rejeitos de sua produo podem ser reciclados e at mesmo utilizados para gerar bioeletricidade, como o caso do
etanol brasileiro produzido da cana-de-acar, cuja produo de cana-de-acar da ordem de 80 t/ha (Nogueira, 2009).
De acordo com Souza e Macedo (2010), por produzir menos Gases de
Efeito Estufa (GEE) que a gasolina e o diesel, o etanol uma importante
alternativa para a mitigao das mudanas climticas, especialmente para
os pases que, por fora do Protocolo de Kyoto, necessitam reduzir suas
emisses. Segundo avaliao da OEDC em 2008 (OECD, 2008), a partir
dos resultados de anlises das emisses de GEE ao longo do ciclo de vida
de biocombustveis produzidos por diferentes rotas tecnolgicas, conforme
demonstra a Tabela 17.1, o etanol de cana-de-acar emite entre 50% e 60%
menos GEE do que a gasolina, podendo essa marca superar 100% se for
considerado o aproveitamento de subprodutos da indstria sucroalcooleira
para a gerao de eletricidade. Resultados mais modestos so encontrados
548
para o etanol de milho, que permitem reduzir as emisses em 35%; para o

etanol de trigo, que permitem reduzir as emisses em 34%; e o de beterraba,
que permite uma reduo mdia de 45%.
Alm disso, pode-se observar na Tabela 17.1 que o etanol obtido da
cana-de-acar, quando comparado s outras fontes primrias (milho, trigo e beterraba), apresenta outras vantagens, tais como maior produtividade
(litros/hectares), e apresenta maior quantidade de energia contida no etanol por unidade de energia fssil utilizada para produzi-lo com menor custo
de produo.
Tabela 17.1 Produtividade, balano energtico, reduo das emisses e custo de produo
Matria-prima
Cana-de-acar Milho Trigo Beterraba
Pas
Brasil
EUA
UE
UE
Produtividade (litros/hectare)
7.000
3.800
2.500
5.500
Balano energtico
9,3
1,4
Reduo das emisses de GEE
90%
35%
34%
45%
22
40
68
68
Custo produo de etanol (US$ cents por litro)

Fonte: Souza et al. (2010)
Alm do elevado rendimento na etapa agrcola, decorrente da alta eficincia fotossinttica da cana-de-acar, uma das razes da elevada produtividade e do menor custo do etanol produzido no Brasil o aproveitamento
do bagao da cana no s para energia para o processo em plantas de cogerao, mas, tambm, para produzir excedentes substanciais. Esses excedentes so vendidos para concessionrias de distribuio de energia eltrica ou
para grandes consumidores.
O setor sucroalcooleiro o maior autoprodutor de energia eltrica no
pas e, tambm, o maior gerador de excedentes de energia eltrica para a
rede pblica. A utilizao de caldeiras de alta presso e de turbinas a vapor
eficientes, junto com diminuies no consumo energtico especfico das
usinas, tem permitido a gerao crescente de excedentes de eletricidade.
A mecanizao gradual da colheita da cana-de-acar tem disponibilizado
parte da palha da cana para ser queimada nas unidades de cogerao, contribuindo para incrementar ainda mais esses excedentes.
A regulamentao final da Renewable Fuel Association (RFA, 2009)
foi anunciada em fevereiro de 2010 e a Environmental Protection Agency
(EPA) (Usepa, 2009) designou o etanol de cana-de-acar como bicom-
ANLISE EXPERIMENTAL DA REFORMA A VAPOR DE ETANOL
549
bustvel avanado, capaz de reduzir as emisses de gases do efeito estufa

em pelo menos 50%, comparado com a gasolina. Como as emisses de GEE
ao longo do ciclo de vida de um combustvel ocorrem ao longo do tempo, a
EPA sugeriu, para calcular as emisses, a considerao do aspecto temporal
das emisses em um horizonte de trinta anos, sem considerar peso diferente
s emisses presentes e futuras.
A EPA (Usepa, 2009) ratificou ainda que o etanol brasileiro atinge uma
reduo de emisso de gases de efeito estufa (GEE, do ingls Greenhouse
Gases GHG) superior s exigncias mnimas de todas as categorias. O
clculo da EPA (Usepa, 2009) aponta reduo mdia de 61% quando comparado com a gasolina, utilizando um prazo de compensao de trinta anos
para emisses ligadas a efeitos indiretos do uso da terra, ILUC (Indirect
Land Use Change). O etanol de milho, utilizando as melhores prticas industriais (ou seja, com uso de eletricidade gerada com gs natural), reduz
emisses somente em 21%, mas a mdia americana ainda fica bem abaixo.
A matriz energtica brasileira

A matriz energtica brasileira, e em especial a matriz eltrica calcada
especialmente na gerao hidroeltrica (72%), possui carter mpar em termos de reduzido impacto ambiental, em especial no que se refere s emisses de gases de efeito estufa (Souza; Macedo, 2010).
A Tabela 17.2 apresenta o perfil das emisses brasileiras comparando
com a de outros pases. Observa-se que a maior parte das emisses brasileiras relativa coluna LULUCF (Land Use, Land Use Change, and Forestry), que inclui as queimadas. Por sua vez, as emisses do setor de energia
respondem apenas por 8,8% do total.
Nesse contexto, evidencia-se a importncia da eletricidade na manuteno de uma matriz com reduzida intensidade em carbono, contribuindo,
dessa forma, para a mitigao das alteraes climticas. Especialmente
porque, nesse caso, a eletricidade uma fonte de energia intrinsecamente
complementar gerao hdrica, pois a safra da cana-de-acar coincide
com o perodo de seca e, tambm considerando o ciclo expansivo do setor
sucroenergtico associado ao gradativo fim da queima da cana, garante a
biomassa necessria para gerao de significativos montantes de eletricidade nos prximos anos.
550
Tabela 17.2 Perfil das emisses do Brasil e de outros pases selecionados (%)
Regio/Pas
Energia Transporte
Processos
industriais
Agricultura
LULUCF
Lixo
Total
18,6
3,6
100
Mundo
48,8
11,8
3,4
13,8
China
64,6
4,6
7,9
21,4
-1
2,5
100
ndia
52,3
6,8
3,5
34,8
-2,2
4,8
100
Indonsia
7,9
0,5
83,6
1,9
100
Coreia do Sul
68,8
17,5
9,2
2,8
0,2
1,6
100
Brasil
8,8
5,7
1,5
20,1
62
1,8
100
Mxico
50,5
16,6
3,5
8,2
15,8
5,3
100
frica do Sul
73,7
9,6
2,7
10,7
0,5
2,9
100
Fonte: Souza; Azevedo (2006)
Produo de hidrognio
O hidrognio o elemento mais simples e mais abundante no universo;
o combustvel que apresenta a maior quantidade de energia por unidade
de massa (PCI = 119.950 kJ/kg). No entanto, o hidrognio nunca ocorre
isoladamente, ou seja, na natureza ele sempre aparece combinado a outros
elementos, como oxignio, nitrognio e carbono, mas pode ser obtido a partir de vrias matrias-primas, utilizando-se diversas tecnologias. Dentre as
vrias matrias-primas, incluem-se os recursos fsseis como carvo, gs
natural e petrleo, e recursos renovveis como a biomassa, luz solar e vento
(Silva et al., 2009).
De acordo com o Centro de Gesto de Estudos Estratgicos (CGEE,
2010), essa caracterstica do hidrognio, que a possibilidade de sua produo por meio de diversos insumos e processos, o coloca como um elemento de integrao entre diversas tecnologias, como pode ser observado
na Figura 17.1.
A Tabela 17.3 apresenta a produo mundial de hidrognio para grandes consumidores, na qual se pode observar que as fontes primrias no
renovveis, ou fsseis, so responsveis por mais de 95% da produo.
A maior parte da produo de hidrognio, atualmente, obtida por
meio da reforma a vapor de combustveis, em grande escala, como pela
reforma a vapor do gs natural, e em menor escala, pela eletrlise da gua
e outros processos. Os equipamentos utilizados nesses casos so os refor-
551
Figura 17.1 Possveis rotas para produo e utilizao do hidrognio como vetor energtico.
Fonte: CGEE (2010)
Tabela 17.3 Produo mundial de hidrognio para grandes consumidores segundo as fontes
utilizadas
Fonte
Volume (109 m3 ano-1)
Participao (%)
Gs natural
19,6
48
Petrleo
12,2
30
Carvo
7,3
18
Eletrlise (fontes diversas)
1,6
Total
40,7
100
Fonte: Tolmasquim (2003)
madores de combustveis e os eletrolisadores de gua. O mtodo de produo de hidrognio varia, em relao disponibilidade de matria-prima,
quantidade requerida e de acordo com a pureza exigida. Os principais
processos de produo de hidrognio podem ser divididos em trs reas
principais: eletroltica, fotoltica e termoqumica (Silva et al., 2009; U. S.
Department of Energy, 2010).
Dentre os processos produtivos de hidrognio, destaca-se o processo de
reforma a vapor por ser o processo mais usual das tecnologias nas indstrias
552
qumicas. A eficincia da reforma obtida a partir do estudo fsico-qumico

das propriedades da matria-prima a ser reformada, das condies termodinmicas (temperatura e presso da reao), do modelo e das dimenses
do reformador, do catalisador e os fluxos da matria-prima e da gua. O
mtodo a ser utilizado depende do tipo clula a combustvel que ser alimentada. Alguns tipos de clulas exigem hidrognio puro, enquanto outros
tipos admitem certas impurezas. A reforma a vapor ocorre na presena de
um catalisador e o gs de sntese composto por hidrognio, monxido
de carbono, dixido de carbono e metano, entre outros (Silveira et al., 2008).
Reaes da reforma
Souza et al. (2006) apresentam as sequncias de reaes principais envolvidas no processo de reforma de etanol:
Reao global: uma reao endotrmica entre etanol e gua, ambos
em estados gasosos, gerando como produto dixido de carbono e hidrognio, como indica a reao da Equao (17.1).
C2H5OH + 3 H2O 2 CO2 + 6 H2
(17.1)
Reao de reforma a vapor: a Equao (17.2) mostra essa reao, onde

so produzidos monxido de carbono e hidrognio.
C2H5OH + H2O 2 CO + 4 H2
(17.2)
Reao Water Gas Shift: dependo do tipo de clula a ser alimentada,

faz-se necessrio um processo adicional, j que o monxido de carbono pode causar danos ao catalisador de alguns tipos de clulas. A
reao Shift, como mostra a Equao (17.3), exotrmica reversvel
e ocorre em baixas temperaturas.
CO + H2O CO2 + H2
(17.3)
Metanao: vrias reaes qumicas ocorrem simultaneamente no

processo; uma delas a de formao de metano, como apresentada
pela Equao (17.4).
CO + 3 H2 CH4 + H2O
(17.4)
553
Reao de Bouduard: essa reao, representada pela Equao (17.5),

descreve a produo de carbono a partir de monxido de carbono.
2 CO CO2 + C
(17.5)
Prottipo de reformador de etanol

Os reformadores, de modo geral, so dispositivos que convertem o etanol em um gs de sntese rico em hidrognio. Esse gs , ento, submetido
a uma etapa de purificao para quantific-lo e qualific-lo s exigncias de
sua aplicao. Os componentes principais do reformador a vapor de etanol
so: bomba dosadora; vaporizador; reator cataltico de reforma (reformador); e um reator cataltico de troca gua-gs (reator shift).
A bomba dosadora realiza a alimentao da mistura lquida (gua e etanol) e o vaporizador promove a vaporizao da mistura de combustvel (etanol anidro) e gua para alimentar o primeiro reator cataltico. uma etapa
que requer alta temperatura, onde ocorrem as reaes de reforma a vapor
que formam uma mistura gasosa rica em hidrognio. Em seguida, essa mistura gasosa submetida ao processo cataltico do reator shift que remove
parte do CO e produz hidrognio adicional para o gs de sntese do processo.
As Figuras 17.2 e 17.3 mostram os reformadores de etanol, prottipos
I e II, desenvolvidos pelo Grupo de Otimizao de Sistemas Energticos
(Gose), da Universidade Estadual Paulista, campus de Guaratinguet
(Unesp-FEG).
Figura 17.2 Reformador de etanol: prottipo I
554
Pode-se observar na Figura 17.3 o esquema com os componentes do sistema de produo de hidrognio por meio da reforma a vapor do etanol, seguido por um sistema de purificao do gs de sntese, operando com duas
colunas em ciclos PSA (Pressure Swing Adsorption). O gs de sntese rico
em hidrognio aps o sistema de reforma a vapor submetido a um sistema
de purificao por adsoro molecular PSA para minimizar as impurezas,
principalmente as concentraes de CO.
Figura 17.3 Reformador de etanol: prottipo II
555
A Figura 17.4 mostra o sistema de reforma a vapor do etanol proposto

associado s tecnologias de clulas a combustvel. De acordo com as tecnologias de clulas a combustvel e as caractersticas do sistema de reforma a
vapor, possvel implementar a operao em conjunto do processo de reforma a vapor com vrios tipos de clulas a combustvel.
Figura 17.4 Sistema de reforma a vapor de etanol e as tecnologias de clulas a combustvel

Fonte: Adaptado de Ainche (2005)
A qualificao e quantificao dos produtos do processo de reforma a

vapor de etanol dos prottipos reformadores foram determinadas por cromatografia gasosa, utilizando-se o cromatgrafo gasoso Varian CP-4900
Micro-GC, Figura 17.5. O cromatgrafo foi especificado para operar com
uma configurao de trs canais independentes para garantir a anlise dos
componentes presentes no gs de sntese do processo de reforma a vapor.
A Tabela 17.4 apresenta o resultado da anlise cromatogrfica do gs de
sntese obtido nos ensaios experimentais do sistema de reforma a vapor
de etanol prottipo reformador II.
Podem-se observar uma alta produo de hidrognio e baixas concentraes de CO, CH4 e CO2, sugerindo que as reaes de reforma e de deslocamento gua-gs foram altamente favorecidas nas temperaturas de reao,
respectivamente, a 923 K e 493 K.
556
Figura 17.5 CP-4900 Micro-GC para a anlise de gases

Tabela 17.4 Resultado da anlise do gs de sntese antes e aps a purificao
H2
(%mol/mol)
CO
(%mol/mol)
CH4
(%mol/mol)
CO2
(%mol/mol)
Gs de sntese reformador
75,24
8,64
6,79
8,12
Gs de sntese reformador/
purificador
99,84
<1
<1
<1
Amostras
Alm disso, os resultados do gs de sntese, coletado depois do sistema

de purificao por adsoro molecular PSA (Pressure Swing Adsorption),
mostram um fluxo de gs rico em hidrognio, isto 99,84% mol/mol de H2
e baixas % mol/mol de CO, CH4 e CO2. O fluxo de gs de sntese rico em
H2 obtido aps o sistema de purificao possibilita a utilizao do hidrognio produzido como insumo para produo de eletricidade em clulas a
combustvel do tipo PEM.
Anlise econmica da produo de hidrognio

Metodologia da anlise econmica
A metodologia de anlise econmica est fundamentada nos clculos de
engenharia econmica. Considera o investimento no sistema de produo
de hidrognio, os custos de insumos, o custo de operao, o custo de manuteno, a eficincia de converso, a potncia suprida pelo combustvel, o
perodo equivalente de utilizao, a taxa anual de juros e o fator de anuidade. O objetivo determinar o custo (US$/kWh) do hidrognio produzido
na reforma de etanol.
557
Determinao do custo da produo de hidrognio

em US$/kWh
De acordo com Souza (2005), para se determinar o custo de produo de
hidrognio produzido, pode-se utilizar a Equao (17.6).
CH2 =
InvREF f
+ COP + CMAN
H E H2
(17.6)
onde:
CH2 = custo da produo do hidrognio [US$/kWh];
InvREF = investimento no sistema de produo de hidrognio
[x104 US$];
f = fator de anuidade [1/ano];
EH2 = mH2 x PCIH2 [kW];
H = perodo equivalente de utilizao [h/ano];
COP = custo de operao [US$/kWh];
CMAN = custo de manuteno [US$/kWh].
O custo especfico de investimento para o processo de reforma pode ser
estimado na faixa de US$ 50.000 a US$ 8.000.000, respectivamente, para a
faixa de produo de hidrognio de 1Nm3/h e 1.500Nm3/h (Silveira et al.,
2006; Barthel et al., 2004; Kotharir, 2008; Ciambelli et al., 2009).
Para uma maior desagregao e de modo a construir curvas de custos
de investimentos em reformadores, optou-se pelo uso da tcnica de Boehm
(1987), para a estimativa desses valores (Camargo et al., 2003), a qual se
baseia na Equao (17.7).
S
C = Cr
Sr
(17.7)
onde:
C = custo do equipamento para uma grandeza de interesse S;
m = fator de incidncia que indica a escala de economia (0,5 1,0);
Cr = custo do equipamento para uma grandeza de referncia Sr.
Para aplicar a tcnica de Boehm (1987), ilustrada no Grfico 17.1, so
requeridas as seguintes etapas:
558
caracterizao do equipamento;
identificao de Cr, Sr e m;
correo por opes tpicas de equipamentos.
Grfico 17.1 Metodologia para a determinao do custo do equipamento
Utilizando a Equao (17.8), pode-se determinar o investimento

(InvREF) em reformadores a vapor de acordo com a capacidade de vazo de
hidrognio.
0,5304
mH2
InvREF = 400
(17.8)
750
onde:
[x104 US$];
mH2 = capacidade de produo de hidrognio em [Nm3/h].
O custo de operao para o reformador reduzido, em razo da introduo de seus sistemas de automao e controle. Dessa forma, o custo de
operao depende basicamente da fonte de calor utilizada no sistema de reforma e do insumo etanol.
Nesta anlise, foram consideradas as seguintes fontes: bagao de canade-acar ou eletricidade para a vaporizao da mistura (etanol anidro e gua
destilada) e para manter as condies endotrmicas da reforma cataltica (no
se considera aqui a possibilidade de uso do etanol hidratado para a reforma).
559
No caso do consumo do bagao de cana-de-acar como fonte de calor,

o custo de operao obtido por meio da Equao (17.9).
Ecomb( cons) Ccomb EEtOH CEtOH
COP =
+
(17.9)
EH2
EH2
onde:
Ecomb(cons) = potncia suprida pelo bagao de cana-de-acar [kW];
Ccomb = custo do combustvel (bagao de cana-de-acar) [US$/kWh];
EEtOH = potncia armazenada no etanol [kW];
EEtOH = mEtOH x PCIEtOH [kW];
mEtOH = vazo mssica do etanol [kg/s];
PCIEtOH = poder calorfico inferior do etanol [kJ/kg];
CEtOH = custo do etanol [US$/kWh];
mH2 = vazo mssica do hidrognio [kg/s];
PCIH2 = poder calorfico inferior do hidrognio [kJ/kg].
No caso do consumo de eletricidade como fonte de calor, o custo de
operao obtido por meio da Equao (17.10). Ressalta-se que o uso de
eletricidade como fonte de calor apenas aconselhada para prottipos em
pequena escala de produo.
Eelet( cons) Celet EEtOH CEtOH
COP =
+
(17.10)
E H2
EH2
onde:
Eelet(cons) = potncia eltrica consumida [kW];
Celet = custo da eletricidade [US$/kWh];
EEtOH = potncia armazenada no etanol [kW].
De acordo Kothari et al. (2008), o custo de manuteno do sistema de
reforma pode ser considerado como sendo 3% do valor de investimento,
conforme mostra a Equao (17.11).
InvREF f
CMAN = 0,03
(17.11)
H E H2
onde:
[x104 US$];
560
H = perodo equivalente de utilizao [h/ano];

f = o fator de anuidade [1/ano], o qual calculado de acordo com as
Equaes 17.12 e 17.13.
f=
qk ( q 1)
qk 1
r
q = 1+
100
(17.12)
(17.13)
onde:
k = perodo de amortizao ou pay-back [anos];
r = taxa anual de juros [%].
Resultados da anlise econmica custo de produo
de hidrognio em US$/kWh: Prottipo Reformador
Para o estudo da viabilidade econmica associada ao sistema de reforma

a vapor de etanol, foram feitas as seguintes consideraes:
Para os itens de custo em que a referncia est em moeda nacional,
utilizou-se a taxa de cmbio US$ 1,00 = R$ 1,80;
Consumo experimental de etanol no sistema de reforma a vapor:
0,7961 L/h para 1 Nm3/h de H2;
Consumo de energia eltrica do prottipo reformador: 1,9 kWh;
Consumo de bagao de cana-de-acar para manter as condies endotrmicas do processo: 1,23 kg/h;
Taxa anual de juros: valores variando entre 4% e 12%;
Horas de operao: 5.000 h/ano, 6.000 h/ano e 7.000 h/ano;
Perodo de amortizao ou pay-back: valores variando entre dois e 12
anos;
Custo do etanol anidro: 0,4 R$/L (0,222 US$/L), valor estimado considerando o custo de produo do etanol derivado da cana-de-acar;
Custo do bagao da cana-de-acar: considerando-se a grande oscilao de preos dependendo da poca da safra. No incio da safra, por
exemplo, quando da partida da moagem, pode atingir valores acima
de 30,00 R$/t. Por sua vez, em plena safra, o bagao de cana ofertado a preos praticamente nulos. Neste trabalho foi adotado um preo
intermedirio de 7,17 US$/t de bagao de cana;
561
Tarifa de energia eltrica: 0,27396 R$/kWh (0,1522 US$/kWh). Preo da energia eltrica para o setor comercial e de servios na Regio
Sudeste (Sistema de Apoio Deciso, 2010).
O Poder Calorfico Inferior (PCI) dos combustveis utilizados e do H2
compreende:
Etanol: 28.300 kJ/kg (CTC, 2010);
Bagao da cana-de-acar: 7.320 kJ/kg (Braga, 2010)
H2: 119.950 kJ/kg (Silva, 2005).
Utilizando-se essas consideraes e as Equaes (17.6) a (17.13), os resultados da anlise econmica da produo de hidrognio via reforma a vapor do etanol no prottipo reformador so apresentados a seguir.
O Grfica 17.2 apresenta o custo da produo de hidrognio em razo
do perodo de amortizao do investimento (pay-back), variando-se as taxas
anuais de juros entre 4% e 12% para 5.000 h/ano, 6.000 h/ano e 7.000 h/ano
de operao, para um reformador consumindo eletricidade para produzir
1 Nm3/h de hidrognio, a partir de etanol.
Grfico 17.2 Custo da produo de hidrognio em razo do perodo de amortizao do

investimento (fonte de calor: eletricidade; prottipo de 1 Nm3/h de H2)
Pode-se observar que os custos diminuem com o aumento do perodo

de amortizao do capital, com a diminuio da taxa anual de juros e com
o aumento do perodo equivalente de utilizao. Os custos de investimento
influenciam significativamente no custo final do hidrognio produzido. J
562
a influncia dos custos de operao se deve ao consumo de eletricidade para

vaporizar a mistura gua-etanol e, especialmente, pelo consumo de etanol
no processo de reforma a vapor.
O Grfico 17.3 apresenta o custo da produo de hidrognio em razo das taxas anuais de juros para um perodo equivalente de utilizao de
7.000 h/ano, variando-se o perodo de amortizao do investimento (k) entre dois e 12 anos.
Grfico 17.3 Custo da produo de hidrognio em razo da taxa anual de juros, 7.000 h/
ano (fonte de calor: eletricidade; prottipo de 1 Nm3/h de H2)
Grfico 17.4 Custo da produo de hidrognio com o reformador em razo da taxa anual
de juros e horas/ano de operao (fonte de calor: eletricidade; prottipo de 1 Nm3/h de H2
e pay-back de oito anos)
563
Observa-se no Grfico 17.3 que maiores pay-backs implicam menores

custos da produo de hidrognio. J no Grfico 17.4, verifica-se que o aumento do perodo equivalente de utilizao acarreta em uma diminuio no
custo do hidrognio produzido.
Para verificar a influncia do insumo utilizado como fonte de calor foi
realizada uma anlise comparativa do custo do hidrognio produzido pelo
prottipo reformador, na qual se comparou o custo do hidrognio produzido com o sistema operando com eletricidade ou bagao de cana. Foi constatado na anlise comparativa que o custo do hidrognio menor quando
se utiliza o bagao de cana como fonte de calor para o processo de reforma,
cujos resultados so apresentados no Grfico 17.5.
Grfico 17.5 Custo da produo de hidrognio em razo do tempo de operao com variao das taxas de juros e da fonte de calor (energia eltrica ou bagao); prottipo de 1 Nm3/h
de H2 e pay-back de oito anos
Observa-se que o custo do hidrognio produzido, quando se utiliza o

bagao como fonte de calor para o sistema de reforma, aproximadamente
10% menor do que o custo do hidrognio produzido com o sistema operando com eletricidade.
Alm dos estudos relacionados ao prottipo de reforma de 1 Nm3/h de
hidrognio, foi determinado o custo do hidrognio para sistemas de reforma com maiores capacidades de produo (at 1.000 Nm3/h de H2 operando com bagao de cana como fonte de calor).
564
O Grfico 17.6 mostra os custos do hidrognio produzido para sistemas de

reforma a vapor de etanol em razo da capacidade de produo do reformador.
Grfico 17.6 Custo do hidrognio em razo da capacidade de produo do sistema de

reforma (fonte de calor: bagao de cana; H = 7.000 h/ano; r = 12%)
Verifica-se que o custo do hidrognio produzido diminui com o aumento da capacidade de produo, apresentando uma diminuio mais significativa para reformadores de etanol com capacidades de produo abaixo
100 Nm3/h de hidrognio, conforme se pode observar no Grfico 17.6.
Para sistemas de reforma com capacidades de produo superiores a
100 Nm3/h de H2, tambm se observou diminuio nos custos do hidrognio, embora com menor efeito. Considerando a dependncia do custo do hidrognio em razo da variao do perodo de amortizao, foi notado comportamento semelhante. Isto , com o aumento do perodo de amortizao
do capital, tem-se uma diminuio no custo do hidrognio produzido.
observado, portanto, por meio dessa anlise econmica, que a utilizao
do bagao de cana em sistemas reformadores uma opo vivel, pois agrega
uma reduo significativa no custo do hidrognio produzido quando comparado com a utilizao da energia eltrica para a reforma do etanol. Alm
disso, tem-se a produo de hidrognio combustvel, com custos em US$/
kWh atrativos que corrobora economicamente a proposta de inovao da cadeia produtiva do etanol por meio da incorporao da reforma a vapor a usina
sucroalcooleira desenvolvida na seo sobre anlise de eficincia ecolgica.
565
Anlise de eficincia ecolgica da produo de

hidrognio
Metodologia da anlise de eficincia ecolgica
A metodologia de anlise ecolgica baseia-se nos clculos do dixido de
carbono equivalente [(CO2)e] e do indicador de poluio (g) para a determinao da eficincia ecolgica do processo de produo de hidrognio
via reforma a vapor de etanol. Nas sees que seguem so relacionadas as
equaes que permitem esses clculos.
Clculo do dixido de carbono equivalente [(CO2)e] e do

indicador de poluio (g)
Baseando-se na concentrao mnima permitida para o CO2 na atmosfera, que 10.000 mg/m3 (Silveira et al., 2009), determinam-se os coeficientes equivalentes para alguns poluentes. A Tabela 17.5 apresenta valores
especficos para a concentrao mnima admitida para exposio de uma
hora (Villela; Silveira, 2007).
Tabela 17.5 Padres de qualidade do ar para NOX e SO2
Gs
Concentrao mxima em 1 h
(mg/m3)
SO2
125
NOx
200
Fonte: Villela; Silveira (2007)
Segundo Martinelli Jr. (2008), o limite de Materiais Particulados (MP)

emitidos por um processo de combusto, estabelecido pela resoluo n.3,
de 28 de junho de 1990, do Conselho Nacional do Meio Ambiente (Conama), 150 mg/m3. Baseando-se nesses padres e considerando a concentrao mnima permitida para CO2, que 10.000 mg/m3, determinam-se
os coeficientes (SO2)e, (NOX)e e (MP)e para o clculo do dixido de carbono
equivalente (CO2)e, cuja unidade kg por kg de combustvel (kg/kgcomb),
conforme apresenta a Equao (17.14) (Villela; Silveira, 2007).
( CO2 )e = CO2 + 80 ( SO2 ) + 50 ( NOX ) + 67 ( MP )
(17.14)
566
onde:
(SO2)e = 80 (SO2) = dixido de enxofre equivalente em (CO2);
(NOX)e = 50 (NOX) = dixido de nitrognio equivalente em (CO2);
(MP)e = 67 (MP) = material particulado equivalente em (CO2).
Para quantificar o impacto ambiental, tem-se o indicador de poluio
(g), Equao (17.15), definido como sendo a razo entre o dixido de
carbono equivalente do combustvel e seu Poder Calorfico Inferior (PCI)
(Villela; Silveira, 2007; Cardu; Baica, 1999).
g =
( CO2 )e
(17.15)
PCI
onde:
(CO2)e = dixido de carbono equivalente [kg/kgcomb];
PCI = poder calorfico inferior do combustvel [MJ/kgcomb];
g = indicador de poluio [kg/MJ].
Eficincia ecolgica ()
A eficincia ecolgica () um indicador adimensional que permite avaliar o impacto ambiental das emisses gasosas de processos termoqumicos, comparando-se as emisses de poluentes integrados hipoteticamente
(emisses equivalente de CO2) com padres existentes de qualidade do ar.
Considera-se tambm a eficincia de converso como fator determinante
sobre as emisses especficas, expresso por um nmero fracionrio. A eficincia ecolgica () pode ser determinada conforme a Equao (17.16).
0,204 sistema ln (135 g )
=
sistema + g
0,5
(17.16)
onde:
= eficincia ecolgica [ ];
sistema = eficincia termodinmica do processo de reforma [ ];
g = indicador de poluio [kg CO2/MJ].
A eficincia ecolgica () engloba em um coeficiente simples aspectos
que definem a intensidade do impacto ambiental do processo, composio
e combusto do combustvel, indicador de poluio e eficincia de conver-
567
so. Desse modo, o valor da eficincia diretamente proporcional eficincia termodinmica do sistema (sistema) e inversamente proporcional ao
indicador de poluio (g). O valor de varia entre 0 e 1. Do ponto de vista ecolgico, um valor mnimo admissvel para a eficincia ecolgica seria
igual a 0,5 (valor crtico de eficincia ecolgica). Para uma situao hipottica na qual = 0, tem-se uma eficincia ecolgica insatisfatria, ou um
sistema poluidor, e quando = 1 indica uma situao ideal (poluio zero)
(Villela; Silveira, 2007). A Tabela 17.6 apresenta algumas caractersticas
ambientais para combustveis referenciais, tais como (g), (CO2)e e , entre
outras (Villela; Silveira, 2007; Coronado-Rodriguez et al., 2009).
Tabela 17.6 Caractersticas ambientais para combustveis referenciais
Combustvel
Hidrognio
Enxofre
S
(%)
(CO2)e
(kg/kgcomb)
PCI
(MJ/kg)
g
(kg/MJ)
()
119,95
100
1.400
9,270
134
Anlise do sistema de reforma a vapor de etanol

A eficincia ecolgica do processo de produo de hidrognio por reforma de etanol calculada considerando-se a Figura 17.6.
Figura 17.6 Sistema de produo de hidrognio por reforma a vapor de etanol
A Tabela 17.7 apresenta a composio elementar do bagao da cana-deacar em base seca, a partir da qual se determina a equao estequiomtrica do processo de combusto do bagao, apresentada na Equao (17.17).
Nesse caso, como no h uma frmula qumica definida para o combustvel, define-se a equao de combusto para 100 g de combustvel (bagao de cana-de-acar) com um excesso de ar = 30% (Lora; Nascimento,
2004; Carvalho Jr.; McQuay, 2007).
568
Tabela 17.7 Caractersticas tcnicas do bagao (base seca)

Composio elementar (%)
Biomassa
Bagao
44,8 5,35 39,55 0,38 0,01
Composio imediata (%)
Cinza Volteis Cinzas

9,79
73,78
11,27
PCI
Carbono (MJ/kg)
fixo
14,95
7,32
Fonte: Sales (2007).
a1C + b1H + c1O + d1N + e1S + 3,83 ( O2 + 3,76N2 )

w1CO2 + y1H2O + 3,83 (1 ) O2 + 3,833,76N2
(17.17)
onde:
= 1,30 (considerando 30 % de excesso de ar na combusto do bagao);
a1; b1 ;c1; d1; e1 = so os valores dos componentes elementares do bagao, determinados pela razo entre a composio elementar e a massa
molar do respectivo elemento.
Clculo das emisses de CO2 no processo de combusto
do bagao da cana-de-acar
Segundo Villela e Silveira (2007), as emisses de CO2 resultantes de 1

kg de combustvel podem ser calculadas de acordo com a Equao (17.18).
MCO2 =
( w1 44 1) CO2
N
(17.18)
onde:
MCO2 = emisso de CO2 [kgCO2/kgcomb];
N = massa molar do combustvel (bagao) [kg/kg.mol].
A massa molar do bagao pode ser determinada, baseando-se na composio elementar, Tabela 17.7, e na estequiometria da Equao (17.17).
Isto , pode-se calcular a massa molar do bagao da cana-de-acar por
meio da Equao (17.19).
N = ( a112) + ( b11) + ( c116 ) + ( d114 ) + ( e1 32)
(17.19)
Emisses do sistema de reforma a vapor de etanol
Para as emisses de NOX, SO2 e MP, referentes combusto do bagao

de cana-de-acar, foram adotados os valores sugeridos por Lora (Lora;
Nascimento, 2004), apresentados na Tabela 17.8.
569
Tabela 17.8 Emisses de NOX, SO2 e MP na combusto do bagao de cana-de-acar

Componentes
SO2 (kgSO2/kgcomb)
Combusto do bagao de cana

0
NOX (kgNOX/kgcomb)
0,0012
MP (kgMP/kgcomb)
0,0071
Utilizando a reao estequiomtrica da combusto do bagao de cana,

Equao (17.17), a reao estequiomtrica global da reforma a vapor de
etanol, Equao (17.20), e considerando o ciclo do CO2 desde o plantio da
cana-de-acar at a produo do etanol, apresentado na Figura 17.7, podem-se obter as emisses do sistema de reforma a vapor de etanol proposto,
conforme apresentado na Figura 17.6. Para esses clculos, foram consideradas as seguintes relaes: 1 tonelada de cana-de-acar gera 83,33 litros de
etanol e 250 quilogramas de bagao (Cardu; Baica, 1999).
C2H5OH + 3H2O 2CO2 + 6H2
(17.20)
Figura 17.7 Ciclo do CO2 desde o plantio da cana-de-acar at a produo do etanol

Fonte: O ciclo do etanol (2008)
A Tabela 17.9 apresenta os resultados dos clculos das emisses do processo de produo de hidrognio por reforma de etanol representado pela
Figura 17.6. Nos clculos das emisses foram considerados dois cenrios:
um cenrio sem considerar o ciclo do CO2 ilustrado na Figura 17.7 e um
outro cenrio considerando o ciclo do CO2.
570
Tabela 17.9 Resultado das emisses do processo de produo de hidrognio por reforma a vapor
de etanol
Componentes
CO2 (kgCO2/kgcomb)
Combusto do bagao de cana
Reforma a vapor de etanol
Sem o ciclo
Com o ciclo
Sem o ciclo
1,82389
0,46956
SO2 (kgSO2/kgcomb)
Com o ciclo
-1,35433
NOX (kgNOX/kgcomb)
0,0012
0,0012
MP (kgMP/kgcomb)
0,0071
0,0071
Resultados da eficincia ecolgica do sistema de reforma

a vapor de etanol
Utilizando os valores de emisses de CO2, NOX, SO2 e MP e considerando o PCI do bagao de cana-de-acar igual a 7,32 MJ/kg, determinaram-se o dixido de carbono equivalente (CO2)e e o indicador de poluio
(g) associados ao sistema, os quais so mostrados na Tabela 17.10.
Tabela 17.10 Resultados para o dixido de carbono equivalente e o indicador de poluio para o sistema proposto
g [kg/MJ]
(CO2)e [kg/kgcomb]
Sem ciclo
Com ciclo
Sem ciclo
Com ciclo
2,895287
0,186621
0,39553
0,025495
Analisando-se o processo de produo de hidrognio via reforma a vapor, representado esquematicamente pela Figura 17.6, definiu-se a expresso para o clculo da eficincia termodinmica do sistema (sistema), apresentada na Equao (17.21).
sistema =
onde:
EH2 = mH2 x PCIH2;
Ebagaco = mbagaco x PCIbagaco;
Eetanol = metanol x PCIetanol;
PCIH2 = 119,95 MJ/kg;
PCIetanol = 28,3 MJ/kg;
PCIbagaco = 7,32 MJ/kg.
(E
EH2
bagao
+ Ee tan ol )
(17.21)
571
A Tabela 17.11 apresenta os resultados de eficincia termodinmica do

sistema e a eficincia ecolgica, os quais indicam que a rota tecnolgica proposta pouco poluidora, pois a eficincia ecolgica prxima a 100%, considerando o ciclo do CO2 (Figura 17.7) e o sistema proposto (Figura 17.6).
Tabela 17.11 Eficincia termodinmica, indicador de poluio e eficincia ecolgica do processo de reforma a vapor de etanol
sistema (%)
55,78
(%)
Sem ciclo
Com ciclo
76,50
97,82
Se, todavia, no for considerado o ciclo do CO2 desde o plantio da canade-acar at a produo do etanol reformado para a produo do hidrognio, a eficincia ecolgica () tende a diminuir, conforme ilustrado no
Grfico 17.7.
Grfico 17.7 Eficincia ecolgica global do sistema de reforma a vapor de etanol
Pode-se observar no Grfico 17.7 que o ciclo do dixido de carbono interfere positivamente na eficincia ecolgica do sistema de reforma a vapor
do etanol, pois a quantidade de CO2 absorvida ao longo do crescimento da
cana-de-acar maior do que a quantidade de CO2 emitida durante plantio, colheita, produo do etanol e processo de produo de hidrognio por
reforma. Tais resultados corroboram as vantagens ambientais da produo
de hidrognio via reforma a vapor do etanol, ou seja, evidenciam que essa
rota de produo de hidrognio ambientalmente correta.
572
Abordagem sobre a incorporao do sistema

de reforma cadeia produtiva do etanol
A tecnologia da usina sucroalcooleira abrange vrias operaes unitrias, todas com o objetivo de transformar a cana-de-acar em acar e em
lcool. Essas operaes, distintas e dispostas em sequncia lgica, so de
naturezas qumica, bioqumica e fsica. H uma interao entre as diversas
operaes unitrias desse sistema produtivo e, dessa forma, qualquer alterao em uma operao unitria influencia as demais. A etapa industrial
do processamento da cana-de-acar pode ser dividida em cinco grandes
volumes de controle: sistema de extrao; planta de tratamento do caldo;
produo de acar; produo do lcool; e sistema de cogerao.
A incorporao do processo de reforma a vapor de etanol agregar ao
setor sucroalcooleiro a produo de hidrognio, alm dos produtos convencionais (etanol e acar). Essa incorporao consiste em uma planta convencional de produo de acar e lcool associada ao processo de reforma
a vapor de etanol.
Nesse contexto, o etanol produzido, destinado ao mercado consumidor,
passa pelo processo de desidratao no qual atinge as condies ideais de
pureza e o teor alcolico exigidos pela ANP. Uma frao do etanol produzido na usina destinada, diretamente, ao processo de produo de hidrognio sem a etapa de desidratao, visto que os insumos do processo de
reforma a vapor de etanol so etanol e gua destilada (alm de calor que vem
da queima do bagao).
Aps a vaporizao da mistura de etanol e gua destilada, h duas etapas
catalticas, e uma etapa ocorre em altas temperaturas em um dispositivo
denominado de reformador, no qual ocorrem as reaes de reforma a vapor
SRR (Steam Reforming Reactions). E a outra etapa ocorre em temperaturas mais baixas em um reator denominado reator shift, no qual ocorrem as
reaes de deslocamento agu-gs WGSR (Water Gas Shift Reactions).
De acordo com Silva (2005), uma usina sucroalcooleira padro com
capacidade de moagem de 520 toneladas de cana por hora produz 17,10
toneladas de acar por hora, 15.300 L/h de etanol hidratado por hora,
9.680L/h de etanol anidro. Utilizando-se a quantidade de bagao gerado
(130 t/h), pode-se estimar a produo mdia de energia eltrica em 6.500
kWh que supre o consumo especfico de insumos energticos da usina e
573
proporciona um excedente de 780 kWh. A Figura 17.8 mostra um esquema

de uma usina sucroalcooleira com a incorporao da produo de hidrognio proposta.
Figura 17.8 Anlise de uma usina sucroalcooleira aps a incorporao da produo de hidrognio (elaborao prpria)
Considerando, contudo, a incorporao do sistema de reforma a vapor

cadeia produtiva do etanol, observa-se que a usina sucroalcooleira ganha
uma nova configurao, na qual, alm dos produtos convencionais, tais
como acar, etanol anidro, etanol hidratado e eletricidade excedente, tem-se a produo de hidrognio. Utilizando-se 5% do etanol anidro produzido,
neste estudo de caso igual a 484 L/h, tem-se uma produo de hidrognio
na ordem de 608 Nm3/h. Agregando-se ao setor o potencial energtico, ambiental e mercadolgico do hidrognio. Taxas maiores de etanol poderiam
ser convertidas em hidrognio, dependendo da necessidade do mercado.
Acredita-se que em um futuro prximo, na era do hidrognio, a usina
sucroalcooleira poderia ser modificada de acordo com essa proposta, conforme mostra a Figura 17.9. Nesse caso, alm dos produtos convencionais
da cadeia produtiva do etanol, tm-se agregado ao processo os benefcios da
produo de hidrognio combustvel.
Figura 17.9 Esquema proposto para a usina na era do hidrognio

Fonte: Silveira et al. (2009)
574
A incorporao da reforma a vapor do etanol ao processo produtivo

do etanol pode agregar vantagens ambientais e econmicas ao pas, pois a
eficincia ecolgica do sistema de reforma a vapor elevada em razo do ciclo do carbono (Figura 17.10). Alm disso, essa nova configurao do setor
possibilita a produo e o desenvolvimento da economia do hidrognio com
todos os seus benefcios ambientais e tecnolgicos.
Figura 17.10 Ciclo do carbono proveniente da cana-de-acar

Fonte: Ball State University (2008)
Concluses
A reforma a vapor do etanol consiste em uma importante rota para a obteno de hidrognio combustvel. Esse pode ser utilizado para gerar eletricidade em clulas a combustvel como insumo energtico alternativo quando produzido a partir de uma fonte de origem renovvel (cana-de-acar).
O desenvolvimento dessa tecnologia tambm contribui para o aumento da
gerao distribuda e descentralizada de energia e para a diminuio das
emisses de poluentes ao meio ambiente.
Os resultados experimentais obtidos no prottipo reformador indicaram uma alta concentrao de hidrognio, 75,24%, resultando em uma
575
proporo igual a 0,7961 L de etanol para cada 1 Nm3/h de hidrognio.

Aps a passagem do gs de sntese no sistema de purificao por adsoro
molecular PSA (Pressure Swing Adsorption), observou-se um fluxo de gs
rico em hidrognio, isto , 99,84 % de H2, e baixas concentraes de CO,
CH4 e CO2.
O fluxo do gs de sntese rico em H2 obtido aps o sistema de purificao corroborou para a viabilidade tcnica do prottipo de reforma a vapor
de etanol.
A anlise econmica mostrou que os custos de produo do hidrognio
diminuem com o aumento do perodo de amortizao do capital, com a diminuio da taxa anual de juros e com o aumento do perodo equivalente
de utilizao.
Os resultados mostram que o custo do hidrognio produzido quando
se utiliza o bagao de cana como fonte de calor para o sistema de reforma
, aproximadamente, 10% menor do que o custo do hidrognio produzido
com o sistema operando com eletricidade. Verificou-se que o custo do hidrognio produzido diminui com o aumento da capacidade de produo,
sendo mais significativo esse valor para reformadores de etanol com capacidades de produo acima de 100 Nm3/h de hidrognio.
Os clculos do dixido de carbono equivalente [(CO2)e] e do indicador
de poluio (g) para o sistema de reforma a vapor de etanol utilizando bagao de cana como fonte de calor possibilitaram a determinao da eficincia ecolgica do processo de produo de hidrognio por reforma a vapor
de etanol.
Os resultados mostram que o processo de produo de hidrognio por
reforma a vapor de etanol uma rota tecnolgica ambientalmente promissora, pois apresenta alta eficincia ecolgica, 97,82%, quando se considera
o ciclo do CO2.
No cenrio da incorporao do processo de produo de hidrognio no
setor sucroalcooleiro, foi realizado um estudo de caso, no qual se utilizaram
5% do etanol anidro produzido em uma usina tpica para a produo de
hidrognio. Os resultados mostram que para 484 L/h de etanol utilizado,
tem-se uma produo de hidrognio na faixa de 608 Nm3/h, que pode ser
agregada ao setor, com grande potencial energtico, ambiental e mercadolgico para o hidrognio.
576
Finalmente, conclui-se que a investigao dos aspectos tcnicos (sistema de reforma, prottipos de reformadores), a anlise econmica (custo de
produo de hidrognio, em US$/kWh) e avaliao dos aspectos ecolgicos
envolvidos na produo de hidrognio (processo de reforma a vapor de etanol) contribuem para o desenvolvimento da tecnologia do hidrognio combustvel e possibilitam a abordagem sobre a inovao da cadeia produtiva
do etanol.
Determinao da eficincia ecolgica em um motor de

combusto interna aeronutico usando etanol e gasolina
de aviao como combustvel
Um dos grandes motivadores para o estudo de combustveis alternativos a crescente preocupao com as consequncias do aquecimento global
que vem alterando as condies climticas na Terra. A cada dia, mais e mais
pessoas esto trabalhando para reduzir a emisso de poluentes, na tentativa
de reverter a atual situao mundial. A cincia vem buscando incessantemente fontes de energia renovveis mais limpas, isto , com menores taxas de emisses de poluentes.
O etanol produzido a partir de fontes naturais, tais como a cana-deacar no Brasil e o milho nos Estados Unidos. Ele tem sido usado como
combustvel para carros no Brasil desde 1977. Em outubro de 2004, a primeira aeronave equipada com um motor Lycoming convertido para etanol
obteve certificao. Contudo, at agora, no h nenhuma aeronave bicombustvel no mundo. Este trabalho apresenta uma proposta de investigao
experimental das caractersticas de desempenho para motores de combusto interna aeronutico usando lcool e gasolina e prope uma investigao
futura para misturas lcool-gasolina de aviao. O intuito reduzir os custos operacionais da aviao e os danos ao meio ambiente.
Quando ocorre a combusto de combustveis com carbono ocorre a
produo de CO2 em quantidades proporcionais ao combustvel queimado. Se o combustvel for fssil, o dixido de carbono liberado na queima
ser adicionado atmosfera contribuindo para o aumento do efeito estufa e
produzindo o que chamado de ciclo de carbono positivo. Por sua vez, se
577
o combustvel for de origem vegetal, como o etanol, por exemplo, o CO2

liberado igual ao usado pelas plantas para a fotossntese e ser reabsorvido
tornando o ciclo de carbono nulo, o que evita o aumento do efeito estufa.
Alm do mais, o etanol produz menos CO, HC e NOx do que a gasolina de
aviao, quando queimado. O etanol no produz chama de detonao por
causa de sua alta octanagem, o que aumenta a eficincia do motor, visto que
possvel aumentarem-se as taxas de compresso no interior do cilindro,
injetando-se mais combustvel e aumentando a potncia de sada (Pontopiddan et al., 2006).
Neste trabalho foi utilizado um motor Lycoming IO-540 convertido,
que capaz de operar tanto com lcool quanto com combustvel, mantendo
a mesma configurao. Deve-se salientar que a capacidade de operar aeronaves militares com bicombustvel apresenta um aspecto estratgico muito
importante, pois aumenta a autonomia do pas em relao defesa nacional.
Este trabalho d suporte s pesquisas de desenvolvimento do motor bicombustvel, tanto no aspecto de desempenho quanto no de eficincia ecolgica.
Caractersticas do motor de combusto interna

A srie de motores Lycoming IO-540 possui seis cilindros horizontalmente opostos, com acionamento direto da hlice, sem reduo, refrigerados a ar. Os cilindros so de fabricao convencional com cabeas feitas de
liga de alumnio fundido e uma cmera de combusto completa. A Tabela
17.12 apresenta as caractersticas do motor.
Tabela 17.12 Caractersticas do motor (Lycoming Engines, 2007)

Tipo
4 tempos, ignio por centelha
Nmero de cilindros
Taxa de compresso
Curso do pisto (polegadas)
Dimetro do cilindro (polegadas)
Deslocamento volumtrico (polegadas cbicas)
Potncia nominal
6 opostos
8,7:1
4,375
5,125
541
300hp2.700rpm
578
A ideia inicial manter as caractersticas mecnicas do motor. Isso significa utilizar a mesma configurao original incluindo a taxa de compresso. Para auxiliar a partida do motor com etanol em dias frios utilizado o
mesmo conceito dos automveis, ou seja, um pequeno tanque de gasolina
para iniciar o processo.
Descrio do experimento
A bancada de testes para motores aeronuticos a pisto apresentada
na Figura 17.11. Essa bancada possui um motor Lycoming IO-540-K1D5,
idntico ao que equipa a aeronave NEIVA T-25 UNIVERSAL, de dotao da Fora Area Brasileira.
Figura 17.11 Viso geral da bancada de testes com motor Lycoming IO-540 (IAE).
Nessa bancada so efetuadas vrias medies por meio de sistemas diversos, com o armazenamento imediato das informaes no banco de dados
eletrnico, permitindo assim a posterior anlise do funcionamento do motor, por intermdio do aplicativo FieldChart. Entre essas medies esto:
as temperaturas nas cabeas e dos gases de exausto (de escapamento)
de cada um dos cilindros;
a vazo de combustvel;
579
as temperaturas e as presses do ar de admisso e do leo;

a temperatura e as presses do combustvel;
a rotao do motor;
a presso atmosfrica.
A experincia consistiu nas medidas de emisses de poluentes e dos

parmetros de desempenho do motor em pontos definidos previamente,
sob determinadas condies de rotao e frao da mistura ar-combustvel.
Para cada condio tambm foram medidos o torque com o medidor de torque da Lebow, modelo 7541. A emisso de gases foi medida com o analisador de gases Eurotron Greenline 8000.
Os pontos de medio da temperatura foram: cabea do cilindro, leo,
combustvel e escapamento. Alm desses parmetros, tambm foram medidos o fluxo de combustvel, a presso do leo, a presso do combustvel
e a presso de admisso. Os parmetros de desempenho foram constantemente adquiridos ao longo do experimento por meio de um sistema de
aquisio de dados.
O conjunto de dados obtidos permite uma abordagem e anlise bastante
ampla. possvel, portanto, detalhar vrias caractersticas do motor. Dada
a partida no motor, aguardaram-se alguns minutos para o seu aquecimento
e correto funcionamento do seu sistema de lubrificao. Aps isso, o experimento foi realizado seguindo as etapas:
com o comando da mistura em RICA (posio mxima), selecionou-se a rotao de 2.700 rpm por meio do comando da vlvula de entrada
de ar. A partir de ento, foi-se empobrecendo de 10% em 10% a mistura por meio de seu comando de combustvel e os dados foram sendo
adquiridos;
o procedimento foi repetido para as rotaes de 1.800 rpm, 2.000 rpm,
2.200 rpm, 2.400 rpm, 2.600 rpm e 2.700 rpm;
esse procedimento foi realizado para a condio de 100% de gasolina e
100% de etanol.
Anlises preliminares de desempenho

Para melhor visualizao e anlise, os resultados so apresentados em
grficos, mostrando rotao, consumo de combustvel, temperatura de ca-
580
bea de cilindro e temperatura de escapamento, em razo da presso de admisso. Tambm apresentado o grfico de potncia em razo da rotao
que foi obtida por meio da medio do torque (ver Grficos 17.8 a 17.12).
Grfico 17.8 Potncia versus rotao.
No Grfico 17.8 possvel observar que o etanol fornece uma potncia

ligeiramente superior da gasolina. J o Grfico 17.9 mostra as curvas de
consumo dos dois combustveis em razo da presso de admisso, de onde
se observa um maior consumo do etanol em comparao com a gasolina.
Grfico 17.9 Consumo de combustvel versus presso de admisso.
581
Apesar de o etanol, por unidade de massa ou volume, ter poder calorfico bem inferior ao da gasolina, cerca de 40% menor, quando se considera a razo estequiomtrica da combusto tem-se que o poder calorfico da
mistura ar-etanol apenas 10% inferior ao da mistura ar-gasolina, o que j
diminui a diferena. Alm disso, ao misturar com o ar e evaporar, o etanol
retira o dobro da quantidade de calor do ar do que retirado pela gasolina,
e isso aumenta a densidade do ar que entra no cilindro. Como a potncia
de um motor proporcional quantidade de ar que se pode pr dentro do
cilindro e o etanol queima mais lentamente no interior do cilindro do que a
gasolina, o que aumenta o tempo em que a presso da combusto atua sobre
o pisto, o motor a etanol acaba por fornecer mais potncia que o motor a
gasolina. Como o etanol fornece potncia maior, o rendimento do etanol
maior ainda em relao gasolina.
O Grfico 17.10 mostra as temperaturas de cabea do cilindro mais crtico (maior grau de aquecimento), no caso o cilindro 5; por ele nota-se que
o motor opera bem mais frio quando opera com lcool, pelo menos 40C.
Esse fato indica que o etanol provoca menor estresse trmico no motor
do que a gasolina.
Grfico 17.10 Temperatura na cabea do cilindro versus presso de admisso.
No Grfico 17.11 so apresentadas as temperaturas do escapamento do

cilindro mais crtico (cilindro 5). Observa-se que o lcool provoca menor
estresse trmico no motor do que a gasolina.
582
Grfico 17.11 Temperatura de escapamento versus presso de admisso.
Durante essa etapa, para cada determinada posio da borboleta (isto

, para cada diferente vazo de ar) foi ajustada a entrada de combustvel,
variando desde mistura rica, com excesso de combustvel, passando pela
estequiomtrica, at a mistura pobre. Observou-se em todas as situaes
analisadas que o ponto de relao estequiomtrica caracterizado por um
aumento sbito, porm sutil, na rotao e no torque. O Grfico 17.12 ilustra essa condio.
Grfico 17.12 Vazo versus torque e potncia (2.700 rpm).
583
Eficincia ecolgica
Em 1999, Cardu e Baica (1999a) introduziram o conceito de dixido de
carbono equivalente [(CO2)e]. Baseando-se na concentrao mxima permitida para o CO2, que 10.000 mg/m, determinam-se os coeficientes
equivalentes para alguns poluentes. As concentraes mximas admissveis para alguns gases nocivos na atmosfera de um ambiente de trabalho
so apresentadas na Tabela 17.13.
Tabela 17.13 Concentrao mxima admissvel para gases no ambiente de
trabalho
Concentrao mdia
(mg/m3)
Mxima concentrao
admissvel (mg/m3)
CO2
7.000
10.000
SO2
10
15
NOX
10
Gs
A World Health Organization (Villela, 2007) apresenta valores especficos para concentrao mxima admitida para exposio de uma hora,
conforme apresentado na Tabela 17.14.
Tabela 17.14 Padres de qualidade do para uma hora
Gs
concentrao mxima para 1h

(mg/m3)
SO2
125
NOX
200
O limite de materiais particulados emitidos por um processo de combusto especificado pelo Conselho Nacional do Meio Ambiente (Conama), por meio de sua Resoluo n 3, de 28 de junho de 1990. Essa resoluo
considera para padres secundrios de qualidade do ar uma concentrao
mdia de 24 horas de 150 mg/m3 de materiais particulados, que no deve
ser excedida mais de uma vez no ano (Brasil, 2007).
Para o clculo do coeficiente de dixido de carbono equivalente, divide-se a mxima concentrao de CO2 permitida pelo padro de qualidade de
ar prevista pelo WHO para NOx, SO2 e MP em uma hora (Villela, 2007).
584
A expresso para (CO2)e ilustrada pela Equao (17.22) (Cardu; Baica,

1999a).
( CO2 )e = ( CO2 ) + 80 ( SO2 ) + 50 ( NOX ) + 67 ( MP )
(17.22)
Na Equao (17.22), (SO2)e = 80(SO2) o dixido de enxofre equivalente em (CO2), (NOx)e = 50(NOx), o dixido de nitrognio equivalente em
(CO2) e o material particulado equivalente em (CO2) (MP)e = 67(PM).
O melhor combustvel do ponto de vista ecolgico o que apresenta um
quantidade mnima de dixido de carbono equivalente (CO2)e proveniente
da combusto. Para quantificar o impacto ambiental, Cardu e Baica (1999a)
propem um indicador, definido como a diferena entre o dixido de carbono equivalente do combustvel e seu poder calorfico inferior (PCI). A
esse indicador deu-se o nome de indicador de poluio, representado por
g, Equao (17.23).
g =
( CO2 )e
(17.23)
Qi
onde:
(CO2)e dixido de carbono equivalente (kg/kgcomb);
PCI poder calorfico inferior do combustvel (MJ/kgcomb);
g indicador de poluio (kg/MJ).
A eficincia ecolgica (e) um indicador adimensional que permite
avaliar o impacto ambiental das emisses gasosas de uma planta termoeltrica, mediante uma comparao entre emisses poluentes integradas hipoteticamente (emisses equivalentes de CO2) com os padres existentes de
qualidade do ar. Considera-se tambm a eficincia de converso como um
fator determinante sobre as emisses especficas, expresso por um nmero
fracionrio, Equao (17.24) (Cardu; Baica, 1999a)
0,204
=
ln (135 g )
+ g
0,5
(17.24)
onde integra em um s coeficiente os aspectos que definem a intensidade

do impacto ambiental de uma unidade termeltrica: a composio do com-
585
bustvel, a tecnologia de combusto, o indicador de poluio e a eficincia

de converso. O valor de varia (entre 0 e 1), diretamente proporcional
ao valor do indicador de poluio (g). Do ponto de vista ecolgico, um valor mnimo admissvel para a eficincia ecolgica seria igual a 0,5 que seria
chamado valor crtico de eficincia ecolgica, e o valor = 0 considera-se
situao insatisfatria (muito poluidor), mas = 1 indica uma situao ideal
(poluio zero) (Villela, 2007).
Gasolina e etanol
A gasolina um combustvel constitudo basicamente por hidrocarbonetos. Esses hidrocarbonetos so, em geral, menos pesados que aqueles
pertencentes ao diesel (normalmente tm de 5 a 8 molculas de carbono).
Alm dos hidrocarbonetos, a gasolina contm compostos metlicos, tais
como o chumbo tetraetila e o dibrometo de etileno (Petrobras, 2007).
A frmula qumica da gasolina de aviao usada neste trabalho de
aproximadamente 65% de iso-octano, 20% de iso-pentano e 15% de tolueno; com densidade de 740 kg/m3 (Brasil, 2006). A Equao (17.25) normalizada para excesso de ar ().
0,65C8 H18 + 0,2C7 H8 + 0,15C5 H12 + 12,5O2 + 47N2

8CO2 + 9H2O + 47N2 + 12,5( 1) O2
(17.25)
Adotando-se que a gasolina seja queimada na mistura com 30% de excesso de ar, depois do balano estequiomtrico a porcentagem em massa de
cada componente resultante da reao : 15,48 % CO2; 6,51 % H2O; 72,90
% N2 e 5,11 % O2.
A frmula qumica do etanol etlico C2H5OH e sua densidade de
790 kg/m3, para sua reao de combusto estequiomtrica o resultado : 88
gCO2 para 46 g etanol, consequentemente: 1.511 t de CO2 por m3 de etanol.
1C2H5OH + 3O2 + 11,28N2
2CO2 + 3H2O + 11,28N2 + 3 ( 1) O2
(17.26)
Adotando-se que o etanol seja queimado na mistura com 30% de excesso

de ar, depois do balano estequiomtrico a porcentagem em massa de cada
586
componente resultante da reao : 15,14 % CO2; 9,29 % H2O, 70,62 % N2

e 4,95 % O2.
Toxicidade em motores de combusto interna usando

gasolina e etanol
As substncias que compem os gases de exausto podem ser classificadas em vrios grupos: nitrognios, oxignios, hidrognios, vapor e dixido de carbono, pertencentes ao grupo no txico; e monxido de carbono (CO), xidos de nitrognio (NOx), hidrocarbonetos (CxHy), aldedos
(RxCHO), fuligem, dixido de enxofre (SO2), cido sulfrico e material
particulado, pertencentes ao grupo txico. Os hidrocarbonetos poliaromticos (PAH) so substncias cancergenas e formam um grupo especial (Lizarraga, 1994).
Em geral, quando 1 kg de gasolina queimado, libera-se de 300 g a 310
g de componentes txicos, especificamente: 225 g de CO; 55 g de NOx; 20
g de HC; 1,5 g a 2 g de SO; 0,8 g a 1 g de aldedos; 1 g a 1,5 g de fuligem
(Patrakhaltsev et al., 1993). O MP emitido por motores de combusto interna a gasolina 1,44 kg/m3 (Carvalho Jr.; McQuay, 2007). Em um motor
de combusto interna operando com etanol puro elimina-se a emisso de
enxofre, o que representa uma vantagem sobre a gasolina. Por sua vez, o
uso de etanol gera uma quantidade de material particulado insignificante
que desprezado para efeito de clculos. Finalmente, as emisses de NOx,
de acordo com a Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental (Cetesb), so de aproximadamente 0,8 kg/m3.
Clculo da eficincia ecolgica

A Tabela 17.15 apresenta uma comparao terica entre as emisses da
gasolina e do etanol quando utilizados em um motor de combusto interna. O Grfico 17.13 apresenta os valores da eficincia ecolgica calculados
para os dois combustveis analisados e, finalmente, no Grfico 17.14, so
apresentados os valores da eficincia ecolgica em razo do desempenho do
motor.
587
Tabela 17.15 Comparao dos resultados tericos de emisses de poluentes entre os combustveis analisados em motores de combusto interna
Emisso de poluente
(kg/kg de comb)
Gasolina de aviao
Etanol
Gasolina/etanol
(CO2)e
6,1710
1,9688
3,13 vezes
MP
1,945.10
NOX
55.10-3
1,1163.10-3
49,27 vezes
SO2
2.10-3
CO2
3,1306
1,9130
1,63 vez
Total (kg/kg de
combustvel)
Eficincia ecolgica (%)
3,1876
1,9141
1,66 vez
82,43
89,51
-3
Grfico 17.13 Eficincia ecolgica da gasolina e do etanol (lcool).
Grfico 17.14 Variao da eficincia ecolgica em razo do desempenho do motor de combusto interna.
588
A Tabela 17.16 apresenta a comparao de emisses de poluentes de

motores de combusto interna utilizando diferentes combustveis.
Tabela 17.16 Comparao dos resultados de emisses de poluentes entre os combustveis analisados em motores de combusto interna (Coronado-Rodrguez et al., 2009)
Emisso de poluente
(kg/kg de comb)
(CO2)e
Gs
natural
Diesel
Gasolina(*)
Biodiesel Biodiesel Diesel/

B20
B100
B100
2,727
8,529
5,891
MP
1,71.10-5
15,27.10-3
1,92.10-3
14,21.10-3 9,931.10-3
1,5
NOX
4,41.10
-2
4.10
5,5.10
4,04.10
0,9
SO2
1,21.10-6
3.10-2
2.10-3
2,4.10-2
CO2
2,704
3,106
2,853
2,61
0,658
4,7
Total (kg/kg de
combustvel)
2,7042
3,161
2,912
2,689
0,71
4,4
Eficincia ecolgica (%)
91,95
77,34
85,52
78,94
87,58
(*)
-4
-2
7,502
3,423
-2
4,2.10
-2
2,5
Gasolina com 20% de etanol.
Comparando-se o etanol com a Tabela 17.16 observa-se que o motor

apresenta uma eficincia ecolgica excelente (89,51%), ficando abaixo somente do gs natural. importante salientar que a eficincia ecolgica calculada no considera o ciclo de carbono do etanol, o que significa que seu
valor maior do que o apresentado.
Influncia da mistura na emisso de poluentes

Esta parte do trabalho avaliou a influncia da relao ar/combustvel
quanto emisso de poluentes. O experimento foi realizado iniciando em
1.800 rpm com mistura totalmente rica (100%) e, a partir da, essa foi sendo
empobrecida at que o motor comeasse a apresentar falhas. Esse procedimento foi repetido para 2.000 rpm, 2.200 rpm, 2.400 rpm, 2.600 rpm e
2.700 rpm.
As emisses de CO2 so dadas em porcentagem de volume, e as de CO
e NOx, em ppm.
Nos Grficos 17.15, 17.16 e 17.17 so apresentados CO, CO2 e NOx,
respectivamente, para a rotao de 2.000 rpm.
Grfico 17.15 Emisso de CO para 2.000 rpm.
Grfico 17.16 Emisso de CO2 para 2.000 rpm.
Grfico 17.17 Variao de NOx para 2.000 rpm.
589
590
Observa-se que o CO diretamente proporcional a uma reao com

mais combustvel e que o CO2 inversamente proporcional. Essa concluso coerente, pois uma reao com excesso de ar gera mais CO2 do que
uma com falta de ar. A gerao de CO e de CO2 apresentam curvas com
derivada contrria.
Quanto ao NOx, sua emisso diretamente proporcional temperatura
na cmara de combusto.
Concluses
Os estudos preliminares mostraram que h muitas vantagens em se
utilizar lcool como combustvel em motores de combusto interna. Essas
vantagens suportam as pesquisas com os motores aeronuticos bicombustveis. Elas so:
os motores podem operar em temperaturas mais baixas que os seus
limites, o que reduz o desgaste das cabeas de cilindro. A temperatura
na cabea de cilindro um parmetro crtico para esse tipo de motor;
o lcool produz menos emisses de poluentes e, consequentemente,
agride menos o meio ambiente;
em termos de eficincia ecolgica, de acordo com os combustveis
analisados, para gasolina e lcool os valores so, respectivamente,
82,43% e 89,51%.
Os estudos mostram que o lcool pode ser utilizado como uma alternativa de combustvel do ponto de vista ecolgico, uma vez que tem maior
eficincia ecolgica que a gasolina.
Este trabalho faz parte do programa de pesquisa e desenvolvimento motor de combusto interna aeronutico bicombustvel brasileiro e suportar
a tomada de decises no estudo de viabilidade econmica e ambiental do
mesmo.
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VILLELA, I. A. C.; SILVEIRA, J. L. Ecological efficiency in thermoelectric power
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18
Uso de biogs para produo
de gua gelada e eletricidade
Jos Luz Silveira, Wendell de Queirz Lamas,
Iraides Aparecida de Castro Villela,
Giorgio Eugenio Oscare Giacaglia,
Luiz Octvio Mattos dos Reis
Anlise energoeconmica do aproveitamento do biogs

gerado na estao de tratamento de efluentes de um
laticnio para a produo complementar de gua gelada
Atribui-se o nome de biogs mistura gasosa, combustvel, resultante
da fermentao anaerbica da matria orgnica; essa mistura constituda,
em volume, por metano (CH4), com valores mdios entre 55% e 65%, e por
dixido de carbono (CO2) com aproximadamente 35% a 45% de sua composio. O biogs obtido a partir da decomposio anaerbica de lixo urbano, resduos animais e de lamas provenientes de estaes de tratamento
de efluentes. Pela presena do metano, um gs combustvel, e seu poder
calorfico inferior aproximadamente 5.500 kcal/m3, quando a proporo
em volume de metano em mdia 60%.
O grande volume de resduos provenientes das exploraes agrcolas e
pecurias, assim como aqueles produzidos por matadouros, indstrias de
laticnios, esgotos domsticos e estaes de tratamento de lixos urbanos
apresentam uma carga poluente de tal forma elevada, que impem a criao
de solues que permitam diminuir os danos provocados por essa poluio, procurando gastar o mnimo de energia possvel em todo o processo.
Assim, o tratamento desses efluentes pode processar-se por intermdio da
fermentao anaerbia que, alm da capacidade de despoluir, permite valorizar um produto energtico (biogs) e ainda obter um fertilizante cuja
596
disponibilidade contribui para uma rpida amortizao dos custos da tecnologia instalada (Pires, 1996).
Industrialmente, o biogs tem possibilidade de atuar como uma alternativa eficiente e econmica, e entre as atividades mais indicadas utilizao
da biodigesto como fonte geradora de combustvel tm-se as indstrias de
laticnios, as extratoras de leos vegetais, as usinas de acar, as agroindstrias produtoras de alimentos, as criaes de aves e sunos, entre outras (Gastaldoni, 1985). O biogs pode ser aproveitado tanto em sua queima direta
(aquecedores, foges, caldeiras etc.) como tambm para a produo simultnea de energia eltrica e trmica por meio da cogerao.
O objetivo deste trabalho analisar energtica e economicamente a viabilidade do aproveitamento do biogs gerado no reator anaerbico da Estao de Tratamento de Efluentes (ETE) de um laticnio, que atualmente
queimado e lanado ao meio ambiente. A ideia utilizar esse biogs como
fonte de energia alternativa para a produo complementar de gua gelada,
destinada cmara frigorfica da referida indstria.
Caracterizao do sistema de recuperao

de calor residual
A Figura 18.1 caracteriza o combustor o qual permite a recuperao de
calor residual produzido da queima do biogs na ETE. O combustor dever possuir uma vlvula de ar de modo a manter a temperatura de queima desses gases no mximo a 1.000C. A vazo desses gases oriundos da
combusto acionar o sistema de refrigerao por absoro (SRA) de NH3
+ H2O, para produzir gua gelada complementar a 1C, necessria ao processo (Villela et al., 1985).
Figura 18.1 Esquema da instalao proposta.
ANALISE ENERGOEGONMICA DO APROVEITAMENTO DO BIOGS
597
Sistema de refrigerao por absoro

Mquinas de absoro
Mquinas de absoro so equipamentos de produo de frio ou quente
que operam com um dos princpios mais primitivos da refrigerao. No ciclo, a gua, um fluido secundrio, absorve a amnia, um fluido refrigerante primrio, o qual vaporizado. O processo de evaporao absorve calor,
suprindo assim a refrigerao necessria. Geralmente os equipamentos de
absoro de amnia e gua so usados em grandes aplicaes industriais
que requerem baixas temperaturas para o processo de resfriamento; nesses
ciclos utilizam-se amnia como refrigerante e gua como absorvente. O sistema de refrigerao por absoro consiste basicamente em um evaporador,
um absorvedor, um condensador, um gerador, um trocador de calor, uma
pequena bomba e auxiliares. Na parte inferior do sistema so localizados o
absorvedor e o evaporador, ocupando a mesma carcaa, e na parte superior,
em outra carcaa esto localizados o gerador e o condensador (Costa, 1976).
Instalao proposta para a cooperativa de laticnios

A Figura 18.2 apresenta o sistema de refrigerao por absoro proposto
para o laticnio, que dever utilizar a mistura binria de amnia e gua. O
ciclo de refrigerao proposto pode ser explicado como segue: no gerador
ocorrer a dissociao da amnia, mediante o calor fornecido pelos gases de
exausto, no ponto 20 da Figura 18.2. Essa soluo de amnia, dissociada
no gerador, ser ento enviada para o retificador, onde uma pequena frao
de gua ser deslocada para o gerador, no ponto 8 da Figura 18.2. Do retificador, a soluo rica de amnia ser enviada para o condensador, onde ser
liquefeita e fluir para o evaporador. Essa soluo ser expandida isoentalpicamente (vlvula de expanso), acarretando um decrscimo em sua temperatura e presso. No absorvedor, a soluo fraca de amnia proveniente
do gerador absorver o vapor de amnia proveniente do evaporador. Essa
mistura ser ento bombeada para o gerador e o ciclo ser restaurado.
Ocorre a produo de gua quente atravs da passagem de gua (25C)
da rede pelo absorvedor e posteriormente pelo condensador, onde o calor
produzido elevar a temperatura ao redor de 36C.
598
O objetivo deste trabalho, que a produo de gua gelada, ser obtido

atravs da passagem de uma gua de retorno do processo a 11C pelo evaporador, obtendo-se finalmente gua gelada a 1C.
Figura 18.2 Configurao do sistema de refrigerao por absoro.
A Tabela 18.1 apresenta os parmetros termodinmicos do ciclo de absoro referentes Figura 18.2 (Herold et al., 1996, p.329).
Tabela 18.1 Dados termodinmicos do sistema de refrigerao por absoro
PONTOS
P [MPa]
T [OC]
h [kJ/kg]
s [kJ/kgK]
x [kg/kg]
0,240
40,000
-42,282
0,474
0,368
1,555
40,500
-39,235
0,479
0,368
1,555
110,700
306,753
1,465
0,368
1,555
131,000
401,628
1,652
0,268
1,555
40,500
0,863
0,533
0,268
0,204
40,700
0,863
0,537
0,268
1,555
108,000
1547,495
4,891
0,944
1,555
108,000
264,124
1,354
0,368
1,555
44,000
1294,195
4,173
0,999
10
1,555
40,000
190,124
0,659
0,999
11
0,240
-14,500
190,124
0,763
0,999
12
0,240
-10,000
1264,271
5,000
0,999
13
0,150
25,000
105,000
0,367
0,000
14
0,200
25,001
105,050
0,367
0,000
15
0,180
31,000
130,110
0,451
0,000
Continua
599

16
0,160
36,000
150,970
0,520
0,000
17
0,150
11,000
46,340
0,166
0,000
18
0,200
11,001
46,390
0,166
0,000
19
0,180
1,000
4,341
0,015
0,000
20
0,360
970,000
21
0,200
250,000
Anlise energtica do sistema de refrigerao por absoro

A anlise termodinmica do sistema de refrigerao por absoro realizada a partir do balano energtico de sua instalao, o que torna indispensvel o conhecimento perfeito do equilbrio entre o fluido refrigerante
adotado e a substncia absorvente. As Equaes (18.1) a (18.7) mostram os
clculos necessrios do ciclo representado na Figura 18.2.
Note-se que o calor no gerador se refere ao entregue pelos gases e representado pela Equao (18.1)
=Q

gases Cpgases T
Q
g
gases = m
(18.1)
De acordo com Petbow (1998), o coeficiente de desempenho (Coefficient

of Performance COP) para a produo de frio (em simples estgio) varia
entre 0,4 e 1. Neste trabalho utilizou-se um valor para o COP = 0,75. O
fluxo de calor do evaporador pode ser determinado pela Equao (18.2).
= COP Q

Q
e
f
g
(18.2)
Da equao do balano de energia, os fluxos de calor do evaporador e do

condensador so determinados pelas Equaes (18.3) e (18.4).
+m
11 h11 = m
12 h12
Q
e
(18.3)
+m
9 h9 = m
10 h10
Q
c
(18.4)
Os valores de Cpag = 4,2026 kJ/kg.K e Cpag = 4,1790 kJ/kg.K foram usados respectivamente para determinar os fluxos de gua fria e de gua quente, baseados em Keating (1993, p.512-52), nas Equaes (18.5) e (18.6).
600

Q
e
af =
m
(18.5)
Cpag ( T18 T19 )
aq =
m

Q
c
Cpag ( T16 T15 )
(18.6)
A vazo mssica de gases de exausto, nos pontos 20 e 21, determinada pela relao estequiomtrica 21,23 kgar/kgbiogs, de acordo com Keating
(1993), Barcla (1995, p.155) e Van Wylen e Sonntag (1993), Equao (18.7).

m
gases
+m
=m
+ 21,23 . m
= 22,23 . m

= m
b
ar
(18.7)
Por meio de clculos, pode-se chegar aos seguintes fluxos mssicos do

sistema de refrigerao apresentado na Figura 18.2, Tabela 18.2.
Tabela 18.2 Vazes mssicas do sistema de refrigerao por absoro
FLUIDOS
H2O + NH3
H2O
GASES DE QUEIMA
PONTOS
VAZES MSSICAS [kg/s]

58Nm3/h
80Nm3/h
0,5000
0,7000
0,5000
0,7000
0,5000
0,7000
0,2928
0,4142
0,2928
0,4142
0,2928
0,4142
0,2283
0,3141
0,0211
0,0283
0,2072
0,2858
10
0,2072
0,2858
11
0,2072
0,2858
12
0,2072
0,2858
13
10,9498
15,1032
14
10,9498
15,1032
15
10,9498
15,1032
16
10,9498
15,1032
17
5,2966
7,3057
18
5,2966
7,3057
19
5,2966
7,3057
20
0,3582
0,4940
21
0,3582
0,4940
601
Para se determinar os fluxos de calor do absorvedor, gerador e retificador, as Equaes (18.9) a (18.10) foram utilizadas. Essas equaes foram
obtidas tambm do balano energtico dos respectivos componentes.
+m
h +m
h =m
h
Q
a
(18.8)
+m
h +m
h =m
h +m
h
Q
g
3 3
8 8
4 4
7 7

h =m
h +m
h
Q +m
(18.9)
12 12
6 6
7 7
1 1
8 8
9 9
(18.10)
Por ltimo, a potncia de bomba do sistema pode ser determinada pela

Equao (18.11).
= m
h m
h
W
(18.11)
b
1 1
2 2
A Tabela 18.3 mostra os fluxos energticos obtidos em relao vazo

mnima de 58 Nm3/h e mxima de 80 Nm3/h de biogs respectivamente.
Tabela 18.3 Dados gerais do sistema
ITEM [kW]
Qa
Qc
Qe
Qg
Qr
Wb
58 Nm3/h [kJ/s]
80 Nm3/h [kJ/s]
283,35
391,28
228,80
315,58
222,60
307,03
296,79
409,37
79,53
108,72
1,52
2,13
O Grfico 18.1 mostra as variaes dos fluxos de calor em razo do volume de biogs produzido na ETE.
Grfico 18.1 Variao dos fluxos de calor em relao ao volume de biogs.
602
Por meio das Equaes (18.5) e (18.6), os fluxos de gua fria e de gua
quente foram obtidos e os resultados esto representados na Tabela 18.4.
Tabela 18.4 Vazes de gua fria e de gua quente na mquina de absoro
FLUXOS
58 Nm3/h [kg/s]
80 Nm3/h [kg/s]
5,30
7,31
m
aq
10,95
15,10
af
O Grfico 18.2 mostra as variaes nas vazes mssicas de gua fria e de

gua quente do sistema de refrigerao por absoro em razo da produo
de biogs, para um faixa entre 58 Nm3/h e 80 Nm3/h.
Grfico 18.2 Variao das vazes mssicas de gua fria e quente em razo do volume de
biogs.
Sistema de refrigerao por compresso de vapor

Configurao do sistema convencional
O Sistema de Refrigerao por Compresso de vapor (SRC), conforme
mostrado na Figura 18.3, ser dimensionado com a mesma capacidade frigorfica do SRA, de modo a permitir uma comparao direta entre os sistemas de refrigerao.
603
A Figura 18.3 mostra o ciclo da amnia no SRC. Inicialmente a amnia comprimida e enviada para o condensador no ponto 1. Ela se liquefaz
no condensador e enviada para a vlvula de expanso onde expandida
isoentalpicamente, o que ocasiona uma diminuio em sua temperatura e
presso. No evaporador obtida uma soluo rica em amnia e encaminhada ao compressor, reiniciando-se assim o ciclo.
H uma produo de gua quente por meio da passagem da gua da rede
pelo condensador, onde o calor liberado utilizado para elevao da temperatura de 25C para 36C.
A produo de gua gelada a 1C, que o objetivo deste trabalho, obtida por meio da passagem de uma gua de retorno do processo a 11C pelo
evaporador.
Figura 18.3 Configurao do sistema de refrigerao por compresso de vapor.
A Tabela 18.5 caracteriza as propriedades termodinmicas mostradas

nos pontos da Figura 18.3 (Barcla, 1995, p.155).
604
Tabela 18.5 Dados termodinmicos do sistema de refrigerao por compresso

da amnia
PONTOS
P [MPa]
T [oC]
h [kJ/kg]
s [kJ/kgk]
1,30
120,000
1705,30
5,619
1,20
30,000
322,50
1,200
0,30
-9,221
322,50
1,253
0,28
-4,000
1446,90
5,545
0,15
25,000
105,00
0,367
0,20
25,001
105,05
0,367
0,18
36,000
150,99
0,519
0,15
11,000
46,34
0,166
0,20
11,001
46,39
0,166
10
0,18
1,000
4,341
0,015
Anlise energtica do sistema de refrigerao

por compresso
As Equaes (18.12) a (18.17) foram utilizadas para a anlise energtica
do sistema de refrigerao por compresso de vapor.
(18.12)
=m
. h h
Q
c
2
1
(18.13)
(18.14)
=m
. h h
Q
e
=m
. h h
W
c
COPe =

Q
ev

Wc
(18.15)
COPq =

Q
c

W
(18.16)
+Q

Q
c
e

W
(18.17)
COPt =
605
As mesmas potncias frigorficas associadas ao SRA, ou seja, Q e =
222,60 kW (para 58 Nm3/h de biogs) e Q e = 307,03 kW (para 80 Nm3/h

de biogs), foram consideradas para o SRC.
O trabalho do compressor e os coeficientes de desempenho (Wc, COPe,

COPq, COPt ) propostos para o sistema foram obtidos por meio das consideraes mencionadas e das Equaes (18.12) a (18.17).
A Tabela 18.6 mostra os valores energticos (fluxos de calor, trabalho
do compressor e coeficientes de desempenho) no caso de SRC, comparativamente ao SRA.
Tabela 18.6 Dados gerais do sistema convencional de compresso do vapor
ITEM
Q c [kW]
Q e [kW]
Wc [kW]
273,75
377,59
222,60
307,03
51,16
70,56
COPe
4,35
4,35
COPq
5,35
5,35
COPt
9,70
9,70
A Tabela 18.7 mostra os valores dos fluxos de mssicos da gua e da

amnia no SRC.
Tabela 18.7 Fluxos mssicos do fludo refrigerante (NH3) e da gua
FLUIDOS
NH3
H2O
PONTOS
Capacidade Frigorfica [kW]

222,60 kW
307,03 kW
0,1980
0,2731
0,1980
0,2731
0,1980
0,2731
0,1980
0,2731
5,9551
8,2140
5,9551
8,2140
5,9551
8,2140
5,2966
7,3057
5,2966
7,3057
10
5,2966
7,3057
606
O Grfico 18.3 mostra as variaes dos fluxos de calor em razo do

volume de biogs no SRA, de modo a comparar a eficincia de ambos os
sistemas.
Grfico 18.3 Variao dos fluxos de calor.
A Tabela 18.8 mostra os fluxos de gua fria e quente no SRC.

Tabela 18.8 Vazes de gua fria e de gua quente na mquina de compresso
em razo da capacidade frigorfica
FLUXOS
222,60 kW
307,03 kW
5,30
7,31
m
aq
5,96
8,21
af
Anlise econmica dos sistemas produtivos

A receita anual esperada foi determinada baseando-se nos custos de produo de gua gelada nos dois sistemas (SRA e SRC), para a anlise econmica proposta.
Custos de investimentos
As Equaes (18.18) e (18.19) definem os custos de investimentos para
o sistema de refrigerao por absoro (incluindo sistema de queima) e
607
por compresso de vapor, e so vlidas para a faixa de potncia frigorfica

entre 223 kW e 308 kW, de acordo com Silveira e Carvalho Jr. (1997) e
Boehn (1987).
Custo de investimento no SRA
0,66
I
= 253000 .
SRA
264,815
[US$]
(18.18)
[US$]
(18.19)
Custo de investimento no SRC

0,53
I
= 192500 .
SRC
264,815
Custos de manuteno nos sistemas

O custo de manuteno para o SRA considerado de acordo com Boehn
(1987), Equao (18.20).
CM
SRA
= 0,1 .
SRA
.f
H.P
f
[US$/kWh]
(18.20)
A Equao (18.21) define o custo de manuteno para o sistema de refrigerao por compresso de vapor para uma potncia frigorfica entre 20
kW e 5.000 kW, de acordo com (Silveira, 1994).
P
CM
= 8000 . f
SRC
1790
0,42
[US$$/kWh]
(18.21)
Custos de produo de gua gelada nos sistemas

As Equaes (18.22) e (18.23) so utilizadas para o custo de produo
de potncia frigorfica adaptando-se as metodologias em Boehn (1987), Silveira e Nogueira (1992) e Kehlhofer (1987), sendo respectivamente o custo
608
de produo de gua gelada no SRA e o custo de produo de gua gelada

no SRC.
CA =
SRA
.f
H.P

C .Q
P .W
el
+ CM
SRA
[US$/kWh]
(18.22)
Note-se que, nessa metodologia de clculo, o custo do biogs para a produo de gua gelada leva em considerao a energia lquida utilizada, ou
seja, o calor entregue no gerador.
CC =
SRC
.f
H.P
CM
Pel
SRC
+
COP
H.P
[US$/kWh]
(18.23)
O fator de anuidade (f), indicado nas equaes de custo, determinado

pela Equao (18.24).
f =
qk . ( q-1)
(18.24)
qk - 1
sendo:
q = 1 + r /100
(18.25)
A Tabela 18.9 mostra os parmetros para a anlise econmica para os

sistemas de refrigerao propostos.
Tabela 18.9 Parmetros para a anlise econmica
Taxa anual de juros (r)
Payback (k)
Horas de funcionamento da central (H)
Preo de compra da eletricidade (Pel)
Custo do biogs (Cb)
12%
3 anos
7.000 h/ano
0,069 US$/kWh
variando entre 0,000 0,008 US$/kWh
Deve-se ressaltar que ser efetuada a variao de alguns parmetros,

permitindo observar a influncia desses fatores na viabilidade econmica
das instalaes.
609
A Tabela 18.10 mostra os valores de investimentos (capital + instalao)

e manuteno e a Tabela 18.11, o custo de produo de gua gelada nos dois
sistemas de refrigerao (SRA e SRC).
Tabela 18.10 Valores de investimentos e de manutenes
Investimentos
Manuteno
Pf
ISRA
ISRC
CMSRA
CMSRC/H Pf
[kW]
[US$]
[US$]
[US$/kWh]
[US$/kWh]
SRAa
181,06
230061,64
0,00
0,0061465
0,0000000
SRAb
249,73
284457,21
0,00
0,0055010
0,0000000
SRCa
181,06
0,00
180134,07
0,0000000
0,0021391
SRCb
249,73
0,00
213605,96
0,0000000
0,0017751
* Nota: a Capacidade frigorfica de 222,6 kW; b Capacidade frigorfica de 307,03 kW.
Tabela 18.11 Custos de produo de gua gelada em funo do preo do biogs

Cb [US$/kWh]
Custo de produo de gua gelada [US$/kWh]

SRAa
SRAb
SRCa
SRCb
0,000
0,0619433
0,0610948
0,0661327
0,0590173
0,002
0,0646099
0,0637615
0,0661327
0,0590173
0,004
0,0672765
0,0664281
0,0661327
0,0590173
0,006
0,0699431
0,0690948
0,0661327
0,0590173
0,008
0,0726096
0,0717614
0,0661327
0,0590173
Clculo da receita anual

A receita anual esperada calculada pela soma dos ganhos ou benefcios
anuais em razo da instalao do sistema na verso SRA em vez de SRC
(ganhos pela produo de gua gelada). A Equao (18.26) mostra os ganhos ou benefcios anuais pela instalao do sistema proposto, comparando
SRA com SRC.
R =P .H. C C
f
(18.26)
A Tabela 18.12 mostra a receita anual esperada, considerando trs anos

para o perodo de amortizao de capital investido (payback) e uma taxa
anual de juros de 12%, para diversos valores do custo do biogs.
610
Tabela 18.12 Receita anual esperada

Cb [US$/kWh]
Receita anual esperada R [US$/ano]

SRAa
SRAb
6528,86
-4448,86
0,002
2368,46
-10187,26
0,004
-1791,93
-15925,65
0,006
-5936,74
-21642,54
0,008
-10097,14
-27380,94
0,000
Anlise de sensibilidade
O Grfico 18.4 mostra a influncia da taxa de juros sobre o benefcio
anual esperado, considerando um custo do biogs em 0,000 US$/kWh e
um perodo de amortizao de capital em cinco anos.
Grfico 18.4 Receita anual em razo da taxa de juros
611
Note-se que o SRAa economicamente mais vivel do que o SRAb, e

esse torna-se economicamente vivel para taxas de juros inferiores a 15,8%
ao ano.
Mantendo-se o perodo de amortizao de capital em cinco anos, os
Grficos 18.5 (taxa de juros de 8% ao ano) e 18.6 (taxa de juros de 12% ao
ano) mostram a influncia do preo do biogs sobre a viabilidade econmica do investimento.
Grfico 18.5 Receita anual em razo do preo do biogs com taxa anual de juros de 8%.
612
Grfico 18.6 Receita anual em razo do preo do biogs com taxa anual de juros de 12%.
O SRAa apresenta viabilidade econmica garantida para um custo de

biogs de at 0,007 US$/kWh (Figura 18.9) e 0,0065 US$/kWh (Grfico
18.7).
O Grfico 18.7 mostra a influncia do custo do biogs variando de 0,000
US$/kWh a 0,008 US$/kWh sobre a viabilidade econmica do investimento, considerando um taxa de juros de 12% ao ano.
613
Grfico 18.7 Receita anual em funo do preo do biogs.
O SRAa economicamente o mais vivel, com perodo de amortizao

de capital investido variando entre 2,2 anos (para Cb = 0,000 US$/kWh) e
sete anos (para Cb = 0,008 US$/kWh).
Concluses
possvel utilizar o biogs gerado na ETE no laticnio estudado para a
produo de gua gelada complementar a 1C, permitindo uso racional de
energia nos estabelecimentos da fbrica. Nesse caso, a produo de gua
gelada de aproximadamente 7,3 kg/s, considerando uma vazo mdia de
biogs de 80 Nm3/h.
614
Por meio da anlise econmica determinou-se o custo de produo de

gua gelada para as vazes mnimas e mximas de biogs, considerando
uma variao do custo de biogs entre 0,000 US$/kWh e 0,008 US$/kWh.
A instalao do SRA proposto para o laticnio propiciou receita anual esperada positiva, baseado na soma dos ganhos anuais pela instalao do SRA,
em vez do convencional SRC. A viabilidade econmica da instalao do
SRA foi determinada com a variao de alguns parmetros, permitindo observar a sensibilidade desses na sua instalao.
Com relao influncia da tarifa de eletricidade, importante salientar
que a tendncia de aumento de seu valor implicar uma maior vantagem
econmica da implantao do SRA na referida indstria.
Anlise termoeconmica aplicada a uma miniestao

de tratamento de esgoto com autossuficincia
energtica
No Brasil, tem-se um quadro muito desfavorvel com relao rede de
esgoto e ao seu tratamento, onde menos de 55% da populao urbana tem
rede de esgoto, e menos de 20% desse esgoto tratado (Jordo; Alm Sobrinho, 2004). Concomitantemente, h o aumento da contaminao dos corpos dgua, especialmente pelo descarte do esgoto in natura, o que aponta
para uma muito provvel carncia de gua potvel, e o descarte na atmosfera de biogs originado nesse tratamento, o que nocivo ao meio ambiente,
em especial no tocante aos gases de estufa.
Os materiais que constituem o esgoto incluem resduos alimentcios,
esgoto sanitrio e dejetos animais, que so substratos possveis para a produo de gs metano por tratamento anaerbio (ibidem). A partir dessa
caracterstica, um sistema composto por tratamentos anaerbio, aerbio e
anxio do esgoto pode ser considerado uma possibilidade vivel, de baixo
investimento e de grande benefcio populao onde a gua tratada pode
ser utilizada para ferti-irrigao, o que diminui o uso de gua potvel para
esse fim; o biofertilizante gerado a partir da separao dos resduos slidos,
por processo anxio, tambm pode ser aproveitado em reas agrcolas; e o
gs gerado pelo processo anaerbio pode ser utilizado para acionamento de
615
um motor de combusto interna (MCI) que produz energia eltrica para,

no mnimo, autossuficincia energtica da miniestao de tratamento de
esgoto (Lamas, 2007).
Este trabalho tem por objetivo avaliar, por meio da anlise termoeconmica, a viabilidade econmica da miniestao de tratamento de esgoto
(mini-ETE) instalada no campus de Guaratinguet da Faculdade de Engenharia da Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho
(Unesp-FEG).
Metodologia
Este trabalho segue a metodologia proposta por Lamas (2007), adaptada
de Silveira (1998), realizando a identificao das funes que constituem
o sistema em estudo, seguindo-se a construo de seu diagrama funcional
termoeconmico, que base para a formulao do problema de alocao
de custos do tratamento de esgoto realizado na mini-ETE (determinao
das funes exergticas, determinao das equaes de custo, clculo dos
custos associados e estudo da viabilidade econmica).
Identificao das funes do sistema

A primeira parte da anlise termoeconmica consiste em elaborar o diagrama do processo que permita visualizar todos os componentes e todos
os fluxos de materiais relacionados miniestao de tratamento de esgoto.
Os componentes da planta e os fluxos de materiais energticos e exergticos associados so indicados por nmeros que destacam o relacionamento
entre eles, que so utilizados na elaborao do diagrama funcional. A Figura 18.4 ilustra o diagrama de processo da mini-ETE.
Nesse diagrama prevista a utilizao dos insumos ali produzidos, especificamente a energia eltrica, biofertilizante e a gua em condio de reso, respectivamente, para alimentao da sala de controle da mini-ETE,
da iluminao e de uma bomba, e para irrigao de rea verde prxima
mini-ETE. Esse aproveitamento da energia produzida pelo processo de
616
tratamento de esgoto adotado proporciona mini-ETE sua autossuficincia energtica.
Figura 18.4 Diagrama de processo para a mini-ETE.
A partir do diagrama de processo elaborada a Tabela 18.13 que relaciona todas as caractersticas termodinmicas da mini-ETE: tipo de fluido,
vazo, presso, temperatura, entalpia, entropia e exergia especfica. Cada
ponto indicado no diagrama de processo representado na Tabela 18.13
por seu respectivo nmero.
Em razo da no disponibilidade de dados sobre o esgoto, para fins de
clculo, esse foi considerado como sendo lquido.
Segundo Snatural (2007), so necessrios 600 m3/dia de ar para cada 100
3
m /dia de esgoto tratado em biodigestor aerbio. Assim, possvel estimar
a relao ar/esgoto pela Equao (18.27).
ar ar Q ar
m
.
=
es es Q es
m
(18.27)
617
A Tabela 18.13 foi construda com dados obtidos de Godoy Jr. et al.
(2004) para vazo, temperatura e presso, sendo entalpia especfica, entropia especfica e exergia especfica calculados com o programa aplicativo
CATT2 (Borgnakke et al., 2003, p.577) e consultados em (Silveira, 1998).
Tabela 18.13 Caractersticas da miniestao de tratamento de esgoto
Vazo
kg/s
Exergia
Presso Temperatura Entalpia Entropia
Especfica
MPa
K
kJ/kg kJ/kg.K
kJ/kg
Ponto
Fluido
esgoto
0,0160806
0,200
298,15
105,00
0,3673
104,8
esgoto
0,0160806
0,200
298,15
105,00
0,3673
104,8
esgoto
0,01549896
0,180
298,20
105,20
0,3680
105,1
esgoto
0,01493837
0,160
298,25
105,40
0,3687
105,3
biogs
0,00167465
0,160
298,15
28.500(*)
biogs
0,00167465
0,200
298,15
28.500(*)
gases de
exausto
0,01494091
0,300
450,00
31,9
ar ambiente
0,10055596
0,101
298,15
0,0
gua de esgoto 0,01439805
0,140
298,3
105,60
0,3694
105,5
0,01439805
0,180
298,2
105,20
0,3680
105,1
biofertilizante 0,00000273
0,180
298,2
42,08
0,15
5.477,06(*)
0,01439805
0,180
298,15
105,00
0,3673
104,8
13
0,160
298,25
42,160
0,147
5.477,06(*)
14
0,140
298,3
42,240
0,148
5.477,06(*)
8
9
10
11
12
gua em
condio de
re-uso (pr-tratada)
gua em
condio
de re-uso
(tratada)
15
ar ambiente
0,02612447
0,101
298,15
0,0
16
biogs
0,00057890
0,160
298,15
28.500(*)
17
biogs
0,00055796
0,160
298,15
28.500(*)
18
biogs
0,00053778
0,160
298,15
28.500(*)
(*) As exergias especficas do biogs e do biofertilizante so seus prprios PCI.
Construo do diagrama funcional termoeconmico

De acordo com o mtodo desenvolvido por Silveira (1998) e com base no
diagrama de processo apresentado (Figura 18.4), elaborado o diagrama funcional termoeconmico para a mini-ETE, conforme ilustrado na Figura 18.5.
618
Figura 18.5 Diagrama funcional termoeconmico para a mini-ETE.
Formulao do problema de alocao dos custos

do tratamento de esgoto
Determinao das expresses para as funes exergticas
(restries)
Para a determinao das funes exergticas associadas ao diagrama
funcional termoeconmico e de modo a simplificar os clculos sem invalidar a anlise, sero desprezadas as perdas nas tubulaes.
619
A partir do diagrama de processo ilustrado na Figura 18.4 e dos valores

das propriedades termodinmicas indicadas na Tabela 18.13, pode-se determinar os valores dos fluxos exergticos em base incremental, associados
ao diagrama funcional termoeconmico ilustrado na Figura 18.5.
Unidade 1: Caixa de Gordura
1 ( h1-h0 ) T0 ( s1-s0 )
Y1,1 = m
(18.28)
2 ( h2 -h3 ) T0 ( s2 -s3 )
Y1.1 = m
(18.29)
Unidade 2: Biodigestor 1
Y2,1 = Y1.1
(18.30)
16 PCIbg
Y2.1 = m
(18.31)
3 [(h3 h 4 ) T0 (s3 s4 )]
Y2.2 = m
(18.32)
11 PCIbf ) +
Y2.3 = ( 0,6 m
(18.33)
{0,4 m 11 [(h11
h3 ) T0 (s11 s3 )]}
Y3,1 = Y2.2
(18.34)
17 PCIbg
Y3.1 = m
(18.35)
4 [(h 4 - h9 ) - T0 (s4 - s9 )]
Y3.2 = m
(18.36)
13 PCIbf ) +
Y3.3 = ( 0,6 m
{0,4 m 13 [(h13
h 4 ) T0 (s13 s4 )]}
(18.37)
Y4,1 = Y3.2
(18.38)
18 PCIbg
Y4.1 = m
(18.39)
9 g h9
Y4.2 = m
(18.40)
620
14 PCIbf ) +
Y4.3 = ( 0,6 m
{0,4 m 14 [(h14
h9 ) T0 (s14 s9 )]}
(18.41)
Unidade 5: Gasmetro
Y5,1 = Y4.1
(18.42)
Y5,2 = Y3.1
(18.43)
Y5,3 = Y2.1
(18.44)
6 PCIbg
Y5.1 = m
(18.45)
Unidade 6: Motor de Combusto Interna

Y6,1 = Y5.1
(18.46)
T
15 cpar ( T15 T0 ) T0 ln 15
Y6,2 = m
T0
(18.47)
T
7 cpgases ( T7 T0 ) T0 ln 7
Y6.1 = m
T0
(18.48)
Y6.2 = EP
(18.49)
Y7,1 = Y4.2
(18.50)
10 g h10
Y7.1 = m
(18.51)
9 g h9
Y7.2 = m
(18.52)
Y8,1 = Y7.1
(18.53)
Unidade 7: Roda dgua
T
8 cpar ( T8 T0 ) T0 ln 8
Y8,2 = m
T0
12 ( h12 h10 ) T0 ( s12 s10 )

Y8.1 = m
(18.54)
(18.55)
621
A Tabela 18.14 relaciona os valores dos fluxos exergticos associados s

unidades relacionadas e descritas na Tabela 18.13, assim como nos diagramas
de processo e funcional, ilustrados respectivamente nas Figuras 18.4 e 18.5.
Tabela 18.14 Valores dos fluxos exergticos associados mini-ETE
Unidade 1: Caixa de Gordura
Valor
Udes.
Y1,1
kW
Y1.1
0,00014
kW
Unidade 5: Gasmetro
Valor
Udes.
Y5,1
15,3
kW
Y5,2
15,9
kW
Y5,3
16,5
kW
47,7
kW
Valor
Udes.
Y2,1
0,00014
kW
Unidade 6: Motor
Y2.1
16,5
kW
Valor
Udes.
Y2.2
0,00014
kW
Y6,1
47,7
kW
Y2.3
0,01498
kW
Y6,2
kW
Y6.1
0,47592
kW
Y6.2
3,3
kW
Y5.1
Valor
Udes.
0,00014
kW
Y3.1
15,9
kW
Valor
Udes.
Y3.2
0,00013
kW
Y7,1
0,14193
kW
0,01444
kW
Y7.1
0,15300
kW
Y7.2
1,02001
kW
Y3,1
Y3.3
Valor
Udes.
Unidade 7: Roda dgua
Y4,1
0,00013
kW
Valor
Udes.
Y4.1
15,3
kW
Y8,1
0,15300
kW
Y4.2
0,14193
kW
Y8,2
kW
Y4.3
0,01392
kW
Y8.1
0,15300
kW
Determinao das equaes matemticas dos custos dos

produtos associados
A determinao das equaes matemticas do custo dos produtos associados originada na anlise do modelo estrutural baseado em custos ilustrado na Figura 18.6.
Figura 18.6 Modelo estrutural baseado em custos para a mini-ETE.
622
Com o intuito de parametrizar os valores que sero aplicados s equaes que sero desenvolvidas a seguir, foi elaborada a Tabela 18.15, que relaciona os valores de investimento nos diversos subsistemas da mini-ETE,
os custos de operao e manuteno desses subsistemas, a quantidade de
horas trabalhadas ao ano e as vazes dos produtos existentes na mini-ETE.
Tabela 18.15 Valores de referncia adotados
Varivel
Perodo de trabalho H
Potncia eltrica gerada EP
Investimento na planta eltrica Iel
Custo de operao e manuteno da planta eltrica COMel
Investimento nos biodigestores anaerbios IA
Custo de operao e manuteno dos biodigestores anaerbios COMa
Investimento no biodigestor aerbio-anxio IAA
Valor
3.650 [h/ano]
3,3 [kW]
800,00 [US$]
0,00600 [US$/kWh]
2.000,00 [US$]
0,00100 [US$/kWh]
500,00 [US$]
Custo de operao e manuteno do biodigestor aerbio-anxio COMaa 0,00100 [US$/kWh]

Investimento na roda dgua Ir
Custo de operao e manuteno da roda dgua COMr
300,00 [US$]
0,00100 [US$/m3]
Vazo do biogs Qbg
0,002 [m3/h]
Vazo da gua pr-tratada Qap
0,056 [m3/h]
Vazo da gua tratada Qat
0,056 [m3/h]
Vazo do biofertilizante Qbf

Vazo do esgoto Qes
0,00001 [m3/h]
0,06 [m3/h]
As equaes matemticas do custo dos produtos associados possibilitam

alocar os custos dos produtos gerados pela mini-ETE, quais sejam: custo
de eletricidade (cel), custo do biofertilizante (cbf) e custo da gua em condies de reso (cat). Os demais custos so internos mini-ETE, quais sejam:
custo da produo de ar para aerao (caer), custo da gua pr-tratada (cap) e
custo do biogs gerado (cbg).
Assim, o custo de manufatura exergtico (CMex) pode ser definido pela
Equao (18.56).
CMex = c el Y6.2 + c bf ( Y2.3 + Y3.3 + Y4.3 ) + c at Y8.1
(18.56)
A Equao (18.57) representa o custo da produo de eletricidade pelo

MCI, considerando o investimento em equipamentos, o custo de operao
e manuteno desses e o custo do biogs utilizado como combustvel pelo
motor empregado.
c el [US$/kWh] =
IMCI f
+ cOMmci + c bg
H Y6.2
623
(18.57)
A Equao (18.58) representa o custo da produo de biogs, considerando o investimento nos biodigestores anaerbios, incluindo o gasmetro,
e o custo de operao e manuteno desse sistema.
I f
c bg [US$/kWh] = A
fpbg + c OMA
(18.58)
H Y5.1
Alm desses custos, deve ser considerado o fator de ponderao do biogs, que reflete o percentual do investimento realizado que est relacionado
frao equivalente produo de biogs no sistema de biodigesto anaerbia, considerando todos os produtos ali gerados, sejam biogs, biofertilizante e gua pr-tratada, Equao (18.59).
fpbg =
Y5.1
Y5.1 + Y2.3 + Y3.3 + Y4.3 + Y4.2
(18.59)
A Equao (18.60) representa o custo da produo de biofertilizante,

considerando o investimento nos biodigestores anaerbios e o custo de
operao e manuteno do sistema. Analogamente ao biogs, para o biofertilizante tambm deve ser considerado seu fator de ponderao, Equao
(18.61), ou seja, sua parcela de contribuio no investimento no biodigestor
anaerbio.
c bf [US$/kWh] =
fpbf =
IA f
fpbf + COMA
H ( Y2.3 + Y3.3 + Y4.3 )
Y2.3 + Y3.3 + Y4.3

Y5.1 + Y2.3 + Y3.3 + Y4.3 + Y4.2
(18.60)
(18.61)
A Equao (18.62) representa o custo da produo de gua pr-tratada,

considerando o investimento nos biodigestores anaerbios e o custo de operao e manuteno do sistema. O fator de ponderao da gua pr-tratada
est representado na Equao (18.63).
c ap [US$/kWh] =
fpap =
IA f
fpap + c OMA
H Y4.2
Y4.2
Y5.1 + Y2.3 + Y3.3 + Y4.3 + Y4.2
(18.62)
(18.63)
624
A Equao (18.64) representa o custo da produo de gua tratada, que

composto pelo custo da gua pr-tratada, pelo investimento no biodigestor aerbio-anxio e no seu custo de operao e manuteno.
c at [US$/kWh] = c ap +
IAA f
+ cOMAA
H Y8.1
(18.64)
A Equao (18.65) representa o custo da produo de ar para aerao,

que composto pelo investimento na roda dgua e pelo custo de operao
e de sua manuteno.
c aer [US$/kWh] =
Ir f
+ cOMr
H Y7.2
(18.65)
r
(%aa)
k
(anos)
cbg
(US$/kWh)
cel
(US$/kWh)
caer
(US$/kWh)
cbf
(US$/kWh)
cap
(US$/kWh)
cat
(US$/kWh)
CMex
(US$/h)
Tabela 18.16 Valores dos custos para mini-ETE nas diversas condies de anlise
1,04
0,53
0,007
0,048
0,044
0,007
0,007
0,483
0,572
1,04
0,28
0,004
0,028
0,023
0,004
0,004
0,252
0,331
1,04
0,19
0,003
0,022
0,016
0,003
0,003
0,175
0,251
1,04
0,15
0,003
0,019
0,013
0,003
0,003
0,137
0,211
10
1,04
0,12
0,002
0,017
0,011
0,002
0,002
0,114
0,188
1,08
0,56
0,007
0,051
0,046
0,007
0,007
0,510
0,600
1,08
0,30
0,004
0,031
0,025
0,004
0,004
0,276
0,356
1,08
0,22
0,003
0,024
0,018
0,003
0,003
0,198
0,275
1,08
0,17
0,003
0,021
0,015
0,003
0,003
0,160
0,236
10
1,08
0,15
0,003
0,019
0,013
0,003
0,003
0,137
0,212
12
1,12
0,59
0,008
0,053
0,049
0,008
0,008
0,539
0,630
12
1,12
0,33
0,005
0,033
0,028
0,005
0,005
0,301
0,382
12
1,12
0,24
0,004
0,026
0,021
0,004
0,004
0,223
0,301
12
1,12
0,20
0,003
0,023
0,017
0,003
0,003
0,185
0,261
12
10
1,12
0,18
0,003
0,021
0,015
0,003
0,003
0,162
0,238
16
1,16
0,62
0,008
0,056
0,051
0,008
0,008
0,567
0,659
16
1,16
0,36
0,005
0,035
0,030
0,005
0,005
0,326
0,409
16
1,16
0,27
0,004
0,028
0,023
0,004
0,004
0,248
0,327
16
1,16
0,23
0,004
0,025
0,020
0,004
0,004
0,211
0,289
16
10
1,16
0,21
0,003
0,023
0,018
0,003
0,003
0,190
0,267
625
Clculo dos custos associados mini-ETE

Os valores relacionados na Tabela 18.15 so aplicados s Equaes
(18.56) a (18.65) para obter os custos dos produtos da mini-ETE para as
condies de anlise estabelecidas: taxas de juros de 4%, 8%, 12% e 16% a.a.,
e perodos de amortizao de dois, quatro, seis, oito e dez anos.
As Equaes (18.66) e (18.67) so utilizadas para o clculo do fator de
anuidade necessrio ao desenvolvimento dos clculos dos custos dos produtos associados mini-ETE.
f=
qk ( q 1)
qk 1
q = 1+
r
100
(18.66)
(18.67)
A Tabela 18.16 relaciona os valores dos custos dos produtos da mini-ETE, assim como os fatores de anuidade, para as condies de anlise estabelecidas, e os perodos de amortizao e as taxas de juros esto baseados
nos valores praticados comercialmente, orientados pelo Banco Central do
Brasil (Bacen, 2006).
Os Grficos 18.8 a 18.13 ilustram as curvas de desempenho dos valores
obtidos para os custos dos produtos da mini-ETE.
Grfico 18.8 Custos da gua de esgoto que pr-tratada pela mini-ETE.
626
Grfico 18.9 Custos da gua de esgoto que tratada pela mini-ETE.
Grfico 18.10 Custos do ar produzido para aerao na mini-ETE.
Grfico 18.11 Custos do biofertilizante produzido pela mini-ETE.
627
Grfico 18.12 Custos do biogs produzido pela mini-ETE.
Grfico 18.13 Custos da eletricidade gerada no MCI da mini-ETE.
Esses grficos possibilitam observar o perodo de retorno do capital investido (payback) na mini-ETE, de acordo com o desempenho de cada um
dos produtos associados.
O Grfico 18.14 ilustra o custo de manufatura exergtico (CMex) da
mini-ETE, considerando os custos dos produtos e suas exergias.
Grfico 18.14 Custo de manufatura exergtico da mini-ETE.
628
Em todos os grficos possvel observar que os custos associados decrescem com a proximidade do perodo de retorno do capital investido
(payback). Outro fator que influencia diretamente o desempenho dos custos o valor do capital investido, que dependente da taxa de juros e do
perodo de amortizao desse capital.
Estudo da viabilidade econmica

Tendo como referncia os valores praticados pelas concessionrias do
servio de tratamento de gua e esgoto no territrio nacional, alm das taxas
de juros e perodos de amortecimento adotados, realizado o levantamento
das receitas de capital para as condies estabelecidas.
A Equao (18.68) apresenta a relao entre os custos de gua tratada
pela mini-ETE e pela mdia nacional das concessionrias do servio de tratamento de esgoto e a vazo volumtrica de esgoto da mini-ETE, assim
como o custo da eletricidade gerada pela mini-ETE e a mdia nacional praticada pelas concessionrias de distribuio da rede eltrica.
US$
R
= ( Pel Cel ) Pti + Catcia Catete Q at H
ano
(18.68)
As Equaes (18.69) e (18.70) so utilizadas para o clculo do custo da

gua tratada em base volumtrica.
I f
US$
c ap 3 = A
m H Q ap
Q bf
Q bg + Q bf + Q ap
+ COMA
I f
US$
+ COMAA
c at 3 = c ap + AA
H Q at
m
(18.69)
(18.70)
A Equao (18.68), elaborada para clculo da receita anual de uma sistema de tratamento de esgoto com autossuficincia energtica, utilizada
para construir a Tabela 18.16, que relaciona os valores calculados, considerando o valor mdio de tarifao praticado no pas, que de 70,00US$/
MWh, segundo a Aneel (2006), e o valor de 0,70US$/m3 de esgoto tratado
(Godoy Jr. et al., 2004).
629
Tabela 18.17 Valores da receita para a mini-ETE nos perodos observados

r
(%aa)
k
(anos)
Pel-Cel
(US$/kWh)
Pti
(kW)
Ccia-Cae
(US$/m3)
Qae
(m3/h)
H
(h/ano)
R
(US$/ano)
0,022
3,3
0,702
0,056
3650
118,29
0,042
3,3
0,029
0,056
3650
494,50
0,048
3,3
0,194
0,056
3650
619,65
0,051
3,3
0,306
0,056
3650
682,03
10
0,053
3,3
0,372
0,056
3650
719,31
0,019
3,3
0,782
0,056
3650
73,13
0,039
3,3
0,099
0,056
3650
455,46
0,046
3,3
0,127
0,056
3650
581,91
0,049
3,3
0,239
0,056
3650
644,39
10
0,051
3,3
0,305
0,056
3650
681,29
12
0,017
3,3
0,864
0,056
3650
27,45
12
0,037
3,3
0,171
0,056
3650
415,12
12
0,044
3,3
0,056
0,056
3650
542,16
12
0,047
3,3
0,167
0,056
3650
604,08
12
10
0,049
3,3
0,231
0,056
3650
640,00
16
0,014
3,3
0,947
0,056
3650
18,73
16
0,035
3,3
0,246
0,056
3650
373,56
16
0,042
3,3
0,019
0,056
3650
500,56
16
0,045
3,3
0,090
0,056
3650
561,36
16
10
0,047
3,3
0,152
0,056
3650
595,81
O Grfico 18.15 ilustra o desempenho econmico da mini-ETE para as

vrias condies observadas.
Grfico 18.15 Receita anual para a mini-ETE nos perodos observados.
630
A partir do Grfico 18.15 possvel observar que, para as diversas taxas

de juros aplicadas, o retorno do investimento na implantao de uma mini-ETE de aproximadamente um ano.
Observa-se que quanto menor a taxa de juros e o tempo de amortizao, tanto menores so os custos dos produtos associados; assim, a receita
torna-se maior e, como consequncia, o retorno do investimento ocorre em
menos tempo.
Concluso
A aplicao dessa metodologia miniestao de tratamento de esgoto
implantada na Unesp-FEG possibilitou avaliar a sua viabilidade econmica a partir do retorno do capital investido, considerando o custo em base
exergtica dos produtos ali gerados.
Os resultados obtidos corroboraram a expectativa da viabilidade econmica da mini-ETE, haja vista os perodos de payback observados, inferiores
a um ano (Grfico 18.15).
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19
Biodiesel e gs de gaseificao
em motor de combusto interna
Jos Luz Silveira, Wendell de Queirz Lamas, Julio Santana Antunes,
Celso Eduardo Tuna, Christian Jeremi Coronado Rodriguez,
Ronney Arismel Mancebo Boloy, Rodolfo dos Santos
Eficincia ecolgica em motores de combusto

interna usando biodiesel
Os setores que mais poluem so o industrial e o de transporte automotivo. Assim sendo, necessrio que ambos adotem estratgias futuras para
reduzir a emisso de poluentes na atmosfera, com a finalidade de prevenir as concentraes perigosas no ar. Tais poluentes no ar exercem uma
influncia nociva sobre os organismos vivos, piorando as condies de vida
e produzindo danos at mesmo na mesma infraestrutura urbana.
Anualmente se desprendem na atmosfera aproximadamente 700 milhes de toneladas de monxido de carbono, 150 milhes de toneladas de
xidos de nitrognio, 200 milhes de toneladas de partculas slidas e 200
milhes de toneladas de dixidos de enxofre, entre outros. A maioria dessas
substncias produzida pelo setor de transportes. Atualmente, os Motores
de Combusto Interna (MCI) consomem perto de 85% da energia consumida na Terra, dos quais os motores dos veculos a constituem em grande
parte. Os gases de exausto que contm substncias txicas representam
um dos fatores mais perigosos de poluio do meio ambiente (Patrakhaltsev
et al., 1993).
634
A metodologia proposta neste trabalho analisa a eficincia ecolgica em

motores de combusto, considerando as concentraes separadas dos gases
emitidos (CO2, SO2 e NOX), assim como o material particulado. O parmetro de eficincia ecolgica () foi proposto pelos pesquisadores Cardu e Baica (1999a) para ciclos de vapor usando carvo e foi ampliado por Salomon
(2003) para plantas com ciclo combinado que usam gs natural, motores de
combusto interna e ciclos avanados usando biomassa como combustvel.
A eficincia ecolgica avalia o impacto ambiental causado pelas emisses
nos MCI, considerando a combusto de 1 kg de combustvel e no a quantidade de gases liberados na gerao de uma unidade de potncia.
O dixido de carbono equivalente

O dixido de carbono equivalente (CO2)e um fator de concentrao de
poluentes emprico e foi definido por Cardu e Baica (1999b). Para o clculo
desse coeficiente, o valor mximo permitido de concentrao de CO2 dividido pelos correspondentes padres de qualidade de ar para o NOX, SO2
e MP (material particulado) em uma hora. A expresso para determinar o
(CO2)e representada pela Equao (19.1).
(CO2)e= (CO2) + 80 (SO2) + 50 (NOx) + 67 (MP)
(19.1)
As unidades dos componentes qumicos na Equao (19.1) so em kg

por kg de combustvel. Nessa mesma equao, o dixido de enxofre equivalente (SO2)e = 80(SO2), o xido de nitrognio equivalente (NOx)e = 50(NOx)
e o material particulado equivalente (MP)e = 67(MP). O melhor combustvel do ponto de vista ecolgico aquele que apresenta a mnima quantidade
de (CO2)e, dixido de carbono equivalente, originado a partir de sua queima. Para quantificar o impacto ambiental, definido um indicador poluente (g), de acordo com a Equao (19.2).
g =
(CO2 )e
Qi
(19.2)
EFICINCIA ECOLGICA EM MOTORES DE COMBUSTO INTERNA USANDO BIODIESEL
635
onde, (CO2)e em kg/kg (kg por kg de combustvel), Qi em MJ/kg o PCI

(poder calorfico inferior) e (g) em kg/MJ o indicador poluente.
Eficincia ecolgica
A eficincia ecolgica () definida como um indicador que permite a
avaliao do impacto ambiental das emisses gasosas, nesse caso de motores de combusto interna em meios de transporte, comparando o indicador
poluente, emisses de (CO2)e, e os padres de qualidade de ar existentes. A
eficincia da converso tambm considerada um fator determinante nas
emisses especficas. De acordo com Cardu e Baica (1999a, 199b, 2001), a
eficincia ecolgica pode ser determinada pela Equao (19.3).
0,204
Ln ( 135 g )
=
+ g
0,5
(19.3)
onde o coeficiente que define a intensidade do impacto ambiental

dos motores de combusto interna (eficincia ecolgica). Esse coeficiente
engloba os seguintes aspectos: composio do combustvel, tecnologia de
combusto, indicador de poluio e eficincia na converso (). O valor de
diretamente proporcional eficincia dos motores de combusto interna e inversamente proporcional ao valor do indicador poluente (g).
Uma situao considerada insatisfatria do ponto de vista ecolgico
quando = 0, mas quando = 1 indica uma situao ideal. De acordo com
a classificao de combustveis, a queima do hidrognio puro teria 0% de
impacto ao meio ambiente, enquanto a queima do enxofre causaria 100%
de impacto (Tabela 19.1).
Tabela 19.1 Caractersticas de combustveis virtuais

Combustvel
S%
Qi (Mj/kgf)
g (kg/MJ)
Hidrognio
10742
100
1400
10450
134
Enxofre
CO2 (kg/kg combustvel)
Fonte: Villela ; Silveira (2007)
636
Queima do gs natural em MCI

Adotando-se a composio volumtrica do gs natural fornecido pela
Comgs (2010): CH4 (metano) 89,3%; C2H6 (etano) 8%; C3H8 (propano)
0,8%; C4H10 e C5H12 (butano e pentano) 0,1%; CO2 (dixido de carbono);
0,5% e N2 (nitrognio) 1,3%. Com essa composio a sua massa molecular
17,689 g.gmol-1 e sua densidade 789,68 kg/Nm3. A Equao (19.4) representa o caso com excesso de ar na combusto de gs natural.
0,893CH4+0,08C2H6+0,008C3H8+0,0005C4H10+0,0005C5H12+
0,005CO2+0,013N2+ +2,118O2+7,965N21,087CO2+2,064
(19.4)
H2O+7,965N2+2,118(-1)O2
Clculo da eficincia ecolgica

A Tabela 19.2 mostra uma comparao entre os principais combustveis
analisados: o Grfico 19.1 mostra os valores de eficincia ecolgica encontrados para os quatro combustveis analisados: gs natural, diesel, gasolina,
biodiesel (B100 e B20); o Grfico 19.2 mostra os valores de eficincia ecolgica em funo da eficincia em MCI.
Tabela 19.2 Comparao dos resultados das emisses

Emisses
poluentes
(kg/kgcomb)
(CO2)e
Gs. Nat.
Diesel
2,727
8,529
Gasolina * lcool **
5,452
3,269
Biodiesel Biodiesel Diesel/

B20
B100
B100
7,502
3,423
2,5
MP
1,71 10
15,27 10
1,920 10
1,920 10
14,21 10
9,931 10
1,5
NOx
4,412.10-4
4.10-2
5,5.10-2
5,5.10-2
4,04.10-2
4,2.10-2
0,9
SO2
1,213 10
3 10
-2
0,2 10
2,4 10
CO2
2,704
3,106
2,413
0,391
2,61
0,658
4,7
Total (kg/kgcomb)
2,704
3,161
2,472
0,448
2,689
0,71
4,4
Efic. Ecol. (%)
91,95
77,34
82,84
84,97
78,94
87,58
0,8
-5
-6
-3
* Gasolina com 25% de lcool etlico.

