ARTICULO ORIGINAL

Comparacin de las tcnicas de Willis y de

Sheather para el diagnstico
coproparasitoscpico
Csar A. Jara1, Carlos A. Minchn-Medina2 y Csar ZrateAsmat3
1

Departamento de Microbiologa y Parasitologa de la Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo, Per

2
Departamento de Estadstica. Facultad de Ciencias Fsicas y Matemticas. Universidad Nacional de
Trujillo
3
Egresado de la Escuela Acadmico-Profesional de Microbiologa y Parasitologa de la Universidad
Nacional de Trujillo

RESUMEN
Se desarroll un estudio comparativo para evaluar la concordancia de la tcnica de Willis
respecto de la de Sheather en la deteccin de protozoarios y helmintos intestinales en 98
muestras fecales correspondientes a igual nmero de nios aguarunas de la zona de Mesones
Muro (Bagua, Amazonas, Per).
Se detectaron cinco especies de protozoarios intestinales y cinco de helmintos, de las cuales
Blastocystis hominis (91.8%) fue la ms frecuentemente hallada entre las primeras y A.
lumbricoides (71.4%) entre las segundas, por ambas tcnicas. Se encontr una elevada
sensibilidad de la tcnica de Willis respecto de la de Sheather para la investigacin de quistes de
B. hominis (97.8%) y de huevos de A. lumbricoides (91.4%), as como un elevado valor
predictivo positivo para estos organismos y para quistes de Giardia lamblia (93.8, 88.9 y 100.0)
y un elevado ndice de concordancia para Entamoeba coli (kappa= 0.63) y para A. lumbricoides
(kappa= 0.64). En conclusin: es posible la utilizacin de la tcnica de Willis para la deteccin
de quistes de B. hominis y de E. coli, as como de huevos de A. lumbricoides con la misma
eficacia que la tcnica de Sheather.
Palabras clave: Tcnica coproparasitoscopica de Willis, de Sheather, ndice de concordancia,
aguarunas, Bagua-Amazonas-Per
ABSTRACT
A comparative study was developed to evaluate the concordance between the Willis (satured
saline-flotation) and Sheather (sugar-flotation) techniques in the detection of intestinal
protozoan and helminthes in ninety-eight native aguarunas from Mesones Muro Village (Bagua,
Amazonas, Peru). It was detected five species of protozoan parasites and five species of
intestinal helminthes. Of them, Blastocystis hominis (91.8%) was found with the highest
frequency among the protozoan and Ascaris lumbricoides (71.4%) among the helminth
parasites, by both of coprological techniques used. It was found too high sensitivity of Willis
technique related to Sheather technique to investigation of B. hominis cists (97.8%) and A.
lumbricoides ova (91.4%), as well as, high positive predictive value for these organisms and for
Giardia lamblia cists (93.8, 88.9 y 100.0) and high concordance index for Entamoeba coli cists
(kappa= 0.63) and for A. lumbricoides ova (kappa= 0.64). It was concluded that its possible the
using of Willis technique with the same efficiency of Sheather technique for the detection of
cists of B. hominis and E. coli, as well as, for A. lumbricoides ova

