FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES

LABORATORIO BIOQUMICA
Alumno: ___________________________________________ Cdigo: _________________
Alumno: ___________________________________________ Cdigo: _________________

Prctica 6: CARBOHIDRATOS.

OBJETIVOS:

Reconocer los fundamentos qumicos y/o fsicos para la identificacin de carbohidratos.

Utilizar el fundamento qumico para la determinacin cualitativa y de los diferentes carbohidratos.

Aplicar principios biotecnolgicos en la determinacin de carbohidratos

Identificar las diferencias estructurales de los carbohidratos y predecir reactividades qumicas segn
estas diferencias.

1. FUNDAMENTO TERICO.
Experimento 1:

Propiedades de los carbohidratos.

Los carbohidratos son los compuestos orgnicos ms abundantes de la bisfera. La mayora pueden
ser representados con la frmula general C x (H 2 0) y por lo que son literalmente, hidratados de carbono.
Gran parte de sus funciones biolgicas dependen de esta estructura qumica tan particular y verstil.
Ellos son componentes fundamentales de muchos alimentos y su degradacin durante el proceso de
digestin genera la energa necesaria para las funciones vitales del organismo. Cuando se encuentran
combinados con otras biomolculas, dan origen a molculas ms complejas cuyas funciones pueden
ser estructurales o de soporte celular y tisular.

Qumicamente se definen como polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas cclicas o sustancias que

luego de hidrolizarse dan origen a los mismos.
Un carbohidrato que no puede ser hidrolizado en uno ms simple es llamado monosacrido. Los ms
comunes son la glucosa, la fructuosa, la galactosa y la manosa.

Un carbohidrato que puede ser hidrolizado en dos molculas de monosacridos es llamado

disacrido. Los ms importantes son la lactosa (presente en la leche), la sacarosa (presente en el
azcar comn) y la maltosa.
Aquellos carbohidratos que pueden ser hidrolizados en varias molculas de monosacridos son
llamados polisacridos. Los ms comunes son el almidn, glucgeno y la celulosa, ste ltimo
componente estructural de las plantas.
La mayora de los carbohidratos son molculas relativamente polares, miscibles, o solubles, en agua.
Desde el punto de vista qumico, un azcar es aquel compuesto cuya molcula est formada por
tomos de carbono, cada uno de los cuales est unido a un grupo hidroxilo (-OH), excepto uno de
ellos, que lleva un grupo carbonilo (=O). En solucin, la molcula de un azcar est en equilibrio entre
una forma de "cadena recta" y una en anillo; la forma que predomina es la de anillo, por lo que
habitualmente los azcares se representan de esta forma.

Los carbonos anomricos internos de dichas molculas participan en enlaces acetal y no son libres de
actuar como agentes reductores.
Los carbohidratos complejos: disacridos, oligosacridos y polisacridos, estn formados a partir de
monosacridos mediante la unin covalente de molculas de azcar. Los enlaces que se producen
entre las unidades individuales de azcar son relativamente fuertes a concentraciones normales de
iones hidrgeno: Por ejemplo, la sacarosa no se rompe al hervirla, aunque se mantiene rota en
soluciones cidas, como las bebidas de cola; sin embargo, existen enzimas especficas en el intestino
que hidrolizan estos enlaces liberando los monosacridos correspondientes.
Los disacridos, como se mencion anteriormente, son carbohidratos que al estar unidos a travs de
enlaces covalentes (glucosdicos), pueden llegar a ser hidrolizados en sus dos molculas de

monosacridos constitutivas, es decir la unidad mnima de cada disacrido o polisacrido es un

monosacrido.
Los polisacridos se diferencian entre s en varios aspectos: la longitud de su cadena, la naturaleza (o -) y la posicin (por ejemplo, 1-4, 1-6) de los enlaces entre las unidades individuales de los
azcares que los forman.
La celulosa est formada mayoritariamente por unidades glucosilo unidas entre s por enlaces -1,4;
estos enlaces dan al compuesto una estructura fuertemente empaquetada que no es atacada por los
enzimas de los mamferos. Por ello, en los humanos la celulosa pasa casi intacta a travs del intestino
delgado, donde otros carbohidratos son digeridos y absorbidos. La celulosa es degradada por algunas
enzimas bacterianas.

