Clarificacion Completo

INGENIERA ENOLGICA II
INTRODUCCIN
La operacin de "adicin de un agente clarificante" o "encolado"
consiste en incorporar a un vino ms o menos turbio, o que presenta
una inestabilidad coloidal, una sustancia denominada "cola" o
"clarificante" capaz de flocular y de sedimentar, arrastrando las
partculas responsables de la turbidez y/o inestabilidad. Consiguiendo
de esta forma una limpieza en los vinos de las partculas que contiene
en suspensin de forma ms rpida: clarificacin acelerada.
Estabilizacin de los vinos, en donde el vino debe quedar afinado y
suavizado organolpticamente. Esto depende de la naturaleza de la
cola y de la cantidad utilizada.
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MARCO TERICO
CLARIFICACIN
La clarificacin de los vinos es una prctica realizada en enologa
desde muy antiguo y cuyos efectos beneficiosos son bien conocidos,
aunque muchas veces sin saber las causas que los originan.
Los fines que se persiguen con la clarificacin son en un principio
acelerar la eliminacin de materias que enturbian el vino por un
procedimiento ms rpido que el de sedimentacin y trasiego si se
trata de vino sanos y forzosamente necesario cuando se trata de
vinos enfermos o alterados.
La filtracin es un procedimiento de acelerar el a claro y brillante de
los vinos y, en los casos en que pueda ser suficiente, lo consigue con
mayor rapidez y economa. Pero no siempre puede alcanzarse dicho
propsito con una filtracin, sino muchas veces es necesaria la accin
de un tratamiento que puede incluso afectar a su composicin,
actuando de una manera no solamente fsica, sino fisicoqumica; aqu
se hace imprescindible el empleo del clarificante.
Ya en este terreno de la accin fisicoqumica del clarificante estn
otras de sus cualidades, que se refieren a la propiedad de actuar
sobre los vinos, no slo como elemento para su aclar sino mejorando
su caracterstica de finura y disposicin para la crianza y aejamiento.
Adems, puede obrar en el sentido de prevenir contra futuros
enturbiamientos, an no presentes, que podran haber sido originados
por sustancias existentes en el vino que se inutiliza o eliminan con el
empleo de clarificante apropiado.
Cada da es mayor en enologa la importancia de los clarificantes,
pues los modernos estudios sobre el aejamiento del vino han dado
interesantes orientaciones relacionadas con los nuevos conocimientos
como son los referentes a los fenmenos de xidoreduccin.
Como consecuencia de esto se ha deducido que muchas veces se
puede acortar la accin del oxgeno durante la crianza de ciertos tipos
de vinos limitando a una primera fase su conservacin en vasijas de
madera y siendo conveniente un embotellado para terminar sueas a
miento. Los perjuicios que supone un posterior enturbiamiento en
estos envases aumenta la importancia de la mejora de los
procedimientos para conseguir brillantes en el vino y asegurar su
permanencia.
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CAUSAS DEL ENTURBIAMIENTO

Las causas de enturbiamiento son muy diversas y complejas: Una de
origen biolgico y otra qumico o fsico qumico o de varios
simultneamente.
La estabilizacin de un vino contra enturbamiento de origen biolgico,
si el vino es sano y seco, o de elevado grado alcohlico, se consigue
fcilmente por procedimientos naturales; pero si el vino no es sano y
presenta un comienzo de enfermedad microbiana, o tiene residuos
azucarados y poco grado alcohlico, se consigue fcilmente por
procedimientos naturales pero si el vino no es sano y presenta un
comienzo de enfermedad microbiana o tiene residuos azucarados y
poco grado alcohlico ser preciso recurrir a procedimientos, como es
la pasteurizacin o la filtracin esterilizante, para conseguir aqulla.
Los enturbiamientos de origen no microbiano son, en su mayora,
eficazmente combatidos, tanto preventiva como curativamente, por
la accin de clarificantes adecuados.
Para realizar la eleccin acertada del clarificante, es preciso conocer
la naturaleza del enturbiamiento, por lo que pasamos en primer
termin a dar unas nociones sobre ese tema.
ENTURBIAMIENTOs DE ORIGEN BIOLGICO:

Estos son debidos a la presencia de microorganismos, los cuales
pueden ser levaduras o bacterias productoras de enfermedades.
En el primer caso, corregido el enturbiamiento, lo estar el vino; en el
segundo, si no es muy al principio, no ser suficiente la eliminacin
del enturbiamiento para que el vino quede en buenas condiciones.
La caracterizacin de la naturaleza microbiana del enturbiamiento
puede hacerse mediante un examen microscpico, ya sea una
preparacin directamente hecha de lquido, si el enturbiamiento es
muy intenso, o bien del depsito de la centrifugacin de una muestra.
Si no se dispone de microscopio, se puede tener una orientacin
bastante segura, en la mayora de los casos, sumergiendo en un
baomara en ebullicin, durante 2 3 minutos, un tubo de ensayo
con una muestra del vino turbio, enfriandole despus y dejndola
reposar durante unas horas; se observar si el enturbiamiento se
deposita sin disolverse, quedando el lquido claro (aunque no
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brillante). Esto acusara probable presencia de microorganismos que,
una vez, muertos se haban depositado.
Para reconocer en un vino claro la posibilidad de que se presente este

enturbiamiento microbiano, se someter a la prueba de la estufa, qu
consiste en mantener una vasija mediada y otra llena a una
temperatura de 25 o 30C durante algunas horas. Si el vino est
enfermo, pronto aparecer el enturbiamiento.
ENTURBIAMIENTO LLAMADOS QUIEBRAS:
Quiebra Frrica o azul

Las caractersticas son: coloracin azulada negruzca de los
vinos blancos y negros y ennegrecimiento de los tintos.
La reaccin para acusar la presencia de hierro en el depsito es
la siguiente: se decanta el lquido, se filtra el recibo y se
disuelve el poso en cido clorhdrico al 10%. Despus se trata
con unas gotas de ferrocianuro de potasio al 10% y si hay hierro
dar coloracin azul ms o menos intensa.
La caracterstica que pone en manifiesto la propensin a la
quiebra ferrica en los vinos an claros , son: enturbiamiento
cuando se someten a la prueba del aire: aparicin del mismo
por adicin de agua oxigenada (basta con unas gotas en 100
centmetros cbicos de vino y luego llevarlo al resguardo de la
luz). Tambin puede aparecer el enturbiamiento tpico despus
de una filtracin en contacto del aire y el fro.
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Quiebra blanca
El vino presenta un aspecto opalescente, lechoso, como de
nube. Se origina por oxidacin de un compuesto formado por
taninos, materia colorante, fosfatos y cal; por ello, como en el
caso anterior aparece despus de aireacin.
se caracteriza haciendo primero en la reaccin del hierro y
despus de los fosfatos. Para sta se aade a la disolucin en
cido clorhdrico al 10% del precipitado de la primera, un
volumen igual de Nitromolibdato amonico, se calienta a 90C y,
si hay fosfatos, se formara precipitado amarillo.
Sometiendo el vino a la prueba del aire se comprobar si est
propenso a la quiebra.
Quiebra oxidsida
Se observa una coloracin parda del vino, con formacin de
depsito. El agente productor de este enturbiamiento es la
oxidasa, por su actuacin sobre materias colorantes y taninos.
Las reacciones en los vinos aun claros son como en los casos
anteriores: la prueba del aire y la comprobacin de que no se
realiza la aparicin con esta prueba, s sufre previo
calentamiento, ya que este destruye la oxidasa.
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Quiebra cuprosa
El vino presenta un aspecto opalino. Se comprueba esta
quiebran por solubilizarse con adicin de ClH; al contacto con el
oxgeno del aire o por adicin de agua oxigenada. La accin de
la luz tambin la solubiliza.
Las reacciones para acusar su posibilidad de aparicin en el
vino son: Por adicin de hidrosulfito y por la accin del calor
fuera del contacto del aire.
Quiebra proteica
La opalescencia es producida por sustancias albuminoides. Se
disuelven accin de los alcalis. Las reacciones en los vinos
claros se aprecian con la accin del calor an en contacto con el
aire por lo que se diferencia en esta prueba de la cuprosa. La
adicin de tanino provoca enturbiamiento y ste no se disuelve
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por adicin de cido diferencindose con este ensayo de las
quiebras ferricas.
Enturbiamiento por precipitacin de bitartrato

El vino presenta depsitos de aspecto cristalino, muy
caractersticos y se observa al microscopio. Se disuelve
lentamente por accin del calor o de los cidos. Se reconoce la
propensin del vino, sometindole a la accin del fro.
Enturbiamiento por insolubilizacin de la materia