Key words: Willis technique, Shather technique, concordance index, aguarunas, BaguaAmazonas-Peru
INTRODUCCIN
Las infecciones por protozoarios y helmintos intestinales constituyen las dolencias crnicas
ms frecuentes en muchos pases del mundo, en especial en zonas rurales donde causan
disminucin de la capacidad productiva de individuos adultos parasitados y la falta de
crecimiento, aprehensin y desarrollo cognoscitivo en nios y adolescentes1,2, 3, 4.
Siendo tan frecuentes, el diagnstico de rutina de tales infecciones intestinales se ejecuta
mayormente por la tcnica denominada en fresco, que por su simpleza y bajo costo se ha
convertido en una tcnica universal; sin embargo, es poco sensible5,6 lo que ha conducido ha
tener en cuenta la importancia de someter una muestra fecal adicionalmente a una o ms
tcnicas de concentracin para aumentar la sensibilidad y confiabilidad en el hallazgo de las
formas parasitarias, sobre todo cuando la carga parasitaria es baja7.
Tales tcnicas de concentracin, que permiten el anlisis de mayor cantidad de muestra en
comparacin a la tcnica en fresco, se dividen en dos grupos: las de flotacin, que emplean
soluciones densas de modo que las formas parasitarias floten en el depsito de anlisis, y las de
sedimentacin, que por el contrario utilizan soluciones menos densas y las formas parasitarias
debern buscarse en sedimento luego de ejecutada la tcnica5,6.
Las tcnicas de concentracin, por usar equipos y reactivos diferentes, poseen distinto grado
de sensibilidad y de uso existiendo preferencias por parte del laboratorista por el uso de unas u
otras. Siendo as, ha resultado importante someterlas a evaluaciones que, en definitiva, es parte
del proceso de validacin que conduce a acreditar el uso de ellas8.,9,10,11 o realizar comparaciones
bajo ciertos parmetros a fin de determinar las bondades de cada una y posterior uso 12,13,14,15,16.
Por la sencillez de su ejecucin y por utilizar reactivos de uso comn, dos son las tcnicas de
flotacin ms frecuentemente usadas: la de Willis, que utiliza solucin saturada de NaCl22 y la
de Sheather1, que usa solucin saturada de azcar y centrifugacin; sin embargo, resulta
necesario determinar si la primera, que es ms ventajosa por prescindir del uso de equipos
distintos al microscopio compuesto, tiene la misma eficacia en la deteccin de protozoarios y
helmintos intestinales del hombre que la segunda que ha demostrado alta eficacia1,2.
Teniendo en cuenta que el diagnstico coproparasitoscpico debe ser realizado de manera
apropiada, con mayor sensibilidad y especificidad para la deteccin de protozoarios y helmintos
intestinales en lo posible con tcnicas sencillas en su procedimiento y baratas de aplicacin
masiva, toda vez que d ellos depender el tratamiento especfico, es que se propuso una
investigacin que estuvo dirigida a determinar si la tcnica de Willis cuando se usa para la
deteccin de protozoarios y helmintos intestinales del hombre resulta tan eficaz como la tcnica
de Sheather para tales fines.
MATERIAL Y MTODOS
Muestras fecales
Se utilizaron 98 muestras fecales positivas a una o mas especies de protozoarios y helmintos
intestinales de un total de 212 muestras obtenidas de igual nmero de nios de comunidades
Aguarunas de la zona de Mesones Muro, provincia de Bagua, Departamento de Amazonas, en el
Alto Maran (Per), cuyos resultados fueron publicados en un trabajo previo17. Los nios
participantes en dicho estudio tenan entre seis y 11 aos de edad, estaban aparentemente sanos,
concurran con normalidad al colegio y vivan en comunidades cuyas habitaciones estaban
construidas de madera con techo de palma y carecan de luz, agua potable y de Infra-estructura
bsico sanitaria. En dicho estudio, asimismo, se cumplieron con dar charlas de prevencin y de
cumplir con los requisitos ticos. Para la deteccin de protozoarios y helmintos intestinales se
utilizaron, en dicha ocasin, las tcnicas en fresco (con solucin salina fisiolgica y lugol), de
Teleman y de Kynioun17

