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TEORES DE ROTENONA EM CLONES DE TIMB (Derris spp.

FABACEAE) DE DIFERENTES REGIES DA AMAZNIA

Jos Paulo Chaves da COSTA , Srgio de Mello ALVES , Muracy B L O

RESUMO A anlise dos teores de rotenona, em clones de trs espcies de timb, permitiram
a classificao destas plantas de acordo com as suas eficincias no controle de larvas de Musca
domestica. Os resultados evidenciaram correlaes significativas entre os teores de rotenona
apresentados pelos clones de Derris urucu e de Derris nicou, com relao a capacidade de controle
das larvas. As plantas com os maiores teores de rotenona foram as mais eficientes. O contedo
de rotenona, os efeitos dos clones das espcies de Derris nas moscas, alm dos locais de origem
das plantas, mostraram que deve ter ocorrido entre estes timbs, a existncia de isolamento
populacional, durante a poca do pleistoceno na Amaznia. Em Derris sp., que apresentou menor
teor de rotenona, sendo ineficiente no controle das larvas, estas diferenas no foram assinaladas.
Palavras chaves: Timb, rotenona, Musca domestica, Amaznia, refgios florestais.
Rotenone Contents in Timb Clones (Derris spp.: Fabaceae) from Different Amazonian

ABSTRACT The rotenone contents analysis in clones of three timb species permited the
showed significant correlations between the rotenone contents in the Derris urucu and D. nicou
clones with the capacity to control the larvae. The plants with high rotenone contents were more
effective. The rotenone contents, the effect of Derris species clones on the flics and the localization
of the plants origin, showed that among the plants could have happened a populational isolation in
the Amazonia during the pleistocene epoch. In Derris sp., that presented lower rotenone contents
and was ineffective to control of the larvae, these differences were not observed.
Key-words: Timb, rotenone, control, Musca domestica, Amazonia, florest refugia.

INTRODUO
Os indgenas da Amrica do Sul,
particularmente da Amaznia, fazem
suas pescas com o uso de timb,
principalmente
quando
maior
quantidade de alimento seja necessrio
(Corbett, 1940). Estas plantas so
cips trepadores que atingem a copa
das rvores e que, de acordo com a
reviso feita por Francis Macbride,
foram
retiradas
do
gnero
Lonchocarpus e colocadas no gnero
1

Derris,
dentro da famlia das
Leguminosas (Lima, 1987).
H muitas espcies de timb,
mas as de uso mais generalizado so
D. urucu e D. nicou, que segundo
Lima (1987), so portadoras nas razes
da substncia rotenona, de onde deriva
a importncia dessas plantas.
Antes de 1946, a rotenona era
utilizada como inseticida nas lavouras
contra insetos (larvas de borboletas,
coccdeos, cochonilhas e pulges) e

EMBRAPA - Amaznia Oriental, Caixa Postal 48, 66017-970, Belm, PA.


FCAVJ-UNESP, 14870-000, Jaboticabal, SP.

ectoparasitas de animais. Costa et al.


(1986) relata o sucesso de D. urucu no
controle do piolho
Haematopinus
tuberculatus, dos bfalos. A despeito
da rotenona ser de um modo geral,
incua para animais de sangue quente
(Lima, 1987), ela pode ser absorvida
pela pele de m a m f e r o s , p o r m ,
relativamente inofensiva quando
utilizada adequadamente (Link, 1965).
Vianna et al. (1976) verificaram que
extratos alcolicos com rotenona de
Derris negresis aplicados por via
cutnea, foram mais eficientes que os
extratos aquosos e produziram sinais
evidentes de intoxicao e morte aps
sete dias em camundongos. Os efeitos
txicos da rotenona foram manifestados
por conjuntivite, faringite, dermatite,
irritao gastrointestinal e pulmonar,
nuseas e vmitos.
As e x p o r t a e s de t i m b
iniciaram-se em 1939. O produto
exportvel era o p das razes e havia
vrios m o i n h o s em o p e r a o em
Manaus (AM) e Belm (PA). Com o
advento do DDT e dos inseticidas
sintticos, o comrcio do p das razes
de t i m b entrou em c o l a p s o ,
j u n t a m e n t e com a a t i v i d a d e de
pesquisa (Pires, 1978).
O objetivo deste trabalho de
analisar o teor de rotenona no p das
razes de clones em trs espcies de
Derris de diferentes r e g i e s da
Amaznia e os seus efeitos em Musca
domestica. Plantas de determinadas
r e g i e s foram i n t e n c i o n a l m e n t e
selecionadas, com o propsito de
detectar possveis existncias de
isolamento, que poderia ter ocorrido

a n t e r i o r m e n t e a poca atual na
Amaznia, pois os timbs so fortes
indicadores de florestas midas.