colorante
Se disuelve por la accin del calor. Se provoca por accin del
fro independientemente de la accin del oxgeno del aire, A
diferencia de la quiebra ferrica y el aspecto del precipitado no
es cristalino como el de bitartrato.
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PRINCIPALES CLARIFICANTES:
Reproducimos el siguiente cuadro, publicado en la Universidad de Cuyo
(Mendoza) por Aquiles-Maverof, sobre los principales clarificantes vnicos,
por la claridad y brevedad de exposicin:
CLARIFICANTES MINERALES
TIERRAS CLARIFICANTES:
Estn formadas por silicatos y completamente exentas de caliza y de
otros carbonatos, as como de minerales de hierro atacable por los
cidos. No desadifican los vinos ni les enriquecen en hierro. Para el
empleo de estas tierras, temas sern primero en Agua Fra durante
unas 12 horas se decanta el depsito y se forma con vino una papilla
clara que se vierte sobre el vino que se va a calificar.
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Las dosis de tierra son de unos 200 a 300 gramos por hectolitro de
vino. Cuando la tierra se deposite, junto con las impurezas que
arrastran se procede a decantar el vino.
BENTONITAS:
La composicin de la bentonita es variable, por lo que sus
propiedades clarificantes lo son tambin, habiendo buenas y malas
bentonitas. Las buenas bentonitas son capaces de absorber 10 a 12
veces su peso de agua.
Eliminan parcialmente el hierro contenido en el vino. La manera de
aadir la bentonita a los vinos es la siguiente: primero se prepara una
suspensin en agua o en vino. Esta suspensin puede realizarse de
dos maneras; aadiendo la bentonita lentamente y espolvoreando
con un tamiz sobre la superficie del lquido, al mismo tiempo que se
agita enrgicamente, mezclando lo mejor posible. Otro procedimiento
consiste en agregar la bentonita en la misma forma, pero sin agitar el
lquido o muy poco. Se deja reposar, las partculas de bentonita se
hinchan y forma en el fondo una masa gelatinosa. Despus de una o
dos horas hace agita enrgicamente; ests suspensiones son de un 6
a 7% y es preferible realizar las a temperatura que no baje de 20C,
pudiendo llegar a 60Ccon la que se realizan ms rpidamente.
Las dosis de bentonita son muy variables dependiendo de su
naturaleza y de la del vino, pero no deben exceder de 100 gramos por
hectolitro de vino. Muchas veces es conveniente completar la
clarificacin con otra muy ligera de gelatina a razn de unos 2 gramos
por hectolitro y adicionado inmediatamente despus de la suspensin
de bentonita. Es muy recomendable realizar ensayos previos y en
pequea escala antes de decidir la eleccin y dosis de la bentonita
empleada.
TIERRAS ACTIVADAS
Son obtenidas por la accin de cidos sobre diversas arcillas. Su
empleo, an no muy difundido en los vinos, es til para la eliminacin
de materias proteicas y de hierro. Lo primero lo realizan con menos
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intensidad que las bentonitas, pero la eliminacin del hierro es ms
eficaz.
Se emplean agregando las directamente al vino en forma
pulverulenta y en dosis de 1 a 10 gramos por litro. Requiere una
clarificacin filtracin complementaria.
CLARIFICANTES ORGNICOS
ALBMINA DE SANGRE
Como su nombre indica es la albmina procedente de la sangre lo que
interesa en esta clarificacin, por lo que la adicin de los restantes
Elementos que integran la sangre (fresca y de animal sano), que
algunas veces se emplea en esta clarificacin, son, por lo menos,
intiles, sino perjudiciales.
Existe en el comercio albmina de sangre pura y desecada que es la
ms indicada. La forma de realizar esta clarificacin es la siguiente: Si
se va a emplear la sangre fresca se tratar de, separar el suero, que
es la parte ms rica en albmina. Con este fin, se bate enrgicamente
la sangre con unas de varillas se deja en reposo y se separar un
lquido amarillento, que es el suero. Se decanta despus el suero en
una vasija y, tomando la cantidad conveniente, se va a tirar con unos
litros de vino, incorporndole al volumen Total que sea a clarificar
removiendo bien durante unos minutos. Es conveniente Aadir una
pequea cantidad de sal al suero (menos de 10 gramos por
hectolitro), con el fin de facilitar la disolucin. Cuando se emplea la
albmina seca preparada en el comercio se procede primero a su
disolucin en agua tibia, siempre a temperaturas menores de 58C,
para evitar una coagulacin. Este clarificante en muy enrgico
agotando hasta los taninos y el color de los vinos.
La dosis a emplear se determina despus de ensayos previos, como
orientacin se da la cifra de 5 a 10 gramos de albmina seca por
hectolitro de vino.
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CLARAS DE HUEVO
La clara de huevo es casi en su totalidad albmina pura, como
trmino medio contiene unos 4 gramos por Clara. El tanino y el
alcohol son los agentes por los que se coagula en el vino. Es un
clarificante indicado para vinos finos tintos de mesa y blancos, por ser
poco exigente en tanino para floculacin.
La forma de emplear la es batiendo la Clara a punto de nieve y
aadiendo luego unos litros de vino. Tambin es conveniente una
pequea cantidad de sal menos de 3 gramos por Clara. Despus se
vierte poco a poco en el volumen del vino agitando continuamente.
Las dosis son de 2 a 3 claras por hectolitro.
Cuando se emplee albmina seca, se disolver previamente en agua
tibia a 30 o 40C.
La dosis de albmina seca por hectolitro de vino es de 8 a 12 gramos.
CASENA
La casena forma parte de la composicin de leche. Se utiliza
especialmente en vinagreria; para la clarificacion del vino debe ser
desechada, por la serie de productos intiles o perjudiciales que se
incorpora.
Comercialmente se encuentra casena purificada y seca, la cafena se
puede dispersar en agua alcalina en finsimas partculas (estado
coloidal), pareciendo disuelta. En presencia de cido se coagula
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inmediatamente lo que sucede en el vino por los cidos en el
contenido, no siendo necesaria la presencia de taninos. Se prepara
triturando en un mortero la casena aadiendo bicarbonato sdico
(unos 2 a 3 gramos) y agua hasta lograr formar una pasta densa que
se agita bien el mortero. Se diluye con agua tibia hasta formar una
suspensin opalina y se mezcla con unos litros de vino, se agita
contina y rpidamente mientras se agrega a la totalidad del vino que
se va a clarificar, continuando la agitacin durante unos minutos.
GELATINA
Se obtiene mediante la extraccin por coccin de sustancias
colgenas de los huesos y cartlagos. E componente eficaz es la
glutina que segn la calidad de la gelatina, est en diferente
proporcin en la gelatina oro hay un 80%; en la gelatina plata un 70%
y en la gelatina bronce un 60 a 65%. Adems, las impurezas que en
las malas gelatinas acompaan a la glutina pueden ser origen de
malos olores que pasaran al vino.
El tanino presente en los vinos ser el agente que provocar la
coagulacin de las gelatinas; pero la precipitacin puede ser o no
completa influyendo en ella otros factores como son el pH del vino, su
grado alcohlico y otros elementos de su composicin. Ser necesario
asegurar que la riqueza en Dani no sea la suficiente para la
coagulacin de la gelatina; sirve como norma el que 1 gramo de
gelatina consume en su coagulacin 0.9 gramos de tanino.
COLA DE PESCADO O ICTIOCOLA

Es un clarificante indicado para vinos muy finos, por ser poco
exigente en tanino para su coagulacin y decolorar muy poco. Se
presenta en el mercado en forma de pequeos rollos, en filamentos o
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en polvo. Este ltimo se presta ms a fraude. La preparacin es
penosa pues an despus hinchada en agua es difcil su disolucin en
sta necesitando que sea caliente y que se macere triturando y
tamizando, la operacin se repetir hasta no deja residuo. Una vez
dislacerada y hecha la suspensin, se aade un volumen de vino y
como en los otros casos se vierte despus agitando al resto del
volumen. La dosis oscila entre 9 a 10 gramos por hectolitro.
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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
MATERIALES
Vaso precipitado
Probetas
Graduadas
Balanza analtica
Baguetas
Fiola de 250ml
Cocina elctrica
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Embudo de
filtracin
Soporte
universal
Tubo refrigerante
Termmetro
Balon
Manguerillas
REACTIVOS
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Muestras de
mosto
Bentonita
Carbonato de
sodio
Colapez
Gelatina
Huevo
1. PRIMER TESTIGO
En la balanza analtica pesar 0.6 gramos de gelatina para una
cantidad de 2 litros de muestra.
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Disolver la gelatina con agua caliente, hasta conseguir una mezcla

homognea en una proporcin de 1 a 10.
Despus de haber mezclado la gelatina, se pasa a verter la mezcla en

un vaso precipitado de 1000ml, esta accin se hace de poco a poco
para poder obtener una mezcla uniforme del mosto con la gelatina.
Luego de haber vertido mezclado toda la muestra de mostos, se hace

una agitacin y se vuelve a verter la mezcla con ayuda de un embudo
en botella. Luego dejar la botella en reposo para poder apreciar la
sedimentacin.
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2. SEGUNDO TESTIGO
En una balanza analtica pesar 0.6 gramos de colapez para un
volumen de 2 litros de mosto.
Disolver el colapez con 2 ml de agua caliente, hasta conseguir una

mezcla homognea.
Luego de haber disuelto el colapez, se mezcla con el mosto y luego se

va vertiendo la muestra en una vaso precipitado de 1000 ml.
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Luego de obtener la mezcla de colapez y mosto, se pasa a vaciar a la

botella para su posterior reposo y sedimentacin.
3. TERCER TESTIGO
Romper el casacaron de huevo y vaciar a un vaso precipitado
solamente la clara, luego con la yuda de una bagueta agitar hasta
quela clara esta a punto de nieve.
Luego de obtener la clara de huevo a punto de nieve, pesar en una

balanza 0.7 gr, debido a que la proporcin es de 0.35 por litro.
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Verter el mosto en unvaso precipitado aadiendo la clara de huevo,

con la yuda de una bagueta se va a hacer a agitacin hasta ver que la
mezcla se haya homogenizado. Luego de ello se pasa a vaciar el
mosto en la botella y dar reposo para que pueda sedimentar.
4. CUARTO TESTIGO
En una balanza analitica pesar 1g de bentonita, ya que la proporcin
es 0.5g por litro.
En un vaso precipitado echar la bentonita y aadir 10ml de agua y

dejar reporar por 24 horas para que se pueda disolver por completo y
luego aadir al mosto.
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Luego de haver realizado todo los procedimientos con los

clarificantes, se debe dejar reposar hasta que se de la sedimentacin.
En una fiola de 250ml verter el mosto hasta llegar al raz, y luego

vaciar el mosto en una vaso precipitado.
Luego aadir al carbonato de sodio hidrogenado hasta que se sature,

o hasta que el burbujeo deje de ser continuo.
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Luego de que el burbujeo haya cecado y el se haya tornado un color

oscuro se vacia a un balon para poder realizar la detilacin.
Una vez armado el equipo de destilacin, se pasara a calentar la

mezcla y a realizar la destilacin.
Una vez realizada la destilacin se toma la muestra y se llena en una

fiola, , luego se vaca a una probeta y se toma la la concentracin del
contenido alcohlico.
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Nota: La muestra tiene 18 grados de alcohol.
MARCO TERICO
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NEFELOMETRA
La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la
dispersin de la radiacin que atraviesan las partculas de materia.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una
suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y
como consecuencia se observa turbia. La dispersin no supone la
prdida neta de potencia radiante, solo es afectada la direccin de la
propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la misma en
cualquier ngulo. La intensidad depende de:
el nmero de partculas suspendidas, su tamao, su forma.