El almidn, la reserva energtica de las clulas vegetales, es una fuente significativa de carbohidratos
en la alimentacin humana. En el almidn se encuentran juntos dos polisacridos: la amilosa y la
amilopectina.

La amilosa est formada por cadenas largas sin ramificar de residuos de D-glucosa que estn unidos
por enlaces glucosdicos -1,4. Posee un extremo reductor en el que el anillo puede abrirse para
formar un grupo aldehdo libre con propiedades reductoras. Debido a que las molculas lineales de
amilosa forman largas hlices apretadas, su forma compacta es ideal para su funcin de
almacenamiento.
La otra forma de almidn, la amilopectina, es un polmero ramificado que contiene enlaces
glucosdicos -1,4 y -1,6. Los puntos de ramificacin -1,6 pueden producirse cada 20 - 25 residuos
de glucosa e impiden la formacin de una hlice.

Glucgeno

El glucgeno es un polisacrido ramificado; la mayora de los enlaces entre las unidades de azcar
son del tipo -1,4, pero cada 9 - 10 residuos hay un enlace 1, 6, que genera una ramificacin.

Prueba de Benedict.

Algunos azcares tienen la propiedad de oxidarse en presencia de agentes oxidantes suaves como el
ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo carbonilo libre, el cual es
oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con un grupo carbonilo libre son
llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo se encuentra combinado en
unin glucosdica se conocen como azcares no reductores. Existen varias reacciones qumicas que
permiten determinar si se est en presencia de un azcar reductor o no. La prueba de Benedict es
una de ellas y se basa precisamente en la reaccin o no de un azcar con el ion Cu2+. El reactivo de
Benedict contiene soluciones de carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de sodioSi se le
agrega al reactivo una solucin de azcar reductor y se calienta hasta llevar la mezcla a ebullicin, el
azcar en solucin alcalina a elevadas temperaturas se convertir en D-gluconato y su ene-diol,
rompindose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales con sus electrones expuestos,
reaccionarn con el Cu++. Se obtiene entonces un azcar oxidado y dos iones Cu+. Posteriormente el
Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la solucin para formar el hidrxido de cobre:
Cu+ + OH-

Cu(OH) (precipitado amarillo)

El hidrxido pierde agua.

2Cu(OH)

Cu 2 O (precipitado rojo ladrillo) + H 2 O

La aparicin de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un azcar

reductor.
Prueba cualitativa de glucosa oxidasa.
Este mtodo es utilizado hoy en da para la determinacin y cuantificacin de glucosa en sangre y
orina. Vino a reemplazar a otros como la prueba Benedict, debido a su mayor especificidad y
sensibilidad. La prueba se basa en el uso de una enzima llamada glucosa oxidasa que reconoce
especficamente a una de las formas anomricas de la D-glucosa, la forma beta glucopiranosa. Esta
enzima, en presencia de glucosa, oxgeno y un amortiguador de pH, genera gluconolactona y perxido
de hidrgeno.
El perxido de hidrgeno es a su vez sustrato de otra enzima, la peroxidasa, la cual en presencia de
fenol y una amina aromtica (en nuestro caso, la amino-4-antipirina) genera un compuesto de color
rosado y agua. Por lo tanto, cuando el reactivo vira de incoloro a rosado, se demuestra la presencia
de glucosa en la muestra.

Prueba de yodo para Almidn.

La prueba de yodo es una prueba muy sencilla pero que todava se utiliza para determinar la presencia
de almidn en algunos alimentos. La prueba se basa en una reaccin fsica y no qumica, en la cual el
almidn reacciona con el yodo para formar un complejo de color azul intenso. Bajo las mismas
condiciones, el glucgeno da una coloracin caf.
Hidrlisis del almidn.
Esta prctica tiene como objetivo demostrar que efectivamente los polisacridos como el almidn
estn compuestos de monosacridos unidos por enlaces glucosdicos. Todos los polisacridos son
hidrolizados en sus constituyentes monosacridos, por la accin de cidos diluidos. Esta es una
reaccin gradual que puede observarse durante el tiempo de la sesin de laboratorio. La hidrlisis del
almidn se puede evidenciar con dos pruebas:
I

Desaparicin del color azul caracterstico de la prueba del yodo.

