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AVALIAO DE TOXICIDADE

AVALIAO DA TOXICIDADE
Compreende a anlise dos dados toxicolgicos de uma
substncia qumica com o objetivo de classific-la
quimicamente.
Dados toxicolgicos:

- Experimentao em animais de laboratrio;


- Ensaio com microorganismos;
- Estudos epidemiolgicos - registros de casos de
intoxicao ocorridos em seres humanos

AVALIAO DA TOXICIDADE
A lista de estudos pode variar de pas para pas, mas
basicamente inclui os seguintes tpicos
- Informaes preliminares,
- Toxicidade aguda,
- Toxicidade sub-crnica,
- Toxicidade crnica,
- Mutagnese e Carcinognese

- Reproduo e Teratognese,
- Toxicocintica,
- Efeitos sobre a pele e olhos,
- Sensibilizao cutnea,
- Ecotoxicidade

Informaes preliminares
- Estrutura qumica

- Impurezas
- Propriedades fsico-qumicas

Experimentao animal
DURAO E FREQNCIA DE EXPOSIO
- Exposio aguda: at 24 horas (geralmente at 4 horas)
- Exposio subaguda: exposies repetidas at 1 ms
- Exposio subcrnica: de 1 a 3 meses
- Exposio crnica: mais de 3 meses.

Experimentao animal

DURAO E FREQNCIA DE EXPOSIO


Para muitas substncias, os efeitos txicos de uma
exposio aguda so muito diferentes daqueles produzidos por
exposies repetidas.
Ex: benzeno

-manifestao aguda: depresso no SNC


-exposies repetidas: toxicidade para medula - leucemia

Experimentao animal
DURAO E FREQNCIA DE EXPOSIO

Efeitos txicos crnicos podem ocorrer se:


-substncia se acumula no sistema biolgico,
- substncia produz efeitos txicos irreversveis,
- tempo insuficiente para o sistema se recompor de um dano no intervalo da
freqncia de exposio.

Estudos de toxicidade aguda


Toxicidade aguda definida
como os efeitos adversos que
ocorrem dentro de um perodo curto
aps a administrao de uma dose
nica ou doses mltiplas dentro de 24
horas.

DL50
Quantidade necessria, em mg/kg
de peso corpreo, para provocar a
morte de 50% de um lote de animais
submetidos experincia.
-Curva dose x resposta

Estudos de toxicidade aguda


ESCALA PROBIT

Estudos de toxicidade aguda


TOXICIDADE AGUDA PELA VIA RESPIRATRIA (CL50)
EXAUSTOR

AR SINTTICO

CMARA DE
MISTURA

CONTROLE DE
TEMPERATURA
E UMIDADE

CMARA DE EXPOSIO

AGENTE TXICO

SISTEMA DE COLETA
DE URINA E FEZES

DL50 de algumas substncias:


Substncia

Etanol
Cloreto de sdio
Sulfato ferroso
Morfina
Fenobarbital
Estricnina
Nicotina
Tubocurarina
Tetrodotoxina
Dioxina
Toxina botulnina

DL50 (mg/Kg)

7.000
4.000
1.500
900
150
2
1
0,5
0,1
0,001
0,00001

Obs: Maioria dos valores baseados em ratos, etanol e NaCl em


camundongos, dioxina em porquinhos da ndia. C

ESTUDOS DE TOXICIDADE AGUDA

Variveis que influenciam os resultados da DL50

1) Quanto aos animais de experimentao:


-Espcie*
-Linhagem
-Idade
-Sexo*
-Estado nutricional
-Estado patolgico

ESTUDOS DE TOXICIDADE AGUDA

Variveis que influenciam os resultados da DL50


2) Quanto ao agente txico
-Via de administrao
-Veculo empregado na administrao
-Volume de administrao
-Velocidade de administrao
-Impurezas

ESTUDOS DE TOXICIDADE AGUDA

Variveis que influenciam os resultados da DL50


3) Quanto s instalaes e fatores peridicos:
-Tipo de gaiola
-Temperatura ambiente
-Umidade relativa do ar
-Durao do perodo de adaptao
-Ciclo dia e noite
-Qualidade da rao do animal