MATERIAL MTODOS
N o p e r o d o de j a n e i r o / 8 4 a
dezembro/88, a Empresa Brasileira de
Pesquisa Agropecuria (Embrapa),
atravs do Centro de P e s q u i s a
Agroflorestal da Amaznia Oriental,
realizou diversas expedies para
coletas de germoplasma de plantas
a m a z n i c a s , e s t a n d o os t i m b s
r e l a c i o n a d o s entre as e s p c i e s
destinadas ao trabalho de coletas
(Lima & Costa, 1991).
A amostragem foi feita atravs
de ramos (estacas) destacados de
plantas matrizes. Aqueles provenientes
de uma mesma planta receberam
sempre a m e s m a n u m e r a o . Em
seguida, todo material foi remetido
Embrapa para plantio, fazendo parte
hoje do Banco Ativo de Germoplasma
da instituio. As razes empregadas
no trabalho, foram obtidas das plantas
cultivadas em Belm (PA) em rea
com o mesmo tipo de solo, sendo
selecionadas as amostras provenientes
originalmente de regies consideradas
"refgios florestais" ou mais prximos
a eles, como foi descrito por Haffer
(1967 e 1969) para a Amaznia, du
rante o perodo do pleistoceno (Fig. 1).
Neste trabalho foram utilizadas
as espcies: D. urucu, D. nicou e Derris sp., conhecidos nas regies de
coletas, pela denominao vulgar de
timb v e r m e l h o , branco e t i m b
amarelo ou melancia, respectivamente.
Os testes foram realizados com

Legenda:
1: M a n e i o L i m a ; 2 : C r u z e i r o d o S u l ; 3 : B e n j a m i m C o n s t a n t ; 4 : T a b a t i n g a ; 5: S a o P a u u l o d e O l i v e n a ; 6 : S a n t o
Antnio do I; 7: S o Gabriel d a C a c h o e i r a : 8: S a n t a R o s a ( V e n e z u e l a ) : 9: M a r c o B V - 8 ; 10: O i a p o q u e ; 1 1 :
C a l o e n e ; 12: M a z a g o ; 13: Aveiro; 14: Monte Alegre; 15: Porto d e M o z ; 16: G u r u p ; 17: B e l m ; 18: Humait;
19: Costa M a r q u e s ; 2 0 : Fonte Boa; e, 21:Tef

Figura 1. Mapa da parte norte da Amrica do Sul, mostrando a bacia amaznica, com as regies
(A,, A , B, C, D, c F) e os municpios (Legenda), onde as coletas de timbs foram realizadas.
2

o p das razes, que foram seccionadas


a 30 cm da cepa. Depois de limpas
foram cortadas em pedaos de 25 cm,
amarradas em amostras e etiquetadas
com a identificao do nmero do
clone. Posteriormente,
foram
submetidas a processo de secagem,
utilizando-se estufa com ventilao
forada, em temperatura constante de 40
20C, sendo as amostras pesadas
diariamente at a estabilizao do peso.
Em
seguida,
foram
trituradas
separadamente, em um micro-moinho tipo
Willey com o uso de uma peneira de 40
mesh, para a formao do p, sendo o
produto de cada clone, armazenado em
recipientes de plstico leitoso, no

transparente e conservado em ambiente


escuro com circulao de ar.
As determinaes dos teores de
rotenona foram r e a l i z a d a s pela
extrao da substncia de 10 mg do p
das razes, em 10 ml de metanol,
sofrendo agitao em banho de ultrasom, durante cinco minutos, para
obteno do extrato. Estes extratos
foram analisados em Cromatgrafo
Lquido de Alta Eficincia, utilizando
coluna PEGASIL-ODS a temperatura
ambiente e detector UV-VIS, com
comprimento de onda igual a 280 nm
e fase mvel metanol/gua (7:3), com
vazo de 1 ml/minuto. Para a
realizao das anlises comparativas,