II
Aparicin de glucosa, un azcar reductor. La aparicin de glucosa se evidenciar mediante la
prueba de Benedict.

Hidrlisis de la sacarosa.
La sacarosa es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que carece de poder
reductor y la reaccin con el reactivo de Benedict es negativa. Sin embargo, en presencia de HCl y en
caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molcula de agua y se descompone en los
monosacridos que la forman: glucosa y fructosa, que s son reductores. La prueba de que se ha
verificado la hidrlisis se realiza con el Reactivo de Benedict y, si el resultado es positivo, aparecer un
precipitado de color rojo ladrillo. Si el resultado es negativo, la hidrlisis no se ha realizado
correctamente y si en el resultado final aparece una coloracin verde en el tubo de ensayo se debe a
una hidrlisis parcial de la sacarosa.

2. SEGURIDAD DURANTE LA PRCTICA

2.1 Normas de seguridad

El estudiante debe referirse al manual de normas de seguridad.
2.2 Equipos de proteccin personal
Usar durante todo el desarrollo de la prctica los siguientes elementos de seguridad:
Bata de laboratorio
Guantes de nitrilo
Gafas de seguridad
Mantener los elementos personales de seguridad identificados y en buen estado. Est prohibido su
intercambio con los dems compaeros de laboratorio.
2.3 Manejo de Residuos qumicos
Tanto por razones de seguridad como por respeto al medio ambiente, es importante disponer los residuos
generados en las prcticas del laboratorio de qumica en forma adecuada. Por ello el estudiante debe:
1. Emplear los recipientes destinados para eliminar los residuos o desechos de laboratorio, los cuales
estn debidamente identificados segn el tipo de sustancia a desechar.
2. Verter nicamente los residuos en el recipiente correspondiente para evitar reacciones no controladas y
potencialmente peligrosas.
No arrojar por el desage los desechos o residuos qumicos obtenidos durante el desarrollo de la prctica. Si
tiene alguna inquietud al respecto comunquela al responsable del laboratorio, quien le indicar la forma
correcta de hacerlo

3. TRABAJO INTEGRADO DE LABORATORIO.

CONSULTAS PREVIAS.
1. Grafique la estructura qumica de los carbohidratos que presentan propiedades reductoras e identifique
sobre dicha grfica el carbono que sufre la reaccin de xido reduccin y explique el por qu ste y no
otro carbono es susceptible a dicha reaccin.
2. Qu entiendes por hidrlisis de un carbohidrato?
3. Cul es la diferencia estructural entre la celulosa y el almidn?
4. El almidn se hidroliza en presencia de saliva, mientras que la celulosa no por qu?
5. Realice un diagrama de flujo para esta prctica. Muestre este diagrama al instructor ANTES DE INICIAR
LA PRCTICA.

4. METODOLOGIA
4.1 MATERIALES
Tabla 1. Listado de materiales necesarios para el desarrollo de la prctica por pareja.
ITEM
Cantidad
U.M
observaciones
Gradilla
1
UND
Tubos de ensayo medianos
12
UND
Tubos de ensayo grandes
2
UND
Bao Mara
1
UND
Pinzas para tubo de ensayo
2
UND
Pipeta graduada de 5mL
1
UND
Pipeta graduada de 10mL
2
UND
Pipeta graduada de 1 mL
2
UND
Propipeta
1
UND
Vaso de precipitado de 250mL
1
UND
Vaso de precipitado de 25mL
1
UND
Gotero
1
UND
Placa de aglutinacin
1
UND
Frasco lavador
1
UND
Cronmetro
1
UND
Vaso de precipitados de 30mL
6
UND
Por saln
Vaso de precipitados de 150mL
2
UND
Por saln
Pipetas pasteur
6
UND
Por saln
Frasco mbar 1L
1
UND
Por saln
Pipeta Graduada de 1mL
1
UND
Por saln
Propipeta
1
UND
Por saln
Plancha de Calentamiento
9
UND
Por saln
4.2 REACTIVOS
Tabla 2. Listado de reactivos necesarios para el desarrollo de la prctica por pareja.
Reactivos
Cantidad
U.M
Sln Xilosa
0.1M
1
mL
Sln Glucosa
0.1M
1
mL
Sln Galactosa 0.1M
1
mL
Sln. Lactosa
0.1M
1
mL
Sln. Fructosa 0.1M
1
mL
Sln. Sacarosa 0.1 M
4
mL
mL para todo el
cido clorhdrico concentrado
10
grupo
Sln. Hidrxido de sodio
0.4 M
7
mL
Lugol (solucin de yodo)
2
mL
Solucin de almidn al 0.5%
15
mL
Sln de Benedict
20
mL
Solucin de Glucosa Oxidasa/Peroxidasa
4
mL