O
O C

NHCH3

Toxicidade aguda oral do carbaril (inseticida carbamato)


em diferentes animais

Animais
Cobaias
Camundongos
Rato
Coelhos

DL50 (mg/Kg)
280
360-590
540-720
710

ESTUDOS DE TOXICIDADE AGUDA


3.60

Paration etlico

Animais machos
Animais fmeas

Relao DL50 M/ DL50 F

0,57

Paration metlico

2,40

Endrin

2,38

Endossulfon

0,65

Aldrin
Heptacloro

0,61

DDT

0,95

10

30

50

70

100

150 DL50 (mg/Kg)

Estudos de toxicidade aguda


DL50
Inclinao da curva dose x resposta

DL50 A e B = 8mg/kg

CURVA DOSE X RESPOSTA


EFEITO: Anomalia do porte do camundongo aps
tratamento com morfina

Animal no-tratado

Animal tratado

FREQNCIA DO EFEITO NA DEPENDNCIA DA DOSE

CURVA DOSE X RESPOSTA

NDICE TERAPUTICO E MARGEM DE SEGURANA


IT = DL50
DE50

MS = DL1
DE 99

Estudos de toxicidade subaguda


Durao: at 1 ms
So realizados para obter informaes da toxicidade de
uma substncia aps administraes repetidas com o objetivo
de estabelecer doses para estudos de toxicidade subcrnica.
Ratos: 10 animais/sexo/dose
Cachorros: 3 a 4 animais/sexo/dose

Estudos de toxicidade subcrnica


Durao: at 90 dias
No mnimo 3 doses so empregadas:
-uma dose alta que produza toxicidade, mas no cause a
morte em 10%;
-uma dose baixa com efeitos txicos no aparentes
-uma dose intermediria).

Identificar e caracterizar rgos especficos afetados pelo


composto.
Determinar se um efeito particular como neurotoxicidade
necessita de testes especficos.
Estabelecer NOAEL (no observed adverse effect level) e
LOAEL (lowest observed adverse effect level)
Ratos: 10 a 20 animais/sexo/dose
Cachorros: 4 a 5 animais/sexo/dose

Estudos de toxicidade crnica


Durao: mais que 3 meses
O perodo de estudo deve ser compatvel com o
perodo de exposio pretendido para humanos.
- agente for usado por curto perodo: estudo de 6 meses
- aditivo de alimentos: estudo de 2 anos

Realizados para avaliar efeito acumulativo e o potencial


carcinognico de substncias.

Estudos de neurotoxicidade
A neurotoxicidade pode ser definida
como sendo a capacidade de um
composto qumico em provocar efeitos
adversos no sistema nervoso central, em
nervos perifricos e em rgos sensoriais.
Pode ser:
Reversvel: quando ocorrem mudanas funcionais temporrias
Irreversvel: quando envolvem mudanas estruturais com
degenerao de clulas nervosas.

Estudos de neurotoxicidade
Nenhuma tcnica experimental nica capaz de evidenciar
neurotoxicidade dos compostos qumicos
necessrio constituir um conjunto de tcnicas, com
estudos comportamentais, eletrofisiolgicos, neurolgicos,
histoqumicos e bioqumicos com diferentes espcies.
O grau de anormalidade necessrio para caracterizar a
neurotoxicidade uma questo controvertida que muitas vezes
depende de avaliaes subjetivas.

Estudos de neurotoxicidade
Escala de nveis para avaliar o grau de neurotoxicidade:
Nivel

Efeito

Caracterizao

1*

-Sintomas subjetivos reversveis

2*

-Sintomas subjetivos irreversveis

3**

-Parmetros bioqumicos

4**

-Alteraes fisiolgicas e
comportamentais

5*

-Alteraes neurolgicas

6**

-Alteraes morfolgicas

-Mudanas funcionais temporrias no


SNC (cefalia, vertigens, etc)
-Mudanas funcionais irreversveis no
SNC.
-Alteraes
significativas
em
parmetros bioqumicos que permitem
avaliar
a
neurotoxicidade
(neurotransmissores, enzimas, etc).
-Ao neurotxica evidenciada atravs
de testes comportamentais, alteraes
psicolgicas
e
por
eletroencefalograma.
-Ao
neurotxica
demonstrada
atravs de testes especficos.
-Efeitos neurotxicos irreversveis
(morte celular, alteraes morfolgicas
celulares).