as porcentagens referentes aos teores


de rotenona detectadas para o p das
razes
dos
timbs,
foram
transformadas em arco-seno x+1,0.
Os indivduos de M. domestica
empregados foram capturados em
duas granjas de galinhas poedeiras, uma
localizada em Jaboticabal (SP) e outra em
Brodowski (SP). De cada linhagem, 180
fmeas foram isoladas e mantidas no
laboratrio para o fornecimento de ovos.
Como Costa (1996), mostrou no
haver efeitos diferenciais dos clones
na emergncia dos imagos das
linhagens de moscas, estas foram
consideradas conjuntamente, como
repeties nos ensaios.
Os recipientes empregados para
o desenvolvimento dos agrupamentos
larvais foram de plstico transparente,
com capacidade para 500 ml. Na
tampa do recipiente foi confeccionada
uma abertura de 3 3 cm e no local
foi fixado tecido de organza, para
permitir a aerao e evitar a sada das
larvas e imagos.
Os agrupamentos experimentais
foram formados com 300 larvas com
dois dias de idade, descendentes das
moscas das populaes naturais, cujos
i n d i v d u o s foram c o l o c a d o s nos
recipientes de plstico transparente,
com meio de cultura (31,4 g de farelo
de trigo, 2,4 g de fermento, 1,5 g de
leite em p integral e 60 ml de gua
destilada). Em cada agrupamento
adicionou-se 0,7 g do p da raiz do
clone de timb a ser testado, nas
testemunhas no foi adicionado este
produto. Foram realizadas cinco
repeties para cada linhagem de

mosca e para cada clone de timb,


proporcionado 39 tratamentos (clones)
com dez repeties, totalizando em
todo o experimento 390 agrupamentos
ou culturas experimentais.

RESULTADOS
Nos agrupamentos controle, as
moscas de Jaboticabal e de Brodowski
apresentaram mdias e erros padro
para os nmeros de imagos emergidos
das culturas de 214,4 32,7 e 227,0
34,8, respectivamente. A Tabela 1
mostra a identificao dos clones
(nmeros) de cada espcie de timb,
os locais de coletas dentro de cada
regio, com os respectivos teores de
rotenona e os nmeros mdios de
m o s c a s p r o d u z i d a s nas c u l t u r a s
tratadas com o p de suas razes.
Uma anlise comparativa entre
os dados obtidos mostra que D. urucu
a p r e s e n t o u uma m d i a geral de
rotenona para os clones de 3,76%, a
diferena entre o clone com maior
contedo da substncia (clone 862,
regio F), com o de menor contedo
(clone 4 1 , regio A,) de 388 vezes.
Derris nicou apresentou mdia geral
de 4,25%, a diferena entre o clone
com maior contedo da substncia
(clone 850, regio F), com o de menor
contedo (clone 1044, regio B) de
112 vezes. A mdia obtida para Derris sp., foi de 0,18% e o clone 1048
da regio B , tem 145 vezes mais
rotenona que o clone 783 da regio E.
Diferenas nos teores de
rotenona a p r e s e n t a d a pelas trs
espcies de timb, mostraram valor
significativo (F=4,95; P<0,05). Derris

Tabela 1. Relao dos clones de timb (nmeros), regies onde foram coletados, teores de
rotenona nas respectivas razes c produo mdia de moscas emergidas nos agrupamentos
tratados com o p das razes e das testemunhas.
Espcies
limbo
Derris

Derris

Derris

de
urucu

nicou

sp.

Teslem unhas

Nmero do
clone
1 3

Regio

Locais de

coletas

Tabatinga, AM

Teor de
rotenona

Nmero de
m oscas

0,084

2 53,2 0

37

A,

Benjamim Constam.