** Considerando o ciclo do etanol
Fonte: Coronado-Rodrguez et al. (2009)
-3
-3
-3
-3
-2
-3
637
Grfico 19.1 Eficincia ecolgica do Diesel, Gasolina*, B20 e B100

*Gasolina com 25% de lcool etlico
Grfico 19.2 Variao da eficincia ecolgica em funo do rendimento no MCI.

* Gasolina com 25% de lcool etlico
Concluses
O uso de biodiesel puro (B100) ou uma mistura com diesel (B20) em
motores de combusto interna, especialmente do tipo ignio por compresso, representa uma excelente opo do ponto de vista ecolgico.
638
Os nveis de emisso em motores de combusto interna usando biodiesel puro (B100) so: 0,658 kg/kg de combustvel para o CO2; 0,042 kg/kg
de combustvel para o NOx e 0,009931 kg/kg de combustvel de material
particulado MP.
No caso de usar 20% de biodiesel misturado com 80% diesel (B20) os
nveis de emisso so: 2,61 kg/kg de combustvel para o CO2; 0,024 kg/kg
de combustvel para o SO2; 0,0404 kg/kg de combustvel para o NOX e
0,01421 kg/kg de combustvel de material particulado MP.
O total de emisses para o diesel em comparao com o biodiesel (B100)
4,4 vezes a mais, baseados na relao de kg/kg de combustvel. Em termos
de eficincias ecolgicas, as caractersticas de um MCI usando diesel, biodiesel B100 e biodiesel B20 so respectivamente 77,34%, 87,58% e 78,94%,
considerando uma eficincia trmica nos MCI de 30%. Os estudos mostram que o uso de biodiesel como combustvel lquido, desde um ponto de
vista ecolgico quantitativo, melhor que o diesel, apresentando os mais
altos valores de eficincia ecolgica.
Anlise tcnica e econmica de um gaseificador de

biomassa integrado a um conjunto motor/gerador
de 5 kWe de potncia
Procurando respostas para fornecimento de energia, este estudo apresenta ideias e dados para uma possvel aplicao prtica em comunidades
isoladas, distantes da rede nacional de distribuio de energia eltrica. Os
sistemas de gaseificao de biomassa tm sido utilizados h algum tempo e tm demonstrado ser uma boa opo como soluo aos problemas
energticos.
A gaseificao da biomassa se apresenta como uma alternativa sustentvel de produo de energia, com baixa produo poluente que permite
certo equilbrio entre consumo e produo de gs carbnico no ciclo global
de crescimento e consumo de biomassa. A gaseificao consiste em um processo de converso termoqumico no qual a biomassa transformada em
gs combustvel (syngas ou gs pobre), por meio da oxidao parcial com ar,
oxignio ou vapor de gua a altas temperaturas. O ar preferencialmente
639
utilizado como agente de gaseificao (Sims, 2002). Foram desenvolvidos

na Unesp de Guaratinguet dois gaseificadores de leito fixo, tipo downdraft
(concorrente).
Na Tabela 19.3, tem-se uma comparao entre alguns aspectos dos tipos
de gaseificadores de leito fixo existentes (downdraft e updraft). A diferena
principal entre os gaseificadores updraft e downdraft encontra-se no sentido
do fluxo de gs. No caso do downdraft, o fluxo do gs coincide com o sentido do fluxo de alimentao da biomassa. Isso contribui para que exista uma
ordem diferente nas zonas de reao de cima para baixo, ou seja, da parte
mais alta para a mais baixa, na seguinte ordem: secagem, pirlise, oxidao
e reduo. A gerao de alcatro contida no syngas nos gaseificadores downdraft baixa, comparada com os gaseificadores updraft. Alguns autores
recomendam o PCI do syngas entre 4 MJ/Nm3 a 6MJ/Nm3 (Lora; Nogueira, 2003), utilizando ar como agente gaseificante; outros autores afirmam
que o valor do PCI pode alcanar um valor prximo a 7MJ/Nm3 (Sharma,
2008).
Tabela 19.3 Comparao entre os gaseificadores downdraft e updraft
Tipo de
Gaseificador
Temperatura
(C)
Reao
Alimentao Agente de
Sada Fluxo de gs da biomassa gaseificao
do
syngas
Contedo
de
alcatro
Updraft
700-1000
250
Para cima,
contracorrente
com o sentido
de alimentao
da biomassa
Por cima do
gaseificador
Por baixo do
gaseificador
Alto
Downdraft
700-1000
800
Para baixo,
concorrente
com o sentido
de alimentao
da biomassa
Por cima do
gaseificador
Por cima
ou perto de
uma certa
altura acima
da parte
inferior do
gaseificador
Baixo
Esforos tm sido realizados para a busca de uma alta eficincia nos sistemas de gerao de energia de pequeno porte, incorporando sistemas de
gaseificao de biomassa em motores de combusto interna (MCI), microturbinas a gs ou clulas a combustvel (Seri/SP, 1988).
640
Metodologia
Descrio do sistema
Na Figura 19.1, apresenta-se um prottipo de gaseificao tipo downdraft construdo no Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos (Lose), da Faculdade de Engenharia de Guaratinguet (FEG), na
Universidade Estadual Paulista (Unesp), financiado pelo CNPq, Projeto
CTENRG, Processo n 555072/2006-1. O sistema de gaseificao foi projetado para uma capacidade de processamento de biomassa de 15 kg/h a 30
kg/h integrado a um trocador de calor gua-gs, um filtro de manga e um
motor gerador marca Honda de 5 kWe de potncia.
Figura 19.1 Sistema de gaseificao de biomassa construdo no Lose-FEG-Unesp.
A Figura 19.2 apresenta o desenho do sistema de gerao de energia

estudado neste trabalho. O eucalipto, cuja anlise aparece na Tabela 19.4,
entra pelo topo do gaseificador com 20% de umidade, passando posteriormente por um processo de secagem que acontece a uma temperatura
aproximadamente de 200C; uma vez que a temperatura supera os 400C,
inicia-se o processo de pirlise. Quando a temperatura alcana 700C, tm
641
lugar as reaes de gaseificao, que se dividem em reaes heterogneas

(gs-slido) e homogneas (gs-gs), dando lugar formao do syngas.
Esse syngas tem como constituintes principais CO, H2, N2, CO2, vapor de
gua e hidrocarbonatos ou alcatro. Sua composio varia com as caractersticas da biomassa, agente gaseificante e as condies do processo. Um
fator determinante na composio qumica do gs o contedo de umidade; se a biomassa apresenta um contedo de umidade elevado ir requerer
maior quantidade de agente gaseificante no processo porque a gua tem que
se aquecer e evaporar.
Figura 19.2 Desenho do sistema de gerao integrando um gaseificador de biomassa a um

conjunto motor-gerador de 5 kWe.
Tabela 19.4 Composio do eucalipto

Biomassa
Cinzas
Percentagem em peso base seca

Eucalipto
49
5,87
0,3
0,01
43,97
0,72
Percentagem em peso base mida

39,2
4,696
0,240
0,008
35,176
0,576
Vrios autores tm trabalhado na estimativa da composio qumica do

gs de biomassa (Sharma, 2008; Zainal et al., 2001; Jarungthammachote;
Dutta, 2007; Mancebo-Boloy et al., 2008a). Os seguintes parmetros foram assumidos: 20% de umidade do eucalipto (Jarungthammachote; Dut-
642
ta, 2007); relao ar-biomassa de 0,20 (Mancebo-Boloy et al., 2008a); valor

que se encontra na faixa para a gaseificao (0,19-0,43) (Vian, 1991); temperatura de gaseificao de 800C (Mancebo-Boloy et al., 2008a); composio qumica do syngas em base seca: CO2 (9,28%), CO (27,28%), H2
(27,25%), N2 (35,26%) e CH4 (0,92%) (ibidem); poder calorfico inferior de
6,71MJ/Nm3 (ibidem); e massa especifica de 1,30kg/Nm3 (ibidem).
Aps sair do gaseificador, o syngas passa por uma etapa de limpeza, que
consta de vrios sistemas como ciclone, trocador de calor gua-gs e um filtro de manga. Dependendo da eficincia de remoo para a qual foi projetado, o ciclone elimina grande parte do material particulado contido no syngas. No trocador de calor, o syngas entra a 600C de temperatura e se resfria
a uma temperatura de 40C gerando gua quente em diversas temperaturas
(40C, 45C, 50C, 55C e 60C). Ali existe um purgador que tem como
objetivo eliminar o condensado do syngas (alcatro), o qual pode ser usado
nas indstrias veterinria, farmacutica e qumica, na fabricao de espumas de poliuretano, entre outras aplicaes. Finalmente, o syngas passa por
um filtro de manga onde se elimina o resto do material particulado para
garantir as condies mnimas necessrias (Lora; Nogueira, 2003) (Tabela
19.5) que permitam seu posterior uso no conjunto motor-gerador Honda
EP 5500, modelo GX 340 (Tabela 4 19.6) para a gerao de eletricidade.
Tabela 19.5 Qualidade do syngas para seu uso em sistemas de gerao de energia (Lora; Nogueira, 2003)
Parmetros
MCI
Turbina
Particulado(mg/Nm )
50 (Mximo)
30 (Mximo)
Tamanho de particular (um)
10 (Mximo)
5 (Mximo)
Alcatro (mg/Nm )
100 (Mximo)
0,24
Metais alcalinos (mg/Nm3)
Tabela 19.6 Caractersticas do conjunto motor-gerador

Marca Modelo Capacidade Ep Temperatura do Combustvel Consumo de
de
(kW) gs de sada (C)
combustvel
combustvel
(g/kWh)
(l)
Honda
EP
5500
GX 340
17
450
Gasolina
474
643
Simplificaes e suposies
Pode-se efetuar o balano de energia baseado na Primeira Lei da Termodinmica, representada pela Equao (19.4), desprezando os efeitos da
energia cintica e potencial. Para a determinao da eficincia do sistema
foram considerados dois casos:
Caso 1: a biomassa como energtico principal para a produo de eletricidade e de gua quente;
Caso 2: o syngas como energtico principal para a gerao de gua
quente e eletricidade de forma independente.
n
i =1
o =1
Qvc + mi h i = Wvc + mo h o
(19.4)
onde:
Qvc fluxo de calor no volume de controle;
mi fluxo de massa que entra no volume de controle;
Wvc trabalho realizado no volume de controle;
hi entalpia de entrada;
mo fluxo de massa que sai do volume de controle;
ho entalpia de sada.
No conjunto motor-gerador marca Honda (Tabela 19.6) foi determinado o consumo mnimo de syngas requerido para gerar 5 kWe de potncia
nominal. Para o clculo do consumo mnimo de syngas foi necessrio assumir uma eficincia de 14% na gerao de eletricidade (20% eficincia nominal do motor) pelo fato do syngas ter um poder calorfico inferior menor ao
poder calorfico inferior da gasolina. A eficincia do gerador de eletricidade
pode ser considerada 95%. A partir do consumo mnimo de syngas foram
determinados o consumo de biomassa, fluxo real de syngas produzido e o
consumo de ar do gaseificador (Tabela 19.9) (Bacaicoa et al., 1994).
No volume de controle considerado no gaseificador de biomassa foram
determinados os seguintes fatores: entalpia do syngas, entalpia da biomassa,
entalpia das cinzas, a perda de calor ao meio ambiente, a eficincia a frio do
gaseificador, a capacidade calorfica do syngas e a energia trmica do syngas,
conforme se mostra na Tabela 19.9.
644
No volume de controle considerado no trocador de calor gua-gs foram

determinados os seguintes parmetros (Tabela 19.10): fluxo de gua quente gerada (Grfico 19.3) e energia trmica da gua considerando vrias eficincias do trocador de calor (80%, 75%, 70% e 65%) e vrias temperaturas
da gua (40C, 45C, 50C, 55C e 60C).
Para o estudo econmico foi determinado o custo do pessoal de operao,
o custo de manuteno do gaseificador, o custo de gerao de eletricidade
de cada sistema avaliado (alocao de custos), o ganho de eletricidade e a receita anual esperada visando conhecer a viabilidade econmica do sistema.
No caso do gaseificador de biomassa foram determinados os custos de
manuteno e de produo do syngas, considerando que a manuteno do
gaseificador ir se realizar a cada 1.250 h/ano (3,47 h/d) de operao do
equipamento e um custo de eucalipto de 0,0038US$/kWh baseado em um
preo de 20US$/t (Mancebo-Boloy et al., 2008b), respectivamente, o custo
de investimento do gaseificador, o tempo de utilizao, a energia suprida
pela biomassa e o fator de anuidade.
No caso do trocador de calor, o custo de gerao de gua quente foi determinado considerando o custo de investimento, a energia trmica gerada,
o tempo de utilizao, o fator de anuidade e o fator de ponderao de gua
quente para o trocador de calor. Finalmente, no conjunto motor-gerador
foi determinado o custo de gerao de eletricidade considerando o investimento inicial, a potncia eltrica gerada, o tempo de utilizao, o fator de
anuidade e o fator de ponderao de eletricidade.
A receita anual esperada foi determinada a partir dos ganhos de produo de energia trmica (gua quente) e de eletricidade; considerou-se que
no existe um excedente de gerao de energia eltrica. Na anlise tambm
foi considerada uma tarifa de venda de eletricidade de 0,10US$/kWh (EDP
Bandeirante, 2008) para as comunidades isoladas; por ltimo, a tarifa de gerao de gua quente considerada foi 0,0022US$/kWh (Kong et al., 2004).
Todos os resultados obtidos na anlise econmica foram apresentados
em forma de grficos como se mostram nos Grficos 19.4 e 19.5.
Nas Tabelas 19.7 e 19.8, so apresentados os valores assumidos para a
anlise energtica e econmica realizada no sistema.
645
Tabela 19.7 Valores constantes assumidos no sistema

Parmetro
Valor
Parmetro
Valor
Condies normais
de presso e
temperatura
P = 101.325Pa,
T = 25C
Perodo de utilizao
2.000h/ano, 3.000h/
ano, 4.000h/ano,
5.000h/ano, 6.000h/ano
Temperatura de
gua quente
40C, 45C,
50C, 55C,
60C
Investimento capital do
trocador de calor
700US$
Eficincia do
trocador de calor
80%, 75%, 70%,

65%
Investimento capital do
gaseificador de biomassa
(Grupo..., 2008)
10.000,00US$
Capacidade
calorfica da gua
4,19kJ/kg.K
Custo de manuteno do
conjunto motor-gerador
(Wu; Wang, 2006)
0,011US$/kWhe
Investimento capital
do conjunto motor/
gerador [13]
1.437,02US$
Custo de manuteno do
trocador de calor
0,003US$/kWh
Taxa anual de juros
4%, 8%, 12%
PCI da biomassa
(Mancebo-Boloy et al.,
2008)
19.457kJ/kg
Tabela 19.8 Capacidades calorficas (constantes A, B, C e D refere-se a coeficientes empricos)

(Zainal et al., 2001)
Espcies
Tmax
qumicas
CH4
103B
106C
10-5D
1.500 1,702 0,009081 0,00000216
Cp
Dh
dH
(kJ/kmolK) (kJ/kmol) (kJ/kmol)
56,55
43.821,29
30.696,07
H2
3.000 3,249 0,000422
8.300
29,63
22.961,31
22.962,69
CO
2.500 3,376 0,000557
3.100
31,16
24.146,13
86.377,42
CO2
2.000 5,457 0,001047
115.700
48,33
37.448,84 356.057,91
N2
2.000
3,28 0,000593
4.000
30,75
23.829,66
H2O
2.000
3,47
0,00145
12.100
37,43
29.001,74 212.814,51
2.000 1,771 0,000771
86.700
16,87
13.068,25
23.831,09
Anlise energtica do sistema

A anlise energtica realizada considerou os dois casos de estudo mencionados no item anterior (Simplificaes e suposies): para o Caso 1, a
eficincia do sistema foi calculada utilizando a Equao (19.6); para o Caso
2, as eficincias de gerao de eletricidade e gerao de gua quente foram
determinadas respectivamente pelas Equaes (19.5) e (19.8). A energia
trmica da gua foi calculada pela Equao (19.7) que permitiu calcular pela
646
Equao (19.9) o fluxo de gua quente gerado pelo trocador para diferentes
temperaturas de sada da gua (40C, 45C, 50 C, 55C e 60C). Por
ltimo, a energia suprida pelo syngas foi determinada pela Equao (19.10).
EP =
S =
EP
ESSyngas
EP + EHW
EW
EHW = ESyngas HE
HW =
mH 2O =
EHW
EW
HE ESyngas
cpH 2O (TO TI )
ESSyngas =
EP
0,95 0,14
(19.5)
(19.6)
(19.7)
(19.8)
(19.9)
(19.10)
Usando as Equaes (19.11) e (19.12), foram determinados a energia

trmica e a capacidade calorfica do syngas. As Equaes (19.13) a (19.18)
permitiram conhecer o volume de gases, o volume terico dos gases triatmicos, nitrognio e vapor de gua contido no gs de sntese; por ltimo,
foi avaliado o volume terico de ar do processo de gaseificao (Lora; Nogueira, 2003). As entalpias de formao da biomassa, das cinzas e do syngas
foram calculadas pelas Equaes (19.19) a (19.22). Finalmente, pela Equao (19.23), foi determinada a eficincia a frio do gaseificador (Fryda et al.,
2008), desprezando o calor sensvel do gs e as cinzas produzidas.
ESyngas =
mSyngas cpSyngas (TSO TSI )

3600
cpSyngas =
ni=element cpi
6 24,034
Vg = Vg0 + (1,0161 ( ER 1) Vair )
(19.11)
(19.12)
(19.13)
647
Vg0 = RO2 + N 2 + H 2O
(19.14)
RO2 = 0,01866 (C w + 0,375 Sw )
(19.15)
N 2 = (0,79 mar ) + (0,0008 N w )
(19.16)
0
H 2O = 0,111 H w + 0,0124 C w + 0,0161 mar
(19.17)
0
Vair
= 0,0889 ( Cw + 0,375 S w ) + ( 0,265 H w ) ( 0,6333 Ow )
h fb = (PCIb 1000) + (
(h f 0 )i )
(19.18)
(19.19)
i = prod
hb = ((1 MC) h fb ) + (MC (

hcinzas =
hsyngas =
dHH2O
24,03
Dh
24,28
Ce dHe
e = elemento
cg =
100 24,03
PCIsyngas
PCIb
(19.20)
(19.21)
(19.22)
(19.23)
Os resultados da anlise so apresentados na Tabela 19.9.
Anlise econmica do sistema

Baseado na metodologia de anlise econmica para alocao de custos
(Silveira, 1990; Silveira et al., 2001; Villela; Silveira, 2005; Silveira et al.,
2007; Lamas et al., 2009; Silveira et al., 2009), a viabilidade econmica do
sistema depende diretamente dos custos produzidos pelos sistemas: conjunto
motor-gerador, gaseificador de biomassa e trocador de calor. As expresses
para determinar esses custos se descrevem nas Equaes (19.24) a (9.36).
Ew =
COperao =
mb PCIb 1000
3600
Indice Salarial Horas de operao

EPGaseificador H
(19.24)
(19.25)
648
CMGaseificador =
CSyngas =
IGaseificador f Cb E w
+
+ CMGaseificador + COperao
H E SSyngas
E SSyngas
(19.26)
(19.27)
IEG f CSyngas FPE

+
+ CMEG + COperao
H EP
EP
(19.28)
CSyngas FPHW
IHE f
+
+ CMHE + COperao
H EHW
EHW
(19.29)
EP
EP + EHW
(19.30)
CEL =
CHW =
Componente + H
EPGaseificador Intervalomanuteno
FPE =
FPHW =
f=
EHW
EP + EHW
qk ( q 1)
(q
q = 1+
r
100
(19.31)
(19.32)
(19.33)
GPEL = EP H ( PEL CEL )
(19.34)
GPHW = EPHW H ( PHW CHW )
(19.35)
R = GPEL + GPHW
(19.36)
O custo do pessoal de operao foi calculado por meio da Equao

(19.25), considerando que o gaseificador ir ser operado por trs funcionrios, onde cada funcionrio tem uma renda salarial de 631,58 US$/ms,
o ndice salarial em [US$/h] foi 3,79, cujo valor foi determinado considerando o tempo de operao do gaseificador, cujo valor por dia est entre 5,6
h/d e 16,7 h/d tomando como referncia um perodo total de operao de
2.000 h/ano at 6.000 h/ano.
O custo de manuteno do gaseificador foi calculado pela Equao
(19.26), considerando que a manuteno do gaseificador ir se realizar a
cada 3,47 h/d de operao do equipamento.
649
Resultados e discusso
Resultados obtidos da anlise energtica no sistema
Do balano de energia realizado nos volumes de controles considerados
no gaseificador, no conjunto motor-gerador e trocador de calor, obtm-se os seguintes resultados: o fluxo de syngas gerado pelo gaseificador foi
de 49,88 Nm3/h (Bacaicoa et al., 1994) com um consumo de biomassa de
15 kg/h (ibidem), o PCI do syngas em base seca foi de 6,71MJ/Nm3 a
600C de temperatura. No estudo do caso, a eficincia do sistema alcanou
valores na faixa de 13,83% at 12,39%, considerando as diferentes eficincias do trocador de calor (80% - 65%). Na Tabela 19.9 se apresentam todos
esses valores, incluindo potncia suprida pela biomassa, eficincia a frio do
gaseificador, potncia suprida pelo syngas, energia e entalpia do syngas, capacidade calorfica do syngas, fluxo de ar, gs de biomassa, gs terico para
a gaseificao, entalpia de formao de biomassa, entalpia da biomassa,
entalpia das cinzas geradas pelo gaseificador e as perdas de calor ao meio
ambiente.
Tabela 19.9 Resultados obtidos da analise energtica no sistema

Parmetros
Valor
Potncia suprida pela biomassa
81,07 kW
Eficincia a frio do gaseificador
47,20%
Fluxo de ar (Bacaicoa et al. 1994)

Potencia suprida pelo syngas
Energia trmica do syngas
Capacidade calorfica do syngas
Perdas de calor ao meio ambiente gerada pelo gaseificador
48,10 Nm3ar/h
37,59 kW
7,77kW
1,56 J/kg.K
39,90 kW
Ar terico para o processo de gaseificao
3,56 Nm3ar/kgb
Fluxo de syngas (Bacaicoa et al. 1994)
49,88 Nm3gas/h
Fluxo de gs de biomassa
1,23 Nm3gas/kgb
Entalpia de formao da biomassa
9267,99 kJ/kg
Entalpia da biomassa
5396,96 kJ/kg
Entalpia das cinzas
538,28 kJ/kg
Entalpia do syngas
1757,93kJ/kg
650
Tabela 19.10 Balano de energia no trocador de calor

Parmetros
Resultados
Eficincia do trocador de calor (%)
80
75
70
65
13,83
13,35
12,87
12,39
7,66
7,19
6,71
6,23
5,83
5,44
5,05
Caso 1
Eficincia do sistema (%)
Caso 2
Eficincia de gerao de gua quente (%)
Eficincia de gerao de eletricidade (%)
13,30
Caso 1 e 2
Energia trmica da gua (kW)
6,21
A Tabela 19.10 mostra que a eficincia do sistema, a eficincia de gerao de gua quente e a energia trmica da produo de gua quente decrescem para pequenos valores de eficincia do trocador de calor, uma possvel
explicao a esse fato pode ser que a energia trmica til do syngas permanece com valores altos at o syngas abandonar o trocador de calor.
O Grfico 19.3 mostra o fluxo de gua quente gerado pelo trocador de
calor em razo da temperatura de sada da gua quente no trocador de calor.
Pode-se observar que para altos valores de temperatura de sada da gua o
fluxo de gua quente gerado pelo trocador diminui pelo fato de o trocador
de calor operar com menores valores de eficincia, pois a energia trmica
til do syngas permanece com valores altos at o syngas abandonar o trocador de calor.
Grfico 19.3 Fluxo de gua quente versus temperatura de sada da gua no trocador de
calor.
651
Resultados da anlise econmica no sistema

Tabela 19.11 Custos de manuteno e operao gerados pelo funcionamento do gaseificador
Custos
2.000 h/ano
3.000 h/ano
4.000 h/ano
5.000 h/ano
6.000 h/ano
Manuteno
0,013770,00909
0,010740,00606
0,009230,00455
0,008320,00364
0,007710,00303
Operao
0,00057
0,000253
0,000142
0,000091
0,000063
0,012
0,009
0,007
0,006
0,005
Total
O custo total de manuteno e operao do gaseificador variou desde

0,012US$/kWh at 0,005US$/kWh durante o perodo de utilizao do
equipamento; esse valor encontra-se na faixa de valor verificado na literatura (Seri/SP, 1988).
O Grfico 19.4 apresenta a variao dos custos de syngas em razo do
perodo de utilizao. Pode-se observar que todos os custos calculados
para cada perodo de utilizao decrescem com o incremento do perodo de
amortizao. A partir de um perodo de utilizao igual a 4.000 h/ano e um
perodo de amortizao igual a quatro anos, os custos do syngas apresentam
pouca variabilidade.
Grfico 19.4 Custos de syngas em razo do perodo de utilizao.
O Grfico 19.5 apresenta a variao dos custos de eletricidade gerados

em razo do perodo de utilizao do sistema. Considerando o preo do
eucalipto (Tabela 19.7), uma taxa de juros de 12%, pode-se observar que
todos os custos calculados para cada perodo de utilizao do sistema decrescem gradualmente com o aumento do perodo de amortizao; pode-se
observar que no caso do custo de gerao de eletricidade para um perodo
652
de utilizao de 2.000 h/ano e um perodo de amortizao de quatro anos,

o sistema alcanar valores inferiores comparado com a tarifa de venda de
eletricidade. Pelo contrrio, para um perodo de utilizao de 6.000 h/ano e
um perodo de amortizao de um ano, o sistema alcanar valores menores
em relao tarifa de venda de eletricidade.
Grfico 19.5 Custos de eletricidade em funo do perodo de utilizao.
O Grfico 19.6 apresenta a variao do custo de gerao de gua quente

em razo do perodo de amortizao. Pode-se observar que todos os custos
calculados para cada perodo de utilizao decrescem gradualmente com
o incremento do perodo de amortizao. Pode-se destacar que em todos
os perodos de utilizao do sistema avaliados, a gerao de gua quente para uso domstico comparado com a tarifa de venda de gua quente
(0,0022US$/kWh) (Kong et al., 2004) no alcanou valores inferiores, pelo
que se pode concluir que o sistema no produz gua quente com preos
competitivos no mercado.
Grfico 19.6 Custos de gerao de gua quente em funo do perodo de utilizao.
653
No Grfico 19.7 pode-se observar a variao da receita anual esperada

versus perodo de amortizao, a qual aumenta gradualmente com o aumento do perodo de amortizao. A viabilidade econmica calculada para
o sistema comea a partir de um perodo de amortizao maior a um ano e
meio, considerando um perodo de utilizao de 6.000 h/ano. Nessas condies, os operrios precisariam trabalhar aproximadamente 17 h/d, algo
muito difcil de se conseguir para o uso desses sistemas em comunidades
isoladas. No caso de considerar um perodo de utilizao de 3.000 h/ano, os
operrios trabalhariam aproximadamente 8 h/d, um perodo timo para o
uso dessa tecnologia em pequenas comunidades isoladas. Com esses resultados, pode-se concluir que a aplicao dessa tecnologia em comunidades
isoladas vivel para um perodo de utilizao de 3.000 h/ano, garantindo
um perodo de amortizao igual a quatro anos, valor de acordo ao encontrado na literatura (Coronado-Rodrguez, 2006).
Grfico 19.7 Viabilidade econmica do sistema para comunidades isoladas.
Concluses
O sistema de gaseificao de biomassa utilizando ar como agente gaseificante integrado a um conjunto motor-gerador para gerao de energia
eltrica em pequeno porte foi avaliado tcnica e economicamente, visando
sua possvel instalao em comunidades isoladas. Desde o ponto de vista
energtico, a eficincia do sistema variou de 13,83% at 12,39% para o Caso
1, sendo seu valor mdio de 13,16%, resultado de acordo com o reportado
na literatura para esses casos, 13% (Lora et al., 2004).
654
Para o Caso 2, a eficincia de gerao de gua quente foi calculada variando de 7,66% a 6,23% e a eficincia de gerao de eletricidade foi de
13,3%. Em ambos os casos, a energia trmica da gerao de gua quente
variou na faixa de 6,21 kW a 5,05 kW. A eficincia a frio do gaseificador
foi de 47,2%.
Esses resultados transformam o sistema em uma tecnologia atrativa e
vivel tecnicamente para ser aplicada em comunidades isoladas. Alm disso, essa tecnologia apresenta emisses baixas de poluentes em comparao
com outras tecnologias de combusto que trabalham com leo diesel mineral. A anlise econmica permitiu, por meio da alocao dos custos gerados
por cada sistema, a determinao da viabilidade. O estudo mostra que o
sistema totalmente vivel para um perodo de amortizao igual a quatro
anos, considerando uma taxa anual de 12% de juros (Grfico 19.5) e um
custo total de capital investido de US$ 16.991,83.
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20
Aspectos do incremento da cogerao no
setor sucroalcooleiro com o uso de novos
equipamentos e tecnologias para melhor
aproveitamento energtico
Ricardo Alan V. Ramos, Rodnei Passolongo,
Marcelo C. Fiomari, Ricardo A. Romo Jnior,
Emanuel R. Woiski, Cassio Roberto M. Maia1
Introduo
O tema abordado neste captulo a cogerao de energia no setor sucroalcooleiro, com nfase na utilizao de novos equipamentos e tecnologias
para melhor aproveitamento energtico e consequente produo de um
maior excedente de energia eltrica para comercializao.
Dentro desse contexto, so considerados o efeito do aumento dos nveis de
presso e temperatura do vapor, pela utilizao de caldeiras e turbinas mais
modernas e eficientes, bem como a eletrificao das moendas, o aproveitamento da palha, quer para queima em caldeira, quer para gaseificao, alm do
aproveitamento da vinhaa, mediante a biodigesto e posterior gaseificao.
Inicialmente feita uma abordagem do setor sucroalcooleiro no Brasil e
de sua insero nas matrizes energtica e eltrica brasileira, bem como do
potencial do crescimento da cogerao, destacando-se as vantagens, perspectivas de expanso, tecnologias disponveis, fatores importantes e incentivos para aumento da produo de bioeletricidade.
1 Os autores agradecem Usina Pioneiros Bioenergia S.A. de Sud Mennucci (SP) o fornecimento de dados de sua planta trmica e de potncia utilizados nos estudos realizados. Os
autores tambm so gratos Fapesp pelo financiamento de um projeto de pesquisa mais
amplo, no qual esto inseridos os temas abordados, bem como pelo fornecimento de bolsa de
estudo de mestrado.
658
Na sequncia, so apresentados os conceitos termodinmicos e as definies de eficincias para os equipamentos e para a planta trmica e de potncia como um todo, como tambm os ndices desempenho e parmetros
importantes de operao no setor sucroalcooleiro. Alm disso, apresentado ainda um modelo de anlise termoeconmica de sistemas de cogerao,
considerando a teoria do custo exergtico, bem como alguns conceitos da
anlise econmica desses sistemas, considerando as tcnicas do Valor Presente Lquido (VPL) e da Taxa Interna de Retorno (TIR).
Aps todas essas consideraes e formulaes, so apresentados exemplos de aplicao de alguns estudos desenvolvidos no setor sucroalcooleiro
no mbito do Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao
de Energia (Nuplen) do Departamento de Engenharia Mecnica da Unesp
de Ilha Solteira, os quais serviram ou serviro de base para implantao de
novos projetos ou melhoria da eficincia dos projetos existentes.
Por fim, so apresentadas algumas consideraes finais, bem como algumas possibilidades para estudos futuros, alm de uma lista com as referncias bibliogrficas utilizadas.
Aspectos do setor sucroalcooleiro no Brasil

O Grfico 20.1 mostra evoluo da produo de cana desde a safra
1994/1995 at a safra 2009/2010, a partir de dados do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (Unica, 2010). Nota-se que a partir do
ano 2000, a produo de cana vem crescendo no Brasil a uma taxa anual de
aproximadamente 35 milhes de toneladas de cana.
O processo de colheita da cana pode ser realizado manualmente ou por
meio de colhedeiras mecnicas. O sistema tradicional de colheita, ainda utilizado na maioria das reas cultivadas com cana-de-acar no Brasil, envolve a queima prvia do canavial e o corte manual da cana inteira. Entretanto,
esse procedimento aos poucos vem sendo substitudo pela colheita mecanizada da cana crua picada, sem queima, por conta de restries ambientais
prtica da queima.
Na Figura 20.1 apresentado o fluxograma desde a colheita da cana
at os processos de produo do etanol e do acar, bem como de alguns
subprodutos do setor.
ASPECTOS DO INCREMENTO DA COGERAO NO SETOR SUCROALCOOLEIRO
659
Grfico 20.1 Evoluo da produo total de cana no Brasil

Fonte: Unica (2010)
Figura 20.1 Fluxograma de produo do lcool e do acar
Considerando o processo com um todo, desde a colheita at a produo

de lcool e acar, existem vrios resduos, tais como a palha, que podem
ser separados durante a colheita mecanizada; o bagao, resultante do processo de moagem; a torta de filtro, proveniente da decantao e filtrao do
caldo; a vinhaa, obtida durante a fabricao do lcool; e, tambm, as cinzas
resultantes do processo de queima na caldeira. Tais resduos so valorizados e alguns deles podem ser reciclados e utilizados como fertilizantes, devolvendo ao solo parte dos nutrientes absorvidos e reduzindo a quantidade
de adubos para tratamento do solo.
660
A fabricao do lcool e do acar apresenta uma grande demanda de

energia trmica, uma vez que necessrio evaporar a gua adicionada ao
caldo durante o processo de embebio. Alm disso, os processos de destilao e desidratao, para fabricao do etanol hidratado e anidro, tambm
requerem energia trmica. Essa demanda de energia pode ser suprida por
um sistema de produo combinada de calor e potncia, denominado sistema de cogerao, o qual tradicionalmente utiliza o bagao da usina como
combustvel. Pelo fato de serem obtidos dois produtos de valores distintos (energia trmica e potncia) utilizando uma mesma fonte de energia, os
sistemas de cogerao tornam-se atrativos por apresentarem eficincias de
primeira lei maiores do que aquelas encontradas quando ambas as formas
de energia so produzidas em processos independentes (Walter, 1994).
A cogerao no setor eltrico brasileiro

Nos ltimos anos, o setor eltrico brasileiro sofreu mudanas estruturais inovadoras, de ordem institucional e em nvel de regulamentao, que
alteraram sensivelmente o panorama, at ento estvel e controlado pelo
governo, para um ambiente competitivo.
Dentro desse contexto, em 1996 foi criada a Agncia Nacional de Energia Eltrica (Aneel) com o objetivo de regular e fiscalizar gerao, transmisso, distribuio e comercializao da energia eltrica. Posteriormente, em
1998 foram criados o Operador Nacional do Sistema Eltrico (ONS), responsvel pelo controle e operao das instalaes de gerao e transmisso
de energia eltrica, e o Mercado Atacadista de Energia (MAE), responsvel
pelas transaes de compra e venda de energia eltrica.
No incio de 2000, foi institudo o Programa Prioritrio de Termeletricidade (PPT), visando implantao de usinas termeltricas e centrais de
cogerao a gs natural, e, posteriormente, em 2002, foi criado o Programa
de Incentivos s Fontes Alternativas de Energia Eltrica (Proinfa), permitindo a contratao de energia produzida por fontes alternativas renovveis
(elica, biomassa e pequenas centrais hidreltricas).
Em 2004, foi criada a Empresa de Pesquisa Energtica (EPE), com a
finalidade de realizar estudos e pesquisas para subsidiar o planejamento do
661
setor energtico, e a Cmara Central de Energia Eltrica (CCEE), com o

objetivo de viabilizar a comercializao de energia eltrica no Sistema Integrado Nacional.
Por fim, no ano 2005, entrou em vigor o Protocolo de Kyoto, permitindo
a comercializao de crditos de carbono oriundos, dentre outras fontes, da
cogerao.
O Grfico 20.2 mostra a distribuio das vrias fontes de energia que
constituem as matrizes energtica e eltrica brasileira, segundo dados do
Balano Energtico Nacional referente ao ano 2009 efetuado pelo Ministrio de Minas e Energia (MME) e pela Empresa de Pesquisa Energtica
(EPE, 2010).
Grfico 20.2 Constituio das matrizes energtica e eltrica brasileira

Fonte: EPE (2010)
662
Segundo dados da EPE (2010), ainda muito baixa a participao da

produo de eletricidade por meio da cogerao na matriz eltrica brasileira, correspondendo a algo em torno de 6% do total. Portanto, existe um
grande espao para crescimento, especialmente no que se diz respeito ao
setor sucroalcooleiro.
De acordo com dados recentes da Unio das Indstrias da Cana-de-Acar (Unica), das 434 usinas de acar e de lcool em operao no pas,
apenas 100 (23%) exportam energia para o Sistema Integrado Nacional
(SIN). Em So Paulo, estado mais importante no cenrio sucroalcooleiro,
esse percentual um pouco maior, e de 182 usinas, 54 (30%) exportam sua
energia ao sistema.
Assim, verifica-se que existe um grande potencial no setor sucroalcooleiro para a produo de energia eltrica excedente para comercializao,
quer seja por meio do retrofit das usinas existentes, quer seja por meio da
implantao de novos projetos, considerando, para tanto, o efeito do aumento dos nveis de presso e temperatura do vapor, mediante a utilizao
de caldeiras e turbinas mais modernas e eficientes; da eletrificao dos acionamentos mecnicos e do uso de difusores para a extrao do caldo, prticas
essas que j vm sendo difundidas no setor; bem como o aproveitamento da
palha, quer seja para queima em caldeira, quer para gaseificao; alm do
aproveitamento da vinhaa, por meio da biodigesto e posterior gaseificao, prticas essas em fase de implantao e/ou ainda em desenvolvimento,
sendo esses os fatores motivadores do presente estudo.
Caracterizao dos sistemas de cogerao

no setor sucroalcooleiro
No setor sucroalcooleiro, o principal sistema de cogerao aquele que
emprega turbinas a vapor como mquinas trmicas e que aparece vinculado
a trs configuraes fundamentais: turbinas de contrapresso, combinao
de turbinas de contrapresso com outras de condensao que empregam
o fluxo excedente, e turbinas de extrao-condensao. A condensao de
uma parte do vapor de escape, ou de uma extrao de vapor de uma turbina de extrao-condensao, garante as necessidades de energia trmica do
sistema.
663
A Figura 20.2 apresenta graficamente um esquema de processo trabalhando em regime de cogerao que emprega turbinas de contrapresso.
Figura 20.2 Sistema de cogerao com turbinas a vapor de contrapresso
Quando o objetivo principal visa adequar a instalao para produo e

venda de energia excedente, o uso de turbinas de extrao-condensao
mais vivel. Alm de altos ndices de desempenho, tais mquinas de condensao com extrao regulada se justificam tambm pela sua capacidade
de satisfazer a relao energia trmica e eltrica que pode variar em uma
ampla faixa.
Esse sistema, com maior capacidade de produo eltrica, possui normalmente turbinas de extrao dupla, sendo a primeira no nvel de presso
em que o vapor requerido pelas turbinas de acionamento mecnico, e a segunda na presso em que o vapor consumido no processo produtivo. Comumente, o vapor de escape das turbinas de acionamento mecnico soma-se ao fluxo da segunda extrao, visando satisfazer a demanda de vapor do
processo. Dentro do setor sucroalcooleiro, a adoo de tal sistema implica
analisar a viabilidade de operao no perodo fora da safra, conjuntamente
com o emprego de outros combustveis para complementar a falta de bagao na entressafra.
664
A Figura 20.3 ilustra um esquema de processo trabalhando em regime

de cogerao que emprega uma turbina de extrao-condensao.
Figura 20.3 Sistema de cogerao com turbina a vapor de extrao-condensao
A tecnologia de gerao de energia eltrica a partir da biomassa que integra a gaseificao do combustvel e turbinas a gs em ciclo combinado conhecida como BIG-GTCC (Biomass Integrated Gasification Gas Turbine
Combined Cycle). Nesse ciclo a biomassa gaseificada e o gs combustvel
gerado usado para o acionamento de uma turbina a gs acoplada a um
gerador eltrico, produzindo eletricidade, conforme mostra a Figura 20.4.
Figura 20.4 Gerao de energia eltrica a partir da biomassa que integra a gaseificao do
combustvel e turbinas a gs em ciclo combinado
665
Essa tecnologia estuda a viabilidade tcnica e econmica de projetos de

gerao de energia eltrica utilizando-se a tecnologia de gerao termeltrica em ciclo combinado, operando em cogerao, integrada a sistemas de
gaseificao de biomassa para a produo de gs combustvel.
Apesar das elevadas eficincias, projetadas para os ciclos combinados
baseados em combustveis gaseificados derivados da biomassa, os aspectos
tecnolgicos e a confiabilidade dos sistemas so ainda um ponto crtico do
seu desenvolvimento.
Vale destacar que a estabilidade da combusto um aspecto importante
para a adaptao dos modelos comerciais de turbinas a gs para operao
com gases de baixo poder calorfico, como o biogs. Uma vez que o gs de
biomassa apresenta um menor aporte de calor, necessria uma quantidade muito maior de combustvel para uma mesma vazo de ar. Assim, todo
o sistema deve ser adaptado para conter essa maior vazo de gs (Corra
Neto, 2001).
Fundamentos e ferramentas para anlise

de sistemas de cogerao
A seguir sero apresentados alguns fundamentos termodinmicos, termoeconmicos e econmicos necessrios para a anlise de sistemas de cogerao de energia.
Fundamentos termodinmicos
Leis da Termodinmica, exergias e irreversibilidades
Para esta anlise considera-se um volume de controle em cada equipamento que compe a planta e no se consideram os processos transitrios,
como entrada em operao, parada ou qualquer variao no tempo.
A primeira anlise a ser feita com relao conservao da massa, a
qual considera as vazes de entrada e sada no volume de controle e a variao de massa no interior do mesmo. A Equao (20.1), tambm conhecida
como equao da continuidade, representa o balano de massa em um volume de controle.
666
dmv.c.
= m e m s
dt
(20.1)
Considerando o processo em regime permanente, e que o estado da massa em cada ponto do volume de controle no varia com o tempo, a Equao
(20.1) pode ser escrita como segue:
m m
e
=0
(20.2)
onde:
m e: vazo mssica que entra no volume de controle (kg/s);
m s: vazo mssica que sai do volume de controle (kg/s).
A equao da conservao da energia, conhecida como Primeira Lei da
Termodinmica, em sua forma completa, considerando inclusive as variaes no tempo, representada pela Equao (20.3) como segue:
2
2
dEv.c.
+ m h + Ve + gZ m h + Vs + gZ
= Q v.c. W
e e 2
s s 2
v.c.
e
s
dt
(20.3)
onde:
g: acelerao gravitacional (m/s2);
he: entalpia especfica na entrada do volume de controle (kJ/kg);
hs: entalpia especfica na sada do volume de controle (kJ/kg);
Q v.c.: potncia trmica no volume de controle (kW);

Ve: velocidade da vazo mssica na entrada do volume de controle
(m/s);
Vs: velocidade da vazo mssica na sada do volume de controle(m/s);
Wvc: taxa de transferncia de trabalho no volume de controle (kW);

Ze: cota da vazo mssica na entrada do volume de controle em relao
a uma linha de referncia (m);
Zs: cota da vazo mssica na sada do volume de controle em relao a
uma linha de referncia (m).
Sero adotadas, alm da hiptese de regime permanente, as hipteses de
que as variaes das energias cintica e potencial so muito pequenas, podendo ser desprezadas. Assim, a Equao (20.3) pode ser reescrita como segue:
+ m h m h = 0
Q v.c. W
ee ss
v.c.
(20.4)
667
As irreversibilidades num processo so quantificadas pela Segunda Lei

da Termodinmica, por meio da propriedade chamada entropia. Para processos em um volume de controle, o balano de entropia definido como:
Q v.c.,j
dSv.c.
= Sger, v.c. +
Tj
dt
+ m e se m s ss
(20.5)
Para o processo em regime permanente, a Equao (20.5) pode ser reescrita como:
Q v.c., j
S ger , v.c. +
+ m s m s = 0
(20.6)
Tj e e s s
onde:
se: entropia especfica na entrada do volume de controle (kJ/kgK);
ss: entropia especfica na sada do volume de controle (kJ/kgK);
Tj: temperatura superficial do volume de controle (K);
Sger, v.c.: gerao de entropia no volume de controle (kW/K).

A anlise energtica (Primeira Lei da Termodinmica) no contabiliza a qualidade da energia que est se perdendo e nem onde ocorrem as
irreversibilidades dos processos, ou seja, no identifica onde e por que elas
aparecem. Assim, apesar de a anlise energtica continuar tendo sua validade, por meio de sua aplicao conjunta com a anlise exergtica pode-se
analisar melhor os sistemas trmicos, complementando as informaes e
permitindo o clculo tanto do valor termodinmico de um fluxo, em termos
do trabalho mecnico que poderia ser extrado dele, como das ineficincias
e perdas termodinmicas reais dos processos nos sistemas.
Assim, conveniente definir a exergia de fluxo de um estado em razo
da capacidade (potencial) para realizar o mximo trabalho possvel.
Para o clculo da exergia especfica dos fluidos utilizada uma equao
que leva em conta a exergia fsica e a exergia qumica:
) (
ex total = ex fis + ex qui
(20.7)
A exergia fsica de um fluxo calculada com base num estado de referncia restrito (P0, T0) onde h equilbrio trmico e mecnico com o meio,
por meio da seguinte equao:
668
ex fis = h h0 T0 ( s s0 ) +
V2
+ g ( z z0 )
2
(20.8)
Desprezando os termos da energia cintica e potencial, tem-se que a

funo exergia para um fluxo de matria em regime permanente assume a
seguinte forma:
ex fis = h h0 T0 ( s s0 )
(20.9)
Para haver equilbrio completo com o meio, o sistema deve estar tambm
em equilbrio qumico com ele. O trabalho que pode ser obtido mediante
um processo reversvel que leva o sistema do estado de referncia restrito
at o estado de referncia onde h equilbrio completo (estado morto), a
exergia qumica, definida por:
ex qui =
( ) x
i
0 ,i
(20.10)
onde:
0,i : potencial qumico de referncia do elemento (T0, P0);
i : potencial qumico do elemento na mistura (T0, P0);
xi : frao do componente na mistura.
Logo, a exergia total pode ser representada por:
ex total = ( h h0 ) T0 ( s s0 ) +
( ) x
i
0 ,i
(20.11)
Para uma soluo ideal de substncias puras, a exergia qumica dada

por (Bejan et al., 1996):
( ex )
qui
( x ex
i
0
i
) + RT ( x lnx )
0
(20.12)
sendo:
0
exi : exergia qumica especfica de cada componente no estado puro

(kJ/kmol);
Mi: massa molecular de cada componente do combustvel (kg/kmol);
R : constante universal dos gases (8,3145 kJ/kmol K);

xi: frao molar de cada componente do combustvel (%).
669
O primeiro termo entre colchetes da Equao (20.12) representa a soma

das parcelas das exergias qumicas dos componentes do gs em estado puro.
O segundo termo dessa equao representa a gerao de entropia associada
ao prprio fato de realizar a mistura e depende da concentrao de cada
substncia presente na mesma.
A Tabela 20.1 mostra os valores da exergia qumica padro para alguns
componentes gasosos a T0 = 25C e P0 = 1 atm, de acordo com Szargut et
al. (1988).
Tabela 20.1 Exergia qumica de alguns componentes gasosos no estado puro
Substncia
Frmula
ex (kJ/kmol)
Metano
CH4
831.650
Etano
C2H6
1.495.840
Dixido de Carbono
CO2
19.870
N2
720
Nitrognio
Para o clculo da exergia especfica do bagao e da palha da cana utilizada a equao apresentada por Szargut et al. (1988), que leva em conta a
correlao entre a exergia qumica e o poder calorfico inferior do combustvel, considerando a relao entre as fraes em massa de oxignio e carbono, a composio elementar do combustvel, e o contedo de umidade,
conforme segue:
excomb = (PCIcomb + Lgua Zgua ) + exgua Zgua
(20.13)
sendo:
ZH
ZO
ZH
ZN
1,0412 + 0,2160 2 0,2499 2 1 + 0,7884 2 0,0450 2
Z
Z
Z
C
C
C
ZC
=
ZO
1 0,3035 2
ZC
onde:
: funo das fraes de massa dos componentes da biomassa;
ZH2 : frao em massa de hidrognio na biomassa (%);
ZO2 : frao em massa de oxignio na biomassa (%);
ZN2 : frao em massa de nitrognio na biomassa (%);
ZC : frao em massa de carbono na biomassa (%);
Zgua : frao em massa de gua na biomassa mida (%);
(20.14)
670
PCIbag : poder calorfico inferior da biomassa (kJ/kg);

Lgua : entalpia de vaporizao da gua (kJ/kg);
exgua : exergia qumica da gua lquida (kJ/kg).
A Tabela 20.2 apresenta as caractersticas do bagao de cana utilizadas
para o clculo da exergia (Camargo et al., 1990; Souza, 2001).
Tabela 20.2 Caractersticas do bagao e da palha da cana
Bagao
Palha
Unidades
Poder Calorfico Inferior
Parmetros
7.736
13.151
kJ/kg
Umidade
50,0
15,0
Carbono
46,3
45,03
Hidrognio
6,4
6,3
Oxignio
43,3
44,26
Nitrognio
0,0
0,8
O balano de exergia na sua forma completa obtido quando a Equao (20.5) multiplicada por T0 e, desse resultado, subtrada a Equao
(20.3), resultando:
dIv.c.
=
dt
Q
1
j
T0
Tj
+
W
v .c .
m ex m ex
e
Iv.c.
(20.15)
A taxa de variao instantnea de exergia ou de gerao de irreversibilidade mostrada na Equao (20.15) composta por vrios termos. O primeiro termo aps a igualdade, a taxa instantnea de exergia, est associado
transferncia de calor; o segundo termo, transferncia de trabalho; o
terceiro e o quarto, transferncia de massa; e o quinto e ltimo termos,
associados destruio de exergia ou gerao de irreversibilidade.
Para um processo em regime permanente, a Equao (20.15) pode ser
reescrita como segue:
Iv.c. =
Q
1
j
T0
Tj
+
W
v .c .
m ex m ex
e
(20.16)
onde:
exe: exergia especfica na entrada do volume de controle (kJ/kg);
exs: exergia especfica na sada do volume de controle (kJ/kg);
671
Tj: temperatura superficial do volume de controle (K);

T0: temperatura do estado morto (K);
iv.c.: variao temporal da exergia no volume de controle (= T0Sger, v.c.)

(kW).
Vale destacar que foi adotado neste estudo para o estado morto
T0 = 298,15 K e P0 = 101,3 kPa.
Eficincias trmicas para equipamentos e para o sistema
de cogerao
A seguir sero formuladas as eficincias trmicas dos principais equipamentos utilizados em sistemas de cogerao e, tambm, desses sistemas
como um todo.
Turbinas, bombas e compressores
Para turbinas, a eficincia pela primeira lei (I) pode ser definida como
sendo a razo entre o trabalho produzido no volume de controle e o trabalho
que seria produzido no processo isentrpico. A Equao (20.17) apresenta
a eficincia com base na primeira lei para turbinas:
I =

W
vc
m hiso
(20.17)
onde:
hiso: diferena entre as entalpias de entrada e de sada do volume de
controle, para processo isentrpico (kJ/kg);
m : vazo mssica no volume de controle (kg/s);
Wvc: potncia desenvolvida no volume de controle (kW).

A definio de eficincia pela segunda lei (II) para turbinas envolve
a comparao entre o trabalho real produzido no processo e a variao de
exergia entre os estados de entrada e sada, de acordo com a equao a seguir:

W
v .c .
II =
(20.18)
m ( exe exs )
onde:
exe: exergia especfica do vapor na entrada da turbina (kJ/kg);
exs: exergia especfica do vapor na sada da turbina (kJ/kg).
672
Para o caso de bombas e compressores, as eficincias pela primeira e segunda leis so definidas de maneira inversa:
m hiso

W
(20.19)
m ( exe exs )

W
(20.20)
I =
vc
II =
v .c .
Caldeira convencional
Para caldeiras convencionais a bagao, a eficincia pela primeira lei,

considerando que a vazo de gua de alimentao e de vapor de sada seja a
mesma, dada pela equao:
I =
m vapor hvapor hgua

m bag PCIbag
(20.21)
onde:
hvapor: entalpia especfica do vapor na sada da caldeira (kJ/kg);
hgua: entalpia especfica da gua na entrada da caldeira (kJ/kg);
m vapor: vazo mssica de vapor na sada da caldeira (kg/s);
m bag: vazo mssica de bagao consumido na caldeira (kg/s);
PCIbag: poder calorfico inferior do bagao com umidade 50%
(7.736 kJ/kg).
A eficincia pela segunda lei para caldeiras pode ser definida como segue:
II =
m vapor exvapor - exgua

m bag exbag
(20.22)
onde:
exvapor: exergia especfica do vapor na sada da caldeira (kJ/kg);
exgua: exergia especfica da gua na entrada da caldeira (kJ/kg);
exbag: exergia especfica do bagao da cana (kJ/kg).
Caldeira de recuperao
Para caldeiras de recuperao de calor, considerando que a vazo de

gua de alimentao igual vazo de vapor gerado, a eficincia pela primeira lei (I ) dada por:
I =
(
(h
m vapor hs,vapor he,gua

m gases
e, gases
hs, gases
)
)
673
(20.23)
onde:
m vapor: vazo mssica de vapor na sada da caldeira (kg/s);
m gases: vazo mssica de gases de exausto (kg/s);
hs,vapor: entalpia especfica do vapor na sada da caldeira (kJ/kg);
he,gua: entalpia especfica da gua lquida na entrada da caldeira
(kJ/kg);
he,gases: entalpia especfica dos gases na entrada da caldeira (kJ/kg);
hs,gases: entalpia especfica dos gases na sada da caldeira (kJ/kg).
A eficincia pela segunda lei (II ) para a caldeira de recuperao calculada pela relao entre o fluxo de exergia do vapor produzido menos o
fluxo de exergia da gua que entra na caldeira e a diferena entre os fluxos
de exergia dos gases de exausto que entram e saem na caldeira, de acordo
com a equao:
m vapor exs,vapor exe,gua
II =
(20.24)
m gases exe, gases exs, gases
(
(
)
)
onde:
exs,vapor: exergia especfica do vapor na sada da caldeira (kJ/kg);
exe,gua: exergia especfica da gua lquida na entrada da caldeira (kJ/kg);
exe,gases: exergia especfica dos gases na entrada da caldeira (kJ/kg);
exs,gases: exergia especfica dos gases na sada da caldeira (kJ/kg).
Turbina a gs
A eficincia da turbina a gs representa a eficincia total do conjunto

(compressor, cmara de combusto e expansor) e leva em conta a potncia
lquida de eixo em relao potncia fornecida pelo combustvel, conforme
mostra a equao a seguir:
I =
WTG

mcomb PCIcomb
(20.25)
Diversos fatores influem diretamente no desempenho da turbina, como

a razo de presso, temperatura de entrada no expansor e eficincias isentrpicas da turbina e do compressor.
674
A eficincia pela segunda lei para a turbina a gs calculada pela relao

entre a potncia lquida de eixo da turbina e a variao de exergia entre o
combustvel, o ar e os gases de exausto, de acordo com a equao:
II =

W
TG
m comb excomb + m ar exar m gases ex gases
(20.26)
Gaseificador
A eficincia do gaseificador calculada em razo dos parmetros do gs

obtido e dos insumos utilizados, ou seja, o combustvel slido e o ar utilizado para a gaseificao. Ao contrrio das plantas que operam com gaseificadores pressurizados, os sistemas que utilizam gaseificadores atmosfricos
precisam promover o resfriamento do gs antes de sua compresso para
utilizao na turbina a gs. A eficincia a frio de um gaseificador definida
pela equao a seguir (Nogueira; Lora, 2003):
m gas PCI gas
f =
m comb PCIcomb + m ar har
(20.27)
A eficincia a frio do gaseificador considera apenas a energia que pode

ser liberada por meio da combusto. Em aplicaes trmicas da gaseificao, quando o gs resultante utilizado para gerao de vapor ou queimado diretamente em fornos, mais conveniente definir a eficincia a quente
do gaseificador, de acordo com a equao a seguir (Nogueira; Lora, 2003):
q =
m gas PCI gas + m gas hgas

m comb PCIcomb + m ar har
(20.28)
ndices de desempenho para sistemas de cogerao
O objetivo da utilizao de ndices de desempenho avaliar os sistemas de

cogerao como um todo, esclarecendo as diferenas entre eles, fundamentalmente com relao aplicao de mtodos baseados na primeira e na segunda
leis da termodinmica. A seguir sero apresentados alguns desses ndices.
Eficincia global da planta
A avaliao pela primeira lei da termodinmica permite calcular as

potncias de eixo produzidas para os acionamentos dos geradores eltricos
675
(Wger,ele), alm das potncias consumidas na planta, relativas ao bombea
mento (Wbomb) e compresso (Wcomp). Tambm, por meio da primeira lei,

pode-se determinar a potncia trmica til no processo para o sistema de
evaporao da gua do caldo (Q util) e a perdida no condensador (Q cond).

Para uma avaliao geral da planta, devem-se considerar a potncia eltrica disponvel para exportao, a potncia trmica e a energia da fonte
quente da planta. A potncia disponvel para exportao dada pela potncia total gerada descontando-se a potncia consumida no bombeamento
e compresso e a consumida pela usina (Wconsumo). Assim, pode-se definir a

eficincia global do sistema (global), conforme ilustrado pela equao que
segue:

W
+ Q til W
comp Wbomb Wco nsumo
global = ger ,ele
(20.29)
m PCI
comb
comb
Esse ndice representa o aproveitamento lquido da energia do combustvel, pois considera a energia til, na forma de potncia eletromecnica ou
energia trmica, e a energia consumida no ciclo termodinmico.
Eficincia de aproveitamento da biomassa
A definio da eficincia global, de acordo com a Equao (20.29), tem

como base apenas a energia fornecida planta, desconsiderando a energia
de outras fontes disponveis na indstria que poderiam ser utilizadas para
fins energticos, mas que no so aproveitadas. Assim, ser considerada
tambm uma eficincia de aproveitamento energtico da biomassa como
sendo a relao entre a energia til, seja ela trmica, seja eletromecnica, e a
energia total da biomassa disponvel para aproveitamento, ou seja, bagao,
palha e biogs da vinhaa, independentemente se ela estiver ou no sendo
aproveitada na planta, sendo definida por:

W
ger ,ele + Q til Wcomp Wbomb Wconsumo
aprov,biom =
(20.30)
m bagao PCIbagao + m palha PCI palha + m biogs PCIbiogs
Razo potncia-calor
Outro ndice importante a relao entre a potncia disponvel para ex

portao (Wexport)e a energia trmica utilizada no processo. Assim, define-se
a razo potncia-calor (RPC) como:
676
RPC =

W
exp ort

Q
(20.31)
til
A partir do clculo desses parmetros possvel identificar as vantagens

e/ou desvantagens de um sistema de cogerao em relao a outro.
Relao bagao-vapor
O consumo especfico de bagao, ou relao bagao-vapor (Rbag,vap),

um parmetro importante que est associado eficincia das caldeiras. Tal
parmetro calculado a partir da quantidade de bagao que necessria
para se produzir um quilograma de vapor na presso e temperatura desejada. Assim, tem-se:
Rbag,vap =
m bag
m vapor
(20.32)
Conhecido o valor de projeto do consumo especfico de bagao por unidade de vapor gerado numa caldeira, pode-se determinar seu consumo de
bagao para uma determinada produo de vapor, conforme mostrado na
Equao (20.32).
Relao vapor-cana moda
No que diz respeito demanda trmica de processo de fabricao de

acar e lcool, a relao vapor-cana moda (Rvapor,cana) representa a energia
trmica que est sendo usada no processo e dada em quilogramas de vapor
por tonelada de cana moda. O objetivo das plantas reduzir esse nmero,
ou seja, conseguir processar o caldo da cana com a menor demanda de vapor
possvel. A Equao (20.33) ilustra o clculo dessa relao para uma dada
quantidade de cana moda (m cana):
Rvapor,cana =
m vap
m cana
1000
(20.33)
Relao potncia eltrica-cana moda
Analogamente relao Rvapor,cana, pode-se caracterizar a relao da energia eltrica disponvel para exportao, em kWh, para cada tonelada de
677
cana moda (Rpot,cana). A equao a seguir ilustra essa relao para o fluxo de
cana dado em t/h:
Rpot,cana =

W
exp ort
m cana
(20.34)
Esse nmero difere em usinas que tm turbinas nos acionamentos mecnicos para aquelas que utilizam motores eltricos nos mesmos acionamentos. Neste ltimo caso, essa relao maior, j que a potncia eltrica
instalada e a demanda so maiores. Portanto, quando Rpot,cana for utilizada
para comparar diferentes plantas, deve-se considerar que tipo de acionamento utilizado.
Relao vapor consumido-potncia eltrica
A razo entre o vapor consumido (kg/s) e a potncia eltrica gerada

(Rvappotele) expressa por kg/kWh pode ser dada por:
Rvap,ele =
3.600 m vap

W
(20.35)
ger,ele
Essa relao conhecida como consumo especfico de vapor, quer seja

numa turbina ou numa planta como um todo.
Relao bagao-potncia total
Essa relao representa a razo entre a quantidade total de bagao consumido (kg/s) pelas turbinas da planta com relao potncia total produ
zida, quer seja nas turbinas de gerao de eletricidade (Wele) ou de aciona
mento mecnico (Wmec), dada em kg/kWh:
Rbag,pot =
3.600 m bag
+W
)
(W
ele
(20.36)
mec
Fundamentos termoeconmicos
Definio de termoeconomia
Termoeconomia um termo que combina a anlise termodinmica com os

princpios de economia. Como as consideraes termodinmicas utilizadas
678
na Termoeconomia so baseadas no conceito de exergia, o termo Exergoeconomia tambm muitas vezes utilizado para a descrio dessa combinao.
A anlise termoeconmica objetiva a determinao de custos de produo em base exergtica e emprega critrios de partio/distribuio de custos em plantas multiprodutos, tal como em sistemas de cogerao, tambm
em base exergtica.
De acordo com Tsatsaronis (1993), uma completa anlise termoeconmica consiste em:
Identificar a localizao, magnitude e fontes de perdas termodinmicas reais num sistema;
Calcular os custos associados s destruies, perdas e exergia;
Calcular separadamente o custo de cada produto gerado pelo sistema
que possui mais de um produto final.
Assim, mediante uma anlise termoeconmica, possvel (Bejan et al.,
1996):
Entender o processo de formao de custo e o fluxo de custos no
sistema;
Facilitar estudos de viabilidade e otimizao na fase de projeto ou melhorar o processo de um sistema existente;
Aperfeioar variveis especficas em um nico componente;
Aperfeioar o sistema global;
Auxiliar em procedimentos de tomada de deciso relacionados operao e manuteno;
Comparar alternativas tcnicas.
Vertentes e metodologias da termoeconomia
Ao longo das dcadas de 1980 e 1990, muitos pesquisadores se dedicaram ao estudo da termoeconomia. Diferentes metodologias e abordagens
foram propostas para a sua implementao matemtica, descrevendo de
maneira adequada a distribuio dos custos exergticos e monetrios entre
os equipamentos que compem um sistema trmico. Assim, surgiram duas
vertentes principais na termoeconomia, as quais sero descritas resumidamente na sequncia.
679
A primeira vertente da termoeconomia estabelece que a otimizao

parte integrante e fundamental da diviso dos custos, justificando o uso da
exergia pela possibilidade de se dividir instalaes complexas em partes que
possam ser otimizadas separadamente.
A segunda vertente da termoeconomia utiliza a alocao dos custos mdios dos produtos (externos e internos) e dos componentes do sistema, satisfazendo alguns objetivos, como determinar o custo atual dos produtos ou
servios, propiciar bases racionais para a fixao dos preos dos produtos e
servios, fornecer um meio de alocar e controlar os gastos e fornecer informaes a partir das quais decises operacionais podem ser estabelecidas e
avaliadas.
Na primeira vertente podem ser destacadas as metodologias de Otimizao Termoeconmica, desenvolvida por El-Sayed e Evans (1970), e de
Anlise Funcional Termoeconmica, proposta por Frangopoulos (1983);
e na segunda vertente a metodologia da Teoria do Custo Exergtico, difundida por Lozano e Valero (1993), que ser a metodologia utilizada no
presente estudo, merecendo, portanto, uma melhor descrio a seguir.
Teoria do custo exergtico
Essa anlise baseada na contabilidade da destruio de exergia que

experimentam os fluxos na sua passagem por meio dos diferentes equipamentos constituintes do sistema. Dessa forma, so contabilizadas as eficincias (e perdas exergticas), em cada um dos volumes de controle do sistema, tendo como resultado o custo exergtico de cada um dos portadores
de energia.
Um balano de custo aplicado para o k-simo componente do sistema
mostra que a soma das taxas de custos associadas com todos os fluxos de
exergia de sada igual soma das taxas de custos de todos os fluxos de
exergia de entrada mais o custo apropriado em razo do investimento de
capital e despesas de operao e manuteno. Consequentemente, para um
componente k que recebe uma transferncia de calor e gera potncia, resulta a seguinte equao (Lozano; Valero, 1993):
C
s
sk
+ CWk = C Q k +
C
ek
+ Z k
(20.37)
680
onde:
C sk: custo mdio do fluxo de sada por unidade de tempo no componente k (R$/s);
C wk: custo mdio do trabalho por unidade de tempo no componente

k (R$/s);
C Q k: custo mdio do calor por unidade de tempo no componente

k (R$/s);
C ek: custo mdio do fluxo de entrada por unidade de tempo no componente k (R$/s);
Zk:custo mdio total do equipamento por unidade de tempo no componente k (R$/s).

Por meio da Equao (20.37) possvel constatar que o custo total dos
fluxos de sada de exergia igual despesa total para obt-lo. interessante
notar que, quando um componente recebe potncia (compressor ou bom
ba), o termo C wk muda o seu sinal. O mesmo ocorre quando existe transfe
rncia de calor do componente, onde o termo C Q k aparece com sinal negativo. Geralmente os balanos de custos so escritos de forma que todos os
termos so positivos, assim, o que se faz rearranjar a equao transferindo
os termos para esquerda ou para a direita de acordo com o sinal.
Para vazes mssicas entrando e saindo com taxas associadas de trans
ferncia de exergia (Exe e Exs), potncia (W ), e a taxa de transferncia de
exergia associada com a transferncia de calor (Exq), tem-se:

= c m ex
C e = ce Ex
e
e e e
(20.38)
= c m ex
C s = c s Ex
s
s s
s
(20.39)

CW = cWW
(20.40)

C Q = cQ Ex
Q
(20.41)
onde: ce, cs, cW e cQ denotam os custos mdios por unidade de exergia em

reais por Gigajoule (R$/GJ).
681
No k-simo componente, as taxas de exergia entrando e saindo (Exe e
Exs), bem como as de calor transferido e de trabalho (Exq e W ) so calculadas em uma anlise exergtica.
Antes da determinao de Zk, deve ser calculado o custo anual dos equia
pamentos com amortizao (Zk ), levando-se em conta as despesas com investimento de capital e com operao e manuteno, por meio da equao:
Zka = Zk ( fa + fomf + FC fomv )
(20.42)
sendo:
Zk: custo de investimento de capital no equipamento k (R$);
fa: fator de amortizao;
fomf: percentual de custo anual fixo associada operao e manuteno;
fomv: percentual de custo anual varivel de operao e manuteno;
FC: fator de carga.
O fator de amortizao ( fa) pode ser calculado pela seguinte expresso:
fa =
i (1 + i )
(1 + i )n 1
(20.43)
sendo:
i: taxa anual de juros (%);
n: perodo de amortizao (anos).
Assim, tem-se:
i (1 + i )n
Zka = Zk
+ fomf + FC fomv
(20.44)
n
(1 + i ) 1
A taxa de custo para cada equipamento (Zk), levando-se em conta as despesas com investimento de capital, operao e manuteno, alm do tempo
efetivo de funcionamento, pode ser calculada por (Leite, 2003):
Z k =
Zka
3600toper
sendo:
Zk: taxa de custo do equipamento k (R$/s);

Zka: custo anual de equipamento k com amortizao (R$/ano);
toper : tempo efetivo de operao do equipamento k (h).
(20.45)
682
Introduzindo as expresses de taxa de custo, Equaes (20.38) a (20.41),

e a Equao (20.45) na Equao (20.37), obtm-se:
)
( c Ex
s
= c Ex

+ cwk W
k
Qk
Qk +
)
( c Ex
e
Zka
3600 toper
(20.46)
Na Equao (20.46) as variveis correspondem aos custos particionados

por unidade de exergia para os fluxos de exergia associados com o componente k (cek, csk, cWk e cQ k). Para analisar cada componente pode-se assumir
que os custos por unidade de exergia so conhecidos para todos os fluxos de
entrada. Caso uma corrente venha a incorporar o sistema, o custo dessa corrente ser o seu custo de compra; logo, as variveis desconhecidas a serem
calculadas pelo balano de custos para o k-simo componente so os custos
por unidade de exergia dos fluxos que saem (csk). No caso do componente
analisado transferir calor ou potncia, o custo por unidade de exergia deve
r ser associado como transferncia de potncia (W ) ou calor (cQ k).
A determinao dos custos feita de acordo com um conjunto de regras
(postulados) enumerada por Lozano e Valero (1993) que considera um conjunto de definies prvias de estrutura fsica e produtiva de modo a gerar
um sistema de equaes para a determinao dos custos dos fluxos de uma
instalao, a saber:
Postulado 1: Custos exergticos so quantidades conservativas como
consequncia de suas definies, e pode-se, portanto, escrever uma
equao de balano para cada unidade do sistema.
Postulado 2: Na ausncia de informaes externas, o custo por unidade
de exergia o custo de aquisio do insumo.
Postulado 3: Todos os custos gerados no processo produtivo devem ser
includos no custo final dos produtos, o que se traduz na atribuio de
custo zero a todas as perdas.
Os Postulados 2 e 3 permitem escrever tantas equaes quanto forem os
fluxos supridos ao sistema de perdas. Como em geral o nmero de fluxos
superior soma do nmero de sistemas, dos fluxos de entrada e das perdas,
as equaes obtidas pela aplicao dos Postulados 1 a 3 no constituem um
sistema determinado. As equaes adicionais sero obtidas pela aplicao
dos dois postulados finais, que so:
683
Postulado 4a: Se um fluxo que sai de uma unidade for parte do insumo
desta unidade, ento o custo exergtico do fluxo constante atravs da
unidade.
Postulado 4b: Se o produto de uma unidade composto por mais de um
fluxo, ento so iguais os custos exergticos de cada um desses fluxos.
A resoluo do sistema de equaes envolve o uso de equaes complementares, de modo a distribuir custos entre os produtos. Os dois ltimos
postulados mencionados fornecem uma base para arbitrar essa distribuio. Outra forma de explicitar essa distribuio foi proposta por Reistad e
Gaggioli (1980), tomando-se o exemplo de uma turbina de contrapresso e
propondo-se quatro mtodos:
Mtodo das extraes: considera que a gerao de potncia a nica
finalidade da utilizao da turbina. Todos os custos de capital e a irreversibilidade gerada so alocados ao produto, ou seja, potncia
eltrica/mecnica produzida, de modo que os fluxos de vapor que entram e saem da turbina possuem o mesmo custo exergtico unitrio.
Mtodos das igualdades: considera-se que, alm da potncia, o vapor
de baixa presso que deixa a turbina tambm constitui um produto.
Neste caso a turbina funcionaria tal qual uma vlvula de expanso.
Assim, os custos de capital e da irreversibilidade da turbina so distribudos entre os produtos, ou seja, os custos unitrios da potncia e do
vapor de baixa possuem o mesmo valor.
Mtodo do trabalho como subproduto: nesse caso, a produo de vapor
de baixa presso considerada o produto principal do sistema e a potncia gerada vista como um aproveitamento.
Mtodo do vapor como subproduto: a potncia considerada como produto principal e o vapor como subproduto.
Verifica-se que existe uma associao entre os Postulados de Lozano e
Valero (1993) e os Mtodos de Reistad e Gaggioli (1980), pois os postulados
4a e 4b so, essencialmente, os critrios das extraes (que pode ser aplicado a outros equipamentos alm da turbina) e das igualdades. Tambm
importante notar que os mtodos de subprodutos no guardam relao com
os processos reais da planta, pois consideram a determinao de uma das
incgnitas em uma condio tima de produo.
684
Fundamentos econmicos
As tcnicas mais sofisticadas de anlise de investimento de capital, segundo Gitman (1984), consideram o fator tempo no valor do dinheiro e
envolvem conceitos de fluxos de caixa supostamente conhecidos ao longo
da vida til do projeto.
Os critrios de rentabilidade baseados em fluxos de caixa descontados
tm duas importantes caractersticas: por um lado, supem a considerao
de todos os fluxos de caixa associados ao investimento ao longo de toda sua
vida til e, por outro lado, fazem uso do princpio do desconto. A avaliao
de um projeto de investimento faz uso da taxa de desconto (j), ou taxa mnima de atratividade (TMA), a qual representa o custo de oportunidade
do capital investido ou uma taxa definida pela empresa em funo de sua
poltica de investimento (Galesne et al., 1999).
Horlock (1997) apresenta uma srie de tcnicas desenvolvidas para
avaliar projetos de cogerao, baseadas no Valor Presente Lquido (VPL),
preo da eletricidade, fluxos de caixa atualizados, preo do calor e perodos
de payback.
A utilizao do mtodo do payback, ou tempo de recuperao do capital, corresponde a uma ideia muito simples: aquela segundo a qual um investimento tanto mais interessante quanto suas entradas de caixa anuais
permitirem mais rapidamente recuperar o capital inicialmente investido
(Galesne et al., 1999). O uso desse mtodo est associado a um dos critrios
de rentabilidade baseados no fluxo de caixa descontado, descritos a seguir.
Valor presente lquido
Tcnicas baseadas nos fluxos de caixa so as mais utilizadas para descrever a interao entre as despesas com capital e os benefcios obtidos
anualmente com a implantao de um projeto. Esses benefcios so obtidos
pelo uso do combustvel de uma forma mais racional. O mtodo consiste
em atualizar at o ano zero de operao os benefcios obtidos durante a vida
til do projeto a uma taxa de desconto e, depois, esses valores so somados e
descontados do capital gasto inicialmente, o valor resultante denominado
como o Valor Presente Lquido (VPL). O mtodo VPL demonstra explicitamente o lucro real lquido que o investidor deve receber ao longo da vida
til do projeto, sendo definido por:
VPL =
ELC
(1 + j )
CTI
685
(20.47)
onde:
ELC: entrada lquida de capital anual (R$);
j: taxa de desconto adotada (%);
N: perodo de anlise (anos);
CTI: capital total investido no incio de operao do projeto (R$).
O critrio quando o VPL usado para tomar decises do tipo aceitar
ou recusar o projeto o seguinte: se o VPL for maior ou igual zero deve-se aceitar o projeto, pois a empresa obter um retorno igual ou maior
que o custo de capital investido e o projeto conservar ou aumentar o seu
patrimnio; caso contrrio, se o VPL for menor que zero, deve-se recusar
o projeto.
Horlock (1997) apresenta uma variao do clculo do VPL que possibilita visualizar graficamente o perodo em que o fluxo de caixa atualizado e
acumulativo anula o investimento inicial (CTI). Nesse ponto de interseco, os benefcios obtidos com o projeto implantado retomam o investimento inicial a uma taxa de desconto (j). Esse mtodo denominado Discount
Cash Flow e a interseco no ponto zero possibilita determinar o Tempo de
Retorno do Investimento (TRI).
O Grfico 20.3 mostra o TRI e o VPL graficamente.
Grfico 20.3 Fluxo de caixa acumulativo tpico de um projeto
686
Taxa interna de retorno
Segundo Gitman (1984), provavelmente a tcnica de anlise mais utilizada para se avaliar alternativas de investimento a Taxa Interna de Retorno (TIR). A taxa interna de retorno de um investimento a taxa j* que
retorna o valor presente das entradas lquidas de caixa associadas ao projeto igual ao investimento inicial ou, equivalentemente, a taxa j* que torna o
VPL do projeto igual a zero. Trata-se de um critrio mais objetivo, no qual
a deciso para avaliar o projeto baseia-se no custo de capital. Se a TIR for
maior ou igual ao custo do capital ou taxa de desconto adotada, deve-se
aceitar o projeto, caso contrrio, deve-se rejeitar o projeto.
A TIR determinada iterativamente, segundo a expresso:
N
ELC
1 + j*
CTI = 0
(20.48)
onde:
j*: taxa de interna de retorno de um investimento (%).
Comparao entre as tcnicas VPL e TIR
As diferenas bsicas entre as tcnicas de anlise adotadas, VPL e TIR,

resultam em classificaes conflitantes. Com base puramente terica, o uso
do VPL melhor. Sua superioridade terica atribuda a inmeros fatores.
O mais importante a suposio implcita no uso do VPL de que todas as
entradas de caixa intermedirias geradas pelo investimento so reinvestidas
ao custo de capital da empresa, enquanto no uso da TIR supe-se o reinvestimento da taxa especificada pela TIR, frequentemente irrealista.
Um segundo problema terico o de se encontrar comumente mais de
uma TIR para padres no convencionais de fluxos de caixa. O problema
de mltiplas TIR resulta de propriedades matemticas especficas dos clculos envolvidos. Em razo da natureza tcnica desse problema, suficiente dizer que um fluxo de caixa pode ter mais de uma TIR e que, nesse caso,
torna-se difcil sua interpretao.
Uma terceira crtica resulta do fato de que determinados fluxos podem
ter propriedades matemticas tais que nem exista uma TIR. De novo, esse
problema tcnico pode provocar dificuldades que no ocorrero com a
abordagem do VPL.
687
J que a abordagem do VPL no tem as deficincias descritas antes, do

ponto de vista terico ela prefervel. Apesar desse fato, os administradores
financeiros das grandes empresas preferem usar a TIR, o que atribuvel a
sua preferncia por taxas de retorno ao invs de retorno em dinheiro.
Por se mencionarem frequentemente juros e medidas de lucratividade,
como taxas, o uso da TIR faz mais sentido para os responsveis pelas decises nas empresas. Eles tendem a achar o VPL mais difcil de usar, porque o
mesmo no mede benefcios relativos ao montante investido. Ao contrrio,
a TIR d muito mais informaes sobre os retornos relativos ao investimento inicial.
Em suma, constata-se que, embora o VPL seja teoricamente prefervel,
a TIR mais popular pelo fato de se poder relacion-la diretamente aos
dados disponveis de deciso. No presente estudo sero consideradas as
duas tcnicas de anlise econmica para anlise do desempenho financeiro
das plantas.
Ferramentas computacionais
Existem vrias ferramentas computacionais para a resoluo dos sistemas de equaes resultantes da formulao dos problemas de plantas de cogerao, e no caso especfico ser efetuada pelo programa EES (Engineering Equation Solver), desenvolvido por Klein e Alvarado (1995), e/ou pelo
programa IPSEpro, desenvolvido pela Simtech Ipsepro (2003). Maiores
informaes sobre esses programas podem ser obtidas, respectivamente,
em <http://www.fchart.com/ees> e em <http://www.simtechnology.
com>.
Estudos desenvolvidos no Nuplen na rea de cogerao

no setor sucroalcooleiro
A seguir sero apresentados trs exemplos de pesquisas aplicadas, desenvolvidas no setor sucroalcooleiro, no mbito do Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen) do Departamento
de Engenharia Mecnica da Unesp de Ilha Solteira, os quais serviram ou
serviro de base para implantao de novos projetos ou melhoria da efi-
688
cincia dos projetos existentes. Maiores informaes sobre essas pesquisas

podem ser obtidas, respectivamente, nas seguintes referncias: Fiomari
(2004), Romo Jnior (2009) e Passolongo (2011).
Anlise do efeito do aumento dos nveis de presso e

temperatura e da eletrificao das moendas na produo
energia numa usina sucroalcooleira
Introduo e objetivos
Com o advento da cogerao e a possibilidade de exportao de energia eltrica, alm da competitividade do mercado, as usinas passaram a se
preocupar com o consumo de vapor de processo, na substituio de acionamentos mecnicos de baixa eficincia (turbinas a vapor de simples estgio)
por motores eltricos, na readaptao das turbinas de simples estgio para
mltiplos estgios e na gerao de energia eltrica por meio de mquinas
trmicas mais eficientes, ou seja, de mltiplos estgios, podendo ou no ser
de extrao-condensao.
Com o grande desenvolvimento tecnolgico tem sido crescente o aumento dos nveis de presso e temperatura nos equipamentos (caldeiras e
turbinas a vapor), passando dos modestos valores de 21 bar e 300C usados na dcada de 1970 para at 118 bar e 530C nos novos projetos em
desenvolvimento.
A Figura 20.5 mostra os ganhos energticos associados ao aumento dos
nveis de presso e temperatura, segundo a fabricante de turbinas TGM.
Figura 20.5 Evoluo e ganhos devido presso e temperatura

Fonte: TGM.
689
No Grfico 20.4 mostrado o consumo especfico de vapor em razo

dos nveis de presso e temperatura, de acordo com a fabricante de turbinas TGM. Verifica-se que existe uma reduo considervel com o aumento
desses parmetros, com consequente aumento da produo de eletricidade.
Grfico 20.4 Consumo especfico em funo da presso e temperatura

Fonte: TGM
Diante desse contexto, nesta seo mostrada uma anlise evolutiva dos
sistemas de cogerao de energia de uma usina da regio noroeste paulista
visando o aumento da produo de energia para comercializao, sendo verificados os efeitos do aumento dos nveis de presso e temperatura e da
eletrificao dos acionamentos mecnicos.
Reviso bibliogrfica
A seguir sero destacados alguns trabalhos relacionados cogerao no

setor sucroalcooleiro com destaque para as alternativas/tecnologias que visam produo de excedentes de energia eltrica para comercializao.
Walter (1994) tratou da cogerao e da produo independente de eletricidade, como formas de gerao descentralizada de energia eltrica e, em
especial, da viabilidade e das perspectivas dessas tecnologias junto ao setor
sucroalcooleiro no Brasil, levando-se em conta a expanso da agroindstria
canavieira. Foram analisadas vrias alternativas de gerao eltrica em larga
escala e determinadas as principais caractersticas tcnicas de cada sistema,
tais como: a capacidade de gerao, a produo de energia eltrica, a disponibilidade de excedentes e a demanda de biomassa. Esses resultados permi-
690
tiram identificar o potencial das tecnologias de maior viabilidade tcnica e

econmica, a partir da considerao de cenrios alternativos de crescimento
da produo de cana no estado de So Paulo e da identificao das usinas
mais adequadas para isso.
Barreda del Campo et al. (1998) estudaram o sistema de cogerao de
uma usina sucroalcooleira que fornece excedentes de energia para a rede
eltrica. Eles realizaram uma comparao das eficincias de primeira e segunda leis, mostrando a utilidade desta ltima na avaliao de um sistema
real, e como elemento importante para deciso de melhorias das plantas trmicas, ao evidenciar os equipamentos de maiores irreversibilidades e, consequentemente, a perda de oportunidades de gerao de energia eltrica.
Higa e Bannwart (2002) realizaram algumas simulaes e anlises trmicas de uma planta produtora de acar e lcool visando otimizar a produo
de excedente de energia eltrica e encontrar a melhor forma de recuperao
de calor e integrao trmica do processo. Foram consideradas diferentes
tecnologias de cogerao e de arranjos de evaporadores de mltiplos efeitos.
Os resultados obtidos demonstraram que diferentes configuraes requeriam tambm diferentes medidas e estabeleceram algumas prioridades, que
podem ser adotadas em diversos nveis de investimentos econmicos. Alm
das diferenas na integrao da usina no sistema de cogerao para a economia de bagao, ou para o aumento da gerao de energia eltrica excedente,
foi possvel concluir que as medidas para alcanar esses objetivos devem ser
priorizadas de acordo com o consumo de vapor de processo e a integrao
de evaporadores de mltiplos efeitos.
Lobo et al. (2002) analisaram os processos de extrao de duas usinas
sucroalcooleiras que usam turbinas de contrapresso para fornecer trabalho, sendo o vapor de contrapresso utilizado como energia trmica de processo. Uma das usinas emprega grandes turbo geradores de mltiplos estgios, que operam com entrada de vapor a 3,0 MPa e 330C, para cogerar
energia eltrica para motores eltricos que acionam as moendas, picadores e
desfibradores. J na outra usina, o acionamento das mquinas feito diretamente por pequenas turbinas de simples estgio operando com vapor a 2,0
MPa e 290 C. Foi verificado que a usina que usa energia eltrica cogerada,
com turbinas maiores para acionar as mquinas, chega a economizar 65%
de bagao gasto para moer uma tonelada de cana quando comparada com
691
a usina que usa vrias turbinas menores e menos eficientes. Concluiu-se

que, com o uso mais racional do bagao gerando vapor em temperaturas e
presses maiores, obtm-se uma grande economia de bagao, que pode ser
comercializado ou usado para gerao de excedente de eletricidade.
Jaguaribe et al. (2002) realizaram um estudo termodinmico e avaliaram
as condies tcnicas das instalaes a serem implantadas em um sistema
de cogerao de energia de uma destilaria. A ampliao proposta no teve o
objetivo apenas de tornar a destilaria autossuficiente em termos de energia,
mas tambm tornar possvel exportar 33.616 MWh durante a safra e 3.600
MWh na entressafra. Foram considerados todos os custos envolvidos e os
resultados mostraram que de imediato o negcio pode no ser atrativo, mas
se houver uma elevao do preo de venda da eletricidade, o novo sistema
de cogerao com venda de energia seria mais rentvel.
Lobo et al. (2007) fizeram uma anlise econmica de modificaes
propostas no processo de moagem de uma usina sucroalcooleira de mdio porte antiga, levando-se em conta o consumo de energia envolvido no
processamento da cana, bem como a eficincia de extrao de acar. Essas
modificaes incluram o uso de acionamento eltrico direto e maior embebio em gua durante o esmagamento para aumentar a extrao do caldo.
Embora mais energia seja gasta nessas condies, e tanto a umidade do bagao como a diluio do caldo sejam maiores, usando turbinas modernas
para acionamento dos geradores, nota-se que o consumo do vapor aumenta
muito pouco e ocorre uma reduo no consumo de bagao. Foram obtidos
os custos do bagao e da eletricidade consumida para o acionamento extra,
bem como o aumento da renda com maior produo de acar.
Kamate e Gangavati (2009) apresentaram uma anlise exergtica de
uma planta de cogerao tpica de uma usina que processa 2.500 toneladas
de cana por dia, utilizando turbinas de contrapresso e de extrao-condensao. A configurao com turbinas de extrao-condensao se mostrou
mais eficiente do ponto de vista da exergia. As anlises mostraram que a
caldeira o componente que mais contribuiu para a ineficincia da planta,
pela sua natureza intrnseca. Verificou-se que uma caldeira moderna com
a tecnologia atual poderia utilizar apenas 37% da exergia qumica do combustvel na gerao de vapor, de forma que 63% dessa exergia perdida na
combusto irreversvel.
692
Definio dos casos estudados
No presente estudo, sero realizadas anlises energtica e exergtica de

trs configuraes de plantas de vapor baseadas na expanso do sistema
de cogerao de uma usina da regio noroeste paulista no perodo de 2003
a 2007.
A configurao inicialmente considerada (Caso 1) constituda por
duas caldeiras que geram vapor em baixos nveis de presso e temperatura
(2.156 kPa e 290C), com turbinas de simples estgio para gerao de eletricidade (1,2 MW cada) e com picador, desfibrador e moendas com acionamento mecnico.
A configurao intermediria (Caso 2) consiste na substituio das caldeiras de baixa presso por uma nica caldeira que produz vapor em nveis
maiores de presso e temperatura (6.468 kPa e 530C) e das turbinas geradoras de eletricidade de simples estgio por uma nica turbina de extrao-condensao de mltiplos estgios (32 MW), mantendo-se as outras
turbinas de acionamento mecnico, e as turbinas da bomba de alimentao
de gua da caldeira, do Gerador T e do exaustor no operam, porm esto
instaladas e podem eventualmente entrar em operao.
Por fim, o Caso 3 trata de uma configurao da planta com eletrificao
total no acionamento de seus equipamentos na qual o turbo gerador A, mais
eficiente, tem preferncia no vapor produzido, enquanto o turbo gerador T
funciona somente se for necessrio produzir mais vapor de baixa presso
para o processo, evitando-se o uso de uma vlvula redutora de presso.
Na Tabela 20.3 so apresentadas as caractersticas de operao de cada
um dos casos considerados.
Dentre os dados apresentados na Tabela 20.3, mediante a comparao
entre os Casos 1 e 2, pode ser verificado o efeito do aumento dos nveis de
presso e temperatura, e mediante a comparao dos Casos 2 e 3, pode ser
verificado o efeito da eletrificao dos acionamentos sobre a produo de
eletricidade.
As Figuras 20.6 a 20.8 mostram, respectivamente, as plantas para os
Casos 1 a 3, sendo a vazo mssica (m ), a temperatura (T), a presso (P), a
entalpia (h) e a entropia (s) especficas nos pontos indicados, so apresentadas nas Tabelas 20.4 a 20.6, respectivamente.
693
Tabela 20.3 Dados de operao da usina que passou por retrofit

Parmetros
Cana moda total (t)
Caso 1
Caso 2
Caso 3
1.100.000
1.300.000
1.400.000
Dias de safra
215
215
225
Eficincia agrcola (%)
97,0
97,0
97,0
Eficincia industrial
92,4
94,0
94,0
Horas efetivas de moagem
4.609
4.695
4.914
Moagem horria (t/h)
237,0
276,9
284,9
Relao bagao-vapor (kg/kg)
0,52
0,47
0,47
Presso do vapor gerado (kPa)
6.468
2.156
6.468
Temperatura do vapor gerado (C)
300
530
530
Teor de fibra da cana (%)
12,6
13,5
13,5
Teor de fibra do bagao (%)
46,2
47,4
47,4
Fluxo de bagao na caldeira AZ (t/h)
26,0
Fluxo de bagao na caldeira SZ (t/h)
37,4
Fluxo de bagao na caldeira MC (t/h)
70,5
70,5
1,3
8,4
10,6
Bagao total residual da safra (t)
5.856
39.213
52.297
Capacidade nominal dos geradores 1, 2 e 3 (kW)
1.200
Capacidade nominal do gerador A (kW)
32.000
32.000
Capacidade nominal do gerador T (kW)
5.000
5.000
Fluxo de bagao residual (t/h)
Figura 20.6 Representao esquemtica da planta com produo de vapor com baixos nveis de presso e temperatura e com acionamentos mecnicos Caso 1
694
Figura 20.7 Representao esquemtica da planta com produo de vapor com altos nveis
de presso e temperatura e com acionamentos mecnicos Caso 2
Figura 20.8 Representao esquemtica da planta com produo de vapor com altos nveis
de presso e temperatura e com acionamentos eltricos Caso 3
695
Tabela 20.4 Parmetros de operao da planta do Caso 1

Pontos
(t/h)
P (kPa)
T (C)
h (kJ/kg)
s (kJ/kg.K)
122,0
245
105,0
440,3
1,363
72,0
245
105,0
440,3
1,363
50,0
245
105,0
440,3
1,363
50,0
3.332
105,3
444,9
1,367
72,0
3.332
105,3
444,9
1,367
72,0
2.156
290,0
2.994,4
6,683
50,0
2.156
290,0
2.994,4
6,683
10,9
2.156
290,0
2.994,4
6,683
61,1
2.156
290,0
2.994,4
6,683
10
20,4
2.156
290,0
2.994,4
6,683
11
20,4
245
170,0
2.806,6
7,275
12
20,4
2.156
290,0
2.994,4
6,683
13
20,4
245
170,0
2.806,6
7,275
14
20,4
2.156
290,0
2.994,4
6,683
15
20,4
245
170,0
2.806,6
7,275
16
61,1
245
170,0
2.806,6
7,275
17
12,2
2.156
280,0
2.970,3
6,639
18
12,2
245
155,0
2.775,6
7,204
19
12,2
2.156
280,0
2.970,3
6,639
20
12,2
245
155,0
2.775,6
7,204
21
12,5
2.156
280,0
2.970,3
6,639
22
12,5
245
164,0
2.794,2
7,247
23
12,0
2.156
280,0
2.970,3
6,639
24
12,0
245
164,0
2.794,2
7,247
25
12,0
2.156
280,0
2.970,3
6,639
26
12,0
245
164,0
2.794,2
7,247
27
60,9
245
160,4
2.786,8
7,230
28
6,0
245
170,0
2.806,6
7,275
29
55,1
245
170,0
2.806,6
7,275
30
116,0
245
164,9
2.796,2
7,251
31
2,8
245
25,0
105,0
0,367
32
118,8
245
135,0
2.733,5
7,103
33
40,0
245
135,0
2.733,5
7,103
34
78,8
245
135,0
2.733,5
7,103
35
78,8
245
100,0
419,2
1,307
36
78,8
490
100,1
419,6
1,307
37
37,2
245
25,0
105,0
0,367
696