4.3 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

Mtodo 1:

Hidrlisis del almidn.

Procedimiento.
Coloque 10 mL de una solucin de almidn al 0.5% en un tubo de ensayo grande.
Realice una prueba de yodo a la solucin de almidn. Para ello, transfiera 0.5 mL de la solucin
de almidn a otro tubo y aada una gota de solucin de yodo. Anote su resultado.
Inicie la hidrolisis del almidn, para ello pida a su instructor que le aada 0.5 mL de HCl
concentrado al tubo que contiene la solucin de almidn. Agite bien, luego coloque el tubo en
un bao de agua hirviendo con cuidado de no quemarse.
Repita la prueba del yodo cuando la hidrlisis del almidn se haya llevado a cabo por 30
minutos. Para ello, transfiera 0.5 mL de la solucin de almidn que tiene hidrolizando a otro
tubo y aada una gota de solucin de yodo.
Compare el resultado con lo obtenido anteriormente. Contine la hidrlisis del almidn hasta
obtener una prueba de yodo negativa. Haga pruebas con intervalos de 30 minutos.

Realice una prueba de Benedict a los 5 min de iniciar la hidrolisis del almidn, a los 30 minutos
y cuando la prueba de yodo arroje un resultado negativo. En todos los casos, aada en un tubo
0.5 mL del almidn hidrolizado, 1 mL de NaOH 0.4 M y 2.0 mL de reactivo de Benedict.
Incubar por 8 minutos en agua hirviendo. Anote y analice los 3 resultados.

Mtodo 2:

Prueba de Benedict.

Procedimiento.
Deposite 2.0 mL de reactivo de Benedict en cada uno de 7 tubos de ensayo medianos.

Luego, a cada tubo, aada 6 gotas de una y solo una de las siguientes soluciones de
carbohidratos: glucosa, galactosa, lactosa, xilosa, Fructosa, sacarosa 0.1 M y almidn al
0.5%.

Coloque los tubos en un bao de agua hirviendo por 5 minutos.

quemarse.

Observe cualquier cambio de color durante el calentamiento. Saque el tubo y pngalo en una
gradilla y observe qu ha ocurrido.

Mtodo 3:

Tenga cuidado de no

Prueba de Glucosa oxidasa.

Procedimiento.

Coloque 3 gotas de solucin de glucosa oxidasa/peroxidasa en siete depresiones de la placa

de ensayos.

Aada una gota de glucosa a la primera depresin.

Aada una gota de fructosa en la segunda depresin.

Contine adicionando en las dems depresiones solo una gota de, galactosa, lactosa, xilosa,
sacarosa 0.1 M y almidn 0.5%. Observe las depresiones inmediatamente y anote los
resultados.

Despus de 5 minutos vuelva a observar las depresiones y revise si existe algn cambio.

Mtodo 4:

Prueba de yodo para el almidn.

Procedimiento.
En tres tubos de ensayo medianos y utilizando la pipeta que ms se ajuste, distribuya los
reactivos indicados segn el siguiente cuadro:
Tabla 3. Distribucin de los reactivos para la prueba de yodo
Reactivo
Tubo Nmero Agua (mL) Almidn 0,5% (gotas) Solucin de yodo (gotas)
1
5
5
1
2
5
1
1
3
5
0
1

Agite muy bien los tubos y note la diferencia de color que se atribuye a la formacin de un
complejo entre el almidn y el yodo.

Anote el resultado.