los ndices refractivos de la partcula y del medio dispersante.
la longitud de onda de la radiacin dispersada.
La relacin entre variables y es ms factible un tratamiento
terico, pero debido a su complejidad raras veces se aplica a
problemas analticos especficos.
El procedimiento generalmente es emprico y slo se consideran 3

factores:
LA CONCENTRACIN: Mayor sea el nmero de partculas, mayor es
la dispersin.
TAMAO DE LA PARTCULA: Factores como el pH, la velocidad y
orden de la mezcla, concentracin de los reactivos, duracin del
estado de reposo y la fuerza inica.
LONGITUD DE ONDA: es la distancia real que recorre una
perturbacin (una onda) en un determinado intervalo de tiempo. Ese
intervalo de tiempo es el transcurrido entre dos mximos
consecutivos de alguna propiedad fsica de la onda. En el caso de las
ondas electromagnticas esa propiedad fsica (que vara en el tiempo
produciendo una perturbacin) puede ser, por ejemplo, su efecto
elctrico (su campo elctrico) el cual, segn avanza la onda, aumenta
hasta un mximo, disminuye hasta anularse, cambia de signo para
hacerse negativo llegando a un mnimo (mximo negativo). Despus,
aumenta hasta anularse, cambia de signo y se hace de nuevo
mximo (positivo). Esta variacin del efecto elctrico en el tiempo, si
la representamos en un papel, obtenemos "crestas" y "valles"
(obtenemos una curva sinusoidal) pero la onda electromagntica no
"tiene" crestas y valles. Otra propiedad fsica, que podramos haber
utilizado para medir la longitud de onda de las ondas
electromagnticas, es su efecto magntico (su campo magntico),
que tambin vara en el tiempo.
En el caso de las ondas llamadas "olas del mar", esa propiedad puede
ser la posicin de una de sus molculas respecto al nivel medio del
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mar. La perturbacin avanza a una determinada velocidad (que
depende de varios aspectos que aqu no son relevantes).
Si medimos lo que avanza la perturbacin en el transcurso de tiempo
empleado por una de sus molculas en pasar dos veces consecutivas
por un mximo en su posicin respecto al nivel medio del mar,
obtendremos la longitud de onda de esa onda que llambamos "olas
del mar". En este caso, esa distancia (esa longitud de onda) coincide
con la separacin entre dos crestas consecutivas, pero no es
conveniente quedarse con la idea de que todas las ondas tienen
"crestas". La luz no las tiene. La definicin de "distancia recorrida por
la perturbacin (no por el material, molculas, etc.) en una
determinada duracin de tiempo" es la definicin vlida.
Si representamos en dos dimensiones cmo vara esa propiedad fsica
con la distancia que recorre la onda obtenemos una curva cuyo
aspecto muestra cierta periodicidad. En muchos casos esa curva tiene
aspecto sinusoidal. La distancia entre dos mximos de esa curva
sinusoidal nos muestra el valor (expresado en metros, centmetros o
cualquier otra unidad de medida de distancia) de la longitud de onda,
pero no "es" la longitud de onda. La longitud de onda es una distancia
real recorrida por la onda. No es la distancia entre dos mximos de
una curva pintada en un papel. Como es lgico, para poder
representar esta curva, necesitamos conocer la velocidad a la que
avanza la onda. Las ondas electromagnticas que llamamos "luz
visible" pasan de un mximo de su campo elctrico a un mnimo y
otra vez a un mximo varios billones de veces por segundo. A pesar
de que la onda va a una velocidad de casi 300 000 km/s, la distancia
que puede recorrer la onda entre dos mximos consecutivos de su
campo elctrico es pequesima (nanmetros). En cambio, las ondas
electromagnticas que llamamos "ondas de radio" tienen la propiedad
de que su campo elctrico se hace mximo y mnimo a un ritmo
muchsimo menor que el de la luz visible. Por ello, las ondas de radio
pueden avanzar centmetros, metros e incluso kilmetros en el
transcurso de dos mximos consecutivos de su campo elctrico. Es
por ello que la longitud de onda y la frecuencia (nmero de veces que
su campo elctrico se hace mximo por segundo) son parmetros que
necesariamente estn relacionados.
Es necesario recalcar que la longitud de onda no es la distancia que
recorren las partculas implicadas en la propagacin de la onda
(molculas de agua en las olas del mar, tomos o molculas de la
corteza terrestre en un terremoto, molculas de la atmsfera terrestre
propagando un sonido, etc.). Es la distancia que recorre la onda.
En lenguaje fsico/matemtico podemos decir que la longitud de onda,
es una magnitud fsica que describe la distancia entre dos puntos
consecutivos de una onda sinusoidal que poseen la misma fase.
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La longitud de onda es descrita frecuentemente con la letra
griega lambda (). El concepto de longitud de onda suele extenderse
tambin a cualquier onda peridica aunque no sea sinusoidal. La
longitud de onda se mide en metros en unidades del Sistema
Internacional de Unidades.
En aquellas ondas que se desplazan a una velocidad constante, la
longitud de onda es inversamente proporcional a la frecuencia y
directamente proporcional al perodo de la onda. Ejemplos comunes
de ondas son las ondas elsticas (como el sonido) y las ondas
electromagnticas (como la luz).
ONDAS SINUSOIDALES
Por el teorema de Fourier, cualquier onda peridica puede ser
expresada como la suma ponderada de ondas sinusoidales de
distinta longitud de onda. En otras palabras, cualquier onda
peridica, independientemente de su forma, puede ser
descompuesta en una serie de ondas sinusoidales. Esta
propiedad permite estudiar el comportamiento de multitud de
ondas mediante el anlisis de cada una de sus componentes,
denominadas componentes espectrales.
En una onda sinusoidal de frecuencia f y periodo T, la longitud
de onda viene dada por la expresin:
Donde v es la velocidad de propagacin de la onda. En el caso

de ondas electromagnticas propagndose en el vaco, la
velocidad de propagacin es la velocidad de la luz; en el caso
de ondas de sonido, es la velocidad del sonido. En los medios
denominados
como no
dispersivos esta
velocidad
de
propagacin es la misma para cualquier longitud de onda.
pg. 26
MEDIOS DIFERENTES AL VACIO

Las nicas ondas capaces de transmitirse a travs del vaco son
las ondas electromagnticas. Cuando stas penetran en un
medio material, como puede ser el aire o un slido, su longitud
de onda se ve reducida de forma proporcional al ndice de
refraccin n de dicho material. La velocidad de propagacin de
la luz en el medio es menor a la del vaco mientras que su
frecuencia no vara. La velocidad de propagacin v' en un
medio ndice de refraccin n viene dada por:
LONGITUD DE ONDA ASOCIADA A PARTICULAS

Louis-Victor de Broglie postul que todas las partculas que
posean una cantidad de movimiento tenan asociada una
determinada longitud de onda. Es la denominada Hiptesis de
Broglie.
Donde:
h es la Constante de Planck,
p es la cantidad de movimiento de la partcula.
El cociente entre una constante muy pequea y un
denominador que depende de la velocidad de la partcula, hace
que para objetos macroscpicos en movimiento las ondas
asociadas a estos sean imperceptibles por ojo humano.
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La Nefelometra mide la luz dispersada en direccin distinta a la luz

emitida (generalmente con ngulos que oscilan entre 15 y 90).
Utiliza como instrumento el nefelmetro (en el que el detector se
ubica con un ngulo que oscila entre 15 y 90 ej. a 90). Se suele
utilizar
para
concentraciones
ms
diluidas.
Se basa en la deteccin de los complejos Ag-Ab, por la refraccin que
dichos complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por
el tubo con el antgeno y el anticuerpo correspondiente.
Habitualmente se utilizan rayos lser y se establece una relacin
entre lacantidad de luz que llega y la cantidad de complejos
formados.
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA

