FUNDAMENTO

La Turbidimetria y la Nefelometra

La Turbidimetria y la Nefelometra, se basan en el hecho de que la formacin de

inmunocomplejos solubles, con un tamao de 1000+ va acompaada por un
aumento proporcional de la luz difractada y en consecuencia una disminucin de
la luz transmitida I (Ecuacin de Rayleigh). En ambos casos, la curva dosisrespuesta es similar a la curva de inmunoprecipitacion de Heidelberg-Kendall}

Inmunoturbidimetria o Turbidimetria: mide la disminucin de la intensidad de la

luz transmitida I a 180 debida a la difraccin producida por los complejos inmunes
formados. La disminucin de la intensidad de luz (aumento de Absorbancia) es
proporcional a la concentracin de analito presente.
Nefelometria cuantifica la luz difractada hacia un detector en determinados
ngulos (normalmente 90). La misma aumenta proporcionalmente al nmero y
tamao de los inmunocomplejos formados.
Resulta evidente que la naturaleza de la reaccin inmunoqumica es la misma y lo
que los diferencia es el principio de deteccin empleado.
Rango de medida: La inmunoturbidimetria permite cuantificar protenas
plasmticas, mediante la lectura espectrofotomtrica de la Absorbancia producida

en la reaccin Ag-Acpo. bajo condiciones controladas. Para ello es necesario

conocer el Rango de Medida.
El mismo, se define para cada equipo y cada determinacin dejando una zona de
seguridad para evitar posibles errores debidos a exceso de Antgeno. Fig. 3.

Una vez conocido el Rango de Medida, es posible definir los valores de

Estndares para trazar la curva de calibracin. Fig. 4

Fig. 4
El Estndar 1 define el lmite de deteccin del ensayo y corresponde a una
Absorbancia 3 veces superior al Blanco de reaccin.
El Estndar 6 es punto ms alto de trabajo, por encima del cual es necesario
efectuar diluciones de la muestra.

La interpolacin de las absorbancias de las muestras permite obtener la

concentracin del analito a medir. Para cada nuevo lote de reactivos, es necesario
trazar una curva de calibracin. En corridas sucesivas es recomendable incluir
controles.
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NEFELOMETRA Y
TURBIDIMETRA
QUE ES? Nefelometra y/o Turbidimetra
son mtodos analticos basados en la
dispersin de partculas suspendidas en
lquidos.

-Turbidimetra: es
la medicin de la luz transmitida a
travs de una suspensin, tiene la
ventaja de permitir la valorizacin
cuantitativa, sin separar el producto de
la solucin. Las mediciones, pueden
efectuarse con cualquier
espectrofotmetro.

-Nefelometra: mide la luz dispersada

en direccin distinta a la luz emitida
(generalmente con ngulos que oscilan
entre 15 y 90). Utiliza como
instrumento el nefelmetro (en el que el
detector se ubica con un ngulo que
oscila entre 15 y 90 ej. a 90). Se
suele utilizar para concentraciones ms
diluidas. Permite mayor sensibilidad con
concentraciones menores de partculas
suspendidas. Constituye un mtodo ms
exacto para la medida de la opacidad.

EN QU SE BASA? Cuando la luz atraviesa

un medio transparente en el que existe
una suspensin de partculas slidas, se
dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia. La
turbidez es la propiedad ptica de una

muestra que hace que la radiacin sea

dispersada y absorbida ms que
transmitida en lnea recta a travs de
la muestra. Es ocasionada por la
presencia de materia suspendida en un
lquido. Y para medirla utilizamos ambos
mtodos. La dispersin no supone la
prdida neta de potencia radiante, slo
es afectada la direccin de la
propagacin, la intensidad de la
radiacin es la misma en cualquier
ngulo.
En la turbidimetra se compara la
intensidad del rayo de luz que emerge
con la del que llega a la disolucin. En
cambio, en la nefelometra la medida de
la intensidad de luz se hace con un
ngulo de 90 con respecto a la
radiacin incidente.

El instrumento usado en la nefelometra,

el nefelmetro en cambio en
turbidimetra se utiliza el turbidmetro
que es un fotmetro de filtro. El
procedimiento de la nefelometra
generalmente es emprico y slo se
consideran 3 factores:
1. La concentracin: Mayor sea el nmero
de partculas, mayor es la dispersin.
2. Tamao de la partcula: Factores como
el pH, la velocidad y orden de la
mezcla, concentracin de los reactivos y
la fuerza inica.
3. Longitud de onda: Generalmente las
muestras se iluminan con luz blanca,
pero si estn coloreadas, se debe
escoger una porcin del espectro
electromagntico en la que la absorcin
del medio se reduzca al mnimo.