AM

0,204

242,30

41

A,

Benjamim Constant,

AM

0,027

2 60.4 0
41,00

52

A,

S a o Paulo de Olivena, A M

3,39

57

S o Paulo de Olivena, A M

5,50

19,10

84

S a n t o Antnio do I, A M

6.08

25,70

1 051

S a o Gabriel da C a c h o e i r a ,

1089

Marco V -8. RR

AM

2,66

89,30

1 ,21

161 ,80
21.30

491

Mazago,

AP

3,78

492

Mazago,

AP

4.17

8.00

557

Gurup, PA

2.77

4 6,40

561

Gurup, PA

3,44

28,30

581

onte A leg r e , P A

4,09

1 7,1 0

655

Porlo de M o z . PA

2,97

14,40

B72

Aveiro. PA

2,20

59,80

700

B e l m , PA

5,92

11,60

861

C ruzeiro do Sul, A C

9,00

15.90

S2

Cruzeiro do Sul, A C

10,48

1.30

863

C r u z e i r o d o S ul, A C

5,7 7

13,80

103

F.P.'

Fonle B o a , A M

0.173

222,80

1 50

F.P.'

Tel. Lago Tef, AM

1 044

So Gabrielda

1 047

Santa Rosa,

495

Caloene,

AP

496

498

4.97

29,80

0,086

202,00

0,605

1 88,40

1 ,12

80,90

Oiapoque, A

1 ,40

90,00

C aloene, A

1,28

92.30

519

Oiapoque, A

1,95

62.70

521

Oiapoque, AP

2,34

68.40

841

Cruzeiro do Sul, AC

8,08

6.20

64 2

Cruzeiro do Sul, A C

7.27

11 . 9 0

8 50

Maneio Lima, AC

9,65

9,60

851

Maneio Lima, AC

8,19

1 0,80

Cachoeira,

AM

Venezuela

854

ncio Lima, AC

9,09

1 8.70

1048

Santa Rosa.

0,58

247,80

1 057

Sao Gabriel da Cachoeira,

0,235

234,80

716

Humait, AM

0,044

248,90

71 7

H u m ai t, A M

0,012

220.60

783

Costa Marques, RO

0.004

245,70

Venezuela
AM

Linhagem de

Brodowski

227,00

Linhagem de

JJJaboticabal

.214,30

' = "Fundo d o Prato" d e acordo c o m Vanzolini ( 1 9 7 0 )

urucu e D. nicou no diferiram e


mostraram possuir maiores teores de
rotenona que Derris sp. (Tab. 2).
As relaes entre os efeitos dos
teores de rotenona dos clones e os
nmeros de moscas emergidas dos
agrupamentos, envolvendo as espcies
D. nicou e D. urucu (Figs. 2 e 3),
indicam que os aumentos nos teores
de rotenona nos clones de timb
correspondem a uma diminuio
progressiva nos nmeros de imagos
emergidos.
A confirmao destas relaes
foi realizada atravs dos coeficientes
de correlao "r". Os resultados
mostraram correlaes negativas
significativas
(P< 0,001), com r = -0,89 para
D. nicou e r= -0,81 para D. urucu. O
valor para Derris sp., r = 0,30 foi no
significativo (P> 0,05).
Para comparaes, os valores de
"r" foram transformados de acordo
com Steel & Torrie (1981) em z(r). Os
resultados mostram que os dados
obtidos para D. nicou e D. urucu so
homogneos. Diferena significativa
foi obtida entre D. nicou e Derris sp.
Quanto D. urucu e Derris sp., o valor
do teste "t" no foi significativo (Tab.
3). Esta homogeneidade corresponde
distncia de 0,03 para o nvel de
significncia de 1,96 (P= 0,05).
A d e t e c o de eventuais
variaes entre as plantas de timb da
mesma espcie, provenientes das
diferentes regies, em relao aos
teores de rotenona no p de suas
razes, mostraram para Derris nicou
(F= 161,97; P<0,001) e D. urucu (F=
16,44; PO,001), resultados altamente

significativos, enquanto que para Derris sp., o resultado foi no significativo


(F= 10,08; P>0,05), porm, muito
prximo ao nvel de significncia (F=
10,13; P=0,05). Os dados indicaram que
os teores de rotenona encontrados em D.
nicou diferiram significativamente entre
as plantas provenientes das regies F, C
e B, indicando, respectivamente, que nas
regies F e foram obtidos exemplares
que apresentaram maior e menor teores
para a substncia (Tab. 4).
Em D. urucu, as variaes foram
mais complexas: das 15 diferenas
possveis entre as mdias, seis foram
significativas. Como na espcie anterior,
os maiores teores de rotenona foram
obtidos em plantas provenientes da
regio F, as quais
diferiram
significativamente dos valores obtidos
para os clones das regies A,, e D;
enquanto que as plantas provenientes da
regio A, apresentaram os menores valores
para o contedo de rotenona. Estes valores
diferiram significativamente dos teores
apresentados pelas plantas provenientes
das regies A^ C e D.

