UNIVERSIDAD NACIONAL AUNTONOMA DE MEXICO.

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA.

CARRERA DE QUIMICA FARMACEUTICO BILOGICA

Microbiologa General II
TRANSMISORES, VECTORES Y ECTOPARASITOS
INVESTIGACIN

Integrantes:
Ortiz Martnez Liliana

Equipo: 2
Practica: 2
Grupo. 2701

El tamao de los microorganismos impide detectarlos a simple vista, por lo que

es esencial el uso del microscopio. Para que un objeto pueda ser percibido a
travs del microscopio, este debe poseer cierto grado de contraste con el
medio circundante. Para aumentar el contraste de los microorganismos y lograr
una mejor observacin de los mismos, se emplean diferentes preparaciones y
tcnicas de tincin. Las preparaciones pueden ser hmedas o frotes fijos, las
primeras se utilizan para observar movilidad y en ambos casos la adicin de
colorantes, al aumentar el contraste, permite una mejor observacin. Por
ejemplo en el estudio microscpico de los protozoos se utilizan colorantes
vitales y supravitales que tien ciertas estructuras como se expone en el
cuadro 1. Los colorantes vitales permiten observar movilidad, as como algunos
de sus organelos o inclusiones teidas, sin dao aparente; estos se preparan
en soluciones acuosas o alcohlicas muy diluidas. En tanto que los colorantes
supravitales, aun cuando tienen la ventaja de hacer ms evidentes algunos
organelos, presentan el inconveniente de afectar la viabilidad de los
organismos. Estos colorantes varan en su composicin y consisten en mezclas
de reactivos que incluyen el colorante, cidos, aldehdos, alcoholes y agua. Los
primeros se aplican directamente en la muestra, en tanto que para los
supravitales se recomienda aplicar una pequea cantidad del colorante al
portaobjetos y dejar secar y posteriormente colocar la muestra. Para que la
aplicacin del colorante sea uniforme, se recomienda extenderlo con la ayuda
de otro portaobjetos.

Existe un gran nmero de tinciones las que se aplican con objetivos

especficos, de las cuales a continuacin se exponen algunos ejemplos. La
reaccin a la tincin de Gram y de Ziehl-Neelsen se basa en la composicin y
estructura de la pared celular, que determina que unas bacterias retengan el
primer colorante, en tanto que otras lo pierdan, lo que les permite reaccionar
con el colorante de contraste. Las tinciones selectivas son aqullas que
permiten observar un organelo celular determinado. Algunas bacterias tienen
la capacidad de producir endosporas y cpsulas. Los primeros son organelos de
resistencia que se caracterizan por presentar una capa externa formada por un
complejo de calcio, cido dipicolnico y peptidoglicano. Debido a esta
composicin, es muy difcil que los colorantes penetren, por lo que al aplicar
una tincin simple, estas aparecen como cuerpos incoloros (dentro o fuera de
la clula). No obstante es posible teirlas mediante la aplicacin de mtodos
drsticos. Respecto a la cpsula, esta es una cubierta extracelular constituida
por agua y polisacridos que se acumulan alrededor de la clula. Estos
componentes no se combinan con los colorantes, por lo que para la
observacin de la misma se emplean tinciones negativas con las que se
oscurece el fondo y de esta manera se contrastan las cpsulas.
2.2.5.1 Tincin de Gram Materiales Cultivos puros de las siguientes bacterias:
Cepas de referencia: Staphylococcus aureus ATCC 25923 Escherichia coli ATCC
25922 Cepas de prueba (X): Bacillus sp Klebsiella o Serratia marcescens
Moraxella sp Streptococcus oralis Material por equipo: Microscopio Aceite de
inmersin Colorantes para tincin de Gram: Cristal violeta, safranina, lugol y
alcohol acetona Material que deben tener los alumnos: Mecheros Asas
Portaobjetos Charola para tincin Puente de vidrio para tinciones Pinzas Piseta
Pao limpio de algodn Papel seda Frasco con una solucin de sanitizante para
desinfectar las preparaciones Mtodo Lavar y desengrasar los portaobjetos y
cubreobjetos. Para ello emplear jabn lquido y agua; enjuagar varias veces con
alcohol al 95%, ponerlos a secar y flamearlos 2 a 3 veces. 1. Etiquetar tres
portaobjetos por uno de sus extremos con los nombres de: Staphylococcus
aureus, Escherichia coli y el tercero con la bacteria X. 2. Preparar los frotes
bacterianos a partir de cultivos lquidos o slidos. 3. Fijar con calor (mechero).
4. Agregar cristal violeta en cantidad suficiente para cubrir el frote (2 a 3 gotas)
y dejar actuar 1 minuto. 5. Lavar con el mnimo de agua para eliminar el
exceso de colorante. 6. Agregar lugol en cantidad suficiente para cubrir el frote
(2 a 3 gotas) y dejar actuar 1 minuto. 7. Lavar con el mnimo de agua para
eliminar el exceso de mordente. 8. Decolorar con alcohol acetona hasta que el
efluente salga incoloro. 9. Lavar con agua para eliminar el exceso de

disolvente. 10. Agregar safranina en cantidad suficiente hasta cubrir el frotis (2

3 gotas) y dejar actuar 1 minuto. 11. Lavar con agua para eliminar el exceso
del colorante de contraste.
Bibliografia
Balows, A. 2005. Manual of Clinical Microbiolgy. 5 edicin. A. Society for
Microbiology, Washington, USA. Collins C.H. y Lyne Patricia M. 1989. Mtodos
Microbiolgicos. ACRIBIA. 524 pp Daz, R., G. Gamazo e I. Lpez Goi.1995.
Manual Prctico de Microbiologa. 1 edicin. MASSON, S. A. Espaa Leboffe,
M. J., y B. E.