* somente ao homem ** No homem e em animais

Estudos de neurotoxicidade
Mesmo que a neurotoxicidade de um composto seja
efetivamente demonstrada em estudos com animais, a
extrapolao para o homem deve ser feita com cautela.
Ex:
1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetraidropiridina

extremamente
neurotxico para o homem, mas no para ratos.

Estudos de mutagnese
Mutagnese a capacidade de substncias em causar
alteraes no material gentico de modo que essas alteraes
possam ser transmitidas durante a diviso celular.
Ensaios in vitro e in vivo
In vivo
Estudo do potencial mutagnico
Aberraes cromossmicas so identificadas na
medula ssea do fmur de ratos e camundongos expostos ao
agente txico. Estas aberraes podem afetar uma ou ambas
as cromtides.

Estudos de mutagnese
In vivo
Teste do microncleo
Promove a deteco de substncias mutagncias
clastognicas (ruptura dos cromossomas com recombinao
entre eles) ou interferentes na formao do fuso mittico.
Os
microncleos
resultam
de
fragmentos
cromossmicos acntricos, sendo facilmente reconhecidos no
citoplasma.

Estudos de mutagnese
In vitro - So rpidos, sensveis, de baixo custo, reprodutveis e
recomendados por entidades governamentais e rgos de pesquisa
de diversos pases.
-Teste de Ames
Substncia a
ser avaliada

Microssomas
de rato

Salmonella
mutante

Agar sem
histidina

Colnias que
sofreram reverso
da mutao
incubao

Estudos de mutagnese
-Teste de Ames
Composto orgnico
benz[b]fluoranteno
3,3 - dimetoxibenzidina
4-cloro-fenilenediamina
2-nitroflureno
4-aminobifenila
benzidina
2-naftilamina
benz(a)antraceno
benz(a)pireno
4-cloro-toluidina
n-nitrosodimetilamina

Classificao IARC
Grupo 1
(reconhecidamente carcinognico)

Grupo 2A
(possivelmente carcinognico)

Grupo 2B
(provavelmente carcinognico)

Estudos de carcinognese
A carcinognese um processo anormal, nocontrolado, de diferenciao e proliferao celular, inicialmente
localizado mas que pode ser disseminado pelo organismo,
provocando a sua morte.
-O cncer s pode ser evidenciado em organismos superiores,
-Estudos devem ser realizados em duas espcies de animais
(ratos e camundongos). Durao: 100-130 semanas.

Todos os animais so submetidos necrpsia completa:


anlise macroscpica, fragmentos representativos de leses
visveis e anlise histolgica de rgos.

Estudos de carcinognese
Testes de carcinognese devem ser realizados
principalmente nos casos em que ocorra exposio humana a
longo prazo.
Limitao:
toda substncia que apresenta efeito carcinognico em
animais tambm apresentar em humanos - nem sempre
verdadeira
- Variao deve estar relacionada na diferena nos processos
de biotransformao de pr-carcingenos e carcingenos
definitivos.

Estudos de carcinognese
- Uso da Maior Dose Tolerada (dose que administrada aos
animais durante seu perodo mdio de vida, no provoque a
morte ou diminuio de 10% do peso).
- utilizadas para garantir o aparecimento do tumor em um
pequeno nmero de animais.
Problemas de interpretao:
Ex. sacarina provoca tumor em ratos (altas doses)

Toxicidade reprodutiva e do desenvolvimento


Envolve trs fases distintas:
1) Avaliao do potencial txico do composto qumico sobre a
fertilidade e desempenho reprodutivo:
-animais machos e fmeas tratados num
perodo de at 60 dias antes do acasalamento.
-depois: fmeas durante a gestao e lactao

-Sacrifcio da metade
dos animais para a
constatao
de
anormalidades uterinas.