DISCUSSO
Os teores de rotenona e os seus
efeitos no controle das larvas de M.
domestica foram importantes para a
diferenciao dos clones das trs
espcies de timb estudadas. Enquanto
os
dados
mostraram
uma
homogeneidade mdia indicada pelas
plantas de D. nicou e D. urucu, os
valores apresentados por Derris sp.
foram menores, em relao aos teores
desta substncia.
A importncia de D. nicou foi
enfatizada por Caminha Filho (1940),

Tabela 2. Valores mdios em porcentagens dos teores de rotenona nas espcies de timb de
origem sul-americana.
Espcies

Valores em porcentagens'

Derris

nicou

4,26

Derris

urucu

3,76

Derris

b
b
a

0,18

sp.

DMS

21-12"

3,55

= 4,88
21-5
= 5,22
12-5

1 = M d i a s seguidas pelas m e s m a s letras no diferem significativamente, pelo teste d e Tukey.


2 = d i f e r e n a m n i m a significativa.

IM4

1047

9*

JI9
N M E R O S DOS

321

143

Sl

CLONES

Figura 2. Relaes entre os teores de rotenona dos clones ( )


nicou e nmero de moscas ( ) emergidas dos agrupamentos.

NMEROS OOS

de

Derris

CLONES

Figura 3. Relaes entre os teores de rotenona dos clones ( ) de Derris


c nmero de moscas ( ) emergidas dos agrupamentos.

urucu

Tabela 3 . Resultados do teste aplicado para detectar diferenas entre os valores dos coeficientes
de correlao (r) obtidos para as espcies sul-americanas de timb.
Comparaes entre os valores de "r"
D. nicou

D.

urucu

Valores de "t"

0,72

>0,05

D. nicou

Derris

sp.

2,21

<0,05

D. urucu

Derris

sp.

1,93

>0,05

Tabela 4. Valores mdios cm porcentagens dos teores de rotenona para as plantas de timb de
cada regio.
Espcies
Derris

Derris

nicou

urucu

Regies

Valores em porcentagens'

8,46 (5)

1,65 (5)

0,34 (2)

8,41 (3)

4,99 (3)

D MS

. =1,60
5

, =2,12

. =3,79

=3,28

3,97 (2)

. =4,23

3,56 (6)

1,93 (2)

A,

0,10 (3)

36

1 = M d i a s s e g u i d a s pelas m e s m a s letras n a o diferem, significativamente, pelo teste d e Tukey,


2 = n m e r o d e clones (entre parnteses) dentro d e c a d a regiSo,
3 = diferena m n i m a significativa.

que apresentou maior quantidade de


rotenona (15 a 17%), em relao a D.
urucu (5 a 12%), e o descreveu como
sendo o m a i s ativo dos t i m b s
(referiu-se a eles como pertencentes ao
gnero Lonchocarpus). possvel que
possam existir clones com essas
propores de princpio ativo; mas,
infelizmente eles no foram includos
neste trabalho.
A classificao dos clones pelos
teores de rotenona apresentados e as
suas relaes com o nmero de moscas
emergidas
dos
agrupamentos

experimentais enfatiza a importncia da


substncia no controle das larvas. Os
aumentos em rotenona nos clones de
timb, produziram redues no nmero
de imagos emergidos rias culturas.
Segundo Costa (1996), as plantas
de D. nicou provenientes da mesma
regio, no apresentaram diferenas
significativas em suas capacidades
controladoras das larvas. Diferenas fo
ram anotadas entre as plantas de regies
diferentes. Os clones provenientes da
regio F predominaram, em relao aos
clones da regio C, e estes foram mais