PRESICIN (HPLC)
La cromatografa lquida de alta eficacia o high performance liquid
chromatography (HPLC) es un tipo de cromatografa en columna
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utilizada frecuentemente en bioqumica y qumica analtica. Tambin
se
la
denomina
a
veces cromatografa
lquida
de
alta
presin o cromatografa lquida de alta resolucin (high pressure
liquid chromatography) (HPLC), aunque esta terminologa se
considera antigua y est en desuso. El HPLC es una tcnica utilizada
para separar los componentes de una mezcla basndose en
diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias
analizadas y la columna cromatogrfica.
PRINCIPIO:
CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA RESOLUCIN (HPLC):
En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna
cromatogrfica a travs de la fase estacionaria (normalmente, un
cilindro con pequeas partculas redondeadas con ciertas
caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de
lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la columna. La muestra
a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus componentes
se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones
qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan
por la columna. El grado de retencin de los componentes de la
muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composicin
de la fase estacionaria y de la fase mvil. El tiempo que tarda un
compuesto a ser eluido de la columna se denomina tiempo de
retencin y se considera una propiedad identificativa caracterstica de
un compuesto en una determinada fase mvil y estacionaria. La
utilizacin de presin en este tipo de cromatografas incrementa la
velocidad lineal de los compuestos dentro de la columna y reduce as
su difusin dentro de la columna mejorando la resolucin de la
cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua,
el metanol y el acetonitrilo. El agua puede contener tampones, sales,
o compuestos como el cido trifluoroactico, que ayudan a la
separacin de los compuestos.
Una mejora introducida a la tcnica de HPLC descrita es la variacin
en la composicin de la fase mvil durante el anlisis, conocida
como elucin en gradiente. Un gradiente normal en una
cromatografa de fase reversa puede empezar a un 5%
de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25
minutos. El gradiente utilizado vara en funcin de la hidrofobicidad
del compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra
como una funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil
utilizada respecto a la afinidad por la fase estacionaria. En el ejemplo,
utilizando un gradiente agua/acetonitrilo los compuestos ms
hidroflicos eluirn a mayor concentracin de agua, mientras que los
compuestos ms hidrofbicos eluirn a concentraciones elevadas de
acetonitrilo.
pg. 29
A menudo, hace falta realizar una serie de pruebas previas con tal de
optimizar el gradiente de forma que permita una buena separacin de
los compuestos.
TIPOS DE HPLC:
Cromatografa de fase normal: La cromatografa de fase normal
o normal phase HPLC (NP-HPLC) fue el primer tipo de sistema HPLC
utilizado en el campo de la qumica, y se caracteriza por separar los
compuestos sobre la base de su polaridad. Esta tcnica utiliza una
fase estacionaria polar y una fase mvil apolar, y se utiliza cuando el
compuesto de inters es bastante polar. El compuesto polar se asocia
y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de adsorcin aumenta
a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la interaccin
entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en comparacin
a la fase mvil) aumenta el tiempo de retencin.
La fuerza de interaccin no slo depende de los grupos funcionales
del compuesto de inters, sino tambin en factores estricos de
forma que los ismeros estructurales a menudo se pueden diferenciar
el uno del otro. La utilizacin de disolventes ms polares en la fase
mvil disminuye el tiempo de retencin de los compuestos mientras
que los disolventes ms hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo de
retencin.
La NP-HPLC cay en desuso a los aos setenta con el desarrollo del
HPLC de fase reversa o reversed-phase HPLC debido a la falta de
reproductibilidad de los tiempos de retencin puesto que los
disolventes prticos cambiaban el estado de hidratacin de la silica o
almina de la cromatografa.
Cromatografa de fase reversa: La HPLC de fase reversa (RP-HPLC)
consiste en una fase estacionaria apolar y una fase mvil de polaridad
moderada. Una de las fases estacionarias ms comunes de este tipo
de cromatografa es la silica tratada con RMe2SiCl, donde la R es una
cadena alquil tal como C18H37 o C8H17. El tiempo de retencin es
mayor para las molculas de naturaleza apolar, mientras que las
molculas de carcter polar eluyen ms rpidamente.
El tiempo de retencin aumenta con la adicin de disolvente polar a
la fase mvil y disminuye con la introduccin de disolventes ms
hidrofbicos. La cromatografa de fase reversa es tan utilizada que a
menudo se lo denomina HPLC sin ninguna especificacin adicional. La
cromatografa de fase reversa se basa en el principio de las
interacciones hidrofbicas que resultan de las fuerzas de repulsin
entre un disolvente relativamente polar, un compuesto relativamente
apolar, y una fase estacionaria apolar. La fuerza conductora en la
pg. 30
unin del compuesto a la fase estacionaria es la disminucin del rea
del segmento apolar del analito expuesto al disolvente. Este efecto
hidrofbico est dominado por el aumento de la entropa, y la
consecuente disminucin de la energa libre, asociada con la
minimizacin de la interfase compuesto-disolvente polar. El efecto
hidrofbico disminuye con la adicin de disolvente apolar a la fase
mvil. Esto modifica el coeficiente de particin de forma que el
compuesto se mueve por la columna y eluye.
Las caractersticas del compuesto de inters juegan un papel muy
importante en la retencin. En general, un compuesto con una
cadena alquil larga se asocia con un tiempo de retencin mayor
porque aumenta la hidrofobicidad de la molcula. Aun as, las
molculas muy grandes pueden ver reducida la interaccin entre la
superficie del compuesto y la fase estacionaria. El tiempo de
retencin aumenta con el rea de superficie hidrofbica que suele ser
inversamente proporcional al tamao del compuesto. Los compuestos
ramificados suelen eluir ms rpidamente que sus ismeros lineales
puesto que la superficie total se ve reducida.
Aparte de la hidrofobicidad de la fase inmvil, otras modificaciones de
la fase mvil pueden afectar la retencin del compuesto; por ejemplo,
la adicin de sales inorgnicas provoca un aumento lineal en la
tensin superficial, y como que la entropa de la interfase compuestodisolvente est controlada precisamente por la tensin superficial, la
adicin de sales tiende a aumentar el tiempo de retencin.
Otra variable importante es el pH puesto que puede cambiar la
hidrofobicidad del compuesto. Por este motivo, la mayora de
mtodos utilizan un tampn como el fosfato de sodio para controlar el
valor del pH. Estos tampones controlan el pH, pero tambin
neutralizan la carga o cualquiera resto de silica de la fase estacionaria
que haya quedado expuesta y actan como contraiones que
neutralizan la carga del compuesto. El efecto de los tampones sobre
la cromatografa puede variar, pero en general mejoran la separacin
cromatogrfica.
Las columnas de fase reversa se echan a perder con menor facilidad
que las columnas de silica normales. Aun as, muchas columnas de
fase reversa estn formadas por silica modificada con cadenas alquil
y no se deben utilizar nunca con bases en medio acuoso puesto que
stas podran daar el esqueleto de silica subyacente. Las columnas
se pueden utilizar en cidos en medio acuoso, pero no deberan estar
expuestas demasiado tiempo al cido porque puede corroer las partes
metlicas del aparato de HPLC.
Cromatografa de exclusin molecular: La cromatografa de
exclusin molecular, tambin conocida como cromatografa por
pg. 31
filtracin en gel, separa las partculas de la muestra en funcin de su
tamao. Generalmente se trata de una cromatografa de baja
resolucin de forma que se suele utilizar en los pasos finales del
proceso de purificacin. Tambin es muy til para la determinacin de
la estructura terciaria y la estructura cuaternaria de las protenas
purificadas.
La cromatografa de filtracin molecular es un mtodo de
cromatografa en columna por el cual las molculas se separan en
solucin segn su peso molecular, o ms precisamente, segn su
radio de Stokes.
En esta cromatografa, la fase estacionaria consiste en largos
polmeros entrecruzados que forman una red tridimensional porosa. A
los fines prcticos, las columnas se empaquetan con pequeas
partculas esferoidales formadas por esos polmeros entrecruzados.
En consecuencia, estas partculas son porosas, y el tamao de los
poros es tal que algunas molculas (las demasiado grandes) no
podrn ingresar a esos poros, en tanto que otras (las suficientemente
pequeas) podrn pasar libremente. Los poros quedan conectados
formando una malla o red, lo cual determina una serie de caminos a
ser recorridos por las molculas que acceden al interior de esta.
Cromatografa de intercambio inico:
En la cromatografa de intercambio inico, la retencin se basa en la
atraccin electrosttica entre los iones en solucin y las cargas
inmovilizadas a la fase estacionaria. Los iones de la misma carga son
excluidos mientras que los de carga opuesta son retenidos por la
columna. Algunos tipos de intercambiadores inicos son: i) Resinas de
poliestireno, ii) intercambiadores inicos de celulosa y dextranos
(geles) y iii) Silica porosa o vidrio de tamao de poro controlado. En
general los intercambiadores inicos favorecen la unin de iones
elevada carga y radio pequeo. Un incremento en la concentracin
del contrain (respecto a los grupos funcionales de la resina) reduce
el tiempo de retencin. Un incremento en el pH reduce el tiempo de
retencin en las cromatografas de intercambio catinico mientras
que una disminucin del pH reduce el tiempo de retencin en las
cromatografas de intercambio aninico. Este tipo de cromatografa es
ampliamente utilizado en las siguientes aplicaciones: purificacin de
agua, concentracin de componentes traza, Ligand-exchange
chromatography, Ion-exchange chromatography of proteins, High-pH
anion-exchange
chromatography
of
carbohydrates
and
oligosaccharides, etc.
Cromatografa basada en bioafinidad: Este tipo de cromatografa
se basa en la capacidad de las sustancias biolgicamente activas de
formar complejos estables, especficos y reversibles. La formacin de
pg. 32
estos complejos implica la participacin de fuerzas moleculares como
las interacciones
de
Van
der
Waals, interacciones
electrostticas, interacciones
dipolo-dipolo, interacciones
hidrofbicas y puentes de hidrgeno entre las partculas de la
muestra y la fase estacionaria.
Cromatografa lquida de alta eficacia en condiciones
desnaturalizantes (DHPLC): Se trata de un mtodo que se emplea
para el rastreo de mutaciones (ya casi totalmente en desuso debido
al auge de la secuenciacin), que permite detectar la presencia de
variaciones en el ADN aunque no se determinan especficamente
cules. En este caso, se utiliza la tcnica cromatogrfica para la
deteccin de heterodplex de ADN, en lugar de utilizar un gel para
correr las molculas de cidos nucleicos.
El procedimiento consiste en desnaturalizar (aumentando la
temperatura normalmente) una muestra que contenga tanto el ADN
problema como un ADN control, que no es ms que el mismo ADN
problema pero en su versin silvestre o normal (sin mutaciones).
Luego se procede a renaturalizar (disminuyendo la temperatura), de
manera que aquellas cadenas de ADN que vuelvan a unirse con sus
respectivas complementarias (cadena "a" silvestre con cadena "b"
silvestre; o bien cadena "a" mutante con cadena "b" mutante) no
presentarn diferencia con el estado original; sin embargo, si por
ejemplo una cadena "a" silvestre hbrida con una cadena "b" mutante,
aquella regin (ms o menos amplia) en la que exista mutacin no
complementar, formndose un bucle u horquilla, es decir, una regin
en la que las bases nitrogenadas no son complementarias y no
establecen las uniones caractersticas por puentes de hidrgeno en la
doble hlice de ADN. Dichas estructuras son los denominados
heterodplex (dplex de ADN hbridos). Estos heterodplex migran de
forma diferente a los homodplex en la columna de cromatografa de
fase reversa (al igual que lo hacen en un gel de agarosa o acrilamida).
La separacin se realiza en condiciones desnaturalizantes variables,
detectndose las molculas de ADN midiendo la absorbancia a 260
nm. Esto origina un pico de elucin a un tiempo caracterstico. A
medida que se incrementan las condiciones desnaturalizantes los
heterodplex migran por delante de los homodplex, apareciendo los
picos correspondientes a heterodplex antes en el grfico resultante,
el cromatograma. De esta manera, como los heterodplex se
desnaturalizan a temperaturas distintas a los homodplex, ambas
molculas dan lugar a picos de elucin distintos.
Previo al proceso inicial de desnaturalizacin se suele llevar a cabo
una PCR para la amplificacin del ADN molde en fragmentos de unas
150-450 pb.
pg. 33
Con este sistema pueden detectarse fcilmente sustituciones de una
base, inserciones o deleciones, con un coste reducido y de manera
rpida (aproximadamente 16 minutos).
PARMETROS:
DIMETRO INTERNO
El dimetro interno de una columna de HPLC es un aspecto crtico que
determina la cantidad de muestra que se puede cargar a la columna y
tambin influye en su sensibilidad. Las columnas de dimetro interno
ms grande (>10mm) se utilizan normalmente en la purificacin de
compuestos para su utilizacin posterior. En cambio, las columnas de
dimetro interno menor (4-5 mm) se utilizan en el anlisis
cuantitativo de las muestras, y se caracterizan por el aumento la
sensibilidad y la minimizacin del consumo de disolventes que
conllevan. Estas columnas se suelen denominar columnas de rango
analtico y normalmente estn asociadas a un detector UV-VIS.
Aparte, existen otros tipos de columnas, como las de tipo capilar, con
un dimetro inferior a 0.3 mm, utilizadas principalmente
en espectrometra de masas.
MEDIDA DE LAS PARTCULAS
La mayora de HPLC tradicionales se realizan con una fase
estacionaria unida al exterior de partculas esfricas de silica. Estas
partculas pueden tener diferentes medidas, siendo las de 5\mum de
dimetro las ms utilizadas. Partculas ms pequeas ofrecen una
mayor superficie y una mejor separacin, pero la presin que se
requiere por obtener una velocidad lineal ptima aumenta de forma
inversamente proporcional al cubo del dimetro de la partcula. Esto
significa que disminuir la medida de las partculas a la mitad,
aumentara la resolucin de la columna, pero a la vez, aumentara la
presin necesaria en un factor de ocho.
TAMAO DE PORO
Muchas fases estacionarias son porosas para proporcionar una mayor
superficie. Los poros pequeos proporcionan una mayor superficie
mientras que los poros de mayor medida proporcionan una cintica
mejor, especialmente para los compuestos de tamao ms grande;
por ejemplo, una protena que sea ligeramente ms pequea que el
tamao de los poros puede entrar, pero difcilmente saldr con
facilidad.
PRESIN DEL SISTEMA
pg. 34
La presin de las bombas es variable segn el modelo y fabricante,
pero su rendimiento se mide en su habilidad para generar un flujo
constante y reproducible. La presinpuede lograr valores de hasta
40 MPa (o unas 400 atmsferas). Los aparatos ms modernos de
HPLC incorporan mejoras para poder trabajar a presiones ms altas y,
por lo tanto, poder utilizar partculas de tamao ms pequeo en las
columnas
(<
2
micrmetros).
Estos
nuevos
aparatos,
denominados ultra performance liquid chromatography(UPLC) pueden
trabajar con valores de hasta 100 MPa de presin (unas 1000
atmsferas). (Hay que tener en cuenta que las siglas UPLC son una
marca registrada de Waters Corporation aunque a veces se utilizan de
forma general para designar este tipo de aparatos).
CROMATOGRAFA DE GASES
La cromatografa de gases es una tcnica cromatogrfica en la que la
muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil
de gas inerte. A diferencia de los otros tipos de cromatografa, la fase
mvil no interacta con las molculas del analito; su nica funcin es
la de transportar el analito a travs de la columna.
Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa
gas-slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta
ltima la que se utiliza ms ampliamente, y que se puede llamar
simplemente cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase
estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se produce
pg. 35
mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de
adsorcin, que no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de
cromatografa tenga aplicacin limitada, ya que la retencin del
analito sobre la superficie es semipermanente y se obtienen picos de
elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies
gaseosas de bajo peso molecular. La GLC utiliza como fase
estacionaria molculas de lquido inmovilizadas sobre la superficie de
un slido inerte.
La GC se lleva a cabo en un cromatgrafo de gases. ste consta de
diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin
de muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el
detector.
GAS PORTADOR
Diagrama de un cromatgrafo de gases