-Nmero, sexo, peso e anormalidades


externas dos filhotes. Sobrevida da me
e peso da me e filhotes durante a
amamentao. Sacrifcio da prole:
constatao de anormalidades viscerais.

Toxicidade reprodutiva e do desenvolvimento


2) Administrao do agente durante o perodo da organognese:
Animal
Rato
Camundongo
Coelho
Hamster

Gestao(dias)
22
20
33
15

Organognese (dias)
6-15
5-14
6-18
8-12

Trs doses so administradas:


a) Menor dose: considerada de exposio ao homem ou dose
teraputica (medicamento)
b) Maior dose: estabelecida em funo da toxicidade do composto em
animais fmeas.
c) Dose intermediria.

Toxicidade reprodutiva e do desenvolvimento


2) Administrao do agente durante o perodo da organognese:

-Administrao
do
agente
em
fmeas
durante o perodo da
organognese.

-No final da gestao, as fmeas


so sacrificadas e os fetos
retirados. So observados: sexo,
peso, ocorrncia de mortalidade
precoce ou tardia de embries e
fetos.
Exame
interno:
microdisseco de rgos.

Toxicidade reprodutiva e do desenvolvimento


3) Avaliao do composto sobre o desenvolvimento peri e ps-natal:

A administrao do agente txico feita durante o perodo


que compreende o ltimo tero da gestao at o desmame.
-So avaliados o desenvolvimento somtico, neuromotor, sensorial
e comportamental da prole.

Estudos de toxicocintica
Informaes sobre absoro, distribuio, biotransformao e
excreo de substncias.
Ex: A comparao da dose letal de uma substncia por diferentes
vias de exposio pode fornecer importantes informaes sobre sua
extenso de absoro.
Outros objetivos:
- Diferenas de metabolismo (atividade enzimtica) entre espcies,
- Velocidade de metabolismo

Efeitos sobre a pele e olhos


- Realizada no caso de cosmticos ou exposies acidentais.
Animal de eleio: coelho (pele e olhos) e a cobaia (pele).
Parmetros avaliados:
Pele: eritema, escara, edema e corroso.
Olhos: alteraes na conjuntiva, crnea, ris e cristalino
Existem trs tipos de testes de irritao:
irritao local ou aguda,
irritao cumulativa,
irritao induzida fotoquimicamente.

Efeitos de sensibilizao cutnea


Informaes sobre a capacidade de uma substncia em
induzir reaes de sensibilizao cutnea so necessrias quando
houver possibilidade de contatos repetidos com a pele.
Animais: coelhos ou cobaias.
Tratamento:
-Doses repetidas por perodo de uma a duas semanas.
Aps 3 semanas da ltima exposio, os animais so submetidos a
uma dose no irritante da substncia e o aparecimento de eritema
monitorado.

Estudos de ecotoxicidade
Ecotoxicologia: estudo dos efeitos txicos provocados pelas
substncias qumicas sobre os constituintes dos ecossistemas,
animais, vegetais e microorganismos, num contexto integrado.
Fatores a serem considerados:
Qumicos (estados de oxidao, interao com outros
materiais, etc)
Biodegradao
Testes de toxicidade aguda (microorganismos, plantas, peixes,
mamferos)
Desaparecimento da atmosfera
Bioacumulao
Eutroficao

Outros estudos
Programas de computador - predizer a toxicidade de
compostos, atravs de modelos com uma srie de variveis.
Avaliao da toxicidade in silico

PROGRAMA 3Rs

REDUCTION
REFINEMENT
REPLACEMENT

Grande nmero de animais utilizados em experimentos;


-2002, segundo a Research Defense Society, mais de 2,5
milhes de animais utilizados em experimentos,
-EUA: estima-se o uso de mais de 20 milhes de animais
PROGRAMA 3Rs
Reduo do nmero de animais,
Melhora na conduo dos estudos no sentido de reduzir o sofrimento
ao mnimo possvel,
Busca de mtodos alternativos para substituio dos testes in vivo
Os dois primeiros representam os objetivos a curto-prazo e o
ltimo, a meta mxima a ser alcanada.