Pontos
(t/h)
P (kPa)
T (C)
h (kJ/kg)
s (kJ/kg.K)
150,0
6.468
530,0
3.488,5
6,931
29,3
6.468
530,0
3.488,5
6,931
29,3
2.156
510,2
3.488,5
7,424
120,7
6.468
530,0
3.488,5
6,931
36,0
2.650
426,0
3.295,1
7,070
64,0
245
147,2
2.759,3
7,165
20,7
8,5
42,7
2.578,2
8,205
20,7
8,5
42,6
178,4
0,607
36,0
2.156
422,7
3.295,1
7,163
10
65,3
2.156
462,0
3.381,9
7,284
11
73,2
2.156
320,0
3.064,8
6,804
12
0,0
13
0,0
14
14,7
2.156
310,0
3.041,6
6,765
15
14,7
245
185,0
2.837,3
7,343
16
14,7
2.156
310,0
3.041,6
6,765
17
14,7
245
185,0
2.837,3
7,343
18
15,0
2.156
310,0
3.041,6
6,765
19
15,0
245
194,5
2.856,6
7,385
20
14,4
2.156
310,0
3.041,6
6,765
21
14,4
245
194,5
2.856,6
7,385
22
14,4
2.156
310,0
3.041,6
6,765
23
14,4
245
194,5
2.856,6
7,385
24
0,0
25
0,0
26
0,0
27
0,0
28
3,0
245
190,7
2.848,8
7,368
29
70,2
245
190,7
2.848,8
7,368
30
134,2
245
169,8
2.806,1
7,274
31
138,0
245
135,0
2.733,5
7,103
32
20,7
490
42,7
179,3
0,608
33
3,8
490
42,7
179,3
0,608
34
16,9
490
42,7
179,3
0,608
35
138,0
245
100,0
419,2
1,307
36
138,0
490
100,1
419,6
1,307
37
154,9
490
93,8
393,4
1,237
38
157,9
245
105,0
440,3
1,363
Continua
697

Pontos
(t/h)
P (kPa)
T (C)
h (kJ/kg)
s (kJ/kg.K)
39
157,9
8.820
106,8
454,1
1,376
40
150,0
8.820
106,8
454,1
1,376
41
7,9
8.820
106,8
454,1
1,376
42
7,9
2.156
107,8
454,1
1,394
43
3,8
245
42,8
179,3
0,609

Pontos
P (kPa)
T (C)
h (kJ/kg)
s (kJ/kg.K)
150,0
(t/h)
6.468
530,0
3.488,5
6,931
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
10,0
6.468
530,0
3.488,5
6,931
10,0
2.156
510,2
3.488,5
7,424
140,0
6.468
530,0
3.488,5
6,931
0,0
120,0
245
134,5
2.732,5
7,101
20,0
7,2
39,6
2.572,6
8,264
20,0
7,2
39,5
165,4
0,566
0,0
10,0
2.156
510,2
3.488,5
7,424
11,5
2.156
330,0
3.087,8
6,843
11,5
245
164,5
2.795,3
7,249
3,5
245
134,5
2.732,5
7,101
128,0
245
137,2
2.738,1
7,114
128,2
245
135,0
2.733,5
7,103
20,0
490
39,6
166,3
0,567
0,2
490
39,6
166,3
0,567
19,8
490
39,6
166,3
0,567
128,2
245
100,0
419,2
1,307
128,2
490
100,1
419,6
1,307
148,0
490
92,0
385,8
1,216
151,5
245
105,0
440,3
1,363
151,5
8.820
106,8
454,1
1,376
150,0
8.820
106,8
454,1
1,376
1,5
8.820
106,8
454,1
1,376
1,5
2.156
107,9
454,1
1,394
116,5
245
134,5
2.732,5
7,101
0,2
245
39,7
166,3
0,568
698
Resultados
A Tabela 20.7 mostra as eficincias, bem como a potncia gerada, a taxa

de irreversibilidade e o consumo especfico de vapor nas turbinas. Nas Tabelas 20.8 e 20.9 so apresentados, respectivamente, o calor transferido nos
processos, e a potncia consumida e a irreversibilidade nas bombas. Na Tabela 20.10 so mostradas as eficincias das primeira e segunda leis para as
caldeiras. Por fim, na Tabela 20.11 so mostrados alguns ndices de desempenho da planta trmica e de potncia da usina considerada.
Tabela 20.7 Eficincias, potncia, taxa de irreversibilidade e consumo especfico nas turbinas
Caso 1
Equipamento
i (kW)
Rvap,pot (kg/kWh)
660
570
18,5
611
629
20,4
49,3
587
603
20,4
49,3
587
603
20,4
II (%)
II (%)
Picador/Desfibrador
46,1
53,7
Moendas (1o/2o T)
41,7
49,3
Moendas (3 /4 T)
41,7
Moendas (5o/6o T)
41,7
Turbogerador 1, 2, 3
(kW)
43,7
51,6
1.063
999
19,2
Turbogerador T
Turbogerador A
i (kW)
Rvap,pot (kg/kWh)
Caso 2
Equipamento
II (%)
II (%)
Picador/Desfibrador
46,1
54,3
834
704
17,6
Moendas (1o/2o T)
41,7
50,0
771
770
19,5
Moendas (3 /4 T)
41,7
50,0
740
739
19,5
Moendas (5o/6o T)
41,7
50,0
740
739
19,5
(kW)
Turbogerador T
63,8
70,5
388
12,5
Turbogerador A
80,3
84,0
20.132
3.836
6,0
Caso 3
II (%)
II (%)
i (kW)
Rvap,pot (kg/kWh)
Picador/Desfibrador
46,1
54,3
17,6
Equipamento
(kW)
Moendas (1 /2 T)
41,7
50,0
19,5
Moendas (3o/4o T)
41,7
50,0
19,5
Moendas (5 /6 T)
41,7
50,0
19,5
Turbogerador T
63,8
70,5
936
388
12,5
Turbogerador A
86,9
88,6
30.290
3.887
4,6
699
Tabela 20.8 Transferncia de calor nos processos

Processo
Caso 1
Caso 2
Caso 3
Q(kW)
Q(kW)
Q(kW)
Evaporao do caldo
50.660
88.718
82.428
Destilaria
25.715
13.799
13.374
Condensao
Tabela 20.9 Potncia consumida e irreversibilidade nas bombas

Caso 1
Bombas
i (kW)
(kW)
Bombas 1 e/ou 2
156,4
4,6
9,3
3,7
Bomba 3
Bomba 4
Caso 2
Bombas
i (kW)
(kW)
Bombas 1 e/ou 2
605,0
211,7
Bomba 3
17,8
8,0
Bomba 4
5,1
2,3
Caso 3
Bombas
i (kW)
(kW)
Bombas 1 e/ou 2
580,4
203,2
Bomba 3
16,6
7,4
Bomba 4
4,9
2,2
Tabela 20.10 Eficincias termodinmicas das caldeiras

Caldeiras
AZ e SZ
Caso 1
Casos 2 e 3
I (%)
II (%)
I (%)
63,4
18,2
83,5
28,8
MC
II (%)
Tabela 20.11 ndices de desempenho da planta trmica e de potncia da usina considerada

ndices de Desempenho
Caso 1 Caso 2 Caso 3
RPC Razo Potncia-Calor
0,082
0,271
0,379
Rvapor,cana Vapor Produzido / Cana Moda (kg/t)
501,2
498,6
450,1
Rpot,cana Potncia Eltrica Produzida / Cana Moda (kWh/t)
13,5
72,7
109,6
Rvap,ele Vapor Consumido / Potncia Eltrica Produzida (kg/kWh)
19,4
8,1
4,9
Rbag,pot Bagao Consumido / Potncia Total (kg/kWh)
10,1
2,9
2,3
global Eficincia Global da Planta (%)
60,5
64,5
65,8
Eletricidade Produzida (kW)
3.189
ger,ele
20.132 31.226
700
Concluses
Pelos resultados obtidos, foi verificado que as eficincias das caldeiras

calculadas pela primeira lei so maiores que as obtidas pela segunda lei,
independentemente da configurao. Isso ocorre em razo da sua prpria
definio que expressa a relao entre a energia til absorvida pelo vapor e
a energia do combustvel. Diferentemente, a segunda lei estabelece uma relao entre a mxima potncia que poderia ser extrada do vapor que deixa
a caldeira e a exergia disponvel do combustvel, evidenciando as irreversibilidades presentes na combusto do bagao e no processo de vaporizao
da gua. De modo inverso, as turbinas apresentam eficincias de segunda
lei superiores as de primeira lei, isso porque na primeira lei considerado
como referncia um processo ideal reversvel, enquanto na segunda lei a
eficincia calculada usando o fluxo real de exergia.
Com relao aos critrios de desempenho, foi verificado que todos os
ndices obtidos para a configurao final so favorveis. A Razo Potncia-Calor (RPC) aumenta significativamente por causa do aumento significativo da eficincia do gerador de energia eltrica e da exergia do vapor.
Com relao aos outros critrios tradicionalmente usados nas indstrias
de cana-de-acar, que levam em conta o consumo da cana-de-acar e bagao e as quantidades de vapor e potncia produzidos, foi verificado que
a configurao final a que tem desempenho melhor, porque apresenta o
consumo especfico menor de vapor e de bagao de cana-de-acar, alm
de ter uma gerao de potncia maior por tonelada de cana. Valores menores para as relaes Rvapor,cana, Rvap,pot e Rbag,pot indicam que a planta mais
eficiente; no entanto, se a planta for para cogerao de energia para exportao, interessante que Rpot,cana seja o mais alto possvel. Pode-se verificar
que as relaes Rpot,cana e Rbag,pot dependem das eficincias da caldeira e das
turbinas que operam na planta, enquanto a relao Rvap,pot s associada s
eficincias das turbinas. Por sua vez, a energia trmica til de processo
diretamente proporcional relao entre Rvapor,cana e a quantidade da canade-acar usada. Essa relao que define o ponto de operao da planta,
porque as indstrias de cana-de-acar trabalham em paridade trmica.
importante salientar que a turbina de extrao-condensao tem seu
ponto de operao definido em razo do consumo de vapor de processo
considerado, de forma que para gerar mais potncia necessria a reduo
do consumo de vapor nos processos, reduzindo as extraes na turbina com
701
aumento consequente do volume condensado. A reduo do consumo de

vapor pode ser feita mediante modificaes na planta da usina, tais como:
arranjo do sistema de evaporao que comea a usar quatro efeitos alm do
pr-evaporador; uso de vapor vegetal nos outros aquecimentos do caldo;
uso da energia trmica contida nos subprodutos de cana para troca de calor
com o caldo; entre outras.
Diante do que foi exposto, e sabendo-se que a maior parte das usinas sucroalcooleiras brasileiras est enfrentando a necessidade de troca de equipamentos por estar no final de sua vida til, essa seria uma excelente oportunidade para a introduo de equipamentos mais eficientes, que permitiriam
no s o aumento da capacidade de moagem, mas tambm a gerao de
excedentes de eletricidade para comercializao.
Por sua vez, existe a possibilidade de que ocorra um incremento ainda
maior na gerao de energia no setor sucroalcooleiro se for feito o aproveitamento da palha que brevemente estar disponvel no campo em maior
quantidade em razo da tendncia de mecanizao da colheita e extino da
queimada, sendo esse assunto objeto de estudo na prxima seo.
Anlise do efeito do aproveitamento da palha para queima

em caldeira convencional numa usina sucroalcooleira
A queima da palha tem sido uma prtica comum nas usinas para facilitar
a colheita. Entretanto, a Unica, representando a indstria paulista produtora de acar, etanol e bioeletricidade, e o governo do estado de So Paulo,
assinaram, no dia 4 de junho de 2007, o Protocolo Agroambiental do Setor
Sucroalcooleiro Paulista. Esse protocolo, de adeso voluntria, estabeleceu
uma srie de princpios e diretivas tcnicas, de natureza ambiental, a serem
observadas pelas usinas.
Por meio desse Protocolo Agroambiental, a maioria das usinas do setor
sucroalcooleiro paulista se comprometeu a antecipar o cronograma de diminuio gradual das queimadas nas lavouras de cana no estado, anteriormente fixados pela Lei Estadual n.11.241/02. At 2014, as usinas devero
eliminar 100% da queimada nas reas mecanizveis e, at 2017, o fogo dever ser eliminado at mesmo nas reas no mecanizveis. O Grfico 20.5
702
mostra o cronograma de diminuio das queimadas no estado de So Paulo,

de acordo com o estabelecido pelo protocolo.
Com isso, os investimentos para colheita mecanizada e recuperao da
palha para gerao de energia tendem a se multiplicar nos prximos anos.
Diante desse contexto, nesta seo analisada a possibilidade da utilizao da palha como combustvel suplementar para caldeiras convencionais de alta presso (para bagao), possibilitando, assim, um aumento de
gerao de energia excedente com a possibilidade de ser exportada para
comercializao. So realizados estudos de perdas, ganhos e investimentos
com a introduo da palha na indstria, mediante anlises termodinmicas de gerao de energia; produo de lcool e acar; alm das eficincias
de equipamentos, como colhedoras de cana, sistema de lavagem de cana a
seco, picador de palha, caldeira de alta presso, dentre outros.
Grfico 20.5 Prazos para a eliminao da queima da palha no estado de So Paulo

Fonte: Unica (2008)
Tcnicas de limpeza da cana e recuperao da palha
A Figura 20.9 demonstra uma forma de colheita da cana-de-acar,

onde se verifica que a maior parte da palha eliminada no prprio campo. Obviamente que, mesmo com a colheita mecanizada, boa parte dela
no ser recuperada para produo de energia, devendo ainda continuar no
campo para cobertura do solo e adubao.
703
Figura 20.9 Colheita mecanizada da cana-de-acar

Fonte: <http://www.rankbrasil.com.br>
Duas mudanas importantes podem ser apontadas nos processos atuais

de recuperao da palha, as quais contribuiriam para acelerar seu aproveitamento energtico, a saber: o aumento sua densidade no ato da colheita; a
eliminao do manuseio intenso com seus correspondentes custos e a contaminao com terra.
A Figura 20.10 mostra dois sistemas de enfardamento para o transporte
da palha deixada no campo.
Figura 20.10 Sistema de enfardamento da palha para transporte

Fonte: <http://www.unica.com.br>
A cana picada possui mais reas de atrao de impurezas, de modo que,

se a usina for lavar a cana picada, a perda de acar ser da ordem de 5%,
tornando proibitiva essa medida. Para evitar grandes perdas de sacarose no
processo industrial, necessrio separar essas impurezas e, atualmente, o
704
melhor sistema para realizar essa funo por meio do Sistema de Limpeza
de Cana a Seco (SLCS).
O sistema de limpeza de cana a seco faz que um fluxo de ar, gerado por
ventiladores instalados atrs ou sob a mesa de alimentao, atravesse a cascata de cana que vem da mesa alimentadora para a esteira de cana, eliminando as impurezas e separando a palha. Trata-se de uma soluo j adotada por
algumas usinas com bons resultados. Parte dessas unidades separa e manda
para a lavoura a palha e a terra recolhida, j outras separam a palha da terra e
a passam pela moenda. No entanto, o ideal a utilizao da palha como combustvel suplementar para as caldeiras de bagao, possibilitando um aumento de gerao de energia excedente que pode ser exportada; porm, as palhas
retiradas apresentam um inconveniente que o fato de serem de tamanho
grande e com fibras longas, por isso no so prprias para a queima direta
nas caldeiras convencionais a bagao. Faz-se necessria a utilizao de um
picador de palha para transform-la em pequenos pedaos para que possa fazer a mistura com o bagao e, depois, a queima nas caldeiras convencionais.
As Figuras 20.11 e 20.12 mostram, respectivamente, um esquema de
um SLCS desenvolvido pelo CTC e uma foto de uma instalao na Usina
Equipav.
Figura 20.11 Sistema de lavagem a seco de cana do CTC

Fonte: Centro de Tecnologia Canavieira (CTC)
705
Figura 20.12 Sistema de lavagem a seco em uma usina sucroalcooleira

Fonte: Usina Equipav
Reviso da bibliogrfica
A seguir sero destacados alguns trabalhos relacionados ao recolhimento e aproveitamento da palha para queima em caldeira, bem como aos sistemas de limpeza de cana a seco.
Zulauf et al. (1985), para clculo da energia liberada pela queima, consideraram valores entre 4% e 11,5% de palha e entre 6% e 16,2% de ponteiros.
Os autores citam ainda valores encontrados em Cuba que, em 144 t de massa total (in natura), 28 t corresponderiam a ponteiros e 16 t seriam folhas
verdes e folhas secas, o que equivaleria a 19,4 e 11,1%, respectivamente.
Para determinao da energia gerada pela queima, foi determinado em laboratrio o poder calorfico da palha que, corrigido pelo teor mdio de umidade nas condies dos experimentos, chegou-se a um valor de 2.576 kcal/
kg palha (poder calorfico inferior).
Ripoli et al. (1991) afirmaram que, com o aumento da colheita mecnica,
as usinas que desejarem agregar valor por meio do aproveitamento da palha
706
tendero a apresentar custos operacionais menores do que os atuais, pois as

futuras colhedoras de cana picada, por exigncia de mercado, podero apresentar valores de aquisio por volta de 20% a 30% menores do que os atuais
(por volta de US$ 300 mil), visto que no mais apresentaro exaustores,
ventiladores, alm de menor nmero de motores hidrulicos, mangueiras e
outros componentes e, com certeza, motores de combusto interna de menores potncias. Com isso, afirmam que mquinas com tais caractersticas
permitiro manutenes peridicas mais rpidas e mais baratas, levando-se
a simplificao das estruturas de apoio do sistema de colheita.
Hassuani (1998) obteve um custo de US$ 19,80 para recolhimento e
transporte a 10 km para 1 t de palha seca enfardada. Considerando a produo de 11,2 t de resduo seco por hectare e uma eficincia de recolhimento
de palha de 50%, tem-se um custo aproximado de US$ 110/ha para recolhimento e transporte da palha at a usina. Uma vez que essa palha possui
um equivalente energtico a 1.943 kg de leo combustvel a um custo aproximado de US$ 125,00/t, pode-se evitar o gasto equivalente a US$ 132,00
para cada hectare de resduo recolhido. Esse raciocnio desconsidera custos
de decomposio dos fardos.
Carpio et al. (1999) apresentaram critrios de avaliao termodinmica
para sistemas de cogerao em usinas de acar, analisando dois sistemas de
cogerao, um com turbina de contrapresso operando a 2,1 MPa e 300C
e outro com turbina de extrao-condensao operando a 8,0 MPa e 450C.
Foi analisada tambm a possibilidade do uso de combustveis auxiliares (palha de cana, eucalipto e gs natural) para o perodo da entressafra, sendo determinado o custo de gerao de eletricidade para cada caso. Foi concludo
que o sistema com turbina de condensao e com duas extraes apresenta
eficincia de 66,0% contra 42,0% do sistema de contrapresso, alm de ter
uma taxa de economia da energia do combustvel quase sete vezes menor.
Como alternativa de gerao fora da safra, o gs natural foi o combustvel
que apresentou o menor custo seguido pela palha, se considerado custos de
colheita e transporte inferiores a R$ 25,00/ton.
Snchez Prieto et al. (2001) argumentam que a cogerao tem uma grande aceitao no setor sucroalcooleiro, fundamentalmente em razo da sua
adequao, pois o combustvel empregado um rejeito do processo de fabricao e os produtos do sistema, potncia mecnica ou eltrica e vapor so
utilizados no prprio processo.
707
Bohrquez et al. (2006) avaliaram a utilizao integral do bagao de

cana-de-acar resultante do processo produtivo de uma usina de acar
que pretende incrementar sua capacidade de gerao de energia eltrica de
7 para 35 MW, mediante o redesenho do ciclo e a incorporao de novos
turbogeradores. Com o uso de ferramentas termoeconmicas, foram estabelecidas a matriz de incidncia da planta de cogerao, a determinao dos
custos exergoeconmicos e a realizao das simulaes da variao do preo
de combustvel e a eficincia da caldeira. Alm disso, foi efetuado um breve
estudo econmico da produo de energia eltrica e da venda dos excedentes de 27 MWh mdios, e concludo que o custo da eletricidade gerada era
de US$ 0,051/kWh.
Oliveira e Halmeman (2006) estudaram quais so as principais implicaes do novo modelo do setor eltrico como alternativa para impulsionar a
gerao de energia, utilizando o bagao da cana-de-acar no processo de
cogerao. Os dados sobre as autorizaes e registros das usinas termoeltricas foram obtidos junto Agncia Nacional de Energia Eltrica, bem
como as informaes sobre processo de compra e venda da gerao distribuda a partir da utilizao do bagao da cana junto s usinas que receberam
autorizao ou registro entre 2004 a 2005.
Metodologia
Foi analisado um caso com dados reais para a possibilidade de utilizao

da palha como combustvel suplementar na caldeira de alta presso de uma
usina sucroalcooleira do oeste paulista, e os dados necessrios para os clculos foram fornecidos da safra 2008/2009. Nessa safra, a moagem da referida
usina foi de 1.817.674 toneladas de cana, e sua produo de lcool anidro e
hidratado foram, respectivamente, 37.120 m e 61.196 m, e a produo de
acar chegou a 114.472 toneladas (Unica). O mix de produo foi de 58,6 %
para lcool e os outros 41,4%, para acar
A porcentagem de mecanizao da colheita de 45%, sendo o restante
manual e com o uso de queimadas; do total de cana disponvel, 1.725.185
toneladas so referentes a colmo e 89.815 toneladas, referentes palha, considerando que 55% da palha j foram queimados. Assim, a Tabela 20.12
mostra a quantidade de cana (colmo + palha) que chega indstria, e a
Tabela 20.13 mostra a quantidade de palha que separada com o Sistema
de Limpeza de Cana a Seco (SLCS) ligado.
708
Tabela 20.12 Quantidade de cana entrando na indstria, com 45% da colheita mecanizada
Colhedora de cana (Ventilao)
Quantidade de colmo e palha
1.725.185 t_colmo
Ventilada
17.980 t_palha
Parcialmente ventilada
Sem ventilao
1.725.185 t_colmo
44.960 t_palha
1.725.185 t_colmo
84.520 t_palha
Tabela 20.13 Quantidade de palha separada pelo SLCS ligado

Tipo de ventilao
Palha (t)
Ventilada
7.364
Sem ventilao
18.410
34.611
A partir do consumo total de energia necessrio para o funcionamento

da usina e a gerao total energia, encontra-se a quantidade de energia que
pode ser exportada em cada situao estudada.
Resultados
A Tabela 20.14 mostra a exportao total de energia na usina, podendo

ser verificado que a gerao de energia aumenta com a maior introduo de
palha na indstria e, consequentemente, a exportao de energia tambm
aumenta. Assim, o Grfico 20.6 apresenta a eficincia energtica global dos
indicadores estudados. Pode-se observar que, quando a colhedora trabalha com sua eficincia de ventilao baixa (Sem ventilao), a gerao de
energia aumenta relacionada quantidade de cana que entra na indstria,
isso ocorre por ter uma maior quantidade de palha preparada sendo queimada na caldeira, obtendo-se, assim, uma melhor eficincia de exportao
de energia por quantidade de cana (114 kW/tcana). A menor eficincia da
indstria ocorre quando a colheita totalmente manual por meio de queimada da cana (80 kW/tcana) em razo da no utilizao da palha como
combustvel suplementar para queima na caldeira, e por meio das anlises
o principal motivo de uma melhor eficincia energtica da indstria.
709
Tabela 20.14 Gerao total e exportao de energia (MWh/Safra)

Tipo de
colheita
Tipo de
ventilao
Ventilada
SLCS Ligado
Sem ventilao
Ventilada
SLCS Desligado Parcialmente ventilada
Sem ventilao
Colheita manual (queimada)
Gerao total
de energia
236.964
260.345
294.638
232.614
249.471
274.195
221.376
Exportao de
energia
150.352
171.134
201.614
146.883
161.168
182.120
137.360
Grfico 20.6 Eficincia energtica global
A receita final da utilizao da palha como combustvel suplementar na

caldeira apresentado no Grfico 20.7. Observa-se que, para a primeira safra, a usina ter o maior dficit, prximo a R$ 4.060.000,00 quando o SLCS
est desligado e a colhedora trabalhando com sua eficincia mxima de
limpeza de palha no campo; porm, com o SLCS ligado e com uma maior
quantidade de palha entrando na indstria e sendo utilizada para queima
na caldeira, a usina pode pagar o investimento com o sistema e ainda ter um
supervit de aproximadamente R$ 1.960.000,00.
Grfico 20.7 Receita final com venda de energia excedente na primeira safra
710
O Grfico 20.8 apresenta a rentabilidade da energia excedente exportada com a introduo da palha para queima na caldeira em safras, e a Tabela
20.15 apresenta alguns ndices variando a porcentagem de mecanizao da
colheita da cana-de-acar considerando a melhor situao comparada ao
modo de extrao de palha das colhedoras (Ventilada, Parcialmente ventilada e Sem ventilao).
Grfico 20.8 Rentabilidade da energia excedente exportada
Tabela 20.15 Melhor situao de extrao da palha em funo do percentual de mecanizao da

colheita (MWh/safra)
Melhor situao
Porcentagem de mecanizao da colheita

15%
30%
45%
60%
75%
90%
Gerao de energia
(MWh/safra)
245.797
270.217
294.638
319.060
343.480
367.900
Exportao de
energia (MWh/safra)
158.100
179.855
201.614
223.374
245.134
266.894
Eficincia energtica
global (kWh/tc)
91
102
114
125
136
146
Receita final (R$)
-2.760.000
-400.000 1.960.000 4.317.871 6.676.787 9.035.702
Concluses
Os resultados obtidos mostram que a utilizao da palha como combustvel suplementar em caldeiras de alta presso a bagao pode ser bem vantajosa no sentido financeiro, aumentando consideravelmente a receita final
da usina, alm de gerar uma energia limpa e renovvel, colaborando para
suprir eventuais dficits de energia no Brasil.
711
Por sua vez, existe a possibilidade de que ocorra um incremento ainda maior na gerao de energia no setor sucroalcooleiro se forem utilizadas tecnologias mais avanadas que permitam um melhor aproveitamento
energtico do combustvel, tal como o processo de gaseificao da biomassa, ainda em fase de desenvolvimento, que ser objeto de estudo na prxima seo.
Anlise do efeito da integrao de sistemas

de gaseificao da biomassa na produo de energia
numa usina sucroalcooleira
Alm do bagao de cana, outros subprodutos da indstria canavieira

apresentam grande potencial para aproveitamento energtico, como vinhaa e palha, por exemplo.
A vinhaa um resduo final da fabricao do lcool gerado em grande
quantidade (cerca de 10 a 15 litros para cada litro de lcool produzido), e,
no incio da indstria sucroalcooleira no pas, era comum seu descarte em
guas de rios e lagos, pois no havia critrio nem legislao a respeito. O potencial poluidor da vinhaa reside em sua elevada carga orgnica, o que faz
que seja consumido rapidamente o oxignio da gua, ocasionando morte de
peixes e uma srie de outros problemas. Uma alternativa um pouco menos
impactante consiste na aplicao do efluente nas lavouras de cana, com a
finalidade de fertilizar o solo e, ao mesmo tempo, irrigar a cultura da cana-de-acar (fertirrigao). Essa prtica permite uma reduo dos custos com
adubao mineral, alm de proporcionar um aumento na produtividade
agrcola. Projetos de pesquisa recentes esto permitindo novas alternativas
de destino para a vinhaa, e umas delas pelo processo de biodigesto anaerbia, que propicia a diminuio da carga orgnica da vinhaa, produzindo
o biogs da vinhaa, que pode ser aproveitado para gerao de eletricidade.
Esse processo apresenta algumas vantagens, como baixo consumo de energia, pequena produo de resduo slido e maior eficincia na diminuio
da carga orgnica. Alm disso, aps passar por esse processo, a vinhaa no
tem alterado o seu poder fertilizante, podendo ainda ser utilizada para fertirrigao, porm com um menor potencial poluidor.
712
A palha um subproduto da cana-de-acar que estar disponvel em

abundncia em virtude do processo gradual de extino da queimada no
setor sucroalcooleiro, conforme j mencionado anteriormente. Uma possibilidade de aproveitamento da palha recuperada, alm da sua queima em
caldeira, seria por meio da gaseificao, que uma tecnologia de converso termoqumica de um combustvel slido em um combustvel gasoso,
mediante a oxidao parcial da biomassa sob altas temperaturas, dando
origem ao gs de biomassa. Embora esse biogs apresente um baixo poder
calorfico, ele gerado em grandes quantidades permitindo seu uso para
fins energticos.
Diante desse contexto, o objetivo desta seo analisar, dos pontos de
vista termodinmico, termoeconmico e econmico, a integrao de sistemas de gaseificao da palha e da vinhaa numa usina sucroalcooleira, considerando a queima do bagao na caldeira para suprir a demanda de vapor
da usina.
Tecnologias para produo de biogs no setor sucroalcooleiro
A seguir, sero apresentados alguns aspectos relacionados produo de

biogs a partir da vinhaa e da palha, visando sua posterior utilizao em
turbinas a gs para incremento da gerao de energia nas usinas.
A gaseificao da biomassa slida pode ser definida como um processo
qumico de converso de slido (fosseis, biomassa) em gs combustvel de
baixo poder calorfico, mediante a oxidao parcial a temperatura elevada.
A mistura de gases quentes que sai do gaseificador chamada de gs pobre
por causa do seu baixo poder calorfico, em torno de 4,5 a 6,0 MJ/Nm3,
correspondente a aproximadamente 10% do poder calorfico do gs natural.
Projetos mais recentes j produzem gases que alcanam um poder calorfico
da ordem de 30% do poder calorfico do gs natural.
Os principais componentes combustveis do gs formado so o monxido de carbono (CO), o hidrognio (H2) e o metano (CH4), em percentuais
que variam com o tipo de gaseificador, com as condies de operao e com
a umidade da matria-prima, conforme mostra a Tabela 20.16. Esses parmetros determinam tambm o grau de contaminao do gs com alcatres
e partculas de fuligem. No se verificam grandes variaes na composio
do gs quando utilizados diferentes tipos de gaseificadores, mesmo trabalhando com diferentes tipos de biomassa (Corra Neto, 2001).
713
Tabela 20.16 Principais componentes do gs de acordo com o tipo de gaseificador

Componente
Unidades
Gaseificador
atmosfrico
Ar
Vapor
Gaseificador pressurizado
(5-20 bar)
H2
% em volume
12,5
38,1
4,0-15,0
CO
% em volume
16,3
28,1
10,0-19,0
CO2
% em volume
13,5
21,2
14,0-19,0
CH4
% em volume
4,4
8,6
5,0-9,0
HC
% em volume
1,2
3,0
N2
% em volume
52,0
45,0-60,0
PCI
MJ/Nm3
5,1
13,2
3,5-6,5
As impurezas no gs podem alterar negativamente a vida til de equipamentos industriais, que, geralmente, so de custo elevado. Portanto, extremamente importante a minimizao dessas impurezas a fim de otimizar
o emprego do gs em ciclos combinados de gaseificao integrada.
Segundo Larson et al. (2001), gaseificadores de leito fluidizado so mais
adequados converso de uma maior quantidade de biomassa, e sistemas
com capacidade entre 10 e 20 t de biomassa por hora so operacionais. Eles
so, tambm, mais flexveis quanto s caractersticas do insumo, podendo
ser empregados na converso de biomassa com mnimas necessidades de
processamento anterior alimentao. Em razo dessas vantagens, alm
do controle mais fcil, eles tm sido empregados em quase todos os projetos de desenvolvimento de sistemas BIG-CC.
Por sua vez, alm dos maiores custos operacionais, os problemas de adequao dos gases quanto sua qualidade tendem a ser maiores. Em razo da
prpria natureza do processo, a quantidade de material particulado arrastada tambm tende a ser maior. Um segundo aspecto que a maior temperatura de sada dos gases permite que os lcalis saiam ainda da fase gasosa,
impondo dificuldades adicionais limpeza (Pereira Jnior, 2001).
A Figura 20.13 apresenta um esquema do gaseificador em leito fluidizado.
Uma outra forma de aproveitamento de biogs no setor sucroalcooleiro
seria por meio da biodigesto da vinhaa, a qual processa sua carga orgnica
(DQO/DBO) gerando o biogs e vinhaa biodigerida com baixa carga orgnica, mas que mantm o seu poder fertilizante. A quantidade de matria
orgnica de um substrato normalmente quantificada pelo valor de sua de-
714
Figura 20.13 Gaseificador de leito fluidizado

Fonte: Nogueira (2009)
manda bioqumica de oxignio (DBO) ou sua demanda qumica de oxignio

(DQO), que determinam o oxignio necessrio para a degradao biolgica
e qumica, respectivamente, da matria orgnica presente no substrato.
Considerando que uma tonelada de cana moda gera um metro cbico
de vinhaa, e que ocorre a gerao de 7,2 kg de metano durante o processo
de biodigesto de um metro cbico de vinhaa, a energia qumica produzida seria da ordem de 100 kWh por tonelada de cana. Se essa energia for
utilizada para produo de energia eltrica poderia haver um incremento de
aproximadamente 20 kWh por tonelada de cana.
O processo de produo do biogs se inicia com o efluente a ser tratado
sendo distribudo uniformemente na base do reator, passando pela camada
de lodo, transformando a matria orgnica em biogs. Na prtica, por meio
da vinhaa, obtm-se 0,30 litros de CH4/gDQO consumida, e a proporo de CH4 no biogs 55% a 65% (sendo o restante CO2). Como o biogs
apresenta alguns contaminantes imediatamente aps a sua produo, necessrio que seja feita uma depurao dele utilizando filtros, compressores,
resfriadores, bombas e outros equipamentos.
Dentre os principais tipos de biodigestores existentes, o reator anaerbio UASB (Up Flow Anaerobic Sludge Blanket Reactors) seria o mais indicado para aplicao no setor sucroalcooleiro, segundo Cortez et al. (2007),
sendo esse representado esquematicamente na Figura 20.14.
715
Figura 20.14 Representao esquemtica de um biodigestor tipo UASB

Fonte: Busato (2004)
Reviso bibliogrfica
A seguir, sero destacados alguns trabalhos relacionados gaseificao

da biomassa que contriburam para o desenvolvimento do presente estudo.
Corra Neto (2001) avaliou a viabilidade tcnica e econmica de projetos de gerao de energia eltrica utilizando como combustvel o bagao, a
palha e as pontas da cana-de-acar, como opo complementar expanso
do sistema eltrico brasileiro. A tecnologia analisada foi de gerao termeltrica com ciclo combinado, operando em cogerao, integrado a sistemas
de gaseificao de biomassa para a produo de gs combustvel, com e sem
adio de gs natural. A anlise econmica foi feita por meio da modelagem
e construo de curvas de economicidade do projeto, baseadas nos preos
da energia eltrica, do gs natural e nos custos da biomassa.
Walter e Llagostera (2006) realizaram uma anlise da viabilidade da utilizao de ciclos combinados com co-firing baseado na gaseificao dos resduos da cana-de-acar (bagao e palha) e aproveitamento do gs natural.
A anlise foi baseada nos custos de investimento de capital e de operao
716
e manuteno de tais ciclos, levando em conta os custos atuais e de mdio

prazo das tecnologias BIG-CC (Biomass Integrated Gasification Combined
Cycle), ainda em desenvolvimento. Foi concludo que uma profunda reduo dos custos de investimentos nas tecnologias de gaseificao, bem como
do custo do gs natural, ponto-chave para fazer a tecnologia BIG-CC
competitiva ante as outras opes existentes no mercado para a produo de
eletricidade, mas isso s vai ser conseguido com a implantao e aprimoramento de algumas pequenas e mdias unidades experimentais.
Ensinas et al. (2006) analisaram diferentes opes de sistemas de cogerao em usinas sucroalcooleiras com objetivo principal de verificar as possibilidades do aumento da gerao de eletricidade. Foram consideradas quatro
opes, sendo a primeira a utilizao da tradicional turbina de contrapresso; a segunda, a utilizao de uma moderna turbina de extrao-condensao; a terceira, a utilizao de um gaseificador de bagao, uma turbina a
gs e uma caldeira de recuperao; e, por fim, a quarta, com configurao
de ciclo combinado integrado com a gaseificao da biomassa. Vale destacar
que a anlise da potncia das plantas foi realizada junto com a reduo da demanda de vapor do processo de produo de acar, uma vez que esses dois
sistemas esto interligados. Os resultados obtidos mostram que existe um
potencial significativamente grande para o aumento da produo de eletricidade usando o bagao e a palha da cana como combustveis na entressafra,
especialmente com ciclos a vapor com turbinas de extrao-condensao.
Zanetti et al. (2006) apresentaram um sistema de cogerao de energia
para uma usina sucroalcooleira, com utilizao de bagao de cana-de-acar
e gs natural, visando maximizar a produo de eletricidade. Para esse sistema, propuseram diversas estratgias de operao para uma mesma de utilidade, sendo uma delas a utilizao de todo o bagao na gaseificao e complementao de gs natural na turbina a gs de forma a atender a demanda
de vapor da usina (sem queima de bagao na caldeira de recuperao), e outra
forma de operao com o envio de uma determinada quantidade de bagao
ao gaseificador para acionar uma turbina a gs, sendo o excedente queimado na caldeira de recuperao de forma a maximizar a quantidade de vapor
produzida. Por fim, concluiu-se que a maximizao da produo de energia
eltrica implicaria o comprometimento do rendimento exergtico do sistema,
em razo do aumento das irreversibilidades na caldeira.
Ensinas et al. (2007) analisaram a reduo da demanda de vapor no processo industrial de uma usina com acionamentos eletrificados e com sistema
717
de evaporao de cinco efeitos. Foram apresentadas quatro configuraes

de plantas, considerando desde plantas convencionais com turbina de contrapresso at a gaseificao do bagao em ciclo combinado. Foi verificado
que, para os ciclos de vapor tradicionais, uma quantidade significativa de
bagao excedente pode ser obtida com o processo de reduo da demanda
de vapor. Alm disso, a gaseificao da biomassa se mostrou uma importante alternativa a longo prazo, permitindo um incremento de mais de 70%
na gerao de eletricidade.
Rodrigues et al. (2007) realizaram um estudo sobre a operao de turbinas
a gs com combustveis de baixo poder calorfico. Foram estudadas trs estratgias de modificao nas turbinas, as quais so: o de-rating da turbina a
gs, que consiste na reduo da temperatura de chama dos gases, que deve ser
feita de forma que seja alcanada uma razo de presses adequada; a possibilidade da extrao de uma frao de ar do compressor; e o redesenho da entrada
do expansor. As duas ltimas estratgias acarretam em melhor desempenho
para o sistema, embora sejam solues de longo prazo, sendo justificadas
somente aps o desenvolvimento do mercado da tecnologia BIG-GTCC
(Biomass Integrated Gasification Gas Turbine Combined Cycle).
Salomon (2007) realizou uma avaliao econmico-financeira e ambiental da utilizao de tecnologias para a valorizao energtica do biogs,
incluindo a possibilidade de negcios com a venda de crditos de carbono
(MDL) relacionados utilizao do biogs no Brasil. Foram feitas anlises
da produo de biogs, a partir de um modelo terico e de resultados experimentais, alm da modelagem da produo de eletricidade a partir do biogs gerado, para diferentes temperaturas de operao do reator. As anlises
mostraram o grande potencial para gerao de biogs por meio da vinhaa,
mostrando tambm que os motores de combusto interna ainda se apresentam como a melhor opo de gerao de eletricidade a partir do biogs.
Seabra (2008) investigou as opes tecnolgicas envolvendo o aproveitamento do bagao e da palha da cana considerando diversas tecnologias,
como a gerao de energia eltrica mediante a cogerao com ciclos a vapor
(opo atualmente comercial), cogerao com gaseificao da biomassa integrada a ciclos combinados, alm da produo de etanol por meio da hidrlise e produo de combustveis a partir da gaseificao da biomassa.
Foi avaliado que opes atualmente comerciais j propiciariam a gerao de
excedentes de energia eltrica superiores a 140 kWh/tc, com custos em tor-
718
no de R$ 100,00/MWh, para os casos de cogerao com alta presso e uso

de alguma palha em conjunto com o bagao. No entanto, esperado que, no
futuro, sistemas de cogerao com ciclos combinados integrando a gaseificao da biomassa devero permitir que os nveis de excedentes ultrapassem os 200 kWh/tc, mas com custos tambm superiores (>140 R$/MWh).
Pellegrini et al. (2010) apresentaram um estudo termodinmico e termoeconmico comparativo de novas tecnologias para plantas de usinas
sucroalcooleiras. As configuraes estudadas compreendem ciclos a vapor supercrticos, com nveis de presso e temperatura do vapor atingindo
300 bar e 600C, respectivamente, e tecnologias para gaseificao da biomassa, considerando a gaseificao atmosfrica e pressurizada. As tecnologias de ciclos supercrticos e gaseificao atmosfrica permitiriam que a
gerao de eletricidade excedente atingisse cerca de 150 kWh/tc, ao passo
que, com a gaseificao pressurizada, seria possvel atingir at 202 kWh/tc
de excedente de eletricidade. Alm disso, o custo exergtico da eletricidade
gerada poderia ser reduzido em at 50% com o ciclo a vapor supercrtico, e
em mais de 60% com a gaseificao pressurizada.
Dias et al. (2010) realizaram a simulao de plantas de usinas com otimizao da demanda de vapor de processo utilizando conceitos da Anlise
Pinch. Diferentes sistemas de cogerao foram analisados: um ciclo Rankine simples, com turbinas de contrapresso; ciclo a vapor com turbina de
condensao; e o sistema BIG-CC (Biomass Integrated Gasification Combined Cycle), com gaseificao do bagao da usina. A integrao trmica
permitiu a reduo da demanda de vapor da usina para valores abaixo de
230 kg de vapor por tonelada de cana moda, em contraste com os valores tpicos de 380 a 450 kg/tc do setor. O trabalho tambm mostrou a viabilidade
do uso da tecnologia BIG-CC em plantas para produo de lcool anidro.
Descrio dos casos estudados
Sero considerados cinco casos de estudo, os quais sero descritos na

sequncia.
Caso 1 Planta de cogerao convencional de uma usina
sucroalcooleira existente
O primeiro caso a ser estudado uma planta convencional de uma usina

sucroalcooleira do noroeste paulista, mostrada na Figura 20.15. A planta uti-
719
liza equipamentos modernos e eficientes, incluindo caldeira que produz 160

t/h de vapor a 68,6 bar e 530C, sendo que 125 t/h desse vapor consumido
por uma turbina extrao-condensao acoplada a um gerador de 32 MW.
feita uma extrao de 97 t/h de vapor a uma presso de 2,45 bar para o processo de evaporao do caldo, e o restante do vapor continua a expandir at a
presso de 0,07 bar, sendo ento condensado. O restante do vapor (35 t/h)
direcionado a uma turbina de contrapresso, a qual est acoplada a um gerador de 12 MW. O vapor descarregado a uma presso de 2,45 bar e, tambm,
destinado a atender a demanda de vapor do processo industrial.
Vale destacar ainda que o processo industrial atualmente consome 130 t/h
de vapor (cerca de 450 kg de vapor por tonelada de cana moda), a uma
temperatura de 135C. Como a temperatura do vapor de escape prxima
de 160C necessrio o uso de um dessuperaquecedor, cuja finalidade reduzir a temperatura do vapor at um ponto prximo saturao, atravs da
injeo de uma determinada quantidade de gua lquida a 38C no vapor.
Do ponto de vista energtico no h perdas, pois a diminuio da energia
em razo do abaixamento da temperatura compensada pelo aumento da
vazo de vapor que deixa o dessuperaquecedor.
Figura 20.15 Planta convencional de vapor de uma usina sucroalcooleira existente (Caso 1)
720
A Tabela 20.17 apresenta alguns dados da safra da usina considerada.

Tabela 20.17 Dados de safra da usina considerada
Parmetros
Cana moda total
Dias de safra
Valores
Unidades
1.500.000
240
dias
Moagem horria
286,0
t/h
Relao bagao-vapor
0,47
kg/kg
Vazo de bagao produzido
81,5
t/h
Vazo de bagao na caldeira
75,2
t/h
Vazo de bagao excedente
6,3
t/h
Vazo de vapor na caldeira
160,0
t/h
Consumo de vapor no processo
130,0
t/h

sucroalcooleira existente com a integrao da gaseificao da vinhaa
Nesse caso estudada uma configurao hipottica na qual incorporado na planta do Caso 1 um sistema para gaseificao da vinhaa, conforme
mostra a Figura 20.16.
Figura 20.16 Planta integrada para biodigesto da vinhaa numa usina existente (Caso 2)
721
Considerando que a produo de lcool da usina cerca de 14 m3/h,

e que para cada m3 de lcool so produzidos 13 m3 de vinhaa, a vazo de
vinhaa que pode ser aproveitada no biodigestor de cerca de 180 m3/h.
Nessa planta, o biogs gerado no biodigestor aproveitado numa turbina a gs (modelo Rolls Royce 501 KB7, com razo de presso de 13,5 e
potncia de 5,2 MW nas condies padro) para gerao de energia eltrica.
O calor dos gases de exausto da turbina aproveitado numa caldeira de
recuperao, gerando vapor para acionamento de uma turbina a vapor
de condensao (turbina a vapor e condensador). O condensado dessa turbina se junta ao condensado do processo de fabricao e da turbina de extrao-condensao, seguindo ento para o desaerador trmico para retirar
o oxignio dissolvido na gua.
sucroalcooleira existente com a integrao da gaseificao da palha
No Caso 3 estudada uma configurao hipottica, mostrada na Figura

20.17, na qual inserido um sistema de gaseificao da palha da cana junto
planta da usina considerada no Caso 1, cujos dados de operao foram
apresentados na Tabela 20.13.
Figura 20.17 Planta integrada para gaseificao da palha numa usina existente (Caso 3)
722
O sistema consiste de um gaseificador de palha, de uma turbina a gs

acoplada a um gerador eltrico, uma caldeira de recuperao de calor e um
sistema de vapor, composto por uma turbina de condensao, um condensador e a bomba de alimentao da caldeira de recuperao, alm da planta
tradicional de vapor da usina.
Segundo Romo Jr. (2009), a porcentagem de palha na cana de aproximadamente 12%. Considerando uma colhedeira sem ventilao, possvel
um aproveitamento de 94% da palha. No presente estudo, ser considerado
que 12% do total da palha devero ficar no campo para fins de fertilizao,
de forma que, para uma vazo de 286 t/h de cana moda, a vazo de palha
aproveitada para gaseificao seria cerca de 30 t/h.
O gaseificador considerado de leito fluidizado circulante, trabalhando
presso atmosfrica. Como o gs produzido a uma faixa de temperatura
de 700 C, necessrio realizar um resfriamento desse antes de ser comprimido. Assim, o gs passa por um pr-aquecedor de ar de gaseificao e
por um trocador de calor, onde deve pr-aquecer a gua de alimentao da
caldeira. Esse pr-aquecimento da gua da caldeira permite um aumento na
vazo de vapor gerado de 160 t/h para 170 t/h, considerando que a caldeira
no apresente uma reduo em sua eficincia. Em seguida, o gs passa por
mais um sistema de resfriamento com limpeza do gs para que possa ser
comprimido e utilizado na turbina a gs.
A turbina a gs considerada da Hitachi, modelo PG6561(B), com razo de presso igual a 12,0; sendo a mesma acoplada a um gerador de 39,6
MW nominal. Os gases de exausto dessa turbina passam por uma caldeira
de recuperao de calor para produo de vapor, o qual consumido em
uma turbina de condensao, e o condensado se junta ao condensado do
ciclo convencional a vapor para desaerao, sendo ento bombeado de volta
para a caldeira de recuperao.
sucroalcooleira existente com a integrao da gaseificao
da palha e da vinhaa
O Caso 4 apresenta a configurao apresentada na Figura 20.18, a qual

engloba a proposta de gaseificao da palha e da vinhaa na planta do Caso 1.
Os processos de gaseificao e biodigesto so os mesmos descritos nos
Casos 2 e 3, respectivamente, e as vazes de palha e vinhaa no gaseificador
e no biodigestor tambm so as mesmas (30,0 t/h de palha e 180 m3/h de
723
Figura 20.18 Planta integrada para gaseificao da palha e vinhaa numa usina existente
(Caso 4)
vinhaa). Considera-se nesse caso uma mistura do gs da palha e do biogs

para consumo em uma nica turbina a gs.
A turbina a gs considerada neste caso da Siemens, modelo
W251B11/12, com razo de presso de 15,3, sendo ela acoplada a um gerador de 49,5 MW nominal. O aproveitamento dos gases de exausto e a
planta de vapor so similares aos Casos 2 e 3, com a diferena de que, nesse
caso, se utiliza uma turbina de condensao maior para o ciclo combinado,
uma vez que a vazo de gs para a turbina a gs ser maior, de modo que a
vazo dos gases de exausto tambm assim o ser.
Caso 5 Planta de cogerao modificada de uma usina
sucroalcooleira idealizada com integrao da gaseificao da palha e
da vinhaa
O Caso 5, cuja planta mostrada na Figura 20.19, consiste na concepo

de uma usina nova, com o dobro da capacidade de moagem da usina considerada no Caso 1, e que considera a gaseificao da palha e da vinhaa da
usina, tal como no caso anterior.
724
Figura 20.19 Planta integrada para gaseificao da palha e da vinhaa numa usina idealizada (Caso 5)
O sistema para gaseificao da palha e da vinhaa semelhante ao do

Caso 4. A turbina a gs considerada da Hitachi, modelo PG7121 (EA), com
razo de presso de 12,6 e potncia nominal de 85,4 MW. Nesse caso, foi
considerado um aumento na presso do vapor produzido pelas caldeiras convencional e de recuperao, de forma que o vapor gerado a 86 bar e 520C.
A planta de vapor da usina conta com caldeira que gera 320 t/h de vapor e
turbina de extrao-condensao de mltiplos estgios, alm da turbina de
condensao para aproveitar o vapor gerado pela caldeira de recuperao.
Vale destacar ainda que nesse caso considera-se uma reduo no consumo de vapor para o processo, de forma que esse consome uma vazo de
231 t/h de vapor, o que corresponde a 403 kg de vapor por tonelada de cana
moda. O pr-aquecimento da gua de alimentao da caldeira, mediante a
reduo da temperatura do gs da palha, permite um aumento na gerao
de vapor da caldeira de 320 t/h para 340 t/h, considerando que a eficincia
da caldeira se mantenha estvel.
Na Tabela 20.18 so apresentados alguns dados hipotticos da safra dessa usina idealizada.
725
Tabela 20.18 Dados de safra da usina idealizada

Parmetros
Cana moda total
Valores
Unidades
3.000.000
240
dias
Horas efetivas de moagem
5.241
Dias de safra
Moagem horria
572,3
t/h
Relao bagao-vapor
0,44
kg/kg
Vazo de bagao produzido
163,0
t/h
Vazo de bagao na caldeira
150,0
t/h
Vazo de bagao excedente
13,0
t/h
Vazo de palha gaseificada
60,0
t/h
Vazo de vinhaa biodigerida
360,0
m/h
Vazo de vapor na caldeira
340,0
t/h
Consumo de vapor no processo
231,0
t/h
Resultados
Consideraes e clculos preliminares
A seguir, so apresentados alguns clculos preliminares e consideraes

necessrias para as simulaes.
A soluo do sistema de equaes resultante da anlise termodinmica de cada um dos casos obtida pelo emprego do software IPSEpro
(SIMTECH IPSEPRO, 2003), sendo que maiores informaes sobre o
mesmo podem ser obtidas em www.simtechnology.com.
Foram consideradas eficincias isentrpicas de 80% para os compressores e 75% para as bombas. As eficincias de converso eltrica e mecnica
foram estimadas em 98%. O PCI da palha e do bagao so, respectivamente, 13.151 e 7.736 kJ/kg, de acordo com Hassuani et al. (2005). A exergia
dos combustveis foi calculada de acordo com a metodologia apresentada
anteriormente. Nos casos com biodigesto da vinhaa, os clculos foram
feitos com base no PCI do biogs gerado, que 26.022 kJ/kg, o qual foi
calculado pelo software IPSEpro com base na sua composio.
A fim de verificar o desempenho das turbinas a gs selecionadas quando
trabalham com gs de baixo poder calorfico, foram realizadas simulaes
dessas com esse tipo de gs. Foi verificado que a temperatura da combusto
sempre ficou menor que a temperatura de chama para a simulao com gs
natural, assim como houve uma menor temperatura dos gases de exausto,
diminuindo a eficincia do ciclo.
726
Em relao s vazes no sistema, foi observado que, com a utilizao de

gs proveniente da biodigesto da vinhaa, a vazo desse combustvel era
cerca de duas vezes maior que a vazo de gs natural, enquanto, no caso da
gaseificao da palha, a vazo desse combustvel era cerca de nove vezes
maior. A vazo de ar para a combusto tambm foi menor nas situaes
com gaseificao se comparado com o uso de gs natural. Entretanto, essa
reduo da vazo de ar deve ser controlada, pois vazes de ar muito inferiores podem levar o compressor ao fenmeno de surge, o que poderia
acarretar em fluxo reverso no compressor.
Em todas as situaes analisadas, comparando-se com o uso de gs natural, houve reduo na potncia total do conjunto e na eficincia das turbinas. A reduo na eficincia ficou entre 5,6%, quando da utilizao do
biogs da vinhaa, e 10,9%, quando da utilizao da mistura de gases da vinhaa e da palha, mostrando que a palha contribui mais para essa reduo.
Na simulao com gs de biomassa, procurou-se trabalhar com uma
vazo de gases de exausto semelhante vazo de gases da turbina a gs
operando com gs natural. Alm disso, os nveis de presso no ciclo no
foram alterados. Como essa anlise visa apenas comparao entre as duas
condies de operao das turbinas, com esses parmetros fixados (vazo e
presso), os resultados da simulao com gs de biomassa aqui apresentados diferem daqueles encontrados na simulao dos casos estudados, uma
vez que as turbinas a gs utilizadas nas plantas de cogerao operam com
vazes de combustvel dadas pela capacidade de produo das plantas, de
forma que a vazo de gases sempre difere da vazo nas condies padro.
Os custos dos equipamentos das configuraes estudadas foram estimados
a partir de informaes disponveis na literatura (Gas Turbine World Handbook, 2001-2002; Garagatti Arriola, 2000). Os custos referentes aos sistemas
de biodigesto da vinhaa foram estimados de acordo com Salomon (2007),
e os custos especficos dos equipamentos dos sistemas BIG-GTCC foram
estimados de acordo com Larson et al. (2001), alm de informaes do Instituto de Economia Agrcola (Torquato; Fronzaglia, 2005), de forma que foi
considerado um custo especfico para implantao do sistema BIG-GTCC
de cerca de R$ 2.500,00/kW (aproximadamente US$ 1.400,00/kW).
O custo anual dos equipamentos, com amortizao, foi calculado levando-se em conta um perodo de amortizao de vinte anos. A taxa de juros considerada foi de 12%, condizente com o cenrio econmico brasileiro. Foi
considerado ainda um percentual de custo anual fixo associada operao
727
e manuteno de 9%, e um percentual de custo anual varivel de operao e

manuteno de 1%, com um fator de carga de 0,75.
Nas Tabelas 20.19 a 20.23 so apresentados os custos dos equipamentos
(expressos em reais, mas atualizados com relao a data da fonte, com base
na variao do dlar), os custos anuais amortizados e as taxas de custos de
cada equipamento utilizado.
Tabela 20.19 Custo estimado dos equipamentos e custos com amortizao Caso 1
a
a
Equipamento
Custo (R$)
Zk (R$/ano)
Z (R$/s)
Caldeira
28.000.000,00
6.478.605,84
Turbina a vapor extrao-condensao
17.000.000,00
3.933.439,26
0,168615
Turbina a vapor contrapresso
3.000.000,00
694.136,34
0,029756
Condensador
800.000,00
185.103,02
0,007935
Bomba de condensado
100.000,00
23.137,88
0,000992
Dessuperaquecedor
150.000,00
34.706,82
0,001488
Evaporao do caldo
1.000.000,00
231.378,78
0,009919
200.000,00
46.275,76
0,001984
Desaerador
2.000.000,00
462.757,56
0,019837
Bomba da caldeira
1.800.000,00
416.481,80
0,017853
Mistura dos condensados
0,277718
a
a
Equipamento
Custo (R$)
Zk (R$/ano)
Z (R$/s)
Biodigestor
3.300.000,00
763.549,97
0,032731
Compressor
1.200.000,00
277.654,54
0,011902
Turbina a gs
3.250.000,00
751.981,04
0,032235
3.510.000,00
812.139,52
0,034814
Turbina a vapor de condensao
950.000,00
219.809,84
0,009423
Condensador da turb. condensao
200.000,00
46.275,76
0,001984
Bomba de condensado turb. cond.
50.000,00
11.568,94
0,000496
Caldeira
28.000.000,00
6.478.605,84
0,277718
17.000.000,00
3.933.439,26
0,168615
3.000.000,00
694.136,34
0,029756
Condensador
800.000,00
185.103,02
0,007935
Bomba de condensado
100.000,00
23.137,88
0,000992
Dessuperaquecedor
150.000,00
34.706,82
0,001488
Evaporao do caldo
1.000.000,00
231.378,78
0,009919
Mistura de condensados
200.000,00
46.275,76
0,001984
Desaerador
2.000.000,00
462.757,56
0,019837
Bomba da caldeira
1.800.000,00
416.481,80
0,017853
150.000,00
34.706,82
0,001488
Bomba HRSG
728
a
a
Equipamento
Custo (R$)
Zk (R$/ano)
Z (R$/s)
Caldeira
28.000.000,00
6.478.605,84
0,277718
17.000.000,00
3.933.439,26
0,168615
3.000.000,00
694.136,34
0,029756
Condensador
800.000,00
185.103,02
0,007935
Bomba de condensado
100.000,00
23.137,88
0,000992
Dessuperaquecedor
150.000,00
34.706,82
0,001488
Evaporao do caldo
1.000.000,00
231.378,78
0,009919
200.000,00
46.275,76
0,001984
Desaerador
2.000.000,00
462.757,56
0,019837
Bomba da caldeira
1.800.000,00
416.481,80
0,017853
Gaseificador
39.000.000,00
9.023.772,42
0,386822
Resfriamento de gs
2.800.000,00
647.860,58
0,027772
Limpeza do gs
5.600.000,00
1.295.721,17
0,055544
Compressor de gs
6.700.000,00
1.550.237,83
0,066454
Turbina a gs
19.800.000,00
4.581.299,84
0,196386
21.400.000,00
4.951.505,89
0,212256
5.000.000,00
1.156.893,90
0,049593
1.000.000,00
231.378,78
0,009919
Bomba Cond. turb. condensao
100.000,00
23.137,88
0,000992
Bomba HRSG
700.000,00
161.965,15
0,006943
a
a
Equipamento
Custo (R$)
Zk (R$/ano)
Z (R$/s)
Gaseificador
39.060.000,00
9.037.655,15
0,387417
Resfriamento de gs
Limpeza do gs
2.790.000,00
645.546,80
0,027673
5.580.000,00
1.291.093,59
0,055345
Biodigestor
Compressor
3.300.000,00
763.549,97
0,032731
6.700.000,00
1.550.237,83
0,066454
Turbina a gs
24.750.000,00
5.726.624,81
0,245483
26.800.000,00
6.200.951,31
0,265816
4.900.000,00
1.133.756,02
0,048601
1.000.000,00
231.378,78
0,009919
Bomba de condensado turb. cond.
100.000,00
23.137,88
0,000992
Caldeira
28.000.000,00
6.478.605,84
0,277718
17.000.000,00
3.933.439,26
0,168615
3.000.000,00
694.136,34
0,029756
Continua
729
Equipamento
Custo (R$)
a
Zk (R$/ano)
a
Z (R$/s)
Condensador
800.000,00
185.103,02
0,007935
Bomba de condensado
100.000,00
23.137,88
0,000992
Dessuperaquecedor
150.000,00
34.706,82
0,001488
Evaporao do caldo
1.000.000,00
231.378,78
0,009919
200.000,00
46.275,76
0,001984
Desaerador
2.000.000,00
462.757,56
0,019837
Bomba da caldeira
1.800.000,00
416.481,80
0,017853
800.000,00
185.103,02
0,007935
Bomba HRSG
a
a
Equipamento
Custo (R$)
Zk (R$/ano) Z (R$/s)
Gaseificador
78.000.000,00
18.047.544,84
0,773643
Resfriamento de gs
5.600.000,00
1.295.721,17
0,055544
Limpeza do gs
11.200.000,00
2.591.442,34
0,111087
Compressor de gs de biomassa
13.400.000,00
3.100.475,65
0,132908
Biodigestor
6.500.000,00
1.503.962,07
0,064470
Compressor de biogs
2.100.000,00
485.895,44
0,020829
Turbina a gs
36.200.000,00
8.375.911,84
0,359050
40.000.000,00
9.255.151,20
0,396740
13.500.000,00
3.123.613,53
0,133900
2.800.000,00
647.860,58
0,027772
300.000,00
69.413,63
0,002976
Caldeira
45.000.000,00
10.412.045,10
0,446333
34.000.000,00
7.866.878,52
0,337229
Condensador
1.600.000,00
370.206,05
0,015870
Bomba de condensado turb. condens.
Bomba de condensado
200.000,00
46.275,76
0,001984
2.000.000,00
462.757,56
0,019837
350.000,00
80.982,57
0,003471
Desaerador
4.000.000,00
925.515,12
0,039674
Bomba da caldeira
3.500.000,00
809.825,73
0,034715
Bomba HRSG
1.700.000,00
393.343,93
0,016861
Evaporao do caldo
O custo do bagao foi considerado igual a R$ 15,00/t, enquanto o custo

da vinhaa foi admitido ser R$ 5,00/m. Foi considerado tambm que o
custo da palha da cana para utilizao na usina de R$ 32,00/t, custo esse
que se deve ao seu transporte at a indstria, o custo de oportunidade da
palha no campo e seu custo de processamento (MME, 2007).
730
A resoluo do sistema de equaes resultante da anlise termoeconmica foi efetuada utilizando-se o programa EES (Engineering Equation
Solver), desenvolvido por Klein e Alvarado (1995), que possibilita a realizao de clculos de maneira simples e eficiente.
Resultados termodinmicos
Nas Tabelas 20.24 a 20.28 so apresentadas: a potncia eletromecnica,

a potncia trmica, as irreversibilidades geradas e as eficincias pela primeira e pela segunda leis da termodinmica para os equipamentos das plantas analisadas.
Tabela 20.24 Potncia eletromecnica, trmica, irreversibilidades e eficincias para os equipamentos da planta do Caso 1
Equipamento
W (kW) Q (kW)
i (kW)
II (%)
I (%)
Caldeira
167.613,3
36.870,08
78,0
27,5
Turb. a vapor extr.-condensao
27.147,52
3.594,03
85,8
88,7
Turb. a vapor de contrapresso
6.527,54
944,91
84,0
84,3
502,16
89,66
75,0
78,2
2,39
0,45
75,0
77,2
Processo
79.791,3
40.347,66
Condensador
16.372,9
1.477,41
Bomba da caldeira
Bomba de condensado
Equipamento
W (kW)
Q (kW)
i (kW)
II (%)
I (%)
Compressor de biogs
372,79
38,22
80,0
85,8
Turbina a gs
5.511,96
7.230,80
30,5
39,2
Turb. a vapor de condensao
2.795,77
518,05
84,0
81,5
7.460,06
1.079,90
84,0
84,3
Turb. a vapor de extr.-condensao
25.930,35
3.425,42
85,8
88,7
Bomba da caldeira
502,16
89,66
75,0
78,2
Bomba da caldeira de recuperao
24,85
4,44
75,0
78,2
Bomba de cond. turb. extr.-condens.
2,47
0,64
75,0
69,9
Bomba de cond. turb. condensao
0,94
0,17
75,0
77,8
Processo
80.251,9
40.120,37
Condensador turb. extr.-condens.
15.179,3
1.368,69
Condensador turb. condensao
6.561,4
859,5
Caldeira
167.613,3
36.870,08
78,0
27,5
9.050,5
632,21
93,0
89,4
731
Equipamento
W (kW)
Q (kW)
i (kW)
II (%)
I (%)
Compressor de gs
10.180,09
872,54
80,0
87,5
Turbina a gs
31.046,12
33.823,66
33,8
59,1
14.317,16
2.652,95
84,0
81,5
9.325,09
1.349,87
84,0
84,3
26.262,63
3.488,33
85,7
88,7
Bomba da caldeira
534,95
95,51
75,0
78,2
127,26
22,74
75,0
78,2
2,74
0,72
75,0
69,9
4,80
0,88
75,0
77,8
Processo
80.251,9
40.120,37
16.850,9
1.519,41
33.601,2
4.401,55
Caldeira
167.613,3
36.106,25
78,5
28,2
48.009,2
4.899,23
89,8
75,6
Equipamento
W (kW)
Q (kW)
i (kW)
II (%)
I (%)
Compressor de gs
11.563,52
958,44
80,0
87,8
Turbina a gs
40.838,05
40.309,11
36,2
63,5
14.128,72
2.618,04
84,0
81,5
9.325,09
1.349,87
84,0
84,3
26.274,06
3.490,49
85,7
88,7
Bomba da caldeira
534,95
95,51
75,0
78,2
108,59
19,41
75,0
78,2
2,75
0,72
75,0
69,9
4,74
0,87
75,0
77,8
Processo
80.251,9
42.088,47
16.908,4
1.524,60
33.158,9
4.343,62
Caldeira
167.613,3
36.106,25
78,5
28,2
56.684,4
14.125,55
75,1
64,8
732
Equipamento
W (kW)
Q (kW)
i (kW)
II (%)
I (%)
Compressor de gs da palha
Compressor biogs da vinhaa
20.194,6
1.732,0
80,0
91,1
736,6
78,2
80,0
88,9
Turbina a gs
72.349,5
80.810,7
32,2
60,1
39.682,1
7.353,4
84,0
81,5
75.799,1
10.105,9
85,8
88,6
Bomba da caldeira
1.313,1
233,6
75,0
78,3
538,4
95,5
75,0
78,3
6,5
1,3
75,0
75,7
73,4
12,4
2,8
75,0
Processo
142.042,9
73.458,96
Condensador turb. extr. condens.
43.008,2
3.877,86
81.554,4
10.682,01
Caldeira
322.333,3
62.315,5
80,7
29,6
119.656,7
10.463,5
91,3
83,9
As condies de operao dos gaseificadores de palha dos Casos 3, 4 e

5 no foram alteradas e, portanto, suas eficincias no apresentaram grandes flutuaes, de forma que a eficincia a quente dos gaseificadores foi de
93,8%, enquanto a eficincia a frio ficou em 83,6%, calculadas com base no
poder calorfico da palha com 15% de umidade em base mida.
Na Tabela 20.29 so apresentados os resultados para os ndices de desempenho das plantas, baseados na primeira lei da termodinmica, e nos Grficos 20.9 a 20.12 so apresentados graficamente os resultados para a eficincia global, eficincia de aproveitamento da biomassa, razo potncia-calor e
para a relao potncia eltrica-cana moda, para os casos analisados.
Tabela 20.29 ndices de desempenho das plantas analisadas
Caso
1
Caso
2
Caso
3
Caso
4
Caso
5
global Eficincia global da planta (%)
61,4
58,7
48,1
47,3
47,1
aprov,biom Eficincia aproveitamento da biomassa (%)
34,9
36,1
44,2
46,3
47,1
RPC Razo Potncia-Calor
0,290
0,359
0,662
0,740
0,915
Rbag,vap Relao bagao-vapor (kgbag/kgvapor)
0,488
0,488
0,470
0,459
0,441
ndice
Rvapor,cana Relao vapor-cana moda (kgvapor/tcana)
454
454
454
454
403
Rpot,cana Relao pot. eltrica-cana moda (kWh/tcana)
81
101
186
207
227
733
Grfico 20.9 Eficincia global para cada um dos casos considerados
Grfico 20.10 Eficincia de aproveitamento da biomassa para cada um dos casos considerados
Grfico 20.11 Razo potncia-calor para cada um dos casos considerados
734
Grfico 20.12 Razo potncia eltrica-cana moda para cada um dos casos considerados
De acordo com o Grfico 20.9, verifica-se que a integrao da gaseificao planta da usina promove uma reduo na eficincia global, uma vez
que esse ndice considera apenas a relao entre a energia til e a energia
efetivamente fornecida planta, desconsiderando outras fontes de energia
disponveis na usina que poderiam ser utilizadas. Entretanto, as vantagens
da gaseificao, sob a ptica da termodinmica, podem ser vistas no Grfico
20.10, pois a eficincia de aproveitamento da biomassa superior do Caso 1
em todos os outros casos. Esse aumento era esperado, uma vez que a gaseificao possibilita um aumento na gerao de eletricidade em todos os casos,
e, tambm, pelo fato de que a eficincia de aproveitamento da biomassa tem
como base toda a biomassa disponvel na usina, o que resulta em um melhor
aproveitamento nos casos com gaseificao. Observa-se tambm um expressivo aumento na Razo Potncia-Calor (RPC) e na relao potncia eltrica-cana moda (Rpot,cana) da usina, ndice este que poderia atingir 227 kWh/tc
com a gaseificao da palha e vinhaa em uma usina moderna idealizada.
Resultados termoeconmicos
Na Tabela 20.30 so mostrados os resultados termoeconmicos para cada

um dos casos estudados, obtidos com base na Teoria do Custo Exergtico.
O custo mdio da energia eltrica produzida obtido a partir de uma
mdia ponderada entre os custos de gerao de cada um dos turbogeradores
existentes, para as configuraes que possuem mais de um turbogerador.
A Tabela 20.30 mostra que tanto a gaseificao da palha como a biodigesto da vinhaa promovem um aumento no custo mdio de gerao de
eletricidade da usina. Esse aumento ocorre pelo elevado custo de gerao
735
Tabela 20.30 Resultados termoeconmicos para cada caso estudado

Parmetros
Caso 1 Caso 2 Caso 3 Caso 4 Caso 5
Custo de gerao de eletricidade na turbina a

gs (R$/MWh)
284,90
93,91
100,10
110,10
Custo de gerao de eletricidade da turbina a

vapor de condensao (R$/MWh)
204,70
151,70
179,40
145,40

vapor de extrao-condensao (R$/MWh)
94,40
69,25
92,68
93,65
76,96

vapor de contrapresso (R$/MWh)
89,21
60,69
81,76
82,75
Custo mdio de gerao de eletricidade

(R$/MWh)
93,39
105,30
102,30
108,80
104,20
Custo do vapor de processo (R$/t)
11,56
7,38
11,17
11,32
9,64
de eletricidade da turbina a gs e da turbina de condensao, e pode-se observar que os custos de gerao das turbinas a vapor da planta convencional
no se elevam, ficando menores que os custos do Caso 1 nos Casos 2 e 5,
embora o custo do vapor de processo tambm tenha ficado bem menor nesses casos.
Os resultados apresentados na Tabela 20.30 foram obtidos considerando valores fixos para os custos dos insumos, ou seja, o custo de bagao
de R$ 15,00/t, o custo da palha de R$ 32,00/t e o custo da vinhaa de
R$ 5,00/m. A fim de se realizar uma avaliao mais completa, sero apresentadas a seguir anlises de sensibilidade do custo mdio de gerao em
funo dos custos dos insumos.
O Grfico 20.13 apresenta a curva de sensibilidade do custo mdio de
gerao de eletricidade do Caso 1 em razo da variao do custo do bagao
entre R$ 0,00/t e R$ 20,00/t.
De acordo com esse grfico, o custo de gerao de eletricidade para o
Caso 1 se mostra bastante sensvel em relao ao custo do bagao, pois a
variao do custo do bagao de R$ 0,00/t para R$ 20,00/t promove uma
elevao no custo da eletricidade de R$ 47,00/MWh.
gerao de eletricidade para o Caso 2, em razo do custo do bagao e para o
custo da vinhaa variando entre R$ 0,00/m e R$ 10,00/m.
gerao para Caso 3, em razo do custo do bagao e variando-se o custo da
palha entre R$ 10,00/t e R$ 40,00/t.
736
Grfico 20.13 Curva de sensibilidade do custo de gerao para o Caso 1
Grfico 20.14 Curvas de sensibilidade do custo de gerao para o Caso 2
Grfico 20.15 Curvas de sensibilidade do custo de gerao para o Caso 3
737
Observando-se os Grficos 20.14 e 20.15, nota-se que o custo de gerao da eletricidade se mostra muito mais sensvel em relao ao custo da vinhaa do que em relao ao custo da palha, pois a variao do custo da vinhaa entre R$ 0,00/m e R$ 10,00/m resulta em uma diferena de custo de
R$ 39,00/MWh, enquanto a variao do custo da palha entre R$ 10,00/t
e R$ 40,00/t resulta em uma diferena de apenas R$ 11,00/MWh.
Nos Grficos 20.16 a 20.18 so apresentadas as curvas de sensibilidade do custo mdio de gerao de eletricidade para o Caso 4, em razo
dos custos do bagao e da palha, e para custos da vinhaa de R$ 0,00/m,
R$ 5,00/m e R$ 10,00/m, respectivamente. Os grficos mostram que,
de forma similar aos Casos 2 e 3, o custo de gerao de eletricidade se mostrou muito mais sensvel em relao ao custo da vinhaa do que em relao
ao custo da palha, uma vez que, para uma variao do custo da palha de
R$ 10,00/t para R$ 40,00/t, o custo mdio de gerao de eletricidade sofreu
um aumento de apenas R$ 5,00/MWh, enquanto que para um aumento da
vinhaa de R$ 0,00/m para R$ 10,00/m o aumento foi de aproximadamente R$ 18,00/MWh.
Grfico 20.16 Curvas de sensibilidade do custo de gerao para o Caso 4, para a vinhaa
custando R$ 0,00/m
738
custando R$ 5,00/m
custando R$ 10,00/m
Nos Grficos 20.19 a 20.21 so apresentadas as curvas de sensibilidade

do custo mdio de gerao de eletricidade para o Caso 5, em razo dos custos do bagao e da palha, e para custos da vinhaa de R$ 0,00/m, R$ 5,00/
m e R$ 10,00/m, respectivamente.
739
custando R$ 0,00/m
custando R$ 5,00/m
custando R$ 10,00/m
740
Os Grficos 20.19 a 20.21 mostram que, analogamente ao Caso 4, o

custo mdio de gerao de eletricidade do Caso 5 muito mais sensvel ao
custo da vinhaa do que ao custo da palha, pois a variao do custo da palha
de R$ 10,00/t para R$ 40,00/t implica uma variao do custo mdio de
gerao de R$ 9,00/MWh, enquanto que a variao do custo da vinhaa
de R$ 0,00/m para R$ 10,00/m resulta em um aumento de R$ 20,00/MWh
no custo de gerao de eletricidade.
Em todos os casos estudados que envolvem gaseificao, a variao do
custo do bagao apresentou influncia semelhante sobre o custo de gerao
de eletricidade, uma vez que o aumento de R$ 20,00/t no custo do bagao
resultou em um aumento de aproximadamente R$ 20,00/MWh, em mdia, ou seja, para um aumento de R$ 1,00/t de bagao haveria um aumento
de aproximadamente R$ 1,00/MWh no custo de gerao.
Resultados econmicos
Com o auxlio da anlise econmica possvel observar o comportamento do fluxo de caixa ao longo da vida til da planta, alm de verificar a
viabilidade financeira dos investimentos.
Na Tabela 20.31 so apresentados alguns resultados globais para os
casos de estudo, como potncia produzida, o consumo de eletricidade da
usina, potncia excedente disponvel para comercializao, alm do custo
de gerao da eletricidade e o investimento total no sistema de cogerao
analisado.
Tabela 20.31 Resultados globais de para os casos estudados

Resultados
Caso
1
Caso
2
Caso
3
Caso
4
Caso
5
Quantidade de eletricidade produzida (MW)
33,2
40,8
70,1
78,3
165,0
Quantidade de eletricidade consumida* (MW)
10,0
12,0
17,0
19,0
35,0
Quantidade de eletricidade excedente (MW)
23,2
28,8
53,1
59,3
130,0
Custo de gerao de eletricidade (R$/MWh)
93,39 105,30 102,30 108,80 104,20
Investimento total (milhes de R$)
54,05
66,66 156,15 169,83 336,20
Custo por unidade de potncia instalada (R$/kW)
1.628
1.634
Valor estimado com base em usinas do setor
2.228
2.169
2.038
741
Para cada caso considerado, as anlises foram feitas considerando quatro valores de venda da eletricidade, com preos que variam de R$ 150,00/
MWh at R$ 180,00/MWh, permitindo, assim, avaliar o desempenho
econmico do sistema para diversas opes de contratos de venda da
eletricidade.
As Tabelas 20.32 a 20.36 apresentam os resultados para o Valor Presente
Lquido (VPL), a Taxa Interna de Retorno do investimento (TIR) e o Tempo de Retorno do Investimento (TRI), em anos, para cada um dos casos estudados. Os Grficos 20.22 a 20.26 apresentam o desempenho do fluxo de
caixa dos casos estudados, para diferentes valores de venda da eletricidade,
considerando um perodo de implantao do sistema de dois anos, tempo
no qual ocorrem os desembolsos. A interseco das curvas com o eixo horizontal representa o tempo de retorno do investimento, ou seja, o tempo a
partir do qual o fluxo de caixa passa a ser positivo.
Tabela 20.32 Resultados econmicos para o Caso 1, em razo do preo de venda da eletricidade
Preo de venda (R$/MWh)
VPL (R$)
TIR (%)
TRI (anos)
150,00
9.436.655,42
14,7
13,0
160,00
20.651.397,59
17,8
9,5
170,00
31.866.139,75
20,8
7,5
180,00
43.080.881,92
23,7
6,5
Grfico 20.22 Fluxo de caixa ao longo da vida til da planta do Caso 1
742
VPL (R$)
TIR (%)
150,00
-4.362.189,54
10,9
TRI (anos)
160,00
9.574.680,81
14,2
14,0
170,00
23.511.551,16
17,4
9,5
180,00
37.448.421,51
20,4
7,5

VPL (R$)
TIR (%)
TRI (anos)
150,00
160,00
-33.551.730,00
8,4
-7.849.787,00
11,2
170,00
17.852.155,00
13,8
14,5
180,00
43.554.098,00
16,3
11,0
743
VPL (R$)
TIR (%)
TRI (anos)
150,00
-51.474.480,39
6,8
160,00
-22.747.412,53
9,8
170,00
5.979.655,34
12,6
18,0
180,00
34.706.723,21
15,2
12,0

VPL (R$)
TIR (%)
TRI (anos)
150,00
-47.948.019,30
9,7
160,00
14.989.094,39
12,7
17,5
170,00
77.926.208,08
15,6
11,5
180,00
140.863.321,77
18,3
9,0
744
Observando-se os Grficos 20.22 a 20.26 e as Tabelas 20.31 a 20.36,

pode-se observar que o Caso 1 se apresenta como o menos arriscado sob o
ponto de vista econmico, uma vez que esse caso apresenta o menor tempo de retorno do investimento e os maiores valores para a Taxa Interna de
Retorno (TIR). O tempo de retorno do investimento seria de 6,5 anos para
um preo de venda da eletricidade de R$ 180,00/MWh (valor reivindicado pelo setor), e o Valor Presente Lquido (VPL) para essa situao seria
superior a 43 milhes de reais aps um perodo de vinte anos.
Os casos que envolvem gaseificao da biomassa alcanaram valores
para TIR menores que no Caso 1 e tempo de retorno do investimento superior. No caso da biodigesto da vinhaa (Caso 2), no haveria retorno do
investimento para o preo de venda da eletricidade de R$ 150,00/MWh
(valor prximo aos valores atuais), e a TIR nessa situao no chegaria a
11%. Para a melhor situao analisada, ou seja, para um preo de venda
da eletricidade de R$ 180,00/MWh, o capital acumulado ao final de vinte
anos seria inferior ao obtido pelo Caso 1.
Quando se considera a integrao da gaseificao da palha integrada
planta da usina convencional (Casos 3 e 4) os resultados so ainda piores.
Para esses casos, no haveria retorno de investimento para valores de venda
da eletricidade inferiores a R$ 170,00/MWh, e a mxima TIR obtida seria
de 16,3% para o Caso 3, e 15,2% para o Caso 4.
Por sua vez, para o caso que considera uma usina idealizada com gaseificao da biomassa e equipamentos modernos e eficientes (Caso 5), de
acordo com a Tabela 20.36 e com o Grfico 20.21, j se verificaria retorno
do investimento para preos de venda da eletricidade acima de R$ 160,00/
MWh. Pode ser observado ainda que, se a eletricidade fosse negociada a
R$ 180,00/MWh, a TIR obtida seria de 18,3%, o acmulo de capital aps
vinte anos seria superior a 140 milhes de reais e o retorno do investimento
aconteceria antes da metade da vida til da planta, o que poderia tornar o
projeto mais interessante.
Concluses
Nesta seo foi feita uma anlise da proposta de integrao da gaseificao da biomassa em uma usina sucroalcooleira existente e na concepo de
uma planta de uma usina moderna que utiliza a gaseificao da biomassa.
Foram avaliados cinco casos de estudo, que consideram desde a planta de
745
vapor de uma usina existente, qual foram integrados sistemas para gaseificao da palha da cana e da vinhaa, at a concepo de uma planta de uma
usina idealizada com gaseificao da palha e da vinhaa e que utiliza equipamentos modernos e eficientes, incluindo caldeira que gera vapor a altos nveis de presso e temperatura e reduo do consumo de vapor do processo.
Do ponto de vista termodinmico, a gaseificao da palha integrada
planta da usina se mostrou uma tecnologia mais interessante, pois permite
um aumento de 105 kWh/tc na gerao de eletricidade. Em relao biodigesto da vinhaa, h tambm um ganho na gerao, mas em menor escala
(20 kWh/tc).
De acordo com os resultados termoeconmicos, a gaseificao da vinhaa e da palha da cana implica uma elevao no custo da eletricidade gerada.
Todavia, os resultados mostraram que o custo de gerao da eletricidade
muito mais sensvel em relao ao custo da vinhaa e ao custo do bagao
do que em relao ao custo da palha. Vale destacar que o custo atribudo
vinhaa diz respeito ao custo de oportunidade da mesma, uma vez que a
aplicao da vinhaa nas lavouras de cana permitiria uma reduo no uso
de fertilizantes e poderia incrementar a produtividade. Alm disso, o preo
atribudo ao bagao de cana tambm discutvel, e uma anlise mais refinada envolvendo os processos de extrao do caldo e produo do bagao
seria recomendada.
Em termos econmicos, o Caso 1 ainda se mostra como o caso menos arriscado, uma vez que apresenta o menor tempo de retorno do investimento
e os maiores valores para a Taxa Interna de Retorno (TIR). Para todos os
outros casos analisados, o tempo de retorno do investimento mais longo,
e para os atuais preos de venda da eletricidade (em torno de R$ 150,00/
MWh) no haveria retorno do investimento mesmo para um perodo de
vinte anos. Entretanto, para os Casos 2 e 5, se a eletricidade fosse vendida
a R$ 180,00/MWh (que um preo reivindicado pelo setor), seria possvel obter retorno do investimento antes mesmo da metade da vida til das
plantas (dez anos). Isso poderia trazer maior atratividade para esses casos,
especialmente para o Caso 5 (usina idealizada, com equipamentos modernos e eficientes), uma vez que esse caso apresenta uma grande gerao de
eletricidade (227 kWh/tc), alm da maior eficincia de aproveitamento da
biomassa (47,1%) e, para um preo de venda da eletricidade de R$ 180,00/
MWh, a TIR obtida chegaria a 18,3%.
746
importante salientar que a tecnologia BIG-GTCC aplicada para gaseificao da palha da cana ainda est longe de se tornar comercial, e sua
maturidade tecnolgica no pode ser esperada nos prximos anos. Porm,
seu desenvolvimento tem sido constante e crescente, de modo que, em longo prazo, essa tecnologia poder se tornar uma alternativa interessante para
o setor e contribuir no sentido de se evitar uma eventual crise de abastecimento de eletricidade.
Por fim, a realizao de um estudo mais amplo, envolvendo todo o sistema de extrao do caldo e produo de bagao, alm dos processos de
fabricao do lcool e do acar, permitiria uma melhor determinao dos
custos dos insumos utilizados e mostraria o impacto das novas tecnologias
no sistema como um todo.
Consideraes finais
Em relao ao que foi exposto neste captulo, ficaram claros a importncia e o potencial do setor sucroalcooleiro para produo de eletricidade
para comercializao, por meio do processo de cogerao, mediante novos
empreendimentos e/ou ampliao/repotencializao de usinas j existentes, com a utilizao de novos equipamentos e tecnologias que permitam
um melhor aproveitamento energtico e, em especial, em reas de expanso
da chamada agricultura da energia, estabelecidas no Plano Nacional de
Agroenergia do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento, que
incluem principalmente a regio oeste paulista e os Estados de Mato Grosso do Sul e Gois.
Vale destacar que em estudos futuros, alm de anlises termodinmica, termoeconmica e econmica, sero incorporadas anlises de impacto
ambiental e sustentabilidade.
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Parte IV
Biorrefinarias, alcoolqumica
e oleoqumica
21
Da biotecnologia biorrefinaria
Jonas Contiero, Roberta Barros Lovaglio,
Fabricio Coutinho de Paula, Paulo Avila Neto,
Mariana Cortezi, Mary Helen Palmutti,
Luciana Fontes Coelho, Kate Cristina Blanco
Introduo
Recentes avanos na biotecnologia e a grande preocupao atual com os
efeitos provocados no meio ambiente, alm da sustentabilidade que pode
ser obtida por meio das fontes de recursos naturais, tm direcionado para
uma mudana de paradigma em relao s indstrias qumicas, principalmente no que concerne a obteno de produtos que podem ser produzidos
mediante via microbiana. Atualmente grandes indstrias farmacuticas
tm dedicado parte do desenvolvimento de suas pesquisas rea de bioprocessos. Pode-se observar um grande movimento industrial preocupado
em desenvolver seus produtos tendo por base a biomassa, e no mais os
insumos da indstria petrolfera. Embora o potencial em termos de petrleo seja enorme, deve-se ressaltar que hoje em dia a procura por produtos
denominados amigos do meio ambiente j e uma realidade. Hoje notrio
que grandes indstrias da rea de petrleo tm dirigido seus departamentos
de pesquisa para a rea de transformao da biomassa reutilizvel. Aliado
a esse fato deve-se ressaltar o grande potencial brasileiro em termos de reas agriculturveis e o resduo dessa agroindstria que pode ser aproveitado para a produo de insumos com alto valor agregado. Neste captulo
pretende-se introduzir algumas importantes aplicaes em biotecnologia
754
BIORREFINARIAS, ALCOOLQUMICA E OLEOQUMICA
e recentes desenvolvimentos de tecnologias de bioprocesso para a utilizao de biomassa, com foco principal na bioconverso industrial das fontes
renovveis em qumicos de interesse. O conceito e os princpios de biorrefinaria integrada para a obteno de alimentos, energia e produtos industriais
tambm sero tratados aqui.
Biotecnologia industrial: histria e aplicao

A biotecnologia tem sido apontada como a grande inovao do sculo
XX e tem sido aplicada a diversos segmentos da vida humana, desde a produo de insumos para a sade humana e para a agricultura at a produo
de insumos industriais, como pode ser observado atravs da Figura 21.1.
Biotecnologia, no sentido mais amplo, pode ser definida como o uso de
microrganismos vivos ou parte deles para fazer ou modificar produtos, desenvolver plantas ou animais ou desenvolver outros microrganismos para
usos especficos. O uso da biotecnologia j conhecido desde 6000 a.C.,
quando nossos ancestrais faziam uso de alimentos e bebidas fermentados,
mas o conhecimento do ser responsvel pela transformao somente veio a
ser conhecido em 1857, quando Pasteur mostrou ser um microrganismo o
responsvel por essa transformao. Em 1910, a indstria de fermentao
nasce e se torna rapidamente uma potncia na produo de etanol e solventes (acetona e butanol), continuando a se desenvolver com a produo de
cido ctrico e penicilina em 1923 e 1944, respectivamente. Com a descoberta do petrleo e o desenvolvimento da indstria petrolfera em 1950, os
insumos produzidos por fermentao tendo como fonte de carbono o acar foram substitudos por derivados do petrleo, utilizando-se da sntese
qumica.
Aps a primeira crise do petrleo, na dcada de 1970, crescem as discusses sobre a exausto do combustvel fssil e aumenta a preocupao
com pesquisas sobre o desenvolvimento de tecnologias com base em fontes
renovveis de energia; entretanto, com algumas excees, o baixo custo do
petrleo no permitiu o desenvolvimento mais profundo daquelas pesquisas. Entretanto, com as discusses atuais em torno da mudana da matriz
energtica, a questo da sustentabilidade e a procura por processos menos
agressivos ao meio ambiente, associados ao preo do petrleo, a produo
DA BIOTECNOLOGIA BIORREFINARIA
755
de insumos com base na biotecnologia tornou-se atrativa. A Tabela 21.1

mostra a evoluo da biotecnologia, e a Tabela 21.2 nos permite verificar a
produo atual de insumos obtidos por meio da fermentao.
Figura 21.1 Aplicaes da biotecnologia em vrios setores do mercado
Tabela 21.1 Desenvolvimento histrico da biotecnologia

Ano
Evento
6000 a.C.
Bebidas alcolicas, po e queijo obtidos por fermentao.
1857
Pasteur prova que a fermentao causada por microrganismo.
1910
Desenvolvimento da indstria de fermentao (combustveis

e produo de solvente.
1923
Produo de cido ctrico por fermentao.
1944
Produo de penicilina.
1953
Elucidao da estrutura do DNA.
1973
A tecnologia do DNA recombinante torna possvel a engenharia

gentica.
1982
Produo comercial de protena recombinante (produo de

insulina humana).
756
Tabela 21.2 Produo de aminocidos via fermentao

Aminocido
L-glutamato
Produo
1,5 tonelada (fermentao)
L-lisina
600 mil toneladas (fermentao-170g/L)
DL-metionina
50 mil toneladas (sntese qumica)
Glicina
22 mil toneladas (sntese qumica)
L-treonina
L-cido asprtico
10 mil toneladas (catlise enzimtica)
L-fenilalanina
L-cisteina
3 mil toneladas (catlise enzimtica)
L-glutamina
2.200 toneladas (fermentao)
L-arginina
1.000 toneladas (fermentao)
L-triptofano
500 toneladas (fermentao)
L-valina
L-leucina
Fonte: Demain, 2010
A crise do leo em 1970 trouxe preocupaes em relao exausto do

petrleo e deixou claro que o desenvolvimento econmico tendo por base a
indstria petrolfera no era sustentvel. Embora houvesse extensiva preocupao no desenvolvimento de tecnologia por meio de fontes renovveis,
o preo baixo do petrleo no permitiu o seu desenvolvimento. Somente
agora, com o preo alto do petrleo e a grande preocupao em relao ao
meio ambiente, aliados busca de novas alternativas em termos de energia
e produtos obtidos de fontes renovveis, est-se permitindo a mudana de
paradigma em relao produo de energia no mundo. No momento atual
a indstria de fermentao tem como produtos drogas, alimentos e alimentos animais, alm do etanol, que um dos produtos lderes em termos de
mercado. A Tabela 21.3 traz alguns metablitos primrios obtidos por mutagnese e seleo tcnica gentica moderna , microbiologia industrial e
uso de engenharia bioqumica, mostrando que os microrganismos utilizados produzem em excesso em relao ao necessrio para seu crescimento.
Altos nveis de cidos orgnicos so obtidos por meio da microbiologia
industrial, podendo ser citado o cido ltico, com uma produo de 250 mil
toneladas por ano.
757
Tabela 21.3 Superproduo de alguns metablitos primrios

Requerido para
crescimento (mg/L)
Produo (mg/L)
Razo produo/
requerido
Lisina
250
100 mil
4x102
cido glutmico
300
125 mil
4x102
cido inosnico
25
30 mil
1,2x103
Riboflavina
0,5
25 mil
5x104
0,0001
150
1,5x104
Produto
Vitamina B12
Fonte: Demain, 2010
Tabela 21.4 Produo de cidos orgnicos

cidos orgnicos
Produo
L(+) Ltico
195g/L (Lactobacillus lactis)
D(-) Ltico
120g/L (Corynebacterium glutamicum)
cido kjico
41g/L (Aspergillus oryzae)
cido pirvico
135g/L (Saccharomyces cerevisiae)
cido glucnico
504g/L (Aureobasidium pullulans)
cido fumrico
107g/L (Rhizopus arrhizus)
cido succnico
146g/L (Corynebacterium glutamicum)
cido mlico
113g/L (Aspergillus flavus)
cido ctrico
200 g/L (Aspergillus niger)
cido chiqumico
90g/L (Escherichia coli)
Fonte: Sanches e Demain, 2008
A biotecnologia tem atuado em vrios setores, como se destaca a seguir.
Indstria farmacutica
Aps a elucidao do DNA por Watson e Crick, em 1953, avanos na
biologia molecular e no desenvolvimento da tecnologia de DNA recombinante permitiram o nascimento da indstria de biotecnologia atual. O
desenvolvimento da primeira protena humana para fins teraputicos (insulina humana), em 1982, permitiu que ocorresse uma grande aplicao de
recursos no desenvolvimento de drogas teraputicas. Hoje estima-se que o
mercado est acima de US$400 bilhes e que 20% da produo de insumos
ocorram por via biotecnolgica, quando no somente a tecnologia do DNA
recombinante utilizada, mas tambm a biocatlise, a qual utiliza enzimas
ou clulas como catalisador.
758
Tabela 21.5 Mercado de anti-infectivo em 2000

Composto
Valor de mercado (US$)
Cefalosporina
9,9 bilhes
Penicilinas
8,2 bilhes
Outros beta-lactamas
1,5 bilho
Antivirais (excluindo vacinas)
10,2 bilhes
Quinolonas
6,4 bilhes
Antifngicos e antiparasitas
4,2 bilhes
Aminoglicosdeos
1,8 bilho
Tetraciclinas
1,4 bilho
Outros antibactericidas
6,1 bilhes
Outros anti-infectivos
5,3 bilhes
Total
55 bilhes
Fonte: Demain, 2010
Agricultura e alimentos
A biotecnologia tambm tem tido um grande impacto sobre as indstrias agrcola e de alimentos. Plantas transgnicas e culturas que contriburam para o aumento da produtividade agrcola so utilizadas na produo
de alimentos e rao animal. Culturas transgnicas j eram avaliadas em
mais de US$20 bilhes em 2002, e espera-se rpido aumento desse valor
com o uso de plantas transgnicas para produzir produtos farmacuticos,
produtos qumicos e combustveis (Gavrilescu e Chisti, 2005). Alm disso,
grandes empresas agrcolas no Brasil vm expandindo agressivamente seus
negcios no mercado de produtos de valor agregado para alm do alimento
tradicional humano e animal.
Indstria qumica
A indstria qumica uma das maiores indstrias de transformao, e
consiste em quatro setores principais: produtos qumicos de commodities,
especialidades qumicas, produtos de higiene e produtos farmacuticos,
com mais de US$2 trilhes em vendas em todo o mundo (Willke e Vorlop,
2004). A biotecnologia pode oferecer benefcios econmicos e ambientais
para a indstria qumica e tem um grande potencial para alcanar a produo sustentvel de produtos existentes e novos a partir de matrias-primas
759
renovveis. Com poucas excees, a produo de insumos qumicos tem

sido, em grande parte, construda sobre a plataforma de hidrocarbonetos.
Como a produo de energia no renovvel de fssil tem seu custo cada vez
mais oneroso e, consequentemente, preos ao consumidor cada vez mais altos nesses ltimos anos, o interesse em produzir esses insumos sobre outra
plataforma em que se utilizem fontes renovveis tem crescido. O potencial
para aplicaes biotecnolgicas nas indstrias qumicas e de energia enorme, embora at agora o impacto da biotecnologia nesses setores do mercado seja muito pequeno em termos de vendas e quota de mercado. Essa
mudana esperada para os prximos anos, uma vez que vrias grandes
empresas qumicas e agrcolas desenvolveram novas tecnologias para produzir economicamente produtos qumicos de base biolgica, substituindo
assim aqueles obtidos por meio da indstria de petroqumicos e produtos
derivados de combustveis fsseis.
A produo biotecnolgica de substncias qumicas menos agressiva
ao meio ambiente (ambientalmente amiga) do que os mtodos qumicos,
porque biocatalisadores (enzimas ou clulas) so altamente seletivos, resultando em maior rendimento do produto, com menos ou nenhum subproduto, os quais geralmente so difceis de separar. A sntese qumica muitas vezes requer solventes txicos e gera grandes quantidades de resduos,
causando problemas de poluio. Um exemplo a produo de cefalexina,
um antibitico semissinttico derivado de cefalosporina C. Mtodos de
fermentao e enzimtico podem reduzir o nmero de etapas e ao mesmo
tempo diminuir a formao de resduos (Vandamme e Bienfait, 2004). Um
processo enzimtico para a acrilamida desenvolvido pela Mitsubishi Rayon
usa aproximadamente 20% menos energia que o processo tradicional. Tambm a DuPont e a Genencor desenvolveram processo de produo de 1,3
propanodiol por E. coli recombinante a partir de milho como fonte de carbono (Kurian, 2005). Esse insumo (1,3 propanodiol) produzido por meio
da biotecnologia elemento bsico na produo de polmero e consome de
30% a 40% menos energia (Anonymous, 2006). A Nature Works produz
cido polilctico (PLA) de cido lctico a partir de milho como fonte de
carbono. O uso de PLA biodegradvel deve crescer rapidamente em materiais de embalagem e em fibras txteis, assim como em aplicaes mdicas
e farmacuticas. A Dow Chemical e a ADM esto desenvolvendo poliis
a partir de fontes renovveis, como carboidratos e glicerol. Alm disso, a
760
DSM est comercializando produtos derivados do cido succnico obtido a

partir do milho. Outro insumo de grande perspectiva futura so os polihidroxialcanoatos (PHA), obtidos a partir de fontes renovveis e que podem
substituir polmeros que so produzidos pela indstria petrolfera. Esses
polmeros podem substituir polisteres, poliacrlicos, poliamidas e poliuretanos (Willke e Vorlop, 2006).
Combustvel e energia
A biomassa tem potencial energtico tanto como combustvel para
aquecimento e gerao de energia quanto como matria-prima para a produo de produtos qumicos e materiais. Combustveis e produo de energia a partir de biomassa representam, portanto, outro segmento de mercado importante para a biotecnologia. Biocombustveis, incluindo etanol,
biodiesel, butanol, metano e hidrognio, podem ser produzidos a partir de
recursos renovveis em substituio de alguns combustveis fsseis. O Brasil aumentou sua rea de plantao de cana-de-acar para a produo de
etanol, com uma produo anual acima de 15 bilhes de litros, satisfazendo
mais de 33% da demanda de gasolina no pas (Lin e Tanaka, 2006). Materiais lignocelulsicos so os mais abundantes recursos renovveis na Terra,
e as novas tecnologias esto sendo desenvolvidas para seu uso, no futuro, de
forma mais econmica como matria-prima para combustveis e produtos
qumicos (Lynd et al.,2005).
Aps esse breve relato sobre as possibilidades do uso de biomassa na
produo de energia e insumos, apresentamos alguns exemplos de como
o setor de biotecnologia poderia desenvolver processos para a produo de
determinados insumos, que so, na maioria, importados e que, caso fossem
produzidos no Brasil, fariam frente ao mercado internacional, uma vez que
possumos a biomassa necessria tal realizao.
Polihidroxialcanoatos (PHA) e glicerol de biodiesel:

um futuro a partir de fontes de energias renovveis
Nas ltimas dcadas, o desenvolvimento de tecnologias em cincias de
materiais possibilitou a criao de polmeros sintticos com diferentes pro-
761
priedades fsico-qumicas, originando produtos plsticos com uma maior

integridade mecnica e excelente durabilidade. Esse progresso contribuiu
para um aumento notvel da versatilidade desses produtos, os quais passaram a ser utilizados em diversas aplicaes, especialmente na indstria
mdica e alimentcia, resultando em um aumento da produo mundial de
plsticos de 1,5 milho de toneladas em 1950, para 245 milhes de toneladas em 2008. Assim, o estabelecimento de uma sociedade caracterizada
pelo alto consumo desses produtos, associado incidncia significativa
de descarte inapropriado destes, passou a ser um srio problema para a
administrao pblica, j que esses polmeros sintticos, geralmente derivados do petrleo, no so biodegradveis e acabam por ser extremamente persistentes no meio-ambiente, acumulando-se nos ecossistemas
(Chanprateed, 2010).
Ao lado do impacto ambiental gerado pela utilizao de produtos plsticos, tem-se verificado um aumento gradativo sobre o preo do petrleo e
de seus derivados. Estimativas apontam um declnio significativo na produo desse combustvel fssil desde 2010, at sua total escassez em 2050,
tornando-se necessrio o estabelecimento de fontes de energia alternativas
e ecologicamente viveis, em substituio aos produtos derivados do petrleo. Dessa forma, a produo de polmeros biodegradveis a partir de
fontes renovveis tornou-se atrativa industrialmente (Silva, Mack e Contiero, 2009).
Entre os biopolmeros, os polihidroxialcanoatos (PHA) tm recebido
considervel ateno devido ao seu alto potencial de biodegradao. Os
PHA representam uma classe de polmeros produzidos por meio da fermentao bacteriana, sendo sintetizados e acumulados como reserva de
carbono por esses microrganismos. O polmero obtido geralmente apresenta de 103 a 104 monmeros, podendo ser acumulado por bactrias gram-positivas e negativas na forma de incluses citoplasmticas com 0,2-0,5m
de dimetro (Anderson e Dawes, 1990; Steinbchel, 1991; Steinbchel e
Fchtenbusch, 1998). A estrutura, as propriedades fsico-qumicas, a composio monomrica, o nmero e o tamanho dos grnulos so variveis e
dependem do microrganismo produtor. Esses polmeros so semicristalinos e, dependendo de sua composio, podem apresentar temperaturas de
fuso variando entre 120C e 180C. Os PHA so compostos de monmeros de cidos hidroxialcanoicos e/ou hidroxialcenoicos, formando poli-
762
steres de cadeia aliftica, apresentando uma grande variedade estrutural.