Tcnicas coproparasitoscpicas.
Se compararon las tcnicas de Willis, tal como se halla descrita en el Manual de Mtodos
bsicos de laboratorio en Parasitologa proporcionada por la Organizacin Mundial de la Salud5
mientras que la tcnica de Sheather usada es la descrita en el Manual de procedimientos de
laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre propuesto por el Instituto
Nacional de Saluid4. Por sus antecedentes de mayor sensibilidad1, la tcnica de Shether fue
tomada como la gold estndar
Tratamiento estadstico
Los datos obtenidos fueron analizados utilizando el programa computarizado EPIDAT,
versin 3.1, a fin de determinar la sensibilidad, especificidad, ndice de predictibilidad, valor
predictivo positivo, valor predictivo negativo, el ndice de concordancia y probabilidad, con un
nivel de confianza del 95%.
RESULTADOS
En las 98 muestras fecales investigadas se detectaron cinco especies de protozoarios
intestinales y cinco de helmintos. Blastocystis hominis fue el protozoario detectado con mayor
frecuencia tanto por la tcnica de Willis como la de Sheather y Giardia lamblia el detectado con
menor frecuencia, tambin por ambas tcnicas (Tabla 1). Respecto de los helmintos, Ascaris
lumbricoides fue el ms frecuentemente detectado por ambas tcnicas, en tanto que las dems
especies slo fueron detectadas por la tcnica de Sheather (Tabla 1).
Se encontr elevada especificidad de la tcnica de Willis respecto de la de Sheather cuando se
trata de detectar quistes de B. hominis (97.8%) y huevos de A.lumbricoides (91.4%), por el
contrario, se encontr baja especificidad para estos parsitos pero alta, del 100%, para el caso de
G. lamblia y F. hepatica (Tabla 2). Se encontr, asimismo, como se muestra en la misma Tabla
2, que el ndice de validez fue mayor para el caso de los helmintos que para los protozoarios
intestinales y que el valor predictivo positivo fue elevado cuando se pretende encontrar quistes
de B. hominis (93.8%) y de G. lamblia (100.0%) y, por el contrario, el valor predicitivo
negativo fue alto para la deteccin de parsitos distintos a estos ltimos.
El ndice de concordancia (valor kappa) fue relativamente alto slo para el caso de cuando se
quiere detectar la presencia de qustes de E. coli y de huevos de A.lumbricoides, asimismo, se
encontr una diferencia significativa (p<0,05) cuando se trata de utilizar las tcnicas en el
hallazgo de los protozoarios, a excepcin de B. hominis (Tabla 2)

Tabla 1. Frecuencia de infeccin por protozoarios y helmintos intestinales en 98 muestras fecales

positivas a dichos organismos pertenecientes a nios aguarunas de Wawico, Bagua,
Amazonas-Per* detectadas por las tcnicas de Sheather y de Willis
Tcnica
Protozoario o helminto
Blastocystis hominis
Entamoeba coli
Iodamoeba butchslii
Endolimax nana
Giardia lamblia

Sheather
N(%)
92(93.9)
50(51.0)
46(46.9)
12(12.2)
10(10.2)

Willis
N(%)
90(91.8)
40(40.8)
20(20.4)
04(04.1)
02(02.0)

Ascaris lumbricoides
Trichocephalus trichiura
Necator/Ancylostoma
Fasciola hepatica
Enterobius vermicularis

70(71.4)
06(06.1)
04(04.1)
04(04.1)
02(02.0)

64(65.3)
00(00.0)
00(00.0)
00(00.0)
00(00.0)

*Los datos completos de la investigacin respecto de la prevalencia han sido publicados previamente17

Tabla 2. Comparacin de la tcnica de Willis en relacin a la tcnica de Sheather en la deteccin de

protozoarios y helmintos intestinales en 98 muestras fecales ,positivas a dichos organismos,
pertenecientes a nios aguarunas de Wawico, Bagua, Amazonas-Per*
Protozoo o helminto

Willis/
Positivo

Sheather
Negativo

S%

E%

VP+

VP-

Kappa

00.0
83.3
84.6
97.7
100.0

ndice
de
validez
91.8
81.6
65.3
89.8
91.8

Blastocystis hominis
Entamoeba coli
Iodamoeba butchslii
Endolimax nana
Giardia lamblia

90/92
40/50
20/46
4/12
2/10

0/6
40/48
44/52
84/86
88/88

97.8
80.0
43.5
33.3
20.0

93.8
83.3
71.4
66.7
100.0

00.0
80.0
62.9
91.3
91.7

-0.03
0.63
0.29
0.39
0.31

0.715
0.000
0.002
0.000
0.000

Ascaris lumbricoides
Trichuris trichiura
Necator/Ancylostoma
Fasciola hepatica
Enterobius
vermicularis

