ACTIVIDAD ENZIMTICA

Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol
de sustrato en un minuto. La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena
(U/mg prot) o por mililitro de disolucin (U/ml).
Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la
cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal(kat). Como 1 mol son
106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106U. Esta unidad es muy grande, de
forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 109
kat).
Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el nmero de centros activos por molcula de enzima, las
medidas de actividad enzimtica permiten calcular el nmero de recambio del enzima, o sea, el nmero de
reacciones elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.
CINTICA ENZIMTICA

La cintica enzimtica estudia la velocidad de las

reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan informacin directa acerca del
mecanismo de la reaccin cataltica y de la especifidad
del enzima. La velocidad de una reaccin catalizada
por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya
que en muchos casos no es necesario purificar o
aislar el enzima. La medida se realiza siempre en
las condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad
de reaccin observada es la velocidad mxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin
de los productos o la desaparicin de los reactivos.

Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del

sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la
reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la
reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va
disminuyendo porque se va consumiendo el sustrato de la reaccin (Figura
de la derecha). Para evitar esta complicacin se procede a medir la
velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es
igual a la pendiente de la curva de avance a tiempo cero (Figura de la
derecha). De esta forma, la medida de v0 se realiza antes de que se consuma
el 10% del total del sustrato, de forma que pueda considerarse la [S] como
esencialmente constante a lo largo del experimento. Adems, en estas

condiciones no es necesario considerar la reaccin inversa, ya que la cantidad de producto formada es tan
pequea que la reaccin inversa apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de
velocidad.

Para estudiar la cintica enzimtica se mide el efecto de la

concentracin inicial de sustrato sobre la velocidad inicial de la
reaccin, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si
representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una grfica como la de la
Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequea, la velocidad inicial
es directamente proporcional a la concentracin de sustrato, y por
tanto, la reaccin es de primer orden. A altas [S]0, el enzima se
encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de
[S]0. En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es
mxima (Vmax).
La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten
(v0 frente a [S]0) es una hiprbola (Figura de la izquierda). La
Vmaxcorresponde al valor mximo al que tiende la curva experimental,
y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual la
velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.

Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es

ms sencillo utilizar la representacin doble
recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea recta.
Esta representacin doble recproca recibe el nombre
de representacin de Lineweaver-Burk (Figura de la
derecha). Es una recta en la cual:

La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede

calcular grficamente, los valores de KM y Vmax de un
enzima para diversos sustratos.