Por meio do tipo de microrganismo ou substrato utilizado durante o crescimento, as molculas dos monmeros obtidos podem conter um simples
radical metil a estruturas funcionais, contendo ligaes insaturadas duplas
ou triplas, halognios ou grupos benzil, cianida e at epxi. A estrutura e
a composio dos monmeros influenciam diretamente nas propriedades
fsicas desses polmeros. Os PHA podem ser quebradios, como o polihidroxibutirato (PHB), produzido por vrias espcies de bactrias; flexveis,
como os PHB-co-HV, os quais consistem em um copolmero formado de
3-hidroxibutirato (HB) e 3-hidroxivalerato (HV); alm dos PHB-co-HHx,
copolisteres compostos por HB e 3-hidroxihexanoato (HHx). Tambm
podem apresentar propriedades elastomricas quando constitudos pelos monmeros 3-hidroxioctanoato (3HO) e 3-hidroxidecanoato (3HD)
(Chen, 2003).
Entre todos os PHA caracterizados, os grupos alquil, os quais ocupam
a configurao R no carbono C-3 da molcula de ster, variam de um
tomo de carbono (C-1) at mais que quatorze carbonos (C-14) por monmero. Assim, os PHA podem ser classificados em trs maiores classes, por
meio do nmero de tomos de carbono presentes em sua estrutura monomrica: PHA de cadeia curta ou scl-PHA (short chain length-PHA), com
seus monmeros constitudos por at cinco tomos de carbonos; PHA de
cadeia mdia ou mcl-PHA (medium chain length-PHA), apresentando monmeros com seis a quatorze carbonos; e por fim, PHA de cadeia longa ou
lcl-PHA (long chain length-PHA), cujos monmeros contm mais de quatorze tomos de carbono (Suriyamongkol et al., 2007).
Os microrganismos capazes de acumular PHA so geralmente bactrias
gram-positivas e negativas, existindo mais de 300 espcies, distribudas em
mais de 75 gneros diferentes, as quais produzem mais de 150 tipos desse
polmero. De um modo geral, a produo de PHA pode ser dividida em
duas vias, de acordo com as caractersticas de acmulo desse polmero. Na
primeira, o PHA comea a ser produzido quando h um excesso de fonte
de carbono e o crescimento celular interrompido pela ausncia de um nutriente essencial, como o N, P, Mg, K ou S. A segunda apresenta produes
de PHA associadas ao crescimento celular. A bactria Cupriavidus necator (classificada anteriormente como Alcaligenes eutrophus, depois como
Ralstonia eutropha, e por ltimo como Wautersia eutropha), uma conhecida
763
produtora de PHA, pertence ao primeiro grupo, enquanto Alcaligenes lactus, Azotobacter beijerinckii e E. coli recombinante pertencem ao segundo.
Dessa forma, o desenvolvimento de estratgias de cultivo para cada tipo
de microrganismo torna-se fundamental. As bactrias produtoras de PHA
em condies limitantes de nutrientes apresentam melhores produes em
sistemas de batelada dividida em duas etapas, enquanto os microrganismos
produtores associados ao crescimento demonstram melhores resultados em
sistemas de alimentao contnua (ibidem).
Entre uma grande variedade de bactrias produtoras de PHA, o PHB
o polmero mais comumente encontrado entre diversas espcies. Embora outros tipos de PHA sejam observados, o PHB, o PHB-co-HV e o
PHB-co-HHx so os mais produzidos industrialmente e explorados em escala comercial. A produo industrial de PHA exige linhagens de microrganismos com o mximo de caractersticas associadas s melhoras de produo, tais como rpido crescimento em fontes de carbono de baixo custo,
alta porcentagem de acmulo de PHA, alta eficincia de transformao do
substrato em produto, obteno de um polmero facilmente extrado das
clulas bacterianas e bem adaptado s tcnicas de separao, alm de apresentar-se inofensivo a seres humanos, animais e ao meio ambiente. Ainda,
uma linhagem bacteriana ideal para a produo de PHA deve apresentar
baixa demanda de oxignio, observando-se um crescimento com alta densidade de clulas e baixa limitao por oxignio, produzindo polmeros de
alto peso molecular. Devido grande dificuldade de isolamento de uma
linhagem bacteriana adaptada s condies ideais, a produo industrial
desse biopolmero tem-se concentrado na obteno de PHA a partir de Alcaligenes latus e Cupriavidus necator (Chen, 2003).
Atualmente, um pequeno grupo de bactrias, principalmente espcies
de Pseudomonas, tem despertado interesse na produo de PHAmcl. Alm
disso, com o desenvolvimento dos estudos genticos referentes sntese
de PHAmcl, tem-se isolado genes na tentativa de compreender a dinmica do metabolismo dessas bactrias, estabelecendo uma relao com a
produo de PHA a partir de cidos graxos e outras fontes de carbono
menos convencionais.
As aplicaes dos PHA esto diretamente relacionadas s propriedades
desses polmeros, sendo termoplsticos e/ou elastmeros, insolveis em
gua, no apresentam toxicidade e so biocompatveis, caractersticas que
764
os tornam atraentes para a indstria, sendo utilizados na elaborao de

produtos de higiene e embalagens, alm de aplicaes no setor mdico e
farmacutico, particularmente na produo de cpsulas de medicamentos
e drogas agrcolas, tambm sendo utilizados na obteno de prteses e enxertos de tecidos humanos e na medicina veterinria. O PHB possui caractersticas similares ao polipropileno (PP), de origem petroqumica, ambos
apresentando um alto grau de cristalinidade e temperaturas de fuso muito
prximas. Como j foi mencionado, essas caractersticas podem ser alteradas com a adio de outros PHA, como o 3-hidroxivalerato (3HV), formando um copolmero com propriedades termomecnicas diferenciadas.
O copolmero com at 24% de 3HV produzido por Cupriavidus necator tem
sido comercializado desde 1976, quando a empresa inglesa Imperial Chemical Industries comeou a produzi-lo com o nome comercial Biopol. No
entanto, mesmo diante de vrias caractersticas interessantes para a indstria, a ampla introduo desses biopolmeros no mercado ainda torna-se
invivel devido aos elevados custos envolvidos no seu processo de produo. At 2006, as mdias de preos observadas na comercializao de PHB
e alguns copolmeros, como o PHB-HV, ainda eram muito superiores s
de outros biopolmeros, devido aos custos referentes matria-prima para
os cultivos, alm da extrao e processamento desses polmeros. A partir
de 2010, por meio do desenvolvimento de novas tecnologias e recentes
investimentos na produo de PHA, preos menores foram observados
no mercado, com cotaes prximas de US$ 2.00/kg. No entanto, esses
avanos ainda se distanciam muito dos preos de mercado dos polmeros
de origem petroqumica, como o polipropileno, cujas cotaes atingem no
mximo US$ 0.70/kg. Os custos destinados compra de matria-prima
para os cultivos de produo de PHB podem chegar a 40% da demanda
total (Chanprateed, 2010). Portanto, a utilizao de fontes de carbono e
outros nutrientes de baixos valores de mercado, assim como o emprego de
subprodutos industriais como insumos de cultivo, vem tornando-se uma
boa alternativa na minimizao dos custos de produo de PHA. Outra
soluo vivel seria vincular o processo de obteno desses biopolmeros
cadeia de produo de outros produtos provenientes de fontes renovveis, principalmente os biocombustveis, podendo, por meio da utilizao de seus subprodutos, gerar uma linha de produo de combustveis
e polmeros independentes daqueles derivados do petrleo e, ao mesmo
765
tempo, agregar valor a ambos os produtos, viabilizando seus processos

de produo.
Atualmente, as tecnologias mais difundidas e comumente aplicadas na
obteno de combustveis a partir de fontes renovveis so a produo de
etanol por meio da fermentao de acares provenientes da cana-de-acar, do milho e da beterraba, e a produo de biodiesel mediante a transesterificao de leos vegetais ou gordura animal com lcool para a produo
de steres (Yazdani e Gonzalez, 2007). Entre os combustveis alternativos,
o biodiesel tornou-se uma excelente opo devido s suas propriedades similares s do leo diesel, podendo ser utilizado em misturas com este combustvel ou substituindo-o totalmente sem a necessidade de ajustes nos
motores, aumentando a vida til destes por ser um timo lubrificante. O
biodiesel apresenta ainda menores riscos de exploso e, dessa forma, pode
ser mais facilmente armazenado e transportado. Alm disso, sua queima
produz menos poluentes, e sua utilizao contribui para a diminuio do
efeito estufa (Yuste e Dorado, 2006).
O estabelecimento do segmento de mercado do biodiesel e a crescente
adoo desse combustvel em programas de matrizes energticas de diversos pases, resultando na superproduo do subproduto glicerol, provocaram um aumento do nmero de pesquisas em biotecnologia voltadas para
o desenvolvimento de novas tcnicas de converso e aprimoramento das
vias de fermentao desse subproduto. A produo de glicerol equivalente a cerca de 10% do volume total de biodiesel produzido, e a utilizao desse subproduto tornou-se um desafio, pois seu emprego na indstria
de alimentos e cosmticos invivel sem um pr-tratamento e posteriores
processos de purificao. Assim, despertou-se o interesse pelo desenvolvimento de tecnologias de sntese de PHA, utilizando esse subproduto como
fonte de carbono em processos fermentativos.
A sntese de PHA a partir de glicerol pode ser considerada uma sntese a
partir de um substrato no relacionado, onde, geralmente, ocorre a reduo
da molcula de glicerol a acetil-CoA, produzindo variados tipos de monmeros de PHA, dependendo da linhagem bacteriana utilizada em cultivo.
As linhagens de P. aeruginosa apresentam uma composio de monmeros
essencialmente formada de HD (~70%), HO (~20%-25%), HHx (~5%) e
HDd (~5%) (Huijberts et al., 1992). Diferenas na proporo entre esses
766
monmeros obtidos poderiam ser atribudas a uma deficincia na assimilao da fonte de carbono (glicerol) na formao de um polmero tpico.
Alguns pesquisadores tm relatado produes de PHA a partir de glicerol puro. Koller et al. (2005) realizaram experimentos em biorreatores
obtendo esses polmeros a partir de soro hidrolisado de leite e glicerol lquido utilizando um microrganismo altamente osmoflico. Na ausncia de
precursores, observou-se a produo de PHB-co-HV em ambas as fontes
de carbono. Nesses processos fermentativos tambm se utilizou como fonte
de nitrognio o extrato de carne e farinha de osso, juntamente com a adio
de glicerol como fonte de carbono, resultando na produo de PHA. Costa et al. (2009), em seus estudos com linhagens de P. aeruginosa, tambm
realizaram experimentos utilizando glicerol para a obteno simultnea de
PHA e biossurfactantes. As linhagens LMI 6c e 7a apresentaram valores
de 22,2% e 16,8% de acmulo de polmero celular, respectivamente. No
entanto, ainda so escassos trabalhos publicados sobre a produo desses
polmeros utilizando glicerol bruto proveniente da produo de biodiesel.
A utilizao de glicerol bruto nos meios de cultivo muitas vezes exerce um
efeito negativo sobre o crescimento celular e acmulo de polmero. Tal fato
deve-se presena de ons de sdio nesse insumo, provenientes do catalisador NaOH utilizado no processo de transesterificao de leos e gorduras,
realizado para a produo de biodiesel. O excesso desses ons provavelmente provoca mudanas na permeabilidade da membrana celular dos microrganismos, dificultando o acesso fonte de carbono. Mothes et al. (2007)
avaliaram a produo de PHB utilizando glicerol puro e glicerol bruto proveniente de diferentes usinas de biodiesel. Em seus experimentos, observaram o acmulo intracelular do polmero em duas espcies bacterianas,
Paracoccus denitrificans e Cupriavidus necator (anteriormente classificada
como Ralstonia eutropha), sendo esta ltima largamente conhecida por sua
capacidade em produzir altas concentraes celulares de PHB. Os maiores
acmulos celulares de polmeros foram obtidos nos cultivos com C. necator
a partir de glicerol puro (70%). Ao utilizar glicerol bruto, foi relatado um
efeito negativo sobre o crescimento celular e o acmulo de polmero. Nos
ensaios com esse substrato foi observado um mximo acmulo de 48% da
massa seca celular (MSC) obtida. Esses efeitos tambm foram relatados por
Cavalheiro et al. (2009), apresentando um acmulo mximo de polmero
a partir de glicerol bruto de 38% da MSC utilizando uma linhagem de C.
767
necator. Ashby, Solaiman e Foglia (2004) realizaram cultivos com linhagens

de P. corrugata e P. oleovorans utilizando glicerol bruto (subproduto de usina de biodiesel com 40% de glicerol e 36% de cidos graxos e steres) para
a produo de PHA. Os experimentos foram conduzidos a 30C por 72
horas, variando-se concentraes desse insumo de 1% a 5%. A maior produo de polmero foi verificada em 5% de glicerol bruto para P. oleovorans
(0,4g/L) e em 2% desse insumo para P. corrugata (0,7g/L).
Embora alguns trabalhos cientficos venham sendo observados nessa
recente linha de pesquisa cientfica, ainda torna-se necessria a descoberta
de novos microrganismos capazes de utilizar o glicerol bruto proveniente
da produo de biodiesel para a obteno de PHA, alm da elaborao e
otimizao de tcnicas de cultivo empregadas na produo desses compostos a partir desse subproduto. Dessa forma, estabelece-se um novo desafio
biotecnolgico fundamentado na elaborao de uma cadeia de produo de
biodiesel e biopolmeros, visando obteno de novas commodities a partir de fontes renovveis.
Biossurfactantes
Os biossurfactantes so detergentes biolgicos sintetizados por bactrias, leveduras e fungos filamentosos cultivados em diferentes fontes de
carbono. Esses compostos so constitudos por uma poro hidrofbica,
usualmente uma cadeia hidrocarbnica de um ou mais cidos graxos, que
podem ser saturados, insaturados, hidroxilados ou ramificados, ligados a
uma poro hidroflica que pode ser um ster, um grupo hidroxi, fosfato,
carboxilato ou carboidrato (Cameotra e Makkar, 1998).
As pores hidroflicas e hidrofbicas presentes na molcula de surfactante tendem a se distribuir na interface de fases fluidas com diferentes
graus de polaridade (leo/gua e gua/leo). Esta distribuio das molculas responsvel pela principal propriedade desses compostos, que a
capacidade de reduo das tenses superficial e interfacial. Essas propriedades os tornam adequados para serem utilizados em diferentes aplicaes
industriais envolvendo detergncia, emulsificao, lubrificao, capacidade espumante, capacidade molhante, solubilizao e disperso de fases
(Banat et al., 2000).
768
Os surfactantes sintticos so usualmente classificados de acordo com o

grupo polar, entretanto os biossurfactantes so diferenciados com base em
sua natureza bioqumica. As principais classes de biossurfactantes incluem
os glicolipdios, os lipopeptdios e a lipoprotena, os cidos graxos e os fosfolipdios e biossurfactantes polimricos (Makkar e Cameotra, 2002). A
Tabela 21.6 mostra as principais classes de biossurfactantes e os respectivos
microrganismos produtores.
Tabela 21.6 Principais classes de tensoativos produzidos por microrganismos
Biotensoativo
Microrganismo
Glicolipdios
Ramnolipdios
Pseudomonas sp.
Burkholderia sp.
Rhodococcus erythopolis
Trealolipdios
Nocardia erythopolis
Mycobacterium sp.
Soforolipdios
Celobiolipdios
Torulopsis bombicola, T.
Apcola e T. petrophilum
Ustilago zeae
Ustilado maydis
Lipopeptdios e lipoprotenas
Peptidolipdio
Bacillus lincheformis
Viscosin
Pseudomonas fluorescens
Surfactin
Bacillus subtilis
cidos graxos, fosfolipdios

cidos graxos
Corynebacterium lepus
Fosfolipdios
Thiobacillus thiooxidans
Surfactantes polimricos
Emulsan
Anthrobacter calcoaceticus
Fonte: Modificado de Desai e Banat, 1997
Os ramnolipdios sintetizados por Pseudomonas aeruginosa so glicolipdios cuja poro hidroflica composta por molculas de ramnose, e a poro hidrofbica, por cidos hidroxialcanoicos. Esses biotensoativos podem
reduzir a tenso superficial da gua de 72mN/m para 30mN/m (Abalos et
al., 2001), e sua concentrao micelar crtica est entre 50mg/l e 65mg/L
(Mata-Sandoval et al., 1999).
769
Os biossurfactantes produzidos por microrganismos vm despertando

considervel interesse nos ltimos anos devido sua natureza biodegradvel, baixa toxicidade e diversidade de aplicaes. Apesar das vantagens
apresentadas, os biotensoativos no so amplamente utilizados comercialmente devido aos altos custos de produo, o que est associado baixa
produtividade e ao uso de substratos caros.
De acordo com Mukherjee et al. (2006), trs estratgias devem ser
adotadas para tornar os custos do processo de produo mais baixos: (1)
substrato utilizao de resduos ou matria-prima de baixo custo; (2)
desenvolvimento de bioprocessos eficientes para a produo e recuperao
do produto, incluindo otimizao das condies de cultivo; e (3) desenvolvimento de mutantes ou linhagens recombinantes para aumentar o rendimento do biossurfactante.
Fatores que influenciam a produo

Entre os parmetros que influenciam o tipo e a quantidade de produto
formado esto a natureza da fonte de carbono, possveis limitaes nutricionais e parmetros fsicos e qumicos, como aerao, agitao, gerao de
espuma, temperatura e pH (Fiechter, 1992; Chang et al., 2005).
Elevadas propores C/N (Guerra-Santos et al., 1984; Raza et al.,
2007; Wu et al., 2007) e C/P (Mulligan et al., 1989) estimulam a sntese de ramnolipdios, enquanto altas concentraes de ctions bivalentes,
especialmente ferro, so inibitrias (Guerra-Santos et al., 1986; Venkata,
Ramana e Karanth, 1989). Benincasa e Accorsini (2008) avaliaram a produo de ramnolipdios por P. aeruginosa LBI sob diferentes propores C/N
e alcanaram a mais alta concentrao, 7,3g/L, com a proporo C/N de
8/1. A utilizao de NH+4, glutamina, asparagina e arginina como fonte
de nitrognio inibe a produo de ramnolipdios, enquanto NO-3, glutamato e aspartato promovem a sntese (Mulligan e Gibbs, 1989; Venkata, Ramana e Karanth, 1989; Khler et al., 2000). De acordo com alguns autores,
o nitrato a melhor fonte de nitrognio a ser utilizada, pois estimula uma
alta expresso de rhlAB, que o principal gene responsvel pela sntese de
ramnolipdios (Venkata, Raman E Karanth, 1989; Manresa et al., 1991;
Arino et al., 1996; Henning et al., 2008). De acordo com Manresa et al.
(1991), a preferncia por essa fonte de nitrognio pode ser devido ao fato de
770
P. aeruginosa ser apta a fazer denitrificao e, portanto, poderia se utilizar

nitrato como aceptor de eltrons, mesmo na presena de oxignio.
Fatores ambientais e condies de crescimento, como pH, temperatura, agitao e disponibilidade de oxignio, afetam a produo de biossurfactantes, interferindo no crescimento e na atividade celular (Desai e Banat, 1997). A produo de ramnolipdios por Pseudomonas sp. foi mxima
quando o pH foi mantido entre 6 e 6,5; j acima de 7, a produo caiu bruscamente (Guerra-Santos et al., 1984).
Durante a produo por leveduras, a sntese de biossurfactantes aumentou quando as taxas de agitao e aerao foram elevadas (Yeh et al., 2006).
Para Sheppard e Cooper (1990), a transferncia de oxignio um dos parmetros-chaves para a otimizao e produo em grande escala de surfactina
por B. subtilis.
Um desafio enfrentado durante a produo aerbica de biossurfactante
a formao de um grande volume de espuma, devido agitao e aerao
do caldo de cultivo (Chayabutra et al., 2001). Com a finalidade de reduzir o volume de espuma, Adamczak e Bednarski (2000) adicionaram 4%
de leo de soja aps 48 horas e 96 horas de cultivo, porm houve queda na
produo de 45g/L para 28g/L. Uma alternativa encontrada por Mller
et al. (2010) foi o emprego de um quebrador mecnico de espuma, o que
permitiu aumentar o volume de trabalho do reator sem que houvesse perda de fermentaes devido ao extravasamento de meio fermentado, o que,
alm de prejuzos financeiros devido perda de produtividade, aumenta os
riscos de contaminao (Abdel-Mawgoud et al., 2011).
Substratos alternativos: resduos agroindustriais

como fonte de carbono
A utilizao de fontes alternativas de nutrientes, facilmente disponveis
e de baixo custo, tais como subprodutos agrcolas ou de processamento
industrial, pode reduzir o problema econmico da produo de biossurfactantes. Estima-se que a matria-prima seja responsvel por cerca de 10%
a 30% dos custos totais de produo em muitos processos biotecnolgicos
(Mukherjee et al., 2006). Alm disso, o aproveitamento de resduos pode
contribuir para a reduo da poluio ambiental, bem como permitir a valorizao econmica dos resduos que seriam descartados.
771
O glicerol um subproduto que corresponde a 10% (v/v) da produo

de biodiesel (Mu et al., 2006). No Brasil, a adio de 2% de biodiesel ao
diesel de petrleo (B2) obrigatria desde 2008, e essa porcentagem deve
aumentar para 5% (B5) em 2013, gerando grande quantidade de glicerol
devido ao aumento da produo do biocombustvel. Na Unio Europeia,
companhias de produo de biodiesel enfrentam problemas em relao ao
excesso de glicerol produzido, j que sua disposio dispendiosa economicamente, e o seu valor de mercado baixo. Uma soluo a esse entrave a
utilizao do glicerol como fonte de carbono em processos biotecnolgicos,
como a produo de biossurfactantes (Silva et al., 2009).
A sntese de ramnolipdios produzidos por Pseudomonas aeruginosa utilizando glicerol foi descrita por Zhang et al. (2005), que obtiveram 15,4g/L
do tensoativo. J Rahman et al. (2002) relatam uma produo de 1,77g/L,
enquanto Silva et al. (2010) alcanaram 3,5g/L de ramnolipdios. Esses
resultados confirmam o potencial da utilizao do glicerol como fonte de
carbono para a produo de biossurfactante.
Benincasa et al. (2010) propem o emprego de sistemas integrados para
a reduo dos custos de produo de ramnolipdios. Um exemplo desse sistema seria a combinao de resduos do processamento de leos vegetais e
da produo de etanol a partir da cana-de-acar, borra de leo e vinhaa.
No processo de produo de etanol gerado 10L de vinhaa para cada litro
de produto, constituindo um grande problema ambiental devido ao grande
volume que produzido. O emprego de borra de leo vegetal eficiente
para a produo de biossurfactante (Nitschke et al., 2005; Nitschke et al.,
2010; Lovaglio et al., 2010), entretanto necessria a adio de gua para
diluio e grande quantidade de cido para ajuste de pH, o que pode ser
contornado pela vinhaa, que um resduo aquoso com pH em torno de
3,5. Nesse sistema integrado obteve-se 6,5g/L de ramnolipdios, alm
de reduo de 94% na demanda qumica de oxignio da vinhaa (Benincasa
et al., 2010).
Outra fonte renovvel e de baixo custo para ser utilizada em processos
biotecnolgicos o melao de cana-de-acar. Patel e Desai (1997) utilizaram o melao associado gua de macerao de milho (AMM) para a
produo de biossurfactante, e obteve-se 0,24g/L de ramnolipdios.
A sntese de biossurfactante a partir de resduos provenientes da produo de bicombustveis pode reduzir os custos da produo e, consequen-
772
temente, permitir a substituio dos surfactantes qumicos por aqueles de

origem biolgica.
Biossurfactantes e suas aplicaes industriais

Os campos de utilizao dos biossurfactantes incluem a agricultura e as
indstrias farmacutica, petrolfera, de alimentos e bebidas, de papel, de
metal, de produtos de limpeza, de couro e txtil. So imensamente aplicados na indstria petrolfera, onde so utilizados na produo de petrleo ou
incorporados a formulaes de leos lubrificantes, assim como em biorremediao e disperso no derramamento de leo.
O biossurfactante pode ser adicionado ao local onde h contaminao
por petrleo e derivados, ou ainda, o microrganismo produtor pode ser
inoculado na rea impactada. A linhagem Pseudomonas aeruginosa LBI foi
capaz se consumir querosene, leo diesel e petrleo bruto como nica fonte
de carbono. A mais alta concentrao de ramnolipdio 9,9g/L foi alcanada com 30% de leo diesel (PIRLLO et al., 2008)
De acordo com Wang e Mulligan (2009), biossurfactantes podem ser
teis na remoo de arsnico de rejeitos da minerao. Outra aplicao
na remoo de cromo (VI) da gua e do solo. Ara e Mulligan (2008) relataram que houve retirada de 100% desse metal da gua quando se estabeleceram condies fsico-qumicas timas, como: pH 6,0, soluo com 2%
de ramnolipdios e temperatura de 25C.
A remoo e mobilizao de resduos de leo em tanques de estocagem
e a recuperao melhorada de petrleo tambm fazem parte dessa gama de
aplicaes. Alm da remoo de hidrocarbonetos, os ramnolipdios so efetivos tambm na remoo de metais, ou mistura de ambos, de locais contaminados (Mulligan, 2005).
Um estudo realizado por Qiuzhuo et al. (2008) comprovou a eficincia
dos ramnolipdios na decomposio de palha de arroz, aumentando em
22,3% a produo de aucares redutores quando se adicionou biossurfactante purificado ao meio de sacarificao hidroltica. Foi avaliado tambm
o efeito da inoculao de P. aeruginosa para a produo in situ do tensoativo,
e a quantidade de aucares redutores produzido foi 12,2% maior quando
comparado ao controle, lembrando que esse segundo mtodo omite a etapa
de purificao, reduzindo os custos do processo.
773
Os biotensoativos possuem propriedade antiadesiva, que impede a formao de biofilmes patognicos em materiais hospitalares, diminuindo o
risco de infeces hospitalares sem a utilizao de drogas sintticas (Singh
e Cameotra, 2004). De acordo com Wei et al. (2005), os biossurfactantes
podem atuar na recuperao de adsorventes de leos usados. Dessa maneira, esse material pode ser reutilizado na recuperao de leo ou em outras
aplicaes, como na engenharia civil.
Os biossurfactantes podem atuar, ainda, como antimicrobianos, incluindo atividade antifngica, antibacteriana e antiviral (Abalos et al.,
2001). Wang et al. (2005), verificaram que mistura de ramnolipdios produzidos por Pseudomonas aeruginosa tm efeito potencial algicida, inibindo
o crescimento de Heterosigma akashiwo, e quando em altas concentraes
apresentam forte atividade ltica.
O interesse na sntese biolgica de nanopartculas tem aumentado devido sua excelente biocompatibilidade e baixa toxicidade. Os ramnolipdios
esto sendo empregados na formao e estabilizao de nanopartculas de
xido de nquel e zircnia e prata (Mulligan, 2009; Palanisamy e Raichur,
2009; Ganesh et al., 2010). As nanopartculas de ramnolipdios e prata exibiram atividade antibitica contra patgenos gram-positivos/negativos e
leveduras Candida albicans, evidenciando o amplo espectro de ao da sua
atividade antimicrobiana (Ganesh et al., 2010).
Recentemente, foi descrito por Zhang e Ju (2011) a utilizao de ramnolipdios para separao de -glicosidase de uma mistura de enzimas por
meio do fracionamento de espuma. Os ramnolipdios foram utilizados devido sua propriedade espumante e pela presena de di-ramnose em alguns
homlogos, a qual atua como um substrato anlogo para a -glicosidase.
Produo de cido ltico a partir de biomassa

agroindustrial
A preocupao com a escassez dos recursos no renovveis, assim como
os problemas ambientais relacionadas ao uso de matria-prima fssil, como
o aquecimento global e ainda a elevao dos preos do petrleo, tm incentivado a busca de alternativas que diminuam o impacto ambiental e reduzam os custos de produo. A utilizao da biomassa uma possibilidade
774
promissora, especialmente para o Brasil, que produz matria-prima abundante, diversificada e com preo competitivo.
A converso da biomassa em produtos de maior valor agregado que possam substituir os derivados de petrleo, por meio da fabricao dos polmeros verdes, apresenta um grande potencial ainda pouco explorado. O
cido ltico se apresenta como matria-prima de grande importncia para
a indstria qumica, uma vez que pode ser produzido por fermentaes
bacterianas de substratos renovveis e de baixos custos.
O Brasil se destaca como bastante competitivo na produo de substratos industriais que poderiam ser empregados na fermentao ltica, como
o caldo e o melao de cana-de-acar, assim como o soro de queijo. Tais
substratos no necessitam de uma prvia hidrlise, pois so constitudos de
acares prontamente metabolisveis (sacarose, glicose, frutose e lactose),
contendo, ainda, outros nutrientes necessrios bactria.
Embora os resduos lignocelulsicos agroindustriais necessitem de um
tratamento prvio por meio de hidrlise cida ou enzimtica, para disponibilizar os acares fermentescveis, importante destacar a importncia
dessas matrias-primas, uma vez que apresentam baixo custo e alta disponibilidade. Dessa forma, alguns estudos tm sido realizados com o objetivo
de desenvolver tecnologias viveis, que melhorem o processo de fermentao do cido ltico a partir do bagao, assim como as fermentaes de
pentoses a partir de hemicelulose.
O cido ltico e o cido poliltico

O cido ltico amplamente empregado na indstria txtil, farmacutica, qumica, alimentcia (Wee et al., 2004). O uso do cido ltico na indstria farmacutica est relacionado produo de cosmticos. O lactato
de clcio pode ser usado como terapia na deficincia de clcio. Alm disso,
pode atuar como um agente de eliminao de crie dental (Narayanan et al.,
2004). Na indstria alimentcia, o cido ltico empregado como aditivo,
acidulante, flavorizante, aromatizante e emulsificante, alm de inibir a esporulao de bactrias em alimentos processados, e na indstria qumica
empregado na produo de solventes orgnicos e na produo de 1,2-propanodiol e cido acrlico (Hofvendahl e Hahn-Hagerdal, 2000).
775
O cido poliltico (PLA) tem sido considerado um dos plsticos biodegradveis mais promissores. A elevada resistncia qumica desse composto
vantajosa para a manufatura de fibras e filmes, enquanto a resistncia ao
calor favorvel para a produo dos mais diversos utenslios, como copos,
bandejas (Tanaka et al., 2006), talheres, pratos, sacolas, sacos de adubo,
garrafas de refrigerante e sacolas de supermercado (Naveena et al., 2005).
Os polmeros produzidos a partir de cido ltico D-() e L-(+) tm mostrado propriedades fsico-mecnicas comparveis s dos plsticos produzidos a partir de reservas fsseis de energia, porm com elevadas taxas de
biodegradabilidade. Seu tempo de vida til curto, podendo ser totalmente
degradado no meio ambiente em condies de aerobiose ou anaerobiose
(Auras et al., 2003).
Alm disso, os polmeros de cido ltico podem tambm ser utilizados na medicina, por serem biorreabsorvveis, podendo ser empregados
na regenerao de tecidos, em suturas e em fixaes de fraturas (Sakata et
al., 2004).
No processo de sntese do PLA, duas molculas de cido ltico passam
por um processo de esterificao e ciclizao cataltica para fazer um ster de
dilactdeo cclico (Figura 21.2). Although dimerization also generates water, it can be separated prior to polymerization due to a significant drop in
polarity. Esse processo de dimerizao gera gua, que pode ser separada antes da polimerizao, devido a uma queda significativa na polaridade. PLA
of high molecular weight is produced from the dilactate ester by ring-opening polymerization using most commonly a stannous octoate [ citation needed ]
catalyst, but for laboratory demonstrations tin(II) chloride is often employed. PLA de alto peso molecular produzido a partir do ster dilactdeo,
pela abertura do anel de polimerizao, usando um catalisador (octoato de
estanho). Esse mecanismo no gera molcula de gua adicional e, portanto,
possvel obter uma vasta gama de pesos moleculares (Wikipdia, 2011).
Figura 21.2 Sntese do policido ltico
776
A pureza enantiomrica do cido ltico fator crucial nas propriedades

fsicas do PLA. A polimerizao de uma mistura racmica de L-(+) ou D-()
cido ltico geralmente leva sntese de PDLLA, que amorfa. O grau
de cristalinidade e muitas outras propriedades importantes so controlados
pela razo dos enantimeros D e L usados (Sodegard e Stolt, 2002). Vrias
formas distintas de polmeros podem existir: PLLA o produto resultante
da polimerizao do L-(+) cido ltico. O PLLA tem uma cristalinidade
de aproximadamente 37% e temperatura de fuso entre 173C e 178C. A
temperatura de fuso do PLLA pode ser aumentada em 50C, e sua temperatura de deflexo trmica pode ser aumentada em aproximadamente
60C a at 190C, pela mistura fsica com o polmero PDLA, o que pode
formar um estereocomplexo altamente regular com cristalinidade aumentada. A estabilidade de temperatura maximizada quando uma mistura
50:50 usada, mas mesmo em baixas concentraes, de 3% a 10% de PDLA,
ainda h uma melhora substancial. Nesse ltimo caso, o PDLA atua como
agente de nucleao, aumentado assim a velocidade de cristalizao. Entretanto, devido maior cristalinidade do PDLA, sua biodegradao mais
lenta do que para o PLA (Wikipdia, 2011).
O cido ltico pode ser obtido tanto pela ao fermentativa de bactrias,
fungos e leveduras quanto por sntese qumica. Porm, os processos fermentativos so mais vantajosos, pois so mais econmicos, no requerem a
utilizao de temperaturas e presses elevadas e catalisadores metlicos, o
consumo de energia, assim como, o custo da matria-prima baixo, possvel utilizar matria-prima renovvel e so estereosseletivos, ou seja, produzem um dos ismeros preferencialmente (Pondey et al., 2001).
Alm disso, a sntese qumica do cido ltico sempre produz uma mistura racmica. Aproximadamente 90% do total do cido ltico produzido
no mundo produzido por fermentao utilizando bactrias (Zhou et al.,
2006).
As bactrias lticas (BL) so bastante exigentes quanto s condies de
crescimento. Segundo Buchta (1983), os acares representam as melhores
fontes de carbono para essas bactrias, havendo tambm a necessidade de
nitrognio, vitaminas e sais minerais para o bom desempenho da fermentao ltica. Diversos subprodutos e matrias-primas da agroindstria e da
indstria de alimentos tm sido empregados para a produo de cido ltico, pela alta disponibilidade e baixo custo, tais como bagao, melao e cal-
777
do de cana-de-acar, soro de queijo, alm da gua de macerao de milho

(AMM) e do autolisado de levedura.
Durante a fermentao do acar, dependendo da espcie de bactria,
ela pode produzir exclusivamente L-(+) cido ltico, exclusivamente D-()
cido ltico, quantidades aproximadamente iguais de ambos ismeros ou
produzir predominantemente uma forma em relao outra (Garvie, 1980;
Kandler e Weiss, 1986; Schleifer, 1986). A maioria das BL produz as duas
formas enantiomricas do cido ltico. A reduo enzimtica do piruvato
a lactato processada por desidrogenases estereoespecficias, sendo que o
L-(+) lactato formado pela enzima LdhL, enquanto o D-() lactato formado pela enzima LdhD. Algumas bactrias possuem a lactato racemase
(LR), que converte o L-(+) cido ltico em D-() cido ltico (Kandler,
1983).
O cido ltico pode ser produzido por bactrias, por algumas leveduras
e por alguns fungos filamentosos. Os fungos filamentosos (Rhizopus) ainda
so pouco utilizados para a produo de cido ltico, pois o processo necessita de biorreatores, com alta taxa de aerao, pois so obrigatoriamente
aerbios. Alm disso, a eficincia dos processos produtivos utilizando esses microrganismos baixa, devido menor taxa de reao causada pela
limitao transferncia de massa (Park et al., 1998). A produo de cido
ltico feita principalmente por BL. Os gneros que compreendem essas
bactrias so Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus e Streptococcus, assim como Aerococcus, Carnobacterium, Enterococcus, Oenococcus,
Teragenococcus, Vagococcus e Weissella (Euzeby, 1997).
Produo de cido ltico a partir de recursos renovveis

Biomassas agrcolas ou agroindustriais so consideradas fontes renovveis de energia. Por volta de 3,5 milhes de toneladas de resduos agrcolas
so produzidas por ano no mundo. O uso de uma determinada matria-prima de carboidrato depende de seu preo, sua disponibilidade e sua pureza.
Embora os resduos agroindustriais sejam ricos em carbono, sua utilizao
limitada, devido baixa concentrao de protena (Pondey et al., 2001).
A fonte de carbono para a produo microbiana de cido ltico pode
ser o acar em sua forma pura, como a glicose, sacarose, lactose. Entretanto, esses acares so muito caros. Dessa forma, diferentes produtos
778
alimentcios e agroindustriais ou resduos so alternativas mais baratas do

que acares refinados para a produo de cido ltico, tais como soro de
queijo (Buyukkileci e Harsa, 2004; De Lima et al., 2010), amido de batata, tapioca, milho, trigo, mandioca, vagem, cevada e cenoura (Rojan et al.,
2005; Anuradha et al., 1999; Bulut et al., 2004; Narita et al., 2004; Oh et
al., 2005; John et al., 2006), melao e caldo de cana-de-acar (Calabia e
Tokiwa, 2007; Coelho et al., 2010; Coelho et al., 2011; De Lima et al., 2009;
De Lima et al., 2010), manipueira (Coelho et al., 2010), AMM (Coelho
et al., 2010; De Lima et al., 2009), resduos de papel de escritrio (Park et
al., 2004), hidrolisados de hemicelulose e lignocelulose (Karel et al., 1997),
celulose (Venkatesh, 1997), sorgo doce (Richter e Trager, 1994) e glicerol
(Mazumdar et al., 2010). O bagao de cana usado como suporte para a
produo de cido ltico por R. oryzae e Lactobacillus em fermentao em
estado slido (SSF) ou hidrolisado de amido como fonte de carbono (Rojan
et al., 2005).
Geralmente, BL so deficientes em enzimas celulolticas e amilolticas
e requerem uma hidrlise prvia dos resduos celulsicos e amilceos para
sua melhor utilizao. Pode ser realizada a hidrlise cida ou enzimtica. A
hidrlise da casca de caf foi estudada usando cido diludo ou tratamento
a vapor (Pandey e Soccol, 2000) ou por enzimas lignocelulolticas (Pondey,
1991; Pondey et al., 2000). O material lenhoso pode ser triturado at formar uma polpa de celulose com bissulfato de clcio para liberar hexoses e
pentoses. Esse licor de sulfito de resduos pode ser utilizado para a fermentao ltica pelos microrganismos como L. pentosus (Sethi e Maini, 1999).
A utilizao de cido ou enzima para hidrolisar resduos que contenham
amido, como bagao de mandioca, bem documentada (Woiciechowski et
al., 2002). O bagao pode ser gelatinizado, tratado com alfa-amilase (liquefao) e glucoamilase (sacarificao). Woiciechowski et al. (ibidem) estudaram o aspecto econmico da recuperao de acares redutores por hidrlise
cida e enzimtica do bagao de mandioca. Embora tanto a hidrlise cida
como a hidrlise enzimtica sejam quase igualmente eficientes, com base
no rendimento de acares redutores (94,5% de hidrlise cida e 97,3% da
enzima hidrlise), a hidrlise cida economicamente mais vantajosa, pois
o custo do consumo de energia para a hidrlise enzimtica 24,92% maior
do que para a hidrlise cida (ibidem). Fraes de celulose e hemicelulose
podem ser gelatinizadas com 72% de cido sulfrico e, em seguida, dilu-
779
das para obter os acares (Pandey e Soccol, 2000). Outro resduo muito
importante da indstria de laticnios o soro de queijo, que contm lactose
como fonte de carbono, protenas, vitaminas e minerais.
O melao tambm tem sido muito estudado, por ser um subproduto
abundante, pois aproximadamente 17,9 milhes de toneladas de melao de
cana-de-acar so produzidos por ano no Brasil durante a fabricao do
acar. Alm de sua composio rica em acares fermentescveis (Lima et
al., 1975), nitrognio e vitaminas, seu custo baixo e h alta disponibilidade no territrio brasileiro.
Entretanto, a maioria dos resultados sobre o cido ltico produzido
(17g/L 90g/L) e a produtividade (2g/L 4g/L h) em fermentaes em
batelada relativamente baixa (Kotzamanidis et al., 2002). Assim, pode ser
necessrio o tratamento adicional do melao com cido sulfrico, fosfato
triclcico, ferrocianeto de potssio e EDTA, para aumentar a eficincia na
fermentao, porque o melao contm metais pesados (ferro, zinco, cobre,
mangans), alm de magnsio e clcio, que podem inibir o crescimento celular, afetar o pH do meio e inativar as enzimas associadas com a formao
do produto (Roukas, 1998).
Tendncias atuais e perspectivas futuras nas pesquisas

com cido ltico
O mercado mundial de cido ltico, praticamente imune recente turbulncia na economia global, est atualmente experimentando um crescimento constante. observado um aumento da demanda devido ao surgimento
de novas aplicaes, e espera-se que esse crescimento continue para os prximos anos. Segundo um novo relatrio da Global Industry Analysts Inc.,
o mercado global de cido ltico ir alcanar 328,9 mil toneladas em 2015.
O cido ltico usado em alimentos e bebidas, cosmticos, produtos farmacuticos, plsticos biodegradveis e outros setores qumicos. O
uso de cido ltico em produtos para cuidados pessoais e farmacuticos,
tais como solues intravenosas, hidratantes, xampus, cremes antienvelhecimento da pele e sabonetes, continua em alta em diversos pases.
previsto que essa demanda pela utilizao do cido ltico aumente ainda mais devido ao apelo mundial pela utilizao de biopolmeros em detrimento aos polmeros convencionais, em respeito ao ambiente, e tambm
780
devido reciclagem fcil e de menor custo. Dessa forma, pode-se destacar

o PLA como um polmero biodegradvel chave. Outra rea de destaque,
responsvel pelo aumento da demanda de produo do cido ltico, seria
a dos solventes verdes, que so steres de baixo peso molecular derivados
do cido ltico, tais como lcoois etlicos, propil, butil e lactato. A Agncia
de Proteo Ambiental (EPA) dos Estados Unidos da Amrica aprovou os
solventes de steres de lactato como ingredientes inertes com insignificante
toxicidade e um excelente perfil ambiental (Datta e Henry, 2006).
Alm disso, o cido ltico pode ser potencialmente utilizado para a fabricao de grande volume de produtos qumicos, tais como propilenoglicol, xido de propileno, cido acrlico, steres acrlicos e outros produtos
qumicos intermdios (ibidem).
Com a crescente demanda de cido ltico e o aumento da preocupao
com o impacto ambiental do acmulo de gesso como um subproduto da
produo fermentativa tradicional de cido ltico, maiores esforos para o
desenvolvimento de tecnologias alternativas esto sendo feitos. Abordagens de engenharia gentica tm sido exploradas para a melhoria das BL
(Singh et al., 2006).
Devido aos problemas intrnsecos ao crescimento em condies anaerbicas e incapacidade de BL para produzir cido ltico em condies
de baixo pH, o grande desafio est em desenvolver BL com tolerncia ao
pH baixo e inibio pelo acmulo do produto, tornando a recuperao
do cido ltico mais fcil e resultando em menor acmulo de gesso. Apesar do
considervel esforo pioneiro investido por algumas empresas no desenvolvimento e na comercializao de produtos base de cido ltico, tecnologias de produo desse composto orgnico precisam ser mais avanadas e
colocadas em prtica. Alm disso, precisam ser economicamente viveis
e ambientalmente corretas.
Produo de ciclodextrinas
A enzima ciclodextrina-glicosiltransferase
Nos dias atuais, a demanda mundial da principal fonte para a produo
de energia, o petrleo, est em constante aumento, principalmente para sa-
781
tisfazer a produo industrial do rpido crescimento econmico de pases

em desenvolvimento. Essa situao do mercado atual refletida na expectativa do aumento do preo do petrleo, maior que US$ 100/barril (r7notcias, 2011). Diante do fato de o petrleo ser uma fonte de energia no renovvel, as pesquisas esto se direcionando para as fontes energia alternativas,
com matrias-primas renovveis, como a biomassa, a qual produzida in
natura ou obtida no ecossistema, como na agricultura.
As enzimas so produtos industriais, e seu mercado mundial movimenta, anualmente, cerca de US$2 bilhes (Soetaert et al., 2006). As enzimas
so usadas em cerca de 2.500 reaes diferentes, que esto listadas no International Union Handbook of Enzyme Nomenclature (Aguiar, 2001).
As amilases (enzimas) hidrolisam o amido e so amplamente utilizadas
na liquefao do amido, em indstrias de papel, farmacuticas e alimentcias, tendo como principal preocupao industrial sua produo de baixo
custo. Uma alternativa para produo enzimtica a utilizao de resduos
agroindustriais no processo de fermentao. Esses resduos representam
um dos melhores reservatrios de carbono na natureza. Muitos estudos tm
sido realizados para o uso eficaz desses resduos para uma posterior produo de enzimas em larga escala. Este captulo apresenta alguns produtos
agrcolas explorados para a produo de enzimas.
O amido um dos polissacardeos mais encontrados na natureza e nos
alimentos. Composto por unidades de glicose ligadas por ligaes glicosdicas -1,4- ou -1,6-, apresenta de 15% a 25% de amilose e de 75% a 85% de amilopectina. Para sua quebra em acares menores, necessria a presena de
enzimas pertencentes famlia das amilases, que representam, no mercado
mundial, de 25% a 33% das enzimas produzidas a partir de microrganismos.
As principais aplicaes das amilases so na indstria de alimentos (produo de xaropes de glicose, frutose, maltose), na sacarificao de amido,
na indstria de detergentes, na indstria txtil, na indstria farmacutica e
na produo de novos produtos. A ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase, E.C. 2.4.1.19) responsvel pela formao de molculas cclicas, as
ciclodextrinas (CD), compostos cclicos que tm a habilidade de formar
complexos de incluso com uma grande variedade de molculas hidrofbicas. As CGTases so conhecidas por catalisar quatro reaes diferentes:
ciclizao, acoplamento, desproporcionamento e hidrlise de amido (Gunaratne et al., 2007).
782
As CD, o principal produto da enzima CGTase, so monmeros de

glicose (-D-glucopiranose) unidos por ligaes glicosdicas -1,4 (Huang,
2009), maltooligossacardeos cclicos que formam complexos de incluso
devido sua estrutura tronco-cnica (Dodziuk, 2006), que favorvel
formao do complexo CD/molcula hspede. As -, -, -CD so produtos industriais amplamente utilizados (Seon et al., 2009), constitudas
por seis, sete e oito unidades de glicose, respectivamente, com diferentes
dimetros internos para acomodar molculas de diferentes tamanhos, que,
portanto, caracterizam sua aplicao.
A formao do complexo de incluso pode ser afetada pelo tamanho e
pela geometria da molcula hspede (Tian et al., 2009). Assim, o volume
presente em 1g de -CD de 0,1mL (Matioli, 2000). A -CD (8 ) pode
incluir uma molcula de naftaleno, enquanto que a -CD (10 ), duas molculas de naftaleno (Provenzi et al., 2006).
A formao de complexos de incluso pode realizar-se em meio aquoso
ou slido. Em meio aquoso, a cavidade interior das CD ocupada por molculas de gua por meio de uma interao fraca, a interao polar-apolar,
o que facilita a incluso de molculas menos polares que a gua. Para a formao do complexo de incluso, primeiramente ocorre a aproximao da
molcula hspede CD, seguido da eliminao de molculas de gua da
cavidade, assimilao dessas molculas de gua pela gua circundante e a
interao da CD e da molcula hspede.
Os fatores de encapsulao so relevantes na caracterizao da aplicao
das CD em escala industrial (Aime et al., 2009), sendo relatados por alguns
autores (Ribeiro et al., 2007; Haiyee et al., 2009; Gorns et al., 2009) que a
incluso modifica as propriedades indesejveis das molculas, aumentando sua estabilidade aps sua complexao com a CD, protegendo contra
reaes e modificando a mobilidade cromatogrfica da molcula hspede.
A incluso na matriz rgida das CD geralmente proporciona s molculas inseridas mudana em suas propriedades fsico-qumicas, como aumento da estabilidade e biocompatibilidade. Devido possibilidade de formao dos compostos de incluso, as CD so muito utilizadas em produtos
farmacuticos, alimentcios e agrcolas. Nesses produtos, as CD agem como
veculos de solubilizao, sendo incorporadas em seu interior substncias
apolares que utilizam a parte exterior polar do tronco para a solubilizao
em gua (Ribeiro et al., 2007; Rawat et al., 2004; Ueno, et al., 1981).
783
As CD podem ser modificadas pelo mtodo direto, indiscriminadamente, formando uma mistura de produtos que so separados posteriormente
por cromatografia ou por um mtodo mais elaborado, com vrias etapas, no
qual as modificaes ocorrem em posies especficas (Croft et al., 1983).
Assim, os grupos hidroxilas presentes nas CD, encontrados nas posies
dois, trs ou seis, so substitudos. A rotao dos grupos dois e trs (hidroxilas secundrias) muito restrita, enquanto que a rotao das hidroxilas da
posio seis (primrias) livre (Ribeiro et al., 2007).
As CD foram modificadas com o objetivo de aumentar a solubilidade
de seus complexos, melhorar a associao entre as CD e as molculas de
incluso e formar stios especficos (Caira et al., 2007).
No estudo realizado por Britto et al. (2004), CD foram modificadas visando favorecer a formao de ligaes intramoleculares de hidrognio, com
o intuito de conferir um carter mais rgido s estruturas das CD, tornando-as, assim, estveis, reduzindo a reatividade e a mobilidade molecular.
A grande variedade da formao de complexos de incluso (Abdel-Shafi
et al., 2009) promove efeitos benficos como a proteo contra a oxidao
de lipdios (Haiyee et al., 2009), a reduo ou a estabilidade de aromas
(Seon et al., 2009), a estabilidade de cores (Provenzi et al., 2006) e vitaminas
(Cho, 2006) e o aumento da solubilidade de drogas (Jeulin et al., 2009). Por
essas razes, as CD so amplamente utilizadas em indstrias de alimentos,
farmacuticas, de cosmticos e outras.
Na indstria de alimentos, so utilizados na encapsulao de substncias, promovendo estabilidade de aromas, vitaminas, corantes, gorduras
insaturadas etc., estendendo o tempo de prateleira dos produtos (Szente et
al., 2004; Astray et al., 2009; Merji et al., 2009). O conselho europeu em
2008 autorizou o uso da -CD como um ingrediente alimentar (Commission Decision, 2008).
As CD so utilizadas na indstria de cosmticos e produtos de limpeza
encapsulando fragrncias, promovendo estabilidade fsico-qumica e reduzindo a velocidade da oxidao dos compostos (Centini et al., 2007).
O interesse da encapsulao de medicamentos como a penicilina e amoxilina pela indstria farmacutica ocorreu a partir da complexao do princpio ativo -lactama com CD (Rawat et al., 2004; Namazi et al., 2009),
pois este era pouco solvel em gua, quimicamente ou fisicamente instvel
e apresentava sabor desagradvel, o qual era mascarado pelo uso de CD
784
(Loftsson et al., 2007; Lu et al., 2009; Namazi et al., 2009). As CD ajudam na ruptura de bolsas de lipdeos em clulas, melhorando o quadro de
doenas vasculares (Rodal et al., 1999; Mattern et al., 2009).
Na indstria qumica, as CD e seus derivados so utilizados como catalisadores em reaes qumicas, como ocorre na oxidao de compostos, e
auxiliando na extrao de um componente de uma mistura (Abdel-Shafi et
al., 2009; Sasikala et al., 2009).
Na despoluio ambiental, as CD so utilizadas na tentativa de evitar
o efeito de substncias txicas contidas no ambiente por meio da formao
de complexos no txicos, como nos resduos industriais (Oonnittan et al.,
2009). Alguns compostos orgnicos so os maiores poluentes em gua, podendo ser txicos ou carcinognicos at em baixas concentraes. Com o
aumento da tecnologia de remoo de poluentes orgnicos da gua, as CD
removem de 47% a 58% de compostos indesejveis (Salipira et al., 2006).
A habilidade das CD de sequestrar componentes especficos de um
meio uma das mais promissoras caractersticas para aplicao industrial, e
suas aplicaes esto sendo ampliadas.
Produo da enzima ciclodextrina glicosiltransferase

utilizao de resduos agroindustriais
A enzima CGTase, entre outros diversos produtos biolgicos utilizados pelas indstrias, obtida por processos fermentativos. Atualmente, a
fermentao de produtos microbianos apresenta importncia crescente na
economia. Estima-se que mais de trezentas empresas no mundo produzem
e comercializam produtos biotecnolgicos. As enzimas produzidas a partir
os microrganismos tm as vantagens de custo e eficcia, como o tempo de
produo e a facilidade para modificao e otimizao do processo fermentativo (Blanco et al., 2009).
A ciclodextrina glicosiltransferase produzida por uma variedade de
bactrias, incluindo, em sua maioria, o gnero Bacillus: Bacillus sp. TS11 (Mahat et al., 2004); Bacillus sp., subgrupo alcalophilus (Freitas et al.,
2004); Bacillus circulans ATCC 21783 (Vassileva et al., 2003); Bacillus firmus (Moriwaki et al., 2007); Bacillus macerans (Arya et al., 2006); Bacillus
macorous (Wang et al., 2006); Bacillus circulans DF 9R (Szerman et al.,
2007); e Bacillus lehensis (Blanco et al., 2011). Alm desses, microrganismos de outros gneros so citados (Avci et al., 2009; Gawand et al., 2001).
785
Cada microrganismo apresenta caractersticas fsico-qumicas e exigncias nutricionais. Assim, as condies de fermentao como a composio
e concentrao dos meios de cultura e fatores ambientais como temperatura, concentrao de oxignio e pH influenciam no crescimento do
microrganismo e na produo da enzima. A produo em grande escala de
enzimas exige baixo custo e eficcia de produo, que esto diretamente
relacionados ao aproveitamento de amido como uma matria-prima industrial para a obteno de um melhor resultado comercial. Os substratos altamente ricos em energia e que apresentam baixos custos para o processo
de fermentao so os resduos agroindustriais. A utilizao de resduos
agroindustriais para a produo de enzimas objetivo de pesquisadores,
devido ao fato de, alm de eliminar resduos ambientais, tambm produz
menos resduos no caldo fermentativo. Produtos agrcolas como farelo de
trigo, farelo de arroz, farelo de milho, soja, resduos de mandioca, sorgo,
batata, farelo de amendoim e farinha de mandioca podem ser usados como
fonte de amido em bioprocessos industriais para a produo de enzima ciclodextrina glicosltransferase.
Resduos agroindustriais
O primeiro estgio da degradao dos resduos industriais e de matrias-primas de baixo valor comercial realizado por microrganismos. Existem pesquisas com culturas energticas para uso em biodigestores. Com a
viabilidade do crescimento dessas culturas pretende-se aumentar a produo de acar (Murphy e Energia 2008). Polmeros complexos, incluindo
carboidratos, protenas e lipdios, tambm so digeridos em monmeros
por enzimas, celulase, amilase e protease, produzidas por esses microrganismos. O amido, um tipo de carboidrato, utilizado por uma vasta gama
de bactrias para produzir a enzima CGTase. Os produtos secundrios menos complexos podem ser utilizados como substrato em novos processos de
fermentaes.
Amido
As principais agriculturas de amido do mundo so trigo, arroz, milho,
batata, aveia e mandioca. A mandioca (Manihot esculenta), tambm deno-
786
minada polvilho, segundo a Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria (Embrapa, 2008), uma planta da famlia Euphorbiaceae, e dentre as
matrias-primas caracterizadas como amilceas ou feculentas, a mandioca
se destaca como excelente opo para fermentaes (Daiuto et al., 2002;
Blanco et al., 2009) por apresentar alto teor de amido. A mandioca est entre os principais produtos agrcolas do mundo, e o Brasil um dos maiores
produtores mundiais, com mais de dois milhes de hectares para o plantio e
com capacidade de expanso em solos menos frteis. Segundo a Associao
Brasileira dos Produtores de Amido de Mandioca (Abam), a secretaria de
agricultura e abastecimento pretende aumentar a produtividade atual de 23
toneladas por hectare durante um ano para 35 toneladas por hectares durante um ano em cinco anos (Abam, 2009). A gua residuria de mandioca
um resduo de carboidrato gerado em grandes quantidades durante a produo de farinha de mandioca, sendo que uma tonelada de mandioca gerada a partir de trezentos litros de gua residuria de mandioca (Costa et al.,
2009). Assim, a mandioca no meio de cultura contribui para uma reduo
nos custos de produo da enzima ciclodextrina glicosiltransfrerase (Blanco
et al., 2011), aumentando o valor econmico dos resduos.
Fontes de nitrognio
Os produtos de origem animal, vegetal e derivados so comumente
usados como fonte de nitrognio nos processos de fermentao a partir
de substratos como melao, extrato de malte, extrato de carne ou resduos
agroindustriais. So testados segundo a linhagem do microrganismo utilizado no processo de fermentao. A AMM um subproduto do processo
de moagem de milho, rico em minerais, aminocidos e vitaminas. Fontes
alternativas de resduos industriais esto cada vez mais sendo utilizadas
como fonte de nitrognio em muitos processos de fermentao industrial
para a produo de enzimas.
Dextrana em biorrefinarias
A crescente utilizao de polmeros em diversas aplicaes forou o desenvolvimento tecnolgico de sua produo proveniente do petrleo. Con-
787
tudo, devido s altas de preo e crescente limitao de disponibilidade

dessa matria-prima, tornou-se necessrio o desenvolvimento de produo
a partir de recursos renovveis por meio das biorrefinarias (Bastos, 2007).
Os biopolmeros, ou polmeros verdes, produzidos por ao microbiana, como poliamidas, polisteres e principalmente os polissacardeos
(ou, como so comumente denominados, biopolissacardeos), tm apresentado promissoras aplicaes industriais (ibidem).
Neste tpico daremos nfase ao biopolmero dextrana, que um homopolissacardeo formado por unidades D-glucopiranosil, sintetizadas a partir
da ao da enzima dextranasacarase secretada pelas bactrias agrupadas na
famlia Lactobacillaceae e, mais especificamente, nos gneros Lactobacillus,
Streptococcus e Leuconostoc. Mas a cepa mais amplamente utilizada em pesquisas e industrialmente a Leuconostoc mesenteroides, e a linhagem que recebe maior ateno e tem sido utilizada para a produo de dextrana comercialmente a NRRL B512F. (Brown e McAvoy, 1990). As possibilidades de
aplicao da dextrana tm se mostrado inesgotveis desde sua descoberta, e
o crescente interesse em investimentos na sua produo e utilizao deve-se
no somente por se tratar de um produto com caractersticas hidroflicas,
pureza e habilidade para formar solues claras e estveis, mas por ser um
produto originrio de fontes renovveis e degradado por sistemas ecolgicos.
Como as biorrefinarias processam biomassa utilizando um subproduto
proveniente de algum outro processo, maximizando a variedade e a produo de produtos, a dextrana pode ser considerada um produto de biorrefinarias, por sua produo poder ocorrer partir de biomassas, como o melao
e a AMM, que so, respectivamente, fonte de carbono e nitrognio.
Processo de produo convencional e produo por via

enzimtica
A produo de dextrana pode ocorrer por meio de dois processos distintos, sendo eles o processo convencional e a produo por via enzimtica.
No processo convencional de produo de dextrana, esta produzida
durante o crescimento de Leuconostoc mesenteroides em meio de cultura
contendo sacarose (melao), fonte de nitrognio (extrato de levedura ou
AMM) e outros nutrientes, controlando a temperatura, o pH e a aerao.
Na produo de dextrana por via enzimtica existem duas etapas: produo da enzima e sntese da dextrana. A sntese da dextrana in vitro apre-
788
senta um potencial econmico enorme, devido a algumas caractersticas da

enzima. Por ser uma enzima extracelular, para sintetizar a dextrana no
necessria energia adicional, e, alm disso, a reao irreversvel. (Kaboli e
Reilly, 1980)
Aps a produo, a dextrana precipitada com metanol ou etanol, com
eliminao prvia das clulas. O maior produtor de dextrana a Pharmacia,
seguida por Fisons, Meito, Pfeiffer & Langen, UEB Sermwerke e Polfa.
No segmento clnico, alm da Pharmacia e da Fisons, so mencionadas a
Knoll/Schiwa, a Abbot e a Trevenol (Canilha, 2006).
Uso do melao e AMM na produo de dextrana

por microrganismos
Os polissacardeos obtidos de microrganismos so uma alternativa extremamente vlida em diferentes reas industriais, j que possuem propriedades similares aos sintetizados quimicamente e, em alguns casos, so mais
vantajosos por possurem propriedades especficas que os qualificam para
o desenvolvimento de novos produtos.
Os meios de cultivo utilizados na produo de alguns polissacardeos
podem ser complexos ou quimicamente definidos, sendo que os meios
complexos podem ser formulados a partir de subprodutos industriais, tais
como o melao, cana-de-acar, AMM, soro de queijo, manipueira, farinha de trigo, farinha de soja, entre outros.
Essas matrias-primas so de composio qumica desconhecida, podendo-se conhecer os teores dos acares disponveis, de nitrognio e de
fsforo, mas no se conhecem os teores dos sais minerais, pois certamente
h sempre um nmero muito grande de constituintes. Esses meios podem
requerer suplementao com compostos que proporcionem quantidades
adicionais de alguns elementos. Nesse sentido, o melao e a AMM apresentam uma composio bastante complexa.
O melao resultante da etapa de centrifugao ou de decantao no
processo de fabricao de acar. Alm de conter sacarose, apresenta uma
grande quantidade de acares redutores e um teor relativamente alto de
sais. Usualmente, utilizado na fermentao para a produo de lcool
em especial o etanol , como matria-prima para fabricar cachaa, rum e
fermentos biolgicos e usado largamente em raes animais.
789
A AMM (Corn steep liquor) um subproduto rico em carboidratos, aminocidos, peptdeos, minerais, metais, vitaminas e fosfato.
Segundo Schmidell (2001), sempre difcil mencionar as caractersticas
de microrganismos sem associ-los a um determinado meio de cultivo. Algumas caractersticas importantes dos meios de cultivo so destacadas a seguir:
ser o mais barato possvel;
atender s necessidades nutricionais dos microrganismos;
auxiliar no controle do processo, como o caso de ser ligeiramente
tamponado, o que evita as variaes drsticas de pH, ou evitar uma
excessiva formao de espuma;
no provocar problemas na recuperao do produto;
os componentes devem permitir algum tempo de armazenagem, a fim
de estarem disponveis todo o tempo;
ter composio razoavelmente fixa;
no causar dificuldades no tratamento final do efluente.
Todas essas caractersticas so importantes, destacando-se o custo do
meio de cultura, que deve ser o menor possvel, desde que atenda s necessidades do microrganismo selecionado.
Diante do exposto, ressalta-se que a utilizao de substratos alternativos
de baixo custo em processos fermentativos permite a reduo dos custos de
produo, minimizando problemas ambientais, pois auxilia na destinao
desses resduos.
A sacarose e a glicose so usadas como fonte de carbono preferenciais
para a produo de biopolmeros (Sutherland, 2002), porm algumas fontes
alternativas tm sido sugeridas, tais como melao, resduo da indstria de
soja, soro de leite, entre outras (Kalogiannis et al., 2003; Nitschke et al.,
2001). O melao um subproduto do processo de produo de acar, tanto
o acar de beterraba quanto acar de cana, sendo definido como um xarope que escoa do estgio final da cristalizao do acar. uma das fontes
de carbono mais econmicas na indstria microbiana, sendo usado como
substrato em fermentaes (Bae e Shoda, 2004; Kalogiannis et al., 2003).
Salienta-se que a composio do melao complexa. Os principais componentes so gua e acar, e os componentes secundrios so oligoelementos, vitaminas e substncias de crescimento.
Em relao AMM, a principal desvantagem desse subproduto em
microbiologia a varivel composio. Essa variabilidade pode estar rela-
790
cionada ao tipo e condio do milho, mas ainda mais sobre uma infinidade
de variveis envolvidas no processamento de amido. Por outro lado, esse
subproduto uma alternativa barata em relao a outros, tais como o extrato de levedura e a peptona. A AMM tem um pH de 3,7 a 4,1 geralmente apresenta um teor de nitrognio de 3,85% a 4,1% e contm quantidades
considerveis de vitaminas do complexo B, com exceo da tiamina, que
normalmente baixa ou ausente.
O uso desse subproduto em meios de cultura data de 1909, tendo contribudo fortemente para a produo da penicilina.
Nos meios de cultura, pode servir tanto como um complemento para
substituir extratos quanto como a principal fonte de nitrognio e carbono para todos os microrganismos, exceto patgenos fastidiosos. Em geral, qualquer organismo capaz de crescer bem em meios simples contendo
extrato de carne e peptona vai crescer em meios contendo apenas AMM,
como, por exemplo, os seguintes microrganismos: Acetobacter suboxydana, Candida guilliermondi, Aspergillus flavus, Bacillus macerans, Candida
lipolytica, Lactobacillus brevis, Leuconostoc mesenteroides, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus lactis e Aspergillus flavus.
Alguns autores estudaram a utilizao de subprodutos da agroindstria
na produo de dextrana.
Moosavi-Nasab et al. (2010), estudaram a produo de dextrana por
Leuconostoc mesenteroides utilizando resduos da indstria de alimentos. O
objetivo do estudo foi avaliar a produo de dextrana a partir do melao
(um subproduto das refinarias de acar) e do soro de queijo (subproduto
da indstria de laticnios). Segundo os autores, a mxima produo de dextrana foi obtida quando o microrganismo foi cultivado em meio de cultura
contendo soro de queijo e melao 10% (p/v), sendo vivel a utilizao desses resduos na produo de dextrana.
Ribeiro et al. (1998) estudaram a produo de dextranasacarase por fermentao com Leuconostoc mesenteroides NRRL B 512 (F) em diferentes
formulaes de meio de cultura. A temperatura usada foi 27C, pH 6,7,
aerao 0,5vvm e agitao 250rpm. Dentre os meios utilizados, o que apresentou melhores resultados em termos de produo de enzima foi aquele
contendo melao (40g/L) em substituio sacarose, atingindo uma atividade de 240UDS/ml aps sete horas de fermentao.
Cortezi e Conteiro (2001) observaram que a concentrao de melao no
meio de cultivo teve forte influncia na produo da enzima dextranasaca-
791
rase por Leuconostoc mesenteroides FT 045 B. Segundo os autores, a maior

atividade enzimtica foi obtida quando utilizado melao na concentrao
de 97,3g/L correspondente a 25g/L de sacarose.
A produo de dextranasacarase por Leuconostoc mesenteroides NRRL
B-512(F) foi estudada por Queiroz (1987). As fermentaes foram realizadas
em frascos agitados e minifermentadores em batelada e batelada alimentada.
Nesse estudo foram testados meios de cultura contendo melao, AMM, extrato de levedura e sacarose. Na fermentao em frascos agitados, verificou-se uma baixa produo da enzima, no havendo diferenas significativas
para os meios com melao ou sacarose pura. Em minifermentadores o controle de pH promoveu um aumento de aproximadamente 60% para o meio
padro e 40% para os meios com melao. Com fermentaes em batelada
alimentada, a produo de dextranasacarase foi aumentada de trs a quatro
vezes. Os melhores resultados foram conseguidos em meio padro, chegando, ao final de dez horas, a 35UDS/ ml. Nos meios com melao e AMM, os
melhores resultados foram conseguidos com alimentao contnua de melao. Nessas condies, a atividade mxima ficou em torno de 80UDS/ml.
Aplicaes das dextranas

Atualmente a dextrana tem sido empregada em diversas reas devido
s suas caractersticas no inicas e boa estabilidade em condies normais de operao. O potencial da dextrana se estende indstria farmacutica, qumica, petroqumica e de alimentos. Dentre as aplicaes que
alcanaram sucesso comercial, destacam-se as utilizaes na indstria farmacutica para fins clnicos. Mais recentemente, a indstria fotogrfica e a
oftalmolgica tm mostrado um grande interesse na demanda de dextrana.
Dextranas so tambm utilizadas em formulaes de cremes e loes, obtendo grande sucesso nas formulaes de cremes utilizados em bebs.
Outra rea em crescimento que faz uso da dextrana e que j foi aprovada pelos Estados Unidos da Amrica e pela Comunidade Europeia a de
imagem de ressonncia magntica. Alm dessas aplicaes, a dextrana tambm vem sendo usada na biologia molecular, onde um de seus derivados,
a dextrana sulfato, utilizada em processos de hibridizao. A dextrana
tem contribudo para a estabilidade de vacinas, auxiliando em bioprocessos
industriais, visando o melhoramento de tcnicas de floculao.
792
A dextrana de baixa massa molar (< 75000Da), por ser completamente

metabolizada pelo organismo e por no apresentar efeitos txicos ou alrgicos, pode ser amplamente empregada pela indstria farmacutica, tendo
como exemplo de aplicao de maior importncia a utilizao como expansor do plasma sanguneo e o uso do complexo dextrana-ferro no tratamento
da anemia.
A indstria alimentcia utiliza a dextrana como agente estabilizante e
geleificante, que inibe a cristalizao (ibidem).
A ttulo de curiosidade, o polmero de dextrana o chamado Sephadex
(SEparation, PHArmacia DEXtran), que em 1959 teve suas propriedades
filtrantes publicadas na Nature (Porath e Flodin, 1959), o que gerou imediata aceitao dos bioqumicos de todo o mundo no uso do gel para purificao de molculas biolgicas, sendo que ainda hoje usado no estudo de
estruturas e na funo de biomolculas, especialmente de protenas (Pharmacia.Biotech, 1997)
Entre os anos 1976 e 2010, somente nos Estados Unidos da Amrica foram patenteados 44.086 estudos sobre dextranas e seus derivados (US Patent, 2010). Na Europa foram registrados 3.926 documentos sobre patentes
de dextrana e derivados (EU Patent, 2010).
Existe um nmero considervel de artigos publicados que relatam os
inmeros usos da dextrana e de seus derivados (Leathers, 2002; Remaud-Simeon et al., 2000; De Belder, 1996), tanto na rea alimentcia como
na farmacutica (Pharmacia.Biotech, 1997) e qumica, sendo empregada
como agente emulsificante, condutor, estabilizante (Goulas et al., 2004),
teraputico, estabilizante, imunoestimulante ou prebitico (Eggleston e
Cote, 2003), espessante (Naessens et al., 2005; Food, 2000), anticristalizador, melhorador de hidratantes, separador como polmero de ligao cruzada em purificao e separao de protenas (Leathers, 2002; Robyt, 1985;
Sarwat et al., 2008; Pharmacia.Biotech, 1997), no tratamento da deficincia
do ferro em anemias, auxiliador na tcnica de ressonncia magntica (De
Belder, 1996), anticoagulante similar heparina (Alsop, 1983), inibidor potencial da ribonuclease, antiviral no tratamento do HIV (Piret et al., 2000;
Ueno e Kuno, 1987; James, 1988), como fonte de energia em alimentos,
como adoante (Naessens et al., 2005), entre inmeras outras aplicaes.
O quadro a seguir mostra um resumo de diversas aplicaes da dextrana
em diferentes reas.
Uso de microesferas de dextranas na imunizao contra o ttano.
Adio de dextrana sulfato como atenuante de problemas cardacos.
Dextrana ligada a polietilenoglicol para engenharia de tecidos Jukes et al., 2008

cartilaginosos.
Efeito da massa molar da dextrana na agregao de clulas vermelhas Neu, Wenby e Meiselman, 2008
do sangue.
Uso da dextrana como mtodo simples, barato e no reativo para a Rumball et al., 2008
estimativa de parmetros do volume sanguneo em ovelhas prenhas.
Uso de dextrana como potencial agente veicular de antifungos.
Frmacos
Medicina
Medicina
Medicina
Medicina
Medicina
Uso de dextrana sulfato no tratamento de doenas sseas.
Uso de dextrana em reaes hipersensveis de resposta a IgG para Zanoni et al., 2008
vacinas.
Medicina
Medicine
Hamdani et al., 2008
Uso de dextrana sulfato na reduo dos danos causados pela isquemia. Gajanayake et al., 2008
Medicina
Clay et al., 2008
Uso de dextrana em problemas relacionados com o fgado.
Uso de dextrana sulfato como inibidor da ativao de clulas naturais Spirig et al., 2008
assassinas humanas.
Medicina
Medicina
Choi et al., 2008
Banz et al., 2008
Tabassi, Tafaghodi e Jaafari, 2008
Trs massas molares diferentes de dextranas como redutor da Tong et al., 2008
higroscopicidade de extratos herbreos amorfos.
Referncia
Frmacos
Comentrio
Compostos de dextrana oxidada com N-carboxietilquitosana no Weng et al., 2008

citotxicos e hidrogis.
Biomateriais
Aplicao
Quadro 21.1 Resumo dos usos recentes da dextrana em diferentes reas

Ano
Continua
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
2008
793
Uso de hidrogis antioxidantes com potencial uso em produtos Cassano et al., 2009
cosmticos e farmacuticos como veculo de vitamina E.
Uso de dextrana na construo de hidrogis e gelatinas para engenharia Liu e Chan-Park, 2009
de tecidos vasculares.
Nanopartculas biodegradveis feitas de dextrana grafitada com Nouvel et al., 2009

polilactato.
Presena de dextrana no acar brasileiro e em depsitos insolveis Aquino e Franco, 2009

da cachaa.
Dextrana no clareamento qumico de membranas de policarbonados.
Construo de uma enzima fundida de dextranasacarase e dextranase Kim et al., 2009

para a produo em um nico passo da produo de isomaltooligossacardeos.
Concentrao e tempo de efeito da exposio da dextrana em clulas Rouleau, Rossi e Leasky, 2010
endoteliais viveis.
Conjugado de gua, taxol, dextrana e clulas tumorais pela imobilizao Nakamura et al., 2010
de cido flico.
Hidrogis de dextrana sintetizados com cloreto de potssio como um Chen, Yi e Zhang, 2010
ligante cruzado.
Medicina
Biomateriais
Nanotecnologia
Nutrio
Qumica
Sntese
Medicina
Medicina
Sntese
Zator et al., 2009
Interaes entre a beta-lactoglobulina e a dextrana sulfato prximos ao Vardhanabhut et al., 2008

pH neutro e seu efeito na estabilidade trmica.
Referncia
Bajgai et al., 2008
Nutrio
Comentrio
Degradao hidroltica in vitro de fibras de dextranas grafitadas.
Nanotecnologia
Aplicao
Quadro 21.1 Continuao

Ano
2010
2010
2010
2009
2009
2009
2009
2009
2009
2008
2008
794
795
Produo de cido ctrico

Em 2005, o governo brasileiro autorizou o uso comercial do biodiesel,
sendo que este era adicionado ao diesel comum a uma proporo de 2%
(B2). Em 2008, tornou-se obrigatrio o seu uso, e a partir de 2010 a proporo passou a ser de 5% (B5) (Faria et al., 2007; Brasil, 2005). Somente com
o uso do B2 foi gerado um mercado de 800 milhes de litros de biodiesel
por ano (Almeida e Pinto, 2007), sendo que com a B5, a produo ser de 2
milhes de litros por ano (Bulhes, 2007). E com a crescente produo de
biocombustveis, esperada uma grande disponibilidade de glicerol, pois
este um subproduto abundante da produo do biodiesel. A utilizao de
leos vegetais, como o de mamona e de canola, para a produo do biodiesel gera para cada 10kg de biodiesel e 1kg de glicerol (Yazdani e Gonzalez,
2007). Isso significou uma produo atual de 200 milhes de litros de glicerina por ano no Brasil.
A converso desse glicerol em outras molculas um desafio e uma alternativa para reduzir os custos da produo do biodiesel (Papanikolaou et al.,
2002). Todavia, novas aplicaes esto sendo procuradas para grandes volumes de glicerol, pois este no pode ser utilizado para uso direto em alimentos e cosmticos sem um processo de limpeza e refino (Pachauri e He, 2006).
Sabe-se que o glicerol pode ser utilizado como fonte de carbono em bioprocessos para a fabricao de molculas de alto valor agregado a partir da
fermentao (Almeida e Pinto, 2007). Entre as principais espcies estudadas esto os gneros Clostridium, Citrobacter, Klebsiella e Pseudomonas
(Crdenas et al., 2006; Cheng et al., 2004; Deckwer, 1995; Galdeano-Villegas et al., 2007; Gonzlez-Pajuelo et al., 2006; Lee et al., 2001; Pachauri e
He, 2006; Solaiman et al., 2006; Yazdani e Gonzales, 2007).
Uma das aplicaes estudadas a do glicerol residual do biodiesel para
a produo de 1,3-propanodiol por Klebsiella pneumoniae. Vias alternativas
para a utilizao do glicerol em larga escala esto tambm sendo estudadas
em relao sua transformao em cido ctrico e leo de origem unicelular
(Papanikolaou e Aggelis, 2002; Rymowicz et al., 2006).
Biodiesel
A maior parte de toda a energia consumida no mundo provm de combustveis fsseis, como o petrleo, o carvo e o gs natural. quase unnime
796
na literatura que essas fontes so limitadas e com previso de esgotamento

no futuro. H uma tendncia de crescimento contnuo do consumo a uma
taxa mdia de 3% ao ano no mundo desde 1985. Entretanto, as reservas de
petrleo comercialmente explorveis so descobertas a taxas menores que o
consumo. As reservas mundiais de petrleo em 2005 totalizavam 1,147 trilhes de barris, e o consumo anual desse combustvel fssil estava em torno
de 80 milhes de barris. Estima-se que as reservas mundiais de petrleo se
esgotaro por volta do ano de 2046, isto sem levar em considerao a taxa de
crescimento no consumo (Rathman et al., 2005).
A busca por fontes alternativas tem sido objeto de estudo no mundo
todo. Nesse contexto, os biocombustveis surgem como alternativa para
substituir os combustveis derivados do petrleo, e sua demanda vem
crescendo rapidamente, sendo a utilizao de biomassa para sua produo uma alternativa promissora (Silva, et al., 2009). Alm disso, com o
advento dos problemas ambientais causados pela queima dos combustveis fsseis, alternativas com menor impacto ambiental do que as vias
tradicionais tm sido pesquisadas (Ferrari, 2005). Estudos j apontam que
a utilizao da biomassa para fins energticos vem tendo uma participao
crescente em relao matriz energtica mundial, levando estimativa de
que at o ano de 2050 dever dobrar o uso mundial de biomassa disponvel
(Fischer, 2001).
O Brasil foi pioneiro no uso de uma fonte combustvel limpa (em balano de CO2) quando colocou em prtica, em 1973, o uso de lcool combustvel, sendo que em meados de 1980 a maior parte dos carros fabricados no
pas foi adaptada para o uso de lcool. Em 2003, cerca de 80% dos carros
vendidos no Brasil utilizavam tecnologia flex (capazes de utilizar lcool ou
gasolina em qualquer proporo). Na ltima dcada a utilizao de biocombustveis aumentou consideravelmente, e em 2003 seu consumo anual
foi de aproximadamente 30 bilhes de litros (Demirbas e Balat, 2006).
Atualmente, 46% da matriz energtica brasileira provm de fontes renovveis, enquanto que a mdia mundial de 13,6%. Certamente a utilizao
de biocombustveis tende a aumentar, uma vez que a disponibilidade de
combustveis fsseis limitada (Silva et al., 2009).
Outro biocombustvel promissor o biodiesel. Assim como o lcool
pode substituir a gasolina em motores com ciclo Otto (ou com fasca eltrica), o biodiesel pode substituir o diesel em motores de ignio por compres-
797
so (ibidem), sendo que o biodiesel tem 85% do poder energtico do diesel

de petrleo (Crdenas, 2006).
O biodiesel um combustvel no fssil formado a partir de alquil-monosteres derivados da transesterificao de leos e gorduras. A adio de
lcoois de baixa massa molar, como o metanol e o etanol, e de um catalisador cido ou bsico (Ma e Hanna, 1999) resulta na transformao dos triglicerdeos em molculas menores de steres de cidos graxos. O metanol o
mais utilizado devido ao seu baixo custo e s suas vantagens fsico-qumicas
(polaridade, lcool de cadeia mais curta, reage rapidamente com o triacilglicerdeo e dissolve facilmente o catalisador bsico). J a utilizao do lcool
etlico necessita que este seja anidro e exige o uso de leos com baixo teor
de gua, pois a gua no sistema resulta na saponificao dos triglicerdeos
(ibidem).
Vrios so os benefcios e motivaes de carter ambiental no uso do
biodiesel. O biodiesel pode reduzir em 78% as emisses de gs carbnico,
permite que seja feito um ciclo fechado de carbono, ou seja, o CO2 emitido de sua queima reabsorvido pela cultura de oleaginosas, e ainda pode
diminuir em 90% as emisses de fumaa, inclusive as emisses de xido
de enxofre, causador da chuva cida e de irritaes das vias respiratrias
(Carvalho, 2006). Alm disso, possui caractersticas melhores que o diesel
comum, como alto nmero de octano, teor mdio de oxignio, maior ponto
de fulgor, menor emisso de partculas HC, CO e CO2, carter no txico
e biodegradvel, alm de ser proveniente de fontes renovveis (Faria et al.,
2007; Ferrari et al., 2005).
O maior produtor mundial de biodiesel a Unio Europeia, com 82%
da produo mundial em 2003 (Demirbas e Balat, 2006), sendo que utiliza amplamente esse combustvel renovvel desde 1991. A Alemanha a
maior produtora e consumidora de biodiesel no mundo, sendo este utilizado em carros de passeio e em veculos de carga e agrcolas (Carvalho, 2006).
Os Estados Unidos da Amrica tambm incentivam a produo de biodiesel com o Programa Ecodiesel, no qual bastante cogitado o uso da
B-20, mistura de 20% de biodiesel ao diesel comum. A poltica de produo
emana da National Biodiesel Board, onde uma lei do senado prope uma meta
anual de 20 milhes de litros de biodiesel sendo produzidos. Vrios estados
americanos incentivam o uso dos estoques de leo de soja excedentes na produo do biodiesel, sendo que estudos da Comisso de Segurana Ambiental
798
americana recomendam a utilizao do biodiesel em transporte escolar, e a

Nasa e as Foras Armadas americanas consideram-no um combustvel de
excelncia para ser usado em qualquer motor diesel. Uma vez que um litro
de biodiesel equivale em capacidade energtica veicular a 2,5 litros de lcool
etlico, o programa americano de biodiesel equivale a sete vezes o mximo
atingido do programa brasileiro do lcool (Rathman et al., 2005).
No Brasil, com a crise energtica de 1973, o governo brasileiro comeou uma srie de experimentos na produo de biodiesel, com o programa
Prodiesel, em 1979, e o Prosene, a fim de verificar a utilizao de biodiesel
e querosene vegetal, o que deu origem a duas patentes mundiais. Mas com
a queda do preo do petrleo, o preo do combustvel estabilizou, e a ideia
de biocombustveis a partir de leos vegetais foi abandonada no Brasil, as
patentes caram em domnio pblico devido ao desuso, enquanto que na
Europa a ideia prosperou (Parente, 2003).
O biodiesel somente se insere na matriz energtica brasileira a partir de
2005, com a criao do marco regulatrio, Lei 11.097/2005, que torna facultativo seu uso, em uma mistura de 2% ao diesel comum, a partir da sua
publicao. Aps 2008, o uso da mistura de 2% se torna obrigatria, e a
de 5%, prevista por lei para iniciar em 2013 (Lima, 2007; Rathman et al.,
2005), foi antecipada para janeiro de 2010. Atualmente, o Brasil consome
cerca de 35 milhes de toneladas por ano de leo diesel, e com o uso da
B2, isto traria uma economia ao pas de U$160 milhes em importao de
petrleo. Com o uso da B5, essa economia poderia chegar a U$400 milhes
(Ferreira, 2006). Alm disso, o pas contm grandes plantaes de oleaginosas e, consequentemente, pode fazer uso dessa diversidade para a produo de biodiesel a partir de plantas como palma, babau, soja, girassol,
amendoim, mamona e dend (Geris et al., 2007; Ferrari, 2005).
O Brasil, com mais de 90 milhes de hectares de terra, que podem ser incorporados ao processo produtivo de maneira sustentvel, desponta como
o pas com as maiores oportunidades com a agricultura de energia. Nos
prximos anos, apenas na regio do Cerrado, mais de 20 milhes de hectares podem ser disponibilizados para o plantio de gros, pela integrao
lavoura-pecuria. No Nordeste, alm da cana-de-acar, possvel cultivar
mamona, amendoim, gergelim, babau, entre outras oleaginosas. Somente
para a mamona, existe uma rea de mais de 4,5 milhes de hectares aptas ao
seu cultivo. Segundo a National Biodiesel Board, o Brasil teria condies de
799
ser o lder mundial na produo de biodiesel, podendo substituir em 60% a

demanda atual de diesel mineral no mundo (Ferreira, 2006).
Alm de fontes oleaginosas cultivveis para a produo do biodiesel,
est sendo investigada a produo de biodiesel de leo de origem unicelular
por algas e leveduras, produzindo biocombustvel a partir de biomassa que
no compromete fontes de alimentos (Yazdani e Gonzalez, 2007). Outra
possibilidade a utilizao de leo de fritura de restaurantes e lanchonetes.
Estima-se que haja um mercado de 30 mil toneladas desse resduo que podem ser aproveitadas para a fabricao do biodiesel (Parente, 2003).
Glicerol
O glicerol conhecido desde 1779, quando foi descoberto por Scheele
no processo de saponificao do azeite de oliva. Foi tambm observado por
Pasteur no processo de fermentao etanlica. O glicerol, ou 1,2,3 propanotriol (OH-CH2-CH (OH)-CH2-OH), um polilcool atxico, de sabor
adocicado, incolor, viscoso, higroscpico, com ponto de fuso a 17,8C,
ponto de ebulio a 290C, solvel em lcool e ter e insolvel em hidrocarbonetos. O termo glicerol aplica-se somente ao composto puro, 1,2,3
propanotriol, enquanto o termo glicerina aplica-se purificao de compostos comerciais que contm normalmente quantidades maiores ou iguais
a 95% de glicerol. raramente encontrado em sua forma livre na natureza,
pois est geralmente associado a cidos graxos, como o cido olico e o palmtico, em leos e azeites, como o de coco, dend, soja, algodo e oliva, e
tambm em gorduras de animais, como a banha de porco e o sebo (Arruda
et al., 2007).
O glicerol utilizado amplamente nas indstrias alimentcias, farmacutica, txtil, qumica e de cosmticos. Como exemplo pode-se citar o papel do glicerol na produo de resinas e polisteres, devido sua reatividade
polifuncional, e tambm como lubrificante na indstria alimentcia e txtil
(Pachauri e He, 2006).
Outra caracterstica do glicerol seu papel como osmorregulador, importante mecanismo que ocorre nas clulas como reao a fatores ambientais (Arruda et al., 2007). Esse mecanismo utilizado pela levedura Sacharomyces cerevisae, em resposta ao estresse hiperosmtico (reduo da gua
extracelular) (Wang et al., 2001).
800
O glicerol pode ser produzido por saponificao de leos e gorduras,

assim como a partir de petrleo utilizando clorao em altas temperaturas.
Ambas as rotas no so mais utilizadas para a produo em grande escala.
Outras vias de produo do glicerol envolvem a fermentao por bactrias,
fungos, leveduras, algas ou protozorios, utilizando diferentes substratos,
como acares, amidos ou celulose. A formao do glicerol dentro da clula ocorre pela reduo da dihidroxiacetona, catalizada pela NAD+, a glicerol-3-fosfato, e este desfosforilado a glicerol (Arruda et al., 2007).
Como subproduto da transesterificao para a fabricao do biodiesel,
um triglicerdeo reage com o lcool na presena de uma base ou cido forte,
e produz uma mistura de steres de cidos graxos e glicerol (Geris et al.,
2007). A fase mais densa composta de glicerina bruta, impregnada dos
excessos utilizados de lcool, de gua e de impurezas inerentes matria-prima. A fase menos densa constituda de uma mistura de steres metlicos ou etlicos, conforme a natureza do lcool originalmente adotado. O
glicerol produzido pode ser retirado por centrifugao (Ma e Hanna, 1999)
ou pela adio de gua (Hajk et al., 2006). Durante a transesterificao,
so produzidos 10% de glicerol (m/m) em proporo ao total de biodiesel
produzido (Mu et al., 2006; Papanikolaou et al., 2002).
Entretanto, economicamente invivel a utilizao do glicerol residual
do biodiesel na indstria alimentcia, farmacutica e cosmtica, uma vez que
aquele exige purificao, como branqueamento, desodorizao e trocador
de ons para remover qualquer trao de outros elementos, tornando o processo oneroso (Pachauri e He, 2006). Alguns processos geram resduos to
impuros que acabam no sendo aceitos comercialmente. Nesse caso, a glicerina torna-se um efluente da planta, exigindo adequado tratamento, o que
demanda investimentos adicionais, com os custos de descarte atribudos
produo do biodiesel (Ferreira e Cristo, 2006; Yazdani e Gonzalez, 2007).
O aproveitamento do glicerol residual do biodiesel no uso industrial
pode tornar a produo do biodiesel competitiva no mercado de combustveis, reduzindo seu custo de produo (Arruda, 2007). Mesmo assim,
a insero da cadeia produtiva do biodiesel na matriz energtica brasileira dever gerar um aumento significativo da oferta interna de glicerina
(Rathman et al., 2005). Tambm, o preo do glicerol vem se tornando competitivo com o dos acares usados na produo de qumicos via fermentao microbiana (Dharmadi et al., 2006), e essa fonte de carbono est se
801
tornando uma promissora e abundante alternativa devido produo do

biodiesel (Silva et al., 2009), sendo que eram estimados cerca de 700 a 900
milhes de toneladas de glicerol disponveis em 2010 (Vollenweider et al.,
2004), e estando o preo do glicerol bruto do biodiesel entre 60 a 80 por
tonelada no mercado europeu (Rymowicz et al., 2008). A disponibilidade
de glicerol no mercado tem sido to grande que a Dow Chemical e a Procter
& Gamble Chemicals desativaram em 2006 suas plantas de produo de
glicerol sinttico (Maervoet et al., 2011).
Recentemente novas aplicaes do glicerol vm sendo descobertas,
como substrato para fermentaes bacterianas com a finalidade de se obter
metablitos de alto valor agregado, como polmeros biodegradveis, ramnolipdios, biossurfactantes, entre outros (Arruda, 2007). Apesar de vrios
microrganismos serem capazes de utilizar o glicerol na presena de aceptor
final de eltrons (no caso, o oxignio), poucos so capazes de ferment-lo.
E para aqueles capazes de fermentar o glicerol em compostos de alto valor
agregado existem limitaes para sua efetiva manipulao, como a patogenicidade, o requerimento de anaerobiose restrita, a necessidade de suplementao com nutrientes complexos, a falta de capacidade gentica e o conhecimento fisiolgico do organismo em questo (Yazdani e Gonzalez, 2007).
Fermentao do glicerol para a obteno de produtos

de alto valor agregado
O glicerol comea a ser metabolizado j na membrana celular, dependendo das concentraes e das condies de oxignio, onde pode ser fosforilado
para glicerol-3-fosfato ou catabolizado pela glicerol desidrogenase. Algumas espcies de bactrias apresentam em sua membrana canais facilitadores
de glicerol (GlpF) e aquagliceroporinas, que conduzem tanto gua quanto
glicerol. Os canais facilitadores de glicerol que fazem a fosforilao do glicerol so descritos em Escherichia coli, Bacillus subtilis, Klebsiella, Shigella,
Nocardia, Enterococcus, L. lactis e em espcies de Pseudomonas. Sabe-se que
o catabolismo de acares no sistema respiratrio de leveduras especialmente realizado por ambas as vias pentose-fosfato e Embden-Meyerhof
(EMP). Contudo, o catabolismo do glicerol em leveduras principalmente
realizado pela via C3 da EMP. Em comparao com a utilizao de acares,
isso visto como uma vantagem, pois apresenta menor rendimento que o
802
catabolismo de glicerol, uma vez que a via pentose-fosfato leva diretamente

formao de NADPH+H+ (Papanikolaou e Aggelis, 2003).
Com a grande disponibilidade de glicerol e glicerol residual de biodiesel,
torna-se interessante sua utilizao como fonte de carbono para fermentao. Alguns dos subprodutos que podem ser obtidos a partir de fermentao utilizando o glicerol como fonte de carbono so o 1,3-propanodiol
(1,3-PDO) produzido por algumas espcies de bactrias da famlia Enterobacteriaceae e pelas espcies Clostridium butyricum, Citrobacter freundii e
Klebisiella pneumoniae (Homann et al., 1990) , o cido succnico utilizando Anaerobiospirillum succiniciproducens (Yazdani e Gonzalez, 2007; Lee et
al., 2001) , o butanol pela fermentao por Clostridium pasteurianum , o
cido propinico por Propionibacteria acidipropionici , o cido actico,
o cido ltico, o 1,3-butanodiol (Deckwer, 1995), o dihidroxiacetonas, o
hidrognio e os polidrohialcanoatos (Pachauri e He, 2006; Solaiman et al.,
2006; Ashby et al., 2005).
A converso do glicerol para cido succnico por Anaerobiospirillum
succiniciproducens tambm descrita, e sua produo pode ser obtida junto
com a pequena formao de cido actico. A mxima produo realizada
por meio de fermentao alimentada de glicerol e extrato de levedura resultou em uma produo mxima de 49g.L-1 de cido (Yazdani e Gonzalez, 2007).
Alguns microorganismos tm a capacidade de produzir metablitos menos txicos, como lcoois e glicis, para escapar da diminuio progressiva
do pH do meio conforme produzem cidos orgnicos. o caso de Clostridium acetobutilicum, que forma cido actico e butrico em pH neutro
e, logo aps a acidificao do meio, passa a produzir acetona e butanol. O
mesmo acontece com as bactrias do gnero Klebsiella, que so capazes de
adaptar a formao de metablitos segundo o pH do meio, como Klebsiella
pneumoniae, que a partir da fermentao do glicerol troca a produo de
cido actico pela de 2,3 butanodiol assim que o pH cai para 5,5 (Biebl et
al., 1998).
Produo de cido ctrico por leveduras utilizando glicerol

H muitas teorias sobre a sntese de citrato tanto em leveduras como
em fungos. No entanto, nenhum dos mecanismos completamente conhe-
803
cido. Pode-se dizer que o cido ctrico acumula-se por uma anormalidade
induzida no metabolismo do fungo durante o ciclo do cido tricarboxlico, ou ciclo de Krebs, que uma sequncia cclica de reaes bioqumicas
de ocorrncia quase universal na mitocndria de organismos aerbicos, e
catalisada por um sistema multienzimtico, que aceita o grupo acetil, do
acetil-coenzima A, como combustvel. Em cada viragem no ciclo, uma molcula de acetil-coenzima A (dois carbonos) se liga a uma molcula de cido
oxalactico (quatro carbonos) para formar o cido ctrico, de seis tomos
de carbono. Esse cido ctrico ento degradado e recuperado na forma de
cido oxalactico, utilizado no prximo ciclo.
A produo fermentativa de cido ctrico por leveduras pode ser classificada como uma fermentao do tipo II, porque a produo de cido ctrico
surge de um metabolismo de energia primria, embora seja no associada
ao crescimento (Rane e Sims, 1996). A produo de cido ctrico por fermentao mostra claramente uma fase de crescimento da biomassa, seguida
da chamada fase de produo do produto, durante a qual o cido ctrico
acumula. A transio do crescimento da biomassa para a produo de cido
ocorre no final do crescimento exponencial, provocada por condies de
limitao de nitrognio (Crolla e Kennedy, 2004).
Extensivos estudos tm mostrado que trs fatores so fundamentais no
excesso de metablitos. Um deles a rpida absoro de fonte de carbono
por difuso simples, pois um fenmeno meramente fsico, no dependente de regulao metablica do organismo. O segundo o irrestrito fluxo
metablico por meio da gliclise, produzindo precursores para a sntese de
intermedirios do ciclo do TCA. E o terceiro a reoxidao do NADH, resultando em nveis mais baixos de ATP e, portanto, diminuio das reaes
anablicas. No entanto, o desregulamentado fluxo metablico por meio da
gliclise um pr-requisito para a sntese rpida de cido ctrico (Berovic e
Legisa, 2007).
O acmulo de cido ctrico bastante influenciado pelo tipo e pela concentrao da fonte de carbono. A presena de carboidratos que podem ser
facilmente assimilados e metabolizados pelo microrganismo determinante na produo de citrato. Diferentes fontes de carbono podem ser utilizadas para a produo de cido ctrico por leveduras, entre elas podem ser
citados n-parafinas, leos naturais, cidos graxos, glicerol, etanol, glicose,
sacarose e lactose. Essas fontes de carbono oferecem resultados diferen-
804
tes, dependendo da variedade de levedura com a qual se est trabalhando.