Posteriormente coloque los tres tubos en un bao de agua caliente (70oC) con cuidado por 10
minutos y observe cualquier cambio de color.

Anote el resultado.

Enfre los tubos y observe nuevamente.

Anote el resultado.

Mtodo 5:

Hidrlisis de la sacarosa.

Procedimiento.
Tomar 3mL de solucin de sacarosa 0.1M y aadir 10 gotas de HCl concentrado.

Introducir en el bao de Mara a ebullicin por 3 minutos.

Dejar enfriar.

Neutralizar aadiendo 3mL de solucin de NaOH.

Realizar la prueba de Benedict como se indica en el mtodo 2.

Observar y anotar los resultados.

5. RESULTADOS Y ANLISIS.
Experimento 1:
Mtodo 1:
1

Propiedades de los carbohidratos.

Hidrlisis del almidn.

Haga un cuadro con los resultados de la prueba del yodo a diferentes tiempos.

Cunto tiempo tard la solucin de almidn en hidrolizarse? Use los datos del cuadro

Bosqueje la reaccin qumica que se est llevando a cabo durante la hidrolisis del almidn.
Porque usar HCl?

Para que se adiciona NaOH a la solucin de almidn que se est hidrolizando antes de hacer la
prueba de Benedict?

Qu parte del almidn reacciona con el yodo, por qu?

Los resultados de las pruebas de Benedict a las tres alcuotas de la solucin de almidn que se
est hidrolizando son lo que usted esperara? Argumente.

Mtodo 2:

Prueba de Benedict.

Elabore un cuadro con los carbohidratos que utiliz en esta prueba, indique si se form un
precipitado y de qu color es el mismo.

Concuerdan sus resultados con lo esperado tericamente sobre carbohidratos reductores?

Explique usando las estructuras qumicas.

Qu otro reactivo se puede usar para anlisis de azcares reductores?

Por qu es necesario el citrato de sodio en el reactivo de Benedict?

La forma cclica de la glucosa sufre la reaccin de xido reduccin con el reactivo de

Benedict? Justifique la respuesta

Por qu la sacarosa no reacciona con el reactivo de Benedict, si sus monosacridos

constituyentes, cuando se encuentran libres, s reaccionan con dicho reactivo?

Mtodo 3:

Prueba de Glucosa oxidasa.

Qu coloracin es una prueba positiva para la glucosa oxidasa y a que se debe esta
coloracin?

Usara usted esta prueba para la determinacin de fructosa? Por qu?

Observ algn cambio luego de incubar por ms tiempo las diferentes reacciones? Si es as,
a qu cree usted que se debe este cambio? Qu implicaciones podra tener este resultado?

Investigue sobre la enzima glucosa oxidasa. Estructura, usos comerciales, reaccin qumica,
cofactor, fuente de origen y mencione una posible forma de produccin industrial para la
comercializacin.

Dibuje la reaccin catalizada por la peroxidasa en esta prueba de laboratorio. A qu se debe el

color observado?

Mtodo 4:

Prueba de yodo para el almidn.

Describa el resultado obtenido en los diferentes tubos luego de incubar a temperatura

ambiente.

Describa el resultado obtenido en los diferentes tubos luego de incubar a alta temperatura.

Qu sucede cuando los tubos se enfran de nuevo?

Tomando en cuenta la estructura helicoidal del almidn, explique qu tipo de reaccin se lleva
a cabo cuando se mezcla el yodo con el almidn.

Cmo explica los fenmenos descritos en las respuestas a las preguntas 1 Y 2?

Cmo cree usted que dara el resultado de esta prueba si se utiliza celulosa?

Mtodo 5:

Hidrlisis de la sacarosa.

Compare los resultados obtenidos para la prueba de Benedict para la sacarosa hidrolizada y
sin hidrolizar.

Argumente con estructuras qumicas a que se debe esta diferencia.

REFERENCIAS
ANGULO UGALDE, Y. Bioqumica Manual de laboratorio. Universidad de Costa Rica. 1999
ELITECH Diagnostics. Instrucciones de uso del reactivo Glucosa PAP, versin 12/2002
Nelson D.L y Cox M.M: Lehninger Principles of Biochemistry. W, H. Freeman and Company, NY. Cuarta
edicin, 2005.