64/70
0/6
0/4
0/4
0/2

20/28
92/92
92/94
94/94
92/96

91.4
0.0
0.0
0.0
0.0

71.4
100.0
97.9
100.0
95.8

85.7
93.9
93.9
95.9
93.9

88.9
*
0.0
*
0.0

76.9
93.9
95.8
95.9
97.9

0.64
0.00
-0.03
0.00
-0.03

0.000
1.000
0.768
1.000
0.768

*Los datos completos de la investigacin respecto de la prevalencia han sido publicados previamente17
S= sensibilidad, E= especificidad, VP+= valor predictivo positivo, VP-= valor predictivo negativo, p= probabilidad

DISCUSIN
La aplicacin de diferentes mtodos de examen de heces se torna necesaria teniendo en
cuenta la gran variabilidad morfolgica y biolgica que presentan los protozoarios y helmintos
intestinales. Los dos mtodos elegidos para efectuar la presente investigacin son de fcil
proceso, fcil obtencin de materiales y reactivos y de relativa eficacia. De ambos, la tcnica de
Sheather ha sido usada como patrn, toda vez que utiliza en su procedimiento la centrfuga lo
que asegura que los detrituts presentes en la muestra fecal sern separados con mayor eficacia
de las formas parasitarias que cuando se usa la tcnica de Willis en la cual no se usa tal equipo y
la separacin se hace manualmente, con el uso de una bagueta de vidrio o material parecido. Al
mismo tiempo, la solucin saturada de azcar utilizada en la tcnica de Shetaher presenta un
mayor peso especfico que la solucin saturada de sal utilizada en la tcnica de Willis dndole
una mayor eficacia en el diagnstico. Sin embargo, como se ha mencionado, la ltima de las
tcnicas nombradas no utiliza equipos diferentes al microscopio compuesto, el ClNa2 usado es
mucho ms disponible que el azcar, las medidas recomendadas (28g para 100mL) para la
preparacin de la solucin saturada usada en el procedimiento son ms precisas que las medidas
de azcar, respectivamente, de la cual no se tiene una medida exacta5,6.
El presupuesto de que la tcnica de Sheather es ms eficiente que la de Willis para el
diagnstico de coproparsitos establecido en trabajos previos, ha sido corroborado luego de
efectuados los anlisis coproparasitoscpicos porque, como se puede apreciar en la Tabla 1,
mediante la tcnica de Sheather se ha detectado mayor nmero de especies de parsitos
intestinales y en mayor frecuencia, a excepcin de cuando fue utilizada para la investigacin de
quistes de Blastocystis hominis y de Entamoeba coli, as como huevos de Ascaris lumbricoides.
Esto estara indicando que para estos casos especficos puede usarse una u otra tcnica, siendo
preferible el uso de la tcnica de Willis por ser, como se ha manifestado, ms sencilla y barata;
sin embargo, para lograr este cometido debe recomendarse que la lectura se haga antes de los 15
minutos a fin de evitar que la solucin saturada de sal se des-sature. De otro modo se arribar a
resultados equivocados, sobre todo para el caso de A. lumbricoides, porque se trata de un
helminto cuyos huevos son ms pesados que los quistes de los referidos protozoarios y, pasados
entre 15 y 30 minutos, tienden a sedimentar en el depsito5,6,7.
Concordante con lo sealado en el prrafo anterior, luego de efectuar las comparaciones se
encontr elevada sensibilidad solamente cuando se trata de detectar a los quistes de B. hominis y

a los huevos de A. lumbricoides y mediana sensibilidad cuando se trata de encontrar quistes de