Os melaos so preferidos para a produo do cido ctrico por fungos e
leveduras devido a seu baixo custo e sua grande quantidade de acares.
Mas outros substratos e resduos industriais tambm podem ser utilizados,
como leos vegetais (coco, palma, oliva, soja), n-parafina e o glicerol, sendo
que Yarrowia lipolytica N-5704 capaz de ferment-los (Armiliato, 2004).
Ultimamente o glicerol bruto, subproduto do biodiesel, tem sido utilizado
para biossntese de cido ctrico por Y. lipolytica (Levinson et al., 2007; Papanikolaou e Aggeliz, 2003; Rymowicz et al., 2008).
Outros fatores como fonte de nitrognio e de fsforo tm grande importncia na formao do cido ctrico. Baixos nveis de fosfato tm efeito
positivo sobre a produo de cido ctrico, atuando na atividade enzimtica.
Por outro lado, o excesso de fosfato estimula o crescimento celular. Com relao ao nitrognio, fisiologicamente, sais de amnio so preferidos, como
a ureia, o sulfato e o nitrato de amnio, assim como a peptona, o extrato de
malte e o extrato de levedura. A concentrao da fonte de nitrognio necessria para a sntese de cido ctrico de 0,1g.L-1 a 0,4g.L-1. Altas concentraes de nitrognio levam ao aumento de biomassa e consequente consumo
de fonte de carbono, diminuindo a quantidade de cido ctrico produzido
(Soccol et al., 2006). A produo de citrato ocorre apenas na deficincia de
nitrognio do meio de cultura, e dessa forma a ausncia de nitrognio livre
no meio aumenta a produo de citrato (Rymowicz et al., 2008), sendo que
apenas em caso de fermentao contnua o nitrognio adicionado ao meio
de cultivo ser somente para a manuteno da viabilidade celular (Rane e
Sims, 1996).
leos e gorduras so utilizados na produo de cido ctrico para controlar a formao de espuma. Alm disso, alguns leos estimulam a produtividade e manuteno dos processos de fermentao, e estes podem
tambm ser utilizados como fonte de carbono, sendo consumidos durante
a fermentao, quando necessrio manter o seu nvel entre 0,05% e 0,3%
(Soccol et al., 2006).
O pH de uma cultura pode mudar em resposta s atividades metablicas
microbianas devido secreo de cidos orgnicos, como cido ctrico. No
cultivo de Aspergillus niger, por exemplo, o pH pode cair rapidamente para
menos de 3,0. A natureza do substrato e a tcnica de produo tambm
influenciam a cintica de pH. Dessa forma, o pH inicial deve ser bem defi-
805
nido e otimizado, dependendo do microrganismo, do substrato e da tcnica

de produo (ibidem).
Vrias leveduras tm a capacidade de produzir cido ctrico. Todavia,
Yarrowia lipolytica capaz de produzir esse cido utilizando diferentes fontes de carbono. Nessa levedura, a produo de cidos orgnicos ocorre por
meio do ciclo do cido tricarboxlico, ou ciclo de Krebs, onde a Acetil-CoA
reage com o oxaloacetato mediante a citrato sintase para formar o cido ctrico (Crolla e Kennedy, 2004). Algumas cepas dessa espcie, na limitao
de fonte de nitrognio, podem ter aumentada a produo do cido ctrico
devido alta produo de citrato sintase (Papanikolaou et al., 2002). Ou
seja, interrompida a fase de crescimento celular (trofofase) com a diminuio na concentrao de ons NH4+ no meio, ocorre o aumento da produo
de citrato sintase, resultando em uma produo excessiva de cido ctrico
(idiofase). Os fatores limitantes do crescimento mais significativos para
que isso ocorra so, em primeiro lugar, a falta de nitrognio, e em segundo,
a falta de ons fosfato (Rywinska et al., 2006).
Em meio de cultivo contendo tiamina, observa-se que o cido ctrico
acumulado tem sua excreo facilitada para o meio extracelular. A produo de cido ctrico est intrinsecamente ligada a concentraes limitantes
de macronutrientes (nitrognio e fsforo) e concentraes timas de micronutrientes, como ons de ferro, tiamina, controle de pH e saturao de oxignio dissolvido. Este ltimo muito importante, pois a falta de oxignio
pode levar no produo de cido ctrico ou produo elevada de cido
isoctrico (Levinson et al., 2007; Armiliato, 2004; Ilchenko et al., 2002;
Anastassiadis et al., 2006). Em Aspergillus niger, altas concentraes de
oxignio so exigidas para a formao do cido ctrico, maiores do que as
requeridas para o crescimento vegetativo, isso porque as cepas produtoras
possuem via respiratria alternativa, constituda por uma oxidase resistente
a cianidas, que requerida para a reoxidao de NADH produzida por via
glicoltica.
Desde que a produo de cido ctrico um processo aerbio, o oxignio ofertado tem um efeito determinante sobre sua produo. O aumento
da taxa de aerao conduz a bons rendimentos e reduz o tempo de processo. Uma interrupo da aerao durante a fermentao bastante prejudicial, pois o fornecimento de oxignio influencia diretamente na formao
do cido ctrico. A alta demanda de oxignio suprida por meio de dispo-
806
sitivos de aerao e dependente da viscosidade do caldo de fermentao

(Soccol et al., 2006). Oxignio puro pode ser misturado ao ar bombeado no
reator, e comprovadamente aumenta a quantidade e produtividade, mas se
mostra economicamente invivel. Alm disso, devido alta taxa de aerao,
h uma grande formao de espuma, que deve ser controlada com antiespumantes ou mecanismos de quebra de espuma. Quando o organismo se
desenvolve na forma de filamentos, a tenso de oxignio dissolvido rapidamente cai para menos de 50% do seu valor anterior, mesmo sem o aumento
significativo da massa seca (ibidem). Isso importante no caso de Yarrowia
lipolytica, por ser uma levedura dimrfica.
Kamzolova et al. (2003) descrevem a Yarrowia lipolytica como sendo
uma levedura especial devido sua habilidade de secretar grande quantidade de cido ctrico, assim como uma grande variedade de cidos orgnicos
pertencentes ao ciclo de Krebs, incluindo o cido isoctrico. No caso especfico da Y. lipolytica, em concentraes mais elevadas de oxignio dissolvido no meio de fermentao h favorecimento de acmulo de cido ctrico.
Em concentraes de oxignio dissolvido entre 50% e 60%, observa-se uma
concentrao de cido isoctrico maior que a concentrao de cido ctrico.
Para nveis de oxignio dissolvido maiores do que 70%, o acmulo de cido
ctrico favorecido, enquanto que a produo de cido isoctrico no sofre
grandes alteraes. Porm, a adio de inibidores de aconitase, como ons
de clcio, e a limitao de ons de ferro favorecem o acmulo de cido ctrico
e uma menor produo de cido isoctrico (Armiliato, 2004).
Em geral, as leveduras apresentam algumas vantagens em relao aos
fungos, como maior tolerncia a altas concentraes de substrato, maior
taxa de converso, maior produtividade, e permitem um maior controle
do processo, por serem de natureza unicelular (ibidem). O grande problema em se produzir cido ctrico a partir de leveduras est na formao do
cido isoctrico (Rymowicz et al., 2006) e por no se obter uma produo
competitiva como a de Aspergillus niger (Soccol et al., 2006). Papanikolaou e Angelis (2002) mostraram que a taxa de converso do glicerol para
citrato na fermentao por Y. lipolytica mostra-se maior do que se utilizando acares, o que no acontece para o crescimento celular, onde a taxa de
crescimento utilizando-se acares maior. Sabe-se que a respirao de
leveduras utilizando-se acares ocorre por duas vias: pentose-fosfato e
Embden-Meyerhof-Pathway (EMP). No caso do glicerol, a oxidao ocor-
807
re somente pela via C3 da gliclise da EMP. Por esse motivo, a produo

de citrato mais favorecida usando glicerol, pois leva direto ao piruvato,
enquanto que a via pentose-fosfato direcionada para a produo principalmente de compostos NADPH+.
cido ctrico
O cido ctrico (cido 2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxlico) o
principal cido orgnico produzido hoje pela fermentao. A histria de
cido ctrico comeou em 1784, com W. Scheele, que primeiro isolou o
citrato de clcio do suco de limo, o qual, tratado com cido sulfrico, liberava o cido ctrico na forma livre. Em 1893, Wehmer foi o primeiro que
observou a produo de cido ctrico como subproduto do oxalato de clcio,
fermentado por uma cultura de Penicillium glaucum a partir da fermentao
de acar, o que lhe gerou uma patente. Em 1884, foi construda a primeira
planta industrial para produo de cido ctrico usando sistema de fermentao em estado slido em bandejas abertas, mas dez anos depois a fbrica
fechou devido fermentao ser considerada longa demais, e contaminaes frequentes ocorriam. Zahorsky, em 1913, seguindo as pesquisas para
a produo de cido ctrico, patenteou uma nova cepa, Aspergillus niger,
sendo que Currie, em 1917, abriu um novo caminho para a fermentao
industrial, pois constatou que a cepa crescia bem em baixo pH (entre 2,5
e 3,0), o que impedia o crescimento de outros microrganismos. A partir de
1928, o cido ctrico recomeou a ser produzido em escala industrial pela
via fermentativa usando melado de beterraba, uma fonte de carbono barato, mas apresentava teor de metais elevado, problema este resolvido em
1938 pela adio de ferrocianeto de potssio como agente quelante (Berovic
e Legisa, 2007; Soccol et al., 2006).
Em meados de 1960, comeou no Japo a primeira produo de cido ctrico a partir de levedura do gnero Candida, que utilizava n-alcanos como
fonte de carbono, resultando em quantidades considerveis de cido ctrico
e isoctrico (Tanaka et al., 1968).
Hoje, praticamente 99% da produo mundial de cido ctrico realizada via fermentao de vrios substratos por diferentes microrganismos.
Sua extrao a partir de restos de frutas ctricas ainda praticada, entretanto, torna-se insignificante quando comparada ao processo fermentativo.
808
A produo mundial de cido ctrico atingiu 1,4 milho de toneladas em

2004, e estimava-se um aumento de 3,5% a 4% por ano, podendo alcanar
1,6 milho de toneladas em 2010 (Grfico 21.4), com um preo de mercado chegando a US$1,3 por quilograma (Rymowicz et al., 2008). Com isso,
espera-se que o mercado de cido ctrico possa ultrapassar os US$2 bilhes
(Soccol et al., 2006).
Grfico 21.1 Produo de cido ctrico mundial

Fonte: adaptado de Berovic e Legisa, 2007
Cerca de 60% a 70% do cido ctrico produzido so consumidos pela

indstria de alimentos. Do restante, 18% so utilizados na indstria farmacutica. Nos maiores produtores China, Estados Unidos da Amrica
e Europa , quase toda a produo feita por via microbiolgica (Berovic e Legisa, 2007). A China sozinha responsvel por cerca de 40% da
produo mundial. Entre as maiores produtores podem-se citar a ADM,
a Cargill, a Tate & Lile, a DSM, a Gadot Biochemical Industries (Israel) e a
Anhui BBCa Biochemical (China). A intensa competio e os preos relativamente baixos do cido ctrico levaram pequenas produtoras a abandonar
as linhas de produo de citrato na ltima dcada. Isso porque a indstria
de cido ctrico tem passado por muita presso e oscilao de preos nos
ltimos anos, com preos do quilo do citrato entre US$0,70 e US$2, sendo
os fornecedores chineses os mais competitivos, vendendo ao preo mais barato possvel para vencer a concorrncia europeia (Soccol et al., 2006).
809
No Brasil, o consumo anual de cido ctrico e citrato de sdio compreende cerca de 30 mil toneladas por ano. O fato de o cido ctrico ser muito
apreciado na indstria de alimentos deve-se sua baixa toxicidade, solubilidade, palatabilidade e por ser facilmente metabolizado pelo organismo.
Tambm utilizado para a limpeza de equipamentos na indstria e, juntamente com seus sais, como tampo e estabilizante em vrios produtos
alimentcios (Armiliato, 2004; Rymowicz et al., 2008; Berovic e Legisa,
2007). A produo mundial de cido ctrico ocorre principalmente por meio
de fermentao microbiana, sendo que o segundo metablito em volume
mais produzido, perdendo apenas para o etanol. Enquanto a maior parte
da produo do citrato por via fermentativa realizada pelo fungo filamentoso Aspergillus niger, vrias leveduras so capazes de sintetizar o cido
tricarboxlico, a maior parte do gnero Candida, como Candida tropicalis,
C. guilliermondii, C. intermedia, C. parapsilosis, C. zeylanoides, C. fibriae, C.
subtropicalis e C. oleophila (Berovic e Legisa, 2007). Yarrowia lipolytica, em
especial, capaz de faz-lo em grandes quantidades (Levinson et al., 2007).
Yarrowia lipolytica tem sido a mais estudada na produo de cido ctrico a
partir de vrios substratos oxidveis Acetil-CoA, como acares, alcanos,
leos vegetais, hidrolisados de amido, etanol e glicerol. A levedura Yarrowia lipolytica uma daquelas com potencial para a produo tambm de
grandes quantidades de cido isoctrico e de outros cidos orgnicos que
podem servir na sntese mais fcil de outras molculas na chamada qumica verde (Heretsch, 2008; Sauer, 2008). Alm disso, o isocitrato tambm
matria-prima para a fabricao de medicamentos para trombose e anemia.
Tambm o -cetoglutarato, outro metablito sintetizado por Yarrowia lipolytica em grande quantidade, fonte de matria-prima para a fabricao
de frmacos, polisteres, poliis, poliamidas, plastificantes e inibidores de
corroso (Finogenova et al., 2005).
Produo de citrato por Yarrowia lipolytica

A razo entre nitrognio e fonte de carbono afeta diretamente a produo de citrato e isocitrato, quando a otimizao do meio de cultura pode levar a razes de citrato/isocitrato bastante elevadas (Levinson et al., 2007).
De acordo com Costa (2000) e Papanikolaou e Aggelis (2003), a fermentao de cido ctrico por Y. lipolytica ocorre melhor em duas etapas, uma
810
fase de crescimento celular, e outra de produo de citrato, aps a depleo

do nitrognio extracelular. Papanikolaou e Angelis (ibidem) determinaram
os modelos cinticos de Y. lipolytica para o crescimento celular, consumo
de glicerol e produo de citrato usando frascos comuns em batelada e uma
concentrao de glicerol inicial de 80g.L-1 e nitrognio total de 0,14 g.L-1. A
constante de saturao de nitrognio obtida foi maior do que a constante de
saturao de elementos minerais, que de 10mg.L-1 a 20mg.L-1, o que pode
ser atribudo ao fato de que o crescimento dessa espcie geralmente continua mesmo aps a depleo do nitrognio mineral extracelular, enquanto
que as reservas de nitrognio intracelular so consumidas. Levinson et al.
(2007) utilizaram 40g.L-1 de glicerol e variaram a relao de C/N para observar a produo de citrato e isocitrato. Os resultados sugeriram que uma
razo de C/N entre 343 e 686 oferece uma maior produo de citrato, alm
de favorecer uma melhor relao citrato/isocitrato, maior que 9.0, e que a
taxa de converso diminuda em razes C/N maiores que 172.
Ribeiro et al. (2009), utilizando Yarrowia lipolytica IMUFRJ 50682,
realizaram dois planejamentos experimentais 2k-1, variando as concentraes de carbono e nitrognio. O meio mineral era composto de KH2PO4,
Na2HPO4.7H2O, MgSO4.7H2O, CaCl2. 2H2O, FeCl3.6H2O, ZnSO4.7H2O
e MnSO4.H2O. No primeiro planejamento (k = 4), utilizaram duas concentraes de glicerol em 40g/L e 200g/L, extrato de levedura na concentrao
de 0,5g/L e 10g/L, sulfato de amnia na concentrao de 0g/L e 10g/L e
agitao a 160rpm e 250rpm. Encontraram o melhor resultado (0,55g.L-1
de citrato) utilizando concentraes de 200g.L-1 de glicerol, 0,5g.L-1 de extrato de levedura, sem adio de sulfato de amnia, e agitao de250rpm.
No segundo planejamento (k = 2) variaram o glicerol em 150g/L e 250g/L
e o extrato de levedura na concentrao de 0,1g/L e 0,9g/L e obtiveram
os melhores resultados (custo-benefcio) em 45 horas de processo usando
150g.L-1 de glicerol e fonte de nitrognio limitante.
Rymowicz et al. (2006), visando a sntese de citrato, utilizaram em seus
experimentos frascos de 300mL com um volume de trabalho de 50mL,
30C durante 72 horas de fase de produo, adicionado de 200g.L-1 de glicerol, 3g.L-1 de NH4Cl, 0,2g.L-1 de KH2PO4, 1g.L-1 de MgSO4.7H2O e 1g.L-1
de extrato de levedura, e selecionaram a melhor cepa produtora Yarrowia
lipolytica 1.31. Em fermentador, fixaram a taxa de aerao em 0,2min-1,
811
600rpm de agitao, pH 5,5 controlado com NaOH, e atingiram um mximo de 124,5g.L-1 de citrato produzido pela cepa 1.31, equivalente a uma
produtividade de 0,62g/g.
Produo microbiana de 1,3-propanodiol

O maior destaque est na produo microbiana de 1,3-propanodiol
(1,3PDO). O 1,3PDO conhecido h mais de cem anos e amplamente
empregado na produo de polmeros do tipo politrimetilenotereftalato
(PTT). O PTT conhecido por suas propriedades elsticas e empregado amplamente na fabricao de resinas, adesivos, tintas aquosas, laminados, revestimentos, molduras, polisteres alifticos e anticongelantes.
O 1,3PDO conhecido por ser uma molcula bifuncional e pode ser usado em mesmas aplicaes tais como so usados o etilenoglicol, o propilenoglicol, o 1,3-butanodiol e o 1,4-butanodiol. Alm disso, como os passos
de produo de polietileno (PET) e PTT so anlogos, possvel converter
plantas industriais de PET j existentes para a produo de PTT a um custo
de cerca de 10% a 20% da construo de uma nova planta. O PTT apresenta
a mesma resistncia que o PET, com a vantagem de ter uma cristalizao
mais rpida, menor ponto de fuso e menor temperatura para moldagem
(Maervoet et al., 2011).
Existem vrios estudos com Klebsiella pneumoniae, Citrobacter freundii,
Clostridium butyricum e C. acetobutilicum, que so capazes de converter o
glicerol residual do biodiesel em 1,3PD. Dentre essas bactrias se destaca
a C. butyricum, que tambm capaz de produzir dihidroxiacetona, etanol,
acetato e butirato. A ampla variedade de aplicaes do 1,3PD permite estimar que em 2020 exista um mercado potencial de 230 mil toneladas por ano
(Crdenas et al., 2006).
A produo do 1,3-propanodiol est ligada a um processo oxidativo do
glicerol. O glicerol entra na clula por transportador facilitado de glicerol
GlpF ou por difuso (Maervoet et al., 2011). Quando entra na clula, pode
seguir por duas vias. Na primeira, oxidativa, sofre desidrogenao pela (coenzima) NAD ligada a uma glicerol desidrogenase (glyDH), tornando-se
uma dihidroxiacetona (DHA), sendo fosforilada por DHA quinases dependente de ATP. Por meio do processo paralelo, via fermentiva, o glicerol
812
desidratado pela coenzima B12-dependente de glicerol desidratase, para

formar 3-hidroxipropionaldeido (3-HPA). O 3-HPA ento reduzido para
1,3PD pela NADH ligada ao 1,3PDO desidrogenase (Yazdani e Gonzalez,
2007).
Em K. pneumoniae, a taxa de reao global da via redutora limitada, em
primeiro lugar porque essa reao mediada por uma coenzima, a cianocobalamina (vitamina B12). Alm disso, pode haver inibio pelo substrato,
formando uma ligao irreversvel da ligao Co-C da cobalamina com a
apoenzima, formando alquilcobalaminas. Contudo, fatores de reativao,
complexo de protenas GdrA e GdrB, fazem troca da cobalamina inativada
por uma nova vitamina B12, na presena de Mg+ e com consumo de Atp.
Ento, para evitar a baixa atividade da enzima, deve haver o controle da
quantidade de glicerol e adio de vitamina B12 ao meio (Shibata et al.,
2002; Kajiura et al., 2001; Daniel et al., 1999).
Engenharia metablica aplicada produo

de 1,3-propanodiol
Com o uso da engenharia metablica possvel manipular as vias de sntese de certos produtos e reduzir ou at eliminar a formao de subprodutos
indesejveis (Cheng, Lin e Lin, 2005). Forage e Lin (1982) verificaram os
genes responsveis pela produo de 1,3-propanodiol em Klebsiella pneumoniae. Com isso, identificaram o complexo de genes responsveis pela via
da dihidroxiacetona (DHA), que codificam enzimas no metabolismo do
glicerol, como glicerol desidratase (DHA 1, 2, 3), 1,3-propanodiol oxiredutase (DHA T), glicerol desidrogenase (DHA D), dihidroxiacetona quinase
(DHA K) e um gene regulatrio (DHA R).
A DuPont e a Genencor International, Inc. modificaram E. coli geneticamente de modo que esse organismo pudesse produzir 1,3PDO a partir de
glicose. Uma vez que E. coli selvagem no pode produzir de forma eficiente
glicerol a partir da glicose e no capaz de produzir 1,3PDO a partir de
glicerol, sete genes tiveram que ser introduzidos no genoma. Dois desses
genes (dar1 e gpp2) originados de Saccharomyces cerevisiae, e cinco genes (dhaB1, dhaB2, dhaB3, dhaBX e orfX) a partir de Klebsiella pneumoniae.
Dessa forma, fornece 1,3-propanodiol a uma produtividade de 3,5g/L/h,
uma concentrao de 135g/L e um rendimento de 0,62mol/mol.
813
Devido necessidade de valorizar o glicerol e pelo fato de E. coli ter

bom crescimento em glicerol, pesquisadores vm tentando desenvolver E.
coli para produzir 1,3-PDO. Ma et al. (2009) inseriram dois genes em E.
coli e, expressando os dois genes na mesma direo, conseguiram produzir 11,3g/L de 1,3PDO a partir de 40g/L de glicerol. Zhang et al. (2006)
construram um plasmdeo similar em E. coli, e usando delineamento experimental, a partir de concentraes fixadas em 61,8g/L de glicerol, 6,2g/L
de extrato de levedura e 49mg/L de vitamina B12, conseguiram uma produo de 41,3g/L de 1,3PDO. Zhang et al. (2006) conseguiram o mximo
obtido com um mutante de E. coli quando usaram os genes dhaB1 e dhaB2
de C. buyiricum, que apresenta rpida converso e no dependente de vitamina B12, e usaram fermentao em dois estgios, o primeiro a 30C, para
obteno de alta densidade celular (high cell density), e o segundo passando
a cultura para 42C e anaerobiose total para produo, chegando ao final
com 104g/L de 1,3PDO a uma produtividade de 2,61g/L/h.
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Parte V
Sustentabilidade
dos biocombustveis
22
Mudanas recentes na ocupao
sucroalcooleira em decorrncia da
mecanizao do corte de cana-de-acar
no estado de So Paulo
Jos Giacomo Baccarin,
Jos Jorge Gebara,
Janana Gagliardi Bara
Introduo
Pode-se discutir a forma como ocorre o corte da cana-de-acar tanto do
ponto de vista mais restrito, da gesto empresarial, quanto de perspectiva
mais ampla, envolvendo temas como a gerao de postos de trabalho, as relaes sociais entre empresrios e trabalhadores e a preservao ambiental.
A princpio, h quatro possibilidades para aquela operao: corte manual
de cana sem queimar, corte manual de cana queimada, corte mecnico de
cana queimada e corte mecnico de cana sem queimar.
Na metade da dcada de 1960, no estado de So Paulo, o corte da canade-acar era feito, na quase totalidade, de maneira manual sem a queima
prvia de sua palha. Na atualidade, o corte mecnico de cana sem queimar
predominante nos canaviais paulistas, tendo se verificado acelerao de seu
uso aps 2006. Tambm ocorreram modificaes tecnolgicas no plantio da
cana-de-acar.
Ao mesmo tempo tem se verificado grande expanso da rea plantada e
da produo de cana-de-acar no estado. Assim, informaes do Projeto
Canasat indicam que o total cultivado com cana-de-acar em So Paulo passou de 3.002.676 hectares (ha) em 2003/04 para 5.303.342 ha em
2010/11: um crescimento de 76,6% (Inpe, 2011).
836
SUSTENTABILIDADE DOS BIOCOMBUSTVEIS
A expanso canavieira tende a afetar positivamente a gerao de emprego ou ocupao canavieira, enquanto a mudana tecnolgica, especialmente
no corte de cana, tende a diminuir a necessidade de trabalhadores canavieiros no qualificados, mais especificamente dos cortadores de cana.
O objetivo do presente trabalho analisar os efeitos das mudanas tecnolgicas, com destaque para o corte de cana, na evoluo do nmero de
trabalhadores canavieiros no qualificados ocupados por empresas sucroalcooleiras no estado de So Paulo, vis--vis os demais tipos de ocupao
dessas empresas, no perodo compreendido entre 2007 e 2010. Especificamente, pretende-se:
a) Comparar a ocupao entre diferentes empresas sucroalcooleiras;
b) Estimar o nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados;
c) Analisar mudanas na sazonalidade de ocupao dos trabalhadores
canavieiros no qualificados;
d) Estimar o nmero de pessoas ocupadas em atividades industriais,
administrativas e de apoio e no sucroalcooleiras das empresas sucroalcooleiras;
e) Comparar a evoluo de diferentes categorias de ocupao com a
evoluo da rea de cana-de-acar e da produo setorial.
Alm da introduo, este captulo est organizado em mais trs sees.
A primeira aborda as mudanas tecnolgicas que ocorreram no cultivo,
mais enfaticamente no corte da cana-de-acar em So Paulo, entre as dcadas de 1960 e 2010, procurando captar suas motivaes administrativas
e sociais e consequncias ambientais e sociais. A segunda refere-se metodologia, com descrio das fontes e da forma como se trataram os dados de
produo e ocupao sucroalcooleiras. A terceira dedicada interpretao
dos resultados. H ainda as consideraes finais.
Mudanas tecnolgicas no cultivo da cana-de-acar

Costuma-se dividir a colheita da cana em trs operaes: o corte propriamente dito, o carregamento da cana cortada em veculos e seu transporte, em uma ou duas etapas, para o processamento industrial nas usinas
e destilarias.
MUDANAS RECENTES NA OCUPAO SUCROALCOOLEIRA
837
At o final da dcada de 1960, as operaes de corte e carregamento

eram feitas manualmente. Havia trabalhadores que, com o uso do podo, se
dedicavam ao corte da cana crua (sem queima prvia de sua palha) em um
eito composto por trs a cinco ruas da cultura. O produto cortado era depositado em leira contnua ou em feixes na rua central do eito. Outro grupo de
trabalhadores carregava nas costas a cana cortada, muitas vezes subia uma
escada e a depositava nas carrocerias de caminhes ou em carretas de tratores para seu transporte at as agroindstrias sucroalcooleiras.
No final da dcada de 1960, o carregamento da cana cortada passou a ser
feito mecanicamente, por meio de guinchos acoplados a tratores. Tambm
aumentou a capacidade de carga dos caminhes transportadores. Diante
disso, tornou-se necessrio ou aumentar o nmero de cortadores de cana
por frente de trabalho ou elevar a quantidade de cana que cada um cortava
diariamente.
Essa segunda opo acabou predominando, com a adoo da prtica de
queimar a palha da cana-de-acar horas antes de seu corte. Segundo relatos de empresrios e trabalhadores, estima-se que com isso a quantidade de
toneladas de cana cortada diariamente por trabalhador no mnimo dobrou
ou mesmo triplicou. Alm disso, a queimada do canavial afugentava animais peonhentos e diminua o nmero de ferimentos, inclusive nos olhos
dos trabalhadores, causados pela palha da cana.
Portanto, a queimada proporcionou ganho significativo na produtividade do cortador de cana, o que certamente mais do que compensava seus
custos empresariais. A adoo da queimada dos canaviais trouxe evidentes prejuzos ambientais, poluindo o ar e contribuindo para a destruio da
fauna e flora nativas, no sendo raro o fogo dos canaviaisatingir reas de vegetao natural, acidentalmente ou no. Como a rea com cana-de-acar
era bem menor que na atualidade e a mobilizao social na defesa do meio
ambiente era menos expressiva, por muitos anos a reao contra a queimada dos canaviais no ganhou grande expresso.
Outro expediente usado desde ento at a atualidade, para aumento da
produtividade, o pagamento do corte manual proporcionalmente quantidade de cana cortada.
O corte manual de cana queimada generalizou-se entre o final da dcada
de 1960 e o incio da dcada de 1980, no estado de So Paulo, e consolidou-
838
-se o chamado sistema de cana de cinco ruas, correspondente largura do

eito de trabalho do cortador.
Na primeira metade da dcada de 1980 constatava-se grande contingente de trabalhadores rurais canavieiros no estado de So Paulo, como decorrncia da expanso da produo de cana-de-acar, associada aos incentivos do Programa Nacional do lcool (Prolcool), de 1975. Isso estimulou,
inclusive, o aumento do nmero de migrantes sazonais,1 originados do norte de Minas Gerais e de alguns estados do Nordeste, para o corte de cana.
Por volta de 1983, vrios empresrios sucroalcooleiros tentaram implantar modificaes no sistema de corte manual de cana. Visando reduzir custos com maquinrio agrcola e obter cana cortada com menos terra
impregnada, garantindo melhor rendimento industrial, procuraram elevar
a largura do eito de trabalho de cinco para sete ruas, ou seja, de 6,0 para
9,0 metros, bem como aumentaram as exigncias quanto deposio da
cana em montes na rua central (Gebara; Baccarin, 1984). Em face do maior
esforo fsico que o novo sistema de sete ruas impunha, a reao dos trabalhadores foi imediata e generalizada, com registro de vrias greves e mobilizaes sociais, como a revolta ocorrida no municpio de Guariba (SP), em
1984, que paralisou totalmente o corte de cana na regio.
Os empresrios tiveram que voltar atrs, mantendo o sistema de cinco ruas, e da em diante as negociaes anuais feitas em torno dos salrios
e demais condies de trabalho, pelo menos por alguns anos, foram mais
favorveis aos canavieiros (Alves, 1991). A contratao dos trabalhadores,
antes feita de maneira indireta, por empreiteiros, tendeu a ser substituda
pela contratao direta pelas empresas sucroalcooleiras; o transporte dos
trabalhadores, feito antes em caminhes, passou a ser feito por nibus; os
empresrios, com o tempo, passaram a fornecer equipamentos de proteo
individual contra acidentes de trabalho.
poca, alguns empresrios chegaram a expressar a inteno de adotarem amplamente a colheita mecanizada de cana-de-acar, at como uma
1 A maioria dos migrantes era constituda por pequenos agricultores na sua regio de origem,
sendo que a suas atividades laborais eram menores justamente no perodo coincidente com
a safra de cana-de-acar em So Paulo, possibilitando o fenmeno da migrao sazonal. Ou
seja, na entressafra de cana os trabalhadores permaneciam em suas regies de origem, plantando pequenas reas de lavouras temporrias, e na safra dirigiam-se aos canaviais paulistas
para o trabalho de corte (Zocoller; Baccarin; Gebara, 1984).
839
forma de presso nas negociaes trabalhistas. Como se ver logo adiante,

tal inteno no se efetivou, de forma ampla, pelo menos at o final da dcada de 1990.
No campo ambiental, a partir do final da dcada de 1980, acentuaram-se as mobilizaes sociais e as aes do Ministrio Pblico procurando impedir a prtica das queimadas. Nessa direo, foram editadas novas normas
pblicas, de mbito federal e paulista, estipulando a eliminao gradativa
da queima dos canaviais. Em So Paulo, aps vrias tentativas de normatizao mais rgidas, editou-se a lei 11.242, de 19.9.2002 que estabelece
que a extino da queima dos canaviais deva ocorrer at 2031, em reas no
mecanizveis (declividade acima de 12%), e at 2021, em reas mecanizveis (declividade abaixo de 12%). Por sua vez, o decreto federal n.2.661, de
8.7.1998, trata apenas das reas mecanizveis e estabelece o ano de 2018
como prazo para extino completa da queima dos canaviais (Paes, 2007).
O prazo relativamente longo estabelecido na legislao para o fim da
queima dos canaviais guardava correspondncia com o debate social que se
desenvolvia em torno do assunto, no final da dcada de 1990. Do lado dos
defensores da queimada, o argumento mais usado era que apenas com tal
prtica se garantia a colheita manual de cana e a manuteno de milhares de
empregos rurais. Se a cana tivesse que ser colhida sem queimar, necessariamente, teriam que ser usadas colhedoras mecnicas, cada uma substituindo
de oitenta a cem cortadores, provocando grande dispensa destes.
Esse argumento era apenas parcialmente verdadeiro. Primeiro, por que
a cana sem queimar ou crua pode ser cortada manualmente, embora, como
j visto, em ritmo muito menor que a cana queimada e, provavelmente,
com oposio dos trabalhadores que h muitos anos vinham colhendo cana
queimada. O mais importante, contudo, que muitas vezes se praticava a
queimada da cana (agredindo o meio ambiente) e se colhia mecanicamente
(provocando desemprego), posto que vrias colhedoras da poca apresentavam dificuldades de operar com o excesso caracterstico de palha da canade-acar.
Estimativas apresentadas por Paes (ibidem) apontam que a rea colhida com colhedoras no estado de So Paulo era de apenas 18% da rea total
com cana, em 1997. Em termos da gesto empresarial, pode-se especular
que este nvel baixo de mecanizao estava associado s dificuldades financeiras e de investimento de grande parte das empresas sucroalcooleiras na
840
dcada de 1990, a custos ainda relativamente mais baixos da colheita manual, falta de adaptao dos canaviais (especialmente o comprimento dos
talhes de cana) e das cultivares para emprego mais eficiente das colhedoras
mecnicas, bem como ao insuficiente desenvolvimento tecnolgico dessas
mquinas.
importante reter outro dado levantado por Paes (ibidem) sobre 1997.
Nesse ano, da rea colhida com colhedora, em 79% usava-se a queima prvia dos canaviais e apenas em 21% colhia-se cana crua.
A partir dessas informaes e supondo que o corte manual de cana sem
queimar era residual, pode se estabelecer que, em 1997, o sistema de corte manual de cana queimada representava 82%, o corte mecnico de cana
queimada, 14%, e o corte mecnico de cana sem queimar representava to
somente 4% da rea colhida de cana-de-acar, em So Paulo. Ou seja,
continuava amplamente predominante o corte manual de cana queimada
e o pouco de mecanizao que se adotava tinha efeito muito reduzido na
diminuio dos problemas ambientais associados queimada.
Na dcada inicial do sculo XXI registraram-se vrios acontecimentos
favorveis no mercado de lcool e de acar, estimulando o crescimento da
produo sucroalcooleira (Bacarin; Alves; Gomes, 2008). A capitalizao
das empresas aumentou, com obteno de considerveis financiamentos
junto ao Banco Nacional de Desenvolvimento Econmico e Social (BNDES), via mercado de capitais e com a entrada de novos grupos no setor,
muitos internacionais. Tambm, a exportao do lcool combustvel tornou-se efetiva, trazendo novas exigncias quanto certificao de conformidade tcnica e ambiental do produto.
Nesse perodo constatou-se que as mudanas tecnolgicas no cultivo da
cana-de-acar se aceleraram. Em 2006, a rea de cana colhida mecanicamente em So Paulo se elevara para 40%, sendo que deste total 27% continuava empregando a queimada prvia e 73% j no usava a prtica (Paes,
2007). Ou seja, o corte manual de cana queimada continuava predominando, com participao de 60%, embora de forma bem menos expressiva que
em 1997. No entanto, o corte mecnico de cana queimada cara para 11% e
o corte mecnico de cana sem queimar se elevara para 29% do total da rea
colhida com cana em So Paulo.
Dados de imagem de satlite obtidos pelo Projeto Canasat e trabalhados
por Aguiar, Rudorff e Silva (2010) indicam que, na safra 2006/07, 34,2%
841
da rea colhida com cana em So Paulo no utilizou a queima prvia, valor

prximo ao obtido a partir dos dados de Paes (2007).
Entre 2006 e 2007, aparentemente, ocorreu modificao na atitude e no
discurso empresarial quanto adoo da colheita mecnica. Antes, procurava-se justificar o alto nvel de rea de cana queimada associando-o
manuteno da ocupao dos cortadores de cana. A partir da, passou-se a
destacar a necessidade de se adotarem prticas preservacionistas, revelando
a inteno de acelerar ainda mais a adoo do corte mecnico de cana sem
queimar. Nesse momento, em torno de 25% da produo brasileira de lcool combustvel j era destinada exportao.
Um fato que comprova essa mudana de atitude e discurso a assinatura, em 2007, do Protocolo Agroambiental entre a Unio da Indstria de
Cana-de-acar (Unica) e as Secretarias Estaduais do Meio Ambiente e da
Agricultura e Abastecimento, prevendo-se a antecipao do final das queimadas da cana-de-acar em So Paulo para 2014, em reas mecanizveis, e
para 2017, em reas no mecanizveis. Embora a adeso ao protocolo fosse
(e continua sendo) voluntria, sua edio deixava clara a opo, pelo menos
das lideranas dos empresrios paulistas, em extinguir, o quanto antes, as
queimadas (Fredo et al., 2008).
A acelerao da adoo da colheita mecnica , indiretamente, comprovada pelo estudo de Aguiar, Rudorff e Silva (2010). Se em 2006/07 a rea
colhida com cana sem queimar em So Paulo atingira 34,2% do total colhido, em 2007/08 esse valor passou para 46,6%, e em 2008/09 para 49,1%,
alcanando 55,7% em 2009/10.2 Ou seja, nesse ltimo ano a rea colhida
sem queima prvia do canavial tornou-se levemente majoritria.
Supondo-se que a substituio do corte mecnico de cana queimada por
corte mecnico de cana crua, entre 2006 e 2009, tenha se mantido no ritmo
constatado por Paes (2007) entre 1997 e 2006, pode-se estimar, a partir dos
dados de Aguiar, Rudorff e Silva (2010) que, em 2009, 61,7% da rea colhida com cana em So Paulo usou colheita mecnica, sendo 6,0% precedida
da queima dos canaviais.
2 Estudo desenvolvido por Ramos (2007) aponta para a intensificao do uso de colhedoras,
sendo que, em 2003, foram vendidas no Brasil quarenta dessas mquinas, saltando para 254,
em 2006, e prevendo-se que seriam comercializadas entre 950 e mil unidades, em 2010. O
autor estima que 80% da rea de cana-de-acar no Centro-Sul do Brasil sero colhidos mecanicamente, em 2015.
842
O efeito negativo da incorporao mais acelerada da colheita mecnica sobre o nmero de trabalhadores canavieiros vem sendo reforado pelo
acrscimo da produtividade mdia do cortador de cana, verificado desde o
final da dcada de 1980. Assim, dados coletados pelo Instituto de Economia Agrcola (IEA) da Secretaria de Agricultura e Abastecimento do estado
de So Paulo mostram que, em 1989, o trabalhador canavieiro cortava, em
mdia, 6,09 toneladas de cana por dia em So Paulo. Este valor passou para
7,00 toneladas, em 1995, 7,69 toneladas, em 2000, at alcanar, em 2009,
8,79 toneladas (IEA, 2008, 2009). Ou seja, em um prazo de vinte anos, a
produtividade mdia do canavieiro no corte de cana, em So Paulo, aumentou em 44,3%.
Alm da colheita, realizada entre os meses de abril e novembro nas condies paulistas, outra operao agrcola em que se observam modificaes
tecnolgicas importantes o plantio de cana-de-acar, realizado, normalmente, nos quatro primeiros meses do ano (Baccarin; Gebara, 2010). Neste
caso j se constata a substituio do plantio manual pelo plantio mecnico
em algumas empresas. Tambm aumentou o nmero de cortes de um mesmo canavial, de uma mdia de trs, comum na dcada de 1970, para uma
mdia superior a seis, atualmente. Ou seja, em uma mesma rea de canade-acar, o plantio tende a se repetir, nos dias atuais, a cada sete anos ou
mais, contra os quatro anos da dcada de 1970, reduzindo a necessidade de
trabalhadores por rea de cana-de-acar.
Metodologia
Os dados da rea de cana-de-acar no estado de So Paulo foram
obtidos do Projeto Canasat do Inpe. Os da produo de cana-de-acar,
de acar e lcool foram obtidos de publicaes da Companhia Nacional de
Abastecimento (Conab).
J a fonte de informaes sobre ocupao foram os arquivos do Ministrio do Trabalho e Emprego (MTE) do Governo Federal do Brasil, que
registram informaes sobre ocupao formal (com carteira de trabalho
assinada) prestadas pelas prprias empresas empregadoras. importante
ressaltar que nas condies prevalecentes no estado de So Paulo, Moraes
(2004) estimava que a ocupao formal representava, aproximadamente,
843
90% da ocupao sucroalcooleira. Como de l para c a formalidade de trabalho em geral tendeu a aumentar no Brasil, entende-se que algo semelhante deve ter acontecido no setor aqui analisado, aumentando ainda mais a j
alta representatividade dos dados analisados nesse trabalho.
As empresas enviam dois tipos de relatrio ao MTE. Um, chamado de
Relao Anual de Informaes Sociais (Rais), tem dados de ocupao em
31 de dezembro de cada ano. O outro tipo de relatrios que registram,
para cada ms do ano, a movimentao (admisso e demisso) das pessoas
ocupadas, chamado de Cadastro Geral de Empregados e Desempregados
(Caged). A partir das informaes da Rais de um ano qualquer, pode-se obter uma estimativa do nmero de pessoas ocupadas em determinado ms do
ano seguinte, agregando-se o nmero de admisses e demisses registrado
at ento pelo Caged.
Para as empresas sucroalcooleiras necessrio no se ater apenas aos
dados registrados na Rais, cujas informaes coincidem com a entressafra
do setor, quando as agroindstrias no esto mais processando a cana-deacar e as atividades agrcolas so menores. imprescindvel que tambm
se usem os dados do Caged, que permitem obter informaes dos meses da
safra sucroalcooleira, cujo pice ocorre entre maio e julho de cada ano.
Em um primeiro momento, fez-se uma anlise da ocupao de acordo
com o tipo de empresa. Consideraram-se como empresas sucroalcooleiras
aquelas classificadas na Rais e no Caged nos seguintes grupos: cultivo da
cana-de-acar, fabricao do acar em bruto, fabricao do acar refinado e fabricao de lcool.
preciso observar que essa classificao se estabelece de acordo com a
atividade principal da empresa, sendo que uma empresa classificada como
de cultivo da cana-de-acar, por exemplo, pode se dedicar tambm a outras
atividades agropecurias ou mesmo no agropecurias. Outra observao
que no Brasil h grande integrao vertical nas agroindstrias sucroalcooleiras (produtoras de acar e lcool) que produzem, diretamente, grande
parte de sua matria prima, a cana-de-acar.3 Dessa forma pressupe-se
3 Na safra 2007/08, constatou-se que nas agroindstrias sucroalcooleiras do Centro-Sul, onde

se encontra So Paulo, 65,4% da cana-de-acar moda era proveniente de canaviais das prprias usinas ou destilarias e apenas 34,6% provinha de fornecedores independentes (Conab,
2008).
844
que o nmero de pessoas ocupadas em atividades agrcolas nas empresas

dedicadas fabricao do acar em bruto, do acar refinado ou do lcool seja significativo, embora menos importante que no caso das empresas
dedicadas ao cultivo de cana-de-acar.
A anlise dos resultados foi feita comparando-se o ocorrido isoladamente em empresas do cultivo de cana-de-acar com o acontecido no conjunto
dos outros trs tipos de empresas sucroalcooleiras, que ser chamado de
agroindstrias sucroalcooleiras. As empresas do primeiro tipo so de menor tamanho mdio, sendo que 6.258 delas apareceram registradas na Rais
2009. J as agroindstrias sucroalcooleiras so, na mdia, de maior porte,
com 258 registros na Rais 2009 (MTE, 2011).
Em um segundo momento, analisou-se a evoluo das diferentes categorias profissionais registradas nas empresas sucroalcooleiras. Para tanto, considerou-se o nvel de classificao famlia ocupacional, conforme a
Classificao Brasileira de Ocupaes (CBO).4 Foi constatada a existncia
de 380 famlias ocupacionais nas empresas sucroalcooleiras.
De acordo com a experincia acumulada pelos autores deste trabalho,
essas famlias foram organizadas nos seguintes grupos: pessoas ocupadas
na agricultura, pessoas ocupadas na indstria (usinas ou destilarias), pessoas ocupadas em atividades administrativas e de apoio (escritrios, manuteno etc.) e pessoas ocupadas em atividades no sucroalcooleiras.
A seguir subdividiu-se o grupo de pessoas ocupadas na agricultura em
trs subgrupos: trabalhadores canavieiros no qualificados, trabalhadores
da mecanizao agrcola e outras pessoas ocupadas na agricultura. O primeiro subgrupo resulta da soma de trs famlias ocupacionais, quais sejam,
trabalhadores agropecurios em geral, trabalhadores de apoio agricultura
e trabalhadores agrcolas na cultura de gramneas, e entende-se que a esto
includos os trabalhadores que se dedicam s atividades que no exigem
4 A CBO foi instituda pela Portaria Ministerial n.397, em 2002, e tem por finalidade a identificao das ocupaes no mercado de trabalho, para fins classificatrios junto a registros
administrativos e domiciliares. Ela classifica as ocupaes em quatro grupos. O grande grupo ocupacional constitui o nvel mais agregado da classificao. O subgrupo ocupacional
principal busca melhorar o equilbrio hierrquico entre o nmero de grandes grupos e subgrupos. O subgrupo ocupacional indica o domnio dos campos profissionais de famlias ocupacionais agregadas. E a famlia ocupacional contempla 596 grupos de base, que agrupam
situaes de emprego ou ocupaes similares (MTE, 2009).
845
maior qualificao profissional, como o plantio e o corte de cana-de-acar.

O segundo subgrupo constitui uma famlia ocupacional especfica da CBO
e o terceiro resulta da soma das demais famlias ocupacionais observadas na
lavoura canavieira.
Em algumas anlises s se consideraram dois grupos de pessoas ocupadas nas empresas sucroalcooleiras, o dos trabalhadores canavieiros no
qualificados e o conjunto dos demais tipos de ocupao, que foi denominado de outras ocupaes sucroalcooleiras.
Para os trabalhadores canavieiros no qualificados, alm da variao de
seu nmero entre os anos considerados, fez-se uma anlise de sua variao
entre os meses do ano, procurando captar eventuais mudanas na sazonalidade de emprego.
Por fim, comparou-se a evoluo do nmero das diferentes categorias
de ocupao com a evoluo da rea de cana-de-acar e com a produo de
cana-de-acar, acar e lcool.
A opo de considerar para a anlise apenas o perodo posterior a 2007
justifica-se por duas razes: houve mudana na metodologia da Rais do
Caged em 2006, dificultando a comparao dos anos mais recentes com os
anteriores a 2006, e entende-se tambm que em 2007 os empresrios sucroalcooleiros explicitaram claramente a inteno de generalizar, em poucos
anos, o corte mecnico de cana sem queimar, dando maior intensidade
modernizao tecnolgica da lavoura canavieira.
Resultados
Ocupao por tipo de empresa
Fica evidenciada na Tabela 22.1 queda de 19% na mdia anual de pessoas ocupadas em empresas do cultivo da cana-de-acar de 2007 a 2010.
O nmero mdio de pessoas ocupadas nas chamadas agroindstrias sucroalcooleiras cresceu 15% no perodo todo, embora tenha ficado praticamente
estagnado entre 2008 e 2009, muito provavelmente devido crise econmica deste ltimo ano. Para o conjunto de empresas sucroalcooleiras houve
pequena diminuio no nmero mdio de pessoas ocupadas, de 316.121,
em 2007, para 310.413, em 2010, ou 2% a menos.
846
Tabela 22.1 Nmero mdio de pessoas ocupadas em diferentes empresas sucroalcooleiras, estado de So Paulo, 2007 a 2010
Tipo de Empresa
Cultivo da Cana-de-acar
Agroindstria Sucroalcooleira
Empresas Sucroalcooleiras
Item
2007
2008
2009
2010
126.378
Valor
156.682
147.891
137.575
ndice
100
94
88
81
Valor
159.439
172.803
173.640
184.035
ndice
100
108
109
115
Valor
316.121
320.694
311.215
310.413
ndice
100
101
98
98
Fonte: MTE (2011)
A queda da ocupao nas empresas do cultivo da cana-de-acar, enquanto crescia a ocupao nas agroindstrias sucroalcooleiras, a princpio,
poderia decorrer da diminuio do nmero das empresas do primeiro grupo
em relao ao segundo grupo. Contudo, isso, de fato, no ocorreu, sendo que
o nmero de empresas do cultivo de cana-de-acar aumentou de 6.010, em
dezembro de 2007, para 6.258, em dezembro de 2009. Com as agroindstrias
sucroalcooleiras aconteceu o contrrio, uma diminuio no perodo considerado, de 268 para 258 empresas (MTE, 2011), apontando para a intensificao da concentrao econmica setorial (Baccarin, Gebara; Rosada, 2009).
Outra provvel explicao, que se confirma nas anlises posteriores,
que, como nas empresas do cultivo da cana-de-acar a importncia das
ocupaes agrcolas maior que nas agroindstrias sucroalcooleiras, justamente nas empresas do primeiro grupo que se refletem com maior fora
as atuais mudanas tecnolgicas na colheita da cana-de-acar, resultando
na dispensa de trabalhadores rurais.
Ocupao por categorias profissionais

As atividades sucroalcooleiras tm forte sazonalidade ao longo do ano.
H um perodo de safra, em que ocorre a colheita da cana-de-acar e seu
concomitante processamento industrial que, nas condies paulistas, tende
a se estender entre os meses de abril e novembro, com pice entre maio e
julho. J a entressafra, em que ocorrem atividades como o plantio da canade-acar e a manuteno de mquinas e equipamentos industriais, dura de
dezembro de determinado ano a maro do ano seguinte. O final de dezembro costuma registrar o menor nvel de ocupao sucroalcooleira. Dada essa
847
caracterstica as anlises a seguir consideram a situao do ms de junho e a

do ms de dezembro.5
Observa-se, na Tabela 22.2, que o nmero total de pessoas ocupadas
em empresas sucroalcooleiras no perodo de safra apresentou uma pequena
queda, de 4%, entre 2007 e 2010.
Tabela 22.2 Pessoas ocupadas em junho em empresas sucroalcooleiras, de acordo com grupos e
subgrupos, estado de So Paulo, 2007 a 2010
Grupos e Subgrupos
1 Pessoas Ocupadas na
Agricultura
Item
2007
2008
2009
2010
207.674
Valor
246.616
242.423
220.209
ndice
100
98
89
84
Trabalhadores Canavieiros
no Qualificados
Valor
212.966
205.495
182.735
165.807
ndice
100
96
86
78
Trabalhadores da Mecanizao
Agrcola
Valor
26.289
28.946
30.036
34.103
ndice
100
110
114
130
Valor
7.361
7.982
7.438
7.764
Outras Pessoas Ocupadas

na Agricultura
2 Pessoas Ocupadas
na Indstria
3 Pessoas em Atividades
Administrativas e de Apoio
no Sucroalcooleiras
5 Total
ndice
100
108
101
105
Valor
32.938
33.263
34.586
35.984
ndice
100
101
105
109
Valor
76.348
82.907
85.174
93.775
ndice
100
109
112
123
Valor
5.970
7.566
8.684
9.053
ndice
100
127
145
152
Valor
361.872
366.159
348.653
346.486
ndice
100
101
96
96
Fonte: MTE (2011)
Entre os grupos, o das pessoas ocupadas em atividades no sucroalcooleiras cresceu 52%, embora represente menos que 3% da ocupao das
empresas sucroalcooleiras. O grupo pessoas ocupadas em atividades administrativas e de apoio teve expressivo crescimento, de 23%, bem maior que
o do grupo de pessoas ocupadas na indstria, de 9%.
Por sua vez, o nmero de pessoas ocupadas na agricultura registrou uma
queda de 16%, entre junho de 2007 e junho de 2010. Isso se deveu reduo
5 Para o conjunto das ocupaes sucroalcooleiras, o ms de junho foi o que registrou o maior
nmero de pessoas ocupadas nos anos de 2007, 2008, 2010, enquanto em 2009, isso ocorreu
em maio. J o ms de dezembro registrou o menor nmero de ocupao tambm em 2007,
2008 e 2010, sendo que em 2009 o nmero de pessoas ocupadas em janeiro e fevereiro foi
menor que o de dezembro.
848
do nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados, de 22%, e reflete

o avano da colheita mecnica nos canaviais paulistas. Outro reflexo dessa
mudana tecnolgica o crescimento expressivo, de 30%, dos trabalhadores
na mecanizao agrcola, entre 2007 e 2010.
H uma mudana evidente na composio da ocupao sucroalcooleira
no perodo da safra em So Paulo. Em 2007, as pessoas ocupadas na agricultura representavam 68,2% do total de pessoas ocupadas em empresas sucroalcooleiras no estado, valor que caiu para 59,9%, em 2010. No caso dos trabalhadores agrcolas no qualificados, esses nmeros so, respectivamente,
de 58,9% e 47,9%.
A Tabela 22.3 permite observar que na entressafra o nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados sofreu uma alterao bem menos significativa, ou seja, uma queda de apenas 4%, entre 2007 e 2010. Ao mesmo tempo,
houve expanso significativa no nmero dos trabalhadores da mecanizao
agrcola, bem como das pessoas ocupadas na indstria e das pessoas ocupadas em atividades administrativas e de apoio, de forma que o total de ocupao sucroalcooleira na entressafra expandiu-se em 11%, entre 2007 e 2010.
Tabela 22.3 Pessoas ocupadas, dezembro, em empresas sucroalcooleiras, de acordo com grupos
e subgrupos, estado de So Paulo, 2007 a 2010
Grupos e Subgrupos
Item
2007
2008
2009
2010
1 Pessoas Ocupadas na
Agricultura
Valor
120.867
123.411
127.060
123.288
ndice
100
102
105
102
Trabalhadores Canavieiros
no Qualificados
Valor
92.133
92.144
93.002
88.618
ndice
100
100
101
96
Trabalhadores da Mecanizao
Agrcola
Valor
22.184
24.526
27.087
28.254
ndice
100
111
122
127
Outras Pessoas Ocupadas

na Agricultura
Valor
6.550
6.741
6.971
6.416
ndice
100
103
106
98
2 Pessoas Ocupadas
na Indstria
Valor
24.190
27.650
29.404
28.869
ndice
100
114
122
119
Administrativas e de Apoio
Valor
66.565
74.002
79.979
81.669
ndice
100
111
120
123
Valor
4.115
4.243
5.048
6.638
no Sucroalcooleiras
5 Total
Fonte: MTE (2011)
ndice
100
103
123
161
Valor
215.737
229.360
241.491
240.464
ndice
100
106
112
111
849
Pode-se estabelecer que as mudanas tecnolgicas na lavoura canavieira na entressafra, especialmente na operao do plantio da cana-de-acar,
tm resultado em efeitos negativos menos fortes sobre o nvel de ocupao
do que aqueles que ocorreram na safra.
Tanto na safra quanto na entressafra a ocupao na lavoura canavieira,
especificamente a que no exige maior qualificao, revelou um desempenho bem abaixo dos outros tipos de ocupao, seja na indstria, seja nos
escritrios. Isso pode dar uma falsa impresso de atraso tecnolgico nesses
dois setores quando comparados com a agricultura. Muito provavelmente, o que de fato ocorreu que na indstria e nos escritrios as mudanas
tecnolgicas e administrativas foram muito contundentes e ocorreram j
na dcada de 1990, tendo se verificado automatizao e informatizao de
vrias etapas do processo produtivo, bem como terceirizao de atividades
tpicas de servios. J na agricultura as mudanas tecnolgicas acentuaram-se no presente sculo, especialmente aps 2006.
Sazonalidade de ocupao dos trabalhadores canavieiros no
qualificados
A Tabela 22.4 evidencia a queda no nmero mdio de trabalhadores canavieiros no qualificados ao longo dos quatro anos de anlise. Em termos
absolutos essa diminuio atingiu 37.734 trabalhadores. Considerando-se o
estado de So Paulo o nmero pouco expressivo diante do total de pessoas
nele ocupadas. Contudo, tal situao pode apresentar repercusso social
mais forte de maneira localizada, em municpios em que a ocupao sucroalcooleira representa grande parte da sua ocupao total. Tambm pode
estar influenciando o fluxo de migrao sazonal para os canaviais paulistas.
Tambm fica evidenciada a diminuio da sazonalidade de ocupao dos
trabalhadores canavieiros no qualificados, entre 2007 e 2010. Assim, no ms
de maio (o de maior ocupao) de 2007 o nmero desses trabalhadores superava em 132% o seu nmero em dezembro (o de menor ocupao) do mesmo
ano. Ano a ano foi se observando reduo nessa relao, at se atingir 88%,
em 2010. Embora em queda, a sazonalidade se mantm ainda muito alta.
O nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados praticamente permaneceu constante nos meses de dezembro de 2007, 2008 e 2009 e
apresentou pequena queda de 4% em 2010, em comparao a 2007. J entre
maio de 2007 e maio de 2010, a diminuio do nmero desses trabalhadores
850
Tabela 22.4 Nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados, ms a ms, de 2007 a 2010,

estado de So Paulo
Ms
2007
2008
2009
2010
Nmero
ndice
Nmero
ndice
Jan.
121.183
132
107.202
116
95.233
102
95.116
107
Fev.
147.704
160
133.831
145
105.931
114
110.278
124
Mar.
165.461
180
152.807
166
143.142
154
142.949
161
Abr.
194.655
211
195.870
213
178.593
192
162.205
183
Maio
213.753
232
206.723
224
185.718
200
166.408
188
Jun.
212.966
231
205.495
223
182.735
196
165.807
187
Jul.
207.111
225
200.672
218
177.824
191
163.272
184
Ago.
205.150
223
195.828
213
174.575
188
160.055
181
Set.
203.919
221
192.324
209
173.115
186
156.094
176
Out.
198.658
216
189.571
206
171.678
185
148.630
168
Nov.
175.630
191
179.094
194
168.439
181
126.082
142
Dez.
92.133
100
92.144
100
93.002
100
88.618
100
Mdia
178.194
170.963
Nmero ndice Nmero ndice
154.165
140.460
Fonte: MTE (2011)
foi de 22%. Portanto, pode-se estabelecer que a diminuio da sua sazonalidade de ocupao se deveu reduo da quantidade de emprego disponvel
na safra canavieira, em face do avano do corte mecnico de cana-de-acar.
Indicadores de ocupao e de produo sucroalcooleira

Os indicadores da Tabela 22.5 mostram que, entre 2007 e 2010, a produo do lcool cresceu 16%, do acar e da cana-de-acar 21% e da rea
cultivada com cana-de-acar cresceu 25% no estado de So Paulo.
Tabela 22.5 Indicadores de ocupao e produo sucroalcooleira, estado de So Paulo, 2007 a
2010
Grupos e Subgrupos
rea Cultivada
(1.000 ha)*
Produo de cana
(1.000 t)
Item
2007
2008
2009
2010
Valor
4.249,9
4.873,9
5.242,5
5.303,3
ndice
100
115
123
125
Valor
297.135,7
345.465,4
362.664,7
359.235,5
ndice
100
116
122
121
Continua
851

Item
2007
2008
2009
2010
Produo de acar
(1.000 t)
Grupos e Subgrupos
Valor
19.428,6
20.186,7
20.815,8
23.572,8
ndice
100
104
107
121
Produo de lcool
(milho l)
Valor
13.351,3
16.897,8
14.918,5
15.489,2
ndice
100
127
112
116
Trab. Canavieiros no
Qualificados (mdia anual)
Valor
178.194
170.963
154.165
140.460
ndice
100
96
87
79
Outras Ocupaes
Sucroalc. (mdia anual)
Valor
137.928
149.731
157.052
169.953
ndice
100
109
114
123
Total Ocupao Sucroalc.

(mdia anual)
Valor
316.121
320.694
311.215
310.413
ndice
100
101
98
98
* Inclui reas em que o canavial est sendo reformado

Fonte: Conab (2011), Inpe (2011), Mte (2011)
Ao mesmo tempo, a ocupao total sucroalcooleira apresentou pequeno

decrscimo de 2%, no acompanhando o crescimento da produo setorial.
Contudo, nota-se que, isoladamente, a categoria de outras ocupaes sucroalcooleiras apresentou crescimento semelhante ao da produo sucroalcooleira. Enquanto isso, o nmero mdio dos trabalhadores canavieiros no
qualificados decrescia em 21%, entre 2007 e 2010.
Consideraes finais
No perodo de anlise, de 2007 a 2010, as mudanas tecnolgicas no cultivo da cana-de-acar apresentaram maior alcance e consequncias quanto
ao nvel de ocupao do que aquelas ocorridas em outras etapas do processo
produtivo sucroalcooleiro, nos escritrios e na transformao industrial.
Especificamente, houve acelerao da introduo do corte mecnico de
cana sem queimar que, em 2010, j predominava nos canaviais paulistas,
substituindo o corte manual de cana queimada, que se mostrava amplamente majoritrio no final dos anos 1990.
Muito provavelmente, o corte de cana mecnico j apresenta custos de
produo relativos menores (ou, no mnimo, semelhantes) que o corte manual e os canaviais e cultivares de cana usadas no estado de So Paulo esto
mais adaptados colheita mecanizada.
852
O fato de substituir o corte manual de cana queimada por corte mecnico de cana sem queimar e no pelo corte mecnico de cana queimada indica
que as questes ambientais esto sendo levadas em conta nas tomadas de
deciso dos empresrios sucroalcooleiros. Mais do que a existncia de uma
legislao especfica sobre a queimada dos canaviais, tal procedimento est
relacionado com a estratgia empresarial de firmar uma imagem, em mbito mundial, de que o setor produz um combustvel que, alm de renovvel,
agrediria pouco o meio ambiente.
Em termos dos postos de trabalho, as recentes mudanas tecnolgicas
tm feito com que, apesar do significativo crescimento da produo de acar, lcool e cana-de-acar, o nvel de ocupao nas empresas sucroalcooleiras em So Paulo tenha se apresentado praticamente estagnado entre
2007 e 2010.
Mais especificamente, enquanto crescia o nvel das outras ocupaes sucroalcooleiras, o nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados, em
que esto includos os cortadores de cana, decrescia em valor semelhante.
Nas ocupaes agrcolas, a diminuio relativa do nmero de trabalhadores canavieiros no qualificados foi menos intensa que o aumento do nmero de trabalhadores na mecanizao agrcola. Contudo, em termos absolutos, aquela queda revelou-se bem mais significativa que esse aumento.
Est ocorrendo uma evidente e acelerada alterao na composio da
ocupao sucroalcooleira, com diminuio da importncia daquelas ocupaes que exigem menor grau de qualificao profissional em favor das com
maior qualificao. A partir disso, supe-se que tanto as empresas quanto
o poder pblico estejam desenvolvendo aes em favor da requalificao
profissional de egressos do corte manual de cana.
A sazonalidade de ocupao dos trabalhadores canavieiros no qualificados apresentou uma diminuio no perodo analisado. Entretanto, ela
continua muito alta, sendo que o nmero desses trabalhadores contratados,
em maio de 2010, suplantou em 88% o seu nmero em dezembro do mesmo ano.
A partir dos resultados e anlises aqui apresentadas, sugerem-se alguns
aprofundamentos ou detalhamentos e derivaes para futuras pesquisas.
Quanto ao primeiro ponto, seria interessante checar junto aos Departamentos de Recursos Humanos de empresas sucroalcooleiras se os grupos e
subgrupos das famlias ocupacionais aqui considerados esto bem delimi-
853
tados. Tambm, sugere-se que se faa cruzamento entre o tipo de empresa

sucroalcooleira e seus respectivos grupos e subgrupos ocupacionais.
Dentro do segundo grupo de sugestes, est a de se desagregar a anlise para o nvel municipal, verificando provveis diferenas e repercusses
locais das atuais mudanas na ocupao sucroalcooleira. Outra linha de
pesquisa seria analisar os efeitos qualitativos e quantitativos da diminuio
dos trabalhadores canavieiros no qualificados na migrao sazonal para
a colheita de cana. Tambm se sugere procurar explicaes para o grande
crescimento observado nas ocupaes administrativas e de apoio nas empresas sucroalcooleiras, bem como se prope que se verifique a existncia
de programas de requalificao e recolocao profissional, sob encargo dos
empresrios ou do poder pblico, que atendam especificamente os trabalhadores canavieiros no qualificados.
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23
Potenciais riscos ambientais
do biodiesel
Llian Nogueira,
Eduardo Alves de Almeida
Introduo
Os combustveis derivados do petrleo, responsveis por gerar efeitos
prejudiciais ao ambiente, esto gradativamente sendo substitudos por fontes de energia renovveis e menos poluentes. Um exemplo disso o biodiesel, uma mistura de steres metlicos de cidos graxos derivados de gordura
animal e leos vegetais, que vem se apresentando como uma alternativa ao
uso do leo diesel.
Muitos estudos demonstram que o biodiesel mais biodegradvel (Pasqualino; Montan; Salvad, 2006; Prince; Haitmanek; Lee, 2008) e produz menos matria particulada e gases txicos e de efeito estufa durante a
queima que o leo combustvel derivado de petrleo (Lee; Herage; Young,
2004; Balat; Balat, 2010) (Tabela 23.1), sendo mais amigvel para a atmosfera, apesar de que alguns trabalhos mostram que as emisses de xidos de
nitrognio e de alguns hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) especficos como fenantreno, etil e trimetil benzenos aumentam em misturas
de biodiesel com diesel de petrleo (Corra; Arbilla, 2006).
Mas apesar de o biodiesel ser ecologicamente mais limpo em comparao ao diesel derivado de petrleo, o incremento de sua produo pode acarretar em potenciais riscos ambientais que no so ainda totalmente claros,
necessitando-se de mais estudos relacionados. O aumento em si da produ-
856
Tabela 23.1 Mdias das emisses de biodiesel puro B100 (biodiesel 100 %) e da mistura B20 (20
% biodiesel/80 % petrodiesel) em relao s emisses geradas pela queima do leo diesel
Emisses
B20
B100
Monxido de carbono
-12 %
-48 %
Hidrocarbonetos totais no queimados
-20 %
-67 %
Matria particulada em suspenso
-12 %
-47 %
xidos de nitrognio
Sulfatos
Compostos txicos no ar
2%
10 %
-20 %
-100 %
-12 a -20 %
-60 a -90 %
Fonte: Lotero et al. (2006); Balat; Balat (2010)
o vegetal como fonte para a produo do biodiesel pode ser um ponto de

preocupao, visto que incrementos da demanda pelo biodiesel significam
necessidade de ampliaes nas reas de plantio, com efeitos diretos ao meio
ambiente, em funo do aumento no uso de intensivos agrcolas e desmatamento para expanses das reas de cultivo.
Efeitos adversos do biodiesel sobre a sade

de organismos vivos
No que se refere aos efeitos adversos da exposio de organismos vivos
ao biodiesel, tem-se mostrado tambm que o biodiesel muito menos nocivo que o diesel de petrleo, sendo que a toxicidade do diesel tambm diminui na medida em que a porcentagem de biodiesel em misturas aumenta.
Por exemplo, Ackland et at. (2007) demonstraram que cultivos de clulas
do trato respiratrio humano expostos a diesel contendo 20% de biodiesel
apresentaram uma diminuio em 52% nos nveis de alteraes nucleares,
em comparao quelas que foram expostas ao diesel puro. As que foram
expostas a diesel contendo 80% de biodiesel tiveram apenas 16% das alteraes apresentadas em comparao a clulas expostas a diesel puro.
O leo diesel uma mistura complexa que consiste principalmente em
hidrocarbonetos olefnicos, parafnicos e aromticos (Vieira et al., 2007).
Muitos hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) presentes na composio desse combustvel so considerados carcinognicos pela Agncia
Internacional de Pesquisa sobre Cncer (Iarc) (Zhu et al., 2008). Quando
POTENCIAIS RISCOS AMBIENTAIS DO BIODIESEL
857
comparamos a presena dessas substncias txicas nos combustveis, podemos observar que o biodiesel no possui HPA em sua composio, ao
contrrio do leo diesel (Nogueira et al., 2011). Dessa forma, esperado
que o leo diesel seja mais prejudicial aos organismos que o biodiesel, o que
explica os resultados de menor toxicidade para organismos expostos.
Atividades urbanas e industriais promovem a deposio de HPA nos
ecossistemas e vazamentos de petrleo ou acidentes com caminhes tanque cheios de combustveis ajudam a agravar esse quadro (Hamouten et al.,
2002; Silva et al., 2009). Com o aumento da utilizao do biodiesel e de suas
misturas com o leo diesel, esses tipos de acidentes agora podem resultar
na deposio de compostos derivados do biodiesel nesses ambientes. Porm, apesar de o biodiesel ser comprovadamente menos txico, ele tambm
apresenta riscos, e existem poucos estudos ainda referentes caracterizao
completa dos elementos presentes em diferentes composies de biodiesel
ou toxicidade potencial de muitos desses elementos biota.
Ainda que no apresente concentraes relevantes de HPA, diversos
outros compostos de toxicidade desconhecida podem estar presentes na
composio do biodiesel, sejam elementos naturais derivados da fonte usada para sua sntese, sejam compostos utilizados durante sua produo, para
catalisar de forma eficaz as reaes necessrias para dar origem ao biodiesel.
Alm disso, diversos aditivos usados na produo do biodiesel podem tambm apresentar efeitos adversos biota.
Sabe-se, por exemplo, que muitos tipos de biodiesel propiciam ambientes favorveis para o desenvolvimento de microorganismos, fazendo com
que colnias desses seres se estabeleam e se desenvolvam durante perodos
de estocagem, trazendo assim potenciais prejuzos para seu uso em motores, como por exemplo, o entupimento de filtros, comprometendo assim o
desempenho do combustvel. Nesse sentido, a adio de certos biocidas no
biodiesel tem sido prtica comum em diversos pases, para evitar a proliferao de microorganismos. Dentre esses biocidas, temos como exemplos
a 5-cloro-2-metil-4-isotiazolinona e a 2-metil-4-tiazolinona, sendo que h
estudos indicando que o primeiro apresenta diversos efeitos prejudiciais
para clulas de defesa do sistema imunolgico do pulmo de ratos (Poon et
al., no prelo).
Os biocidas so apenas um dos exemplos dos diversos aditivos usados
no biodiesel, e um dos poucos que foram estudados. Segundo Swanson,
858
Madden e Ghio (2007), alm dos biocidas, o biodiesel pode levar como aditivos supressores de fumaa, diminuidores de pontos de nvoa, detergentes,
anticongelantes, antioxidantes, metais etc., cujos efeitos prejudiciais no
foram ainda estudados em organismos vivos expostos. Alm disso, esses
autores afirmam que o biodiesel pode conter altas concentraes de aldedos txicos, que podem prejudicar a sade humana. Por exemplo, um dos
subprodutos da produo do biodiesel, o glicerol, pode gerar acrolena com
alto rendimento (Figura 23.1), um aldedo comprovadamente carcinognico (Mota; da Silva; Gonalves, 2009; Liu; Zhu; Xie, 2010), aps a queima.
Apesar de ser extrado do biodiesel antes de ir para o mercado, quantidades
residuais do glicerol podem permanecer na composio do biodiesel.
Figura 23.1 Produo de biodiesel a partir da transesterificao de leos vegetais e gerao

de potenciais resduos txicos
Khan, Warith, e Luk (2007) conduziram experimentos a fim de avaliar a

toxicidade aguda do leo diesel, biodiesel puro e das misturas entre os dois
compostos B5, B20 e B50 (5, 20 e 50 % de biodiesel em diesel de petrleo,
respectivamente) em larvas de truta arco-ris (Oncorhynchus mykiss) e microcrustceos (Daphnia magna). Nesse estudo foi observado que, em ambas
as espcies testadas, medida que a porcentagem de leo diesel de petrleo
aumentava na composio dos combustveis, maior era a mortalidade dos
animais. Dessa forma, o biodiesel puro apresentou menor toxicidade aguda
nos organismos.
Porm, outros estudos demonstram que o biodiesel tambm pode afetar
negativamente os organismos. Durante quatro semanas Poon et al. (2007)
859
administraram leo diesel, biodiesel derivado de leos vegetais e biodiesel

derivado de gordura animal por via oral a ratos. Apesar dos efeitos, no geral,
terem sido mais prejudiciais aos animais tratados com leo diesel, aqueles
tratados com biodiesel tambm apresentaram aumento no peso do fgado
e mudanas histopatolgicas nos tbulos renais. Tambm houve aumento
na atividade das enzimas de fase I e II de biotransformao de compostos
txicos (Figura 23.2), como algumas isoformas de citocromo P450 e atividade da enzima glutationa-S-transferase (GST), respectivamente, aps
tratamento com biodiesel.
Figura 23.2 Esquema geral da biotransformao de compostos txicos nos organismos

vivos que podem ser afetados pela exposio ao biodiesel. Na fase I, enzimas do complexo
multienzimtico P450 e outras mono-oxigenases inserem grupos funcionais no composto
txico, tornando-o mais eletroflico. Na fase II, enzimas de conjugao unem o composto
eletroflico a molculas endgenas, como glicose, cido glucurnico, sulfato ou o tripeptdeo
glutationa, tornando o elemento mais hidrossolvel e facilitando sua excreo
Em outros estudos foi verificada a presena de concentraes crescentes

de metanol (Leite et al., 2011) no biodiesel de fonte animal ou vegetal, ao
longo do tempo de estocagem. Na verdade, grande parte do biodiesel produzido hoje proveniente de reaes de transesterificao entre mono, di
ou triacilgliceris em meio alcalino contendo metanol como fonte de grupo metila para formar o ster metlico do cido graxo (Vasudevan; Briggs,
2008), como mostra a Figura 23.1. Alm do metanol residual que pode,
porventura, ocorrer no biodiesel comercial, ao longo do perodo de sua estocagem reaes reversas de hidrlise da transesterificao podem ocorrer,
liberando o grupo metila na forma de metanol, que aumenta de concentrao ao longo do tempo (Leite et al., 2011). No caso de vazamentos ou
derramamentos de biodiesel no ambiente, isso resultaria em uma exposio
da biota a este composto, cuja toxicidade j bem conhecida.
Em trabalhos de nosso grupo de pesquisa, peixes das espcies Oreochromis niloticus (tilpia do Nilo) e Pterygoplichthys anisitsi (cascudo marrom)
860
foram expostos ao leo diesel puro, s misturas B5, B20 e ao biodiesel puro
B100 produzido a partir de sebo animal (Nogueira, 2011). O diesel puro de
petrleo e a mistura B5 foram prejudiciais para ambas as espcies de peixes,
porm o biodiesel puro e as demais misturas tambm afetaram negativamente a fisiologia dos animais.
Nas duas espcies houve um aumento nos nveis de leses em membranas nas brnquias dos animais expostos ao biodiesel puro, assim como
efeitos na atividade de enzimas antioxidantes dos animais. Como o biodiesel utilizado nesse estudo foi produzido a partir de gordura animal, pode-se
supor que o B100 pode ser absorvido com alto rendimento pelas brnquias,
aumentando a quantidade de cidos graxos no tecido branquial, contribuindo para um aumento nos nveis de peroxidao lipdica.
possvel ainda que elementos potencialmente txicos presentes no
biodiesel, aldedos reativos e aditivos txicos diversos, mesmo que em baixa
concentrao, contribuam para os efeitos deletrios observados nos peixes.
Tais efeitos poderiam ser potencializados ainda de acordo com o tempo de
estocagem do biodiesel, o que contribui para a produo de novos compostos devido a processos de auto-oxidao ou biodegradao do biodiesel.
Nesse contexto, dados recentes indicam que alguns dos elementos possivelmente deletrios do biodiesel perdem seu potencial txico em misturas
com o diesel de petrleo. De acordo com McCormick (2009), o diesel diminui a taxa de oxidao do biodiesel, fazendo com que haja menos produtos oxidativos. Em seus experimentos, os nveis de compostos cidos e
perxidos gerados devido auto-oxidao do B100 aumentaram significativamente ao longo de 12 semanas, enquanto o teste no mostrou nenhuma
indicao de que a oxidao de biodiesel esteja ocorrendo em misturas B5,
nas mesmas condies de ensaio.
Outro ponto importante a ressaltar que o biodiesel possivelmente
aumente a lipofilia de elementos txicos presentes no diesel do petrleo.
Assim, em misturas como o B5 e o B20, o biodiesel poderia promover um
aumento na absoro dos compostos txicos presentes no leo diesel. Apesar de essa teoria ainda necessitar mais estudos para comprovao, poderia
explicar o fato de essas misturas que possuem menor concentrao de leo
diesel em sua composio promoverem danos semelhantes ou at mais expressivos que o leo diesel puro, como visto nos estudos com peixes (Nogueira, 2011).
861
Concluses e perspectivas
Quando olhamos para todos esses estudos, levando em considerao todos os aspectos experimentais, espcies utilizadas e tempo de exposio aos
poluentes, podemos perceber que, embora seja um combustvel mais biodegradvel, que emite menos gases de efeito estufa, tem-se demonstrado
que o biodiesel e suas misturas com o leo diesel tambm apresentam riscos
para o ambiente e, consequentemente, tambm podem vir a apresentar riscos para a sade humana. Assim, estas novas fontes de energia devem ser
manuseadas com cuidado para evitar derramamento e descargas indevidas
para o ambiente.
Como bem observaram Swanson, Madden e Ghio (2007) em seu artigo Biodiesel Exhaust, a compreenso total sobre os potenciais riscos que o
biodiesel pode conferir ao meio ambiente ainda est longe de ser alcanada,
no apenas do ponto de vista das emisses geradas em sua queima, mas
tambm do relacionado exposio direta dos organismos vivos ao leo do
biodiesel em ambientes contaminados. Essa necessidade premente deve-se
especialmente ao fato de que o uso deste combustvel apenas recentemente
est sendo difundido, porm em grande escala (B5 j obrigatrio em nosso
pas), e de que existem inmeros tipos de composio para ele, seja devido
suas diferentes fontes (animal ou vegetal, por exemplo), seja pelo processo
de produo, tipos de aditivos usados e tempo de estocagem, entre outros.
Tais estudos possibilitaro um manuseio mais correto e sustentvel desse
combustvel, contribuindo assim para elevar o status do biodiesel como um
combustvel de fato menos poluente.
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24
Impactos do uso de concentrado
de vinhaa biodigerida e outras fontes de
nutrientes nos agroecossistemas de cultivo
da cana-de-acar
Jairo Osvaldo Cazetta,
Luciana Maria Saran, Terezinha Ferreira Xavier,
Kamilla Ortega, Marcos Paulo Mendes
Introduo
Em consequncia da expanso da indstria sucroenergtica no pas,
vem ocorrendo um aumento significativo da produo de lcool e, consequentemente, tambm da gerao de vinhaa e outros subprodutos agroindustriais. No que se refere vinhaa comum, agora que a utilizao deste
subproduto como fertilizante foi bem estabelecida no sistema de cultivo e
colheita tradicionais da cana-de-acar, surgiram alteraes importantes
no manejo dessa cultura.
A principal mudana a passagem da colheita da cana queimada para
o sistema de colheita da cana crua (sem a queima da palha), acompanhada
de alternativas de crescente interesse e importncia como, por exemplo,
o caso do cultivo orgnico (Camargo et al., 2006). Nesses novos sistemas,
vrios aspectos da cultura devem ser repensados, pois a palha (tambm
chamada de palhada) que permanece sobre o solo deve alterar a distribuio do sistema radicular das plantas, a dinmica qumica, fsica, biolgica
e fitossanitria do agroecossistema, no qual a aplicao da vinhaa pode ter
uma forma de participao importante e diferente da que tem no sistema
com queima.
Se isso no bastasse, com a perspectiva da produo de lcool de segunda gerao (Marques, 2009), em breve teremos tambm o resduo desses
864
novos processos, que ser um material de comportamento desconhecido no

ambiente do solo. Tambm a crescente demanda por fontes de energia renovvel tem sugerido o uso da vinhaa para produo de biogs, por meio da
biodigesto anaerbica, o qual seria usado em geradores de energia eltrica.
A vinhaa biodigerida um produto com muito menos matria orgnica, o que facilita a sua concentrao, o reuso da sua gua na indstria e a
reduo do custo de transporte. A soma das vantagens viabilizaria a aplicao agrcola em cultivos mais distantes das usinas. Portanto, se as alteraes que o manejo da cultura vem passando j levantam por si ss muitas
perguntas ainda sem respostas seguras, o uso do concentrado de vinhaa
biodigerida em vez de vinhaa in natura, nesse sistema, uma varivel adicional que suscita ainda mais questes, como: A aplicao do concentrado de vinhaa biodigerida altera a dinmica da decomposio da palhada,
a reciclagem dos nutrientes, a fertilidade do solo e a nutrio das plantas,
comparada com a vinhaa in natura? Ser que, por um lado, a vantagem do
uso da vinhaa para a produo de bioenergia, com a aplicao da vinhaa
biodigerida no campo no trar prejuzo para a cultura? Ou, por outro lado,
ser que, em vez de a vinhaa ser usada para produzir metano dentro de
um reator visando seu uso como combustvel para gerar energia, sua aplicao no campo no levaria rpida decomposio de sua matria orgnica
(portanto, sem vantagens para o sistema agrcola) com a rpida liberao de
CO2? Pior ainda ser que no sistema de isolamento do solo pela espessa
camada de palha que se acumula em certas circunstncias poderia ser aumentada a condio de anoxia no solo, com a possibilidade de produzir,
entre outros compostos, o metano (sem a possibilidade de seu uso) e outros
gases que, liberados na atmosfera, so danosos pelo potente efeito estufa e
grande contribuio para o aquecimento global? Ou, ainda, ser que nesse
novo sistema de produo, a adubao est adequada?
Portanto, o domnio dos fenmenos do sistema solo-planta-atmosfera
envolvendo o agroecossistema da cana-de-acar de capital importncia
para o Brasil manter sua liderana no que tange ao know how dessa cultura e
produtos relacionados. Aliada ao desenvolvimento da tecnologia industrial
e novos gentipos, a produo de biomassa do chamado sistema de cana
crua, cana verde, cana orgnica, entre mais alternativas, lana novos desafios para a agregao de valores aos produtos nacionais. Tambm induzem
mudanas no que se refere quantidade, qualidade e possibilidades de adu-
IMPACTOS DO USO DE CONCENTRADO DE VINHAA BIODIGERIDA
865
bao, alteraes na ciclagem de nutrientes e no comportamento deste agroecossistema, certamente com reflexos no ambiente global do ser humano.
Em funo do anteriormente exposto, embora muitos aspectos tcnicos de alternativas industriais tenham sido propostos e suas viabilidades
econmicas possam ser determinadas de forma relativamente simples por
meio de clculos tcnicos e econmicos, muitos aspectos agrcolas ainda
permanecem sem resposta. Alm disso, todas essas perguntas tero de ser
refeitas e respondidas em relao aos resduos que sero produzidos dentro
da perspectiva de produo de lcool de segunda gerao.
Aspectos gerais
A cana-de-acar (Saccharum spp.) vem sendo cultivada no Brasil h
muito tempo, com destacada importncia na produo de acar. Entretanto, com o advento do Pralcool nos anos 1980, comeou a haver grande expanso da indstria alcooleira no pas (Rezende, 1984). Na virada do sculo
esse tipo de agroindstria passou a ser visto como uma das melhores opes
de fonte de energia renovvel, apresentando grande importncia no cenrio
agrcola brasileiro (Maul; Mazza; Martha Jnior, 2001). Atualmente o Brasil se destaca no cenrio mundial como produtor de cana-de-acar, cultivando uma rea de aproximadamente sete milhes de hectares (Agrianual,
2011). Naturalmente, acompanhando o aumento significativo da produo
de lcool, tambm cresceu a gerao de vinhaa, que o principal resduo
dessa atividade (Rezende, 1984), pois vinha sendo produzida numa proporo de 13 litros para cada litro de lcool obtido (Rossetto, 2004; Brito;
Rolim, 2005), valor este que pode ser reduzido em torno de 8 a 9 litros com
a utilizao de processos mais modernos.
Considerando que o Brasil produz atualmente cerca de 27 bilhes de
litros de etanol e levando em conta uma mdia de 10 litros de vinhaa produzida por litro de etanol, pode-se avaliar que so produzidos aproximadamente 270 bilhes de litros de vinhaa por ano. A vinhaa in natura que era
problema no passado atualmente considerada um insumo de grande valor
para a rea agrcola. Por isso, qualquer outro destino que se possa pensar
para esse produto levanta dvidas sobre as reais vantagens e desvantagens
que outra aplicao traria.
866
Outro aspecto muito interessante da cultura da cana-de-acar o fato

de o etanol e o acar serem constitudos apenas de carbono, hidrognio e
oxignio. Assim, se a vinhaa, as tortas de filtro e as cinzas do bagao queimado na cogerao de energia forem retornadas s respectivas reas de cultivo, praticamente todos os minerais retirados da rea agrcola pela colheita
seriam retornados ao solo. No que se refere ao etanol e acar, especialmente se usados para produzir energia ou na alimentao, sero transformados
basicamente em gs carbnico e gua, que retornariam lavoura por meio
da atmosfera. Caso o etanol ou o acar forem usados para a produo de
material inerte (como plsticos, por exemplo), o carbono sequestrado ser
mantido fora do sistema dinmico por maior tempo, ajudando a diminuir o
teor de CO2 atmosfrico e seus efeitos como gs de efeito estufa.
Esse aspecto um dos grandes diferenciais entre a cultura da cana-deacar e as de cereais ou pastagens, em que os minerais extrados do solo
so definitivamente exportados do mesmo (na forma de gros, carne, fibra etc.), fazendo com que nutrientes como K, P, Ca, Mg, Cu, Fe, Mn,
Zn e Mo tenham sempre que ser repostos nas reas de cultivo por meio de
fertilizantes produzidos a partir de fontes no renovveis. Desse ponto de
vista, a cultura da cana-de-acar seria um dos sistemas mais sustentveis
que existe no meio agrcola. Entretanto, para que isso acontea, a coleta e
uso racional de todos os resduos produzidos desde a colheita at o final
do processo industrial teriam que ser retornados ao campo original, o que
tecnicamente vivel. A viabilidade econmica, no entanto, apenas ser
alcanada se for usada inteligncia, desenvolvimento cientfico e tecnolgico e uma perfeita integrao entre o sistema industrial e o agrcola.
Caractersticas da vinhaa in natura

Dentre os principais componentes da vinhaa destaca-se uma concentrao significativa de matria orgnica e de potssio, alm de outros nutrientes em concentraes relativamente baixas (Lyra; Rolim; Silva, 2003).
As caractersticas fsicas e qumicas das vinhaas so variveis, dependendo
dos processos utilizados na indstria (Gloria; Orlando Filho, 1984). Entretanto, num levantamento realizado em 28 usinas do estado de So Paulo
foram observados os seguintes resultados mdios: pH=4,15; temperatura =
867
89,16C; demanda bioqumica de oxignio de 16949,76 mg L-1; demanda

qumica de oxignio de 28450,0 mg L-1; slidos totais = 25154,62 mg L-1;
clcio = 515,25 mg L-1CaO; cloreto = 1218,91 mg L-1Cl; cobre = 1,20 mg
L-1CuO; ferro = 25,17 mg L-1 Fe2O3; fsforo total = 60,41 mg L-1 P2O5;
magnsio = 225,64 mg L-1MgO; mangans = 4,82 mg L-1MnO; nitrognio
= 356,63 mg L-1 N; nitrognio amoniacal = 10,94 mg L-1N; potssio total =
2034,89 mg L-1 K2O; sdio = 51,55 mg L-1Na; sulfato = 1537,66 mg L-1
SO4; sulfito = 35,90 mg L-1 SO4; zinco = 1,7 mg L-1 ZnO (Rossetto, 2008).
O uso da vinhaa in natura como fertilizante

Nos primrdios da produo de lcool de cana-de-acar no Brasil, a
vinhaa era um resduo descartado em rios ou acumulado em lagoas de decantao, o que gerava srios problemas ambientais. Por volta de 1950 a
vinhaa comeou a ser usada na lavoura de cana-de-acar e, a partir de
ento, seus efeitos no solo e na cultura passaram a ser mais bem estudados,
com um uso mais racional a partir de 1972 (Glria, 1976, 1997). Com a
percepo de seus efeitos benficos como fertilizante do solo, passou a ser
uma matria de valor cada vez maior.
Ao ser aplicada no campo, a vinhaa in natura provoca uma srie de modificaes nas caractersticas fsicas e qumicas do solo, principalmente no
pH, CTC, Carbono orgnico, reteno de gua, condutividade eltrica, porosidade, afetando tambm a populao e a atividade de microorganismos
do solo (Glria, 1976, 1997; Copersucar, 1978; Leal, 1983; Camargo et al.,
1984; Sengik, 1988; Mendoza et al., 2000).
De forma geral, parece que a influncia da aplicao da vinhaa na agregao do solo um processo dinmico e existem indcios de que seus efeitos
benficos esto relacionados com a atividade microbiana (Campos, 1995),
principalmente devido mucilagem excretada pelos microrganismos que
metabolizam os acares de pequenas cadeias carbnicas, presentes na vinhaa. Assim, sugere-se que altas taxas de aplicao desse resduo, juntamente com o tempo adequado de contato com o solo, favorecem a aglutinao das partculas, promovendo aumento na sua estabilidade estrutural
(Camargo; Valadares; Geraldi, 1983). Entretanto, diferentes condies
edafo-climticas podem induzir diferentes resultados, pois num experi-
868
mento utilizando doses de vinhaa de 0 a 600 m3 ha-1 por dois anos seguidos
em uma rea de cana-de-acar com latossolo vermelho distrofrrico tpico
e textura muito argilosa no se verificou aumento significativo nos ndices
de agregao do solo (Passarin et al., 2007).
Distintos solos apresentam diferentes capacidades de reteno de elementos orgnicos e inorgnicos. A reteno e a movimentao de elementos
solveis so determinadas pela textura e porosidade do solo e pela caracterstica de cada superfcie coloidal. Tais variveis interferem na solubilidade e troca de ons por processos de adsoro/dessoro (Usman; Gameh,
2008), provavelmente devido complexao e s reaes redox dos elementos ativos na soluo do solo. Por isso, essas propriedades so fortemente
influenciadas pela quantidade de matria orgnica e drenagem do solo (Silva; Griebeler; Borges, 2007).
Um dos componentes inorgnicos da vinhaa que tem grande mobilidade no solo o potssio, pois foram observados aumentos considerveis das
concentraes desse elemento nas diversas camadas at 100 cm de profundidade, em solo que recebeu vinhaa em doses de at 1000m3 ha1 (Brito;
Rolim, 2005).
Por sua vez, a matria orgnica da vinhaa parece no ter uma mobilidade muito pronunciada, pois na gua do lenol fretico a 3m de profundidade numa rea fertirrigada com vinhaa no se observou contaminao
significativa do aqufero, revelando a grande capacidade do solo em reter
compostos orgnicos oxidveis (Lyra; Rolim; Silva, 2003).
Dessa forma, a experincia indica que, de modo geral, quando a vinhaa
aplicada no solo ocorre uma melhoria em sua fertilidade, porm as quantidades no devem ultrapassar sua capacidade de reteno de ons, isto , as
doses devem ser estabelecidas de acordo com as caractersticas de cada solo,
pois j que este resduo possui quantidades desbalanceadas de elementos
minerais e orgnicos, pode ocorrer a lixiviao de vrios ons, sobretudo do
nitrato e do potssio (Silva; Griebeler; Borges, 2007).
Nesse sentido, em abril de 2005 a Cetesb (2009) publicou a portaria
n.01/05, reeditada em dezembro de 2006, pela Norma Tcnica P4.231, definindo critrios e procedimentos para o armazenamento, transporte e aplicao de vinhaa no solo do estado de So Paulo. Nessa regulamentao foi
estabelecida a obrigatoriedade de apresentao de um Plano de Aplicao
de Vinhaa, at o dia 2 de abril de cada ano, contendo mapas com a identi-
869
ficao das reas de aplicao, canais, tanques, dados sobre o solo, formas e
doses para a sua aplicao, alm da caracterizao qumica da vinhaa a ser
utilizada.
A dose mxima de vinhaa definida pela referida portaria da Cetesb :
m de vinhaa/ha = [(0,05 x CTC ks) x 3744+ 185] / kvi, onde: 0,05 =
5% da CTC; CTC = capacidade de troca catinica (cmolc/dm); Ks = concentrao de potssio no solo (cmolc/dm); 3744 = constante cmolc/dm
para kg de potssio em um volume de 1 ha por 0,8 metros de profundidade;
185 = massa, em kg, de K2O extrado pela cultura por ha, por corte; Kvi =
concentrao de potssio na vinhaa em kg de K2O/m.
Como pode ser observado na proposta de clculo acima exposta, num
determinado solo o potssio que baliza ou limita a dose de vinhaa a ser
aplicada.
Tambm do ponto vista da nutrio das plantas de cana-de-acar, o potssio destaca-se por ser exportado em maior quantidade, alm de influenciar na qualidade da matria-prima. Por isso, um princpio normalmente
usado para orientar a recomendao de adubao potssica nessa cultura
a avaliao da disponibilidade desse nutriente no solo. Normalmente, so
determinados os teores considerados trocveis dos nutrientes no solo, e as
interpretaes dessas anlises so baseadas em faixas de fertilidade, admitindo-se valores mnimos ou crticos abaixo dos quais o desenvolvimento
vegetal seria limitado (Orlando Filho, 1996). No caso do potssio, o nvel
crtico no solo estaria em torno de 2,1 mmolc dm-3 (Raij, 1974).
Devido dinmica das reaes de troca inica nos solos, importante
considerar as inter-relaes entre K+, Ca2+ e Mg2+, pois o excesso de um
poder prejudicar os processos de adsoro do outro, bem como influir nas
quantidades absorvidas pelas plantas (Orlando Filho, 1996), o que deve ser
levado em conta antes de simplesmente descartar a vinhaa no solo de uma
cultura.
Os efeitos da aplicao da vinhaa sobre o pH do solo so decorrentes
da oxidao da matria orgnica (elevando o pH do solo), provocada pela
populao microbiana, que ataca a matria orgnica e decompondo-a parcialmente diminui a acidez do solo (Silva et al., 1999). Em havendo condies oxidantes e facilidade de movimentao de soluo no perfil do solo, o
que ocorre em solos bastante arenosos, a alterao do pH pode facilmente
alcanar mais de um metro de profundidade (Brito; Rolim, 2005), mas cer-
870
tamente esse efeito deve ser muito mais restrito s camadas superficiais dos
solos argilosos.
Alm do potssio e da matria orgnica, outro elemento da vinhaa bastante visado o nitrognio, especialmente nas reas de cultivo orgnico,
onde no se pode aplicar adubo qumico e, assim, qualquer quantidade que
se possa adicionar de forma orgnica avidamente visada pelos agricultores.
Apesar de o nitrognio contribuir com apenas 1%, em mdia, na massa
seca total da cana-de-acar, seu papel to importante quanto o do carbono, hidrognio e oxignio que constituem juntos mais de 90% da matria seca. No solo, o nitrognio disponvel para as plantas suprido pela mineralizao da matria orgnica, fixao biolgica e adio de fertilizantes
nitrogenados (Carneiro; Trivelin; Victoria, 2009). A quantidade de nitrognio fixado biologicamente parece ser muito varivel, depende do sistema de cultivo e das condies edafoclimticas e, por isso, sua importncia
no cultivo da cana-de-acar ainda muito discutvel, embora na literatura sejam encontradas descries da ocorrncia de fixao biolgica de at
210 kg ha-1 ano-1 de N (Vitti et al., 2010).
No sistema tradicional de manejo, a recomendao de adubao para a
cultura de cana-de-acar segue o proposto no Boletim tcnico 100 do Instituto Agronmico de Campinas (IAC) (Spironello et al., 1997), que leva
em conta a produtividade esperada, o teor de fsforo e o de potssio no solo
para estimar a doses de N, P2O5 e K2O a serem aplicadas por hectare. Entretanto, existem dvidas se tais estimativas seriam adequadas para o sistema
de manejo chamado de cana crua, o que justifica a necessidade do desenvolvimento de novos estudos para calibrar a recomendao nesse novo sistema
de manejo, especialmente porque, muito provavelmente, diferentes gentipos e condies edafoclimticas acumulam quantidades diferentes de palha
na superfcie do solo e mineralizam com distintas velocidades.
No caso da colheita sem a queima das palhas, estas so deixadas sobre
o solo. Como tal material possui uma relao carbono/nitrognio elevada,
promove a imobilizao do N, especialmente quando incorporado ao solo,
prejudicando as plantas. Embora a quantidade de N na palhada seja pequena comparada com a necessidade da cultura, existem afirmaes de que a
palhada contribui com a manuteno ou aumento do nitrognio do solo,
que disponibilizado para a as plantas principalmente na medida em que
871
ocorre a mineralizao, especialmente na segunda metade do ciclo da cultura (Gava et al., 2005).
Existem especulaes de produtores de cana orgnica de que a pequena
contribuio da vinhaa em N poderia auxiliar no aumento da velocidade
de decomposio da palhada, mas no existem evidncias cientficas claras para comprovar esse fenmeno, merecendo mais estudos nesse aspecto.
Ao mesmo tempo, existem evidncias de que a adio da vinhaa in natura
no solo pode promover aumento das perdas de nitrognio por volatilizao
e esses resultados parecem estar relacionados melhoria das condies do
ambiente biolgico do solo e abrupta oferta de uma quantidade significativa de compostos orgnicos de fcil decomposio, o que estimula o rpido
crescimento microbiano responsvel por induzir tais perdas (Silva, 1999;
Lara Cabezas, 1991; idem et al., 1994; Sengik; Kiehl, 1995). Assim, no caso
da vinhaa biodigerida, que perdeu grande parte de sua matria orgnica
na forma de metano e gs carbnico, tudo leva a crer que o comportamento
seja distinto da vinhaa in natura, mas s se poder afirmar com certeza
aps o desenvolvimento de experimentos que comparam o efeito de ambos
os tipos de produtos.
Alm da volatilizao, outras formas de perda de N tambm so consideradas, pois foi demonstrado que a recuperao de N-ureia pela cana-planta
bastante baixa (entre 21 e 30%, dependendo da situao). Essa baixa recuperao tem sido atribuda s perdas por lixiviao de nitrato, desnitrificao, volatilizao do fertilizante e por perdas naturais de N pela folhagem da
cultura durante o processo de maturao (Franco et al., 2008). Dessa maneira tem sido demonstrado que, nos sistemas de cultivo tradicionais, a complementao de nitrognio na forma de fertilizante aplicado aps a adio de
vinhaa apresenta melhor retorno econmico (Vitti, 2010). Porm, no que
se refere cana com colheita sem queima, os dados ainda so incipientes.
Uso de vinhaa concentrada, sem prvia digesto

A partir da comprovao dos efeitos benficos do uso da vinhaa para
a cultura da cana-de-acar associado economia de fertilizantes, entre
outros aspectos, a limitao de seu uso agricultura passou a ser o custo de
transporte e aplicao no campo, sendo vivel apenas em curtas distncias a
872
partir do ponto de produo. Por isso, desde 1978 a Usina Santa Eliza veio
tentando otimizar concentradores e equipamento de aplicao no campo,
mas o gasto de energia e o custo da concentrao ainda eram muito limitantes, o que passou a melhorar a partir de 1999, com a implantao do sistema
de cogerao de energia (Barbosa, 2006).
O uso da vinhaa concentrada viabiliza sua aplicao em cultivos localizados at distncias em torno de 90 km, sendo demonstrado que sua aplicao na dose equivalente a 180 kg ha-1 K2O precisa de uma complementao
de adubo nitrogenado para a plena produo, enquanto doses elevadas de
vinhaa (acima do equivalente a 270 kg ha-1 K2O) aparentemente poderiam
dispensar a adubao nitrogenada (Barbosa et al., 2006), mas tais doses de
potssio estariam muito acima da recomendada para a cultura (Spironello
et al., 1997) e, dependendo do tipo de solo, poderiam ultrapassar o mximo
permitido pela Cetesb (2006).
A biodigesto da vinhaa
O incentivo do governo brasileiro em transformar o Brasil numa referncia na produo de bioenergia, bem como o dos rgos de fomento
pesquisa nessa rea, certamente aumentar a produo de etanol de canade-acar. Consequentemente ampliar consideravelmente o volume de
vinhaa produzida, o que torna premente o desenvolvimento de alternativas inteligentes e viveis de disposio e aproveitamento desse efluente.
Dentre as formas alternativas de converso da biomassa em energia secundria, destaca-se a biodigesto anaerbia da vinhaa, o que permite o seu
aproveitamento sob a forma de biogs (mistura gasosa rica em metano). Na
verdade, a finalidade inicial da biodigesto anaerbica era o tratamento da
vinhaa como efluente poluidor das guas, pois tinha a vantagem de promover grande reduo da demanda bioqumica de oxignio (DBO), alm
de produzir o biofertilizante, ter pequena produo de lodo, baixos custos
operacionais e de investimento (Pompermayer; Paula Jnior, 2000).
Na Tabela 24.1 so apresentadas algumas alteraes que podem ocorrer
com a vinhaa in natura ao passar pelo processo de biodigesto e concentrao. Naturalmente, estas alteraes podem variar dependendo do tipo
de vinhaa, do sistema de biodigesto empregado, do tipo de concentra-
873
dor utilizado, bem como do ajuste do mesmo para uma dada operao. A
ttulo de ilustrao, na Tabela 24.1 apresentada uma comparao entre
os respectivos teores na vinhaa original (VO) com os da mesma vinhaa
aps passar pelo processo de biodigesto (VB) e concentrao (VBC). O
aumento do pH ao longo do processo (Tabela 24.1) deve-se principalmente
adio de base visando propiciar condies adequadas para o desenvolvimento dos microorganismos metanognicos. Dependendo da composio
da vinhaa, s vezes necessrio fazer a adio de nitrognio ou outro componente que esteja em nvel subtimo para o processo da biodigesto, o que
tambm pode justificar certas discrepncias entre a vinhaa natural e a vinhaa biodigerida (VB) ou o concentrado final (CVB).
A reduo da carga orgnica (DQO) ocorre devido transformao da
matria orgnica em gs carbnico, metano, que so os principais componentes do biogs que sai do sistema. Parte do nitrognio e enxofre tambm
sai do sistema na forma de substncias volteis tais como N2 e H2S, como
componentes do biogs. Especialmente no caso de compostos de enxofre,
estes so prejudiciais aos equipamentos que utilizam este combustvel e,
por isso, o biogs rico nesses compostos precisa ser previamente tratado
antes de ser utilizado. No que se refere a elementos minerais tais como P,
Ca, Mg, Cu, Fe, Mn e Zn, as perdas durante o processo de biodigesto podem ocorrer pela formao de precipitados (lodo) que pode acumular no
fundo dos reatores e, durante o processo de concentrao, pela incrustao
nas superfcies internas dos evaporadores e suas tubulaes, provavelmente
na forma de carbonatos e bicarbonatos.
Quando se utilizam evaporadores de maior circulao interna, as incrustaes so menos intensas, porm, tais concentradores demandam um maior
consumo de energia para seu adequado funcionamento, devendo, portanto,
a escolha do evaporador ser analisada do ponto de vista da relao custo benefcio de todo o sistema agroindustrial. No caso de concentradores em que
ocorrem incrustaes mais intensas, necessrio realizar frequentes operaes de limpeza ou Clean-in-place (CIP). Nesse caso, o interessante seria fazer a cipagem, retornando os resduos no concentrado de vinhaa para devolver os minerais subtrados no processo de concentrao. Para tal limpeza,
o ideal seria usar o cido ntrico, pois seriam obtidos os respectivos nitratos,
e alm da vantagem de todos os nitratos serem solveis, estaria sendo reposto tambm o nitrognio perdido no processo de biodigesto e concentrao.
874
Tabela 24.1 Caractersticas de uma vinhaa in natura ou original (VO), da mesma vinhaa aps
o processo de biodigesto anaerbica (VB) e concentrada cerda de 12 vezes (VBC), e clculo dos
valores em relao a uma diluio equivalente em potssio da vinhaa original (VBC eq. em K).
Dados obtidos em teste preliminar num projeto piloto da Biotechnical Processes International
(BPI) (2011), realizado na Usina So Francisco, Sertozinho (SP), 2009
Caractersticas
Vinhaa
Original
(VO)
Vinhaa
Biodig.
(VB)
Vinhaa
VBC
Biodig. e
equivalente Unidades
Conc.
em K da VO
(VBC)
pH a 25C
4,41
7,66
9,31
Brix
2,3
1,1
12,0
1,0
Brix
DQO
24,00
7,84
56,00
4,74
g/L O2
Slidos Totais
21,70
13,90
133,31
11,28
g/L
Slidos Solveis Totais
19,33
10,41
110,90
9,38
g /L
Matria Orgnica Solvel
11,38
2,37
31,04
2,63
g /L
Slidos Suspensos Totais
2,37
3,49
22,41
1,89
g/L
Matria Orgnica Suspensa
1,94
2,37
17,21
1,46
g /L
Nitrognio total
0,23
0,31
0,92
0,08
g/L N
Nitrognio Solvel total
0,15
0,17
0,36
0,03
g/L N
Nitrognio Amoniacal
0,03
0,15
0,08
0,01
g/L N-H3
Fsforo
0,03
0,05
0,15
0,01
g/L P
Potssio
2,2
2,2
26,0
2,2
g/L K
Clcio
0,57
0,53
0,99
0,08
g/L Ca
Magnsio
0,17
0,13
0,65
0,06
g/L Mg
Enxofre
0,39
0,40
0,42
0,04
g/L S
Cobre
0,8
0,9
1,50
0,13
mg/L Cu
Ferro
46,9
43,8
87,0
7,36
mg/L Fe
Mangans
3,6
3,4
4,0
0,34
mg/L Mn
Zinco
0,4
0,5
2,5
0,21
mg/L Zn
A biodigesto anaerbia da vinhaa uma alternativa ainda pouco utilizada; entretanto, sua viabilidade vem sendo provada por vrios estudos,
pois alm de reduzir a demanda bioqumica de oxignio (D.B.O) da vinhaa em 70 a 90%, a quantidade de gs produzida serve como fonte adicional
de combustvel renovvel (Longo, 1994; Freire; Cortez, 2000). Considerando os teores de N/P/K da vinhaa biodigerida, esta pode ser utilizada
para a fertirrigao em vez da vinhaa in natura, com a vantagem de mais
fcil manuseio devido ao seu pH neutro ou alcalino (Lamo, 1991). Alm
disso, existem estudos mencionando que a vinhaa biodigerida promo-
875
veu aumento de aproximadamente 30% no contedo de C-orgnico e de