El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los
componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el
detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones:
Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra

como con la fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar...
El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con
el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como
el helio, argn, nitrgeno, hidrgeno o dixido de carbono, y la
eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector
empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o
empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y
del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de manmetros y
pg. 36
reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema
dedeshidratacin del gas, como puede ser un tamiz molecular.
Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un
primer manmetro se sita a la salida de la bala o generador del gas
y el otro a la entrada del cromatgrafo, donde se regula el flujo. Las
presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a
caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25
mL/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede
utilizar un rotmetro o un simple medidor de pompas de jabn, el cual
da una medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la
columna.
La pureza de los gases es sumamente importante, se requieren
niveles 4.5 o mayores es decir 99.995 % de pureza. Sin embargo,
debido al cuidado que se debe tener con la fase activa de la columna,
se hace completamente necesario la instalacin de trampas a la
entrada del Gas carrier, estas trampas obviamente tienen una
capacidad limitada, pero son importantsimas al momento de usar el
Cromatografo. Estas trampas evitan el ingreso de Hidrocarburos,
agua, CO entre otros.
SISTEMA DE INYECCIN DE MUESTRA
La inyeccin de muestra es un apartado crtico, ya que se debe
inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma
(como un "tapn de vapor") que sea rpida para evitar el
ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con
cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado emplea una
microjeringa (de capacidades de varios microlitros) para introducir el
analito en una cmara de vaporizacin instantnea. Esta cmara est
a 50 C por encima del punto de ebullicin del componente menos
voltil, y est sellada por una junta de goma de silicona septa
o septum.
pg. 37
Inyector de muestra para un GC

Si es necesaria una reproducibilidad del tamao de muestra inyectado
se puede usar una vlvula de seis vas o vlvula de inyeccin, donde
la cantidad a inyectar es constante y determinada por el tamao del
bucle de dicha vlvula.
Un muestreador automtico para emplear la tcnica de Espacio de

Cabeza o Head Space para GC (accesorio).
Si la columna empleada es rellena, el volumen a inyectar ser de
unos 20 L, y en el caso de las columnas capilares dicha cantidad es
menor, de 1 L, y dependiendo del tipo de columna capilar (ya que
existen columnas con distinto dimetro interno) es que si se utiliza
todo el volumen de muestra inyectado. Para obtener menor cantidad
de volumen, se utiliza un divisor de flujo (la inyeccin se conoce como
modo "Split") a la entrada de la columna que desecha parte del
analito introducido. Si se utiliza todo el volumen de muestra la
inyeccin es de tipo "Splitless". El modo Splitless, se emple ms para
pg. 38
determinar pequeas
ambientales).
cantidades
trazas
(determinaciones
volumen se multiplicar por mil. Es decir, un microlitro de agua

pasara a ser 1 mL de agua en gas, como el volumen del puerto de
inyeccin es limitado, se emplean split pulsado u otras
configuraciones para garantizar el ingreso adecuado de las muestras.
En caso de muestras slidas, simplemente se introducen en forma de
disolucin, ya que en la cmara de vaporizacin instantnea el
disolvente se pierde en la corriente de purga y no interfiere en la
elucin.
Segn las curvas de Van Demter (HEPT vs. Velocidad Lineal), el mejor
gas a usar en la columna cromatogrfica como portador de los
analitos es elhidrgeno, sin embargo dada su peligrosidad, es ms
usado como gas de encendido en el detector FID, junto con el aire.
Luego vienen, respectivamente, helio y nitrgeno.
El gas hidrgeno es el mejor carrier y los flujos que manejan los
cromatgrafos no son peligrosos, adems a la salida de estos
generalmente existen restrictores de llama que evitan la propagacin
de un posible incendio. Se puede recomendar el uso de hidrgeno
debido a, primero por su bajo precio respecto a los otros gases y por
la resolucin de los picos que se muestran en los cromatogramas.
La relacin para la ignicin entre hidrgeno y aire es de 4,1% para el
lmite inferior y del 74,8% para el superior a 101,3Kpa y 298K (Safety
Standard for Hydrogen and Hydrogen Systems, NASA), y se tiene que
estar en presencia de una chispa o zona de calentamiento alta (desde
520C).
COLUMNAS Y SISTEMAS DE CONTROL DE TEMPERATURA
En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de
relleno y las tubulares abiertas o capilares. Estas ltimas son ms
comunes en la actualidad (2005) debido a su mayor rapidez y
eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 60
metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice fundida
o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en
un horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicolidal con
longitudes de 10 a 30 cm, dependiendo del tamao del horno.
La temperatura es una variable importante, ya que de ella va a
depender el grado de separacin de los diferentes analitos. Para ello,
debe ajustarse con una precisin de dcimas de grado. Dicha
temperatura depende del punto de ebullicin del analito o analitos,
como tambin la mxima temperatura de funcionamiento de la
columna (fase estacionaria), y por lo general se ajusta a un valor igual
pg. 39
o ligeramente superior a l. Para estos valores, el tiempo de elucin
va a oscilar entre 2 y 30-40 minutos. Si tenemos varios componentes
con diferentes puntos de ebullicin, se ajusta la llamada rampa de
temperatura con lo cual sta va aumentando ya sea de forma
continua o por etapas. En muchas ocasiones, el ajustar correctamente
la rampa puede significar separar bien o no los diferentes analitos.
Es recomendable utilizar temperaturas bajas para la elucin ya que,

aunque a mayor temperatura la elucin es ms rpida, se corre el
riesgo de descomponer el analito. Se puede programar la rampa tanto
para aumentar como para disminuir la temperatura del horno para
que no haya solapamiento de los picos.
DETECTORES
El detector es la parte del cromatgrafo que se encarga de
determinar cundo ha salido el analito por el final de la columna. Las
caractersticas de un detector ideal son:
Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisin

cundo sale analito y cuando sale slo el gas portador. Tienen
sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito.
Respuesta lineal al analito con un rango de varios rdenes de
magnitud.
Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de salida.
Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo, desde
temperatura ambiente hasta unos 350-400 C, temperaturas
tpicas trabajo.
Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales de
analito debe dar salidas de seal iguales.
Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores
inexpertos.
Respuesta semejante para todos los analitos, o
Respuesta selectiva y altamente predecible para un reducido
nmero de analitos.
Algunos tipos de detectores:
Detector de ionizacin de llama (FID, Flame Ionization

Detector).
Detector de conductividad trmica (TCD, Thermical Conductivity
Detector).
Detector termoinico (TID, ThermoIonic Detector).
Detector de captura de electrones (ECD, Electrn-Capture
Detector).
pg. 40
Detector de emisin atmica (AED, Atomic Emission Detector).
Vista de un detector GC del tipo FID (desmontado).