eficientes que aqueles da regio B. As


estimativas dos teores de rotenona
destas p l a n t a s confirmaram que
aquelas da regio F apresentaram
quatro vezes mais rotenona que os
clones das regies C e B.
As plantas de D. urucu das
regies A, e A apresentaram padres
diferenciais em relao aos teores de
rotenona e nos seus efeitos na
emergncia
de
imagos
dos
agrupamentos experimentais. Estes
grupos esto localizados em uma
posio
difcil,
pois
esto
relativamente distanciados da regio
base, denominada de "refgio do
N a p o " , por Haffer (1969). Como
descreveu este autor, na Amaznia,
muitos " r e f g i o s " p o d e r i a m ter
existido ao longo dos rios mais
volumosos,
que
no
foram
identificados em suas observaes.
2

Devido ao contedo de rotenona


e dos seus efeitos no controle das lar
vas, as plantas de D. urucu mostraram
maior dificuldade na caracterizao
dos "refgios florestais" propostos por
Haffer (1967 e 1969), devido
sobreposio de valores encontrados para
os clones das regies D, C e A^. Entretanto,
as regies F, e A,, puderam ser muito
bem diferenciadas de outras.
As plantas de D.
urucu
procedentes da regio F (refgio do
Leste -Peruano) apresentaram como
D. nicou, os m a i o r e s teores de
rotenona e foram entre as amostras
coletadas, as que mostraram maior
capacidade para o controle das larvas
de M. domestica.
Deste m o d o , a anlise do

contedo de rotenona em plantas de D.


nicou e D. urucu e os seus efeitos na
emergncia de i m a g o s de M.
domestica, mostraram diferenas en
tre plantas de regies diferentes,
dentro dessas espcies. Isso pode
mostrar uma resposta favorvel
teoria do isolamento que deve ter
ocorrido em poca anterior a atual na
Amaznia. Fato descrito por Haffer
(1969), Vanzolini (1970), Vuilleumier
(1971) e Simpson & Haffer (1978),
com outras espcies. evidente que
diferenas entre os clones, especialmente
os de D. urucu, no teor de rotenona e nos
seus efeitos nas larvas, possam ter
ligeiramente obscurecido a caracterizao
de certos "refgios". Isso, entretanto,
parece dever-se mais a localizao
inadequada do local de origem de algumas
plantas, em relao aos locais originais dos
"refgios florestais" descritos por Hafter
(1967 e 1969) e/ou pela longa distncia
geogrfica entre os clones dentro de certas
regies. Por outro lado, alguns organismos
podem ter uma distribuio mais
abrangente que outros (Brown Jnior 1977,
mostrou a existncia de 38 "refgios" para
as borboletas do grupo Heliniini).
A denominao "fundo do prato" 1
foi usada por Vanzolini (1970) ao referirse s estruturas geogrfica e fsica da
Amaznia, pois a parte central baixa,
com padres indefinidos de distribuies
de organismos; enquanto os "refgios
florestais" so geralmente orogrficos e
perifricos. Infelizmente, s duas amostras
de plantas provenientes dessa regio foram
empregadas, mas confirmaram positi
vamente, as afirmaes do autor acima.
A especificidade observada nos

testes para deteco das doses letais


realizadas com clones de D. urucu e
D. nicou (Costa et al. 1997), mais a
seleo dos clones que melhor
controlam as larvas dos agrupamentos
experimentais, mostraram a importncia
do valor seletivo realizado nestas
plantas, o que foi baseado na capacidade
de controle destes insetos. Mais detalhes
a respeito dos efeitos em M. domestica,
regies de origem e isolamento das
plantas de timb, sero publicados por
Costa & Belo (1999).
As plantas de timb apresentam
grande c a p a c i d a d e de serem
empregadas industrialmente, pois h
possibilidade
da
extrao,
e s t a b i l i z a o e p a d r o n i z a o da
rotenona, que a principal substncia
contida em suas razes. Segundo Lima
(1987), as mesmas apresentam alm
da rotenona, os rotenides (dequelina,
tefrosina e toxicarol) que necessitam
de mais pesquisas para se ter melhor
conhecimento dos seus efeitos e que
podero servir de matria-prima para
a produo de inseticidas biolgicos.

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Aceito para publicao em 17/11/1999