N-total, indicando que, mesmo com baixo teor de matria orgnica total
em relao vinhaa in natura, sua aplicao no solo resultou em aumento
sensvel nos teores desses elementos (Longo, 1994).
Outra vantagem da biodigesto da vinhaa a viabilidade de expanso
da distribuio para reas distantes, uma vez que a vinhaa biodigerida
pode ser bastante concentrada, reduzindo os custos com transporte. Entretanto, a diferena existente entre a vinhaa comum e o concentrado de vinhaa biodigerida (Tabela 24.1) certamente deve induzir diferentes reaes
fsicas, qumicas, bioqumicas e biolgicas no solo. A diferena na resposta
biolgica est ilustrada na Figura 24.1, na qual pode ser observado um intenso desenvolvimento de fungos nos dois tipos de solos tratados com vinhaa comum, mas no nos tratados com a biodigerida e concentrada, nas
mesmas condies de umidade do solo e demais variveis ambientais.
Figura 24.1 Aspecto geral de fungos crescidos em solo tratado com vinhaa oriunda do
processo de produo de etanol de cana-de-acar. A = latossolo e D = argissolo, ambos
sem tratamento (controle); B = latossolo e E = argissolo, ambos tratados com o equivalente a
100 m3/ha de vinhaa in natura; C = latossolo e F = argissolo, ambos tratados com concentrado de vinhaa biodigerida, em dose de K equivalente ao de B e E, nas mesmas condies
de umidade do solo e demais variveis ambientais
876
Embora a anlise da Figura 24.1 (especificamente nas imagens C e F)

possa sugerir pouca atividade biolgica nos solos tratados com concentrado
de vinhaa biodigerida, os resultados da determinao da respirao basal
dos solos (apresentados no Grfico 24.1) revelam que a evoluo de CO2
nos solos tratados com vinhaa biodigerida j bastante intensa 48 horas
aps a aplicao, enquanto nos solos tratados com vinhaa in natura a atividade biolgica mais intensa ocorre logo aps esse perodo (Grfico 24.1).
Levando em conta o observado na Figura 24.1 e no Grfico 24.1, pode-se
concluir que a aplicao dessas diferentes formas de vinhaa devem estimular distintos tipos de microorganismos do solo, o que tambm precisa ser
melhor estudado e determinadas as consequncias para a cultura.
Grfico 24.1 Variao da taxa de respirao basal de dois tipos de solo: argissolo (Arg.) e
latossolo (Latos.), submetidos a trs tratamentos: controle (Test); adicionado de vinhaa in
natura (V.IN) ou vinhaa biodigerida e concentrada (V. Conc.), nas mesmas condies de
umidade do solo e demais variveis ambientais
Como ilustrado no Grfico 24.1, as diferentes formas de vinhaa foram

aplicadas em condies distintas das que ocorrem no campo e na ausncia de palha. Por isso, podem ser levantadas perguntas como: Se tais dados
preliminares deixam claro que as diferentes formas de vinhaa alteram o
comportamento biolgico do solo, ser que so suficientes para alterar a
fertilidade do solo ou as condies fitossanitrias? O balano de carbono
no solo? Se aplicadas sobre a palhada (no sistema de cana crua) tambm
influenciam de maneira diferente a decomposio dessa camada deixada
pela colheita mecnica? Ser que podem alterar a ciclagem de nutrientes?
Ser que aplicada por anos a fio trar alteraes significativas para o sis-
877
tema solo-planta-atmosfera? Ou ser que a frentica e distinta atividade

biolgica no passa de um rpido e efmero fenmeno, pouco significativo
no ecossistema agrcola e no ecossistema global?
Em funo do anteriormente exposto, clara a necessidade de estudos e
pesquisas que possam contribuir para o desenvolvimento dessa importante
rea (multidisciplinar) pois, alm da importncia econmica e ambiental,
ela tambm de carter estratgico para a nao, tanto do ponto de vista
econmico quanto do ambiental.
Dentro deste contexto, vrias empresas tm procurado desenvolver tecnologias para adequar os sistemas de biodigesto de vinhaa. Inicialmente
muitos problemas de entupimento de equipamento e solidificao dos leitos de biodigesto dos reatores limitavam o adequado uso e encareciam a
manuteno dos sistemas de biodigesto. Entretanto, empresas como a Dedini, localizada em Piracicaba (SP), tm se associado a produtores de biorreatores como a empresa Holandesa Paques BV para produzir sistemas de
biodigesto com sistema de recirculao interna e que apresentam bastante
eficincia (Dedini, 2010). Da mesma forma, outras empresas tm procurado transferir o know-how utilizado com sucesso no tratamento de outros
tipos de efluentes para tratar vinhaa, por exemplo a Biotecnical Processes
International (BPI) (2005) que possui diferente tipo de biodigestor e que
tem tentando aplicar sua tecnologia no setor de vinhaa oriunda da produo de lcool de cana-de-acar.
Uma das caractersticas que distingue a vinhaa comum da biodigerida
e concentrada que esta ltima, por ter menos matria orgnica, permite
uma grande concentrao, o que leva a um aumento significativo do teor de
eletrlitos na suspenso resultante. Esse elevado teor salino pode provocar
queimadura de folhas de plantas jovens, se for aplicada diretamente sobre
as mesmas (Figura 24.2).
Uma vez que o processo de biodigesto para produo de biogs exige
que o pH da vinhaa original seja elevado para valores ao redor de 8,0,
necessria a adio de uma base antes de ser introduzida no biodigestor, o
que eleva ainda mais o teor salino do efluente resultante.
Para a neutralizao da acidez da vinhaa, o ideal seria usar hidrxido
de potssio (KOH), uma vez que o sal resultante conteria potssio, que
nutriente de plantas. Entretanto, por representar menor custo, o hidrxido
de sdio (NaOH) tende a ser preferido, mas introduz na suspenso o sdio
878
Figura 24.2 Aspecto geral de uma planta jovem de cana-de-acar pulverizada com vinhaa biodigerida e concentrada dez vezes (A); detalhe da folha pulverizada com vinhaa in
natura ou original (B); aparecimento de manchas clorticas e pontos necrticos nas folhas
que receberam concentrado de vinhaa biodigerida (C)
(Na), que alm de no ser nutriente de plantas tem efeito dispersante das
partculas estruturais do solo. Isso significa que, se adicionado repetidas
vezes ou em doses relativamente elevadas, ele pode contribuir para a compactao do solo e a salinizao do mesmo, o que, em conjunto, pode prejudicar o desenvolvimento das plantas (Figura 24.3).
Naturalmente, nas condies de campo em que o sistema aberto e
ocorrem chuvas que auxiliam na diluio dos eletrlitos, bem como na lixiviao dos mesmos, alm de extrao e exportao pelas colheitas, efeitos
to drsticos seriam difceis de ocorrer a curto prazo, a no ser que fossem
aplicadas doses muito elevadas (e atualmente proibidas pela Cetesb). Entretanto, tais doses foram utilizadas de forma didtica neste trabalho com
a finalidade de ilustrar os efeitos nas plantas e de mostrar uma possvel
perspectiva se forem usadas doses indiscriminadamente elevadas ou ocorrer acmulo no solo.
Finalmente, pelo que se pode depreender das observaes da prtica,
aparentemente a biodigesto da vinhaa para produzir biogs como fonte
879
Figura 24.3 Plantas de milho submetidas a diferentes doses de vinhaa neutralizada com
NaOH, biodigerida e concentrada bruta dez vezes: A = controle sem aplicao de vinhaa;
B = 20 m3/ha (equivalente a 200 m3/ha de vinhaa bruta); C = 40 m3/ha (equivalente a 400
m3/ha de vinhaa bruta); D = aspecto do solo compactado que impede o desenvolvimento
normal das plantas, na dose de 400 m3/ha; E = aspecto do solo extremamente compactado e
endurecido com a aplicao de 80 m3/ha (equivalente a 800 m3/ha de vinhaa bruta), o que
impede completamente a germinao e o desenvolvimento das plantas
de energia, isoladamente, ainda no deve ser economicamente interessante,

pois atualmente poucas usinas realizam biodigesto e concentrao da vinhaa. Entretanto, a viabilidade econmica desse processo pode ser alcanada se ele for integrado no processo agroindustrial de produo de etanol e
cogerao de energia, bem como associado produo de fertilizantes, para
retornar s reas de cultivo da cana os nutrientes minerais dela retirados e
exportados por ocasio da colheita (Olivrio et al., 2010).
880
Aspectos ambientais
O desenvolvimento de tecnologias mais eficientes no setor industrial,
sem sombra de dvida, de capital importncia. Entretanto, a viabilidade
econmica e ambiental s ter sido maximizada com o desenvolvimento paralelo de conhecimento cientfico dos aspectos agrcolas e ambientais. Esse
conhecimento tende a fixar a cultura nas regies de tradicional cultivo, reduzindo a expanso para reas de biomas que devem ser preservados.
Estudo recente (Nassar et al., 2008) concluiu que, no Brasil, a expanso
de reas cultivadas com cereais e com pastagem tem ocorrido independentemente do aumento do cultivo de cana-de-acar. Nesse estudo tambm
sugerido que o aumento de produtividade animal das regies tradicionais
de pastagens tem sido responsvel pelo aumento da produo pecuria
do pas, reforando que o aumento das reas de desmatamento do bioma
Amaznico no est diretamente relacionado com a expanso de reas de
cereais e cana-de-acar. O mito de que a cultura da cana-de-acar era
degradante do solo outro aspecto que vem sendo vencido, pois vem sendo
demonstrado que esta cultura promove maior fixao de carbono no solo e
menos eroso, com menor introduo de fertilizantes nas reas cultivadas,
em comparao com a de outras culturas como milho e soja (Amaral et al.,
2008).
Embora a produo de energia de cana-de-acar para a produo de
bioenergia tenha aumentado significativamente, tambm parece no haver
competio com a produo de alimentos, nem tem relao com o aumento
do preo de alimentos no mercado mundial (Bance; Nowicki; Meijl, 2008).
Do ponto de vista da qualidade de vida, tambm tem sido, aos poucos,
desvinculada da imagem do passado na qual a produo de cana-de-acar
era baseada na mo-de-obra escrava, levando ideia de que esta cultura
conduzia degradao da qualidade de vida do ser humano. Aparentemente, o contrrio tem sido observado.
Embora ainda existam muitos aspectos a serem melhorados e ocorra ainda muita desigualdade entre as unidades sucroenergticas do pas, alguns
indicativos de melhora devem ser considerados. Um deles o processo de
queima, que est sendo substitudo pela colheita de cana crua, que muito
menos poluente. Alm disso, as novas tecnologias industriais e agrcolas
que o setor sucroenergtico precisa usar no dia-a-dia para se manter com-
881
petitivo exigem cada vez mais mo-de-obra qualificada, o que tem levado
as empresas a recrutar e treinar pessoal, que passa a ganhar mais e ter melhor qualidade de vida. Paralelamente, o mercado internacional tem valorizado os produtos que so obtidos por empresas que no degradam o meio
ambiente e que valorizam o ser humano. Isso tem levado as usinas a, paralelamente ao desenvolvimento tecnolgico, se preocupar com a realizao
de projetos sociais e com a qualidade de vida da populao ligada direta ou
indiretamente s unidades de produo (Paiva, 2011).
A agricultura, ao lado de outras atividades humanas, tem uma contribuio muito importante no aumento da gerao de gases de efeito estufa
e, por isso, tambm deve ser considerada, paralelamente aos estudos de interesse agronmico (Robertson; Paul; Harwood, 2000). Esse aspecto tem
merecido uma crescente ateno dos pesquisadores brasileiros, tanto pelo
aspecto meramente cientfico quanto pela necessidade de domnio do assunto e da metodologia pertinente (Costa et al., 2006) e tambm pelo aspecto estratgico da nao, pois o mundo ainda pensa na cana-de-acar
como cultura degradante do meio ambiente. Este ltimo aspecto extremamente relevante do ponto de vista do comrcio internacional e soberania
nacional porque, se por um lado os pases interessados no lcool brasileiro
reconhecem a importncia do Brasil como potencial produtor de biocombustveis, por outro lado temem que as nossas prticas agrcolas promovam mais perdas do que estocagem do carbono no solo. Esse fato bastante
agravado por no termos muitas pesquisas nessa rea e a maioria dos dados
existentes terem sido, at ento, publicadas em lngua pouco lida no mundo (portugus). Entretanto, tem sido verificado grande esforo para mudar
esse aspecto (Zuurbier; Vooren, 2008).
Os temores sobre as trocas de carbono entre o solo e a atmosfera tm
seus fundamentos, pois a mera incorporao de resduos orgnicos ao solo
promove aumentos na evoluo do CO2 (Silva; Griebeler; Borges, 2007).
Entretanto, apesar do cultivo da cana-de-acar sempre ter sido considerado uma prtica degradante do meio ambiente, evidncias tm surgido de
que a fixao de CO2 no solo dessa cultura maior que a de outras prticas
agrcolas (Rossetto, 2004).
A emisso de CO2 pelos solos, de forma geral, resultado da ao de
vrios processos fsicos, qumicos e biolgicos que esto relacionados com
a produo e o transporte deste gs no solo. Vrios resultados apontam a
882
temperatura e a umidade como os principais fatores que controlam a produo de CO2 no solo (Epron et al., 2006; Kang et al., 2003). No entanto,
o teor de matria orgnica e a porosidade tm sido considerados como as
principais variveis que controlam a emisso de CO2 do solo (Epron et al.,
2006; Schwendenmann et al., 2003; Xu; Qi, 2001).
A temperatura e a umidade ou a interao desses fatores parecem estar
mais ligadas variao temporal da produo de CO2 numa mesma rea de
solo (Kang et al., 2003; Kang et al., 2000). Alm da temperatura e umidade, a respirao basal do solo tambm controlada pelo teor de carbono,
biomassa microbiana, nutrientes, pH, capacidade de troca catinica, teor
de xidos de ferro, densidade e porosidade total do solo (Epron et al., 2006;
Xu; Qi, 2001; La Scala; Bolonhezi; Pereira, 2006; Fang et al., 1998). Neste
contexto, certamente as diferenas entre vinhaa in natura e concentrado de
vinhaa biodigerida tm comportamentos distintos (Grfico 24.1) e devem
ainda sofrer interferncia e interagir com distintos tipos de solo e formas de
manejo da cultura.
A cultura da cana-de-acar no sudeste brasileiro tem estado muito
relacionada com a produo de alimentos, biocombustvel e bioenergia e,
por isso, tambm vem sendo considerada como uma importante alternativa, frente aos problemas das mudanas climticas (Cerri et al., 2007). O
potencial de produo de energia renovvel vem sendo bastante discutido
em contraposio ao emprego de energia de combustveis fsseis, mas ainda existem poucos trabalhos que procuram a melhor forma de manejo da
cultura de cana-de-acar visando a maior conservao do carbono no solo.
Nesse aspecto o Brasil tem procurado desenvolver o sistema de cultivo
da cana-de-acar sem realizar a queima da palha, o chamado cana crua ou
cana verde, em lugar do tradicional sistema de queimada prvia colheita.
Alm disso, desde a dcada de 1990 vrios agricultores do estado do Paran vm tentando se adaptar ao sistema de cultivo de cana orgnica: forma
mais extensiva, a Usina So Francisco de Sertozinho (SP) foi a pioneira no
desenvolvimento do sistema de cultivo da cana orgnica (Rossetto, 2004)
e atualmente cultiva cerca de 13.000 ha nessa modalidade (O planeta orgnico visita, s. d.). Apesar de esses sistemas mais conservacionistas terem
sido iniciados j h alguns anos, o comportamento da respirao do solo
nessa nova sistemtica tem sido pouco estudado. Os efeitos da aplicao da
vinhaa in natura nesses novos sistemas so ainda muito pouco conhecidos.
883
Especificamente no tocante aplicao do concentrado de vinhaa biodigerida e outros subprodutos e/ou resduos as informaes so muito escassas.
A despeito das vantagens da cultura de cana-de-acar, de ela ser aparentemente menos degradante do solo que o cultivo de cereais e pastagens
(Amaral et al., 2008), entre outros pontos positivos relacionados neste captulo, necessrio ressaltar que a monocultura, seja ela qual for, tende a
reduzir a biodiversidade (Balsan, 2006). Portanto, este aspecto de extrema
importncia e precisa ser levado em conta, tanto pelas empresas sucroenergticas quanto pelas polticas pblicas de todos os nveis, em especial pelo
cdigo florestal. Infelizmente, ainda hoje muitos interesses partidrios e
econmicos ainda parecem se sobrepor cincia e ao bom senso nas decises a serem tomadas pelos governos (Girardi; Fanzeres, 2010). Por isso,
preciso ressaltar que se no for dada a devida ateno aos aspectos ambientais, a crtica internacional (especialmente dos pases concorrentes do Brasil
na produo de biocombustveis) poder ser mais limitante que os aspectos
tcnicos e econmicos da cultura.
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25
Avanos brasileiros no desenvolvimento
de normas tcnicas analticas para certificao
e controle da qualidade de biodiesel
Danilo Luiz Flumignan,
Jos Eduardo de Oliveira,
Rafael Rodrigues Hatanaka,
Rodrigo Sequinel1
Histrico do plano nacional de produo

e uso do biodiesel
Durante quase meio sculo, o Brasil desenvolveu pesquisas sobre biodiesel, promoveu iniciativas para usos em testes veiculares e foi pioneiro ao
registrar a primeira patente sobre o processo de produo de biodiesel, em
1980. No Governo do Presidente Luiz Incio Lula da Silva, por meio do
Programa Nacional de Produo e Uso do Biodiesel (PNPB), o Governo
Federal organizou a cadeia produtiva, definiu as linhas de financiamento,
estruturou a base tecnolgica e editou o marco regulatrio do novo combustvel (PNPB, 2011).
Em 2 de julho de 2003 a Presidncia da Repblica instituiu por meio de
decreto um grupo de trabalho interministerial encarregado de apresentar
estudos sobre a viabilidade de utilizao de biodiesel como fonte alternativa
1 Os autores agradecem a Jos Honrio Accarini (assessor da Subchefia de Anlise e Acompanhamento de Polticas Governamentais da Casa Civil da Presidncia da Repblica), Rafael da Silva Menezes (coordenador de Aes de Desenvolvimento Energtico do Ministrio
da Cincia e Tecnologia), Pedro Castro Neto (professor-titular da Universidade Federal de
Lavras e presidente do 4 Congresso da Rede Brasileira de Tecnologia de Biodiesel) e a Ezoneth Gomes Souza (Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis, Gerncia de
Normalizao da Comisso de Estudo de Biodiesel da ABNT), cujas informaes foram
de fundamental importncia para a elaborao deste captulo.
890
de energia. Como resultado foi elaborado um relatrio que deu embasamento ao presidente da Repblica para estabelecer o PNPB como ao estratgica e prioritria para o Brasil (Casa civil da Presidncia da Repblica,
jul. 2003). A forma de implantao do PNPB foi estabelecida por meio do
Decreto de 23 de dezembro de 2003 (Casa civil da Presidncia da Repblica, dez. 2003).
A estrutura gestora do programa ficou definida a partir da instituio
da Comisso Executiva Interministerial do Biodiesel (Ceib), possuindo,
como unidade executiva, um grupo gestor. Em 31 de maro de 2004, foi
aprovado pela Ceib o plano de trabalho que norteia as aes do PNPB.
No decorrer de 2004 as aes desenvolvidas permitiram cumprir uma etapa fundamental para o PNPB que culminou com seu lanamento oficial
pelo presidente da Repblica Luiz Incio Lula da Silva, em 6 de dezembro de 2004. Na oportunidade houve o lanamento do Marco Regulatrio
que estabelece as condies legais para a introduo do biodiesel na Matriz
Energtica Brasileira de combustveis lquidos (Casa civil da Presidncia
da Repblica, jul. 2003).
O PNPB um programa interministerial do Governo Federal que objetiva a implantao de forma sustentvel, tanto tcnica quanto economicamente, da produo e uso do biodiesel, com enfoque na incluso social e no
desenvolvimento regional, via gerao de emprego e renda (ibidem).
Como fruto desses esforos, em 13 de janeiro de 2005 foi publicada a
Lei 11.097, marco regulatrio que introduziu formalmente os biocombustveis, em especial o biodiesel, na matriz energtica brasileira, cabendo
Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis (ANP) a
regulao do setor. O marco regulatrio foi complementado pelo estabelecimento dos percentuais mnimos de mistura de biodiesel ao diesel e a autorizao do uso comercial do biodiesel no Brasil, com base na diversidade de
oleaginosas disponveis no pas, na garantia do suprimento e da qualidade,
na competitividade frente aos demais combustveis e em uma poltica de
incluso social. Estas diretrizes permitem a produo de biodiesel a partir
de diferentes oleaginosas e rotas tecnolgicas, possibilitando a participao
do agronegcio e da agricultura familiar (Casa civil da Presidncia da Repblica, jan. 2005).
A regulao feita pela ANP, responsvel pela regulao e fiscalizao do
novo produto no mercado, cria a figura do produtor de biodiesel, estabelece
AVANOS BRASILEIROS NO DESENVOLVIMENTO DE NORMAS TCNICAS
891
as especificaes do combustvel e estrutura a cadeia de comercializao. A

regulamentao tambm permite usos especficos do biodiesel, com misturas superiores estabelecida pelo marco regulatrio, desde que autorizadas
pela ANP (2004). A Lei prev a possibilidade de antecipao dos prazos estabelecidos, a ser determinada por resoluo do Conselho Nacional de Poltica Energtica (CNPE). Para ser autorizada uma antecipao dos prazos
pelo CNPE faz-se necessrio que o segmento de biodiesel e as demais reas
correlacionadas a ele atendam os seguintes critrios: a) a disponibilidade de
oferta de matria-prima e a capacidade industrial para produo de biodiesel; b) a participao da agricultura familiar na oferta de matrias-primas;
c) a reduo das desigualdades regionais; d) o desempenho dos motores
com a utilizao do combustvel; e) as polticas industriais e de inovao
tecnolgica (CNPE, 2005).
No aspecto financeiro, o PNPB conta com apoio de fontes de financiamento junto a dois programas: 1) Programa de Apoio Financeiro a Investimentos do Biodiesel implantado pelo Banco Nacional de Desenvolvimento
Econmico e Social (BNDES) e 2) Programa Nacional de Fortalecimento da
Agricultura Familiar (Pronaf). Os financiamentos ofertados pelo BNDES
so destinados a todas as fases de produo do biodiesel, entre elas a agrcola, a de produo de leo bruto, a de armazenamento, a de logstica, a de beneficiamento de subprodutos e a de aquisio de mquinas e equipamentos
homologados para o uso deste combustvel. Por outro lado, o Pronaf financia o custeio para a produo de oleaginosas. Para obter esse financiamento
necessrio apresentar o contrato de compra e venda feito entre o agricultor
familiar e o produtor de biodiesel (PNPB, 2011).
Outras instituies com disponibilidade de recursos para financiamento
dirigido ao segmento do biodiesel so a Financiadora de Estudos e Projetos
(Finep) e o Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq). Na Finep, a modalidade de financiamento destina-se rea de
desenvolvimento tecnolgico, e ofertada por meio de chamadas pblicas
para projetos que envolvam instituies de pesquisa e/ou iniciativa privada. Nesse sentido, em 2006, o Ministrio da Cincia e Tecnologia (MCT),
por meio da Finep, deu incio capacitao de diversas instituies de pesquisa (Furb, UFRGS, UFPR, UFMS, UFMT, UFG, Unesp, IPT, INT,
Unicamp, UFSCar, Cetec, UFMG, UFRJ, PUC-RIO, Unifacs, UFPE,
UFC, UFMA, UFPI, UFRN, UFPA, Ufam e Unir), integradas Rede
892
Brasileira Tecnologia de Biodiesel (RBTB) e presentes em todas as regies

geogrficas do pas, por meio da consecuo de encomendas verticais de
projetos de pesquisas no valor de R$ 22 milhes.
As instituies coordenadoras na execuo das propostas foram: Furb
(Regio Sul), Unesp (Regio Sudeste), UFG (Regio Centro-Oeste),
UFPE (Regio Nordeste) e UFRN (Regio Norte). O objetivo destas encomendas foi a capacitao tcnica dos laboratrios da RBTB para realizao, de forma complementar, da certificao e do controle de qualidade do biodiesel comercializado no pas, especificados na Resoluo ANP
n 42, de 24 de novembro de 2004, atendendo aos interesses dos organismos regulamentadores, empresas, importadores, organismos certificadores e sociedade. Esta Resoluo foi posteriormente revogada pela Resoluo ANP n.7, de 19 de maro de 2008 (ANP, 2008), que estabelece
no Regulamento Tcnico ANP, a especificao do biodiesel, avaliado por
diversas caractersticas fsico-qumicas, mediante o emprego de normas
tcnicas da Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT), American Society for Testing and Materials (ASTM), da International Organization for Standardization (ISO) e do Comit Europen de Normalisation
(CEN) (Finep, 2011).
Ao mesmo tempo, o MCT, por meio da Finep, financiou o Projeto
Confiabilidade em Ensaios Laboratoriais de Biocombustveis (Celab), com
recursos investidos da ordem de R$ 16 milhes, cujo incio foi em dezembro de 2007 com durao de 36 meses e execuo realizada em parceria
pelo Centro de Referncia em Tecnologias Inovadoras (Fundao Certi) e
o Instituto Brasileiro de Petrleo, Gs e Biocombustveis (IBP). O Projeto
Celab teve como objetivo capacitar os laboratrios que integram a Rede de
Laboratrios de Caracterizao e Controle da Qualidade de Biocombustveis para que realizem ensaios e anlises em biocombustveis de acordo com
requisitos aceitos internacionalmente, de modo a buscar sua acreditao
junto ao Inmetro, segundo os requisitos tcnicos da ABNT NBR ISO/IEC
17025:2005. O pblico-alvo prioritrio do Projeto Celab so 35 laboratrios de diversas instituies de pesquisa, sendo 22 integrantes da Rede de
Laboratrios do Programa de Monitoramento de Combustveis Lquidos
da ANP (PMQC-ANP) e 13 das Redes de Caracterizao e Controle da
Qualidade dos Biocombustveis geridas pelo MCT (Redebio, Bioeste, Redebionorte, Biosudeste e Redesulbio) (Celab, s. d.).
893
No CNPq, a modalidade de financiamento tem por objetivo apoiar atividades de pesquisa cientfica, tecnolgica e de inovao, pela seleo de
propostas para apoio financeiro a projetos ofertados mediante chamadas
pblicas, via editais de pesquisa. Podem apresentar propostas os pesquisadores, professores e especialistas que detenham ttulo de doutor quando da
submisso da proposta, com vnculo empregatcio ou funcional com Instituies de Ensino Superior (IES), de Pesquisa Cientfica ou Tecnolgica,
pblicas e privadas, todas sem fins lucrativos, constitudas sob as leis brasileiras e que tenham sua sede e administrao no pas. Desde 2007, o CNPq
publicou diversos editais, na rea de biodiesel, por meio dos quais foram
contemplados projetos de pesquisas, com recursos no valor global estimado
em R$ 58 milhes nas diversas reas de biocombustveis, quais sejam, formao e fixao de recursos humanos, cultivo de plantas de ciclo curto de
desenvolvimento destinadas produo de matria-prima para obteno
de biodiesel, cadeia de produo e uso de biodiesel, produo de biodiesel a
partir de microalgas, obteno de biodiesel via rota etlica, uso de coprodutos associados cadeia produtiva de biodiesel e caracterizao e controle da
qualidade de biodiesel (CNPq, 2011).
A formao da Rede Brasileira de Tecnologia de Biodiesel (RBTB)
constituiu-se em uma das aes do mdulo de Desenvolvimento Tecnolgico, coordenado pelo MCT, no mbito do PNPB. No decorrer de 2003 e
2004, foram elaborados projetos em parceria com universidades, institutos
e centros de pesquisa, distribudos em 22 estados da Federao. Este trabalho permitiu o mapeamento da competncia instalada no pas, servindo
como base para a estruturao e implantao da Rede. A execuo dos projetos e demais atividades no mbito da Rede contou com R$ 12 milhes
dos fundos setoriais de C&T alocados em 2003 e 2004. Os projetos da
RBTB foram elaborados e executados de forma cooperativa e participativa, com acompanhamento e superviso do MCT, promovendo parcerias,
adequando a realidade e as vocaes estaduais ao Programa Nacional, controlando, assim, a aplicao de recursos e evitando a repetio de esforos
(RBTB, 2011).
A RBTB possui como coordenao central a Secretaria de Desenvolvimento Tecnolgico e Inovao do Ministrio da Cincia e Tecnologia (Setec/MCT) e possui cinco sub-redes temticas, a saber: a) matria-prima;
b) estabilidade, armazenamento e problemas associados; c) produo;
894
d) caracterizao e controle de qualidade; e e) coprodutos. Cada sub-rede

representada por uma coordenao tcnica indicada pelo MCT, composta por pesquisadores de universidades, institutos e centros de pesquisa,
os quais constituem o Comit Tcnico Cientfico da Rede. A RBTB tem
como objetivos principais: a) a consolidao de um sistema gerencial de articulao dos diversos atores envolvidos na pesquisa, no desenvolvimento
e na produo de biodiesel, permitindo assim a convergncia de esforos e
otimizao de investimentos pblicos e b) a identificao e eliminao de
gargalos tecnolgicos que venham a surgir durante a evoluo do PNPB, o
que ser feito por meio de constante pesquisa e desenvolvimento tecnolgico realizados no mbito de parcerias entre instituies de P&D e o setor
produtivo. Os temas em desenvolvimento na RBTB so (ibidem; Menezes;
Neto; Ramos, 2010):
Matria-prima: sistemas de produo e obteno de matrias-primas
graxas de origem animal e vegetal; zoneamento pedoclimtico; variedades vegetais oleaginosas, leos de gorduras residuais (OGRs), micro-organismos e algas; economia e modelagem de sistemas; colheita,
ps-colheita, processamento e transformao;
Estabilidade, armazenamento e problemas associados: estudos de estabilidade, formas de armazenamento do biodiesel e das misturas biodiesel/diesel; propriedades de fluxo; avaliao e desenvolvimento de
aditivos; vida til; avaliao das condies ideais de condicionamento;
Caracterizao e controle de qualidade: caracterizao das matrias-primas, do biodiesel puro e de misturas biodiesel/diesel, assim como
o desenvolvimento de mtodos para anlise e controle de qualidade,
materiais de referncias, visando a maior praticidade e economicidade;
Produo: estudo, desenvolvimento e otimizao de tecnologias para a
produo de biodiesel em escala laboratorial, piloto e comercial. Adequao do processo de produo de biodiesel s produes locais de
matria-prima, de forma a garantir qualidade e economicidade dos
processos;
Coprodutos: estudos quanto ao destino e uso dos coprodutos, resduos e rejeitos dos processos de obteno de matria-prima, extrao
de leo e produo de biodiesel, para que sejam garantidas a agregao de
valor e a sustentabilidade da cadeia.
895
Vale ressaltar que todos os temas contemplam a estruturao de laboratrios e formao de recursos humanos relevantes para o atendimento s
demandas do mercado de biodiesel quanto ao suporte tcnico produo,
controle de qualidade do biocombustvel produzido e mo-de-obra especializada cuja produo dever ocorrer em plantas instaladas de forma dispersa no territrio nacional. Portanto, as aes da RBTB integram diversos
atores envolvidos na cadeia produtiva do biodiesel no pas (RBTB, 2011).
Unir toda a comunidade cientfica brasileira e as vrias instituies de
pesquisa que se dedicam ao estudo da cadeia produtiva do biodiesel , tambm, misso da RBTB. Neste sentido, desde 2006, a RBTB realiza anualmente o Congresso da Rede Brasileira de Tecnologia de Biodiesel e tem
como patrocinadores a Associao Brasileira das Instituies de Pesquisa
Tecnolgica (Abipti) e o Ministrio da Cincia e Tecnologia (MCT). A
partir de 2010, o Congresso da Rede Brasileira de Tecnologia de Biodiesel e
o Congresso Brasileiro de Plantas Oleaginosas, leos, Gorduras e Biodiesel uniram-se e se firmaram como o principal evento cientfico brasileiro
ligado cadeia produtiva do biodiesel. Nestes eventos so abordados e divulgados trabalhos cientficos nas cinco reas temticas que sustentam a
Rede. Pesquisadores, empresrios e gestores do setor, estudantes e tcnicos
dos setores pblico e privado, atuantes em entidades e empresas envolvidas
com pesquisa, desenvolvimento e inovao, renem-se para debater temas
relevantes de toda a cadeia produtiva do biodiesel.
J em sua 4 Edio, o Congresso da Rede realizado em outubro de 2010,
em Belo Horizonte, superou as expectativas dos organizadores, quando foram selecionados 928 artigos cientficos, quase o dobro do ano anterior.
Cerca de 1.200 participantes estiveram presentes durante os quatro dias de
palestras, mesas-redondas e apresentaes de psteres. Dentre as temticas
da RBTB, a matria-prima respondeu por 47% dos trabalhos tcnicos apresentados, visto que a produo de oleaginosas alternativas soja, em larga
escala e a preo competitivo, continua sendo um grande gargalo tecnolgico
para o mercado do biodiesel (RBTB, 2011; Paffrath; Dullius, 2010).
Diante dos desafios impostos, visando consolidao do PNPB e de outros programas de produo de bioenergia, cada vez maior a necessidade
de profissionais capacitados atuando neste setor, que conheam toda a cadeia produtiva e proporcionem o desenvolvimento sustentvel desses programas de gerao de energia renovvel. Especializaes e cursos profissio-
896
nalizantes voltados ao setor, no entanto, ainda so poucos se comparados

atual demanda do pas (Duarte, 2010; Rodrigues, 2011).
De acordo com o Ministrio da Educao (MEC), atualmente, h 17
cursos na rea de biocombustveis e de bioenergia (Tabela 25.1) trs
so cursos tcnicos e profissionalizantes (nvel mdio), sete so cursos de
graduao tecnolgica (nvel superior) e sete so cursos de especializao,
MBA ou mestrado (nvel ps-graduao). A maioria dos cursos ofertados
est nos estados de So Paulo, Paran e Bahia. Com a pouca oferta de cursos
de nvel superior, os profissionais de reas correlatas acabam buscando formao mais especfica em cursos de especializao, MBA, mestrado e at
doutorado (Tabela 25.1) (MEC, 2011; Capes, 2011; Sistec, 2011).
O Catlogo Nacional de Cursos Tcnicos do MEC, em seu Eixo Tecnolgico de Produo Industrial, estabelece que
o Tcnico em Biocombustveis atua no processamento de biocombustveis slidos, lquidos e gasosos, supervisionando desde a aquisio e beneficiamento da
matria-prima at sua comercializao e distribuio. Executa o processamento
de leos vegetais, transformando-os em biocombustveis lquidos. Atua na
produo de biocombustveis slidos a partir da utilizao de produtos oriundos de florestas energticas. Processa resduos agropecurios, objetivando sua
transformao em biocombustveis gasosos. Em sua atuao, auxilia o controle
de qualidade da produo. Promove e incentiva a organizao do associativismo na cadeia de produo de biocombustveis. (Sistec, 2011)
O Curso Superior de Tecnologia em Biocombustveis visa formar

tecnlogos que se enquadrem na rea de Produo Industrial do Catlogo
Nacional dos Cursos Superiores de Tecnologia que
compreende tecnologias relacionadas aos processos de transformao de matria-prima, substncias puras ou compostas, integrantes de linha de produo
especficas. As atribuies do profissional abrangem planejamento, instalao,
operao, controle e gerenciamento dessas tecnologias no ambiente industrial.
Contempla, tambm, a programao e controle de produo, operao de processo, gesto da qualidade, controle de insumos, mtodos e rotinas. A principal
caracterstica desse eixo a associao de competncias da produo industrial
quelas relacionadas ao objeto da produo, na perspectiva de qualidade e pro-
897
Tabela 25.1 Cursos na rea de biocombustveis e bioenergia

LOCAL
NOME DO CURSO
INSTITUIO DE ENSINO
NVEL TCNICO
Z Doca (MA)
Porto Seguro (BA)
Pelotas (RS)
Tcnico em biocombustveis *
Instituto Federal de Educao,

Cincia e Tecnologia do Maranho
(IFMA)

Cincia e Tecnologia da Bahia
(IFBA)
Conjunto Agrotcnico Visconde

de Graa da Universidade
Federal de Pelotas (CAVG-Ufpel)
NVEL SUPERIOR
Lenis Paulista (SP) Tecnolgico em bioenergia *
Faculdade Orgenes Lessa (Facol)
Jaguariava (PR)
Tecnolgico em bioenergia **
Faculdade Jaguariava (Fajar)
Palotina (PR)
Tecnolgico em
biocombustveis *
Universidade Federal do Paran

(UFPR)
Tecnolgico em
biocombustveis **

Cincia e Tecnologia de So Paulo
(IFSP)
Tecnolgico em
biocombustveis **
Faculdade de Tecnologia de So
Paulo (Fatec)
Mato (SP)
Araatuba,
Jaboticabal e
Piracicaba (SP)
NVEL PS-GRADUAO LATO SENSU

Botucatu (SP)
Morrinhos (GO)
Mato (SP)
Especializao em gesto
da cadeia produtiva de
biocombustveis, com nfase
em biodiesel
Faculdade de Cincias
Agronmicas da Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita
Filho (FCA - Unesp)
Especializao em biodiesel

Cincia e Tecnologia Goiano (IF
Goiano)
Especializao em biodiesel

Cincia e Tecnologia de So Paulo
(IFSP)
MBA em engenharia de
Universidade Paulista (Unip)
petrleo, gs e biocombustveis
Fortaleza (CE)
NVEL PS-GRADUAO STRICTO SENSU

Salvador (BA)
So Paulo, Campinas
e Piracicaba (SP)
Cidades Paranaenses
Mestrado profissional em
bioenergia ***
Faculdade de Tecnologia e Cincias

(Rede FTC)
Mestrado em agroenergia ***
Escola de Economia de So Paulo

da Fundao Getlio Vargas (EESP
FGV)
Mestrado em bioenergia ***
UEL, UEM, UEPG, Unicentro,

Unioeste, UFPR, UTFPR, Tecpar,
Iapar, Embrapa Soja e PTI
* Cursos Reconhecidos pelo MEC, ** Cursos Autorizados pelo MEC, *** Cursos Aprovados pela Capes.
898
dutividade, tica e meio ambiente, viabilidade tcnico-cientfica, alm do permanente aprimoramento tecnolgico. (Antoniosi; Menezes, 2010)
Especificamente, segundo o Catlogo Nacional dos Cursos Superiores

de Tecnologia do MEC,
o Tecnlogo em Biocombustveis atua na cadeia de produo, comercializao e
uso de biocombustveis slidos, lquidos e gasosos, planejando, dirigindo, monitorando, gerenciando e controlando matrias-primas, produtos, coprodutos,
processos e fatores de produo utilizados nessa cadeia produtiva. A promoo
da sustentabilidade, em seu conceito amplo, da conservao ambiental e da incluso social devem ser princpios orientadores da atuao desse profissional de
nvel superior. (Sistec, 2011)
Com salrios atrativos e a crescente demanda do mercado por profissionais especializados, no vai tardar para que os cursos na rea se multipliquem pelo pas afora nos prximos anos. Essa nova gerao de especialistas
poder abrir caminhos para um setor mais competitivo e sustentvel.
Introduo
A matriz energtica brasileira agregou nos ltimos anos mais um componente de grande peso, os biocombustveis. Estes constituem uma alternativa vivel aos combustveis derivados do petrleo, podendo participar de
maneira significativa no suprimento de energia no futuro. A participao
dos biocombustveis na matriz energtica depende de um complexo arranjo
de fatores envolvendo os aspectos de produo (matria-prima e tecnologia)
e da sustentabilidade (social, econmica e ambiental) dessa fonte de energia. O biodiesel, combustvel sucedneo do diesel mineral, obtido a partir
de leos/gorduras, traz consigo vrias vantagens enquanto pretenso substituto do diesel. Suas caractersticas fsico-qumicas so bastante similares,
sobretudo no que diz respeito aos parmetros de injeo e combustibilidade. A grande diversidade edafoclimtica brasileira possibilita encontrar
uma gama de oleaginosas com grande potencial para produo de biodiesel,
dispersas em todo o territrio nacional (Sebrae, s. d.).
899
A qualidade do biodiesel est diretamente relacionada com sua sustentabilidade econmica e ambiental. Desde o incio do PNPB, a qualidade do
biodiesel sempre esteve ligada ao desempenho dos motores, principalmente
em decorrncia da comparao ambiental e econmica entre veculos movidos com esse combustvel e os movidos com combustveis tradicionais.
Em futuro prximo, a qualidade do biodiesel desempenhar um papel decisivo na possibilidade de converso do biodiesel em commodity no mercado
internacional (Bonomi, 2010).
A estrutura regulatria existente hoje no Brasil d sustentao produo
e comercializao do biodiesel, visto como uma commodity, em um mercado globalizado. Trs entidades federais fazem parte desta estrutura. So elas:
Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis (ANP),
implantada pelo Decreto n.2.455, de 14 de janeiro de 1998. o rgo regulador das atividades que integram a indstria do petrleo, gs natural e
biocombustveis no Brasil, sendo, dessa forma, responsvel pela definio
das especificaes dos biocombustveis e pelo controle da sua qualidade,
em todas as etapas da cadeia de produo e comercializao (ANP, 2011).
Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial
(Inmetro), criado pela Lei n.5.966, de 11 de dezembro de 1973 que tem
como atribuio no campo metrolgico a formulao, coordenao e superviso da poltica nacional de metrologia, normatizao e qualidade industrial, sendo, dessa forma, responsvel pelos padres metrolgicos do pas
(Inmetro, 2011).
Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT), fundada em 1940,
que o rgo responsvel pela normatizao tcnica no pas, fornecendo a
base necessria ao desenvolvimento tecnolgico. A ABNT responsvel
pela emisso de normas tcnicas atualizadas e sintonizadas com a tecnologia e com as especificaes e regulamentos vigentes e constituda por
Organismos de Normalizao Setorial e Comits Brasileiros, denominados genericamente de Comits Tcnicos. Fazendo parte do Organismo de
Normalizao Setorial (ONS-34 Petrleo), est a Comisso de Estudo de
Biodiesel (CE-00.001.62), composta por diversos agentes de instituies
pblicas e privadas, atuantes em entidades reguladoras ou em empresas envolvidas em pesquisa, desenvolvimento e inovao (ABNT, 2011b).
A caracterizao e o controle de qualidade dos biocombustveis dependem substancialmente de trs fatores: das especificaes normatizadas
900
(atribuio do rgo regulador: ANP), das normas tcnicas oficiais de anlise (atribuio do rgo de normatizao tcnica: ABNT) e dos materiais
de referncia certificados (atribuio do rgo metrolgico: Inmetro). As
especificaes so um conjunto de caractersticas necessrias para assegurar
que o biocombustvel cumpra sua finalidade. As normas tcnicas oficiais
so os instrumentos e procedimentos necessrios para avaliao das especificaes normatizadas do biocombustvel. Os materiais de referncia certificados so dispositivos usados na avaliao, validao e controle analtico
das normas tcnicas oficiais (Bonomi, 2010).
Consoante a uma de suas atribuies, como rgo regulador, a ANP, no
dia 19 de maro de 2008, publicou a Resoluo ANP n.072 que tem como
objetivo regulamentar o biodiesel de origem nacional ou importada, a ser
comercializado em todo o territrio nacional, bem como especificar suas
caractersticas e controle de qualidade (ANP, 2008). Considerando que
as especificaes do biodiesel so normatizadas por organismos nacionais
(ABNT) e internacionais (ASTM e CEN), este captulo tem por objetivo
contribuir para uma ilustrao do estado da arte das normas tcnicas analticas oficiais brasileiras, aplicadas ao biodiesel.
As especificaes para caracterizao e controle

da qualidade do biodiesel
A qualidade de um produto pode ser definida em termos de sua adequabilidade para determinada aplicao. O controle da qualidade realizado por meio de anlises e ensaios apropriados que apresentem boa preciso e reprodutibilidade e de preferncia que sejam os mais simples possvel.
Para garantir a qualidade de um produto, um desempenho satisfatrio na
aplicao a que se destina e a uniformidade de fabricao so estabelecidas
as especificaes. A especificao de um biocombustvel para motores
definida por meio de um conjunto de caractersticas necessrias ao bom
desempenho dos motores. Uma especificao eficiente pode ser definida
como aquela que d um controle adequado da qualidade do produto, sem
2 Revogada pela Resoluo ANP n.14, de 11.5.2012, DOU, 18 maio 2012. Efeitos a partir de
18.5.2012.
901
ser demasiadamente restrita e que ao mesmo tempo envolva um mnimo de

esforo para ser avaliada (Bonomi, 2010).
A ANP, bem como todos os organismos reguladores internacionais, no
regulamenta a composio qumica dos combustveis, mas estabelece, por
meio de resolues e regulamentos tcnicos, especificaes que determinam
a qualidade mnima requerida ao uso destes produtos. As especificaes
do biodiesel, cujas propostas so elaboradas por tcnicos especializados,
conhecidos como especialistas em regulao de petrleo e derivados e gs
natural, so estabelecidas a partir de necessidades e discusses, buscando o
consenso entre os agentes ligados cadeia de produo e uso de biodiesel,
bem como o atendimento aos rgos ambientais e aos anseios do consumidor. Estas especificaes so periodicamente revisadas de modo a atender
s novas tecnologias de motores, s exigncias ambientais e, finalmente, s
necessidades de abastecimento de produtos para a sociedade.
Como exemplo do contnuo aprimoramento das especificaes do biodiesel, em maro de 2008, foi realizada a reviso das especificaes brasileiras para caracterizao e controle de qualidade do biodiesel, Resoluo
ANP n.07, sendo regulamentada a excluso de caractersticas de qualidade
inadequadas (por exemplo, temperatura de destilao equivalente a 90% de
volume recuperado), incluso de novas normas tcnicas oficiais (por exemplo, EN ISO 3675, ASTM D6304, NBR 15342), bem como a alterao da
proporo em volume de biodiesel que dever ser adicionado ao leo diesel.
A partir desta Resoluo e da Resoluo CNPE n.06/2009, convencionou-se adotar a expresso BX na qual B significa Biodiesel e X a proporo
do biocombustvel misturado ao leo diesel. Assim, a sigla B2 significa 2%
de biodiesel (B100), derivado de fontes renovveis e 98% de leo diesel e
o B5 equivale a 5% de biodiesel e 95% de leo diesel. Estas misturas esto
aprovadas para uso no territrio brasileiro e devem ser produzidas segundo
as especificaes tcnicas definidas pela ANP. Portanto, a especificao do
biodiesel, alm de assegurar a sua qualidade, um padro de referncia para
o mercado consumidor (ANP, 2008).
O mercado internacional aponta no sentido de uma demanda crescente,
para o biodiesel, estimulada por polticas pblicas, visando modernizao
da matriz energtica mundial, por meio do uso de energias renovveis e ambientalmente amigveis. Atualmente, existem diferenas importantes entre
as especificaes brasileiras e internacionais para os biocombustveis em ge-
902
ral e, em especial, para o biodiesel. Visando comercializao internacional

(importao e exportao) do biodiesel, imprescindvel a harmonizao
das normas tcnicas (White Paper, 2007).
Um potencial obstculo maior eficincia no mercado global de biocombustveis so as diferenas e s vezes conflitos entre as normas que
regem suas composies e propriedades. Para esclarecer a situao atual e
identificar potenciais barreiras maior compatibilizao, os governos do
Brasil e dos Estados Unidos e a Comisso Europeia criaram uma fora-tarefa de especialistas das organizaes de normatizao para comparar
especificaes crticas em padres usados internacionalmente para biodiesel, tais como contedo, caractersticas fsicas e nveis de contaminao que
determinam sua qualidade.
O White Paper on Internationally Compatible Biofuels Standards, documento fruto do processo de avaliao de harmonizao tripartite, identificou que as principais especificaes para biodiesel presentes nas regulamentaes podem ser classificadas em trs categorias: (A) semelhantes
(e podem ser consideradas compatveis); (B) diferentes, mas podem ser
harmonizadas no curto prazo; (C) incompatveis tais como se apresentam.
A Tabela 25.2 classifica as diferenas encontradas nas especificaes do
biodiesel combustvel. O relatrio lista seis especificaes como compatveis e sugere que muitas das diferenas restantes podem ser solucionadas
por meio da mistura de diversos tipos de biodiesel, para criar um produto
final que satisfaa as diferentes normas regionais, relativas qualidade do
combustvel e a emisses. Os especialistas tambm concluram que os conjuntos de normas tcnicas desenvolvidas pela Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT), pela ASTM Internacional e pelo Comit Europeu
de Normalizao (CEN) vm sendo amplamente utilizadas pelos pases no
comrcio de biocombustveis, e as especificaes nelas contidas possuem
significativa base comum e, portanto, representam poucos obstculos ao
comrcio de biocombustveis (White Paper, 2007).
A Tabela 25.3 compara as especificaes (caractersticas, limites e normas tcnicas) para caracterizao e controle de qualidade de comercializao do biodiesel, adotadas no Brasil pela Resoluo ANP n.07 (ANP, 2008).
Esta normativa substituta da Resoluo ANP n.42, de 24 nov. 2004, e
equivalente EN 14214 (CEN, 2008) na Comunidade Europeia, e ASTM
D6751 (ASTM, 2011) nos Estados Unidos. A mistura leo diesel/biodie-
903
Tabela 25.2 Classificao das diversas especificaes do biodiesel

CATEGORIA A
(semelhantes)
Cinzas SULFATADAS
CATEGORIA B
(diferentes)
Teor de glicerol total
Teor de metais alcalinos e Teor de fsforo

metais alcalinos terrosos
CATEGORIA C
(incompatveis)
Teor de enxofre
Ponto de entupimento de filtro
a frio
Teor de glicerol livre
Resduo de carbono
Nmero de cetano
Corrosividade ao cobre
Teor de ster
Estabilidade Oxidao
Teor de metanol ou etanol
Temperatura de destilao
Mono, di- e triacilglicerdios
ndice de acidez
Ponto de fulgor
Densidade
Contaminao total
Viscosidade cinemtica
gua e sedimentos
ndice de iodo
Teor de cido linolnico
steres metlicos poliinsaturados
sel tem sua especificao estabelecida pela Resoluo ANP n.42, de 17 de

dezembro de 2009, retificada em 14 de janeiro de 2010 (ANP, 2009). Entre
as caractersticas institudas nas normas tcnicas, encontram-se as que so
provenientes da normatizao do diesel mineral e as que foram originadas
de anlises dos leos vegetais, comumente utilizados na indstria oleoqumica. Caractersticas como viscosidade cinemtica, ponto de fulgor e cinzas
sulfatadas, embora tenham origem na normatizao do diesel mineral, fornecem resultados bastante esclarecedores quanto qualidade do biodiesel,
conforme ser abordado a seguir.
Por fim, os especialistas concluram o documento reconhecendo que
muitas das variaes em especificaes podem ser explicadas pelos diferentes procedimentos e mtodos de medio. No sentido de corrigir tais desvios
trs importantes institutos de metrologia o Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial do Brasil (Inmetro), o Instituto
Nacional de Normas e Tecnologia dos EUA (Nist), e o Instituto para Materiais de Referncia e Medidas da Comisso Europeia (IRMM) vm colaborando no desenvolvimento de procedimentos comuns de medio para
o biodiesel, como complemento ao trabalho das organizaes de normatizao. Os esforos iniciais concentraram-se na criao de materiais de referncia certificados para avaliao, validao e controle analtico das normas
tcnicas oficiais em comum (White Paper, 2007; Stradiotto et al., 2010).
EN 14107
EN 10370
ASTM D6584
ASTM D130
ASTM D4951
Glicerol Total
Corrosividade ao
Cobre
Teor de Fsforo
Resduo de Carbono
ASTM D4530
em 100% da amostra
EN 2160
EN 14105
EN 14105
EN 14106
EN 14104
EN 14110
ASTM D6584
Teor de Metanol ou
Etanol
EN 14538
Glicerol Livre
Metais do Grupo II
(Ca + Mg)
EN 14110
EN 14538
EN 14108
EN 14109
EN 14538
% massa
ppm
ppm
% massa
Unidade
EN 14105
ASTM
D6584
% massa
% massa
NBR 15553
ASTM
D4530
ASTM
D4951
EN 14107
% massa
mg/kg
NBR 14359 ASTM D130 EN 2160 classificao
NBR 15344
NBR 15341
EN 14105
EN 14106
ASTM
D6584
NBR 14448 ASTM D664 EN 14104 mg KOH/g
NBR 15343
NBR 15553
NBR 15556
NBR 15553
NBR 15554
NBR 15555
NBR 15556
EN 14108
EN 14109
EN 14538
ASTM D664
Metais do Grupo I
(Na + K)
NBR 6294 ASTM D874 ISO 3987
ISO 3987
ndice de Acidez
ASTM D874
Brasil
(Resoluo ANP 07)
Mtodo de Ensaio
EUA
UE
(ASTM D6751) (EN 14214)
Cinzas Sulfatadas
Caractersticas
Tabela 25.3 Especificaes de caracterizao e controle de qualidade do biodiesel

Limites
0,050 mx.
10 mx.
Classe 3
0,240 mx.
0,020 mx.
0,50 mx.
0,20 mx.
5,0 mx.
5,0 mx.
0,020 mx.
4,0 mx.
Classe 1
0,250 mx.
0,020 mx.
0,50 mx.
0,20 mx.
5,0 mx.
5,0 mx.
0,020 mx.
Continua
0,050 mx.
10 mx.
Classe 1
0,250 mx.
0,020 mx.
0,50 mx.
0,20 mx.
5,0 mx.
5,0 mx.
0,020 mx.
EUA
EU
Brasil
(ASTM D6751) (EN 14214) (Res. ANP 07)
904
ASTM D5453
Estabilidade
Oxidao, 110C
Teor de
Monoacilglicerol
Teor de
Diacilglicerol
Teor de
Triacilglicerol
Enxofre Total
ASTM D2709
gua e Sedimentos
Teor de gua
ASTM D93
NBR 15432
NBR 15344
EN 20846
EN 20884
NBR 15342
NBR 15344
NBR 15342
NBR 15344
EN 14105
EN 14105
EN 14105
EN 15751
EN 14112
EN 12937
ASTM
D5453
ASTM
D6584
ASTM
D6584
ASTM
D6584
EN 20846
EN 20884
EN 14105
EN 14105
EN 14105
EN 14112
EN 12937
EN 12662
EN 3679
EN 14103
ASTM
D6304
NBR 14598 ASTM D93
EN 2719
EN 3679
EN 12662
NBR 15342
EN 14103
Brasil
(Resoluo ANP 07)
Mtodo de Ensaio
EUA
UE
(ASTM D6751) (EN 14214)
Contaminao Total
Ponto de Fulgor
Teor de ster
Caractersticas
mg/kg
% massa
% massa
% massa
horas
mg/kg
% volume
mg/kg
% massa
Unidade
15 (Grau S15)
mx.
500 (Grau 500)
mx.
3,0 mn.
0,050 mx.
93 mn.
10 mx.
0,20 mx.
0,20 mx.
0,80 mx.
6,0 mn.
500 mx.
24 mx.
101 mn.
96,5 mn.
Continua
50 mx.
Anotar
Anotar
Anotar
6,0 mn.
500 mx.
24 mx.
100 mn.
96,5 mn.
EUA
EU
Brasil
(ASTM D6751) (EN 14214) (Res. ANP 07)
Limites
905
ASTM D613
Linoleato de Metila
ster Metlicos
Polinsaturados
( 4 duplas ligaes)
Nmero de Cetano
Densidade a 20C
ndice de Iodo
ASTM D445
Viscosidade
Cinemtica
Densidade a 15C
ASTM D6371
EN 14111
EN 5165
EN 15779
EN 14103
EN 3675
EN 12185
EN 3104
ASTM
D6371
EN 116
% massa
% massa
kg/m3
kg/m3
mm2/s
Unidade
EN 14111 g iodo/100 g
ASTM D613
ASTM
EN 5165
D6890
EN 3675
EN 12185
ASTM
D1298
ASTM
D4052
NBR 7148
NBR 14065
NBR 10441 ASTM D445 EN 3104
NBR14747
Brasil
(Resoluo ANP 07)
Mtodo de Ensaio
EUA
UE
(ASTM D6751) (EN 14214)
Ponto de
Entupimento de
Filtro a Frio
Caractersticas
47,0 mn.
1,9 - 6,0
120
51,0 mn.
1 mx.
12,0 mx.
860 - 900
3,5 - 5,0
Anotar
Anotar
850 900
3,0 - 6,0
19 mx.
EUA
EU
Brasil
(ASTM D6751) (EN 14214) (Res. ANP 07)
Limites
906
907
Os Materiais de Referncia Certificados (MRC)

para biodiesel
Para garantir a qualidade, competitividade e o fortalecimento do biodiesel como uma commodity no mercado internacional, necessrio que as
medies analticas das caractersticas de qualidade deste biocombustvel
apresentem rastreabilidade e confiabilidade, obtidas por meio da utilizao
de materiais de referncia certificados (MRC), que so rastreados de acordo com referncias nacionais e internacionais, e que so utilizados na validao e controle da qualidade de mtodos e na calibrao de instrumentos
analticos (Stradiotto et al., 2010).
O MRC um
material de referncia, acompanhado por um certificado, com um ou mais valores de propriedade, certificado por um procedimento que estabelece sua rastreabilidade obteno exata da unidade na qual os valores da propriedade so
expressos, com cada valor certificado acompanhado por uma incerteza para um
nvel de confiana estabelecido. (Inmetro, 2011)
Os MRC possuem a mais alta qualidade metrolgica e so preparados e

utilizados visando a trs funes principais:
a) ajudar no desenvolvimento de mtodos e anlises mais exatos (mtodos de referncia),
b) calibrar sistemas de medies usados para melhorias nas trocas de bens,
estabelecimento de controle da qualidade, determinao das caractersticas de desempenho ou medio de propriedades e
c) assegurar a adequao e a integridade dos programas de controle de
qualidade em medies de longo prazo.
O Inmetro vem desenvolvendo MRC que podem ser utilizados por
vrios laboratrios do pas que atuam em diferentes reas. Na rea de biocombustvel, o Inmetro, por meio da parceria com o National Institute
of Standards & Technology (Nist) dos Estados Unidos, desenvolveu dois
MRC para anlise de biodiesel, um constitudo somente de biodiesel de
soja (SRM 2772) e outro de um blend de biodiesel de gordura animal/soja
(SRM 2773), conforme definido no White Paper on Internationally Compatible Biofuels Standards e elaborado pelo Grupo de Trabalho Tripartite
Brasil, Estados Unidos e Unio Europeia (ANP, 2009).
908
O MRC de biodiesel blend de gordura animal/soja foi preparado a partir

de uma mistura composta por aproximadamente 85% de gordura animal
e 15% de leo de soja enquanto o MRC de biodiesel de soja foi produzido
com leo de soja puro (Gonalves et al, 2009). A Tabela 25.4 apresenta os
valores certificados com as respectivas incertezas expandidas dos MRC de
biodiesel blend de gordura animal/soja e de soja. A Tabela 25.4 destaca os
valores certificados, determinados com elevados nveis de confiana e exatido, alcanados por meio do uso de equipamentos calibrados, mtodos
primrios de medio e padres; os valores de referncias, valores que no
atendem a todos os critrios do Nist para certificao de materiais de referncia e com valores de incerteza que podem no incluir todas as fontes; e
os valores de informao, valores com menor confiana metrolgica, nem
sequer so acompanhados dos valores de incerteza, mas foram colocados no
certificado, pois so de interesse dos usurios dos MRCs.
Os materiais de biodiesel base de soja e de origem animal foram obtidos de
produtores comerciais e armazenados, sob atmosfera de argnio, em ampolas
de 10ml e seladas com chama. As caractersticas fsico-qumicas certificadas
pelo Inmetro e pela Nist so: nove (SRM 2772 C14:0, C16:0, C16:1, C18:0,
C18:1 n-9, C18:1 n-7, C18:2, C18:3 e C20:0) e treze (SRM 2773 C12:0,
C14:0, C15:0, C16:0, C16:1, C18:0, C18:1 n-9, C18:1 n-7, C18:2, C18:3,
C20:0, C20:4 e C22:0) steres metlicos de cidos graxos, gua, enxofre (SRM
2773), densidade a 20C e viscosidade cinemtica a 20, 30 e 40C (ibidem).
As caractersticas fsico-qumicas, trs (SRM 2772 C15:0, C17:0 e C22:0)
e cinco (SRM 2773 C10:0, C18:1, C19:0, C21:0 e C23:0) steres metlicos
de cidos graxos, ndice de acidez, diolena e diolinolena, glicerina livre, metanol, monoolena, monolinolena e monolinolenina, monopalmitina, poder
calorfico, estabilidade oxidao e triolena foram estudadas e expressas
como valores de referncia pelo Inmetro e pela Nist. As demais caractersticas
foram somente expressas como valores informativos. So elas: constituintes
elementares (cobre, ferro, fsforo, sdio, potssio, clcio e magnsio), glicerina total, etanol, monoglicerdeos, diglicerdeos e triglicerdeos (ibidem).
O desenvolvimento de um MRC envolve estudos de caracterizao, homogeneidade, estabilidade de curta durao (simulao das condies de transporte) e estabilidade de longa durao (simulao do perodo de estocagem)
realizados de acordo com as diretrizes propostas na ISO Guide 35. O processo
de caracterizao prov os valores das propriedades que sero quantificadas,
o estudo de homogeneidade indica se todo o lote avaliado possui propriedades
(4,0843 0,0057)
mm2/s
mm2/s
mm /s
mg/kg
Viscosidade Cinemtica a 20C
Enxofre Total
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
C17:0
C18:0
C18:1, n-9
C18:1, n-7
g/kg
C15:0
C16:1, n-7
g/kg
C14:0
C16:0
g/kg
g/kg
C10:0
C12:0
(5,0532 0,0069)
g/cm3
Densidade a 20C
(0,046 0,002)
Biodiesel Blend de
Gordura Animal/
Soja (SRM 2773)
(14,3 1,5)
(233 6)
(43,0 2,7)
(1,32 0,18)
(107 2)
(0,755 0,089)
(6,4310 0,0098)
(19,4 0,7)
(343 8)
(87,8 4,2)
(23,3 0,9)
(184 6)
(0,305 0,013)
(9,20 0,45)
(0,470 0,017)
(7,39 0,39)
(4,428 0,009)
(5,543 0,010)
(7,147 0,021)
(0,88132 0,00006) (0,87628 0,00010)
(0,018 0,002)
% massa
Teor de gua
Biodiesel de Soja
(SRM 2772)
Unidade
Caractersticas
Valores certificados *
(1,03 0,02)
(0,104 0,012)
Biodiesel de
Soja
(SRM 2772)
Valores de informao
(0,20 0,03)
(7,39 0,39)
Continua
Biodiesel Blend Biodiesel Biodiesel Blend

de Gordura
de Soja
de Gordura
Animal/Soja
(SRM
Animal/Soja
(SRM 2773)
2772)
(SRM 2773)
Valores de referncias *
Tabela 25.4 Caractersticas e valores certificados, valores de referncia e valores de informao para os MRCs de biodiesel blend de gordura animal/soja
(SRM 2773) e de soja (SRM 2772)
909
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
Glicerina Livre
Monopalmitina
Tripalmitina
Monolena, Monolinolena e
Monolinolenina
Diolena e Diolinolena
Triolena
Metanol
g/kg
g/kg
C22:0
C23:0
g/kg
g/kg
g/kg
C20:0
C20:4, n-6
g/kg
C21:0
g/kg
C19:0
Unidade
C18:3, n-3
Caractersticas
(3,66 0,52)
(78,2 2)
Biodiesel de Soja
(SRM 2772)
(1,66 0,06)
(2,53 0,09)
(2,28 0,12)
(25,0 1,0)
Biodiesel Blend de
Gordura Animal/
Soja (SRM 2773)
(587 44)
(241 17)
(707 31)
(1994 98)
(29,7 2,3)
(164 16)
(3,7 1,1)
Biodiesel de
Soja
(SRM 2772)
Valores de informao
(401 34)
(495 38)
(1030 23)
(2668 14)
(91,2 3,4)
(141 3)
(12,1 0,6)
(0,13 0,01)
(0,077 0,008)
(0,42 0,05)
Continua

de Gordura
de Soja
de Gordura
Animal/Soja
(SRM
Animal/Soja
(SRM 2773)
2772)
(SRM 2773)
910
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
g/kg
Cobre
Ferro
Fsforo
Magnsio
Potssio
Sdio
Etanol
Glicerina Total
Monoglicerdeos
Diglicerdeos
Triglicerdeos
* Incerteza expandida (k=2, nvel de confiana de 95%)
g/kg
Clcio
J/g
horas
Poder Calorfico
Biodiesel de Soja
(SRM 2772)
Unidade
Biodiesel Blend de
Gordura Animal/
Soja (SRM 2773)
Estabilidade a Oxidao
Caractersticas
(4,41 0,27)
(39602 13)
Biodiesel de
Soja
(SRM 2772)
Valores de informao
(4,46 0,04)
(39660 17)
1230
1960
3620
1520
< 0,2
0,07
< 0,1
< 0,2
< 0,4
< 0,2
< 0,2
0,5
1350
2970
4110
1660
<5
0,9
< 0,1
0,05
< 0,4
< 0,2
< 0,2
0,1

de Gordura
de Soja
de Gordura
Animal/Soja
(SRM
Animal/Soja
(SRM 2773)
2772)
(SRM 2773)
911
912
fsico-qumicas uniformes e o estudo de estabilidade refere-se capacidade

do MRC em manter o valor de uma determinada propriedade dentro de limites especificados por um perodo de tempo preestabelecido (ISO, 2006).
As normas tcnicas brasileiras de especificao

do biodiesel
As Normas Tcnicas so documentos estabelecidos por consenso e
aprovados por um organismo reconhecido, que fornece, para uso comum
e repetitivo, regras, diretrizes ou caractersticas para atividades ou seus resultados, visando obteno de um grau timo de ordenao em um dado
contexto. So documentos emitidos por organismos reconhecidos, nacional
ou internacionalmente, e em geral surgem da necessidade de padronizao ou de uniformizao de procedimentos e aes por parte de diferentes
agentes ligados ao mercado. No Brasil, o organismo oficial para emisso de
normas tcnicas a Associao Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT). A
ABNT a nica e exclusiva representante no Brasil das seguintes entidades
internacionais: International Organization for Standardization (ISO) e International Electrotechnical Commission (IEC). Tambm o das entidades
de normatizao regionais: Comisso Pan-americana de Normas Tcnicas
(Copant) e Associao Mercosul de Normalizao (AMN) (ANP, 2011b).
A ABNT foi escolhida para secretariar o Comit de Normalizao da ISO
sobre biocombustveis (White Paper, 2007).
Com relao s normas tcnicas para o biodiesel, a Comisso de Estudos
da ABNT, denominada CE-00.001.62 Comisso de Estudo de Biodiesel,
composta por diversos agentes de instituies pblicas e privadas atuantes
em entidades reguladoras ou em empresas envolvidas em pesquisa, desenvolvimento e inovao, vem realizando um processo de reviso das normas
antigas e desenvolvendo novas normas (ABNT, 2011a).
Atualmente, a normatizao nacional do biodiesel resume-se a 25 normas
tcnicas analticas brasileiras, das quais 12 foram desenvolvidas no Brasil e
13 foram baseadas em normas internacionais pela CE Biodiesel da ABNT.
A Tabela 25.5 apresenta o quadro geral das normas brasileiras em vigor para
biodiesel. Alm das normas nacionais, conforme pode ser visualizado na Tabela 25.3, tambm so amplamente utilizadas normas norte-americanas emitidas pela American Society for Testing and Materials (ASTM) e europeias
emitidas pelo Comit Europen de Normalisation (CEN) (ABNT, 2011c).
30.4.2008
24.7.2006
10.10.2007
17.1.2008
30.5.2006
ABNT NBR 7148 *
ABNT NBR 10441
ABNT NBR 11346
ABNT NBR 14065
Publicao
ABNT NBR 6294
Cdigo
Escopo
Referncia
Determinao da
massa especfica e da
densidade relativa pelo
densmetro digital
Continua
Esta Norma estabelece o ensaio para determinao da massa especfica

e da densidade relativa de destilados de petrleo e leos viscosos, que
podem ser manuseados normalmente como lquidos a temperaturas de
Qualidade
ensaio. Sua aplicao limita-se a lquidos com presso de vapor abaixo
de 80 kPa e viscosidade abaixo de 15 000 mm/s, aproximadamente,
temperatura de ensaio.
Esta Norma descreve o mtodo para a determinao do ponto de

Determinao do ponnvoa de produtos de petrleo e biodiesel que sejam transparentes em Qualidade
to de nvoa
camadas de 40 mm de espessura e com ponto de nvoa inferior a 49C.
Esta Norma descreve um procedimento especfico para a determinao da viscosidade cinemtica, , de produtos lquidos de petrDeterminao da vis- leo, tanto transparentes quanto opacos, pela medio do tempo de
cosidade cinemtica e escoamento de um determinado volume de lquido que flui sob a ao
Qualidade
clculo da viscosidade da fora de gravidade, atravs de um viscosmetro capilar de vidro
calibrado. A viscosidade dinmica, , pode ser obtida pela multiplidinmica
cao da viscosidade cinemtica medida pela massa especfica, , do
lquido, determinada na mesma temperatura.
Esta Norma estabelece o ensaio para a determinao em laboratrio

Determinao da masda massa especfica, densidade relativa e API de petrleo, de seus
sa especfica, densidaderivados ou misturas destes com produtos no derivados de petrleo Qualidade
de relativa e API que sejam normalmente lquidos e tenham uma presso de vapor Reid
Mtodo do densmetro
menor ou igual 101,325 kPa (14,696 psi).
Esta Norma prescreve o mtodo para determinao da cinza sulfatada

em leos lubrificantes novos contendo aditivos e de concentrados de
Determinao de cinza aditivos empregados na formulao de leos lubrificantes. Estes aditiQualidade
sulfatada
vos usualmente contm um ou mais dos seguintes metais: brio, clcio,
magnsio, zinco, sdio e estanho. Enxofre, fsforo e cloro tambm
podem estar presentes em forma combinada com outros elementos.
Ttulo
Tabela 25.5 Normas tcnicas analticas brasileiras em vigor aplicadas ao biodiesel
913
30.5.2005
6.4.2009
12.4.2007
25.3.2008
30.04.2006
ABNT NBR 14448
ABNT NBR 14598
ABNT NBR 14747
ABNT NBR 15341 *
Publicao
ABNT NBR 14359
Cdigo

Escopo
Referncia
Determinao de glicerina livre em biodiesel

de mamona por cromatografia em fase gasosa
Continua
Esta Norma estabelece o mtodo para determinao de glicerina

livre em biodiesel por cromatografia em fase gasosa com detector por
Qualidade
ionizao de chama. Esta norma aplicvel ao biodiesel metlico ou
etlico, proveniente da mamona.
Determinao do pon- Esta Norma descreve o mtodo para determinao da temperatura do

to de entupimento de ponto de entupimento de filtro a frio de leo diesel, incluindo aqueles Qualidade
filtro a frio
contendo aditivos, utilizando o aparelho manual ou o automatizado.
Determinao do ponEsta Norma prescreve o mtodo de determinao do ponto de fulgor

to de fulgor pelo apade produtos de petrleo pelo aparelho de vaso fechado Pensky-Mar- Qualidade
relho de vaso fechado
tens, manual ou automatizado, na faixa de 40C a 360C.
Pensky-Martens
Esta Norma descreve os procedimentos para a determinao dos

constituintes cidos em produtos de petrleo, leos lubrificantes e
fluidos hidrulicos solveis ou parcialmente solveis em misturas
Determinao do nde tolueno e isopropanol. aplicvel determinao de cidos cujas
mero de acidez pelo
constantes de dissociao em gua sejam maiores do que 10-9; cidos Qualidade
mtodo de titulao
extremamente fracos cujas constantes de dissociao sejam menores
potenciomtrica
do que 10-9 no so detectados. Os sais reagem se suas constantes de
hidrlise forem maiores do que 10-9. A preciso foi obtida com nmero
de acidez de (0,1 a 150) mg/g KOH.
Esta Norma estabelece o mtodo para determinao da corrosividade

ao cobre em gasolina de aviao, combustvel para turbina de aviao,
Determinao da corgasolina automotiva, gasolina natural, querosene, leo diesel, leo
rosividade - Mtodo
Qualidade
combustvel destilado, leos lubrificantes, solventes de limpeza (Stoda lmina de cobre
ddard) ou outros hidrocarbonetos cuja presso de vapor seja menor
do que 124 kPa a 37,8C.
Ttulo
914
18.6.2009
6.9.2009
17.09.2010
3.4.2008
14.2.2009
ABNT NBR 15343 *
ABNT NBR 15344 *
ABNT NBR 15512 *
ABNT NBR 15553 *
Publicao
ABNT NBR 15342 *
Cdigo

Escopo
Referncia
Esta Norma estabelece o mtodo para determinao de glicerina total

por volumetria em biodiesel, para teores superiores a 0,100 % m/m.
Qualidade
No caso de biodiesel de mamona, esta Norma estabelece tambm o
mtodo para determinao do teor de triacilglicerdeos.
Determinao dos teores de clcio, magnsio,

sdio, fsforo e potssio por espectrometria
de emisso tica com
plasma indutivamente
acoplado (ICP-OES)
Continua
Esta Norma especifica um mtodo de espectrometria de emisso tica

com plasma indutivamente acoplado (ICPOES) para deteco dos
teores de clcio, magnsio, sdio e fsforo iguais ou superiores a 1 mg/
kg e de potssio igual ou superior a 2 mg/kg nos steres metlicos/
Qualidade
etlicos de cidos graxos, denominados doravante como biodiesel. Esta
Norma visa avaliar a qualidade do biodiesel, em termos dos teores de
clcio, magnsio, sdio, fsforo e potssio, cuja presena acima de certas
concentraes pode alterar a sua utilizao como combustvel. Estes
Armazenamento,
transporte, abasteciEsta Norma estabelece os requisitos e procedimentos para o armamento e controle de
zenamento, transporte, abastecimento e controle de qualidade de Armazenamento
qualidade de biodiebiodiesel e/ou mistura leo diesel/biodiesel.
sel e/ou mistura leo
diesel/biodiesel
Determinao de glicerina total e do teor

de triacilglicerdeos
em biodiesel
Determinao da conEsta Norma estabelece o mtodo para determinao da concentrao

centrao de metanol
de metanol e/ou etanol em biodiesel por cromatografia em fase gasosa Qualidade
e/ou etanol por cromacom detector por ionizao de chama.
tografia gasosa
Determinao de monoglicerdeos e diglice- Esta Norma estabelece o mtodo para determinao de monoglicerrdeos em biodiesel de deos e diglicerdeos em biodiesel de mamona por cromatografia gasosa Qualidade
mamona por cromato- com detector por ionizao de chama.
grafia gasosa
Ttulo
915
14.2.2008
14.2.2008
14.2.2008
ABNT NBR 15555
ABNT NBR 15556
Publicao
ABNT NBR 15554
Cdigo

Escopo
Esta Norma visa avaliar a qualidade do biodiesel, em termos dos

teores de sdio, potssio, magnsio e clcio, cuja presena acima de
certas concentraes pode afetar a sua utilizao como combustvel.
Estes elementos podem advir do processo de obteno do biodiesel
e/ou de eventuais contaminaes. Usualmente, clcio e magnsio so Qualidade
oriundos da gua de lavagem e sdio e potssio do catalisador. Esta
Norma descreve o mtodo para deteco dos teores de sdio, potssio,
magnsio e clcio, para concentraes iguais ou superiores a 0,1 mg/
kg, 0,5 mg/kg, 0,1 mg/kg e 1,0 mg/kg, respectivamente.
Determinao do teor
de sdio, potssio,
magnsio e clcio por
espectrometria de absoro atmica
Continua
Esta Norma visa avaliar a qualidade do biodiesel, em termos do teor de

potssio, cuja presena acima de certa concentrao pode afetar a sua
utilizao como combustvel. Este elemento pode advir do processo
Qualidade
de produo do biodiesel e/ou de eventuais contaminaes. Esta
Norma descreve um mtodo para deteco do teor de potssio, para
concentraes iguais ou superiores a 0,50 mg/kg.
Determinao do teor
de potssio por espectrometria de absoro
atmica
Referncia
Esta Norma visa avaliar a qualidade do biodiesel, em termos do teor

de sdio, cuja presena acima de certa concentrao pode afetar a sua
utilizao como combustvel. Este elemento pode advir do processo
Qualidade
de produo do biodiesel e/ou de eventuais contaminaes. Esta
Norma descreve um mtodo para deteco do teor de sdio, para
concentraes iguais ou superiores a 0,1 mg/kg.
elementos podem advir do processo de obteno do biodiesel e/ou

de eventuais contaminaes. Usualmente, clcio e magnsio so
oriundos da gua de lavagem, sdio e potssio do catalisador e fsforo
de fosfolipdios.
Determinao do teor
de sdio por espectrometria de absoro
atmica
Ttulo
916
17.4.2008
23.11.2009
3.12.2009
17.9.2010
5.2.2011
ABNT NBR 15764 *
ABNT NBR 15771 *
ABNT NBR 15867 *
ABNT NBR 15908 *
Publicao
ABNT NBR 15568 *
Cdigo

Escopo
Referncia
Esta Norma estabelece o mtodo para determinao quantitativa

dos teores de glicerina livre, monoglicerdeos, diglicerdeos, triacilglicerdeos e glicerina total por cromatografia gasosa em amostras de
Qualidade
biodiesel proveniente de qualquer matria-prima, incluindo coco,
palma e gordura animal. Porm, esta Norma no se aplica ao biodiesel
proveniente de leo de mamona.
Determinao da glicerina livre, monoglicerdeos, diglicerdeos,

triacilglicerdeos e glicerina total por cromatografia gasosa
Continua
Esta Norma especifica um mtodo de espectrometria de emisso tica

com plasma indutivamente acoplado (ICPOES) para deteco do teor
de enxofre igual ou superior a 1 mg/kg nos steres metlicos/ etlicos
de cidos graxos, denominados doravante biodiesel. Esta norma visa
Qualidade
avaliar a qualidade do biodiesel, em termos do teor de enxofre, cuja
presena acima de certas concentraes pode afetar a sua utilizao
como combustvel. Este elemento pode advir do processo de obteno
do biodiesel e/ou eventuais contaminaes.
Determinao do teor
de enxofre por espectrometria de emisso
tica com plasma indutivamente acoplado
(ICPOES)
Determinao de gliEsta Norma prescreve o mtodo para a determinao de glicerina livre

cerina livre - Mtodo
Qualidade
em biodiesel, por volumetria.
volumtrico
Determinao do teor Esta Norma estabelece o mtodo para determinao da concentrao

total de steres por cro- total de steres em biodiesel por cromatografia gasosa e padronizao Qualidade
matografia gasosa
externa.
Determinao do teor
de biodiesel em leo Esta Norma estabelece as condies para determinao do teor de
diesel por espectros- biodiesel - metlico e/ou etlico - na faixa de 0,5% (v/v) a 30,0% (v/v), Qualidade
copia na regio do in- em leo diesel por espectroscopia na regio do infravermelho mdio.
fravermelho mdio
Ttulo
917
Escopo
Referncia
Esta Norma estabelece o mtodo para determinao da contaminao

total de biodiesel, por substncias no dissolvidas. Esta Norma pode
Determinao de con- ser aplicada para teores de contaminao de 6 mg/kg at 30 mg/kg.
Qualidade
taminao total
A presena de substncias no dissolvidas em um sistema de combustvel pode acarretar o entupimento prematuro dos filtros e/ou falha
no equipamento sendo pois indesejvel.
Consulta
Pblica
Consulta
Pblica
ABNT NBR 14318
pr NBR 34:007.02-005
* Normas Tcnicas Analticas Brasileiras Desenvolvidas pela CE Biodiesel da ABNT.
Esta Norma prescreve o mtodo para determinao quantitativa do

resduo de carbono deixado aps evaporao e pirlise de um leo, e
utilizada para indicar a tendncia formao de coque. Este mtodo
Determinao do resgeralmente aplicado a produtos de petrleo relativamente no volteis,
duo de carbono RamsQualidade
os quais se decompem parcialmente durante a destilao presso
bottom
atmosfrica, e est limitado a amostras que escoam abaixo de 90C.
Este mtodo de ensaio tambm utilizado na determinao do resduo
de carbono nos 10 % (v/v) residuais da destilao.
Esta Norma especifica o procedimento para a medio concomitante

da viscosidade dinmica, , e da massa especfica, , de produtos de
petrleo lquidos e leos crus, tanto transparentes como opacos. A
viscosidade cinemtica, , pode ser obtida pela diviso da viscosidade
dinmica, , pela massa especfica, , obtida mesma temperatura do Qualidade
ensaio. O resultado obtido a partir deste mtodo de ensaio depende do
comportamento da amostra e destina-se aplicao em lquidos para os
quais, primeiramente, a taxa de tenso de cisalhamento e a taxa de cisalhamento sejam proporcionais (comportamento de fluxo newtoniano).
19.10.2011
Ttulo
ABNT NBR 15983
Publicao
Determinao da viscosidade dinmica e
massa especf ica de
lquidos por meio de
viscosmetro Stabinger
(e o clculo de viscosidade cinemtica)
Cdigo
918
919
As normas tcnicas possuem uma aplicabilidade fortemente ligada

tecnologia vigente e ao contexto das regulamentaes. Dessa forma, os organismos de normatizao constituem comisses tcnicas que procuram
manter o conjunto de normas o mais atualizado e sintonizado possvel, com
a tecnologia com as especificaes e regulamentaes nacionais vigentes.
Normas tcnicas analticas desenvolvidas no Brasil

para avaliao da qualidade do biodiesel
Para garantir a qualidade do biodiesel necessrio estabelecer padres
de qualidade, objetivando fixar teores limites dos contaminantes que no
venham a prejudicar a qualidade das emisses da queima, bem como o desempenho, a integridade do motor e a segurana no transporte e manuseio.
Devem ser monitoradas tambm possveis degradaes do produto durante
o processo de estocagem (Quintella et al., 2009).
A ustria foi o primeiro pas a definir e aprovar os padres de qualidade
para biodiesel, aplicados a steres metlicos de colza. Subsequentemente,
padres de qualidade foram sendo estabelecidos em outros pases (Sharma;
Singh; Upadhyay, 2008). Atualmente o padro de qualidade americano,
elaborado pela ASTM, por meio da norma ASTM D6751, o estabelecido
pelo CEN na Unio Europeia por meio da norma EN 14214 e o estabelecido pela ANP no Brasil pela Resoluo ANP n.07 figuram como os mais
conhecidos e so geralmente usados como referncia ou base para outros
padres (Lbo; Ferreira; Da Cruz, 2009).
A qualidade do biodiesel pode sofrer variaes de acordo com as estruturas moleculares dos seus steres constituintes ou devido presena de
contaminantes oriundos da matria-prima, do processo de produo ou
formados durante a estocagem. As estruturas moleculares dos steres podem variar tanto no tamanho da cadeia carbnica quanto na quantidade e
posio de insaturaes ou mesmo devido presena de substituintes na cadeia, a exemplo da hidroxila ligada cadeia carbnica do ster alqulico derivado do cido ricinolico proveniente da mamona. Contaminantes procedentes da matria-prima, a exemplo do fsforo, enxofre, clcio e magnsio,
tambm podem ser encontrados no biodiesel. Dependendo da eficincia
do processo de produo do biodiesel, podem estar presentes em maior ou
920
menor quantidade: glicerina livre, glicerdeos no reagidos, sabes, lcool residual, resduos de catalisadores e gua. A absoro de umidade e os
processos de degradao oxidativa durante o armazenamento do biodiesel
contribuem para a presena de gua, perxidos e cidos carboxlicos de baixa massa molecular (Monteiro et al, 2008). Os resultados analticos aplicados na avaliao da qualidade do biodiesel podem fornecer informaes
importantes a respeito da seleo da matria-prima, do processo de fabricao e do armazenamento, bem como do desempenho do biodiesel como
combustvel e da qualidade das suas emisses (Quintella et al., 2009; Lbo;
Ferreira; Da Cruz, 2009; Monteiro et al, 2008).
Quintella et al. (2009), Lbo, Ferreira e Da Cruz (2009) e Monteiro et
al. (2008) classificaram os mtodos analticos para avaliao da qualidade
do biodiesel em quatro grupos, conforme as informaes que podem proporcionar, sendo estes: mtodos analticos para determinao de contaminantes provenientes da matria-prima; mtodos analticos para avaliao
do processo produtivo; mtodos analticos para avaliao das propriedades
inerentes s estruturas moleculares; mtodos analticos para monitoramento da qualidade do biodiesel durante o processo de estocagem. Esta classificao ser utilizada neste texto aplicando-a as normas tcnicas analticas
brasileiras.
Normas tcnicas analticas desenvolvidas no Brasil para

determinao de contaminantes provenientes
da matria-prima
Algumas caractersticas de qualidade do biodiesel esto relacionadas
com contaminantes provenientes da matria-prima. Dentre elas esto o
teor de fsforo e enxofre, o teor de clcio e magnsio e a corrosividade ao
cobre.
Teor de fsforo e enxofre

O contedo de fsforo no biodiesel proveniente dos fosfolipdios
encontrados tanto nos leos vegetais quanto na gordura animal. Antes do
processo de produo do biodiesel, o leo ou gordura dever passar por um
921
pr-tratamento denominado degomagem, para remoo de grande parte

dos fosfolipdios. Neste procedimento so removidas tambm outras impurezas como ceras, substncias coloidais e ons metlicos, por meio da
lavagem do leo aquecido com gua. A transesterificao de leo vegetais
brutos, ou seja, sem o tratamento prvio de degomagem, resultar na reduo do rendimento da reao, bem como na produo de um biodiesel
com alto teor de fsforo. Como consequncia, as emisses contero grande
quantidade de materiais particulados que podero influenciar na operao
de conversores catalticos automotivos (Meher; Sagar; Naik, 2006).
O fsforo determinado no biodiesel via espectroscopia de emisso atmica com plasma indutivamente acoplado (ICP-OES), cujos comprimentos de onda indicados so 213,6 nm ou 178,3 nm para o fsforo, podendo
ser utilizados outros comprimentos de onda aps avaliao tcnica do laboratrio. A regulamentao brasileira recomenda o mtodo analtico NBR
15553, desenvolvido em 2009, e estabelece o valor mximo de 10 mg.kg-1 de
fsforo no biodiesel. A amostra deve ser diluda com xileno ou querosene,
para permitir a introduo adequada do aerossol no plasma. As solues
de calibrao so preparadas a partir de um composto orgnico de clcio,
magnsio, sdio, fsforo e potssio, dissolvido em leo mineral e diludo
numa mistura de xileno e leo-base. A adio do leo-base tem como objetivo reduzir as diferenas de viscosidade entre as amostras e as solues de
calibrao. As solues so introduzidas em forma de aerossol em um plasma de argnio indutivamente acoplado e os teores de fsforo so determinados por comparao entre a emisso do elemento presente na soluo da
amostra e a emisso das solues de calibrao no respectivo comprimento
de onda (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Assim como o fsforo, o enxofre tambm um tpico veneno de catalisadores e, portanto, afeta os conversores catalticos. A presena de enxofre
no diesel mineral tambm est associada emisso de material particulado,
danos sade e corroso de partes do motor, atribuda aos cidos sulfrico
e sulfnico formados durante a oxidao do combustvel (Braun; Appel;
Schmal, 2003). O biodiesel possui quantidades muito baixas de enxofre e
excelente lubricidade, portanto pode atuar como aditivo para correo da
lubricidade do diesel mineral. A regulamentao brasileira estabelece o valor mximo de enxofre no biodiesel em 50 mg.kg-1, no havendo nenhuma
NBR como referncia para sua determinao (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
922
Alternativamente, a NBR 15867, norma tcnica desenvolvida recentemente pela Comisso de Estudo de Biodiesel, pode ser aplicada na determinao do teor de enxofre em biodiesel por espectrometria de emisso tica
com plasma indutivamente acoplado (Icpoes). A amostra para anlise pode
ser preparada da mesma forma que a NBR 15553, qual seja, a amostra pode
ser diluda em xileno ou querosene com baixo teor de enxofre para permitir
a introduo adequada do aerossol no plasma. As solues para a construo da curva analtica so preparadas a partir de um composto orgnico de
enxofre, dissolvido em leo e diludo numa mistura de xileno em leo-base.
A adio do leo-base tem como objetivo reduzir as diferenas de viscosidade entre as amostras e as solues da curva analtica. As solues so
introduzidas em forma de aerossol em um plasma de argnio indutivamente acoplado e o teor de enxofre determinado por comparao entre a emisso do elemento presente na soluo da amostra e a emisso das solues
da curva analtica no respectivo comprimento de onda. O comprimento de
onda recomendado de 180,7 nm.
Teor de clcio e magnsio

A presena de clcio e magnsio no biodiesel oriunda da matria-prima; todavia seus teores podem ser aumentados durante o processo
de purificao. A gua de lavagem deve ser tratada antes de ser usada no
processo de purificao. A presena de gua no biodiesel hidrolisa os steres produzindo cidos graxos e lcool. Os cidos graxos, na presena dos
ons sdio, potssio, clcio e/ou magnsio, reagiro de modo a formar sal
de cido graxo (sabo) e gua. Os sabes formados implicam em formao de depsitos, entupimento em filtros e sistema de injeo prejudicando
o desempenho do motor (Santos et al., 2007). No Brasil, o valor mximo
regulamentado para a soma das concentraes de clcio e magnsio de
5 mg.kg-1. As normas tcnicas analticas brasileiras indicadas para essas
duas caractersticas de qualidade so a NBR 15553 e NBR 15556, por meio
das quais os metais so determinados por espectrometria de emisso tica
com plasma indutivamente acoplado (ICP-OES) ou espectrometria de absoro atmica, cujos comprimentos de onda indicados so 317,933 nm,
396,847 nm, 393,366 nm ou 422,673 nm para o clcio e 279,553 nm
ou 285,213 nm para o magnsio. Outros comprimentos de onda podem ser
923
utilizados desde que estejam livres das interferncias. De acordo com ambas as normas tcnicas, a amostra deve ser diluda com xileno ou querosene,
para permitir a introduo adequada do aerossol no plasma.
As solues de calibrao so preparadas a partir de um composto orgnico de clcio e magnsio, dissolvido em leo mineral e diludo numa mistura de xileno e leo-base. A adio do leo-base tem como objetivo reduzir as
diferenas de viscosidade entre as amostras e as solues de calibrao. As
solues so introduzidas em forma de aerossol em um plasma de argnio
indutivamente acoplado e os teores de clcio e magnsio so determinadas
por comparao entre a emisso do elemento presente na soluo da amostra
e a emisso das solues de calibrao no respectivo comprimento de onda.
O xileno pode ser substitudo por cicloexano nos laboratrios que no estejam autorizados a usar solventes aromticos (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Corrosividade ao cobre
O ensaio de corrosividade ao cobre um parmetro estabelecido para determinar a potencial capacidade do biodiesel em causar corroso em partes
metlicas, que podem ser do motor ou do tanque de armazenamento. Est
propriedade est associada presena de cidos ou de compostos de enxofre.
A necessidade deste parmetro tem sido discutida, visto que j existe um
mtodo para determinao de acidez e no biodiesel o teor de enxofre muito baixo. Neste ensaio de corrosividade, uma lmina de cobre previamente
polida imersa em um volume de biodiesel e mantida aquecida a 50C,
durante um de perodo trs horas. No final deste perodo, a lmina de cobre
removida, lavada e comparada com os padres ASTM de corroso de lmina de cobre que representam diferentes graus de corroso, aos quais so
atribudos classes de 1 a 5. No Brasil, a norma indicada a NBR 14359, e o
valor mximo aceitvel grau 1 de corroso (ANP, 2008; ABNT, 2011c).

para avaliao do processo produtivo
com avaliaes inerentes eficincia do processo produtivo. Dentre elas
924
esto o aspecto, as cinzas sulfatadas, a contaminao total, o resduo de carbono, o ponto de fulgor, o teor de sdio e potssio, o teor de glicerina livre
e total, mono-, di- e triacilglicerdeos, o teor de steres o teor de metanol e
etanol.
Aspecto
O aspecto do biodiesel um parmetro considerado apenas na regulamentao brasileira, no havendo nenhuma norma tcnica como referncia para sua avaliao (ANP, 2008). Atualmente, a Comisso de Estudo de
Biodiesel, na reunio de abril de 2011, criou um Grupo de Trabalho para
elaborao de texto-base sobre o tema Aparncia para Biodiesel. Trata-se
de uma anlise preliminar, na qual se procura verificar a presena de impurezas que possam ser identificadas visualmente com anotao da temperatura do ensaio, como materiais em suspenso, sedimentos ou mesmo
turvao na amostra de biodiesel, que podem ser decorrentes da presena
de gua. Na ausncia destes contaminantes, o biodiesel classificado como
lmpido e isento de impurezas. O aspecto do biodiesel pode estar tambm
relacionado com caractersticas moleculares do biodiesel, bem como com o
processo de degradao durante a estocagem.
Cinzas sulfatadas
A concentrao de contaminantes inorgnicos no biodiesel pode ser avaliada com base no teor de cinzas sulfatadas. O mtodo baseia-se na queima
da amostra na presena de cido sulfrico, a fim de converter as impurezas
metlicas em seus sulfatos correspondentes, reduzindo a perda de material
por volatilizao. Os xidos de sdio e de potssio, por exemplo, so mais
volteis que os seus sulfatos. Aplica-se este mtodo para determinao de
catalisador residual em biodiesel (Na e K), porm outros elementos podem
estar presentes, como o caso do fsforo que proveniente do leo no
degomado. A presena de catalisador residual no biodiesel pode provocar
danos, por abraso, s peas do motor (Mittelbach, 1996). Neste ensaio, a
amostra inflamada e queimada at que permaneam somente a cinza e
o carbono. Aps o resfriamento, o resduo tratado com cido sulfrico e
aquecido a 775C at que a oxidao do carbono seja completada. A cinza
925
ento resfriada, novamente tratada com cido sulfrico e mantida a 775C

at massa constante. O teor mximo de cinzas sulfatadas em biodiesel regulamentado no Brasil de 0,020% em massa, sendo a norma tcnica de
avaliao a NBR 6294 (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Contaminao total
A massa dos resduos insolveis retidos na filtrao do biodiesel utilizada no clculo do valor do parmetro denominado contaminao total.
A presena de substncias no dissolvidas em um sistema de combustvel
pode acarretar o entupimento prematuro dos filtros e/ou falha no equipamento sendo, pois, indesejvel. A resoluo normativa brasileira adotou
esse parmetro, porm no prev nenhuma NBR para avaliao desta caracterstica. Atualmente, a Comisso de Estudo de Biodiesel est avaliando
o Projeto NBR 34:007.02-005 sobre o tema Determinao de Contaminao Total. Esta Norma estabelece o mtodo para determinao da contaminao total de biodiesel por substncias no dissolvidas. No ensaio, uma
alquota de 400 mL 12 mL pesada e filtrada sob vcuo por meio de um
filtro previamente tarado. O filtro com o resduo lavado, seco e pesado. A
contaminao calculada pela diferena em massa do filtro (inicial e final)
e expressa em relao massa da alquota em miligrama por quilograma
(mg/kg). A legislao adotou o limite mximo de 24 mg/kg para os resduos retidos (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Resduo de carbono
A tendncia de formao de depsitos nas cmaras de combusto pode
ser avaliada por meio da determinao dos resduos de carbono. Alm dos
sabes e dos glicerdeos residuais, contribuem para os valores de resduo de
carbono a gua livre, os cidos graxos livres, os resduos de catalisadores
e as substncias insaponificveis oriundas da matria-prima. Este mtodo
consiste em medir a massa de uma pequena quantidade de amostra (0,15 a
1,5 g) transferindo-a quantitativamente para frascos pequenos (3,0 mL),
mdios (5,0 mL) ou grandes (15 mL). Coloca-se a amostra num frasco de
vidro aquecendo a 500C sob atmosfera de gs inerte (N2) e controla-se por
um perodo de tempo e temperatura programvel, definido em segundos,
926
minutos ou horas. A amostra sofre uma reao de aquecimento que provoca

o surgimento de substncias volteis. Estas so carregadas, e um percentual
da amostra original residual considerado resduo de carbono. Em resumo,
a amostra evaporada e queimada e o resduo final pesado.
Alternativamente, a Comisso de Estudo de Combustveis e Produtos
Especiais desenvolveu a ABNT NBR 14318, norma tcnica em consulta
pblica que prescreve o mtodo para determinao quantitativa do resduo de carbono deixado aps evaporao e pirlise de um leo, e utilizada
para indicar a tendncia formao de coque. A regulamentao no prev
atualmente nenhuma NBR para avaliao desta caracterstica e estabelece
como limite mximo 0,050% em massa (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Ponto de fulgor
O ponto de fulgor definido como a menor temperatura na qual o produto se vaporiza em quantidades suficientes para formar com o ar uma
mistura capaz de inflamar-se momentaneamente quando se aplica uma
centelha sobre a mesma. Para o biodiesel, os valores de ponto de fulgor so
consideravelmente mais elevados que os valores encontrados para o diesel
mineral. Para o biodiesel puro o valor do ponto de fulgor encontra-se prximo aos 170C, porm mnimas quantidades de lcool adicionadas ao
biodiesel ocasionam um decrscimo bastante significativo neste valor. Este
comportamento torna o ponto de fulgor um parmetro muito importante quanto segurana no armazenamento e no transporte, principalmente
quando a transesterificao foi realizada com metanol que, alm de altamente inflamvel, apresenta elevada toxidez. Durante a execuo do ensaio, uma amostra aquecida lenta e constantemente sob agitao contnua, na cuba de ensaio de bronze ou lato com tampa, ambas de dimenses
especificadas, e uma fonte de ignio direcionada ao interior da cuba, a
intervalos regulares com a interrupo simultnea da agitao at que ocorra o lampejo dos vapores, sendo esse fenmeno considerado o ponto de fulgor. Quanto aos valores de ponto de fulgor permitidos para o biodiesel, a
regulamentao brasileira a mais tolerante, fixando um valor mnimo de
100C. Esta determinao baseada na norma tcnica NBR 14598 (ANP,
2008; ABNT, 2011c).
927
Teor de sdio e potssio

A presena de sdio e potssio no biodiesel oriunda do processo de
produo utilizando catlise bsica homognea (Santos et al., 2007). O valor mximo regulamentado, no Brasil, para a soma das concentraes de
sdio e potssio de 5 mg.kg-1. A norma tcnica analtica brasileira indicada
para essas duas caractersticas de qualidade a NBR 15553 via espectrometria de emisso tica com plasma indutivamente acoplado (ICP-OES). A
determinao de sdio e potssio em biodiesel tambm est prevista por espectrometria de absoro atmica (AA), segundo as normas tcnicas NBR
15554, NBR 15555 ou NBR 15556. Tanto por ICP-OES ou AA, os comprimentos de onda indicados so 588,995 nm ou 589,592 nm para o sdio e
766,490 nm ou 769,897 nm para o potssio. Outros comprimentos de onda
podem ser utilizados desde que estejam livres das interferncias. Em todas
as NBR, a amostra deve ser diluda com xileno ou querosene, para permitir
a introduo adequada do aerossol no plasma. As solues de calibrao
so preparadas a partir de um composto orgnico de sdio e potssio, dissolvido em leo mineral e diludo numa mistura de xileno e leo-base. A
adio do leo-base tem como objetivo reduzir as diferenas de viscosidade
entre as amostras e as solues de calibrao. As solues so introduzidas
em forma de aerossol em um plasma de argnio indutivamente acoplado
e os teores de sdio e potssio so determinadas por comparao entre a
emisso do elemento presente na soluo da amostra e a emisso das solues de calibrao no respectivo comprimento de onda. O xileno pode ser
substitudo por cicloexano nos laboratrios que no estejam autorizados a
usar solventes aromticos (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Glicerina livre e total, mono-, di- e triacilglicerdeos

A glicerina um coproduto da reao de transesterificao de leos e
gorduras. A determinao da glicerina residual serve como parmetro para
avaliar a eficincia do processo de purificao do biodiesel. Altas concentraes de glicerina no biodiesel provocam problemas de armazenamento,
pois quando o biodiesel misturado com o diesel de petrleo, observa-se a
separao da glicerina nos tanques de estocagem. Problemas como formao de depsitos, entupimento dos bicos injetores do motor e emisses de
928
aldedos tambm esto relacionados com a alta concentrao da glicerina no

biodiesel (Monteiro et al., 2008).
A glicerina livre residual pode ser facilmente eliminada por meio de
lavagens do biodiesel. Embora seja praticamente insolvel no biodiesel, a
glicerina pode ser encontrada dispersa na forma de gotculas. A presena
de sabes residuais pode interferir, aumentando a concentrao de glicerina no biodiesel devido formao de emulses (Sharma; Singh; Upadhyay,
2008). No Brasil, o teor mximo permitido de glicerina livre no biodiesel
de 0,02% em massa. A NBR 15341 usada para avaliar esta caracterstica
quando o biodiesel for oriundo de duas ou mais matrias-primas distintas,
sendo uma delas leo de mamona. Neste ensaio, a amostra analisada por
cromatografia em fase gasosa com detector de ionizao por chama, injetor
tipo on-column, forno com capacidade para realizar programao de temperatura e coluna capilar polar de slica fundida (15 m x 0,25 mm x 0,25 m),
com fase estacionria 50% de cianopropil-fenil e 50% de dimetilpolisiloxano, utilizando-se a tcnica de padronizao interna para quantificao do
teor de glicerina livre presente no biodiesel. O padro interno utilizado o
etilenoglicol (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
A glicerina combinada, que inclui mono-, di- e triacilglicerdeos, proveniente da reao incompleta dos triacilglicerdeos, logo, este um importante parmetro que pode ser utilizado para avaliar a eficincia da converso
de leos e gorduras em biodiesel. A glicerina combinada pode ser calculada
a partir das concentraes de mono-, di- e triacilglicerdeos, aplicando-se
fatores de converses individuais baseados na massa molar mdia dos cidos graxos que participam da composio da matria-prima (Mittelbach,
1996). Dependendo da concentrao em que podem estar presentes no biodiesel, os triacilglicerdeos no reagidos podem aumentar a viscosidade do
combustvel e, consequentemente, reduzir a eficincia da combusto, provocando entupimento do filtro de combustvel e formao de depsitos em
partes do motor como pistes, vlvulas e bicos injetores.
A soma da concentrao da glicerina livre com a glicerina combinada
denominada glicerina total. Quanto ao teor de glicerina total, a norma brasileira estabelece um limite mximo de 0,25 % em massa. Quanto anlise
de glicerina total em biodieseis de misturas de matrias-primas distintas,
dos quais faa parte o leo de mamona, a regulamentao nacional recomenda a NBR 15342, na determinao quantitativa de mono- e diglicer-
929
deos por cromatografia gasosa, e a NBR 15344, na determinao de glicerina total e do teor de triacilglicerdeos por volumetria. De acordo com a
NBR 15342 a amostra analisada por cromatografia gasosa, com detector
de ionizao por chama, injetor tipo on-column, forno com capacidade para
realizar programao de temperatura e coluna capilar apolar de slica fundida (30 m x 0,25 mm x 0,1 m) para alta temperatura, com fase estacionria
95% de dimetilpolisiloxano e 5% de fenil-metilpolisiloxano, utilizando-se o
mtodo de padronizao externa para quantificao de monoglicerdeos e
diglicerdeos presentes no biodiesel provenientes de mamona. A quantificao da monoricinolena realizada por meio da curva analtica utilizando ricinoleato de etila ou metila como padro. A tricaprina usada como
padro para quantificar os outros monoglicerdeos e os diglicerdeos. Os
triacilglicerdeos que possam estar presentes nas amostras de biodiesel de
mamona devem ser determinados de acordo com a ABNT NBR 15344. A
NBR 15344 estabelece o mtodo para determinao de glicerina total, por
volumetria, em biodiesel, para teores superiores a 0,100 % m/m; no caso de
biodiesel de mamona, estabelece tambm o mtodo para determinao do
teor de triacilglicerdeos. De acordo com a NBR 15344 os glicerdeos presentes no biodiesel so saponificados, gerando glicerina. Toda a glicerina
presente reage com o cido peridico. O excesso deste determinado por
iodometria etilenoglicol (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Alternativamente, as NBR 15771 e NBR 15908, desenvolvidas recentemente pela Comisso de Estudo de Biodiesel podem ser aplicadas na determinao quantitativa de glicerina livre e glicerina livre e total em amostras
de biodiesel. A NBR 15771 prescreve o mtodo para a determinao de
glicerina livre em biodiesel, por volumetria. Experimentalmente, a glicerina extrada do biodiesel reage com cido peridico e o excesso do cido
determinado por iodometria, tcnica semelhante NBR 15344. Por outro
lado, a NBR 15908 estabelece o mtodo para determinao quantitativa
dos teores de glicerina livre e total, mono-, di- e triglicerdeos simultaneamente por cromatografia gasosa em amostras de biodiesel proveniente de
qualquer matria-prima, exceto leo de mamona. Neste ensaio, a amostra
injetada em um cromatgrafo a gs com detector de ionizao por chama,
injetor tipo on-column, forno com capacidade para realizar programao de
temperatura e coluna capilar apolar de slica fundida (30 m x 0,25 mm x 0,1
m) para alta temperatura, com fase estacionria 95% de dimetilpolisiloxa-
930
no e 5% de fenil-metilpolisiloxano, aps ser silanizada com o N-metil-N-trimetilsililtrifluoroacetamida (MSTFA).