Otros detectores minoritarios son el detector fotomtrico de
llama (PFD), empleado en compuestos como pesticidas e
hidrocarburos que contengan fsforo o azufre. En este detector se
hace pasar el gas eluido por una llama hidrgeno/oxgeno donde
parte del fsforo se convierte en una especie HPO, la cual emite a =
510 y 526 nm, y simultneamente el azufre se convierte en S2, con
emisin a = 394 nm. Dicha radiacin emitida se detecta con un
fotmetro adecuado. Se han podido detectar otros elementos, como
algunos halgenos, nitrgeno, estao, germanio y otros.
En el detector de fotoionizacin (PID), el gas eluido al final de la
columna se somete a una radiacin ultravioleta con energas entre
8,3 y 11,7 eV, correspondiente a una = 106-149 nm. Mediante la
aplicacin de un potencial a la celda de ionizacin se genera una
corriente de iones, la cual es amplificada y registrada.
COLUMNAS Y TIPOS DE FASES ESTACIONARIAS
COLUMNAS DE RELLENO:
Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de
vidrio, metal (inerte a ser posible como el acero inoxidable, nquel,
cobre o aluminio) o tefln, de longitud de 2 a 3 metros y un dimetro
interno de unos pocos milmetros, tpicamente de 2 a 4. El interior se
rellena con un material slido, finamente dividido para tener una
mxima superficie de interaccin y recubierto con una capa de
espesores entre 50 nm y 1 m. Para que puedan introducirse en el
horno, se enrollan convenientemente.
El material de relleno ideal consiste en pequeas partculas, esfricas
y uniformes, con una buena resistencia mecnica, para tener una
mxima superficie donde interaccionar la fase estacionaria y el
analito. La superficie especfica mnima ha de ser de 1 m/g. Como
todos los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas
temperaturas (~400 C) y humectarse uniformemente con la fase
pg. 41
lquida estacionaria durante el proceso de fabricacin. El material
preferido actualmente (2005) es la tierra de diatomeasnatural, debido
a su tamao de poro natural. Estas especies, ya extinguidas,
utilizaban un sistema de difusin molecular para tomar nutrientes del
medio y expulsar sus residuos. Por tanto, debido a que el sistema de
absorcin superficial del analito y la fase estacionaria es parecido, son
materiales especialmente tiles.
El tamao es crtico a la hora de darse el proceso de interaccin del
analito, y a menores tamaos la eficacia de la columna es mejor. Pero
existe el problema de la presin necesaria para hacer circular un
caudal estable de gas portador por la columna, ya que dicha presin
es inversamente proporcional al cuadrado del dimetro de dichas
partculas. As, el tamao mnimo para usar presiones mximas de
50 psi es de 250 a 149 m.
COLUMNAS CAPILARES
Las columnas capilares son de dos tipos bsicos: las de pared
recubierta (WCOT) y las de soporte recubierto (SCOT). Las WCOT son
simplemente tubos capilares donde la pared interna se ha recubierto
con una finsima capa de fase estacionaria. Las columnas SCOT tienen
en su parte interna una fina capa de material absorbente como el
empleado en las columnas de relleno (tierra de diatomeas) donde se
ha adherido la fase estacionaria. Las ventajas de las WCOT frente a
las SCOT es la mayor capacidad de carga, ya que en su fabricacin se
emplean mayores cantidades de fase estacionaria, al ser la superficie
de intercambio mayor. Por orden de eficacia, en primer lugar, estn
las WCOT, luego las SCOT y por ltimo las columnas de relleno.
Las columnas WCOT se fabrican a partir de slice fundida, conocidas
como columnas tubulares abiertas de slice fundida o FSOT. Estas
columnas se fabrican a partir de slice especialmente pura, sin apenas
contenido de xidos metlicos. Debido a la fragilidad inherente a este
material, en el mismo proceso de obtencin del tubo se recubre con
una capa de poliimida, de esta forma la columna puede enrollarse con
un dimetro de unos pocos centmetros. Estas columnas, con
propiedades como baja reactividad, resistencia fsica y flexibilidad,
han sustituido a las WCOT clsicas.
Las columnas FSOT tienen dimetros internos variables, entre 250 y
320 m (para columnas normales) y 150-200 m para columnas de
alta resolucin. Estas ltimas requieren menor cantidad de analito y
un detector ms sensible, al eluir menor cantidad de gas. Existen
asimismo columnas macrocapilares con dimetros de hasta 530 m,
pg. 42
que admiten cantidades de analito comparables a las de relleno, pero
con mejores prestaciones.
En estas columnas existe un problema debido a la absorcin del
analito sobre la superficie de la slice fundida, adsorcin debida a la
presencia de grupos silanol (Si-OH), los cuales interaccionan
fuertemente con molculas polares orgnicas. Este inconveniente se
suele solventar inactivando la superficie por sililacin con
dimetilclorosilano (DMCS). La absorcin debida a los xidos metlicos
se ve paliada en gran parte por la elevada pureza de la slice
empleada.
LA FASE ESTACIONARIA
Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida
inmovilizada son:
Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de
selectividad ) adecuados al analito.
Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria
debe ser al menos 100 C mayor que la mxima temperatura
alcanzada en el horno.
Baja reactividad.
Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la
elucin.
Existen como mucho una docena de disolventes con estas
caractersticas. Para elegir uno, debe tenerse en cuenta la polaridad
del analito, ya que a mayor polaridad del analito, mayor polaridad
deber tener la fase estacionaria. Algunas fases estacionarias
utilizadas actualmente (2005) son:
Polidimetilsiloxano,
fase
no
polar
de
uso
general
para hidrocarburos,
aromticos,
polinucleares, drogas, esteroides y PCB.
Poli(fenilmetildifenil)siloxano (10%
fenilo),
para
steres
metlicos
de
cidos
grasos, alcaloides, drogas y
compuestos halogenados.
Poli(fenilmetil)siloxano (50%
fenilo),
para drogas, esteroides, pesticidas y glicoles.
Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para aromticos clorados,
nitroaromticos, bencenos alquilsustituidos.
Polietilenglicol,sirve para compuestos polares, tambin para
compuestos
como glicoles, alcoholes, teres,
aceites
esenciales.
Poli(dicianoalildimetil)siloxano,
para
cidos
grasos
poliinsaturados, cidos libres y alcoholes.
pg. 43
Generalmente, en columnas comerciales, la fase estacionaria se
presenta enlazada y entrecruzada para impedir su prdida durante las
operaciones de elucin o lavado. De esta forma se obtiene una
monocapa adherida qumicamente a la superficie de la columna. La
reaccin implicada suele ser la adicin de un perxido al lquido a
fijar, inicindose una reaccin por radicales libres que tiene como
resultado la formacin de un enlace carbono-carbono que adems
incrementa su estabilidad trmica. Otra forma es la irradiacin
con rayos gamma.
El grosor de la pelcula vara entre 0,1 y 5 m; el grosor depende de
la volatilidad del analito. As, un analito muy voltil requerir una
capa gruesa para aumentar el tiempo de interaccin y separar ms
efectivamente los diferentes componentes de la mezcla. Para
columnas tpicas (dimetros internos de 0,25 o 0,32 mm) se emplean
grosores de 0,25 m, y en las columnas macrocapilares el grosor
sube hasta 1 m. El grosor mximo suele ser de 8 m.
ABSORCIN ATMICA
s un mtodo instrumental de la qumica analtica que permite medir
las concentraciones especficas de un material en una mezcla y
determinar una gran variedad de elementos. Esta tcnica se utiliza
para determinar la concentracin de un elemento particular
(el analito) en una muestra y puede determinar ms de 70 elementos
diferentes en solucin o directamente en muestras slidas utilizadas
en farmacologa, biofsica o investigacin toxicolgica.
La espectroscopia de absorcin atmica fue utilizada por vez primera
como una tcnica analtica, y los principios subyacentes fueron
establecidos en la segunda mitad del siglo XIX por Robert Wilhelm
Bunsen y Gustav
Robert
Kirchhof,
ambos
profesores
de
la Universidad de Heidelberg, Alemania.
pg. 44
La forma moderna de la espectroscopia de absorcin atmica fue
desarrollada en gran parte durante la dcada de 1950 por un equipo
de qumicos australianos. Fueron dirigidos por sir Alan Walsh en
la Commonwealth
Scientific
and
Industrial
Research
Organisation (CSIRO),
Divisin
de
Qumica
Fsica,
en Melbourne, Australia.
DESCRIPCIN
Es un mtodo de qumica analtica cuantificable que est basado en la
atomizacin del analito en matriz lquida y que utiliza comnmente un
nebulizador prequemador (o cmara de nebulizacin) para crear una
niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una
llama con una longitud de trayecto ms larga, en caso de que la
transmisin de energa inicial al analito sea por el mtodo "de llama".
La niebla atmica queda desolvatada y expuesta a una energa a una
determinada longitud de onda emitida ya sea por la llama susodicha,
o por una lmpara de ctodo hueco (Hollow Cathode Lamp o HCL)
construida con el mismo analito a determinar o una Lmpara de
Descarga sin Electrodo (Electrodeless Discharge Lamp o EDL).
Normalmente las curvas de calibracin no cumplen la ley de BeerLambert en su estricto rigor.
La temperatura de la llama es lo bastante alta como para que no
mueran los tomos de la muestra de su estado fundamental. El
nebulizador y la llama se usan para desolvatar y atomizar la muestra,
pero la excitacin de los tomos del analito se consigue con el uso de
lmparas que brillan a travs de la llama a diversas longitudes de
onda para cada tipo de analito.
En AA la cantidad de luz absorbida despus de pasar a travs de la
llama determina la cantidad de analito existente en la muestra. Hoy
da se utiliza frecuentemente una mufla de grafito (u horno de grafito)
para calentar la muestra a fin de desolvatarla y atomizarla,
aumentando la sensibilidad.
El mtodo del horno de grafito tambin puede analizar algunas
muestras slidas o semislidas. Debido a su buena sensibilidad y
selectividad, sigue siendo un mtodo de anlisis comnmente usado
para ciertos elementos traza en muestras acuosas (y otros lquidos).
Otro mtodo alternativo de atomizacin es el generador de hidruros.
ATOMIZACIN CON LLAMA
En un atomizador de llama la disolucin de la muestra queda
nebulizada mediante un flujo de gas oxidante mezclado con el gas
combustible y se transforma en una llama donde se produce la
atomizacin. El primer paso es la desolvatacin en el que se evapora
el disolvente hasta producir un aerosol molecular slido finamente
pg. 45
dividido. Luego la disociacin de la mayora de estas molculas
produce un gas atmico.
Como primer paso, naturalmente, es necesario obtener una disolucin
de la muestra, por ejemplo mediante fusin con perxidos o
por digestin cida.
TIPOS DE LLAMA
Combustible
Gas LP
Gas LP
Hidrgeno
Hidrgeno
Acetileno
Acetileno
Acetileno
Oxidante
Aire
Oxgeno
Aire
Oxgeno
Aire
Oxgeno
xido nitroso
Temperatura
1700-1900C
2700-2800C
2000-2100C
2550-2700C
2100-2400C
3050-3150C
2600-2800C
Vel. de Combustin
39-43
370-390
300-440
900-1400
158-266
1100-2480
285
ESTRUCTURA DE LLAMA: Las regiones ms importantes de la llama