E. coli y muy baja sensibilidad para el resto de protozoarios y helmintos buscados. Ello podra
interpretarse como que la tcnica de Willis tiene una eficacia en alto porcentaje para la
deteccin de B .hominis y de A. lumbricoides que la tcnica de Shather y menores porcentajes
para los dems simbiontes. Anteriormente, Santos-Araujo et al7 y Rodrgues-Alarcn11
encontraron resultados parecidos utilizando tambin tcnicas de flotacin.
Si se tiene en cuenta que las tcnicas usadas para la bsqueda de protozoarios y helmintos
intestinales en esta investigacin son cualitativas, de flotacin y, por lo tanto, con los mismos
principios bsicos, se entender que en general se espera que deban tener baja especificidad,
entendida sta como la capacidad para detectar una determinada especie entre otras. Se espera,
asimismo, que cuando la sensibilidad es alta, la especificidad debe ser baja y eso es los que se
ha verificado. En efecto, para los casos de B. hominis y A. lumbricoides en los cuales se hall
elevado porcentaje de sensibilidad es alta, el porcentaje de especificidad, por el contrario, es
bajo y una de las tareas de diversos grupos cientficos es encontrar tcnicas de diagnstico con
elevados porcentajes (idealmente 100%) para ambos parmetros para recomendar el uso de tal o
cual tcnica. En el mismo sentido, se ha observado alta especificidad para el caso de helmintos
intestinales y para el hallazgo de quistes de G. lamblia, hecho que nuevamente indica que para
el caso de helmintos puede usarse la tcnica de Willis con la misma expectativa que la otra
tcnica investigada y de hecho los manuales prcticos consultados: el del Instituto Nacional de
Salud del Per5 y el de la Organizacin Mundial de la Salud6 recomiendan el uso de estas
tcnicas para la investigacin de helmintos intestinales.
El hecho de que el ndice de validez sea mayor para el caso de la deteccin de la presencia de
helmintos intestinales en muestras fecales que para los protozoarios estara indicando lo que se
ha sealado previamente: las tcnicas de Willis comparada con la de Sheather debe
preferentemente utilizarse para la bsqueda de huevos de helmintos, porque las soluciones que
utiliza en el proceso son de textura gruesa comparadas con otras soluciones saturadas, como la
de sulfato de Zinc que utiliza la tcnica de Faust, y que detecta con mayor prestancia a
protozoarios7,8
En el mismo sentido, cuando se analizan los resultados hallados respecto del valor predictivo
positivo se observa que se han detectado valores altos cuando se trata de quistes de B. hominis y
de G. lamblia. Esto significa que ambas tcnicas son de elevada predisponibilidad para el
hallazgo de dichos organismos y que puede, por lo tanto, usarse la una o la otra para tales fines
con, bsicamente, las mismas posibilidades de deteccin o de diagnstico positivo. Igualmente
sucede para el caso de A. lumbricoides, siendo el nico dentro de este grupo de parsitos, pues
para las dems especies los valores hallados son bajos. Probablemente est influyendo las bajas
frecuencias halladas para las especies de helmintos distintas a las de A. lumbricoides7,11,13,14.
Como sucede con el caso de la sensibilidad y especificidad, cuando el valor predictivo positivo
es alto, el valor predictivo negativo es bajo (Tabla 2)
El ndice kappa es uno de los medidores ms tiles cuando se comparan la eficiencia de dos
medidores utilizados, porque permite medir la concordancia o discrepancia de tcnicas de
coprodiagnstico en este caso. Siendo as, en la mayora de casos analizados el ndice
determinado es bajo, incluso, como cuando se trata de quistes de B. hominis y de huevos de
Necator/Ancylostoma y de E. vermicularis, con valor negativo, entendindose que la tcnica de
Sheather es ms eficiente que la de Willis cuando se trata de detectar a las formas sealadas; sin
embargo, para el caso de quistes de E. coli y de huevos de A. lumbricoides se detect valores
por encima del 0.6, lo que significa que podra emplearse cualquiera de las dos tcnicas de
diagnstico coprolgico de estas ltimas especies con un porcentaje esperado mayor al
50%7,8,11.
Finalmente, el hecho de haber encontrado valores de p menores al 0,05 en la mayora de
protozoos, significa que los valores encontrados cuando se emplea la tcnica de Willis respecto
a la de Sheather son en realidad diferentes; es decir, en la mayora de protozoos a excepcin de
los quistes de B. hominis, es preferible la utilizacin de la tcnica de Sheather. Por el contrario,
los valores de p en el caso de los helmintos es mayor al 0,05, lo que significa que no hay
diferencia estadsticamente significativa pudiendo utilizarse una o la otra tcnica con la misma
eficacia para el diagnstico de los mencionados helmintos intestinales, a excepcin de A..

lumbricoides que, como se lo sealan los otros parmetros, puede usarse la una o la otra con la
misma expectativa.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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