A identificao dos componentes da amostra realizada por comparao com os tempos de reteno de quatro padres de referncia (glicerina,
monolena, diolena e triolena). A quantificao realizada por meio de
curvas analticas com padronizao interna. Para quantificar a glicerina,
deve ser utilizado o etilenoglicol como padro interno e, para os glicerdeos,
a tricaprina. O teor de glicerina total obtido a partir da soma dos teores de
glicerina livre e glicerina combinada (ABNT, 2011c).
Teor de ster
O teor de ster o principal parmetro de qualidade do biodiesel. Os
steres so o biodiesel propriamente dito, ou seja, enquanto uma gasolina
perfeita seria composta apenas por octano, um biodiesel perfeito seria exclusivamente uma mistura de steres alqulicos de cidos graxos. Portanto,
quanto maior o teor de ster melhor o biodiesel. A alta pureza do biodiesel,
ou seja, a alta quantidade de steres promove uma combusto mais limpa
e eficiente, melhor rendimento do motor, gases de exausto mais limpos e
maior tempo de vida til do motor. Cuidado deve ser tomado com o uso do
biodiesel, em virtude das caractersticas solventes dos steres, com relao
a mangueiras, borrachas, elastmeros, pinturas e demais polmeros, pois o
biodiesel pode dissolv-los. Esse problema proporcionalmente reduzido
quando se utilizam misturas de biodiesel com diesel.
O teor de steres metlicos ou etlicos no biodiesel um parmetro previsto na legislao brasileira, cuja porcentagem mnima exigida de ster de
96,5 % em massa. Na Resoluo ANP n.07, recomendada a NBR 15342,
cujo escopo foi alterado e no contempla mais teor de steres, sendo hoje
aplicvel apenas a determinao de monoglicerdeos e diglicerdeos em biodiesel de mamona, conforme cita a Tabela 25.5 (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Alternativamente, a NBR 15764, norma tcnica desenvolvida recentemente pela Comisso de Estudo de Biodiesel, pode ser aplicada na determinao da concentrao total de steres em biodiesel. De acordo com
a norma, a amostra analisada por cromatografia gasosa com detector de
ionizao por chama, injetor tipo on-column, forno com capacidade para
realizar programao de temperatura e coluna capilar apolar de slica fundi-
931
da (30 m x 0,25 mm x 0,1 m) para alta temperatura, com fase estacionria

95% de dimetilpolisiloxano e 5% de fenil-metilpolisiloxano, utilizando-se
o mtodo de padronizao externa para quantificao dos steres presentes no biodiesel, independentemente do tipo de matria-prima utilizado na
produo.
A quantificao realizada por meio de uma curva analtica feita com
estearato de metila ou etila, exceto no biodiesel de mamona e naqueles em
que h predominncia de steres de cidos graxos com cadeia carbnica
menor que C14, usando clorofrmio como solvente. Para amostras de biodiesel de mamona, alm do esterato de metila ou etila, utiliza-se tambm
um padro com ricinoleato de metila ou etila para a quantificao desse ster na amostra. Para amostras de biodiesel que apresentam steres de cidos graxos com cadeia carbnica menor que C14, majoritariamente, alm do
estearato de metila ou etila, utiliza-se um padro com laurato de metila ou
etila para quantificao desses steres na amostra (ABNT, 2011c).
Metanol e etanol
O teor de lcool no biodiesel pode ser utilizado tambm para avaliar o
processo de purificao do biodiesel, visto que o lcool presente no biodiesel proveniente do processo de produo. Altos teores de lcool reduzem drasticamente o ponto de fulgor (aumenta a periculosidade durante o
armazenamento e transporte), o nmero de cetano, a lubricidade e podem
levar corroso em peas de alumnio e zinco. A concentrao de lcool
determinada pelo mtodo cromatogrfico estabelecido na NBR 15343,
tanto para a determinao de metanol quanto de etanol.
A amostra analisada por cromatografia em fase gasosa com detector
de ionizao por chama, injetor split-splitless, forno com capacidade para
realizar programao de temperatura e coluna capilar apolar de slica fundida (30 m x 0,32 mm x 3 m), com fase estacionria 100% de dimetilpolisiloxano, utilizando-se o mtodo de padronizao interna para quantificao
do teor de metanol e/ou etanol presentes no biodiesel. O padro interno
utilizado o terc-butanol. Na normativa brasileira, estabelecida pela ANP,
tanto o teor de metanol como de etanol fixado em 0,20% em massa, no
entanto, a determinao de lcool dispensada no caso de valores de pontos
de fulgor superiores a 130C (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
932
Normas tcnicas analticas desenvolvidas

no Brasil para avaliao das propriedades inerentes
s estruturas moleculares
Algumas propriedades do biodiesel esto relacionadas com as estruturas
moleculares dos seus steres alqulicos constituintes. Neste contexto, caractersticas analticas foram adotadas visando o controle deste efeito sobre
o desempenho do biodiesel. Dentre estas esto a massa especfica, a viscosidade cinemtica, o ndice de iodo, o nmero de cetano, o ponto de nvoa,
o ponto de entupimento de filtro a frio e o ponto de fluidez.
Massa especfica a 20C

A massa especfica do biodiesel est diretamente ligada estrutura de
suas molculas. Quanto maior o comprimento da cadeia carbnica do ster
alqulico, maior ser a massa especfica, sendo que este valor decresce com o
aumento do nmero de insaturaes presentes na molcula. Biodieseis que
apresentam massa especfica elevada oferecem maior energia ao motor. Entretanto, biodieseis fora das especificaes provocam problemas de entupimento do sistema de injeo dos veculos e formao de depsitos na cmara
de combusto. Comparado com o diesel mineral, o biodiesel apresenta maior
massa especfica. Na Resoluo ANP n.07, as normas tcnicas para anlise
da massa especfica do biodiesel so as mesmas aplicadas aos derivados de
petrleo. A regulamentao nacional estabelece valores de massa especfica
entre 850 e 900 kg.m-3, determinadas atravs da NBR 7148, que utiliza hidrmetros de vidro, e NBR 14065, que emprega equipamentos digitais.
Durante a execuo do ensaio segundo a NBR 7148, a amostra deve
atingir a temperatura ambiente e, a seguir, ser transferida para uma proveta
aproximadamente na mesma temperatura. Mergulha-se o hidrmetro de
vidro adequado na amostra (que dever estar tambm em uma temperatura similar), deixando-o flutuar. Aps alcanar a temperatura de equilbrio,
efetua-se a leitura da escala e anota-se a temperatura da amostra. Faz-se a
correo da massa especfica por meio da tabela para temperatura de referncia (20C). Caso necessrio, a proveta contendo a amostra pode ser
colocada em um banho termosttico, para evitar variaes excessivas de
temperatura durante o ensaio.
933
Na execuo do ensaio segundo a NBR 14065, um pequeno volume de

amostra lquida introduzido em um tubo oscilante em formato de U e
a mudana de frequncia de oscilao causada pela mudana na massa do
tubo determinada, em combinao com dados de calibrao do equipamento para calcular a massa especfica da amostra. A Resoluo ANP n.07
estabelece ainda que o biodiesel produzido tenha um prazo mximo de um
ms, a contar da data de certificao, para ser comercializado. Passado este
prazo, deve ser realizada uma nova anlise da massa especfica, e havendo
diferena inferior a 3,0 kg.m-3 em relao ao valor do certificado, devero
ser novamente ensaiados o teor de gua, o ndice de acidez e a estabilidade
oxidao. Caso a diferena seja superior a 3,0 kg.m-3, devero ser reavaliados todos os parmetros de qualidade estabelecidos na Resoluo ANP
n.07 (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Viscosidade cinemtica a 40C

A viscosidade cinemtica a medida da resistncia do biodiesel ao escoamento. A viscosidade do biodiesel aumenta com o comprimento da cadeia
carbnica e com o grau de saturao e tem influncia no processo de queima
na cmara de combusto do motor. A viscosidade est diretamente ligada
lubricidade, ou seja, quanto maior seu valor, melhor a lubricidade do biodiesel. Entretanto, a alta viscosidade (acima do limite estabelecido pela ANP)
ocasiona heterogeneidade na combusto do biodiesel, perda no rendimento
e na potncia do motor, devido diminuio da eficincia de atomizao
na cmara de combusto, ocasionando a deposio de resduos nas partes
internas do motor. Outra situao importante para que este parmetro seja
avaliado durante a armazenagem, uma vez que a viscosidade aumenta de
forma diretamente proporcional presena de produtos da degradao oxidativa do biodiesel, de sabes residuais e de glicerdeos no reagidos (mono, di- e triacilglicerdeos). Estes contaminantes podem, portanto, ser monitorados indiretamente por meio da determinao da viscosidade cinemtica.
A regulamentao nacional estabelece valores de viscosidade cinemtica
entre 3,0 e 6,0 mm2/s, determinados atravs da NBR 10441. Por meio desta
norma tcnica, determinado o tempo, em segundos, de um volume fixo
de lquido que escoa por gravidade atravs do capilar de um viscosmetro
calibrado, a uma temperatura rigorosamente controlada, neste caso, 40C.
934
A viscosidade cinemtica o produto do tempo de escoamento medido pela

constante de calibrao do viscosmetro. O resultado da viscosidade cinemtica a mdia de duas determinaes aceitveis (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Alternativamente, a ABNT NBR 15983, norma tcnica desenvolvida recentemente pela Comisso de Estudo de leos Lubrificantes e de Biodiesel,
pode ser aplicada simultaneamente para a determinao da viscosidade dinmica e cinemtica e da massa especfica de biodiesel. Na execuo do ensaio,
a amostra introduzida nas clulas de medio que esto a uma temperatura
estritamente controlada e conhecida. As clulas de medio consistem em
um par de cilindros concntricos rotacionais e um tubo em formato de U oscilante. A viscosidade dinmica determinada a partir da velocidade rotacional de equilbrio entre o cilindro interno sob a influncia da tenso de cisalhamento da amostra de ensaio, e um freio de corrente parasita em conjunto
com os dados de ajuste. A massa especfica determinada pela frequncia
de oscilao do tubo em formato de U em conjunto com os dados de ajuste.
A viscosidade cinemtica obtida pela diviso da viscosidade dinmica pela
massa especfica obtida mesma temperatura do ensaio (ABNT, 2011c).
ndice de iodo
O ndice de iodo indica o grau quantitativo de insaturaes no biodiesel e dependente do tipo de matriz utilizada. O nmero de insaturaes
no tem apenas efeito nos valores de densidade e de viscosidade dos biodieseis, mas tambm de grande importncia na estabilidade oxidativa dos
biodieseis como ser exposto adiante. Este mtodo consiste no tratamento
da amostra de biodiesel com iodo em excesso, que reage com as duplas ligaes. O iodo no reagido , ento, titulado com tiossulfato de sdio e o
resultado expresso como gramas de iodo que reagem com as insaturaes
em 100 g de amostra. A regulamentao brasileira no prev atualmente
nenhuma NBR para avaliao desta caracterstica, bem como no estabelece nenhum limite mximo (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Nmero de cetano
O nmero de cetano indicativo do tempo de atraso na ignio de combustveis para motores do ciclo diesel, logo, reflete a qualidade da ignio
do combustvel. Quanto maior o nmero de cetano mais curto ser o tem-
935
po de ignio, de modo que um combustvel que apresenta alto nmero

de cetano inflama com mais facilidade quando injetado dentro do motor
produzindo uma combusto mais eficiente. Em comparao com o diesel, o
biodiesel geralmente apresenta um numero de cetano mais alto. Isso se deve
ao fato de o biodiesel apresentar uma porcentagem maior de oxignio na
sua composio. Quanto mais saturada e longa a cadeia carbnica do ster,
maior o nmero de cetano.
O ensaio para avaliao do nmero de cetano realizado em um motor
de bancada de quatro tempos (Cooperative Fuel Research CRF), com um
nico cilindro e ignio por compresso, projetado para testes de amostras
de combustveis usados em motores diesel, ou pela avaliao usando um
analisador automtico (Ignition Quality Tester IQT) que determina a qualidade da ignio por meio da medio direta do atraso de ignio do biocombustvel alimentado atravs de um bico injetor em uma cmara, com
temperatura e presso controlados automaticamente. No Brasil, a regulao no estabelece um valor mnimo ou mximo para o nmero de cetano
no biodiesel, sendo solicitado somente o registro do valor mensurado. Da
mesma forma, no est prescrita atualmente nenhuma NBR para avaliao
desta caracterstica (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Ponto de nvoa, ponto de entupimento de filtro a frio

e ponto de fluidez
Em regies com baixas temperaturas o biodiesel pode formar cristais e
comprometer desde a operao de carga e descarga, em distribuidoras, at
o prprio bombeamento do tanque de combustvel para os bicos injetores,
ocasionando problemas na partida do motor. A partir deste comportamento, foram elaborados trs ensaios de laboratrio: ponto de nvoa, que a
temperatura do combustvel, em um processo de resfriamento, no qual se
observa a formao dos primeiros cristais; ponto de entupimento de filtro a
frio, que a temperatura em que o combustvel perde a filtrabilidade quando
resfriado; e ponto de fluidez, que a temperatura em que o combustvel perde sua fluidez quando sujeito a resfriamento sob determinadas condies.
Essas informaes so de grande importncia para avaliar a aplicabilidade do combustvel em regies de clima frio. Quanto maior for o tamanho da
cadeia e/ou o carter saturado das molculas do biodiesel, mais altos sero os
936
valores destes parmetros. de se esperar, portanto, que o biodiesel originrio de gordura animal apresente valores mais elevados que o biodiesel proveniente de gordura vegetal, devido ao seu alto teor de cidos graxos saturados.
Na anlise de um mesmo biodiesel, verifica-se que o ponto de nvoa apresentar sempre os valores maiores de temperatura, quando comparado com
ponto de entupimento e ponto de fluidez, podendo, ento, ser considerado
como o mais restritivo. O ponto de fluidez ser ento o menos restritivo.
No Brasil estabelecida somente a determinao do ponto de entupimento de filtro a frio, conforme a norma tcnica NBR 14747, exceto para
biodiesel oriundo apenas de mamona. O valor mximo de 19C estabelecido na regulamentao brasileira aplicvel para as regies Sul, Sudeste,
Centro-Oeste e para o estado da Bahia, devendo ser anotado para as demais
regies. Neste ensaio, uma alquota resfriada sob condies especficas e,
em intervalos de 1C, sugada, presso reduzida controlada, para uma
pipeta atravs de um filtro de malha metlica padronizado. Este procedimento repetido at que a quantidade de cristais de parafina que se separam da soluo seja suficiente para interromper ou reduzir a circulao da
amostra, de modo que o tempo necessrio para preencher a pipeta ultrapasse 60 segundos ou que o lquido deixe de retornar completamente para
o recipiente de ensaio, antes de ser resfriado em mais 1C. A temperatura
indicada na qual a ltima filtrao foi iniciada registrada como o ponto de
entupimento de filtro a frio (ANP, 2008; ABNT, 2011c).

para monitoramento da qualidade do biodiesel durante
o processo de armazenamento
com o processo de armazenamento. Dentre elas esto a estabilidade oxidao a 110C, o teor de gua e o ndice de acidez.
Estabilidade oxidao a 110C

A estabilidade oxidao ou estabilidade oxidativa reflete o tempo
que o biodiesel leva para se degradar formando compostos orgnicos vo-
937
lteis. A estabilidade oxidativa do biodiesel est diretamente relacionada

com o grau de insaturao dos steres alqulicos presentes, como tambm
com as posies das duplas ligaes na cadeia carbnica. A concentrao
de steres alqulicos com alto grau de insaturao varia de acordo com a
matria-prima utilizada na produo do biodiesel. Quanto maior o nmero
de insaturaes (maior ndice de iodo), mais susceptvel est a molcula
degradao tanto trmica quanto oxidativa, formando produtos insolveis
que ocasionam formao de depsitos e entupimento do sistema de injeo
de combustvel do motor.
A alta temperatura e a exposio ao ar so fatores importantes que afetam a estabilidade do biodiesel, sendo esta mais significativamente afetada quando os dois fatores esto presentes ao mesmo tempo. A presena de
gua no biodiesel pode tambm promover a oxidao (oxidao hidroltica), no entanto, em menor extenso. A viscosidade, o ndice de perxido e,
principalmente, o perodo da induo (mtodo Rancimat) so parmetros
que podem ser utilizados para o monitoramento da degradao oxidativa
do biodiesel durante o perodo de estocagem.
No mtodo Rancimat, uma amostra de biodiesel mantida em um vaso
de reao, temperatura de 110C e sob um fluxo de ar. Nesse momento
comeam a se formar os perxidos, que so os principais produtos formados na primeira etapa de oxidao do biodiesel. Com o processo de oxidao continuada, so formados compostos orgnicos volteis, dentre estes,
cidos orgnicos de baixa massa molecular. Estes compostos so transportados pelo fluxo de ar para outro recipiente contendo gua destilada, onde a
presena dos cidos orgnicos ento detectada pelo aumento da condutividade no sistema. O tempo decorrente at a deteco dos cidos orgnicos
denominado de perodo de induo. No Brasil, a regulao atualmente
estabelece um valor mnimo de perodo de induo de 6 horas para estabilidade oxidativa no biodiesel, porm no prescreve nenhuma NBR para
avaliao desta caracterstica (ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Teor de gua
A gua, alm de promover a hidrlise do biodiesel resultando em cidos graxos livres, tambm est associada proliferao de micro-organismos e corroso em tanques de estocagem com deposio de sedimentos.
938
Como o biodiesel apresenta certo grau de higroscopicidade, o simples

contato com a umidade do ar pode elevar consideravelmente o seu teor de
gua, tornando imprescindvel o monitoramento deste parmetro durante
o armazenamento.
O mtodo consiste na determinao do teor de gua em biodiesel por
titulao coulomtrica de Karl Fischer, tcnica mais seletiva e sensvel para
a determinao do teor de gua. A amostra titulada com a soluo de Karl
Fischer at atingir o ponto final indicado pelo eletrodo de platina. O funcionamento da titulao coulomtrica de Karl Fischer baseado na oxidao
de SO2 por iodo na presena de gua e de um solvente (geralmente metanol)
entre outras substncias. O equipamento possui dois eletrodos. O eletrodo
gerador responsvel pela gerao de iodo a partir da oxidao do iodeto
formado pela reao de Karl Fischer. A quantidade de iodo gerada equivalente quantidade de gua presente na amostra; quanto maior a quantidade de gua presente no biodiesel mais iodo gerado. O eletrodo indicador
responsvel por detectar o ponto final da anlise. Por meio da quantidade
de carga eltrica necessria para a gerao de iodo possvel calcular a concentrao de gua. No Brasil, a regulao atualmente estabelece um valor
mximo de 500 mg.kg-1 (ppm) para o teor de gua no biodiesel, porm no
prescreve nenhuma NBR para avaliao desta caracterstica (ANP, 2008;
ABNT, 2011c).
ndice de acidez
A alta acidez do biodiesel pode levar sua degradao mais rpida, e
acelerar a corroso do motor e dos sistemas de injeo. O monitoramento
do ndice de acidez ou nmero de acidez no biodiesel de grande importncia tambm durante a estocagem, na qual a alterao nos valores de acidez
pode significar a presena de gua e/ou degradao oxidativa. No Brasil, a
regulao atualmente estabelece um valor mximo de 0,5 mg KOH/g na
determinao do ndice de acidez no biodiesel. O mtodo utilizado o da
NBR 14448, no qual o ndice de acidez determinado por meio de titulao
potenciomtrica. A amostra dissolvida em uma mistura de tolueno e isopropanol contendo uma pequena quantidade de gua e titulada potenciometricamente com soluo de hidrxido de potssio em isopropanol, usando um eletrodo indicador de vidro e um eletrodo de referncia ou, como
939
alternativa, um eletrodo combinado. As leituras so plotadas manualmente

ou automaticamente contra os respectivos volumes de soluo titulante e os
pontos finais so tomados em inflexes bem definidas na curva resultante
(ANP, 2008; ABNT, 2011c).
Consideraes finais
Apesar da grande evoluo observada at o presente momento nas
normas empregadas na caracterizao e controle de qualidade do biodiesel, continua havendo uma constante demanda por novas especificaes e
regulamentaes, o que requer a manuteno de um conjunto de normas
tcnicas o mais atualizado e sintonizado possvel. Este fato pode ser observado pela atuao ativa do Comit de Estudo de Biodiesel da Associao
Brasileira de Normas Tcnicas.
Algumas normas tcnicas analticas para caracterizao e controle de
qualidade do biodiesel so clssicas e bem estabelecidas para a anlise de
diesel mineral; as demais so as empregadas h muito tempo na determinao da qualidade de leos e gorduras. Cabe ressaltar que diversas caractersticas ainda no esto contempladas com normas tcnicas nacionais, e sim
internacionais. Desta forma, pesquisas tm sido continuamente realizadas,
na busca de novas normas tcnicas, cada vez mais rpidas e, na medida do
possvel, de custo cada vez menor.
Dentro do contexto de desenvolvimento de MRC para biodiesel, possvel observar que so de grande importncia para o Brasil. O uso dos MRC
de biodiesel, quais sejam, blend de gordura animal/soja e biodiesel de soja,
desenvolvidos por meio de um estudo colaborativo entre o Inmetro e Nist,
contribui para a produo de biodiesel de qualidade comprovada, colaborando com a transformao do biodiesel produzido no Brasil em commodity
e possibilitando a liderana do pas nesse segmento. Alm de incrementar
o comrcio do biodiesel, o uso do MRC de biodiesel garantir a rastreabilidade e a qualidade dos resultados nas medies analticas das caractersticas de qualidade do biodiesel, contribuindo para um comrcio mais justo
e confivel. Porm, vale destacar a necessidade de MRC que contemplem
uma maior diversidade de caractersticas fsico-qumicas de biodiesel com
valores certificados.
940
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941
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26
Novos mtodos analticos para avaliao
da qualidade do bioetanol combustvel
Paula G. Fenga, Josiel J. Silva, Marcelo F. de Oliveira,
Adelir A. Saczk, Leonardo L. Okumura,
Andr L. dos Santos, Regina M. Takeuchi,
Maria Valnice B. Zanoni, Nelson R. Stradiotto
A utilizao de bicombustveis, principalmente em veculos motorizados, constitui atualmente uma alternativa de grande viabilidade em diversas matrizes energticas de vrios pases. Desta forma, o bioetanol, etanol
derivado da biomassa, destaca-se pela possibilidade de ser utilizado como
combustvel propriamente dito (hidratado) e tambm como aditivo antidetonante (anidro) na gasolina. A avaliao da qualidade do bioetanol reveste-se de enorme importncia, tanto para os processos de produo quanto
para os mercados consumidores. Os parmetros que definem a qualidade
deste biocombustvel so especificados por meio de regulamentos tcnicos
elaborados pelas agncias reguladoras nacionais e internacionais. Alm disso, estas agncias tambm estabelecem os mtodos que devem ser utilizados
para verificar estes parmetros. As evolues das especificaes decorrem
de vrios fatores, como a performance dos motores, a capacidade tcnica de
produo e anlise e a preservao do meio ambiente, entre outros, e estes
fatores impulsionam o desenvolvimento de novos mtodos de anlise para
o bioetanol.
Aps 1998, houve um salto considervel no nmero de trabalhos cientficos publicados sobre mtodos de anlise para este biocombustvel. Estes trabalhos empregam diferentes tcnicas instrumentais, como espectrometria de emisso e absoro atmica, espectrofotometria no ultravioleta
e no visvel, eletroforese capilar, cromatografia lquida e gasosa e tcnicas
946
eletroqumicas, entre outras, alcanando desempenho analtico, em muitos

casos, equivalentes s tcnicas oficiais de anlise. Neste captulo sero descritos estes novos mtodos de anlise, para espcies orgnicas e inorgnicas
presentes no bioetanol, mostrando as diversas alternativas de mtodos para
o controle da qualidade deste to importante biocombustvel.
Qualidade do bioetanol combustvel

O setor sucroenergtico brasileiro, no qual se destaca a cana-de-acar
como uma biomassa de alto teor energtico para a produo de bioetanol
combustvel, vive em contnua evoluo tecnolgica desde a dcada de
1970. Em 2008/09, a regio Sudeste foi responsvel por aproximadamente
70% da safra brasileira com uma produo de cerca de 20 bilhes de litros
de bioetanol, destinados ao mercado nacional e internacional (nica, s. d.).
O azetropo, formado no processo de produo do etanol brasileiro via
fermentao de acares por ao de leveduras da espcie Saccharomyces cerevisiae, responsvel pela formao do bioetanol Hidratado Combustvel
(BHC), cujo teor mnimo de etanol deve ser de 94,5% v/v, e do bioetanol
anidro combustvel (BAC), cujo teor mnimo de etanol deve ser de 98% v/v.
No Brasil, o bioetanol hidratado utilizado diretamente como combustvel;
j o anidro utilizado para adio na gasolina, em substituio a aditivos
poluentes como chumbo tetraetila e ter Metil-Terc-Butlico (MTBE).
No escopo internacional, no sentido de assegurar o controle da qualidade do bioetanol combustvel, h importantes agncias reguladoras responsveis pela aplicabilidade das especificaes tcnicas e normas oficiais.
Nos Estados Unidos e na Unio Europeia (UE), a qualidade regulada respectivamente pelas normas da American Society for Testing and Materials
(ASTM) e pelo European Committee for Standardization (ECS) por meio
das normas europeias ou Europeans Norms (EN) (White Paper, 2007).
No Brasil, tendo em vista a relevncia de garantir a qualidade do bioetanol combustvel e sua competitividade no mercado externo, a Agncia
Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis (ANP) destaca-se
como rgo responsvel pela regulao e fiscalizao das atividades econmicas relacionadas indstria dos combustveis. Desta forma a ANP res-
NOVOS MTODOS ANALTICOS PARA AVALIAO DA QUALIDADE DO BIOETANOL
947
ponsvel por colocar em prtica a poltica nacional do bioetanol, garantindo

o abastecimento do mercado e defendendo os interesses dos consumidores.
Neste cenrio, a ANP estabelece por meio da Resoluo ANP n.7 de
9 de fevereiro de 2011, as especificaes do BAC e do BHC comercializados no pas, segundo as disposies contidas no Regulamento Tcnico
ANP n.3/2011. A determinao das caractersticas fsico-qumicas deve
ser realizada empregando-se as Normas Brasileiras (NBR) da Associao
Brasileira de Normas Tcnicas (ABNT) ou as normas da ASTM (ANP,
2011). A Tabela 26.1 mostra as especificaes tcnicas adotadas nos Estados Unidos, no Brasil e na Unio Europeia, que garantem a qualidade do
bioetanol combustvel.
Conforme pode ser observado, por meio da anlise dos valores apresentados na Tabela 26.1, as especificaes tcnicas utilizadas nas trs regies
so muito semelhantes; no entanto, a no conformidade, em alguns casos,
pode significar srias barreiras tcnicas (Stradiotto et al., 2010) para a exportao do etanol brasileiro para o mercado consumidor mundial.
A semelhana nas especificaes facilita o aperfeioamento dos mtodos
analticos pelas trs regies produtoras contribuindo, assim, para a consolidao do bioetanol como um produto importante no mercado mundial,
uma vez que o emprego do BAC, na forma de aditivo para a gasolina, melhora a combusto pelo aumento da octanagem e pela reduo da liberao
de monxido de carbono.
Para facilitar o comrcio internacional de bicombustveis, foi elaborado,
pelos rgos regulamentadores brasileiros, coordenados pelo Ministrio
de Relaes Exteriores em parceria com equipes da Unio Europeia e dos
Estados Unidos, o documento White Paper on Internationally Compatible
Biofuel Standards (2007), que classifica as especificaes adotadas nestas
regies em trs categorias (A, B e C) de acordo com a equivalncia entre elas
e estabelece metas para torn-las equivalentes.
Neste contexto, torna-se necessrio um controle rgido dos parmetros
que afetam a qualidade desse produto, como acidez, pH, sdio e sulfato,
dentre outros, pois eles podem intensificar a capacidade de corroso do bioetanol, causando a acelerao do processo de deteriorao dos componentes metlicos presentes nos motores. A presena de traos de cobre, ferro e
cloreto pode comprometer a mistura combustvel gasolina-bioetanol pela
formao de gomas e produtos corrosivos, sendo ento importante limitar
Cor
Corante permitido,
obrigatrio ou no
------0,0074
6,5-9,0
93,9
98,4
98,95
4,5
1,05
0,53
No desnaturante
---5,3
5,3 (goma lavada)
4,2
42,1
---0,105
------5
Claro e brilhante
EUA
ASTM D4806-10
No desnaturado
Claro e brilhante
ASTM
D4806-10
Corante permitido,
mas no obrigatrio
---Densidade Mxima a 20C, kg m3
Condutividade Eltrica Mxima, S m1
---Acidez Mxima, m/m %
0,007
pHe
6,5-9,0
Teor Mnimo de Etanol, vol,%
92,1
Teor Mnimo de etanol + lcoois saturados C3-C5, vol,%
---Teor Mnimo Total de Etanol, vol,%
---Teor Mximo de lcoois saturados C3-C5, vol,%
---Teor Mximo de gua, vol,%
1,0
Teor Mximo de Metanol, vol,%
0,5
Teor Mnimo/Mximo de desnaturante, vol,%
1,96/5,0
Teor Mximo de Hidrocarbonetos, vol,%
---Teor Mximo de Solvente-Goma lavada, mg/100 mL
5,0
Goma Mxima ou resduo por evaporao, mg/100mL
5 (goma lavada)
Teor Mximo de Sulfato, mg Kg1
4
40
Teor Mximo de Cloreto, mg Kg1
Teor Mximo de Sdio, mg Kg1
---0,1
Teor Mximo de Cobre, mg Kg1
Teor Mximo de Ferro, mg Kg1
---Teor Mximo de Fsforo, mg L1
---Teor Mximo de Enxofre, mg Kg1
30
Aparncia
Parmetro de qualidade
Brasil
UE
ANP7/2011
ANP7/2011
EN15376-07
(BAC)
BHC
Lmpido e isento Lmpido e isento
Claro e brilhante
de impurezas
de impurezas
Corante proibido Corante permitido, mas no
Laranja
no pas
obrigatrio
791,5
807,6
---350
350
---0,0038
0,0038
0,007
---6,0 - 8,0
Dosado
98,0
94,5
96,8
------98,8
99,6
95,1 96
99,76
------2,0
0,4
4,9
0,24
1
1
1,0
No desnaturante No desnaturante Estabelecido pelo pas 0/1,3
3
3
------------5
5
10 (goma no lavada)
4
4
---1
1
25
2
2
---0,07
---0,1
5
5
---------0,5
------10
Tabela 26.1 Especificaes adotadas pelos Estados Unidos, Brasil e Unio Europeia para o controle da qualidade do bioetanol combustvel
948
949
a presena destes contaminantes a teores seguros. J a presena de enxofre

deve ser minuciosamente controlada pois, aps a combusto, esse contaminante convertido em SOx sendo liberado para a atmosfera e tornando-se
um grande problema ambiental.
Colaborando com este cenrio, no Brasil, o Instituto Nacional de Metrologia Qualidade e Tecnologia (Inmetro) tem papel fundamental por meio
do desenvolvimento de material de referncia certificado para bioetanol
contribuindo para padronizao deste biocombustvel produzido no pas.
Com isso, possvel verificar o desempenho das tcnicas analticas e assim
obter resultados comparveis com confiabilidade conhecida tanto nacional
quanto internacionalmente (Stradiotto et al., 2010). Assim, a possibilidade
de ocorrncia de barreiras tcnicas exportao decorrentes de no conformidades quanto a especificaes requeridas nas diferentes regies globais
torna-se um fator supervel.
Tendo em vista a relevncia de garantir o cumprimento das especificaes tcnicas exigidas no controle de qualidade do bioetanol combustvel,
faz-se necessrio o estabelecimento de mtodos de anlise oficiais por meio
de normas tcnicas. Estas normas tcnicas devem apresentar clareza, norteando todas as condies analticas, como por exemplo, tipo de pr-tratamento da amostra, procedimentos de calibrao e tcnica analtica, entre
outros, a fim de atender s especificaes nacionais. No Brasil, o desenvolvimento destas normas feito pela ABNT e passa por vrias etapas que vo
desde observao de uma demanda, passando pela elaborao do projeto
da norma com a participao dos setores interessados, por uma consulta
nacional, at a aprovao do projeto aps a consulta nacional pela comisso
de estudo autora do mesmo.
Com a adoo de normas tcnicas, o controle da qualidade do bioetanol
combustvel feito de maneira uniforme. Desta forma, a adoo de limites
para a quantidade de contaminantes presentes no bioetanol combustvel, os
quais foram verificados com mtodos analticos com confiabilidade estabelecida (utilizado mtodo oficial por meio de norma tcnica), contribui para
a padronizao deste produto. Na Tabela 26.2 esto listadas as principais
tcnicas analticas recomendas nos mtodos oficiais utilizados para regular o teor de contaminantes orgnicos e inorgnicos presentes em bioetanol
combustvel no Brasil, Estados Unidos e Unio Europeia.
950
Tabela 26.2 Tcnicas empregadas nos mtodos oficiais para a quantificao de contaminantes
orgnicos e inorgnicos adotados no Brasil, Estados Unidos e Unio Europeia, presentes em bioetanol combustvel (White Paper, 2007; Oliveira et al., 2009)
Espcie
contaminante
Tcnica recomendada
Norma Tcnica
Cloreto
Cromatografia Inica
ASTM D7319-09
NBR 10894
EN 15492-08
Sulfato
Cromatografia Inica
ASTM D7319-09
NBR 10894
EN 15492-08
Sdio
Fotometria de Chama
NBR 10422
EU e EUA: sem especificao
Cobre
Espectroscopia de Absoro Atmica
ASTM D1688-07
NBR 11331
EN 15488-07
Ferro
Espectroscopia de Absoro Atmica
NBR 11331
EU e EUA: sem especificao
Espectrometria de Fluorescncia de
Raios-X (EUA)
ASTM D2622-10
Fluorescncia Ultravioleta (EUA)
ASTM D5453-09
Espectrometria de Fluorescncia de
Raios-X (UE)
EN 15485-07
Enxofre
Fluorescncia Ultravioleta (UE)
EN 15485-07
Brasil: sem especificao
Fsforo
Espectrofotometria (UE)
EN 15487-07
Brasil e EUA: sem especificao
Metanol
Cromatografia Gasosa (UE e EUA)
ASTM D5501-09
EN 13132-00
Brasil: sem especificao
lcool C3-C5
Cromatografia Gasosa (UE)
EN 13132-00
Brasil e EUA: sem especificao
A anlise das tcnicas apresentadas na Tabela 26.2 mostra uma variedade de tcnicas instrumentais modernas caracterizadas por alta seletividade,
sensibilidade e frequncia analtica. Por exemplo, para a determinao de
sulfato e cloreto, para a qual inicialmente se empregava o mtodo volumtrico, atualmente se baseia a anlise na cromatogrfica inica, tcnica adotada
nas trs importantes regies produtoras/consumidoras de bioetanol combustvel (Brasil, Unio Europeia e Estados Unidos) como mtodo oficial.
Embora j existam mtodos modernos e desenvolvidos para determinao de vrios contaminantes, no h especificaes tcnicas oficiais para
a determinao de algumas destas espcies, por exemplo, o acetaldedo e
951
os aldedos superiores presentes no bioetanol, fato que tem despertado o

interesse de diversos pesquisadores em desenvolver mtodos analticos altamente precisos e de baixo custo para a quantificao dessas diversas espcies qumicas nesta matriz. Entre os mtodos desenvolvidos, destaca-se a
utilizao de tcnicas cromatogrficas para a quantificao de contaminantes orgnicos, enquanto para as espcies inorgnicas catinicas destacam-se
o uso da espectrometria atmica e tcnicas eletroanalticas, e para a determinao de espcies aninicas destaca-se o emprego da eletroforese capilar
(Stradiotto et al., 2010; Oliveira et al., 2009).
Apesar de a ANP adotar mtodos oficiais por meio de normas tcnicas
para o controle da qualidade do bioetanol, novos mtodos analticos cada
vez mais sensveis tm sido desenvolvidos para anlise de seus contaminantes e tambm para acompanhar a possvel modificao qumica e/ou fsica
desse biocombustvel aps o processo de produo. Embora estes contaminantes representem um papel quantitativamente secundrio no etanol
produzido, o conhecimento e o controle dessas impurezas assumem papel
fundamental nas diversas etapas de seu emprego, como: (i) evitar envenenamento de catalisadores automotivos, cada vez mais sofisticados e caros, (ii) minimizar reaes qumicas secundrias em motores do tipo flex-fuel desenvolvidos com alta tecnologia, cuja emisso de poluentes acarreta
prejuzos ao meio ambiente e (iii) evitar outros danos ao motor e s peas
adjacentes no que se refere aos processos de corroso ou lixiviamento, acarretados por teores de contaminantes acima do valor permitido.
Portanto, facilmente perceptvel a importncia da pesquisa no contexto do desenvolvimento de metodologias alternativas associadas aos mtodos oficiais, regulados por vrios rgos governamentais responsveis
pela fiscalizao da qualidade de bioetanol. Esse biocombustvel ser um
produto-chave global na substituio dos combustveis fsseis, no mercado
consumidor mundial, em um futuro muito prximo, devido aos benefcios
socioeconmicos e ambientais.
Anlise de espcies catinicas em bioetanol combustvel

Alm do nmero significativo de substncias orgnicas presentes no
bioetanol combustvel, oriundas do processo de produo ou de conta-
952
minao na estocagem ou no transporte aos postos, fundamental ter em

mente que componentes inorgnicos tambm esto presentes nessa matriz,
como por exemplo, nions e ctions metlicos. Portanto, quantificao destas espcies torna-se necessria, pois existem problemas relacionados com a
sua emisso para o ambiente, bem como o fenmeno de corroso acentuada
nos motores e contaminao de estgios em plantas industriais onde o bioetanol utilizado como matria-prima (Oliveira et al., 2009).
Quanto anlise de espcies catinicas no bioetanol, deve-se salientar
que a legislao atual (ABNT, ASTM ou ECS) ainda no apresenta normas
oficiais para controle de qualidade de espcies como o chumbo e o nquel,
entre outros. O primeiro trabalho sobre a determinao de espcies catinicas presentes neste biocombustvel foi realizado por Bruning e Malm em
1982, sendo realizadas anlises de Fe, Ni, Cu, K, Na e Cr por espectrometria de absoro atmica.
Aps 1998, houve um salto considervel no nmero de trabalhos cientficos sobre a anlise de espcies catinicas empregando diferentes tcnicas
instrumentais como espectrometria de emisso atmica Faes (do ingls flame
atomic emission spectroscopy) (Oliveira, A. P. et al., 2002a), espectrometria de
absoro atmica Faas (flame atomic absorption spectroscopy) (Padilha; Padilha; Rocha, 1999; Gomes et al., 1998; Roldan et al., 2003; Silva; Budziak;
Carasek, 2004; Teixeira et al., 2005; Moreira; Gushikem, 1985; Filho et al.,
1995; Oliveira, M. F. et al, 2008), espectrometria de absoro atmica em
forno de grafite GF-AAS (graphite furnace atomic absorption spectrometry)
(A. P. Oliveira et al., 2202b; A. P. Oliveira et al., 2202c; Saintpierre, 2008;
Amorim et al., 2008) e eletrotrmica (ET-AAS) (Giacomelli et al., 2004), espectrofotometria no UV-Vis (UV-Vis) (Teixeira et al., 2006), espectroscopia
de massas com plasma indutivamente acoplado ICP-MS (inductively coupled
plasma mass spectrometry) (SaintPierre et al., 2006, 2006b; Tormen et al.,
2008; Rocha et al., 2011), cromatografia (Dias et al., 2010), tcnicas eletroanalticas (M. F. Oliveira et al., 2002, 2004; Takeuchi et al., 2007a, 2007b;
Neves et al., 1987; Mattos et al., 2008; Takeuchi et al., 2009; Munoz; Angnes, 2004; Tartarotti et al., 2006; Bergamini; Santos; Stradiotto, 2006; Cesarino; Marino; Cavalheiro, 2010) e eletroforese capilar (Munoz et al., 2004).
Os trabalhos citados utilizaram tcnicas que permitiram o desenvolvimento de mtodos com limites de deteco indo de 35 a 1,0x106 mg L1,
fato que evidencia a possibilidade de atender necessidade de pr em prti-
953
ca uma legislao mais exigente. Estes trabalhos englobam a anlise de uma

grande variedade de espcies, e ainda no h regulamentao para todas elas.
Desta forma, fica evidente a importncia da antecipao do desenvolvimento de mtodos que contemplem possveis demandas analticas. A seguir so
descritos sumariamente os trabalhos publicados na literatura sobre os novos
mtodos analticos para a aferio da qualidade do bioetanol combustvel.
A. P. Oliveira et al. (2002a) determinaram Na em bioetanol utilizando a
tcnica de Faes com calibrao por adio de padro com o uso de potssio
como supressor ionizao. Com isso, foi alcanado um limite de deteco
de 2,6 g L1.
Padilha, Padilha e Rocha (1999) descrevem o desenvolvimento de um
mtodo de determinao de ons metlicos em bioetanol em nvel de traos
por meio da Faas com pr-concentrao com cido caroboximetilcelulose
(CMCH). Desta forma Cd, Cu, Cr, Fe, Ni e Zn, foram determinados utilizando sistema em fluxo e eluio feita com soluo de cido clordrico 1,0
mol L1. Um fator de enriquecimento de vinte vezes foi obtido com o procedimento de pr-concentrao.
Gomes et al. (1998) propuseram a utilizao de uma coluna empacotada
com slica gel modificada com grupos 5-amino-1,3,4-tiadiazol-2-tiol para
a determinao de metais como Cd, Co, Cu, Fe, Ni, Pb e Zn em bioetanol
combustvel. Alm de a coluna apresentar estabilidade qumica e rpida
adsoro dos metais, o mtodo proposto mostrou-se confivel em estudos
de recuperao.
Roldan et al. (2003) aplicaram a tcnica de Faas para a determinao
de vrias espcies metlicas como Cu, Ni e Zn, aps pr-concentrao em
coluna empacotada com slica gel modificada com 2-aminotiazol. Os resultados obtidos em anlises de amostras de bioetanol com o mtodo proposto
foram compatveis com os obtidos por FG-AAS. Os limites de deteco
alcanados em g L1 foram 1,7 (Cu), 2,3 (Ni), 0,34 (Zn).
Silva et al. (2004) utilizaram um sistema de pr-concentrao on-line
com microcoluna de slica gel modificada com xido de molibdnio V
(Nb2O5-SiO2) para determinao de Cu, Cd, Co, e Zn em bioetanol utilizando Faas. Nesse trabalho foi alcanado um limite de deteco de em g
L1 de 1,4 (Cu), 0,2 (Cd), 1,4 (Co) e 1,0 (Zn).
Teixeira et al. (2005) utilizaram uma resina polimrica, Amberline
XAD-4 funcionalizada com 3,4-cido dihidroxibenzoico, para pr-concen-
954
trao on-line de Cu, Fe, Ni e Zn em bioetanol. Nesse trabalho os autores

alcanam limite de deteco em g L1 de 2,3 (Cu), 5,0 (Fe), 7,8 (Ni) e 0,1
(Zn) utilizando a tcnica Faas.
Moreira e Gushikem (1985) utilizam uma coluna de slica gel funcionalizada com grupos 3(1-imidazol)propil para pr-concentrar Cu, Ni, Fe, Zn
e Cd presente em etanol e posterior determinao destes metais por Faas.
Filho et al. (1995) propuseram o uso de slica gel modificada quimicamente com molculas benzamidazlicas para pr-concentrar Mn, Ni, Cu,
Zn, Cd e Fe em bioetanol e posterior determinao por Faas. A eluio foi
feita com cido clordrico 0,1 mol L1 em uma mistura gua/etanol com
frao molar da gua de 0,8.
M. F. Oliveira et al. (2008) desenvolveram uma metodologia para a determinao de Fe, Cu, Ni e Zn em bioetanol por Faas, na qual a soluo dos
ons metlicos foi pr-concentrada por pirlise. A determinao dos metais
foi feita por curva analtica com intervalo de trabalho de 100-1000 g kg1 e
os valores de recuperao encontrados ficaram entre 97 e 102%.
A. P. Oliveira et al. (2002b) utilizaram a GF-AAS com aquecimento
transversal e adio de modificador qumico, Pd(NO3) e Mg(NO3), e fizeram a determinao simultnea de Al, As, Cu, Fe, Mn e Ni. A metodologia
empregada permitiu a obteno de limites de deteco em g L1 de 1,2 (Al)
2,5 (As), 0,22 (Cu), 1,6 (Fe), 0,20 (Mn) e 1,1 (Ni).
A. P. Oliveira et al. (2002c) desenvolveram um mtodo utilizando GF-AAS com plataforma de grafite tratada com tungstnio e rdio e adio de
modificadores qumicos para a determinao simultnea de Al, As, Cu, Fe,
Mn. Os limites de deteco alcanados nesse trabalho em g L1 foram de
1,9 (Al), 2,9 (As), 0,57 (Cu), 1,3 (Fe), 0,40 (Mn) e 1,3 (Ni).
SaintPierre et al. (2008) quantificaram Cd e Pb em bioetanol por meio
da espectrometria de absoro atmica de forno com filtro de grafite. O
forno com filtro de grafite foi utilizado para eliminar a necessidade de
modificao qumica para estabilizar analitos volteis, alm de poder ser
aplicado na pirlise. Os testes de recuperao foram feitos em sete amostras
de bioetanol comercial e obtiveram valores entre 90 e 120%. Os limites de
deteco em g L1 foram 0,1 para Cd e 0,3 para Pb.
Amorim et al. (2008) determinaram Ba, Cr, e Mo (grupo 1) e Cu, Fe, Ni
e Pb (grupo 2) em amostras de bioetanol. Nesse trabalho foi utilizada a tcnica FG-AAS com tungstnio como modificador permanente juntamente
com Pd(NO3)2 e Mg(NO3)2 para o grupo 2 e sem a adio de modificadores
955
para o grupo 1. Os limites de deteco alcanados nesse trabalho em g L1

foi de 0,6 (Ba), 0,1 (Cr), 0,6 (Cu), 1,8 (Fe), 0,2 (Mo), 0,4 (Ni) e 0,6 (Pb).
Giacomelli et al. (2004) utilizaram irdio e rdio como modificadores
permanentes para determinao de As, Cd e Pb em bioetanol e metanol
utilizando GF-AAS. O desempenho do modificador permanente proposto, quando comparado aos modificadores paldio e magnsio, forneceu melhor recuperao e baixos nveis de background.
Teixeira et al. (2006) realizaram a determinao de Cu e Fe utilizando
ligantes da classe ferrona devido formao de complexos estveis entre os
ligantes e as espcies metlicas inicas. Outros ons metlicos tambm formam complexos com esta classe de ligantes, mas as caractersticas espectrais
so diferentes o suficiente para evitar a interferncia com a anlise espectrofotomtrica de Cu e Fe. Nesse trabalho os autores conseguiram limites de
deteco, respectivamente para Fe e Cu, de 7 e 8 g L1 utilizando a 1,10-fenantrolina e de 11 e 32 g L1 utilizando a 2,2-bipiridina como ligante.
SaintPierre et al. (2006a) aplicaram a tcnica de ICP-MS na anlise de um
amplo espectro de espcies catinicas em bioetanol. Nesse trabalho, foi possvel obter limites de deteco em g L1 de 0,08 (Ag), 0,12 (Cd), 0,04 (Co),
0,4 (Cu), 27 (Fe), 0,7 (Mn), e 0,4 (Ni) pelo mtodo de diluio de istopos.
SaintPierre et al. (2006b) descreveram um mtodo para determinao
de Ag, Cd, Cu, Pb e Tl em bioetanol por meio da tcnica ICP-MS com
vaporizao eletrotrmica e diluio de istopo. Amostras de bioetanol do
tipo comum, aditivado e anidro foram analisadas e os istopos de referncia
foram 109Ag e 107Ag, 112Cd e 111Cd, 63Cu e 65Cu, 206Pb e 208Pb e 203Tl e 205Tl.
Os limites de deteco alcanados em g L1 foram de 0,02 (Ag), 0,08 (Cd),
0,1 (Cu), 0,05 (Pb) e 0,001 (Tl). A diluio de istopo mostrou ser um mtodo de calibrao robusto, rpido e simples para anlise de bioetanol.
Tormen et al. (2008) determinaram Cu, Cd, Ni, Pb, Tl e Sn em bioetanol
utilizando um micronebulizador concntrico para introduo da amostra
no plasma em ICP-MS. O limite de deteco alcanado nesse trabalho em
g L1 foi de 0,1 (Cd), 0,02 (Cu), 0,07 (Ni), 0,02 (Pb), 0,1 (Sn) e 0,03 (Tl).
Rocha et al. (2011) determinaram ferro e cobre em etanol utilizando espectrometria de emisso tica com plasma indutivamente acoplado (ICP-OES)
utilizando um nebulizador ultrassnico acoplado a uma membrana para
dessolvatao sem tratamento adicional na amostra. Nesse trabalho o limite
de deteco alcanado foi de 0,1 e 0,5 g kg1 para Cu e Fe respectivamente.
956
Dias et al. (2010) desenvolveram um mtodo para determinao de

metais em etanol baseado na cromatografia inica com reao ps-coluna
com 4-(2-piridilazo)resorcinol e deteco espectrofotomtrica. O mtodo
mostrou-se livre de interferentes e apresentou limites de quantificao em
g L1 de 6,8 (Zn), 29,6 (Fe) e 24,8 (Cu).
Quanto a metodologias baseadas em tcnicas eletroanalticas, que geralmente so de baixo custo operacional e so compatveis com as tcnicas
convencionais em termos de robustez e preciso, so encontrados alguns
trabalhos sobre a determinao de espcies catinicas em bioetanol.
Oliveira et al. (2004) determinaram Zn, Cu, Pb e Cd simultaneamente
em bioetanol dissolvido em gua utilizando a tcnica voltametria de redissoluo andica com tempo de pr-concentrao de 10 min com eletrodo
de filme de mercrio suportado em carbono vtreo. As modalidades de
varredura linear e pulso diferencial foram testadas, encontrando valores de
limites de deteco de 109 a 108 mol L1 sem pr-tratamento das amostras.
Este trabalho apresentou detectibilidade de 10-100 vezes menor que a espectroscopia de absoro atmica com chama.
Takeuchi et al. (2007a) utilizaram slica organofuncionalizada com
2-aminotiazol (SiAt-SPCPE) como modificador qumico na pasta de carbono para a deteco de Cu em amostras de bioetanol sem nenhum tratamento da amostra. A tcnica voltametria de redissoluo andica na
modalidade pulso diferencial foi utilizada nas medidas com 20 min de pr-concentrao. Foi possvel obter uma faixa de trabalho linear de 7,5 x 108
a 2,5 x 106 mol L1 com limite de deteco de 3,1 x 108 mol L1.
Neves et al. (1987) descreveram a utilizao da tioureia como agente
precipitante para o eletrodo de membrana de cobre. O eletrodo construdo
foi aplicado na tcnica de titulao potenciomtrica e, assim, foi possvel
realizar a determinao direta de Cu em bioetanol comercial.
Mattos et al. (2008) desenvolveram um mtodo utilizando voltametria
adsortiva com onda quadrada e eletrodo de pasta de carbono modificada
com 1,10-fenantrolina/nafion para determinao de Fe em bioetanol. O
limite de deteco alcanado foi de 2,4 x 106 mol L1 com tempo de pr-concentrao de 5 min. As anlises realizadas em amostras de bioetanol
tiveram resultado semelhantes aos obtidos por Faas.
Takeuchi et al. (2009) determinaram Cu em etanol utilizando microeletrodos de ouro e a tcnica voltametria de redissoluo andica na modalidade
957
de varredura linear. Com o mtodo empregado foi alcanado um limite de

deteco de 22 nmol L1 e um intervalo linear de 0,05 a 1,0 mol L1. Os
resultados obtidos em anlises de amostras de etanol foram concordantes
com os obtidos por Faas.
Oliveira et al. (2002) determinaram Zn em bioetanol utilizando eletrodo
de filme de mercrio suportado em carbono vtreo. A tcnica utilizada foi
voltametria de redissoluo andica na modalidade de varredura linear.
Nesse trabalho foi alcanado o limite de deteco de 2,6x107 mol L1 e faixa linear de 5,0x107 a 5,0x106 mol L1.
Munoz e Angnes (2004) desenvolveram um mtodo para a determinao de Cu e Pb em bioetanol por voltametria de redissoluo andica na
modalidade de onda quadrada utilizando eletrodo de ouro. A determinao
foi feita de duas maneiras diferentes: a primeira foi por determinao direta
utilizando mistura etanol/gua e tempo de deposio de 15 min e a segunda
foi por evaporao do solvente e posterior dissoluo em soluo de eletrlito suporte. Os dois mtodos mostraram resultados compatveis. O limite
de deteco alcanado utilizando etapa de deposio foi de 120 e 235 ng L1
respectivamente para Cu e Pb com variao no estudo de recuperao no
intervalo de 102 a 114%.
Tartarotti et al. (2006) determinaram Ni em bioetanol utilizando eletrodo de pasta de carbono modificado com dimetilglioxima. Nesse trabalho
foi empregada a tcnica voltametria de pulso diferencial com tempo de pr-concentrao de 25 min. O intervalo de trabalho da curva analtica utilizada foi de 5,0x109 5,0x107 mol L1 e o limite de deteco alcanado foi
de 2,7x109 mol L1. A regenerao do eletrodo foi feita por imerso em
soluo de HCl 1,0 mol L1 por 5 min. O limite de deteco obtido com o
mtodo proposto foi dez vezes menor que o obtido com GF-AAS.
Bergamini, Santos e Stradiotto (2006) determinaram Pb em bioetanol
utilizando eletrodo de pasta de carbono modificada com resina de troca inica Amberlite IR 120. A tcnica empregada foi a voltametria de redissoluo andica com tempo de pr-concentrao de 15 min. A aplicao do
mtodo possibilitou a obteno de uma faixa linear de 9,9x109-1,2x106
mol L1 e um limite de deteco de 7,2x109 mol L1 com resultados de
estudos de recuperao entre 98-102%.
Takeuchi et al. (2007b) determinaram Ni em bioetanol utilizando um eletrodo de pasta de carbono com parafina slida como aglutinante, a qual foi
958
quimicamente modificada com slica organofuncionalizada com 2-aminotiazol. Os passos envolvidos no mtodo utilizado foram: pr-concentrao por
20 min dos ons Ni2+ presentes no etanol e posteriormente foi feita a transferncia do eletrodo para uma clula eletroqumica contendo dimetilglioxima
(DMG) para formar o complexo [Ni(DMG)2]2+. Em seguida foi utilizada a
voltametria de pulso diferencial para reduzir o complexo presente na superfcie do eletrodo e registrar o sinal; depois disso a superfcie do eletrodo foi
regenerada por polimento. Nesse trabalho, os autores alcanaram faixa linear de 7,5x109 1,0x106 mol L1 e limite de deteco de 2,0x109 mol L1.
Cesarino, Marino e Cavalheiro (2010) determinaram Cu em bioetanol
utilizando um eletrodo slido de grafite-poliuretano modificado com slica
organofuncionalizada com 2-benzotiazoltiol. Nesse trabalho os autores utilizaram a voltametria de redissoluo andica no mdulo pulso diferencial
com tempo de pr-concentrao de 20 min em amostras gua/etanol. Desta
forma os autores alcanaram uma faixa de resposta linear de 0,1-1,2 mol
L1 e um limite de deteco de 3,9x108 mol L1. Os resultados obtidos em
estudos de recuperao ficaram entre 90,3-107,3% e os resultados obtidos
em anlises de etanol de postos de combustveis foram compatveis com os
obtidos por Faas.
Munoz et al. (2004) determinaram Na, K, Ca, Mg e NH4+ em bioetanol por eletroforese capilar utilizando deteco eletroqumica sem contato.
Este tipo de deteco baseia-se na medida de condutividade sem contato
com a soluo, o qual vantajoso por evitar a adsoro de componentes
da matriz na superfcie da clula condutomtrica, o que conduziria perda
de repetibilidade nas medidas. A deteco eletroqumica sem contato tem
sido amplamente empregada em eletroforese capilar e cromatografia inica. Informaes adicionais sobre medidas de condutividade sem contato
como forma de deteco em eletroforese capilar podem ser encontradas na
literatura (Silva; Lago, 1998; Zemann et al., 1998). O mtodo desenvolvido
utilizou calibrao com adio de ltio como padro interno. O pr-tratamento da amostra utilizado no mtodo foi a completa evaporao do etanol
seguida pela redissoluo do resduo obtido em gua deionizada. Os limites
de deteco alcanados nesse trabalho em mg L1 foram de 0,12, 0,18, 0,13
e 0,14 respectivamente para NH4+, K, Na, Ca e Mg.
Uma viso comparativa acerca dos trabalhos relatados na literatura at a
presente data, pertinentes anlise de espcies catinicas em bioetanol por
diferentes tcnicas instrumentais, pode ser obtida na Tabela 26.3.
959
Tabela 26.3 Metodologias analticas utilizadas para a anlise de espcies catinicas em bioetanol
Espcie
Alumnio
Amnio
Antimnio
Arsnio
Tcnica
Limite de deteco
GF AAS
1,2 g L1
A. P. Oliveira, 2002b
GF AAS
1,9 g L1
A. P. Oliveira, 2002c
CE
0,12 mg L1
Munoz et al., 2004
ICP-MS
0,02 g L
Tormen et al., 2008
Referncia
GF AAS
2,5 g L
GF AAS
2,9 g L1
ET AAS
2,0 g L
ICP-MS
0,01-0,03 g L
Giacomelli et al., 2004
1
1
Tormen et al., 2008
Brio
GF AAS
0,6 g L1
Amorim et al., 2008
Bismuto
ICP-MS
0,02 g L
Tormen et al., 2008
Cdmio
Clcio
Faas
--
Faas
N/E
Gomes et al., 1998
0,02 g L
Silva; Budziak; Carasek, 2004
ET AAS
0,05 g L
0,08 g L1
Saintpierre; Frescura; Curtius, 2006b
ICP-MS
0,12 g L
Saintpierre et al., 2006a
M. F. Oliveira et al., 2004
ETV ICP-MS
DP ASV
2,21 g L
GF AAS
0,1 g L1
Saintpierre et al., 2008
ICP-MS
0,1 g L
Tormen et al., 2008
CE
0,14 mg L
1
1
N/E
Munoz et al., 2004

Gomes et al., 1998
1,1 g L
0,05 g L1
ICP-MS
0,2 g L
ET AAS
ETV ICP-MS
Cobalto
Padilha; Padilha; Rocha, 1999
Faas
Faas
Chumbo
DP ASV
3,0 g L
SW ASV
235 ng L1
Munoz; Angnes, 2004
DP ASV
2,0 g L
Takeuchi et al., 2007a
GF AAS
0,3 g L
GF AAS
0,6 g L1
Amorim et al., 2008
ICP-MS
0,02 g L
Tormen et al., 2008
1
1
Saintpierre et al., 2008
Faas
N/E
Faas
1,4 g L1
Gomes et al., 1998
ICP-MS
0,04 g L1
ICP-MS
0,03 g L
Tormen et al., 2008
Continua
960

Espcie
Tcnica
Limite de deteco
Faas
N/E
Faas
-N/E
Gomes et al., 1998
Faas
1,7 g L1
Roldan et al., 2003
Faas
1,4 g L1
Faas
2,3 g L1
Roldan et al., 2003
Faas
N/E
Faas
N/E
Moreira; Gushikem, 1985

Filho et al., 1995
0,5 g L
Garcia; Gaubeur, 2011
GF AAS
0,22 g L1
GF AAS
0,57 g L1
7,4 g L
Dias et al., 2010
HPLC
ICP-MS
0,4 g L1
ICP-OES
0,078 g L
ETV ICP-MS
Rocha et al., 2011

DP ASV
1,01 g L
UV/Vis
8 g L1
SW ASV
0,120 g L
Teixeira et al., 2006

Munoz; Angnes, 2004
N/E
Neves; Neto; Serrano, 1987
LS-ASV
1,4 g L
Takeuchiet al., 2009
GF AAS
0,6 g L1
Amorim et al., 2008
ICP-MS
0,090,2 g L1
Tormen et al., 2008
Faas
6,24 g L
DP-ASV
2,5 g L1
Cesarino; Marino; Cavalheiro, 2010
Faas
N/E
Faas
--
Bruning; Malm, 1982

GF AAS
0,1 g L
Estanho
ICP-MS
0,1 g L1
Estrncio
ICP-MS
Ferro
0,1 g L1
Potenciometria
Cromo
Faas
Faas
Cobre
Referncia
Bruning; Malm, 1982
Amorim et al., 2008
0.010.03 g L
Faas
N/E
Faas
--
Tormen et al., 2008

1
Tormen et al., 2008

Bruning; Malm, 1982
Faas
N/E
Gomes et al., 1998
Faas
5,0 g L1
Roldan et al., 2003
Faas
N/E
Faas
N/E
Filho et al., 1995

Continua
961

Espcie
Tcnica
Limite de deteco
GF AAS
1,6 g L1
GF AAS
1,3 g L1
8,9 g L
Dias et al., 2010
HPLC
Ferro
Glio
Magnsio
Mangans
Molibdnio
Nquel
ICP-MS
27 g L1
ICP-OES
0,16 g L1
Rocha et al., 2011
UV/Vis
7 g L
AdV
133 g L1
Mattos et al., 2008
GF AAS
1,8 g L1
Amorim et al., 2008
ICP-MS
0,7-4 g L-1
Tormen et al., 2008
Faas
2,13 g L1
ICP-MS
0,06-0,2 g L1
CE
0,14 mg L
Tormen et al., 2008

Munoz et al., 2004
GF AAS
0,20 g L1
GF AAS
0,40 g L1
Faas
N/E
ICP-MS
0,7 g L1
ICP-MS
0,02-0,4 g L1
Tormen et al., 2008
GF AAS
0,2 g L1
Amorim et al., 2008
ICP-MS
0,1-0,5 g L1
Tormen et al., 2008
Faas
N/E
Faas
--
Faas
N/E
Filho et al., 1995

Bruning; Malm, 1982

Gomes et al., 1998
Faas
2,3 g L
Roldan et al., 2003
Faas
7,8 g L1
Roldan et al., 2003
Faas
N/E
Faas
N/E
GF AAS
1,1 g L1
GF AAS
1,3 g L1
ICP-MS
Filho et al., 1995
0,4 g L
DPV
58 ng L1
Tartarotti et al., 2006
DPV
1,5 g L
Bergamini; Santos; Stradiotto et al., 2006
AdV
0,12 g L1
Takeuchi et al., 2007b
GF AAS
0,4 g L1
Amorim et al., 2008
18,3 g L
Faas
Potssio
Referncia
Faas
N/E
CE
0,18 mg L1
Bruning; Malm, 1982

Munoz et al., 2004
Continua
962

Espcie
Prata
Tcnica
ICP-MS
Limite de deteco
0,08 g L
Referncia
ETV ICP-MS
0,02 g L1
Rubdio
ICP-MS
0,03 g L1
Tormen et al., 2008
Selnio
ICP-MS
0,4-0,6 g L1
Tormen et al., 2008
Sdio
Tlio
Vandio
Zinco
Faas
N/E
Faes
2,6 g L-1.
Bruning; Malm, 1982
CE
0,13 mg L1
Munoz et al., 2004
ETV ICP-MS
0,001 g L1
ICP-MS
0,03 g L1
Tormen et al., 2008
ICP-MS
0,06-0,5 g L
A. P. Oliveira et al., 2002a
Tormen et al., 2008
Faas
--
Faas
N/E
Faas
0,34 g L1
Roldan et al., 2003
Faas
1,0 g L
Faas
0,1 g L1
Roldan et al., 2003
Faas
N/E
Faas
N/E
DP ASV
17 g L1
DP ASV
1,23 g L1
ICP-MS
0,4-0,6 g L1
Faas
29,8 g L1
HPLC
2,0 g L1
Dias et al., 2010
Gomes et al., 1998

1

Filho et al., 1995
Tormen et al., 2008
N/E = no especificado; GF-AAS = espectrometria de absoro atmica por forno de grafite;

CE = eletroforese capilar; ICP-MS = espectroscopia de massas com plasma indutivamente acoplado;
ET-AAS = espectrometria de absoro atmica com atomizao eletrotrmica; Faas = espectrometria de
absoro atmica com chama; ETV = vaporizao eletrotrmica; AdV = voltametria adsortiva; DP ASV =
voltametria de redissoluo com pulso diferencial; SW ASV = voltametria de redissoluo com onda
quadrada; HPLC = cromatografia lquida de alta eficincia; ICP-OES = espectrometria de emisso tica
com plasma indutivamente acoplado; UV/Vis = espectrofotometria molecular no ultravioleta e visvel.
Com base no nmero expressivo de estudos publicados na literatura,

relacionados anlise de espcies catinicas em bioetanol, pode-se concluir
que o panorama cientfico acerca das opes de metodologias de anlise encontra-se substancialmente bem embasado. Este cenrio, entretanto, no
deve ser visto como estado de excelncia na anlise de ctions em bioetanol,
pois se deve salientar sempre a possibilidade de otimizaes nas metodologias atuais, bem como a criao de novos mtodos para esta importante
classe de constituintes da matriz energtica para que se possa atender a demandas cada vez mais exigentes.
963
Anlise de espcies aninicas inorgnicas

em bioetanol combustvel
Existe um nmero relativamente pequeno de trabalhos descrevendo mtodos analticos para a quantificao de contaminantes inorgnicos
aninicos em bioetanol. A maioria desses mtodos foi desenvolvida para a
determinao de Cl e SO42, os nicos nions inorgnicos cujos teores so
regulamentados pela ANP. Na Tabela 26.4 esto sumarizados os principais
mtodos analticos desenvolvidos para a quantificao de nions inorgnicos em bioetanol.
Tabela 26.4 Mtodos analticos desenvolvidos para a quantificao de nions inorgnicos em

bioetanol
Tcnica
Limite de
Deteco / mg L1
Potenciometria
N/E
Bruning; Malm, 1982
UV-CE
0,026
Pereira et al., 2004
UV-CE
0,012
Analito
Cloreto
Sulfeto
Sulfato
Nitrato
Referncia
CCD-CE
0,06
Munoz et al., 2004
IC
N/E
Herrmann; Chassiniol; Thomas, 2007
CT
0,88
Avelar; Barbeira, 2007
ASV
0,13
Ferreira; Lima; Barbeira, 2008
AD-FIA
0,13
Paula et al., 2008
EDXRF
0,025
Potenciometria
N/E
Bruning; Malm, 1982
Gravimetria
N/E
Bruning; Malm, 1982
UV-CE
0,032
UV-CE
0,021
CCD-CE
0,08
Munoz et al., 2004
IC
N/E
Herrmann; Chassiniol; Thomas, 2007
EDXRF
0,030
Paula et al., 2008
UV-SIA
0,27
Oliveira; Korn, 2006
CCD-CE
0,08
Munoz et al., 2004
UV-CE = eletroforese capilar com deteco no ultravioleta; CCD-CE = eletroforese capilar com
deteco condutimtrica sem contato; IC = cromatografia inica, CT = titulao condutimtrica, ASV
= voltametria de redissoluo andica, AD-FIA = Anlise em fluxo com deteco amperomtrica,
EDXRF = fluorescncia de raios X por disperso de energia, UV-SIA = anlise por injeo sequencial
com deteco no ultravioleta.
964
Conforme pode ser observado na Tabela 26.4, a tcnica de eletroforese capilar a mais comumente empregada para a quantificao de nions
inorgnicos em bioetanol. Nessa tcnica, um fluxo eletrosmtico criado
pela aplicao de uma elevada diferena de potencial (10-40 kV) ao longo
de um capilar de slica fundida preenchido com uma soluo tampo que
atua como eletrlito. Em valores de pH superiores a 3, os grupos silanis
das paredes do capilar encontram-se ionizados; forma-se, ento, uma dupla
camada eltrica constituda pela parede do capilar carregada negativamente
e pelos ctions do tampo utilizado. Esses ctions so atrados para a extremidade do capilar na qual se encontra o ctodo e, devido aos efeitos de
solvatao, arrastam molculas de solvente bem como os demais solutos. A
consequncia deste efeito que todas as espcies, independentemente da
carga, se deslocam em direo ao ctodo. A ordem de eluio, no entanto,
depender da carga do on e de sua mobilidade eletrofortica. Normalmente, a ordem de eluio observada a seguinte: ctions de elevada mobilidade, ctions de baixa mobilidade, espcies neutras e, finalmente, nions
(Holler; Skoog; Crouch, 2009).
Em uma anlise por eletroforese capilar, a amostra introduzida em
uma extremidade do capilar (extremidade do nodo) e o detector posicionado na outra extremidade (extremidade do ctodo). Dentre as caractersticas que tornam a eletroforese capilar muito atrativa destacam-se: elevada
frequncia analtica, elevada eficincia de separao e uso de volumes de
amostra e de reagentes extremamente reduzidos. Outro atrativo dessa tcnica a versatilidade quanto ao sistema de deteco, sendo os detectores
espectrofotomtricos e os eletroqumicos os mais frequentemente empregados para a quantificao de nions inorgnicos em bioetanol.
Alm da eletroforese capilar, possvel encontrar trabalhos na literatura
envolvendo o desenvolvimento de mtodos para determinao de nions
em bioetanol utilizando outras tcnicas instrumentais como cromatografia
inica (Herrmann; Chassiniol; Thomas, 2007) fluorescncia de raio X por
energia dispersiva (Teixeira et al., 2009), espectrofotometria UV/Vis (Oliveira; Korn, 2006) e tcnicas eletroanalticas como titulao condutomtrica (Avelar; Barbeira, 2007), voltametria de redissoluo catdica (Ferreira;
Lima; Barbeira, 2008) e amperometria (Paula et al., 2008). No texto abaixo
segue uma breve descrio dos trabalhos envolvendo a determinao de
espcies aninicas em bioetanol.
965
Bruning e Malm (1982), em seu trabalho pioneiro de anlise dos contaminantes em bioetanol, determinaram CN, Cl, SO42 e S2 em diversas
usinas produtoras deste biocombustvel . As tcnicas utilizadas foram a titulao potenciomtrica de precipitao para Cl e S2, a colorimetria para
CN e a gravimetria para SO42.
Munoz et al. (2004) determinaram Cl, SO42 e NO3 em bioetanol por
eletroforese capilar utilizando deteco eletroqumica sem contato. Este
sistema deteco baseia-se na medida de condutividade sem contato com a
soluo. Esse trabalho permitiu a quantificao simultnea de Cl, SO42 e
NO3 e outros ctions em bioetanol de maneira simples, rpida e com elevada confiabilidade. A calibrao foi realizada utilizando o on lactato como
padro interno para os nions. O pr-tratamento da amostra utilizado no
mtodo foi a completa evaporao do etanol seguida pela redissoluo do
resduo obtido em gua deionizada. Os limites de deteco alcanados nesse trabalho em g L1 foram de 60, 80, 80 respectivamente para Cl, NO3,
e SO42.
Pereira et al. (2004) desenvolveram um mtodo para determinar Cl e
SO42 utilizando a eletroforese capilar de zona com deteco indireta por
UV. A determinao foi feita utilizando eletrlito contendo o cromforo
cromato e brometo de hexametnio como modificador de fluxo osmtico.
Nesse trabalho as amostras foram preparadas por evaporao do etanol e
posterior redissoluo em gua deionizada. Com este procedimento foram
obtidas curvas analticas com faixa linear de 0,0650,65 mg kg1 para o Cl
e 0,254,0 mg kg1 para o SO42. Os limites de deteco alcanados em mg
kg1 foram de 0,041 para o SO42 e 0,033 para o Cl. Os resultados de estudos de recuperao obtidos ficaram na faixa de 85,4-103,3%. Comparaes
feitas com o mtodo oficial para anlises destes nions em amostras de bioetanol mostraram resultados compatveis.
Pereira et al. (2006), novamente utilizando a eletroforese capilar, determinaram Cl, SO42 e outras espcies orgnicas em bioetanol em meio
de nitrato e cido monocloroactico com deteco indireta por UV. Nesse
trabalho os autores utilizaram nitrato como cromforo, o que vantajoso
devido toxicidade do cromato que foi previamente utilizado como cromforo por esses autores. Esta mudana no trouxe prejuzo ao mtodo, o
qual se mostrou capaz de determinar quantidades muito abaixo dos limites
recomendados pela legislao. Os limites de deteco alcanados Neste trabalho foram de 27 g kg1 para o SO42 e 16 g kg1 para o Cl.
966
Herrmann, Chassiniol e Thomas (2007) desenvolveram um mtodo

para determinao de Cl, SO42 em etanol utilizando uma tcnica de injeo direta em cromatografia inica. Em contraste com as outras tcnicas de
supresso, o novo mtodo proporciona uma linha de base estvel a cada injeo. As propriedades dinmicas desta tcnica permitem uma capacidade
supressora suficientemente independentemente da fora inica do eluente.
As tcnicas eletroqumicas tm sido utilizadas em sistemas de deteco
em cromatografia inica e eletroforese capilar; no entanto, elas tambm tm
contribudo consideravelmente para a determinao de nions inorgnicos
em bioetanol por meio da aplicao direta destas tcnicas nas anlises, fato
que pode ser verificado nos trabalhos que seguem descritos abaixo.
Avelar e Barbeira (2007) desenvolveram dois mtodos utilizando a tcnica de titulao condutomtrica para determinao de Cl, com soluo
de AgNO3, e para a determinao da acidez total, com soluo de NaOH,
em bioetanol. Os estudos de recuperao ficaram na faixa de 98,3-101,5%
para o Cl e 98,7-102,7% para a acidez total. Os resultados obtidos em anlises de amostras de bioetanol, comparando com o mtodo oficial, foram
satisfatrios. O limite de deteco alcanado para Cl foi de 0,88 mg L1 e
para a acidez total foi de 3 mg L1.
Ferreira, Lima e Barbeira (2008) determinaram Cl utilizando a tcnica
de voltametria de redissoluo catdica com eletrodo gotejante de mercrio
com apenas 10 s de deposio sob agitao. O mtodo foi comparado com
a determinao potenciomtrica obtendo-se resultados compatveis entre
si e com menor limite de deteco, que foi de 0,040 mg L1, para o mtodo
voltamtrico desenvolvido.
Paula et al. (2008) empregaram um sistema FIA (flow injection analysis)
com deteco amperomtrica para a quantificao de Cl em bioetanol utilizando um eletrodo de carbono vtreo recoberto por um filme de polianilina. O mtodo baseado no fato dos processos redox da anilina dependerem
da incorporao/expulso de nions na estrutura do filme polimrico para
que a eletroneutralidade deste seja mantida. O processo de incorporao/
expulso atribui ao filme seletividade para nions de pequeno raio de hidratao, como o Cl. As anlises por injeo em fluxo foram realizadas
empregando-se glicina como soluo carregadora, mantendo o potencial do
eletrodo de trabalho em um valor suficientemente positivo para que o filme de polianilina sofresse oxidao, na presena de ons cloreto. O mtodo
967
permitiu a anlise direta das amostras comerciais de bioetanol dispensando

qualquer procedimento de pr-tratamento da amostra. Este mtodo mostrou resultados compatveis aos obtidos pelo mtodo oficial em anlises de
amostras de bioetanol e limite de deteco de 3,7x106 mol L1.
Teixeira et al. (2009) desenvolveram um mtodo para a quantificao
simultnea de Cl e SO42 em bioetanol empregando a tcnica de fluorescncia de raio X por energia dispersiva EDXRF (energy dispersive X-ray
fluorescence). A anlise baseou-se na precipitao destes nions como AgCl
e BaSO4 e aps uma etapa de filtrao, os sais ficaram retidos em papel de
filtro, sendo este diretamente analisado por EDXRF. Os teores de SO42
e Cl foram, ento, determinados indiretamente por meio das linhas espectrais da prata e do brio. Este mtodo mostrou-se eficiente e confivel
mediante estudo de recuperao e comparao com o mtodo oficial para
a quantificao simultnea de SO42 e Cl em bioetanol. O fato de os precipitados poderem ser analisados diretamente no papel de filtro conferiu
grande praticidade ao mtodo analtico proposto. Os limites de deteco alcanados em g L1 foram 30 e 25 respectivamente para o sulfato e cloreto.
Oliveira e Korn (2006) utilizaram um sistema de anlise por injeo sequencial SIA (sequential injection analysis) com deteco espectrofotomtrica para a quantificao de SO42 em bioetanol. O mtodo baseado na reao qumica entre o SO42 e o complexo de brio com dimetilsulfonazo(III).
O sulfato desloca o brio do complexo, formando o precipitado BaSO4 e
liberando o complexante orgnico. O complexo orgnico absorve fortemente em 665 nm. Assim, a diminuio da absorbncia em 665 nm causada pelo deslocamento do brio foi empregada como sinal analtico para a
quantificao deste nion em bioetanol. O pr-tratamento requerido pelo
mtodo foi a queima da amostra seguida pela dissoluo das cinzas em gua
deionizada. Este mtodo apresentou um limite de deteco de 0,27 mg L1,
valor bem abaixo da concentrao mxima de sulfato permitida pela ANP,
e resultados em anlises de bioetanol compatveis com os obtidos pelo mtodo oficial.
Os mtodos analticos desenvolvidos para a quantificao de nions
inorgnicos em bioetanol discutidos anteriormente so caracterizados por
excelente desempenho analtico, permitindo anlises rpidas e confiveis
com baixssimos requisitos quanto ao pr-tratamento da amostra. Verifica-se uma predominncia da tcnica de eletroforese capilar, pois esta permite
968
a anlise simultnea de nions com baixo consumo de amostra e reagentes.

Em relao aos sistemas de deteco, existe forte prevalncia das tcnicas
espectrofotomtricas e eletroqumicas que so caracterizadas por elevada
sensibilidade aliada a um custo instrumental relativamente baixo. Essa
grande variedade de mtodos analticos com comprovada eficincia extremamente importante para o controle de qualidade do bioetanol, pois
permite pr em prtica normas tcnicas mais flexveis e que admitam mais
de um mtodo analtico tornando-as mais versteis e, portanto, mais fceis
de serem adotadas.
Anlise de espcies orgnicas em bioetanol combustvel

Os principais contaminantes orgnicos presentes no bioetanol compreendem uma grande quantidade de compostos e podem ser divididos em
duas categorias: substncias mais volteis e menos volteis que o bioetanol,
uma vez que este combustvel obtido por destilao. Os contaminantes
menos volteis so denominados lcoois superiores e so constitudos
principalmente pelos lcoois n-proplico, isobutlico e isoamlico. O grau
de ocorrncia destes compostos no produto final varivel e diretamente
dependente da eficincia do processo de destilao empregado nas usinas
de produo. Os contaminantes mais volteis que o etanol constituem suas
impurezas quantitativamente mais significativas e so constitudos principalmente por metanol, acetaldedo/acetal, acetato de etila, outros steres,
cetonas, furfuraldedo e aldedos superiores.
No entanto, estes contaminantes constituem uma mistura de componentes qumicos muito instveis ou reativos entre si, sendo que suas propores
tendem a alterar-se no decorrer da produo, posterior estocagem e distribuio do produto (Bruning; Malm, 1982). Soma-se a isso, ainda, que a
queima parcial ou incompleta desse combustvel ou a sua evaporao representam uma grande fonte de emisso destas substncias para a atmosfera,
sendo que alguns destes compostos so reconhecidamente carcinognicos
e/ou mutagnicos dependendo do grau e tempo de exposio (Who, s. d.).
Mesmo diante de todos os argumentos apresentados anteriormente,
verifica-se na literatura cientfica especializada que a anlise da maioria
desses contaminantes no bioetanol no est completamente sistematizada
969
e nem se inclui como parte dos requisitos preconizados nas normas oficiais
da ABNT, ASTM ou ECS para o controle de qualidade desse combustvel.
Com o aprimoramento das tecnologias disponveis atualmente, os mtodos de anlise instrumentais, como mtodos cromatogrficos (Bruning;
Malm, 1982; Saczk et al., 2005a; Saczk et al., 2005b; Saczk et al. 2006; Coutrim; Nakamura; Collins, 1993; Vilar et al., 2003), de anlise por injeo
sequencial (Vilar et al., 2003), eletroforese capilar (Pereira et al., 2006), espectrofotomtricos (Teixeira et al., 2004) e eletroqumicos (Rodgher et al.,
2006; Romanini; Trindade; Zanoni, 2009; Rodgher et al., 2006; Saczk et
al., 2002), tm sido utilizados para a deteco e quantificao de diversos
contaminantes orgnicos no bioetanol, validando esses mtodos instrumentais como uma possibilidade real de utilizao na anlise desses contaminantes. Percebe-se, ainda, a alta confiabilidade destes mtodos associada
aos baixos limites de deteco, elevada sensibilidade e seletividade, caractersticas que permitiram uma srie de inovaes tecnolgicas em termos de
controle de qualidade do etanol, permitindo tambm a introduo de novas
normas oficiais e a melhoria das j existentes, levando a uma anlise mais
detalhada da composio deste biocombustvel.
As contribuies analticas mais recentes em relao ao desenvolvimento das tcnicas alternativas na anlise de traos de compostos orgnicos em
etanol so relatadas nesta seo e esto sumarizadas na Tabela 26.5.
De acordo com a literatura, o primeiro estudo independente e pioneiro
sobre a determinao de espcies qumicas em bioetanol foi realizado na
dcada de 1980 por Bruning e Malm (1982). Foram analisadas amostras de
bioetanol obtidas de diferentes destilarias e verificouse que, independentemente da origem do bioetanol, seus principais contaminantes orgnicos
foram sempre o propionato de etila e o acetal. Nesse estudo foi detectada
apenas uma pequena quantidade de acetaldedo, reconhecidamente um dos
principais contaminantes do bioetanol, e grande quantidade de acetal. Segundo os autores, a produo do acetal por meio da reao entre o bioetanol
e o acetaldedo ocorre durante o armazenamento deste combustvel, sendo
esta reao responsvel pela baixa concentrao de acetaldedo encontrada. Assim, esse trabalho demonstrou que o bioetanol e seus contaminantes
constituem uma mistura de componentes qumicos muito reativos entre
si e, portanto, suas propores tendem a sofrer alteraes no decorrer da
estocagem.
970
Tabela 26.5 Metodologias analticas desenvolvidas para a anlise de contaminantes orgnicos

em bioetanol comercial
Analito
2furfuraldedo
5hidrximetil furfural
Acetaldedo
Tcnica
Limite de
Deteco
LSV
35,2 mg L1
Saczk et al., 2002
HPLCED
1,7 ng L1
Saczk et al., 2006
HPLCED
1,8 ng L
Referncia
Saczk et al., 2006
GC
N/E
CE
0,45 mg L1
HPLCUV vis
0,00203 mg L1
Saczk et al., 2005a
0,00380 mg L
Saczk et al., 2005b
HPLCED
Bruning; Malm, 1982

1
SWV
0,0359 mg L1
SWV
0,0105 mg L
Rodgher et al, 2006b

Rodgher et al, 2006a
Acetato de metila
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
Acetato isoproplico
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
lcoois superiores
GC
N/E
Aldedos totais
Butiraldedo
SIA-HPLCUV/vis
Bruning; Malm, 1982
0,060 mg L
F. S. Oliveira et al., 2005
HPLCED
1,9 ng L1
Dietil ter
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
Dimetil ter
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
CE
0,58 mg L1
Dimetilcetona
HPLCED
GC
Formaldedo
2,0 ng L
Saczk et al., 2006

Saczk et al., 2006
N/E
Bruning; Malm, 1982
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
FIA UV vis
0,030 mg L1
Formiato de etila
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
Metanol
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
Metanol
Metil-etilcetona
FTIR
N/E
HPLCED
1,8 ng L1
Carneiro et al., 2008

Saczk et al., 2006
Propanaldedo
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
Propionato de etila
GC
N/E
Bruning; Malm, 1982
Solvente Orange 7
SWV
0,0249 mg L1
Romanini; Trindade;
Zanoni et al., 2009
N/E = no especificado; CE = eletroforese capilar; UV Vis = espectrofotometria molecular no ultravioleta e visvel; GC = cromatografia em fase gasosa, HPLCUV Vis = cromatografia lquida de alta
eficincia com deteco no ultravioleta e visvel; HPLCED = cromatografia lquida de alta eficincia
com deteco eletroqumica; FIAUV Vis = anlise por injeo em fluxo com deteco no ultravioleta
e visvel; FTIR = infravermelho com transformada de Fourier; SWV = voltametria de onda quadrada;
LSV = voltametria de varredura linear.
971
As tcnicas de separao HPLC (high performance liquid chromatography) e GC (gas chromatography) so as mais utilizadas para a determinao
de compostos carbonlicos em matriz alcolica, porm a determinao direta destes compostos no observada, devido baixa sensibilidade apresentada na deteco espectrofotomtrica. No entanto, essa limitao pode
ser contornada por meio da derivatizao, ou seja, a transformao de um
composto, usando um derivado apropriado, em outro composto de fcil
deteco por UV/Vis.
Como o bioetanol atualmente uma commodity importante no cenrio
mundial, uma consequncia direta do crescente interesse por este produto
a constatao da publicao de um grande nmero de artigos cientficos
nos ltimos anos no que se refere ao controle de qualidade deste biocombustvel. Dessa forma, uma descrio resumida dos trabalhos envolvendo
a determinao de contaminantes orgnicos em bioetanol fornecida logo a
seguir.
Saczk et al. (2005a, 2005b) determinaram acetaldedo utilizando a tcnica de cromatografia lquida de alta eficincia, com detector espectrofotomtrico UV-vis (2005a) e com detector eletroqumico (2005b). Ambos
os mtodos so baseados na derivatizao do acetaldedo com 2,4-dinitrofenilhidrazina, DNPH, cujo produto pode ser detectado tanto espectrofotometricamente quanto eletroquimicamente. Os mtodos utilizados pelos
autores foram aplicados para a quantificao de acetaldedo em amostras
comerciais de bioetanol. O mtodo utilizando deteco espectrofotomtrica alcanou limites de deteco de 2,03 g L1 e recuperao com valores
entre 98,7-102%. J o mtodo com deteco eletroqumica alcanou o limite de deteco de 3,80 g L1 e estudos de recuperao com valores entre
99-102%. Os teores de acetaldedo encontrados nas amostras de bioetanol
variaram entre 61,5 e 201 mg L1.
Saczk et al. (2006) determinaram 5-hidroxifurfural, 2-furfuraldedo, butiraldedo, acetona e metiletilcetona derivatizados com 2,4-dinitrofenilhidrazina, DNPH, utilizando HPLC-ED. Os compostos derivatizados foram
separados em coluna de fase reversa sob condies isocrticas de mistura
binria de metanol/LiCl(aq). A deteco foi feita com eletrodo de carbono
vtreo possibilitando faixa linear de 5 a 400 ng mL1, um limite de deteco
de 1,7 a 2,0 ng mL1 e recuperao analtica na faixa de 95-103% utilizando
um volume de injeo de 20 L.
972
Coutrim, Nakamura e Collins (1993) separaram e quantificaram cetonas e aldedos produzidos durante a combusto em motores de automveis,
utilizando a mistura bioetanol-gasolina. Esse mtodo envolveu a derivatizao dos analitos com o dinitrofenilhidrazina, DNPH, e monitoramento
dos produtos obtidos por HPLC com detector UVVis utilizando comprimento de onda de 254 e 365 nm. Os limites de deteco obtidos para as
espcies estudadas foram inferiores a 0,15 mol L-1.
Vilar et al. (2003) utilizaram a tcnica de cromatografia gasosa acoplada
espectrometria de massas (GCMS) para a caracterizao dos constituintes orgnicos do bioetanol anidro. As amostras foram preparadas passando por uma etapa de separao com cromatografia lquida em uma coluna
preparativa contendo slica gel ativada e, posteriormente, as fraes foram
analisadas por GC-MS. Os principais contaminantes encontrados nesta
matriz foram compostos aromticos, hidrocarbonetos e compostos oxigenados como aldedos, cetonas e lcoois. Nesse trabalho foi apresentada a
identificao de cerca de 55 espcies orgnicas utilizando cromatografia
gasosa, seguido pela aquisio do espectro de massa e posterior comparao com os dados espectrais a partir da biblioteca do equipamento. Nesse
estudo, os hidrocarbonetos saturados lineares e hidrocarbonetos aromticos foram eludos na primeira frao e compostos oxigenados como aldedos, cetonas e lcoois eludos na segunda frao, quando o nhexano,
nhexano-benzeno (1:1, v/v) e diclorometano foram usados como fases
mveis. Uma terceira frao com baixa resoluo cromatogrfica tambm
foi obtida.
Oliveira et al. (2005) desenvolveram um mtodo analtico para a determinao de aldedos totais em bioetanol empregando um sistema de anlise
por injeo sequencial com deteco espectrofotomtrica. A deteco foi
baseada na formao de um composto azul, produto da reao de aldedos
alifticos com 3-metil-2-benzotiazolona hidrazona (MBTH) em presena
de Fe3+. Com o objetivo de maximizar a velocidade da reao entre os aldedos e o MBTH, a bobina reacional foi inserida em um forno de microondas domstico. O intervalo linear de resposta do mtodo foi de 0,3 a 6
mg L1, com limite de deteco de 60 g L1, sendo obtida uma frequncia
analtica de 10 determinaes por hora. O mtodo analtico desenvolvido foi
empregado para a quantificao de aldedos totais em amostras de bioetanol combustvel, sendo os resultados comparados aos obtidos com a tcnica
973
de HPLC utilizando 2,4dinitrofenilhidrazina como agente derivatizante.

Os autores observaram que ambos os mtodos forneceram resultados concordantes entre si, sendo que os teores de aldedos presentes nas diferentes
amostras analisadas foram de 90 a 1290 mg L1.
Pereira et al. (2006) empregaram a tcnica de eletroforese capilar para a
determinao de dimetil cetona, acetaldedo e formaldedo em bioetanol utilizando o procedimento de derivao de aldedos e cetonas com 3metil2
benzotiazolona-hidrazona (MBTH). As espcies foram formadas e, aps
isso, detectadas espectrofotometricamente em 216 nm. Essa metodologia
permitiu a determinao das espcies orgnicas no intervalo linear de 32,0
91,3 mg L1, com limites de deteco entre 0,45 e 0,58 mg L1 respectivamente para acetaldedo e acetona e recuperao analtica entre 93,8-99,7%.
Teixeira et al. (2004) determinaram formaldedo por meio da determinao do produto da reao deste composto com a espcie Fluoral P por
espectrofotometria UV-Vis em 412 nm. O produto a reao entre formaldedo e Fluoral P foi quantitativamente retido em uma coluna C18 possibilitando a deteco aps sua eluio. A utilizao da injeo em fluxo (FIA)
permitiu a determinao de formaldedo na faixa de 0,050 1,5 mg L1,
com um limite de deteco de 30 g L1 e uma frequncia analtica de 20
determinaes por hora.
Rodgher et al. (2006a) utilizaram tcnica de voltametria de onda quadrada com eletrodo de gota pendente de mercrio, para a determinao de
aldedos totais em amostras de bioetanol hidratado. O mtodo foi baseado
na derivatizao dos aldedos presentes na amostra com sulfato de hidrazina
e posterior deteco dos compostos derivatizados por meio do monitoramento do pico voltamtrico relativo reduo destes compostos. Os experimentos voltamtricos foram conduzidos em meio de tampo acetato pH
5,0 e o tempo de reao entre os aldedos e a hidrazina foi de 8 min. O mtodo foi empregado para a quantificao de aldedos totais em cinco amostras
comerciais de bioetanol. Os teores de aldedos totais encontrados nas amostras comerciais variaram entre 2 e 8 mmol L1, indicando que os aldedos so
contaminantes orgnicos presentes em grande quantidade no bioetanol. Os
resultados obtidos em estudos de recuperao ficaram entre 95 e 101 % e o
limite de deteco alcanado foi de 2,38x107 mol L1. Estes resultados indicam que o mtodo analtico desenvolvido pode ser empregado com xito
para a determinao de aldedos em amostras comerciais de bioetanol.
974
Romanini et al. (2009) desenvolveram um mtodo eletroanaltico rpido

e preciso para a determinao do corante solvent orange 7 (SO-7), usado
comercialmente como um marcador em amostras de bioetanol. O SO-7
foi oxidado em uma mistura de soluo tampo Britton-Robinson com N,
N- dimetilformamida em um eletrodo de carbono vtreo e apresentou um
pico de oxidao bem definido em torno +0,70 V vs. Ag/AgCl, que foi monitorado por voltametria de varredura linear (LSV) e voltametria de onda
quadrada (SWV). Utilizando a tcnica SWV, foi possvel obter uma relao
linear entre a corrente de pico e a concentrao de corante SO-7 no intervalo
de 4,0 106 a 18,0 106 mol L1 e limite de deteco de 0,90x107 mol
L1. O mtodo desenvolvido foi aplicado com sucesso na quantificao direta do SO-7 em amostras comerciais de bioetanol combustvel, resultando
em uma recuperao analtica de 97,2-98,4%.
Rodgher et al. (2006b) determinaram acetaldedo em bioetanol utilizando voltametria de pulso diferencial para detectar o produto da derivatizao entre acetaldedo e 2,4-dinitrofenilhidrazina. Este mtodo possibilitou
a determinao desta espcie na presena de 0,1 mol L1 de perclorato de tetrametilamnio aps 10 min de reao. O mtodo possibilitou uma faixa linear de 1,00x106 a 1,00x104 mol L1 e um limite de deteco de 8,14x107
mol L1. Os resultados de recuperao, 98-101%, mostraram boa exatido
do mtodo.
Saczk et al. (2002) determinaram 2-furfuraldedo em bioetanol e gua
utilizando eletrodo de carbono vtreo e LiCl e LiOH como eletrlitos-suporte. O mtodo desenvolvido possibilitou uma faixa de trabalho de
9,5x104 a 5,8x103 mol L1 e um limite de deteco de 8,0 x 104 mol L1.
Carneiro et al. 2008 desenvolveram um mtodo para determinar metanol em bioetanol utilizando um modelo de calibrao por regresso dos
mnimos quadrados parciais em espectroscopia de infravermelho mdio e
prximo com transformada de Fourier. O mtodo desenvolvido foi comparado com o mtodo de referncia utilizando a cromatografia gasosa com
detector de ionizao de chama e os resultados obtidos foram compatveis,
mostrando melhor exatido nos resultados obtidos pelo mtodo desenvolvido pelos autores.
Do total de contaminantes orgnicos avaliados nos trabalhos citados,
pode-se destacar mais de uma dezena de substncias que podem interferir
975
nas propriedades do combustvel, assim como afetar o meio-ambiente e diminuir a vida til de peas e dos motores dos veculos. De uma maneira geral, os procedimentos analticos empregados para o monitoramento de contaminantes orgnicos so realizados majoritariamente por meio de mtodos
cromatogrficos acoplados aos detectores espectrofotomtricos, enquanto
os mtodos eletroanalticos aparecem como uma alternativa satisfatria na
anlise desses contaminantes e, tambm, como uma ferramenta analtica
para validao dos mtodos usados oficialmente. Embora grande parte dos
mtodos desenvolvidos ainda no seja utilizada como mtodos oficiais de
anlise pelas agncias reguladoras nacionais e internacionais, visvel que a
maioria deles possui seletividade e sensibilidade suficientes para o propsito de monitoramento nos nveis de contaminao desse combustvel.
Concluses
Os novos mtodos analticos descritos na literatura para avaliao da
qualidade do bioetanol representam atualmente um nmero muito maior
do que os mtodos oficiais utilizados para aferir a qualidade deste biocombustvel, mostrando a existncia de uma grande preocupao com a sua
qualidade.
No desenvolvimento destes novos mtodos analticos prevalece uma
maior ocorrncia de determinaes de espcies inorgnicas, principalmente
de ons metlicos, em comparao com as determinaes de espcies orgnicas, diminuio esta possivelmente decorrente da complexidade biolgica da matriz estudada.
Nos novos mtodos analticos desenvolvidos para aferir a qualidade do
bioetanol existe uma grande predominncia dos mtodos espectroscpicos
para a determinao de espcies inorgnicas, principalmente metais, ao
passo que em relao s espcies orgnicas existe uma maior incidncia de
mtodos cromatogrficos.
As tcnicas instrumentais utilizadas nestes novos mtodos mostram a
existncia de um nmero maior de tcnicas isoladas em relao s tcnicas
acopladas, por exemplo, GC/MS e ICP/MS, tanto para espcies orgnicas
quanto para espcies inorgnicas no desenvolvimento dos novos mtodos
para a avaliao da qualidade do bioetanol.
976
As perspectivas de desenvolvimento de novos mtodos analticos apontam para a determinao de outras espcies qumicas alm daquelas normalmente avaliadas pelas agncias reguladoras e para a busca de limites menores
do que os atualmente utilizados para a avaliao da qualidade do bioetanol.
Concluindo, a pesquisa por novos mtodos analticos para avaliao da
qualidade do bioetanol poder contribuir de maneira significativa para assegurar a sustentabilidade da utilizao deste biocombustvel, pois est composta de um acervo com muitas opes de mtodos analticos para esta matriz com eficincia demonstrada.
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27
Aspectos relacionados produo
de biodiesel com aproveitamento de
resduos, caracterizao e testes de misturas
em motores de combusto interna
Ricardo Alan V. Ramos, Fernando H. Dib,
Paulo Srgio B. dos Santos, Lucas M. Scarpin,
Aparecido C. Gonalves, Antonio J. Diniz, Joo Batista C. Silva1
Introduo
Neste captulo so apresentados aspectos relacionados produo de
biodiesel, pelo processo de transesterificao e rota metlica, utilizando
como matria-prima o leo residual reciclado, e posterior aplicao em
motores de combusto interna, com destaque para o seu uso conjunto com
um gerador de eletricidade. Com isso, visa-se a diversificao da matriz
energtica brasileira e a minimizao dos impactos ambientais decorrentes
do descarte inadequado desses leos.
Para a abordagem desse assunto, inicialmente feita uma contextualizao da demanda energtica por combustveis lquidos em nvel mundial
e nacional, destacando-se a participao do biodiesel no atendimento desta
demanda, assim como a produo deste combustvel por meio de fontes
renovveis, complementada por uma reviso bibliogrfica sobre o assunto.
Na sequncia so apresentados dados histricos e de produo do biodiesel em nvel mundial e nacional, bem como as matrias-primas disponveis
1 Os autores agradecem empresa Biocom Biocombustvel S.A. pela doao do reator Biocom
100 e s empresas Granol e Bertin (atualmente Grupo JBS) pelo fornecimento de biodiesel
B100 de origem vegetal e animal, respectivamente. Os autores tambm so gratos Fapesp
pelo financiamento de um projeto de pesquisa (Processo 2005/01197-6) mais amplo no qual
esto inseridos os temas abordados.
980
e os processos produtivos envolvidos, sendo feitos comentrios a respeito

das propriedades fsico-qumicas e limites para certificao/especificao
do biodiesel.
Outro aspecto importante abordado a questo das patentes na rea de
biodiesel, sendo apresentadas as quantidades registradas e a sua distribuio por rea de aplicao, assunto este de interesse para um futuro prximo.
Depois de todas essas consideraes so apresentados alguns trabalhos
que vm sendo desenvolvidos na rea de biodiesel no mbito do Ncleo
de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen) do
Departamento de Engenharia Mecnica da Unesp de Ilha Solteira. Estes
incluem desde a etapa da reciclagem do leo residual de fritura, passando
pela produo e caracterizao do biodiesel com essa matria-prima e, por
fim, testes em um motor diesel que aciona um gerador de eletricidade e
realizao de comparao do desempenho com relao ao biodiesel B100
de origem animal (sebo) e vegetal (soja), utilizando vrios percentuais de
mistura biodiesel-diesel.
Alm disso, so apresentados alguns outros trabalhos ainda em fase de
desenvolvimento, sendo que dentre estes podem ser destacados a construo de uma miniusina de baixo custo para produo de biodiesel e o desenvolvimento de um sensor para separao da fase glicerol-biodiesel aps o
processo de decantao da mistura que passou pelo processo de transesterificao, bem como as vrias formas de utilizao dos subprodutos.
Por fim, so apresentadas algumas consideraes e possibilidades para
estudos futuros, alm das referncias bibliogrficas usadas.
Contextualizao
No que tange s questes energticas, h algumas dcadas a sociedade
tem somado esforos em pesquisas para o uso de energias renovveis, ambientalmente corretas e economicamente viveis.
De acordo com International Energy Outlook 2010 (IEO 2010), publicado pela Administrao de Informaes de Energia (Energy Information
Administration EIA) do Departamento de Energia dos Estados Unidos, o
consumo de energia no mundo foi de 522 quintilhes de joules (1018J) em
2007 e estima-se que em 2035 o consumo ser de 779 quintilhes de joules,
conforme representado no Grfico 27.1.
ASPECTOS RELACIONADOS PRODUO DE BIODIESEL
981
Grfico 27.1 Consumo mundial de energia de 2007 a 2035 (1018 J)

Fonte: Adaptado de EIA (2010)
A emisso de dixido de carbono em 2007 foi de 29,7 bilhes de toneladas, com uma projeo de 42,4 bilhes de toneladas para 2035, devido
previso de forte crescimento do produto interno bruto (PIB) ao longo
desse tempo, pelas economias emergentes, que resultar em um aumento
na demanda de energia (EIA, 2010).
Os pases em desenvolvimento, conduzidos pelo BRIC (Brasil, Rssia,
ndia e China), sero responsveis por cerca de 84% desse aumento no consumo de energia, sendo que as fontes de combustveis fsseis continuaro
a fornecer grande parte da energia utilizada no mundo. J a previso do
consumo das fontes renovveis ser de aproximadamente 105 quintilhes
de joules, conforme mostrado no Grfico 27.2.
Grfico 27.2 Energia consumida no mundo por fonte (1018 J)

982
Conforme representado no Grfico 27.2, os combustveis lquidos incluem os derivados de petrleo e no derivados de petrleo como o etanol e
o biodiesel, dentre outros.
Estima-se que em 2035 o setor de transportes ser responsvel por 61%
do consumo dos combustveis lquidos fornecidos mundialmente, conforme representado no Grfico 27.3 (EIA, 2010).
Grfico 27.3 Consumo de combustvel lquido por setor (em milhes de barris por dia)
Para os prximos dez anos, a produo de petrleo e gs natural ser

expandida de forma acentuada, aumentando 161 e 187%, respectivamente,
e a demanda de biocombustveis lquidos tambm ter crescimento mdio
anual de 8,7% para o etanol e 9,8% para o biodiesel, implicando investimentos de R$ 66 bilhes. Inquestionavelmente, o setor de bioenergia contribuir imensamente com a gerao de emprego e renda no campo e com a
dinamizao das economias locais (EPE, 2010).
O relatrio final do Balano Energtico Nacional de 2010 (BEN, 2010),
que apresenta os dados do consumo de energia por setor no Brasil em 2009,
mostra que os setores da indstria e de transporte foram responsveis por
cerca de 64,3% da energia consumida no pas, conforme representado no
Grfico 27.4.
Em 2007, a frota de veculos no Brasil era de 25,6 milhes, o equivalente
a 2,5% do mundo, sendo 20,4 milhes automveis, 3,3 milhes de veculos comerciais leves, 1,5 milhes de caminhes e quatrocentos mil nibus
(EPE, 2009 apud MCT, 2009).
983
Grfico 27.4 Consumo de energia por setor no Brasil em 2009

Fonte: Adaptado de EPE (2010)
Dados do BEN-2010 indicam que o leo diesel o combustvel mais

utilizado para o setor de transporte no Brasil e que no ano de 2009 representou 48,4% do consumo total para este setor, conforme representado no
Grfico 27.5.
Grfico 27.5 Consumo de combustvel no setor de transporte no Brasil em 2009

Fonte: Adaptado de EPE (2010)
Segundo o Anurio Estatstico de 2009, da Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis (ANP), em 2008 as importaes de derivados de petrleo totalizaram 17,9 milhes de m3, volume 12,2% superior
ao registrado em 2007. As importaes de derivados energticos em 2008
representaram 54,2% do total e aumentaram 22,8% em relao a 2007.
984
O leo diesel foi o derivado energtico importado em maior quantidade

no ano, contribuindo com 32,5% do volume total importado, o que corresponde a 46% do gasto com as importaes de derivados em 2008, que
totalizaram US$ 11,2 bilhes (ANP, 2009).
Historicamente o Brasil um grande contribuinte para a reduo do uso
de combustveis fsseis no mundo, apresentando posio de destaque na
tecnologia e produo de etanol e tem intensificado a produo de biodiesel, com o incio do Programa Nacional de Produo e Uso do Biodiesel
(PNPB) em 2004, reafirmando, assim, o interesse nos biocombustveis
como caminho natural para a diminuio do uso do petrleo e de seus derivados (MCT, 2009).
Diante desse contexto, pesquisadores brasileiros tm aumentado a busca por medidas mitigadoras ou de reverso aos danos j causados no meio
ambiente, com o uso de energias limpas e renovveis, na qual o biodiesel
surge como um substituto parcial ou integral do leo diesel de petrleo,
tanto em motores de combusto interna de ciclo diesel automotivo (nibus,
caminhes, tratores etc.) quanto em estacionrios (geradores de energia
eltrica).
Indubitavelmente, o biodiesel representa um potencial importante
para o desenvolvimento energtico brasileiro, considerando a perspectiva
nacional de que a dimenso e a oportunidade para o mercado desse combustvel permitiro o desenvolvimento de toda a sua cadeia produtiva, possibilitando o surgimento e a evoluo de novas empresas no setor, as quais
contribuiro com o programa de desenvolvimento sustentvel e a reduo
das importaes de leo diesel.
Trabalhos relacionados ao assunto

Alm de algumas importantes publicaes, como Knothe, Van Gerpen e
Krahl (2006) e Van Gerpen et al. (2004), diversas outras contriburam para
o desenvolvimento deste captulo, e a seguir algumas delas sero apresentadas resumidamente, destacando-se primeiramente as que dizem respeito
aos processos de produo de biodiesel por transesterificao de leos de
diferentes origens, incluindo os residuais, por meio de rotas etlicas e/ou
metlicas e, depois, aquelas relacionadas com a aplicao desse combustvel
985
em motores de combusto interna, incluindo os destinados a acionamento

de geradores de eletricidade.
Trabalhos relacionados com a produo de biodiesel

por transesterificao
Costa Neto (2002) estudou a transformao do leo de soja refinado,
degomado e oxidado termicamente (usado em frituras e aquecido em laboratrio) em steres alqulicos, biodiesel, por meio da reao de transesterificao enzimtica usando lipases comerciais e lcoois de cadeias curtas,
metanol e etanol hidratado. Foi feita a caracterizao fsica e qumica dos
leos utilizados e verificada a eficincia do biocatalizador nas reaes de
transesterificao dos leos, entre outros parmetros. Por fim, as caractersticas dos steres obtidos por via enzimtica foram comparadas com as
dos mesmos obtidos por via qumica.
Wust (2004) props determinar a viabilidade tcnica da obteno de
biodiesel a partir dos resduos gordurosos desemulsificados. Os estudos
iniciaram com a caracterizao dos resduos, com especial ateno composio em cidos graxos, teor de umidade e cidos graxos livres. Uma das
principais caractersticas destes resduos a existncia de um elevado teor
de cidos graxos livres, resultantes da degradao da molcula do triglicerdeo. Aps a caracterizao, foram avaliados procedimentos para obteno
de steres de cidos graxos, buscando-se uma metodologia adequada para
a produo de biodiesel. Estes procedimentos foram baseados em reaes
de transesterificao com catlise bsica e cida e de esterificao com catlise cida. Os procedimentos baseados em reaes com catlise bsica
no apresentaram bons resultados e por este motivo foram explorados os
procedimentos baseados em reaes com catlise cida. Estas reaes foram
avaliadas utilizando-se diferentes condies de temperatura e presso e os
rendimentos lquidos observados foram estimados como prximos a 80%.
Ferrari (2005) buscou avaliar a taxa de converso do leo neutro de soja
em ster etlico (biodiesel) e o rendimento no processo de transesterificao, bem como caracteriz-lo segundo parmetros qumicos e fsicos, testando seu consumo em um gerador de energia eltrica. O rendimento do
processo de obteno do biodiesel adotado neste trabalho foi de 97,5%. As
perdas estimadas foram de 10%, que sendo reduzidas, em conjunto com
986
a recuperao do etanol e a comercializao da glicerina, podem tornar o

processo vivel. Os parmetros fsico-qumicos analisados esto de acordo com os limites estabelecidos pela Agncia Nacional de Petrleo, Gs
e Biocombustveis (ANP). O melhor desempenho do gerador de energia
eltrica foi observado quando se aplica a mistura do biodiesel com diesel de
petrleo (B20).
Nascimento et al. (2006) apresentaram informaes sobre a construo
e montagem de uma miniusina de biodiesel de baixo custo e de fcil operao, capaz de produzir 200 litros de biodiesel por batelada pelo processo
de transesterificao usando qualquer tipo de leo vegetal ou animal com
metanol ou etanol, para aplicao na zona rural do estado do Maranho. A
unidade constituda por quatro tanques, sendo um reator para a preparao do catalisador, um reator principal com aquecimento e agitao por reciclo, um tanque de decantao e lavagem com reaquecimento e sistema de
lavagem por borbulhamento e um tanque para recepo do lcool destilado
sob presso reduzida. Todos os tanques foram construdos com tecnologia
do Ncleo de Biodiesel da Universidade Federal do Maranho (UFMA).
A planta foi montada com custo mdio de R$ 50.000,00, equivalente a 10%
do investimento mnimo a ser feito na menor planta disponvel no mercado
at aquele momento. A planta passou por uma fase inicial de testes, habilitando-a para a realizao de processos de produo a partir de vrios leos
vegetais que j vinham sendo feitos em escala de laboratrio.
Wang et al. (2006) pesquisaram um mtodo em duas etapas para obteno do biodiesel a partir de leo de fritura usado. Foram adotadas duas
etapas para preparar o biodiesel a partir do leo de fritura usado, cuja acidez apresenta valor de 75,92 mg KOH/g de leo. Na primeira etapa de
produo, os cidos graxos livres presentes no leo de fritura usado foram
esterificados com metanol, utilizando sulfato de ferro como catalisador, e
na segunda etapa, os triglicerdeos presentes no leo de fritura foram transesterificados com metanol na presena do catalisador KOH. Os resultados
mostraram que o sulfato frrico apresentou alta eficincia para esterificao dos cidos graxos livres com metanol. A taxa de converso dos cidos
graxos livres alcanou 97,22% quando 2% (em massa) de sulfato frrico foi
adicionado reao contendo metanol e triglicerdeos na proporo 10:1
(razo molar) e reagido a 95C por 4 horas. O metanol foi evaporado a vcuo, e a transesterificao dos triglicerdeos remanescentes foi realizada a
987
65C por 1 hora em um sistema contendo 1% (massa) de hidrxido de potssio e razo molar de 6:1 de lcool em relao aos triglicerdeos. O produto final com 97,02% de biodiesel, obtido aps as duas etapas de catalisao,
foi analisado por cromatografia gasosa.
Santos et al. (2007) desenvolveram metodologias para a obteno de steres etlicos (biodiesel) a partir dos leos de soja residual e refinado. Foram
realizadas reaes de transesterificao alcalina dos leos de soja residual e
refinado variando-se a porcentagem do catalisador hidrxido de sdio na
reao (1 ou 2%). Foi avaliada a influncia do catalisador na quantidade dos
steres produzidos (biodiesel), viscosidade, densidade e ponto de nvoa. Os
resultados demonstraram que uma maior quantidade de steres foi obtida,
para ambos os leos, quando empregado 2% de NaOH nas reaes de transesterificao.
Morandim et al. (2008) fizeram um estudo comparativo da produo de
biodiesel proveniente de leo de fritura e leo de soja utilizando-se metanol via catlise bsica. Para isso, primeiramente foi determinado o melhor
catalisador, o etxido de sdio em ambos os casos numa concentrao de
0,8% no caso do leo de fritura e de 1% no caso do leo de soja. Escolhido
o catalisador, foram determinados a melhor relao molar leo/lcool (1:7
para o leo de fritura e 1:8 para o de soja), a melhor temperatura (50C para
o leo de fritura e 60C para o leo de soja) e o tempo de reao ideal (25
min para o leo de fritura e 45 min para o leo de soja), o que possibilitou
um rendimento de 80% no primeiro caso e de 94% no segundo caso. Cabe
salientar que o biodiesel obtido foi caracterizado por meio de anlises fsico-qumicas (densidade, viscosidade, corroso ao cobre, ndice de acidez, glicerina total e presso de vapor), estando todos os valores dentro dos limites
ideais, e que a porcentagem de converso foi determinada via cromatografia
gasosa (CG) e via titulao de xido reduo.
Oliveira, Dominiki e Santa Maria (2008) estudaram a capacidade de
converso do leo de soja via rotas metlica e etlica para produo de steres (metlicos ou etlicos) empregando o hidrxido de potssio como
catalisador. Empregando razo molar lcool/leo de 6:1, foram variadas
as condies de sntese: tipo de lcool (metanol ou etanol), quantidade de
catalisador (KOH) e temperatura de reao. Os resultados da rota metlica
foram comparados aos obtidos pela rota etlica e analisados por FT-IR (espectroscopia por infravermelho com transformada de Fourier).
988
Albuquerque et al. (2009) avaliaram as propriedades do biodiesel obtido

de diferentes fontes de biomassa (mamona, soja, algodo e canola) e suas
misturas binrias preparadas nas concentraes entre 20 e 80% em volume.
Foram utilizadas como parmetro para comparao as especificaes do
biodiesel impostas pela norma europeia (DIN-14214).
Trabalhos relacionados utilizao de biodiesel

em motores de combusto interna
Costa Neto et al. (2000) realizaram testes com biodiesel de leo de fritura usado em nibus de transporte urbano tendo sido verificado que, entre 3.000 e 5.000 rpm, a potncia efetiva e o torque do motor foram pouco
inferiores aos observados com leo diesel. No obstante, entre 1.500 e 3.000
rpm, os ndices obtidos para ambos foram praticamente idnticos. A maior
diferena verificou-se com relao emisso de fumaa, cuja reduo mdia foi 41,5%, medida em escala Bosch.
Bueno (2003) realizou uma abordagem alternativa para o levantamento
da taxa aparente de liberao de energia em motores diesel, promovendo
a separao entre a injeo e a queima do combustvel, considerando-se a
presena de combustvel no fluido de trabalho. Os resultados obtidos para
a massa total de combustvel queimada, sob tal abordagem, mostraram-se consideravelmente realistas. Exemplos da aplicao desta abordagem
durante o estudo da combusto de misturas entre leo diesel e biodiesel em
motores de ignio por compresso tambm foram reportados e discutidos
nesse trabalho.
Barbosa et al. (2006) avaliaram a eficincia trmica de um motor compresso funcionando em momentos distintos com diesel mineral e misturas
deste com biodiesel nas propores B2, B5, B20 e B100. Para realizao
dos ensaios, foi utilizado um motor ciclo diesel de um trator Valmet 85 ID,
modelo MWM-D225-4TVA, de 4 tempos, injeo direta, refrigerado
gua com 4 cilindros em linha, cilindrada total de 3.778 cm3, taxa de compresso 18:1, com potncia nominal segundo o fabricante de 78 CV (58,2
kW) a 2.300 rpm, seguindo-se a metodologia estabelecida pela norma NBR
5484 da ABNT, que se refere ao ensaio dinamomtrico de motores de ciclo
Otto e Diesel. Concluiu-se que a potncia do motor ao utilizar biodiesel foi
989
pouco inferior quela desempenhada pelo diesel mineral, chegando a uma

reduo mdia de 1,31%.
Bueno (2006) analisou as consequncias da adio de biodiesel (ster
etlico de soja) ao leo diesel e estabeleceu relaes de causa e efeito entre o
desempenho do motor e os processos de combusto e formao de mistura.
Por meio do estudo, pde ser observado que a adio de biodiesel nas concentraes estudadas (B5, B10, B15 e B20) favorece a converso de exergia
do combustvel em trabalho de expanso no interior do cilindro, proporcionando uma elevao na eficincia de converso do combustvel. Esta elevao de eficincia possui um impacto operacional relevante, proporcionando
uma reduo no consumo especfico de combustvel para as misturas estudadas e ganho de desempenho para a adio de biodiesel em concentraes
abaixo da correspondente mistura B10. Em patamares superiores ao B10,
o impacto da eficincia de converso superado pelos efeitos da reduo
de influxo de energia com o combustvel, obtendo-se desempenho ligeiramente inferior ao verificado com o leo diesel. Os resultados apresentados
demonstraram a atratividade, sob o ponto de vista operacional, da adio
de ster etlico de soja ao diesel sob forma de misturas parciais, sobretudo a
mistura B10, que ofereceu as melhores caractersticas quanto ao desempenho e ao consumo especfico.
Santos, Alves e Nbrega (2006) realizaram uma anlise comparativa do
consumo especfico de combustvel e das emisses reguladas (CO2, CO,
NOx, SO2 e O2) de um motor do ciclo diesel estacionrio operando com
diesel e biodiesel (B100), com rotao constante. De acordo com os resultados obtidos, observou-se que o desempenho do motor operando com os
dois combustveis prximo. O biodiesel testado mostrou uma pequena
desvantagem em relao ao consumo especfico diante do diesel. Este fato
pode ser explicado devido ao poder calorfico do biodiesel ser inferior ao
diesel fssil. Com relao s emisses, a concentrao de dixido de carbono foi aproximadamente a mesma: em relao concentrao do monxido
de carbono para potncia de at 3 kW, a variao foi semelhante para os
dois combustveis, entretanto, para 4 kW, o valor da concentrao do gs
aumentou de forma inesperada.
Mron Villarreyes et al. (2007) apresentaram um breve resumo sobre a
importncia das propriedades fsicas e sua relao com combusto interna,
990
propondo um mtodo para determinar a proporo volumtrica de biodiesel a qual ter uma combusto eficiente em motores de compresso. As
principais propriedades de injeo e atomizao relacionadas qualidade
de ignio do biodiesel foram mensuradas, como densidade, viscosidade e
tenso superficial para diesel mineral (B0), biodiesel (B100) e outras onze
misturas. Por meio do mtodo proposto, foi verificado que misturas de
diesel ao biodiesel etlico de leo de soja de B2 a B30 apresentam uma combusto interna satisfatria.
Pereira et al. (2007) realizaram experimentos para gerao de eletricidade usando misturas de diesel e biodiesel de leo de soja produzido por
processo de transesterificao usando metanol e KOH como catalisador.
As propriedades (densidade, ponto de fulgor, viscosidade, ponto de fluidez, ndice de cetano, corroso, resduo de carbono e contedo de cinza)
dos combustveis foram determinadas. A emisso dos gases de exausto
(CO, CO2, CxHy, O2, NO, NOx e SO2) tambm foi medida. Os resultados
mostraram que para todas as misturas testadas a gerao de eletricidade foi
assegurada sem problema. Tambm foi observado que as emisses de CO,
CxHy e SO2 diminuram no caso das misturas diesel-leo de soja. As temperaturas dos gases de exausto e as emisses de NO e NOx foram similares
ou menores que a do diesel.
Histrico do biodiesel e dados de produo

Aps a perfurao do primeiro poo de petrleo, em 27 de agosto de
1859, por Edwin Laurentine Drake, o mundo sofreu efetivamente um surto
epidmico de uso do petrleo, que de forma vertiginosa tem aumentado
o consumo a milhes de barris dirios, sendo que, concomitantemente, os
impactos ambientais referentes extrao e uso desse combustvel se elevaram em nveis alarmantes.
Muito antes de os temas relacionados educao ambiental, aquecimento global e energias renovveis se tornarem manchetes de jornais, em 1900
Rudolph Diesel apresentou, na Exposio Mundial de Paris, um motor de
ignio por compresso que funcionava com leo de amendoim, ou seja, um
biocombustvel (Biodieselbr, 2011). Na Figura 27.1 est representado esse
motor Diesel da primeira gerao.
991
Figura 27.1 Motor Diesel, primeira gerao

Fonte: Peswiki (2011)
No livro escrito por Diesel, Die Entstehung des Dieselmotors (O surgimento das mquinas diesel), no ltimo captulo, intitulado Combustveis
Lquidos, a companhia Otto demonstrou o funcionamento de um pequeno motor diesel com bio-leo de amendoim. Tal experincia foi to bem-sucedida que apenas alguns dos presentes perceberam as circunstncias
em que a mesma havia sido conduzida. O motor, que havia sido construdo
para consumir petrleo, operou com leo vegetal sem qualquer modificao. Tambm foi observado que o consumo de leo vegetal resultou em um
aproveitamento do calor literalmente idntico ao do petrleo (Knothe; Van
Gerpen; Krahl, 2006).
992
Durante uma apresentao no Instituto de Engenheiros Mecnicos da

Gr-Bretanha em 1912, Diesel fez a seguinte afirmao: o uso de leos
vegetais pode parecer insignificante hoje, mas tais leos podem se tornar
ao longo do tempo to importantes quanto o petrleo e o carvo de hoje
(Biodieselbr, 2011).
O primeiro relato do que hoje conhecido como biodiesel consta na
patente belga 422.877, concedida em 31 de agosto de 1937 ao pesquisador Charles George Chavanne, denominada Procd de Transformation
dHuiles Vgtales en Vue de Leur Utilisation comme Carburants (Procedimento para a transformao de leos vegetais para seu uso como combustveis), que descreve a transesterificao do leo de palma com metanol ou
etanol na presena de cido sulfrico como catalisador (Dabdoub; Bronzel;
Rampin, 2009).
Em 1942 foi publicado um relatrio que descreve o que deve ter sido
o primeiro teste de campo com um nibus urbano movido a biodiesel. O
nibus foi abastecido com steres etlicos de palma e transportou passageiros em uma linha comercial entre as cidades de Bruxelas e Lovaina durante
o vero de 1938 e o desempenho do nibus foi relatado como satisfatrio
(Knothe; Gerpen; Krahl, 2006).
No Brasil, em 1980, o professor Expedito Jos Parente de S, da Universidade Federal do Cear, solicitou a primeira patente de nvel mundial
para o processo de fabricao do biodiesel e do querosene vegetal de aviao
(PI 8007957), com o ttulo de Processo de produo de combustveis a partir
de frutos ou sementes de oleaginosas, a qual entrou em domnio pblico, pelo
tempo e desuso (Parente, 2003).
A pesquisa sobre o uso do leo de girassol transesterificado e refinado
de acordo com os padres do leo diesel foi iniciada em 1979 na frica do
Sul, mais de um sculo aps a descoberta da transesterificao de leos vegetais. Em 1983, o processo para a produo de biodiesel com qualidade
de combustvel e os testes em motores foram completados e publicados
internacionalmente. Uma empresa austraca, chamada Gaskoks, obteve a
tecnologia do grupo de Engenheiros Agrcolas Sul-Africanos e construiu
a primeira planta piloto em novembro de 1987 e a primeira planta em escala
industrial em abril de 1989, com capacidade de processamento para trinta
mil toneladas de sementes de colza por ano.
993
Cenrio do biodiesel no mundo