son la zona de combustin primaria secundaria y zona interconal,
esta ltima es la zona ms rica en tomos libres y es la ms
ampliamente utilizada.
PERFILES DE TEMPERATURA: La temperatura mxima se localiza
aproximadamente 1 cm por encima de la zona de combustin
primaria
ATOMIZADORES DE LLAMA:
Un fotmetro de llama de laboratorio que se utiliza propano o butano

como gas de combustin
El aerosol formado por el flujo del gas oxidante, se mezcla con el
combustible y se pasa a travs de una serie de deflectores que
eliminan las gotitas que no sean muy finas. Como consecuencia de la
accin de estas, la mayor parte de la muestra se recoge en el fondo
de una cmara y se drena hacia un contenedor de desechos. El
pg. 46
aerosol, el oxidante y el combustible se queman en un mechero
provisto de una ranura de 1 mm o 2 de ancho por 5 o 10 mm de
longitud. Estos mecheros proporcionan una llama relativamente
estable y larga, estas propiedades aumentan la sensibilidad y la
reproducibilidad.
REGULADORES DE COMBUSTIBLES Y OXIDANTES: Los caudales
de oxidante y combustible constituyen variables importantes que
requieren un control preciso es deseable poder variar cada uno de
ellos en un intervalo amplio para poder encontrar experimentalmente
las condiciones ptimas para la atomizacin
CARACTERSTICAS
DEL
ATOMIZADORES DE LLAMA
FUNCIONAMIENTO
DE
LOS
SEAL DE SALIDA: La seal del detector aumenta al mximo

algunos segundos despus de la ignicin y cae rpidamente a cero
cuando los productos de atomizacin salen fuera.
ATOMIZACIN EN VAPOR FRO: La tcnica de vapor fro solamente
aplicable a la determinacin de mercurio ya que es el nico elemento
metlico que tiene una presin vapor apreciable a temperatura
ambiente.
FUENTES DE RADIACIN: Los mtodos analticos basados en la
absorcin atmica son potencialmente muy especficos, ya que las
lneas de absorcin atmica son considerablemente estrechas (de
0,002 a 0,0005 nm), y las energas de transicin electrnica son
especficas de cada elemento.
LMPARA
DE CTODO HUECO:
Una lmpara
de
ctodo
hueco consiste en un nodo de tungsteno y un ctodo cilndrico
cerradas hermticamente en un tubo de vidrio lleno con nen / argn
a una presin de 1 a 5 torr. El ctodo est constituido con el metal
cuyo espectro se desea obtener, o bien, sirve de soporte para una
capa de dicho metal. Una parte de estos tomos se excitan con la
corriente que pasa a travs de ellos y, de este modo, al volver al
estado fundamental emiten su radiacin caracterstica, los tomos
metlicos se vuelven a depositar difundiendo de nuevo hacia la
superficie del ctodo o hacia las paredes del vidrio. La configuracin
cilndrica del ctodo tiende a concentrar la radiacin en una regin
limitada del tubo metlico, este diseo aumenta la probabilidad de
que la redepositacin sea en el ctodo y no sobre la pared del vidrio.
INSTRUMENTOS DE HAZ SENCILLO: Consiste en una fuente de
ctodo hueco, un contador o una fuente de alimentacin de impulsos,
un atomizador, un espectrofotmetro sencillo de red de difraccin y
un detector.
pg. 47
El haz de luz proveniente de la fuente pasa directamente a travs de
todos los componentes del instrumento hasta llegar al detector.
INSTRUMENTOS DE DOBLE HAZ: Bsicamente consta de las
mismas partes que el sistema de haz sencillo, slo que el haz que
proviene de la fuente de ctodo hueco se divide mediante un
contador reflejante y un divisor de haz, una mitad pasa a travs de la
llama y la otra es enviada por un paso ptico interno. Los dos haces
se encuentran nuevamente en el mismo camino ptico mediante un
espejo semiplateado o recombinador antes de entrar al
monocromador.
MONOCROMADORES:
Existen
diversas
combinaciones
y
distribuciones de los componentes pticos dentro de un
monocromador que buscan optimizar la calidad del espectro
generado. Las ms comunes son las denominadas, prisma de Nicoll o
el de Litrow y Zcerny-Turner para sistemas convencionales con redes
de difraccin hologrficas. Tambin se estn comenzando a utilizar
monocromadores con redes Echelle.
DETECTORES: El detector es el dispositivo encargado de captar la
seal ptica proveniente del monocromador y transformarlo en una
seal electrnica capaz de ser convertida en un valor legible. El ms
comn es el fotomultiplicador, tubo de vaco provisto de placas
fotosensibles que recibe los fotones, los convierte en impulsos
electrnicos y multiplica hasta obtener la suficiente intensidad
elctrica. En aos reciente se estn utilizando tambin los detectores
de estado slido CCD, de alta sensibilidad asociados a los
monocromadores Echelle.
INTERFERENCIAS: Se producen cuando la absorcin o emisin de
una especie interferente se solapa o aparece muy prxima a la
absorcin o emisin del analito, de modo que su resolucin por parte
del monocromador resulte imposible. Las interferencias qumicas se
producen como consecuencia de diversos procesos qumicos que
ocurren durante la atomizacin y que alteran las caractersticas de
absorcin del analito. Dado que las lneas de emisin de las fuentes
de ctodo hueco son muy estrechas, es rara la interferencia debida a
la superposicin de las lneas; para que exista esta interferencia la
separacin entre las dos lneas tiene que ser menor a 0,1 . Algunos
instrumentos poseen Slit (rendija) y monocromadores muy finos que
pueden discernir en 0,1 nm de diferencia. Algunas matrices presentan
seal de ruido que se elimina con el background del instrumento
permitiendo resultados.
FORMACIN DE COMPUESTOS POCO VOLTILES: El tipo ms
comn de interferencia es el producido por aniones que forman
compuestos de baja volatilidad con el analito y reducen as su
pg. 48
velocidad de atomizacin lo que origina resultados menores a los
esperados.
TECNOLOGAS
PLASMA)
DERIVADAS,
ICP
(INDUCTIVELY
COUPLED
Actualmente las tecnologas de espectroscopia atmica tienden a