DIFERENCIAS TURBIDIMETRIA Y
NEFELOMETRIA. La nefelometra se basa en

la medicin de radiacin dispersa, en

cambio la turbidimetra en la medicin
de la intensidad de un haz disminuido.
Factores para la eleccin entre
turbidimetra y nefelometra:
-Intensidad de la radiacin transmitida
o dispersada con la intensidad de la
radiacin procedente de la fuente. La
mejor eleccin cuando la muestra
contiene pocas partculas dispersantes
es la nefelometra. La turbidimetra es
buena cuando las muestras contienen
grandes concentraciones de partculas
dispersantes.
-Tamao de las partculas dispersantes.
En la nefelometra la intensidad de la
radiacin dispersada a 90 es mayor si
las partculas son bastante pequeas
para que se produzca una dispersin
Rayleigh. Si las partculas son mayores
la intensidad de la dispersin
disminuir. En turbidimetra la seal
consiste en la disminucin relativa de
la radiacin transmitida, por lo que el
tamao de las partculas dispersantes es
menos importante.

PARA QU SE UTILIZA? Se utilizan

normalmente en el anlisis de la calidad
qumica del agua, para determinar la
claridad y para el control de los
procesos de tratamiento. Tambin para la
determinacin de iones sulfato.
Turbidimetra.
-Se utiliza para el anlisis de
fibringeno, triglicridos, complejos
Ag-Ac y otras sustancias.
-Aplicable cuando la dispersin es
suficientemente grande (concentracin
alta de partculas).
Nefelometra.
-Preferible para concentraciones bajas
de partculas, ya que la dispersin es
menor y la disminucin de intensidad del
haz incidente es pequea.
-Se suele utilizar para medir
concentraciones especficas de colonias
de bacterias en algn medio de cultivo,
o de muchas protenas utilizando el
principio de dispersin luminosa
molecular.

http://quimicabasica2014.blogspot.mx/2014/10/nefelometria-y-turbidimetria.html

Turbidimetria.
Turbidimetria.

La turbidimetra mide la disminucin de la luz transmitida a travs de una

suspensin de partculas utilizando para ello un espectrofotmetro (detector en la
misma direccin del haz de luz, se mide A o T). Se suele utilizar para soluciones

concentradas (para que haya una buena disminucin de la luz transmitida)

ejemplo:
Determinacin de protenas totales en suero o en orina (haciendo que las
protenas precipiten con cido sulfosaliclico).

Turbidimetra fundamento.

La turbidimetra puede realizarse en espectrofotmetros de visible o violeta.

Cuando la concentracin de partculas en suspensin se mide por turbidimetra, la
suspensin se pone en una cubeta similar a un tubo de ensayo, que permite
realizar las medidas de las energa incidentes y transmitidas. La fuente de
radiacin ms frecuentemente usadas es la lmpara dewolframio, pero pueden
utilizarse otras fuentes de radiacin visible. Si ponemos en la cubeta suspensiones
coloreadas se debe usar un filtro para evitar que influya sobre los resultadosdando
valores excesivamente altos. Los Turbidmetros pueden incorporar cualquier
detectorque sea sensible a la longitud de onda transmitida.

La turbidimetra tiene una gran variedad de aplicaciones y permite trabajar con

muestras gaseosas, liquidas e incluso con slidos transparentes. La formacin
deprecipitados difciles de filtrar, como por ejemplo los gelatinosos o los de tamao
de partcula muy pequeo, suelen proporciona suspensiones ideales para la
aplicacin de tcnicas basadasen la dispersin de la luz que sustituye a las
tcnicas gravimtricas. Este tipo de aplicaciones son frecuentes en laboratorios
analticos, laboratorios clnicos y en plantas de procesos. Uno de los principales
campos de aplicacin reside en estudios de polucin de aire y agua, donde las dos
tcnicas se usan para determinar la transparencia y controlar el tratamiento de
aguas potables, e fluentes de plantas de tratamiento de aguas y otros tipos de
aguas ambientales.

Las medidas de dispersin de la luz se utilizan tambin para determinar la

concentracin de humos, polvo, niebla, aerosoles, etc. A pesar de que los trminos
turbidimetra y nefelometra suelen restringirse a aquellas aplicaciones en las que
se mide la concentracin de partculas en suspensin existen tambin otros tipos
de aplicaciones basados en las medidas de dispersin de la luz. Entre ellas
podemos citar la determinacin de la forma y tamao de las partculas as como la
de los pesos, moleculares (especialmente en el caso de polmeros).

Cmo diferenciar la turbidimetra y la nefelometra?

Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensin de

partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se
observa turbia. La turbidez es la propiedad ptica de una muestra que hace que la
radiacin sea dispersada y absorbida ms que transmitida en lnea recta a travs
de la muestra. La turbidez es ocasionada por la presencia de materia suspendida
en un lquido.
Hay dos mtodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetra y la
nefelometra. Son dos tcnicas complementarias que seutilizan para el anlisis
cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas.
La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la
direccin dela propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la misma en
cualquier ngulo. En la turbidimetra se compara la intensidad del rayo de luz que
emerge con la del que llega ala disolucin. En cambio, en la nefelometra la
medida de la intensidad de luz se hace con un ngulo de 90 con respecto a la
radiacin incidente. El instrumento usado en la nefelometra, el nefelmetro se
asemeja al fluormetro. En cambio en turbidimetra se utiliza el turbidemetro que
es un fotmetro de filtro.
http://lauraucros.blogspot.mx/2014/10/turbidimetria.html