O biodiesel surgiu mundialmente como uma alternativa prspera para
a substituio dos combustveis minerais, derivados do petrleo. Por ser
renovvel uma fonte importante de energia que vm sendo testada atualmente em vrios pases, como Brasil, Argentina, Estados Unidos, Malsia,
Alemanha, Frana e Itlia, os quais j produzem biodiesel comercialmente,
estimulando o desenvolvimento em escala industrial (Biodieselbr, 2011).
O interesse mundial pelo biodiesel resulta em vrios fatores, sendo um
deles a reduo da dependncia do petrleo cujas maiores reservas esto em
regies politicamente crticas, como o Oriente Mdio. Outro motivo est
relacionado s questes ambientais, que levam a substituio de combustveis fsseis por renovveis e menos poluentes. Em alguns pases a plantao de oleaginosas para produo de biodiesel considerada fonte de renda social e incentiva a fixao de populaes no campo (Penteado; Cunha;
Penteado, 2007).
Mundialmente adotou-se uma nomenclatura bastante apropriada para
identificar a concentrao do biodiesel na mistura com diesel de petrleo,
sendo a mesma indicada por BXX, onde XX a porcentagem em volume do
biodiesel mistura. Por exemplo, o B2, B5, B20 e B100 so combustveis
com uma concentrao de 2, 5, 20 e 100%, respectivamente, de biodiesel ao
diesel de petrleo (Meirelles, 2003 apud Silva, 2006).
O principal mercado produtor e consumidor de biodiesel em grande escala tem sido a Europa, pois as refinarias de petrleo naquele continente tm
buscado a eliminao do enxofre do leo diesel e, como a lubricidade desse
leo dessulfurado diminui muito, a correo tem sido feita com a adio do
biodiesel, j que sua lubricidade extremamente elevada (Shvoong, 2011).
De acordo com as metas do relatrio Transporte 2050, apresentado pela
Comisso Europeia, em Bruxelas, foi proposta a eliminao de todos os carros a diesel ou a gasolina das cidades do bloco at 2050 (BBC, 2011).
Segundo as estatsticas do Conselho Europeu de Biodiesel (European
Biodiesel Board EBB), a Unio Europeia produziu em 2009 cerca de 9,046
milhes de toneladas de biodiesel em mais de duzentas unidades localizadas, principalmente, na Alemanha, Itlia, ustria, Frana e Sucia.
Em 2009, a Unio Europeia liderou a produo mundial de biodiesel,
representando 65% da produo mundial e cerca de 75% dos biocombustveis produzidos na Europa, porm ainda continua longe de ser o principal
994
combustvel produzido e comercializado na Europa. Atualmente, a capacidade de produo europeia de biodiesel de aproximadamente 22 milhes
de toneladas (EBB, 2010).
Os quatro maiores produtores de biodiesel na Unio Europeia so Alemanha, Frana, Espanha e Itlia, que juntos representam quase 70% do
biodiesel produzido na Europa. O Grfico 27.6 representa a produo desses pases entre os anos de 1998 e 2009.
A Alemanha o maior produtor e consumidor de biodiesel do mundo,
sendo responsvel por quase 30% do biodiesel produzido na Europa e com
capacidade de produzir 5 milhes de tonelada por ano (EBB, 2010).
Grfico 27.6 Produo de biodiesel na UE entre 1998 e 2009 (em milhes de toneladas)
Fonte: Adaptado de EBB (2010)
A indstria de biodiesel nos Estados Unidos iniciou-se na dcada de 1990,

por produtores de soja. Em 2010 existiam mais de 170 plantas de biodiesel
com capacidade de produo estimada em 2,86 bilhes de litros, ou seja, cerca de 4,5% do consumo de diesel foi de biodiesel (Thinking Ahead, 2011).
O Grfico 27.7 representa a produo estimada de biodiesel nos Estados
Unidos em milhes de litros, entre os anos de 2005 e 2009, de acordo com o
Conselho Nacional de Biodiesel (National Biodiesel Board NBB).
Existe tambm um programa voluntrio, denominado BQ-9000, que
coordenado pela NBB e que combina as especificaes da ASTM para o
biodiesel (ASTM D-6751) com um sistema de controle de qualidade que
inclui estocagem, testes, mistura, embarque, distribuio e prticas de manejo de combustveis.
995
Grfico 27.7 Produo de biodiesel nos EUA entre 2005 e 2009 (em milhes de litros)
Fonte: Adaptado de NBB (2011)
Para que seja possvel a exportao do biodiesel, necessrio transform-lo em uma commodity, tendo como primeiro passo a padronizao
do produto de modo a criar um tipo de biodiesel que se torne referncia
internacional.
A dificuldade para transformar o biodiesel em uma commodity no mercado mundial devida, principalmente, a dois fatores: restries quanto
s especificaes fsico-qumicas do bicombustvel e presses internas da
Unio Europeia e Estados Unidos para proteo da agricultura local (Prates
et al., 2007 apud Ribeiro; Peixoto; Souza, 2008).
Para abrir os mercados mundiais ao biodiesel, ser necessria uma habilidade de diplomacia destes pases para negociar redues na barreira comercial. Alm disso, Estados Unidos e Unio Europeia pretendem aumentar o
consumo de biocombustveis de modo a reduzir a dependncia em relao a
fornecedores de petrleo instveis, como pases do Oriente Mdio e Venezuela, por exemplo (Clemente et al., 2007 apud Ribeiro; Peixoto; Souza, 2008).
Cenrio do biodiesel no Brasil

No Brasil, a trajetria do biodiesel comeou a ser delineada com as iniciativas de estudos pelo Instituto Nacional de Tecnologia na dcada de 20
(Sebrae, 2009).
Na dcada de 1970, a Universidade Federal do Cear desenvolveu
pesquisas com o intuito de encontrar fontes alternativas de energia. As
996
experincias acabaram por revelar um novo combustvel originrio de leos vegetais e com propriedades semelhantes ao leo diesel convencional, o
biodiesel (Holanda, 2004 apud Quessada, 2008).
A primeira crise mundial do petrleo em 1973 motivou o governo
brasileiro a desenvolver um Programa Nacional do lcool Combustvel
(Pr-lcool), a partir da sacarose extrada dos colmos da cana-de-acar.
Paralelamente a este programa foi proposto, em 1975, o lanamento do
Pr-leo Plano de Produo de leos Vegetais para fins energticos (Cmara, 2006), com o objetivo de gerar um excedente de leo vegetal capaz de
torn-lo competitivos com o leo diesel de petrleo, sendo prevista inicialmente uma mistura de 30% de leo vegetal no leo diesel, com perspectiva
para sua substituio integral a longo prazo (Biodieselbr, 2011).
Em 6 de dezembro de 2004, o governo federal lanou o Programa Nacional de Produo e Uso de Biodiesel (PNPB), com o objetivo de pr em
prtica, de modo sustentvel, tcnico e econmico, a produo e o uso do
biodiesel no Brasil, com destaque na incluso social e no desenvolvimento
regional, por meio de gerao de emprego e de renda (Limiro, 2007).
Aps amplas discusses no Congresso Nacional, foi aprovado o marco
legal do biodiesel, composto pela Lei n.11.097, de 13 de janeiro de 2005,
pela Lei n.11.116, de 18 de maio de 2005 e pelo Decreto n.5.297, de 6 de
dezembro de 2004 (Lima, 2007).
A Lei n.11.097, de 13 de janeiro de 2005, ou Lei Biodiesel, estabelece
os percentuais mnimos de mistura de biodiesel ao diesel de petrleo e o
respectivo monitoramento do novo combustvel no mercado nacional (Cmara, 2006). A Figura 27.2 apresenta o cronograma inicial do PNPB.
Figura 27.2 Cronograma inicial do PNPB

Fonte: PNPB (2011)
997
Conforme representado na Figura 27.2, de 2005 a 2007 foi autorizada a

mistura de 2% de biodiesel ao diesel, prevendo-se um mercado consumidor
de oitocentos milhes de litros por ano; de 2008 a 2012 seria obrigatria a
mistura de 2%, havendo uma previso de um bilho de litros ao ano.
A meta do PNPB de misturar 5% de biodiesel ao diesel foi antecipada
em trs anos, pois a partir de janeiro de 2010 o B5 comeou a ser usado.
Para tanto, foi necessria uma produo de aproximadamente 2,4 bilhes
de litros (Zimmerman, 2010).
O Decreto n.5.297 criou o selo Combustvel Social, concedido ao produtor de biodiesel para promover a incluso social dos agricultores familiares
enquadrados no Programa Nacional de Fortalecimento Familiar (Pronaf),
que lhe forneam matria-prima e que comprovem regularidade perante o
Sistema Integrado de Cadastro de Fornecedores (Sicaf) (Lima, 2007).
A empresa que possuir o selo poder ter seus projetos financiados
com condies especiais, conforme enquadramento a ser concedido pelo
Ministrio do Desenvolvimento Agrrio, podendo contar, tambm, com
benefcios tributrios, como a reduo de alquotas de PIS/Pasep e Cofins
e a possibilidade de participao nos leiles de aquisio de biodiesel pela
Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis (ANP)
(Sebrae, 2009).
A adio de biodiesel ao diesel de petrleo, ainda que parcial, proporcionar ao Brasil a reduo das emisses de gases do efeito estufa, que ser
revertida em crditos de carbono e dar origem aos Certificados de Emisses Reduzidas (CERs), os quais sero comercializados no mercado internacional com os pases industrializados que necessitam desses crditos para
cumprir suas metas junto ao Protocolo de Kyoto (Limiro, 2007).
De acordo os dados do Boletim Mensal de Biodiesel de abril de 2011 da
ANP, o Brasil possui 69 plantas produtoras em operao, correspondendo
a uma capacidade autorizada de 17.415,95 m3/dia, sendo que 61 delas possuem autorizao para comercializao do biodiesel produzido, correspondendo a 16.977,25 m3/dia de capacidade.
Dados preliminares, com base nas entregas dos leiles promovidos pela
ANP e de estoques existentes, mostram que a produo em maro de 2011
alcanou cerca de 232 mil m3 e a produo acumulada no ano atingiu 586
milhes de litros, o que representa um aumento de 9% em relao ao mes-
998
mo perodo de 2010, que foi de 540 mil m3, conforme pode-se observar no
Grfico 27.8.
A entrada do biodiesel na matriz energtica brasileira de significativa
importncia ambiental, social e econmica, alm de configurar um curso
histrico no Brasil de investimentos em energias mais limpas, como o lcool
e as hidreltricas.
Grfico 27.8 Produo acumulada de biodiesel no perodo de 2006 a 2011

Fonte: MME (2011)
O biodiesel reduz de forma drstica a emisso de gases poluentes contribuindo em benefcios imediatos, principalmente nos grandes centros urbanos. Vrios estudos cientficos realizados pela Unio Europeia indicam que
o uso de 1 kg de biodiesel colabora para a reduo de 3 kg de CO2, um dos
gases que provocam o efeito estufa (EBB, 2011).
Do ponto de vista social e econmico possibilita melhor aproveitamento
da agricultura com aumento da renda do agronegcio tanto para os produtores de pequeno porte (agricultura familiar) quanto para os grandes empreendimentos, particularmente nos processos agroindustriais articulados
com pequenos empreendimentos, alm de promover significativa economia de divisas para o pas (Sebrae, 2009).
Outro aspecto de importncia no processo de realizao do segmento do
biodiesel diz respeito sua regionalizao, que pode promover o desenvolvimento socioeconmico pela oferta de empregos com aumento da renda
local, principalmente no Nordeste.
O Brasil possui natural vocao para a agropecuria, apresentando condies de clima e de solo que permitem o cultivo de grande variedade de
999
oleaginosas, alm de apresentar grandes rebanhos de sunos e bovinos, fontes de matria-prima para o biodiesel.
Sob o olhar do potencial de gerao de emprego e renda, alm da produo de matria-prima, deve-se ter em conta as oportunidades que emergem
ao longo da cadeia de fornecimento para o campo, assim como para o complexo industrial.
No aspecto de projetos e empreendimentos rurais e industriais essencial avaliar a viabilidade econmica, considerando o volume mnimo de
produo; a assistncia tcnica; os fornecedores de equipamentos e servios; as distncias da produo agrcola em relao s respectivas unidades
de processamento (usinas); a viabilidade logstica e custos correspondentes; a disponibilidade de recursos financeiros para os investimentos fixos
e capital de giro; os limitantes tecnolgicos; as condies de clima; o solo e
a adaptao das espcies no caso de cultivo de oleaginosas, com a ateno
para o zoneamento agrcola que, alm de indicar os locais mais adequados para o cultivo, favorece a obteno de financiamentos da rea agrcola
(ibidem).
Os nmeros mostram as perspectivas de crescente investimento no pas
para produo de biodiesel, sendo essa tambm uma tendncia mundial.
Os principais desafios esto ligados ao fato de ser um mercado nascente
com um complexo agroindustrial em implantao. Fatores de toda ordem
so de igual importncia, como disponibilidade de recursos para investimentos fixos e custeio da produo agrcola, assistncia tcnica contnua
que assegure produtividade e regularidade da produo e desenvolvimento
de pesquisas de novas oleaginosas e de processos tecnolgicos que minimizem custos de produo (ibidem).
Matrias-primas para a produo de biodiesel no Brasil

O Brasil possui uma ampla diversidade de matrias-primas para a produo de biodiesel. Destacam-se entre elas as oleaginosas, como algodo,
amendoim, dend, girassol, mamona, pinho manso e soja (ibidem).
A Tabela 27.1 apresenta a relao das espcies vegetais, produtividade e
rendimento de acordo com as regies produtoras.
1000
Tabela 27.1 Caractersticas de algumas culturas oleaginosas no Brasil

Espcie
Algodo
Produtividade Porcentagem Ciclo

(toneladas/ha)
de leo
de vida
Anual
Regies
produtoras
Rendimento
(ton leo/ha)
MT, GO, MS,

BA e MA
0,1 a 0,2
0,85 a 1,4
15
Amendoim
1,5 a 2
40 a 43
Anual
SP
0,6 a 0,8
Dend
15 a 25
20
Perene
BA e PA
3a6
0,5 a 0,9
Girassol
1,5 a 2
28 a 48
Anual
GO, MS, SP, RS

e PR
Mamona
0,5 a 1,5
43 a 45
Anual
Nordeste
0,5 a 0,9
Pinho
manso
2 a 12
50 a 52
Perene
Nordeste e MG
1a6
Soja
2a3
17
Anual
MT, PR, RS, SP,

GO, MS e MG
0,2 a 0,4
Fonte: Sebrae (2009)
A Figura 27.3 permite a visualizao das regies brasileiras com suas

principais matrias-primas para a produo de biodiesel.
Figura 27.3 Potencialidade brasileira para produo de oleaginosas

Fonte: Sebrae (2009)
1001
Apesar da enorme variedade de oleaginosas existentes no Brasil para a

produo de biodiesel, a soja sempre liderou a produo por ser uma cadeia
produtiva bem estruturada. O Grfico 27.9 representa as matrias-primas
usadas na produo de biodiesel de julho de 2008 a fevereiro de 2011.
Grfico 27.9 Evoluo da participao das matrias-primas usadas na produo de biodiesel

Fonte: MME (2011)
Tendo como referncia o ms de fevereiro de 2011, as matrias-primas

com maior participao na produo de biodiesel foram o leo de soja, seguida do sebo bovino e do leo de algodo, conforme mostra o Grfico 27.10.
Grfico 27.10 Matrias-primas utilizadas para a produo de biodiesel em fevereiro de 2011

Fonte: Adaptado de ANP (2011)
Todos os leos vegetais, enquadrados na categoria de leos fixos ou

triglicerdicos, podem ser transformados em biodiesel. Dessa forma, poderiam constituir matria-prima para a produo de biodiesel os leos das
1002
seguintes espcies vegetais: gro de amendoim, polpa do dend, amndoa

do cco de dend, amndoa do coco da praia, caroo de algodo, amndoa do cco de babau, semente de girassol, baga de mamona, semente de
colza, semente de maracuj, polpa de abacate, caroo de oiticica, semente
de linhaa e semente de tomate, entre muitos outros vegetais em forma de
sementes, amndoas ou polpas (Parente, 2003).
Os leos e gorduras de animais possuem estruturas qumicas semelhantes s dos leos vegetais, sendo molculas triglicerdicas de cidos graxos.
As diferenas esto nos tipos e distribuies dos cidos graxos combinados
com o glicerol (ibidem).
Os cidos graxos predominantes em leos e gorduras so:
leo de soja: cido oleico;
leo de babau: cido laurdico;
sebo bovino: cido esterico.
Constituem-se exemplos de gorduras de animais, passveis de serem
transformados em biodiesel, o sebo bovino, os leos de peixes, o leo de
mocot e a banha de porco, entre outras matrias graxas de origem animal
(ibidem).
Alm dos leos e gorduras virgens, constituem tambm matria-prima
para a produo de biodiesel os leos e gorduras residuais, resultantes de
processamentos domsticos, comerciais e industriais.
Segundo Parente (ibidem), as possveis fontes dos leos e gorduras residuais so:
as lanchonetes e as cozinha industriais, comerciais e domsticas nas
quais so praticadas as frituras de alimentos;
as indstrias que processam frituras de produtos alimentcios, como
amndoas, tubrculos, salgadinhos e vrias outras modalidades de petiscos;
os esgotos municipais nos quais a nata sobrenadante rica em matria
graxa, que torna possvel a extrao de leos e gorduras;
guas residuais de processos de certas indstrias alimentcias, como as
indstrias de pescados, de couro etc.
Os leos de frituras representam um potencial de oferta surpreendente,
superando as mais otimistas expectativas. Tais leos tm origem em deter-
1003
minadas indstrias de produo de alimentos, nos restaurantes comerciais

e institucionais e, ainda, nas lanchonetes (ibidem).
Todos os dias esses resduos so descartados de forma errnea em pias,
o que pode causar, alm do entupimento dos encanamentos e filtros das
Estaes de Tratamento de Esgoto (ETE), o encarecimento do tratamento,
e inclusive poluir e desoxigenar a gua.
Tambm so surpreendentes os volumes ofertados de sebo de animais,
especialmente de bovinos, nos pases produtores de carnes e couros, como
o caso do Brasil. Tais matrias-primas so ofertadas, em quantidades substantivas, pelos curtumes e pelos abatedouros de animais de mdio e grande
porte (ibidem).
Aspectos dos processos produtivos de biodiesel

O uso direto de leos vegetais ou mistura de leos vegetais com diesel
impraticvel, principalmente pelo fato de os mesmos apresentarem alta
viscosidade e altos ndices de cidos graxos livres (Ferrari et al., 2005; Camargos, 2005 apud Quessada, 2008), que apresentam, com a combusto
incompleta, formao de depsitos de carbono nos sistemas de injeo e
formao de acrolena (substncia altamente txica e cancergena), resultante da decomposio trmica do glicerol (Torres, 2007 apud Quessada,
2008).
Vrios mtodos tm sido investigados para reduzir a alta viscosidade de
leos vegetais e, assim, permitir o seu uso em motores diesel sem problemas
operacionais (Knothe; Van Gerpen; Krahl, 2006). Existem duas tecnologias
que podem ser aplicadas para a obteno de biodiesel a partir de leos vegetais (puros ou de fritura) e sebo animal: a tecnologia de craqueamento e a
tecnologia de transesterificao (Sebrae, 2009).
O craqueamento trmico ou pirlise a converso de uma substncia
em outra por meio do uso de calor, isto , pelo aquecimento da substncia
na ausncia de ar ou oxignio a temperaturas que podem chegar a 450C,
a fim de provocar a quebra de molculas. Dessa forma, h um gasto muito
alto com energia trmica e, em algumas situaes, esse processo auxiliado
por catalisadores, geralmente o xido de silcio e o xido de alumnio, para
quebrar as ligaes qumicas, de modo a gerar molculas menores. O equi-
1004
pamento para craqueamento trmico caro, mas os produtos so similares

quimicamente ao leo diesel. A remoo de oxignio reduz os benefcios
de ser um combustvel oxigenado, diminuindo seus ganhos ambientais e,
geralmente, produzindo um combustvel mais prximo da gasolina que do
diesel (Caderno 55, 2007).
A transesterificao nada mais do que a separao da glicerina do leo
vegetal, pois cerca de 20% de uma molcula de leo vegetal formada por
glicerina, o que torna o leo mais denso e viscoso. Durante o processo de
transesterificao, a glicerina removida do leo vegetal, deixando o leo
mais fino e reduzindo a viscosidade (Biodieselbr, 2011).
A Figura 27.4 apresenta o esquema geral da reao de transesterificao,
onde R um radical orgnico relativo cadeia de cidos graxos. O lcool
usado para a produo de biodiesel usualmente o metanol (R = CH3);
todavia tambm pode ser usado o etanol (R= C2H5).
Figura 27.4 Esquema geral da reao de transesterificao

Fonte: Adaptado de Knothe, Gerpen e Krahl (2006)
Quessada (2008) observa que a transesterificaao com um lcool consiste em um nmero de reaes consecutivas e reversveis. Primeiramente,
h a converso de triglicerdeos em diglicerdeos; em seguida ocorre a converso dos diglicerdeos em monoglicerdeos que, por sua vez, so convertidos em glicerol, liberando uma molcula de ster alqulico para cada etapa
anterior, conforme representado na Figura 27.5.
O processo de produo de biodiesel por transesterificao, partindo de
uma matria graxa qualquer, envolve as etapas operacionais mostradas no
fluxograma exposto na Figura 27.6.
1005
Figura 27.5 Converso de triglicerdeos e formao de glicerol e biodiesel

Fonte: Adaptado de Camargos (2005) apud Quessada (2008)
Figura 27.6 Fluxograma do processo de produo de biodiesel

Fonte: Parente (2006) apud Sebrae (2009)
As variveis mais importantes que afetam a produo do biodiesel por

transesterificao incluem temperatura de reao taxa molar, tipo de catalisador, tempo de reao, presena de umidade e teor de cidos graxos livres
(Agarwal, 2007 apud Machado, 2008).
1006
Os procedimentos referentes preparao da matria-prima para a sua

converso em biodiesel visam criar as melhores condies para a efetivao da reao de transesterificao, com a mxima taxa de converso. A
princpio necessrio que a matria-prima tenha o mnimo de umidade e
de acidez, o que possvel submetendo-a a um processo de neutralizao,
por meio de uma lavagem com uma soluo alcalina de hidrxido de sdio
(NaOH) ou de potssio (KOH), seguida de uma operao de secagem ou
desumidificao. Essas especificaes de tratamento dependem da natureza e das condies da matria graxa empregada como matria-prima.
A reao de transesterificao a etapa da converso, propriamente
dita, do leo ou gordura, em steres metlicos ou etlicos de cidos graxos,
que constituem o biodiesel. Essa reao realizada em um reator provido
de camisa de circulao de gua aquecida e agitao mecnica. O sistema
permanece a 50C e ento se adiciona o leo neutro. Quando o sistema
atinge 45C, so adicionados a soluo de metanol ou etanol e o catalisador (NaOH ou KOH), estabelecendo-se este momento como o tempo
zero da reao. Tambm so comumente empregados outros compostos
de carter alcalino, como os metxidos ou etxidos de sdio e potssio
(Khalil, 2006).
A Figura 27.7 mostra a reao da rota metlica e respectivas equaes.
Figura 27.7 Processo de produo de biodiesel com rota metlica

Fonte: PNPB (2011)
A Figura 27.7 representa a reao de converso, quando se utiliza o metanol como agente de transesterificao, obtendo-se portanto como produtos os steres, que constituem o biodiesel e a glicerina.
1007
Uma situao na qual o etanol empregado pode ser vista na Figura 27.8.
Figura 27.8 Processo de produo de biodiesel por rota etlica

Fonte: PNPB (2011)
Uma polmica permanente entre os especialistas em biodiesel durante a

defesa das rotas tecnolgicas metlicas e etlicas a questo da relao consumo de lcool x rendimento em biodiesel. O consumo de metanol cerca de
103 kg de lcool por 995 kg de leo transesterificado, produzindo 1.000 kg
de biodiesel, enquanto o rendimento do etanol maior: 140 kg de lcool por
954 de leo, produzindo 1.000 kg de biodiesel (Khalil, 2006).
A Tabela 27.2 apresenta as caractersticas mais importantes relativas
produo de steres, segundo as rotas com metanol e etanol.
Tabela 27.2 Caractersticas das rotas de processo com o metanol e o etanol
Caractersticas
Metanol
Etanol
Origem
Petroqumica
Cana-de-acar
Oferta
Importado
Produto nacional
Fonte
No renovvel
Renovvel
Volatilidade
Alta
Moderada
Chama
Invisvel
Visvel
Toxicidade
Elevada
Moderada
Custo
R$ 700/ ton
R$ 950/ ton
Cetano do ster
53
64
Tempo de reao
45 min
90 min
Investimentos
Baixo
Alto
Temperatura de reao
60C
80C
Fonte: Adaptado de PNPB (2011)
1008
De acordo com Parente (2003), sob o ponto de vista tcnico e econmico, a reao via metanol muito mais vantajosa que a reao via etanol.
Ramos et al. (2003) apud Machado (2008), destacam que a importncia
de produzir steres etlicos pode ser relacionada aos seguintes fatos: ser um
combustvel biodegradvel e no agressivo ao meio ambiente, e apresentar
um potencial de reduo de fuligem de 50%, podendo ser usado puro ou
em misturas com o diesel de petrleo com alta lubricidade, sem enxofre na
composio.
Os steres etlicos podem ser utilizados imediatamente sem qualquer
exigncia quanto tecnologia de motores, principalmente se utilizados em
misturas. A produo de steres etlicos compem um balano de carbono em ciclo praticamente fechado, pois obtido de produtos renovveis e
pode ser utilizado como projeto de sequestro de carbono (Mecanismo de
Desenvolvimento Limpo (MDL) apud Machado, 2008).
Aps a reao de transesterificao que converte a matria graxa em steres (biodiesel), a massa reacional final constituda de duas fases, separveis por decantao ou por centrifugao.
A fase mais pesada composta de glicerina bruta, impregnada dos excessos utilizados de lcool, de gua e de impurezas inerentes matria prima. A fase menos densa constituda de uma mistura de steres metlicos
ou etlicos, conforme a natureza do lcool originalmente adotado, tambm
impregnado de excessos reacionais de lcool e de impurezas.
De acordo com Knothe, Van Gerpen e Krahl (2006), mesmo aps a reao de transesterificao virtualmente completa, pequenas quantidades de
tri, di e monoacilgliceris permanecem no produto final, reduzindo a qualidade do biodiesel produzido.
A separao de fases uma etapa importante da produo de biodiesel.
O processo de refino dos produtos decorrentes da sua produo pode ser
tecnicamente difcil e pode elevar substancialmente os custos de produo.
A pureza do biodiesel deve ser alta e de acordo com certas especificaes.
De acordo com a especificao da Unio Europeia, por exemplo, o teor de
cidos graxos livres, lcool, glicerina e gua devem ser mnimos, de modo
que a pureza do biodiesel seja superior a 96,5% (Biodieselbr, 2011).
Para realizar a recuperao do lcool da glicerina, a fase pesada, contendo gua e lcool, submetida a um processo de evaporao, eliminando
1009
da glicerina bruta esses constituintes volteis, cujos vapores so liquefeitos

num condensador apropriado.
A etapa de recuperao do lcool dos steres realizada da mesma forma, mas separadamente; o lcool residual recuperado da fase mais leve,
liberando para as etapas seguintes os steres metlicos ou etlicos.
Os excesso residuais de lcool, aps os processos de recuperao, contm quantidades significativas de gua, necessitando de uma separao. A
desidratao do lcool feita normalmente por destilao.
No caso da desidratao do metanol, a destilao bastante simples e fcil
de ser conduzida, uma vez que a volatilidade relativa dos constituintes dessa
mistura muito grande e, ademais, inexiste o fenmeno da azeotropia, ou
seja, quando a mistura de duas ou mais substncias a uma certa composio
possuem um ponto de ebulio constante e fixo, como se fosse uma substncia pura, elas no podem ser separadas por processo de destilao simples.
Diferentemente, a desidratao do etanol mais complicada devido
existncia do fenmeno da azeotropia e a uma menor volatilidade relativa
dos componentes da mistura etanol-gua.
Para realizar a purificao dos steres, estes devem ser lavados por centrifugao e desumidificados posteriormente, resultando finalmente o biodiesel, o qual dever ter suas caractersticas enquadradas nas especificaes
das normas tcnicas estabelecidas para o biodiesel como combustvel para
uso em motores do ciclo diesel.
Por fim, realizada a destilao da glicerina, pois a glicerina emergente do processo de produo de biodiesel possui muitas impurezas. Para o
mercado favorvel a comercializao da glicerina purificada. A purificao da glicerina bruta feita por destilao vcuo, resultando um produto
lmpido e transparente, denominado comercialmente de glicerina destilada, que possui vrias aplicaes, principalmente na indstria qumica. Os
mercados que mais crescem com seu consumo so o de uso pessoal e higiene
dental e de alimentos e bebidas, que juntos respodem por cerca de 64% das
aplicaes da glicerina.
A glicerina pode ainda ser usada como um dos principais ingredientes
na indstria farmacutica na composio de cpsulas, analgsicos, xaropes
etc. Outros mercados importantes so: cosmticos, txteis, lubrificante de
mquinas de processos alimentcios, fabricao de tintas e resinas, fabricao de dinamite etc. (Cadernos NAE, 2004).
1010
Propriedades fsicas e qumicas do biodiesel

A lei n.11.097 datada de 13 de janeiro de 2005 define o biodiesel como
um biocombustvel derivado de biomassa renovvel para uso em motores
combusto interna com ignio por compresso ou, conforme regulamento, para gerao de outro tipo de energia, que possa substituir parcial ou
totalmente combustveis de origem fssil.
No Brasil, a especificao dos padres de qualidade do biodiesel foi
realizada segundo a norma da Associao Brasileira de Normas Tcnicas
(ABNT) e normas internacionais como a American Society for Testing
and Materials (ASTM), International Organization for Standardization
(ISO) e Comit Europen de Normalisation (CEN), sendo as mesmas regulamentadas pela ANP em 2008. Vrias propriedades fsicas e qumicas
foram padronizadas, como massa especfica, viscosidade cinemtica, ponto
de fulgor, teor de enxofre, nmero de cetano, teor de glicerina livre e total e
teor de acilgliceris, dentre outras.
A seguir sero descritas as principais propriedades fsicas e qumicas do
biodiesel, pelas quais podem ser observadas suas vantagens e desvantagens
em relao ao diesel convencional de acordo com Knothe, Van Gerpen e
Krahl (2006) apud Dib (2010):
Viscosidade e densidade: As propriedades fluidodinmicas de um combustvel, importantes no que diz respeito ao funcionamento de motores de injeo por compresso (motores diesel), so a viscosidade e a
densidade. Tais propriedades exercem grande influncia na circulao
e injeo do combustvel. Afortunadamente, as propriedades fluidodinmicas do biodiesel, independentemente de sua origem, assemelham-se s do leo diesel mineral, significando que, deste ponto de
vista, no seja necessria qualquer adaptao ou regulagem no sistema
de injeo dos motores.
Lubricidade: A lubricidade uma medida do poder de lubrificao de
uma substncia, sendo uma funo de vrias de suas propriedades fsicas, destacando-se a viscosidade e a tenso superficial. Diferentemente dos motores movidos a gasolina, os motores a leo diesel exigem que
o combustvel tenha propriedades de lubrificao, especialmente, em
razo do funcionamento da bomba, exigindo que o lquido que escoa
lubrifique adequadamente as suas peas em movimento.
1011
Ponto de nvoa e de fluidez: O ponto de nvoa a temperatura em que

o lquido, por refrigerao, comea a ficar turvo, e o ponto de fluidez
a temperatura em que o lquido no mais escoa livremente. Tanto
o ponto de fluidez quanto o ponto de nvoa do biodiesel variam segundo a matria-prima que lhes deu origem, e ainda segundo o lcool
utilizado na reao de transesterificao. Estas propriedades so consideradas importantes no que diz respeito temperatura do ambiente
onde o combustvel deva ser armazenado e utilizado. Todavia, no Brasil, de norte a sul, as temperaturas no apresentam nenhum problema
de congelamento do combustvel, sobretudo porque se pretende usar
o biodiesel em mistura com o leo diesel mineral.
Ponto de fulgor: a temperatura em que um lquido torna-se inflamvel em presena de uma chama ou fasca. Esta propriedade somente
assume importncia no que diz respeito segurana nos transportes, manuseios e armazenamentos. O ponto de fulgor do biodiesel, se
completamente isento de metanol ou etanol, superior temperatura
ambiente, significando que o combustvel no inflamvel nas condies normais em que ele transportado, manuseado e armazenado,
servindo inclusive para ser utilizado em embarcaes.
Poder calorfico: O poder calorfico de um combustvel indica a quantidade de energia desenvolvida pelo combustvel por unidade de massa, quando ele queimado. O poder calorfico do biodiesel muito
prximo do poder calorfico do leo diesel mineral. A diferena mdia
em favor do leo diesel do petrleo situa-se na ordem de somente 5%.
Entretanto, com uma combusto mais completa, o biodiesel possui
um consumo especfico equivalente ao diesel mineral.
ndice de cetano: O ndice de octano ou octanagem dos combustveis
est para motores do ciclo Otto da mesma forma que o ndice de cetano ou cetanagem est para os motores do ciclo Diesel. Portanto,
quanto maior for o ndice de cetano de um combustvel, melhor ser
a combusto desse combustvel num motor diesel. O ndice de cetano
mdio do biodiesel 60, enquanto para o leo diesel mineral a cetanagem situa-se entre 48 a 52, bastante menor, sendo esta a razo pela
qual o biodiesel apresenta uma ignio mais controlada e queima melhor no motor do que o prprio leo diesel mineral.
1012
Dentre as propriedades qumicas do biodiesel podem ser destacadas as

seguintes:
Teor de enxofre: Como os leos vegetais e as gorduras de animais no
possuem enxofre, o biodiesel completamente isento desse elemento. Os produtos derivados do enxofre so bastante danosos ao meio
ambiente (os SOx so responsveis pela chuva cida), ao motor e seus
componentes. Depreende-se que o biodiesel um combustvel limpo,
enquanto o diesel mineral, possuindo baixo teor de enxofre, danifica a
flora, a fauna, o homem e o motor.
Teor de xidos ntricos (NOx): Em relao ao diesel convencional, o
biodiesel apresenta um aumento nas emisses de NOx. Um dos fatores relacionados este aumento pode ser atribuda matria-prima ou
formulao empregada para produo do biodiesel.
Poder de solvncia: O biodiesel, sendo constitudo por uma mistura de
steres de cidos carboxlicos, solubiliza um grupo muito grande de
substncias orgnicas, incluindo-se as resinas que compem as tintas.
Dessa forma, cuidados especiais com o manuseio do biodiesel devem
ser tomados para evitar danos pintura dos veculos, nas proximidades do ponto ou bocal de abastecimento.
Biodegradabilidade e toxicidade: O biodiesel mostrou-se altamente
biodegradvel em uma simulao de derramamento no solo. Um solo
contaminado com biodiesel pode promover a germinao de sementes
aps a biodegradao do leo que ocorreu de 4 a 6 semanas. Porm,
durante o processo de biodegradao, houve um rpido crescimento
de microorganismos que de alguma forma prejudicaram o crescimento
do vegetal neste solo. Quanto ao fato de ser txico, foram feitos estudos em ratos para analisar os malefcios causados ao ingerir o biodiesel
e comparados aos efeitos do diesel mineral: o biodiesel tambm apresenta menos toxicidade, fato este que foi relacionada a uma quantidade inferior observada de bitos dos animais.
Estabilidade oxidativa: O biodiesel susceptvel oxidao quando
exposto ao ar. Esta propriedade pode ser associada existncia das
ligaes insaturadas nas cadeias carbnicas provenientes dos cidos
graxos, fato que pode comprometer a armazenagem e o uso do bio-
1013
combustvel, porm pode ser superada pela utilizao de aditivos que

melhoram a conservao do biodiesel.
Hoje existem diversas especificaes do biodiesel aceitas no Brasil: a
americana, a europeia e a brasileira, conforme representado na Tabela 27.3
(Ribeiro; Peixoto; Souza, 2008).
Tabela 27.3 Limites para certificao/especificao do biodiesel
Caractersticas
Aspecto
Unid.
Limite
Mtodo
ABNT
ASTM
EN / ISO
L II
Massa especfica a 20C
kg/m3
850 900
7148/14065
1298/4052
3675/12185
Viscosidade cinemtica
a 40C
mm2/s
3,0 - 6,0
10441
445
3104
Teor de gua, mx.
mg/kg
500
6304
12937
Contaminao total, mx.
mg/kg
24
12662
100,0
14598
93
3679
Ponto de fulgor, mn.

Teor de ster, mn.
% massa
96,5
15342
14103
Resduo de carbono
% massa
0,050
4530
Cinzas sulfatadas, mx.
% massa
0,020
6294
874
3987
Enxofre total, mx.
mg/kg
50
5453
20846/20884
Sdio + potssio, mx.
mg/kg
15554/15555
15553/15556
14108/14109
14538
Clcio + magnsio, mx.
mg/kg
15553/15556
14538
Fsforo, mx.
mg/kg
10
15553
4951
14107
Corrosividade ao Cu, 3h
a 50C, mx.
14359
130
2160
Nmero de cetano
Anotar
613/6890
5165
Ponto entupimento de
filtro a frio, mx.
19
14747
6371
116
ndice de acidez, mx.
mg
KOH/g
0,50
14448
664
14104
Glicerol livre, mx.
% massa
0,02
15341
6584
14105/14106
Glicerol total, mx.
% massa
0,25
15344
6584
14105
Mono, di, triacilglicerol
% massa
Anotar
15342/15344
6584
14105
Metanol ou etanol, mx.
% massa
0,20
15343
ndice de iodo
g/100g
Anotar
14111
14112
Estabilidade oxidao a
110C, mn.
Fonte: Adaptado de ANP (2008) apud Dib (2010)
1014
Patentes sobre biodiesel

Conforme supracitado, o desenvolvimento do biodiesel tem apresentado timos frutos para o todos os setores ligados produo desse combustvel. Todavia, para que se tenha um crescimento slido e o Brasil consiga
consolidar o setor de biodiesel com confiana perante o mercado consumidor e at tornar este uma commodity, ser necessrio investir de forma
intensificada em pesquisas.
De acordo com o Boletim Mensal de Combustveis Renovveis do MME
de maro de 2011, a Comisso Econmica para a Amrica Latina e o Caribe
(Cepal) publicou o estudo Anlisis comparativo de patentes en la cadena de
produccin de biocombustibles entre Amrica Latina y el resto del mundo.
No estudo, a Cepal realizou um levantamento sobre o nmero de patentes em biocombustveis a fim de identificar quais pases esto na vanguarda
do desenvolvimento tecnolgico no setor de biocombustveis.
Foram identificadas 846 patentes relativas produo de etanol. A China o pas com o maior nmero de patentes de propriedades de indivduos
ou entidades nacionais.
O Brasil ocupa o 13 lugar, com dez patentes, conforme representado no
Grfico 27.11.
O estudo considerou o nmero de patentes registradas como um indicador que permite a obteno de uma imagem da evoluo de cada pas na
gerao de inovao e levou em conta tecnologias de obteno das principais matrias-primas, produtos intermedirios e produtos finais relativos a
biocombustveis.
Grfico 27.11 Nmero de patentes na produo de etanol de 2006 a 2010

Fonte: MME (2011)
1015
Com relao ao biodiesel, o estudo da Cepal identificou 602 patentes e,

novamente, a China apareceu com o maior nmero de patentes.
O Brasil ocupa o 6 lugar, com 16 patentes, conforme representado no
Grfico 27.12.
Grfico 27.12 Nmero de patentes na produo de biodiesel de 2006 a 2010

Fonte: MME (2011)
De acordo com as linhas de pesquisa, definidas de acordo com a Rede

Brasileira de Tecnologia de Biodiesel (Biodiesel, 2007 apud Ribeiro; Peixoto; Souza, 2008), so definidas separadamente, para que se entendam melhor cada uma delas:
Agricultura: refere-se a invenes relacionadas com variedades vegetais e oleaginosas, economia e modelagem de sistemas, e processamento e transformao.
Armazenamento: refere-se a invenes relacionadas com critrios e
formas de armazenamento do biodiesel e de suas misturas envolvendo
biodiesel e diesel, bem como o desenvolvimento de aditivos, de modo
a alcanar as condies ideais de condicionamento do combustvel.
Caracterizao e controle da qualidade (CCQ): refere-se a invenes
relacionadas com a caracterizao de leo in natura, do combustvel e
suas misturas (biodiesel e diesel), provenientes de diversas matrias-primas, com anlise da qualidade segundo critrios e normas estabelecidos, visando a maior praticidade e economicidade.
Coprodutos: refere-se a invenes relacionadas com o destino e o uso dos
coprodutos, como glicerina, torta, farelo etc., para garantir a agregao
de valor e a gerao de outras fontes de renda para os seus produtores.
1016
Produo: refere-se a invenes de tecnologias para produo de biodiesel tanto em laboratrio quanto em escalas adequadas s produes
locais de leo visando garantir a qualidade e economicidade das plantas.
O Grfico 27.13 revela que 62, do total de cem documentos de patente
analisados, reivindicam a produo de biodiesel para patentes.
Grfico 27.13 Nmero de documentos de patente por linhas de pesquisa

Fonte: Adaptado de Espacenet (2008) apud Ribeiro, Peixoto e Souza (2008)
A incluso deste tpico no presente captulo para mostrar que, embora

o Brasil tenha um grande potencial em termos de produo de biodiesel,
ainda pequeno o nmero de patentes nesta rea, e diante desse contexto,
a Unesp de Ilha Solteira tem realizado pesquisas relacionadas ao desenvolvimento e/ou otimizao de tecnologias para a produo de biodiesel com
a construo de uma miniusina de baixo custo para produo de biodiesel e
instrumentos de controle de processos, as quais sero apresentadas posteriormente e que podero resultar em pedidos de patentes.
Pesquisas na rea de biodiesel realizadas

no mbito do Nuplen
O Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen) do Departamento de Engenharia Mecnica da Unesp de Ilha
Solteira tem desenvolvido diversos estudos relacionados produo de biodiesel, caracterizao e realizao de testes em motores de combusto interna automotivos e estacionrios, bem como no desenvolvimento de equipamentos e acessrios envolvidos no processo produtivo, sendo os mais
importantes deles destacados a seguir.
1017
Pesquisas sobre produo de biodiesel

Procedimentos bsicos para produo de biodiesel
Os procedimentos bsicos de produo do biodiesel, que podem ser

aplicados tanto em nvel laboratorial quanto na produo em maior escala,
levam em conta o pr-tratamento da matria-prima, titulao e transesterificao alcalina.
De acordo com Van Gerpen et al. (2004), o pr-tratamento da matria-prima a ser utilizada na produo do biodiesel envolve os procedimentos de
verificao da umidade, secagem e/ou filtragem do leo, assim como a devida
anlise de cidos graxos livres (AGL), que no caso de ser maior que 2%, o leo
dever passar pelo processo de esterificao, no qual ser adicionado 2,25 g
de metanol, juntamente com 0,05 g de cido sulfrico para 1 g de AGL.
A quantidade de catalisador uma importante varivel na fabricao
do biodiesel. A quantidade mnima recomendada no processo de 4 g de
hidrxido de sdio para cada litro de leo da matria-prima. O catalisador
adicional determina-se mediante a titulao do leo. O indicador para o titulado uma soluo de 1% de fenolftalena em lcool etlico. So 10 gotas
por titulao.
A fenolftalena usada para mostrar uma mudana no pH do leo.
Quando o pH for neutro a fenolftalena ser incolor. Para que o pH se torne
bsico deve-se adicionar hidrxido de sdio e a cor mudar para rosa claro.
Dessa forma, pode se determinar quanto catalisador ser necessrio para
que o leo passe de cido para ligeiramente bsico, correspondendo a uma
cor rosa claro.
Para titulao, prepara-se uma soluo de hidrxido de sdio a 1/1000
em gua destilada. Isso se faz dissolvendo 1 g de hidrxido de sdio em 1
litro de gua destilada, que deve ser agitada at se obter uma mistura homognea com o leo vegetal dissolvido no lcool.
A esta soluo (leo + lcool isoproplico) adicionam-se 10 gotas da
soluo de fenolftalena a 1% em lcool etlico, agitando at se conseguir
uma mistura homognea. Se o resultado for uma cor rosa claro e se esta
cor permanecer por mais de 10 segundos aps a agitao, a titulao est
terminada. Tal mudana de cor indica que a amostra de leo/lcool isoproplico no est cida e tem um pH ligeiramente acima de 7. Se a soluo
leo/lcool isoproplico/fenolftalena no mudar de cor, continua-se com
1018
a titulao. Para isso, adiciona-se soluo de leo/lcool isoproplico/fenolftalena mais 1 cm3 da soluo hidrxido de sdio/gua destilada. Agitar
novamente a mistura. Se se obtiver uma cor rosa claro por mais de 10 segundos, a titulao est terminada. Caso contrrio, adiciona-se mais 1 cm3
de hidrxido de sdio/gua destilada.
Devem-se adicionar as quantidades de hidrxido de sdio/gua destilada at que se observe o tom rosa claro por mais de 10 segundos. Ao final
do processo so somadas estas quantidades, pois estas sero equivalentes
a 1 g de hidrxido de sdio por litro de leo da matria-prima que dever
ser adicionada, alm da quantidade mnima de catalisador, para obter um
processamento correto do leo que foi titulado.
Para realizar a transesterificao alcalina necessrio adicionar uma
quantidade de metanol igual a 20% do volume de matria-prima no transesterificada e 4 g de NaOH para cada litro de leo quantidade adicional de
catalisador para correo da acidez remanescente do pr-tratamento, sendo
que a soluo de NaOH, deve ser misturada com a matria-prima que se
encontra entre 55 e 65C.
Em seguida deve-se agitar a mistura simultaneamente com o aumento
da temperatura at que a mesma atinja 90C, e continuar a agitao por
mais 15 ou 20 minutos, aps desligado o aquecimento. Por conseguinte, a
mistura deve ficar em repouso durante 6 a 8 horas para que as fases de biodiesel e glicerina se separem por decantao. Esta etapa pode ser acelerada
por meio da centrifugao dos produtos.
Aps separar completamente as fases, o biodiesel deve ser submetido a
uma filtrao em resina, a fim de neutralizar os hidrxidos remanescentes,
e, por fim, tem-se a lavagem do biodiesel, que necessita de uma evaporao
a vcuo a fim de evitar que ocorra a hidrlise do biodiesel produzido (Van
Gerpen et al., 2004).
Produo de biodiesel em laboratrio, usando leo de soja
degomado e de fritura reciclado
A produo de biodiesel em laboratrio com leo de soja degomado e

leo de soja de fritura teve como objetivo assistir aos fenmenos decorrentes do processo de transesterificao, utilizando-se, para tanto, um agitador
magntico para simular o funcionamento de um reator, o qual ser utilizado
depois para a produo de biodiesel em maior escala (Dib, 2010).
1019
A Figura 27.9 representa a bancada usada no laboratrio para a realizao dos testes das amostras de matrias-primas.
Figura 27.9 Bancada de laboratrio para a realizao dos processos de obteno do biodiesel
Fonte: Dib (2010)
Na Tabela 27.4 so apresentados os teores de cidos graxos livres presentes nas matrias-primas.
Tabela 27.4 Teor de cidos graxos livres presentes nos leos
Matria-Prima
Densidade (g/ml)
Teor de AGL (%)
Tratamento
leo de soja
0,926
< 1,0
No
leo de fritura usado
0,898
2,0 3,0
Sim
Fonte: Dib (2010)
Primeiramente, utilizou-se o leo de soja degomado e rota metlica com

o hidrxido de sdio como catalisador, sendo que o teor de cidos graxos
presentes nesse leo permitiu que a matria-prima fosse submetida diretamente ao processo de transesterificao alcalina.
Foram aquecidos 500 ml de leo a uma faixa de temperatura entre 55 e
65C, antes de se adicionar a ele uma soluo formada por 2 g de NaOH
P.A. em 100 ml de metanol anidro, mostrada na Figura 27.10.
1020
Figura 27.10 Processo de formao do metxido de sdio

Fonte: Dib (2010)
Aps a mistura, a reao foi conduzida temperatura de entrada do

leo, com o recipiente fechado para evitar a evaporao prematura do metanol, durante um perodo aproximado de uma hora. Aps 45 minutos, foi
possvel observar a mudana de cor do contedo em agitao, de amarelo translcido para um tom escuro e transparente (ibidem). Na Figura
27.11, pode ser observado o comportamento da amostra durante a reao
de transesterificao.
Figura 27.11 Processo de transesterificao do leo de soja degomado com metxido de sdio
Fonte: Dib (2010)
1021
De acordo com Dib (ibidem), este fenmeno semelhante ao que foi observado por Ferrari (2005) e, por analogia, este pode ter sido o indcio de
que todos os triglicerdeos tambm tenham sido convertidos em steres metlicos de cidos graxos finalizando, assim, a reao de transesterificao. A
amostra transesterificada foi colocada em um funil de separao, onde permaneceu em decantao por um perodo de 12 horas. A Figura 27.12 mostra
as fases de biodiesel e glicerol formados ao final do perodo da decantao.
Figura 27.12 Processo de decantao do leo de soja degomado com metxido de sdio
Fonte: Dib (2010)
O contedo do funil de decantao foi drenado at a remoo completa do glicerol e, em seguida, o biodiesel remanescente foi submetido ao
processo de filtrao por meio de uma resina de troca inica (Amberlite
BD10DRY da Rohm and Haas), para neutralizao do catalisador bsico. Os volumes obtidos de biodiesel e glicerol podem ser observados na
Figura 27.13.
Para cada 500 ml de leo de soja reagidos com 100 ml de metanol foram
obtidos 460 ml de biodiesel e 74 ml de glicerol, o que representa uma taxa
de converso da ordem de 92% (Dib, 2010).
1022
Figura 27.13 Resultado da transesterificao do leo de soja: a) ster metlico; b) glicerol

Fonte: Dib (2010)
Segundo Dib (ibidem), utilizou-se tambm a rota metlica para produzir

o biodiesel com o leo de fritura, com o hidrxido de sdio como catalisador.
Antes que a matria-prima fosse submetida ao processo de transesterificao
alcalina, 500 ml de leo de fritura a uma faixa de temperatura entre 55 e 65C
foram misturados a uma soluo formada por 0,3 ml de H2SO4 P.A. em 35 ml
de metanol anidro. Aps a mistura, a esterificao foi conduzida temperatura de entrada do leo, com o recipiente fechado, durante um perodo aproximado de uma hora. A mistura foi colocada num funil de separao, onde
permaneceu decantando por 12 horas a fim de remover a camada formada na
superfcie, composta de cido sulfrico, metanol e de gua, formada durante
a reao de esterificao, como pode ser observado na Figura 27.14.
Aps a neutralizao do cido inorgnico, o leo de fritura submetido
a uma nova anlise do teor de acidez orgnica. Como o leo atingiu um
teor abaixo de 2%, a amostra foi submetida transesterificao, sendo o
leo pr-tratado colocado sob agitao com uma soluo formada por 2 g de
NaOH P.A. em 100 ml de metanol anidro, conforme mostrado na Figura
27.10, durante uma hora (ibidem).
1023
Figura 27.14 leo de fritura pr-tratado e submetido decantao

Fonte: Dib (2010)
Segundo Dib (ibidem), foi possvel observar a mudana de cor do contedo em agitao, de amarelo translcido para um tom escuro e transparente, da mesma forma como ocorreu com o leo de soja e conforme
mostrado na Figura 27.15.
Figura 27.15 Processo de transesterificao do leo de fritura usado pr-tratado

Fonte: Dib (2010)
1024
A amostra transesterificada foi colocada em um funil de separao, onde

permaneceu em decantao por um perodo de 12 horas para obteno das
fases, conforme ilustrado na Figura 27.16.
Figura 27.16 Processo de decantao de fritura pr-tratado e metxido de sdio

Fonte: Dib (2010)
A separao do biodiesel foi feita aps drenar completamente a fase inferior da amostra, que consiste na remoo do glicerol, de parte dos catalisadores (H2SO4 e NaOH) e do excesso de metanol. Na Figura 27.17 podem
ser observados os volumes de steres e de glicerol formados a partir do leo
de fritura usado.
Figura 27.17 Resultado da transesterificao do leo de fritura reciclado com metxido

de sdio
Fonte: Dib (2010)
1025
O volume de 500 ml de leo de fritura reagidos com 100 ml de metanol resultou em 495 ml de steres metlicos e em 56 ml de glicerol, sendo
o excesso de metanol evaporado durante os minutos finais de reao. Isso
representa uma taxa de converso da ordem de 92% (ibidem).
Foi produzido ainda o biodiesel com a rota etlica, utilizando o leo de
soja degomado e, tambm, o leo de fritura usado reciclado, juntamente
com o hidrxido de sdio.
Cada matria-prima foi submetida ao processo de transesterificao alcalina aps os tratamentos (quando necessrios) e o volume de 500 ml foi
aquecido mesma faixa de temperatura de antes (entre 55 e 65C). Em
seguida, a matria-prima foi adicionada soluo de 2 g de NaOH P.A. em
150 ml de etanol anidro (ibidem).
Aps as respectivas misturas, as reaes foram conduzidas temperatura de entrada dos leos, com os recipientes fechados para evitar a evaporao
prematura do etanol, durante um perodo aproximado de uma hora. Enquanto o leo era adicionado, foi possvel observar a mudana de cor do contedo em agitao, de amarelo translcido para um tom escuro e transparente e, em seguida, para um tom transparente e pouco mais claro
durante um pequeno perodo de tempo, de 10 a 15 segundos (ibidem).
Na Figura 27.18 observado o comportamento de uma amostra de leo
de soja degomado durante a reao de transesterificao.
Figura 27.18 Processo de transesterificao do leo de soja degomado por rota etlica
Fonte: Dib (2010)
1026
A amostra transesterificada foi colocada em um funil de separao, onde

permaneceu em decantao por um perodo de 12 horas.
A Figura 27.19 mostra as fases de biodiesel e glicerol ainda misturadas
ao final do perodo da decantao.
Figura 27.19 Final da decantao do leo de soja degomado transesterificado por rota etlica
Fonte: Dib (2010)
O passo seguinte consistiu na separao da amostra, aps ter sido neutralizada e lavada, para que a glicerina fosse retirada junto com a gua e, em
seguida, o biodiesel remanescente fosse submetido ao processo de secagem.
No houve a necessidade de submeter o biodiesel passagem pela resina,
pois o catalisador era removido com a lavagem. Entretanto, esta lavagem
prejudicava muito a amostra e foram verificadas alternativas a fim de realizar a separao das fases, porm no foram obtidos resultados satisfatrios.
Produo de biodiesel no reator usando leo de fritura reciclado
Aps os estudos realizados em laboratrio, foi produzido biodiesel em

maior escala com o reator Biocom 100, mostrado na Figura 27.20, doado
pela empresa Biocom Biocombustvel S.A. de Campo Grande (MS)
Unesp de Ilha Solteira, para incrementar as pesquisas na rea de biodiesel, que at ento eram restritas ao nvel laboratorial. O reator funciona por
processo de batelada e tem uma capacidade de processar 100 litros por vez.
1027
Figura 27.20 Reator Biocom 100

Fonte: Dib (2010)
Devido s diversas dificuldades encontradas para produo do biodiesel

por rota etlica, decidiu-se pela no realizao desta etapa no reator, restringindo o processo de produo rota metlica (ibidem).
O leo residual de fritura foi submetido ao processo de transesterificao
alcalina aps seu tratamento para reduo do seu teor de cidos graxos livres.
Uma soluo formada por 500 g de NaOH P.A. em 16 litros de metanol
anidro foi preparada durante 15 minutos temperatura mdia de 40C e,
em seguida, foram adicionados 80 litros de leo, aps terem sido aquecidos
simultaneamente em outro recipiente uma faixa de temperatura entre 55
e 65C (ibidem).
Aps a mistura, a presso no interior do reator foi ajustada para 2,5 atm,
a temperatura do termostato foi reajustada para 90C e a reao foi conduzida at 15 minutos aps o desligamento automtico do sensor de temperatura. A mistura transesterificada foi decantada por um perodo de 12 horas.
Aps a drenagem completa do glicerol, submeteu-se o biodiesel remanescente ao processo de filtrao na resina de troca inica, para neutralizao do catalisador bsico. O pH da amostra de biodiesel aps a neutralizao
ficou pouco cido, em torno de 6,0.
1028
Ao final do processo foram obtidos cerca de 76 litros de biodiesel e 20

litros de glicerol, sendo o excesso de metanol evaporado durante os minutos
finais de reao. Isso representa uma taxa de converso de 95%, que pode
ser melhorada, segundo o fabricante do reator, medida que a prtica de
produo for aperfeioada, podendo chegar at 98% (ibidem).
Caracterizao bsica do biodiesel produzido

e das misturas constitudas
De acordo com Dib (ibidem), para realizar a caracterizao do biodiesel
e das misturas feitas com base no biodiesel comercial B5, foi adicionada a
quantidade necessria de B100 de cada um dos tipos de biodiesel (animal,
vegetal e de leo de fritura residual), para obter as respectivas propores
B25, B50 e B75.
A Figura 27.21 representa cada uma das misturas produzidas e testadas,
assim como o biodiesel comercial.
Figura 27.21 Amostras de cada uma das misturas de biodiesel produzidas

Fonte: Dib (2010)
Para a certificao do biodiesel produzido, foram realizados testes bsicos para determinao de pH, densidade, viscosidade e ponto de fulgor.
1029
Para a determinao do pH foi usado um processo simples e convencional de imerso de uma fita indicadora representada na Figura 27.22.
Figura 27.22 Fitas indicadoras para determinao do pH

Fonte: Merck (2010) apud Dib (2010)
Para determinao da densidade foi utilizado um picnmetro (Figura

27.23a) e uma balana de preciso (Figura 27.23b) da marca Shimadzu,
modelo UX420, com a preciso de 0,001 g.
A viscosidade foi medida por um viscosmetro tipo pndulo, fabricado pela VEB MLW (Rheo-Viscosimeter), com preciso de medida de 1%,
mostrado na Figura 27.24.
Figura 27.23 Equipamentos utilizados para determinao da densidade

Fonte: Dib (2010)
1030
Figura 27.24 Equipamento utilizado para determinao da viscosidade

Fonte: Dib (2010)
A determinao do ponto de fulgor feita seguindo a norma ASTM

D92-52, por meio do mtodo Cleveland, pelo equipamento mostrado na
Figura 27.25.
Figura 27.25 Equipamento utilizado para determinao do ponto de fulgor

Fonte: Dib (2010)
1031
Na Tabela 27.5 so apresentadas algumas das propriedades dos combustveis utilizados nos testes em motores de combusto interna.
Tabela 27.5 Caracterizao do biodiesel utilizado nos testes temperatura ambiente
Origem
Composio Densidade (g/ml) Viscosidade (cSt) Ponto de fulgor (C)
Comercial
Animal
Vegetal
Residual
B5
0,871
3,9
51
B100
0,905
5,8
183
B75
0,891
5,6
98
B50
0,887
4,7
66
B25
0,878
4,6
60
B100
0,899
4,8
178
B75
0,886
4,7
87
B50
0,883
4,5
61
B25
0,878
4,0
56
B100
0,910
6,1
181
B75
0,894
5,4
110
B50
0,896
5,3
71
B25
0,879
4,1
56
Fonte: Dib (2010).
Aplicao de biodiesel em motores de combusto interna

Testes em um grupo gerador de eletricidade utilizando
vrios tipos de biodiesel e propores de misturas
O biodiesel produzido na Unesp de Ilha Solteira com o leo residual

de fritura foi submetido a testes em um grupo gerador de 6 KVA, a fim
de se comparar a quantidade de energia por unidade de volume, com os
leos combustveis B100 produzidos a partir do sebo bovino (na poca
comercializado pelo frigorfico Bertin de Lins, atual JBS) e de leo de soja
(comercializado pela empresa Granol). Foram realizados testes com o blend
B5, composio de 5% de biodiesel em 95% de diesel fssil, comercializado
nos postos de combustvel.
Os testes de carga no grupo gerador foram estudados ainda com os blends
B75, B50 e B25, formados a partir da mistura do biodiesel B100 produzido
com o blend B5, cujas caractersticas foram apresentadas na Tabela 27.5.
Cada teste foi realizado durante um intervalo de tempo de 60 minutos,
para cada nvel de potncia resistiva ajustada no grupo gerador (0, 1, 2 e 3
KW), a fim de mensurar o consumo de cada combustvel (Dib, 2010).
1032
A Figura 27.26 apresenta o grupo gerador diesel da marca Blizzer utilizado nos testes com o biodiesel. As especificaes tcnicas do motor e do
gerador so apresentadas nas Tabelas 27.6 e 27.7, respectivamente.
Figura 27.26 Grupo gerador utilizado nos testes com biodiesel

Fonte: Dib (2010)
Tabela 27.6 Especificaes tcnicas do motor LD 100

Modelo
Tipo
Injeo
Refrigerao
Dimetro X curso (mm)
Cilindrada (l)
Rotao nominal (rpm)
Potncia nominal kW (HP)
Velocidade mdia do pisto (m/s)
Presso efetiva mdia kPa (kgf/cm2)
Consumo de combustvel g/kWh (g/HPh)
Consumo de leo lubrificante g/kWh (g/HPh)
LD 100
Monocilindro de 4 tempos
Injeo direta
Refrigerado a ar
86 X 70
0,406
3.000/3.600
5,7 (7,7) / 6,7 (9,0)
7,0 / 8,4
561,6 (5,73) / 543,5 (5,55)
<273 (<201) / < 285 (<210)
<4,08 / (<3)
Capacidade do tanque de combustvel (l)
30
Quantidade de leo lubrificante cheio (l)
1,65
Quantidade de leo lubrificante efetivo (l)
0,60
Sentido de rotao do eixo visto do volante
Horrio
Tipo de lubrificao
Bomba de leo
Tipo de partida
Manual retrtil e eltrica
Peso lquido (kg)
48
Fonte: Blizzer apud Dib (2010).
1033
Tabela 27.7 Especificaes tcnicas do gerador BL6500 ES

Modelo
Tenso
BL6500 ES
110/240 V monofsico
Potncia contnua de trabalho
6,25 kVA 5.630 W
Potncia mxima em stand-by
6,33 kVA 5.700 W
Frequncia
60 Hz
Fonte: Blizzer apud Dib (2010).
Para a simulao da carga no gerador, foi construdo um painel com 25

lmpadas incandescentes de 220 V e 200 W ligadas em paralelo, perfazendo
uma carga resistiva total de 5 kW, conforme mostrado na Figura 27.27.
Figura 27.27 Painel de cargas utilizado nos testes do grupo gerador

Fonte: Dib (2010)
Os resultados dos testes de aplicao do biodiesel no grupo gerador foram realizados com as cargas de 0 kW, 1 kW, 2 kW e 3 kW. O Grfico
27.14 representa o comparativo entre os consumos mdios de combustvel
em perodos de 60 minutos de teste para cada carga de potncia resistiva
acoplada ao gerador eltrico, tendo como base o B5 comercial.
1034
Grfico 27.14 Consumo de combustvel no motor em funo da carga no gerador

Fonte: Dib (2010)
De acordo com o Grfico 27.14, com o aumento da carga no gerador

ocorreu um aumento do consumo do combustvel no motor. Para uma mesma carga, no existe uma variao significativa desse consumo entre os tipos de combustveis testados.
Complementarmente, o Grfico 27.15 demonstra o comparativo entre
as temperaturas mdias dos gases de exausto para cada um dos testes realizados, tendo como base o B5 comercial.
De acordo com o Grfico 27.15, nota-se que ocorreu um aumento da
temperatura dos gases de exausto de acordo com o aumento das cargas resistivas e que para uma mesma carga no houve uma variao significativa
da temperatura entre os combustveis utilizados nos testes.
Por fim, foi concludo que, do ponto de vista econmico, devido proximidade dos resultados alcanados de consumo entre as amostras testadas, os leos combustveis provenientes de rejeitos industriais e comerciais,
quando tratados de forma adequada, so mais viveis que o biodiesel proveniente da soja.
1035
Grfico 27.15 Temperatura dos gases de exausto

Fonte: Dib (2010)
Testes em um motor estacionrio a biodiesel, com vrios nveis de

contaminao do leo lubrificante
Outro experimento realizado em motor de combusto interna com a utilizao do biodiesel produzido na Unesp de Ilha Solteira foi conduzido por
Scarpin (2010), que analisou o consumo especfico de um motor estacionrio 10 HP a Diesel da marca Branco, funcionando com Biodiesel comercial
(B5) na fase de amaciamento e depois com Biodiesel B100 de leo residual,
com diferentes nveis de contaminao do leo lubrificante (1, 2 e 3%), simulando o desgaste real ao longo do tempo
A Figura 27.28 ilustra o motor utilizado nos testes, sendo suas especificaes tcnicas apresentadas na Tabela 27.8.
As propriedades qumicas do Biodiesel B100 residual utilizado nas etapas do experimento esto apresentadas na Tabela 27.9.
1036
Figura 27.28 Motor estacionrio Branco, modelo BD 10.0

Fonte: Branco apud Scarpin (2010)
Tabela 27.8 Especificaes tcnicas do motor estacionrio BD 10.0

Modelo
BD 10.0
Tipo
Mono-cilndrico de 4 tempos
Injeo
Injeo direta
Refrigerao
Refrigerado a ar
Dimetro X curso (mm)
86 X 70
Cilindrada (cc)
406
Rotao nominal (rpm)
3.000
3.600
Potncia nominal kW (HP)
5,7 - (7,7)
6,7 - (9,0)
Velocidade mdia do pisto (m/s)
7,0
8,4
Presso efetiva mdia kPa (kgf/cm2)
561,6 - (5,73) 543,5 - (5,55)
Consumo Especfico de Combustvel g/kWh (g/HP.h) <273 - (<201) < 285 - (<210)
Consumo especfico de leo lubrificante g/kWh (g/HP.h)
< 4,08
<3
Capacidade do tanque de combustvel (l)
5,5
Quantidade de leo lubrificante cheio (l)
1,65
Sentido de rotao do eixo visto do volante
Horrio
Tipo de lubrificao
Bomba de leo
Tipo de partida
Manual retrtil e eltrica
Peso lquido (kg)
48
Fonte: Branco apud Scarpin (2010)
1037
Tabela 27.9 Propriedades qumicas do Biodiesel B100 residual

Massa especfica (g/cm3)
0,910
Viscosidade (cSt)
6,1
Ponto de Fulgor
181
PH
6-7
Fonte: Scarpin (2010)
Esse estudo foi realizado seguindo a Norma NBR 1585 da ABNT e os

testes de consumo de combustvel do motor foram divididos em cinco etapas, sendo a primeira referente ao perodo de amaciamento do motor. Nesta
etapa, o motor operou com Biodiesel B5 comercial por 20 horas, sem carga
e a cerca de 3.000 rpm.
A segunda etapa correspondeu ao funcionamento do motor com Biodiesel (B100 residual), sem contaminao do leo de motor com Biodiesel. Ele
operou 40 horas, sem carga e a aproximadamente 3.000 rpm.
A partir da terceira etapa, o leo lubrificante foi contaminado em determinadas propores normatizadas para efeito de simulao de funcionamento de um motor com uma determinada vida e, consequentemente, um
desgaste significativo entre as partes mveis do mesmo. Na terceira etapa,
o motor funcionou com Biodiesel (B100 residual), com contaminao do
leo de motor em 1% do seu volume total (cerca de 16,5 ml de Biodiesel no
leo lubrificante); sem carga e por volta de 3.000 rpm, tendo sido medido o
consumo de combustvel.
O mesmo procedimento foi realizado para a quarta e a quinta etapas,
diferindo apenas na porcentagem de contaminao do leo lubrificante. Na
quarta etapa foram adicionados 2% de Biodiesel (cerca de 33 ml) no crter
do mesmo, e na quinta etapa foram adicionados 3% de Biodiesel (cerca de
49,5 ml) no leo de motor. Com isso, foram medidos os consumos em cada
uma destas etapas.
Os consumos especficos em cada um dos testes esto apresentados na
Tabela 27.10.
Com os dados obtidos nesse estudo foi possvel verificar um ligeiro aumento no consumo especfico de combustvel, funcionando com Biodiesel B100 residual, quando comparado com o consumo especfico do motor
operando com Biodiesel B5 comercial e com Biodiesel B100, este por volta
de 8,6%. Pelo fato de no terem ocorrido alteraes nas caractersticas origi-
1038
nais do motor como variao no sistema de ignio e de injeo de combustvel, pode-se afirmar que o resultado obtido foi satisfatrio.
Tabela 27.10 Consumo especfico em funo da condio de operao do motor
Etapas
Condio
Combustvel
Durao (h)
Consumo (l)
Consumo
especfico
(g/HP.h)
Amaciamento
B5 comercial
20
10,00
59,091
Sem contaminao
B100 residual
40
21,71
64,149
1% de contaminao B100 residual
40
21,72
64,173
40
21,72
64,173
40
21,75
64,267
Fonte: Scarpin (2010)
Com relao ao funcionamento do motor, ele operou com o Biodiesel

B100 sem variaes na rotao e no houve aumento de fumaa e a partida do motor no se alterou. Todas essas caractersticas informadas revelam
que um motor a Diesel (mecnico-bomba injetora) pode funcionar com
Biodiesel B100 residual obtendo bons resultados.
Posteriormente, amostras do leo lubrificante contaminado passaro
por anlises laboratoriais para se verificar a influncia do tipo de biodiesel
e da porcentagem de contaminao sobre as propriedades do lubrificante
(viscosidade, ponto de fulgor, quantidade de partculas magnticas, ndices
de acidez e alcalinidade), sendo este o objeto de estudo de um grupo de pesquisa em Tribologia da Unesp de Ilha Solteira, parceiro do Nuplen.
Desenvolvimento e construo de equipamentos/acessrios

utilizados no processo de produo de biodiesel
Construo de uma miniusina de baixo custo
para produo de biodiesel
Uma miniusina de baixo custo foi projetada e est em fase final de construo na Unesp de Ilha Solteira, sendo ela destinada produo de biodiesel por batelada por meio do processo de transesterificao, utilizando
a rota metlica e hidrxido de sdio como catalisador. A referida usina foi
montada com base no reator Biocom-100 e sua capacidade de produo ser
de 300 litros de biodiesel por dia, considerando 8 horas de trabalho dirio.
1039
Numa primeira etapa a miniusina ser fixa e destinada produo de

biodiesel a partir da reciclagem de leo de cozinha usado, e numa segunda
etapa ela ser montada sobre rodas para poder ser usada no campo, neste
caso sendo necessria a incorporao de uma prensa para extrao do leo
vegetal e, tambm, de um gerador de energia a biodiesel para os acionamentos eltricos, tornando a planta autosuficiente. O biodiesel produzido passar por testes laboratoriais para verificar suas propriedades fsico-qumicas
bsicas e depois ser testado em motores de combusto interna automotivos
e estacionrios (geradores), sendo avaliado o consumo e o desempenho para
diversas cargas, comparando com o biodiesel comercial B5 e com vrios tipos de misturas (B25, B50 e B75) feitas com base no biodiesel comercial.
As Figuras 27.29 e 27.30 representam, respectivamente, o esquema e
fotos da miniusina de biodiesel em construo, sendo possvel observar o
reator Biocom-100 utilizado nas pesquisas at ento.
Figura 27.29 Esquema da miniusina para produo de biodiesel na Unesp de Ilha Solteira
Fonte: Mesquita (2011)
1040
Figura 27.30 Fotos da miniusina para produo de biodiesel na Unesp de Ilha Solteira
Desenvolvimento de instrumentao para controle de processo na

produo de biodiesel
Santos e Pedro (2010) desenvolveram um sensor de condutividade eltrica capaz de diferenciar o biodiesel da glicerina. Inicialmente esse sensor
foi desenvolvido para utilizao em bancada laboratorial, mas atualmente
est sendo aprimorado para utilizao no processo produtivo da miniusina
mencionada anteriormente, de modo que, aps o processo de decantao,
tais fases possam ser enviadas automaticamente para reservatrios distintos, por meio do acionamento de vlvulas de controle.
Parte-se da observao que a fase mais pesada, composta de glicerina
bruta, impregnada por excessos utilizados de lcool, de gua e de catalisador, que apresenta propriedades inicas. Com isso, a condutividade eltrica da fase glicerol alta e maior do que na fase menos densa, constituda
de uma mistura de steres alqulicos (biodiesel). Assim, foi construdo um
circuito eletrnico que permite o registro dessa mudana de condutividade,
com base no trabalho desenvolvido por Cardoso (2009).
Para a elaborao do sensor, foi desenvolvido um aparato experimental
composto por um sistema metlico, constitudo por duas hastes metlicas
fixadas em um suporte de material isolante e nas pontas dessas hastes foram
colocadas duas placas de material condutor, que devem ficar em contato
com o fluido em anlise. Nas outras extremidades das hastes foram ligados
dois fios condutores que enviam o sinal da condutividade entre as placas a
um circuito eletrnico microcontrolado, capaz de identificar o biodiesel e a
glicerina e realizar os procedimentos definidos. A Figura 27.31 representa
o sensor desenvolvido.
1041
Figura 27.31 Sensor de condutividade eltrica

Fonte: Santos e Pedro (2010)
Este sensor diferencia-se daquele desenvolvido por Cardoso (2009)

por possuir um circuito eletrnico composto de um microcontrolador PIC
16F877A, capaz de executar toda a lgica de controle para simular o acionamento das vlvulas para separar o biodiesel da glicerina e incluindo ainda
um visor de LCD para mostrar algumas informaes durante o processo.
Aps calibrado o sensor em uma faixa de sensibilidade, conforme condutividades eltricas esperadas, e uma vez atingidos esses valores, o circuito
eletrnico microcontrolado simulou o acionamento das vlvulas por meio
de LEDs e mostrou em um visor de LCD o fluido em contato com o sensor
e a sua respectiva resistncia eltrica.
Antes da montagem do sensor propriamente dito, foi realizada a elaborao do projeto eletrnico e a simulao do mesmo de forma computacional. A Figura 27.32 representa o circuito sendo simulado, na qual a
resistncia eltrica apresentada de 100 k, que pela lgica desenvolvida o
sensor identifica como glicerina.
Nota-se na Figura 27.32 que o LED que representa o acionamento da
vlvula que direciona a glicerina para um determinado reservatrio est
acionado e indicado com a cor vermelha.
A Figura 27.33 representa a simulao computacional do circuito eletrnico, na qual de acordo com a resistncia mostrada no visor do LCD,
o biodiesel estaria em contato com o sensor. Nota-se ainda o LED que
representa o acionamento da vlvula, que direcionaria o biodiesel para
um determinado reservatrio, se encontra acionado e indicado com a cor
verde.
Figura 27.32 Simulao do circuito eletrnico com resistncia eltrica equivalente da glicerina
1042
Figura 27.33 Simulao do circuito eletrnico com resistncia eltrica equivalente do biodiesel
1043
1044
Aps o desenvolvimento do projeto eletrnico e as respectivas simulaes, foram seguidas as etapas triviais para a confeco de uma placa de
circuito impresso, como passagem do desenho do circuito para a placa de
fenolite, furao, corroso da placa com percloreto de ferro, soldagem dos
componentes eletrnicos e por fim a montagem do circuito em uma caixa
plstica, conforme mostrado na Figura 27.34.
Figura 27.34 Caixa plstica com o circuito eletrnico

Para ligar o sensor ao circuito eletrnico foi usado um conector do tipo

XLR e um cabo blindado, a fim de evitar que rudos e interferncias pudessem interferir no sinal recebido pelo microcontrolador.
A resistncia eltrica do cabo e a das chapas metlicas foram medidas
com o auxlio de um multmetro e apresentaram o valor de 3 , e foram
desconsiderados durante a realizao dos ensaios para o trabalho realizado.
Para a realizao dos ensaios com o sensor, este foi montado com uma
fonte de corrente contnua em 12 V, juntamente com o sensor preso em uma
garra, e colocou-se 80 ml de biodiesel e glicerina em cada um dos bqueres,
conforme representado na Figura 27.35.
1045
Figura 27.35 Aparato experimental para a realizao dos testes

Aps a calibrao do sensor, ele foi inserido no bquer com glicerina

para que fosse analisado o valor da resistncia desta e avaliar o funcionamento da lgica desenvolvida. Na Figura 27.36 mostrado o sensor em
contato com a glicerina.
Figura 27.36 Sensor em contato com a glicerina

1046
As informaes do lquido em contato com o sensor puderam ser observadas no visor do LCD e o circuito eletrnico acionou o LED vermelho,
simulando o acionamento da vlvula que direcionaria a glicerina a um reservatrio. A Figura 27.37 apresenta as informaes do visor de LCD, que
mostra o valor da resistncia da glicerina com o smbolo k, que significa
uma unidade de medida na ordem de k.
Figura 27.37 Visor de LCD com informaes da glicerina

Foram coletados os valores de resistncia apresentada no visor de LCD,

nos primeiros 60 segundos em que o sensor esteve em contato com este lquido. O Grfico 27.16 apresenta a resistncia eltrica em funo do tempo.
Grfico 27.16 Valores da resistncia eltrica da glicerina em funo do tempo

1047
De acordo com o Grfico 27.16, os valores da resistncia eltrica apresentados pela glicerina encontraram-se entre 100 e 120 k, sendo que estes
foram crescendo em funo do tempo, como representado pela reta mediatriz. Neste caso, tal lquido ou poderia estar sofrendo ionizao ou o valor
apresentado pelo sensor no era estvel. Com os valores do grfico apresentado calculou-se o valor mdio para a resistncia eltrica da glicerina, que
foi de 118,77 5,78 k.
Utilizando-se dos mesmos procedimentos experimentais, foram realizados os testes com o biodiesel, conforme mostrado na Figura 27.38.
Figura 27.38 Sensor em contato com o biodiesel

Assim, como para a glicerina, quando o lquido em contato com o sensor

foi o biodiesel, o circuito acionou o LED representando o acionamento da
vlvula para direcion-lo a um reservatrio.
Na Figura 27.39 mostrada a indicao do LED verde e no visor do
LCD a indicao de que o biodiesel era o lquido que estava em contato
com o sensor, alm da resistncia eltrica na ordem de M, representado
apenas como M.
1048
Figura 27.39 Visor de LCD com informaes do biodiesel

Os valores encontrados da resistncia eltrica do biodiesel nos primeiros

60 segundos podem ser observados no Grfico 27.17.
Grfico 27.17 Valores da resistncia eltrica do biodiesel em funo do tempo

1049
Conforme apresentado na Figura 27.56, os valores da resistncia eltrica para o biodiesel variaram em torno de 2,3 e 3,7 M e por meio da reta
mediatriz pde-se perceber que tais valores foram crescentes em funo do
tempo. Pde-se notar ainda que para este lquido houve intensa variao
dos valores encontrados devido ao alto valor da resistncia do biodiesel. O
valor mdio encontrado para o biodiesel foi de 2,78 0,4 M.
Para facilitar a visualizao de quo diferentes so os valores encontrados
para as resistncias eltricas do biodiesel e da glicerina, montou-se o Grfico
27.18, que possui os valores relativos aos dois lquidos.
Grfico 27.18 Valores da resistncia da glicerina e do biodiesel em funo do tempo

Analisando-se o Grfico 27.18, nota-se uma grande diferena entre os

valores de resistncia eltrica da glicerina e do biodiesel, representados pelas cores vermelha e azul, respectivamente.
A variao da resistncia eltrica apresentada pela glicerina torna-se
desprezvel e o grfico pode ser considerado linear quando comparado com
a variao que se obteve com os valores do biodiesel.
Apesar das grandes variaes, pode-se perceber claramente a ordem de
grandeza das resistncias para cada um dos fluidos, fato este que suficiente para implantar o sensor em plantas de biodiesel, que utilizam decantadores para separar as fases glicerina e biodiesel e, assim, poder direcion-los
para diferentes reservatrios para armazenagem.
1050
Utilizao dos subprodutos do processo

de produo do biodiesel
Assim como j ocorre atualmente com a cadeia produtiva do setor sucroalcooleiro, na qual por meio do processamento da cana-de-acar se
produz acar e lcool, tendo como subproduto o bagao, que queimado
em caldeiras produzindo energia (eletricidade e calor), na cadeia produtiva
do biodiesel, a glicerina bruta (glicerol), obtida como subproduto do processamento das plantas oleaginosas e demais leos e gorduras usados como
matria-prima, pode tambm ser aproveitada.
A cada litro de biodiesel produzido so produzidos entre 100 e 200 ml
de glicerol, sendo parte dele usada em sntese de resinas e steres, tabaco,
papis, aplicaes farmacuticas, cosmticos e alimentos, e parte dele descartada, uma vez que existe uma oferta maior que a demanda, sendo que
este desbalano pode se tornar ainda maior medida que for sendo aumentada a produo de biodiesel para atender a necessidade de adio ao diesel,
de acordo com o previsto pelo plano do governo.
Glicerol ou Propano-1,2,3-triol um composto orgnico lquido temperatura ambiente (25C), higroscpico, inodoro, viscoso e de sabor adocicado. O termo glicerina refere-se ao produto glicerol, na forma comercial
com pureza acima de 95%, cujo uso atualmente distribudo de acordo com
o Grfico 27.19. Entretanto, os processos para purificao so complexos
e de alto custo, para que seja possvel alcanar as exigncias em graus de
pureza necessria para estes fins.
Grfico 27.19 Representao dos percentuais de utilizao da glicerina em diversos setores

Fonte: Adaptado de Purificao et al. (2008) apud Daun (2009)
1051
Diante desse contexto esto sendo realizados diversos estudos para o

aproveitamento do glicerol residual do processo produtivo de biodiesel na
miniusina da Unesp de Ilha Solteira, tanto pelo Nuplen quanto por parte de
grupos de pesquisa da Agronomia e Zootecnia, os quais, embora ainda em
fase inicial, sero brevemente destacados a seguir.
Esto sendo desenvolvidos pelos zootecnistas estudos para a utilizao
do glicerol na formulao de raes para aves e sunos por se constituir em
um produto rico em energia (4.320 kcal de energia bruta por kg para o glicerol puro) e com alta eficincia de utilizao pelos animais. Outro aspecto
que justifica a aplicao desse coproduto da indstria de biodiesel na produo de alimentos para animais que parte das matrias-primas renovveis
produzidas para atender finalidades energticas retornar cadeia alimentar para gerar produtos de alto valor nutricional. Alm de servir como fonte
de energia, o glicerol tambm pode ter efeitos positivos sobre a reteno de
aminocidos ou nitrognio, conforme sumarizado por Cerrate et al. (2006);
a ao do glicerol inibe a atividade das enzimas fosfoenolpiruvato carboxiquinase e glutamato desidrogenase, que pode resultar em economia dos
aminocidos gluconeognicos e favorecer a deposio de protena corporal.
Recentemente no Brasil, os estudos de Menten et al. (2008) e Berenchtein (2008) demonstraram que a glicerina pode se constituir em um ingrediente energtico com potencial para uso em dietas de frangos de corte
e sunos em crescimento e terminao, respectivamente. Os resultados de
pesquisas gerados nos ltimos anos evidenciam que o glicerol proveniente
da produo de biodiesel pode ser includo na formulao de raes para
aves e sunos at cerca de 10%, sem afetar adversamente o desempenho, a
sade, a qualidade da carcaa e da carne dos animais. Porm, como a qualidade da glicerina produzida industrialmente pode ser varivel, sua utilizao merece certos cuidados, o que indica a necessidade de mais estudos
avaliando a viabilidade tcnica e tambm a econmica da utilizao deste
subproduto bruto da produo de biodiesel.
O glicerol tambm pode ser utilizado no cultivo de cogumelos comestveis e medicinais, que aproveitam resduos orgnicos agrcolas e agroindustriais como fontes de carbono e energia, sendo isso objeto de estudos
na Agronomia. Como consequncia, tem-se uma reduo das perdas de
carbono, energia e outros nutrientes, a princpio no disponveis para a
1052
alimentao humana e/ou animal. O produto final formado no processo, o basidioma, um alimento de valor nutritivo elevado, sendo rico em
aminocidos e pobre em calorias e gorduras, podendo colaborar de modo
significativo na alimentao humana e fortalecimento e/ou recuperao de
pessoas com sade debilitada.
Por fim, a mais nova forma de aproveitamento do glicerol, alm das
j apresentadas, para a produo de energia, atuando ele como cossubstrato de algum processo de biodigesto de matria orgnica, assunto este
atualmente em estudo no Nuplen (Daun, 2009). Graas ao seu alto teor de
carbono facilmente degradvel, o glicerol possui propriedades favorveis
digesto anaerbica em biodigestores quando associada a resduos orgnicos com alto teor de nitrognio.
No entanto, alm da produo do glicerol, h tambm a gerao de outros subprodutos no processo de produo de biodiesel, que so as tortas.
Atualmente elas so empregadas na adubao orgnica, gerao de energia
e de forma menos expressiva como alimentos para animais (Abdalla et al.,
2008), sendo este outro tema de objeto de estudos na rea de Zootecnia da
Unesp de Ilha Solteira.
A utilizao de tortas e farelos apresenta alguns pontos importantes, no
que tange a sua introduo na alimentao de animais, entre eles a infestao ps-colheita pelo fungo Aspergillus flavus, que produz uma toxina de
alta letalidade, a aflatoxina, porm cuidados durante a colheita e armazenagem reduzem este problema.
Outro ponto crtico o fato de as tortas e farelos apresentarem fatores
antinutricionais ou compostos bioativos, desde agentes goitrognios, glucosinolatus, cido ftico, gossipol, tanino e saponinas, at compostos altamente txicos como o forbol, encontrado no pinho manso (Makkar; Becker, 1998). Mas esses compostos na maioria dos casos so termolbeis e o
desenvolvimento de variedades livres dos mesmos pode favorecer a utilizao das tortas na alimentao de ruminantes e de monogstricos.
O desenvolvimento e o aprimoramento de processos para inativar princpios txicos ou alergnicos presentes nestes subprodutos possibilitam a
utilizao em raes para animais, tornando-os passveis de agregao de
valores produo de diversas oleaginosas como mamona, pinho manso,
nabo forrageiro e crambe.
1053
Consideraes finais
Em relao ao que foi exposto neste captulo, a demanda energtica
mundial por combustveis lquidos poder ser suprida parcialmente por
combustveis renovveis, como por exemplo, o biodiesel.
Todavia, diversos estudos devem ser viabilizados para tornar a produo
do biodiesel economicamente vivel e competitiva frente ao leo diesel do petrleo, de acordo com as normas de qualidade exigidas internacionalmente.
Diante desse contexto, a Unesp de Ilha Solteira continuar desenvolvendo pesquisas nesta rea, em especial por meio da utilizao da rota etlica, tendo em vista a grande produo de etanol na regio Oeste paulista.
Alm disso, sero incrementadas as pesquisas sobre a aplicao do glicerol
no processo de produo de biogs e, tambm, do biodiesel e percentuais de
misturas em motores de combusto interna, em um banco dinamomtrico,
analisando-se no s o desempenho como tambm os impactos ambientais
das emisses.
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1054
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Lista de autores
Adelir A. Saczk Laboratrio de Eletroanaltica, Departamento de Qumica,

Universidade Federal de Lavras.
Adriana Aparecida dos Santos Costa Grupo Especial de Ensaios em Voo,
Instituto de Pesquisas e Ensaios em Voo, Comando-Geral de Tecnologia
Aeroespacial.
Afonso Lopes Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Alberto J. Cavalheiro Ncleo de Bioensaios, Biossntese e Ecofisiologia de
Produtos Naturais, Departamento de Qumica Orgnica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
campus de Araraquara.
Alexander Alves da Silva Ncleo de Bioensaios, Biossntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais, Departamento de Qumica Orgnica, Instituto
de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
(Unesp), campus de Araraquara.
Ana Carla Resende Fraiz Laboratrio de Fisiologia Molecular, Departamento de Biologia Vegetal, Universidade Federal de Viosa (UFV).
Ana Flavia de A. Carvalho Departamento de Cincia de Alimentos, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Universidade Estadual de Campinas
(Unicamp).
Ana Paula Dias da Silva Ncleo de Bioensaios, Biossntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais, Departamento de Qumica Orgnica, Instituto
1060
LISTA DE AUTORES

Andr L. dos Santos Faculdade de Cincias Integradas do Pontal, Universidade Federal de Uberlndia.
Antonio J. Diniz Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao
de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Ilha
Solteira.
Aparecido C. Gonalves Laboratrio de Manuteno Preditiva e de Anlise de leos, Departamento de Engenharia Mecnica, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
campus de Ilha Solteira.
Caio Antonio Carbonari Departamento de Produo Vegetal, Faculdade
de Cincias Agronmicas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Cassio Roberto M. Maia Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e
Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica,
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus
de Ilha Solteira.
Ceclia Laluce Departamento de Bioqumica e Tecnologia Qumica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Celso Eduardo Tuna Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos,
Departamento de Energia, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista "Julio de Mequita Filho" (Unesp), campus de Guaratinguet.
Christian Jeremi Coronado Rodriguez Grupo de Estudos em Tecnologias de Converso de Energia, Instituto de Engenharia Mecnica, Universidade de Itajub, campus de Itajub.
Claudia Dorta Faculdade de Tecnologia (Fatec), campus de Marlia.
Cludio Cavariani Departamento de Produo Vegetal, Faculdade de
Cincias Agronmicas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita
Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Crispin Humberto Garcia-Cruz Programa de Ps-Graduao em Engenharia e Cincia de Alimentos, rea de Concentrao, Cincia e Tecnologia
de Alimentos, Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de So
Jos do Rio Preto.
BIOENERGIA
1061
Cristiane Aparecida Martins Diviso de Engenharia Aeronutica, Instituto Tecnolgico de Aeronutica.

Daniela Alonso Bocchini Martins Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Danilo Luiz Flumignan Centro de Monitoramento e Pesquisa da Qualidade de Combustveis, Biocombustveis, Petrleo e Derivados (Cempeqc),
Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita
Filho (Unesp), campus de Araraquara, e Instituto Federal de Educao,
Cincia e Tecnologia de So Paulo (IFSP), campus Avanado Mato.
Douglas F. da Silva Instituto de Biocincias de Rio Claro, Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
der Aparecido Garcia Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Edivaldo Domingues Velini Departamento de Produo Vegetal, Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade Estadual Paulista Jlio de
Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Eduardo Alves de Almeida Departamento de Qumica e Cincias Ambientais, Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas (Ibilce), Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
So Jos do Rio Preto.
Eduardo Maffud Cilli Departamento de Bioqumica e Tecnologia Qumica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Eduardo Rossini Guimares Laboratrio de Agricultura, Departamento
de Produo Vegetal, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Jaboticabal.
Edvaldo Aparecido Amaral da Silva Departamento de Produo Vegetal,
Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Edwil Aparecida de Lucca Gatts Departamento de Alimentos e Nutrio, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista
Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Eleni Gomes Laboratrio de Bioqumica e Microbiologia Aplicada, Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas, Universidade Estadual Paulista
Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de So Jos do Rio Preto.
1062
LISTA DE AUTORES
Eliana G. M. Lemos Laboratrio de Microrganismos e Plantas, Faculdade

de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de
Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Elson Longo Laboratrio Interdisciplinar de Eletroqumica e Cermica,
Departamento de Fsico-Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio
de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Emanuel R. Woiski Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Ilha Solteira.
Fabricio Coutinho de Paula Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista
Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Felipe Thomaz da Cmara Colegiado de Engenharia Agronmica, Universidade Federal do Cear (UFC), campus de Cariri.
Fernanda Maria Pagane Guereschi Ernandes Programa de Ps-Graduao em Engenharia e Cincia de Alimentos, rea de Concentrao, Cincia
e Tecnologia de Alimentos, Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
campus de So Jos do Rio Preto.
Fernando H. Dib Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Ilha
Solteira/Petrobrs.
Gabriel Mazzi Leme Ncleo de Bioensaios, Biossntese e Ecofisiologia de
Produtos Naturais, Departamento de Qumica Orgnica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
campus de Araraquara.
Gilberto Hirotsugu Azevedo Koike Engenheiro mecnico e consultor
autnomo.
Giorgio Eugenio Oscare Giacaglia Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade de Taubat, campus de Juta.
Gisele Cristina Ravaneli Laboratrio de Tecnologia do Acar e do lcool
(Microbiologia das Fermentaes), Departamento de Tecnologia, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista
Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
BIOENERGIA
1063
Heloiza Ferreira Alves Prado Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Ilha Solteira.
Hideko Yamanaka Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista
Iraides Aparecida de Castro Villela Departamento de Cincias Bsicas e
Ambientais, Escola de Engenharia de Lorena, Universidade de So Paulo
(USP), campus de Lorena.
Isabel Duarte Coutinho Ncleo de Bioensaios, Biossntese e Ecofisiologia de Produtos Naturais, Departamento de Qumica Orgnica, Instituto
Jackson A. M. de Souza Departamento de Biologia Aplicada Agropecuria, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Jairo Osvaldo Cazetta Departamento de Tecnologia, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Janana Gagliardi Bara Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias,
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Janete Apparecida Desidrio Departamento de Biologia Aplicada Agropecuria, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Jessica C. Medina Gallardo Departamento de Bioqumica e Tecnologia
Qumica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de
Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Joo Batista C. Silva Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Ilha Solteira.
Joo Cludio Thomo Laboratrio de Bioengenharia, Departamento de
Engenharia e Tecnologia de Alimentos, Instituto de Biocincias, Letras e
Cincias Exatas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
(Unesp), campus de So Jos do Rio Preto.
1064
LISTA DE AUTORES
Jonas Contiero Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto de

Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Jos Antonio de Souza Rossato Jnior Laboratrio de Ecologia Aplicada,
Departamento de Fitossanidade, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
campus de Jaboticabal.
Jos Eduardo de Oliveira Centro de Monitoramento e Pesquisa da Qualidade de Combustveis, Biocombustveis, Petrleo e Derivados (Cempeqc),
Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Jos Giacomo Baccarin Departamento de Economia Rural, Faculdade de
Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de
Jos Jorge Gebara Departamento de Economia Rural, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Jos Luz Silveira Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos, Departamento de Energia, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Guaratinguet.
Josiel Jos da Silva Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista
Julio Santana Antunes Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos,
Kamilla Ortega Programa de Ps-graduao em Agronomia (Produo Vegetal), Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
Karin M. Ludwig Faculdade de Ensino Superior de Assis (Fema).
Kate Cristina Blanco Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio de
Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Klber Pereira Lanas Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Leomar Paulo de Lima Instituto Federal do Tringulo Mineiro (IFTM),
campus de Uberlndia.
BIOENERGIA
1065
Leonardo L. Okumura Centro de Cincias Exatas, Universidade Federal

de Viosa.
Leonardo Lucas Madaleno Laboratrio de Tecnologia do Acar e do
lcool (Microbiologia das Fermentaes), Departamento de Tecnologia,
Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Llian Nogueira Departamento de Qumica e Cincias Ambientais, Instituto de Biocincias, Letras e Cincias Exatas (Ibilce), Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de So Jos do Rio Preto.
Lucas M. Scarpin Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Ilha Solteira.
Lcia Bollini Braga Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos,
Departamento de Energia, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Guaratinguet.
Lcia Maria Carareto Alves Laboratrio de Microrganismos e Plantas,
Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Luciana Fontes Coelho Departamento de Bioqumica e Microbiologia,
Instituto de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Luciana Maria Saran Departamento de Tecnologia, Faculdade de Cincias
Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita
Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Luiz Octvio Mattos dos Reis Departamento de Engenharia Eltrica,
Universidade de Taubat, campus de Juta.
Manoel Victor Franco Lemos Departamento de Biologia Aplicada Agropecuria, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Marcelo C. Fiomari Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Ilha Solteira/UMOE Bioenergy.
Marcelo Firmino de Oliveira Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras,
Universidade de So Paulo (USP), campus de Ribeiro Preto.
1066
LISTA DE AUTORES
Mrcia Justino Rossini Mutton Laboratrio de Tecnologia do Acar e

do lcool (Microbiologia das Fermentaes), Departamento de Tecnologia, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Mrcio Evaristo da Silva Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos, Departamento de Energia, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Guaratinguet.
Marco A. Modenes Jr. Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Marcos Paulo Mendes Curso de Agronomia, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Maria da Consolao Fonseca de Albuquerque Departamento de Engenharia Civil, Faculdade de Engenharia de Ilha Solteira (SP) (DEC-Feis).
Maria Ins Tiraboschi Ferro Laboratrio de Bioqumica e Biologia Molecular, Departamento de Tecnologia, Faculdade de Cincias Agrrias e
Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
(Unesp), campus de Jaboticabal.
Maria Olivia Campos Masiero Departamento de Bioqumica e Tecnologia Qumica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio
de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Maria Valnice B. Zanoni Instituto de Qumica, Universidade Estadual
Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Mariana Cortezi Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto
de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Mariana R. Pereira Laboratrio de Microrganismos e Plantas, Faculdade
de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio
de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Mary Helen Palmutti Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio
de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Maurcio Boscolo Laboratrio de Fsico-Qumica, Departamento de Qumica e Cincias Ambientais, Instituto de Biocincias, Letras e Cincias
Exatas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
campus de So Jos do Rio Preto.
BIOENERGIA
1067
Melina Cais Jejcic de Oliveira Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
Miguel Angelo Mutton Laboratrio de Agricultura, Departamento de
Produo Vegetal, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Jaboticabal.
Miguel Joaquim Dabdoub Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras, Universidade de So Paulo (USP), campus de Ribeiro Preto.
Murilo Coelho Theodoro Neves Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp),
Nelson R. Stradiotto Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista
Odair Aparecido Fernandes Laboratrio de Ecologia Aplicada, Departamento de Fitossanidade, Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias,
de Jaboticabal.
Paula G. Fenga Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Paulo Avila Neto Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto
de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Paulo Srgio B. dos Santos Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao
e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica,
de Ilha Solteira.
Pedro de Oliva-Neto Departamento de Cincias Biolgicas, Faculdade de
Cincia e Letras, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Assis.
Rafael Rodrigues Hatanaka Centro de Monitoramento e Pesquisa da Qualidade de Combustveis, Biocombustveis, Petrleo e Derivados (Cempeqc),
Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Raffaele Spinelli Consiglio Nazionale delle Ricerche, Istituto per la Valorizzazione del Legno e delle Specie Arboree (CNR/Ivalsa), Itlia.
1068
LISTA DE AUTORES
Regina M. Takeuchi Faculdade de Cincias Integradas do Pontal, Universidade Federal de Uberlndia.

Ricardo A. Romo Jnior Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e
de Ilha Solteira/Cargill Agrcola SA.
Ricardo Alan V. Ramos Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e
de Ilha Solteira.
Roberta Barros Lovaglio Departamento de Bioqumica e Microbiologia,
Instituto de Biocincias de Rio Claro, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Rio Claro
Roberto da Silva Laboratrio de Bioqumica e Microbiologia Aplicada,
Departamento de Qumica e Cincias Ambientais, Instituto de Biocincias,
Letras e Cincias Exatas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de So Jos do Rio Preto.
Rodnei Passolongo Ncleo de Planejamento Energtico, Gerao e Cogerao de Energia (Nuplen), Departamento de Engenharia Mecnica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Ilha Solteira/Petrobras.
Rodolfo dos Santos Laboratrio de Otimizao de Sistemas Energticos,
Rodrigo Sequinel Centro de Monitoramento e Pesquisa da Qualidade de
Combustveis, Biocombustveis, Petrleo e Derivados (Cempeqc), Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho
Rogrio Katsume Kimura Departamento de Engenharia Mecnica, Faculdade de Engenharia de Ilha Solteira (SP) (DEM-Feis).
Ronney Arismel Mancebo Boloy Laboratrio de Otimizao de Sistemas
Energticos, Departamento de Energia, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista "Julio de Mequita Filho" (Unesp), campus de
Guaratinguet.
Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade
Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
BIOENERGIA
1069
Sandra Regina Pombeiro-Sponchiado Departamento de Bioqumica e

Tecnologia Qumica, Instituto de Qumica, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Araraquara.
Saulo Philipe Sebastio Guerra Faculdade de Cincias Agronmicas,
Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Simoni Anese Laboratrio de Ecofisiologia de Sementes, Departamento de
Botnica, Universidade Federal de So Carlos (UFSCar).
Sue Ellen Ester Queiroz Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia Goiano, campus de Uruta.
Terezinha Ferreira Xavier Programa de Ps-graduao em Agronomia
(Cincia do Solo), Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Jaboticabal.
Thas C. Maester Laboratrio de Microrganismos e Plantas, Faculdade de
Ulisses Rocha Antuniassi Departamento de Engenharia Rural, Faculdade
de Cincias Agronmicas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de Botucatu.
Valria Marta Gomes de Lima Departamento de Cincias Biolgicas,
Faculdade de Cincias e Letras, Universidade Estadual Paulista Jlio de
Mesquita Filho (Unesp), campus de Assis.
Viviane Schuch Laboratrio de Microrganismos e Plantas, Faculdade de
Wanderley J. Melo Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho (Unesp), campus de
Jaboticabal.
Wendell de Queirz Lamas Laboratrio de Otimizao de Sistemas
Energticos, Departamento de Energia, Faculdade de Engenharia, Universidade Estadual Paulista "Julio de Mesquita Filho" (Unesp), campus de
Guaratinguet.
Zuy M. Magriotis Departamento de Qumica, Universidade Federal de
Lavras.
SOBRE O LIVRO
Formato: 16 x 23 cm
Mancha: 27,5 x 49,0 paicas
Tipologia: Horley Old Style 11/15
1a edio: 2012
EQUIPE DE REALIZAO
Coordenao Geral
Marcos Keith Takahashi
A bioenergia constitui atualmente um importante

segmento das denominadas energias renovveis, frao cada
vez mais representativa entre as matrizes energticas
de vrios pases do mundo. No Brasil, a pesquisa sobre
bioenergia tem se desenvolvido consideravelmente, e
seu uso, apontado como exemplo a ser seguido na evoluo
tecnolgica energtica da sociedade contempornea.
Nesse contexto, Bioenergia: desenvolvimento, pesquisa
e inovao tem por objetivo proporcionar uma viso
abrangente sobre as diversas reas que compem este
segmento, com o intuito de contribuir para melhor
compreenso dessa importante energia renovvel fundamental
para o desenvolvimento do pas.
Este livro apresenta uma coletnea de trabalhos
realizados por vrios pesquisadores do Instituto de Pesquisa
em Bioenergia (Bioen) da Universidade Estadual Paulista Julio
de Mesquita Filho (Unesp). Essas pesquisas foram
agrupadas em cinco partes distintas, em que so mostradas
as vrias formas de biomassa utilizadas na obteno
de bioenergia; os diversos processos usados na produo de
biocombustveis; as aplicaes dos bicombustveis
em motores; os aspectos concernentes s biorrefinaria,
alcoolqumica e oleoqumica; e os impactos ambientais, sociais
e econmicos da sustentabilidade dos bicombustveis.
ISBN 978-85-7983-256-7
9 788579 832567

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Eliana G. de M.

CONSELHO EDITORIAL ACADMICO

2012 Editora UNESP

CIP BRASIL. Catalogao na fonte

Este livro publicado pelo Programa de Publicaes Digitais da Pr-Reitoria de Pesquisa

1 Metabolmica de cana-de-acar e sua relao com

7 A complexidade da produo do bioetanol em fermentaes

8 Produo de etanol por Zymomonas mobilis CCT 4494

15 Combustvel renovvel em trator agrcola:

21 Da biotecnologia biorrefinaria 753

22 Mudanas recentes na ocupao sucroalcooleira em

Na primeira parte intitulada Biomassa para bioenergia so aportados,

Biomassa para bioenergia

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

tarefa muito difcil (Casu et al., 2004). Os gneros Saccharum, Erianthus,

Por que estudar metabolmica de cana-de-acar?

pteses. Trata-se de abordagem complementar genmica e protemica,

Constituio micromolecular de cana-de-acar

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

Investigaes preliminares sobre a ocorrncia de substncias fenlicas

como CLAE-DAD-EM. Nesses estudos, vrias flavonas O e C-glicosiladas

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

Figura 1.1 Flavonas e antocianinas j identificadas em estudos qumicos com Saccharum

Figura 1.2 Compostos fenlicos e estilbenos j identificados em amostras de Saccharum

Figura 1.3 Lignanas j identificadas como constituintes de kokuto, alimento preparado

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

-3,6-diona; 24-etilcolest-22-en-3,6-diona; 6-hidroxi-campest-4-en-3-ona;

Figura 1.4 Esteroides identificados em estudos qumicos de Saccharum spp.

Figura 1.5 Triterpenos identificados em estudos qumicos de Saccharum spp.

Constituio micromolecular associada a eventos

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

O cido hidroxmico 2,4-diidroxi-1,4-benzoxazin-3-ona (DIBOA),

desses metablitos sob condies de estresse esto relacionadas proteo

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

evidentes nas condies de estresse trmico, indicando sua importncia na

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

vo podem suportar essa proposta. Objetivos adicionais devem considerar a

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

GLASSOP, D.; ROESSNER, U.; BACIC, A.; BONNETT, G. D. Changes in the

MUKHERJEE, S. K. Origin and distribution of Saccharum. Botanical Gazette, v.119,

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

ESTUDOS DA DORMNCIA E DO CONDICIONAMENTO FISIOLGICO DE SEMENTES

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

ESTUDOS DA DORMNCIA E DO CONDICIONAMENTO FISIOLGICO DE SEMENTES

que impedem a entrada de gua na semente. A hidratao e a consequente

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

caso, a absoro de gua e oxignio ocorrem normalmente pelas sementes,

A dormncia causada por substncias inibidoras est relacionada

As sementes de algumas espcies vegetais podem ser dispersas com

ESTUDOS DA DORMNCIA E DO CONDICIONAMENTO FISIOLGICO DE SEMENTES

identificar as partes do embrio. Alguns autores classificam esse tipo de

Condicionamento fisiolgico de sementes

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

Solues osmticas, com agentes inorgnicos, como o NaCl, KNO3 e

ESTUDOS DA DORMNCIA E DO CONDICIONAMENTO FISIOLGICO DE SEMENTES

envolvendo anlise protemica, que enzimas associadas com a mobilizao

BIOMASSA PARA BIOENERGIA

ambos os fenmenos durante o condicionamento em gua (hidropriming) de

ESTUDOS DA DORMNCIA E DO CONDICIONAMENTO FISIOLGICO DE SEMENTES

Sementes de linhagens hbridas de milho submetidas ao hidropriming

Mecanismos fisiolgicos e moleculares associados