migrar de la "absorcin" AA a la "emisin".
Esta tecnologa se llama Espectroscopa de Emisin Atmica por
Plasma Acoplado Inductivamente (ICP por sus siglas en ingls), que
da uso a otros tipos de descargas elctricas, llamadas plasmas; estas
fuentes han sido usadas como fuentes de atomizacin / excitacin
para AA. Estas tcnicas incluyen el plasma inductivamente acoplado y
el plasma acoplado directamente.
NEUMTICA REQUERIDA
El plasma es generado por el gas argn en estado de ionizacin.
Adicionalmente puede requerir gas nitrgeno que es un carrier o gs
de purga para la ptica, y un gas de corte axial que es aire. El Gs
Argn debe ser 99.996 % mnimo de pureza y el gas de purga no
menos de un 99.999 % de pureza. El gs Argn fluye dentr del
equipo a razn de unos 20-25 L/min y el de purga a 5 L/min. El gs de
corte debe fluir a 25 L/min.
SISTEMA DE ENFRIAMIENTO
El acoplamiento se produce generando un campo magntico pasando
una elevada corriente elctrica de alta frecuencia a travs de una
espiral (RF Coil) de induccin enfriada con un sistema Chiller. El
ncleo del oscilador se calienta enormemente generando unas
6600 Btu/hora, esto requiere un sistema que mantenga el detector, el
inductor y el oscilador en temperaturas de -8 C. Adicionalmente la
temperatura ambiente debe ser de 222 C para evitar las
incomodas reiniciaciones cuando el oscdilador vara en 1 C su
temperatura de trabajo.
CARACTERSTICAS DE LA ANTORCHA PLASMTICA
El ICP permite analizar por efectos de ionizacin en elevadas
temperaturas de plasma (8000 K) inducido en campo magntico
de argn casi la totalidad del sistema peridico exceptuando sodio,
potasio y gases nobles. El generador de hidruros usado en
espectroscopia de AA no es necesario en esta tcnica, aunque
algunos espesctroscopista que desean trabajan a concentraciones
muy reducidas del orden de los microgramos lo usan.
NEBULIZADORES: La forma geomtrica de los nebulizadores usados
en ICP son diversos y dependen del fabricante, en general son
pg. 49
cmaras asociadas al sistema del inyector, y este esta solidario a la
antorcha plasmtica y operan por efecto Venturi cuando el gas argn
es introducido a gran velocidad por un tubo capilar. Las cmaras
spray pueden ser de vidrios (ciclnicas-Gemcone)) o de PVC (cmaras
tipo Scott o MEINHARD de flujo cruzado) dependiendo de la cantidad
de slidos disueltos que presente la matriz del analito.
Un equipo ICP Plasma.

FUNDAMENTOS
El fundamento del mtodo es analgicamente parecido a la tcnica
AA, el plasma recalentado es inducido en un campo magntico y se
forma una antorcha plasmtica que es espectroscpica ya sea axial o
radialmente.
Se puede generar un plasma acoplado por induccin al dirigir la
energa de un generador de frecuencia de ondas de radio hacia un
gas apropiado, comnmente argn ICP.
Este inductor genera rpidamente un campo magntico oscilante
orientado al plano vertical (axial o perpendicular) de la espiral. La
ionizacin del gas argn entrante se inicia con una chispa de la
llamada espiral de Tesla. Los iones resultantes y sus electrones
asociados luego interactan con el campo magntico fluctuante. Esto
genera energa suficiente para ionizar tomos de argn por excitacin
de choque.
Los electrones generados en el campo magntico son acelerados
perpendicularmente hacia la antorcha. A altas velocidades, los
cationes, aniones y electrones conocidos como corriente turbulenta
(Corriente de Eddy), colisionarn con los tomos de argn para
producir mayor ionizacin, lo que produce un gran aumento de
temperatura.
En 2 microsegundos, se crea un estado estable con alta densidad
electrnica. Se produce plasma en la parte superior de la antorcha. La
temperatura en el plasma vara entre 6000-10 000 K, usualmente
8000 K. Una larga y bien definida cola emerge desde la parte superior
pg. 50
de la antorcha. Esta antorcha de alta intensidad luminosa es la fuente
espectroscpica que permite la tcnica analtica. La misma contiene
todos los tomos del analito y los iones que fueron excitados por el
calor del plasma. Las ventajas analticas del ICP -Plasma Acoplado por
Induccin yace en su capacidad de analizar una gran cantidad de
analitos en un perodo corto con muy buenos lmites de deteccin
para la mayora de los elementos.
Los elementos pueden ser analizados en forma axial para bajos
lmites de concentracin, o radial para elevadas concentraciones. La
variante de anlisis axial est definida en el rea del ptico
perpendicular a la antorcha.
PTICA: El monocromador o sistema de sellos es parte de la
propiedad del constructor del equipo y su perfomance hace la
diferencia entre una y otra marca; pero en general, estos sistemas
que vienen sellados dentro de un habitculo cuentan con una serie de
espejos de transferencia ptica, que son los primeros elementos que
reciben los haces pticos de la antorcha. Estos son reflejados en
lentes colimadores que los desvan a un prisma que difracta en sus
respectivas longitudes de onda y luego pasan por rendijas y de ah
son recibidos por otro lente colimador que los enva al detector.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Luego de realizar el proceso de clarificacin, se procede a realizar el
proceso de nefelometra.
pg. 51
A continuacin, se toma muestras de cada botella vertiendo una
cantidad considerable en cada vaso de precipitado para empezar el
proceso de nefelometra.
Se ordenan las cubetas junto a

muestras.
las
Luego de tomar las muestras, se vierte 10ml de mosto en las

cubetas.
pg. 52
Se inicia el proceso de medicin; se limpia la cubeta en cada

medicin.
En la primera toma de medicin nos dio estos resultados (unidad de

medicin NTU).
pg. 53
Datos:
Testigo: 152 NTU
Bentonita: 169 NTU
Colapez: 153 NTU
Gelatina: 189 NTU
Clara de huevo: 258 NTU
En la segunda medicin:
Datos:
Testigo: 145 NTU
Bentonita: 159 NTU

Colapez: 145 NTU
Gelatina: 184 NTU
En la tercera medicin.
pg. 54
Datos:
Testigo: 135
Bentonita:
Colapez:
Gelatina: 188 NTU
NTU
159 NTU
144 NTU
Por ltimo se realiza el cuadro comparativo de las muestras y el

promedio de la medicin.
MUESTRA
TESTIGO
BENTONITA
COLAPEZ
GELATINA
CLARA DE
HUEVO
1 MEDICIN
152
169
153
189
258
NTU
NTU
NTU
NTU
NTU
2 MEDICIN
145
159
145
184
252
NTU
NTU
NTU
NTU
NTU
3 MEDICIN
135
159
144
188
263
NTU
NTU
NTU
NTU
NTU
PROMEDIO
DE LA
MEDICIN
144 NTU
162.33 NTU
147.33 NTU
187 NTU
257.67 NTU
pg. 55
CONCLUCIN
Llegamos a la conclusin de que los clarificantes de gelatina y colapez son
mucho ms efectivo que los dems. Tambin podemos decir que la manera
de aplicacin es ms sencilla lo que facilita en un proceso de clarificacin de
vinos.
El estudiante aprende a realizar mediciones del grado de turbidez de la
muestra mediante el nefelmetro y realizando en la prctica de laboratorio,
nos muestra que, mediante el mtodo de clarificacin, se puede realizar
mediciones por nefelometra segn el tipo de muestra sea el adecuado para
esta parte de la prctica y luego aplicarlo segn el grado de turbidez
adecuado para proseguir con los anlisis respectivos.
LINKOGRAFIA
pg. 56
http://www.elmundo.es/yodona/estaticas/especiales/2008/05/catadevi
nos/apartados/apartado_05.html
http://cpd.es/images/paginascursos/ev.pdf
http://www.magrama.gob.es/ministerio/pags/biblioteca/hojas/hd_1955
_23.pdf
http://www.monografias.com/trabajos100/clarificacion-del-vinoagentes-clarificacion/clarificacion-del-vino-agentes-clarificacion.shtml
http://www.vinopedia.tv/vino-paso-a-paso/vino-blanco/clarificacion/
http://urbinavinos.blogspot.pe/2011/03/clarificacion-del-vino_23.html
https://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_de_absorci
%C3%B3n_at
%C3%B3mica_(AA)#Caracter.C3.ADsticas_del_funcionamiento_
de_los_atomizadores_de_llama
https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf
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https://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_l
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https://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_onda#Medios_diferent
es_al_vac.C3.ADo
http://loveforbacteriology.blogspot.pe/2015/05/nefelometria-yturbidimetria.html
http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/ah833s15.htm
http://lauraucros.blogspot.pe/2014/10/turbidimetria.html
http://www.bmglabtech.com/es/tecnologico/modos-dedeteccion/nefelometria/
https://es.wikipedia.org/wiki/Nefelometr%C3%ADa
http://quimicabasica2014.blogspot.pe/2014/10/nefelometria-yturbidimetria.html
https://es.scribd.com/doc/54885577/Turbidimetria-y-Nefelometria
http://www.bioacademia.com.mx/miembros/tecnologia/0008.html
pg. 57

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INGENIERA ENOLGICA II

CAUSAS DEL ENTURBIAMIENTO

ENTURBIAMIENTOs DE ORIGEN BIOLGICO:

Para reconocer en un vino claro la posibilidad de que se presente este

ENTURBIAMIENTO LLAMADOS QUIEBRAS:

Quiebra Frrica o azul

Enturbiamiento por precipitacin de bitartrato

Enturbiamiento por insolubilizacin de la materia

COLA DE PESCADO O ICTIOCOLA

Disolver la gelatina con agua caliente, hasta conseguir una mezcla

Despus de haber mezclado la gelatina, se pasa a verter la mezcla en

Luego de haber vertido mezclado toda la muestra de mostos, se hace

Disolver el colapez con 2 ml de agua caliente, hasta conseguir una

Luego de haber disuelto el colapez, se mezcla con el mosto y luego se

Luego de obtener la mezcla de colapez y mosto, se pasa a vaciar a la

Luego de obtener la clara de huevo a punto de nieve, pesar en una

Verter el mosto en unvaso precipitado aadiendo la clara de huevo,

En un vaso precipitado echar la bentonita y aadir 10ml de agua y

Luego de haver realizado todo los procedimientos con los

En una fiola de 250ml verter el mosto hasta llegar al raz, y luego

Luego aadir al carbonato de sodio hidrogenado hasta que se sature,

Luego de que el burbujeo haya cecado y el se haya tornado un color

Una vez armado el equipo de destilacin, se pasara a calentar la

Una vez realizada la destilacin se toma la muestra y se llena en una

Nota: La muestra tiene 18 grados de alcohol.

el nmero de partculas suspendidas, su tamao, su forma.

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Donde v es la velocidad de propagacin de la onda. En el caso

MEDIOS DIFERENTES AL VACIO

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CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA

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