Como agem os

frmacos: aspectos

moleculares
Consideraes gerais 24

Alvos para a ao de frmacos 24

Protenas receptoras 27
Tipo 1 : canais inicos controlados por ligantes 30
Tipo 2: receptores acoplados protena G 33

Tipo 3: receptores ligados a quinases e receptores

correlatos 42

Tipo 4: receptores nucleares

45

Canais inicos como alvos de frmacos 48

Controle da expresso de receptores 5 1

Receptores e doenas 52

nvel bsico, com a inteno de que os estudantes

possam, se quiserem, pular ou ler por alto estes captulos
sem perder o fio da meada; no entanto, estamos
convictos de que a farmacologia de amanh estar
solidamente alicerada nos avanos da biologia celular
e molecular aqui discutidos.

ALVOS PARA A AO DE FRMACS

Os alvos proticos para a ao de frmacos sobre as clulas de
mamferos (Fig. 3.1) que so descritos neste captulo podem ser,
no geral, divididos em:
receptores

canais inicos

enzimas
molculas carregadoras (transportadoras).
A grande maioria dos frmacos importantes age sobre um ou
outro destes tipos de protena, mas existem excees. Por exemplo,

CONSIDERAES GERAIS
Neste captulo, passamos dos princpios gerais da ao
dos frmacos esboados no Captulo 2 para as
molculas que esto envolvidas no reconhecimento dos
sinais qumicos e na sua traduo em respostas
celulares. A farmacologia molecular tem avanado

rapidamente nos ltimos anos. Este novo conhecimento

no est apenas mudando nossa compreenso da ao
dos frmacos, est, tambm, abrindo muitas novas
possibilidades teraputicas, discutidas mais frente, em
outros captulos.
Em primeiro lugar, consideraremos os tipos de
protenas-alvo sobre as quais os frmacos agem.
A seguir, descreveremos as principais famlias de
receptores e canais inicos que foram reveladas por
clonagem e estudos estruturais. Por fim, discutiremos as
vrias formas de conexo receptor-efetor (mecanismos
de transduo de sinal) pelas quais os receptores so
acoplados regulao da funo celular. A relao
entre a estrutura molecular de um receptor e sua ligao
funcional a um tipo particular de sistema efetor o tema
principal. Nos prximos dois captulos veremos como
estes eventos moleculares alteram aspectos importantes
da funo celular uma base til para a compreenso
dos efeitos dos frmacos sobre organismos vivos
ntegros. Aprofundamos em mais detalhes do que o
necessrio para entender a farmacologia de hoje em

24

a colchicina (Cap. 1 4) interage com a protena estrutural tubulina,

enquanto alguns frmacos imunossupressores (p. ex., a ciclosporina, Cap. 14) ligam-se a protenas citoslicas conhecidas como

imunofilinas. Anticorpos teraputicos que agem sequestrando as

citocinas (mediadores proticos envolvidos na inflamao, Cap.
14) tambm so usados. Alvos para frmacos quimioteraputicos
(Caps. 45-5 1),onde a inteno suprimir os microrganismos inva
sores ou clulas cancergenas, incluem DNA e constituintes da
parede celular, assim como outras protenas.
Receptores
Os receptores (Fig. 3.1 A) so os elementos sensores no sistema
de comunicaes qumicas que coordenam a funo de todas as
diferentes clulas do organismo, sendo mensageiros qumicos os
vrios hormnios, transmissores e outros mediadores discutidos
na Seo 2. Muitos frmacos terapeuticamcnte teis agem ou
como agonistas ou como antagonistas, nos receptores de media
dores endgenos conhecidos. Alguns exemplos so dados na
Tabela 3. 1 . Na maior parte dos casos, o mediador endgeno foi
descoberto antes frequentemente muitos anos antes de o
receptor ter sido caracterizado farmacolgica e bioquimicamente, mas existem exemplos de receptores para molculas de frma
cos sintticos (p. ex., os benzodiazepnicos, Cap. 33; e as sulfonilurias, Cap. 26) para os quais ainda no foi identificado um
mediador endgeno. Os receptores so discutidos com mais
detalhes adiante (p. 27).

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Canais inicos1
Alguns canais inicos (conhecidos como canais inicos contro
lados por ligantes ou receptores ionotrpicos) incorporam um
receptor e se abrem apenas quando o receptor ocupado por um
agonista; outros (p. 48) so regulados por mecanismos diferen
tes, sendo particularmente importantes os canais inicos contro
lados por voltagem (p. 49). Em geral, os frmacos podem afetar
a funo do canal inico pela interao ou com o stio receptor
dos canais controlados por ligantes, ou com outras partes da
molcula do canal. A interao pode ser indireta, envolvendo
uma protena G e outros intermedirios (ver adiante), ou direta,
onde o prprio frmaco liga-se protena do canal e altera sua
funo. No caso mais simples, exemplificado pela ao de anes
tsicos locais no canal de sdio controlado por voltagem (Cap.
44), a molcula do frmaco obstrui o canal fisicamente (Fig.
3. IB), bloqueando a passagem de ons.
Exemplos de frmacos que se ligam a stios acessrios na prote
na do canal, e, assim, afetam seu mecanismo de comporta, incluem:

Direto

Mecanismos de i

w j

Agonista

transduo

Antagonista

Abertura/fechamen
to de canais inicos
Ativao/inibio

enzimtica

Modulao de
canais inicos
Transcrio
do DNA

Sem efeito

Mediadores endgenos bloqueados

CANAIS IONICOS

Bloqueadores

ri

Bloqueio da
permeao
Aumento ou
diminuio da

Moduladores

probabilidade
de abertura

frmacos vasodilatadores do tipo diidropiridina (Cap. 19),

que inibem a abertura dos canais de clcio tipo L (Cap. 4).
tranquilizantes benzodiazepnicos (Cap. 37). Estes frma
cos ligam-se a uma regio do complexo receptor de GABAcanal de cloreto (um canal controlado por ligantes; ver anteri
ormente) distinta do stio de ligao do GABA. Amaioria dos
benzodiazepnicos facilita a abertura do canal efetuada pelo
neurotransmissor inibitrio GABA (Cap. 33); entretanto,
sabe-se que alguns agonistas inversos tm efeito oposto, cau
sando ansiedade em vez de tranquilidade.
as sulfonilurias (Cap. 26) usadas no tratamento do diabetes,
que agem nos canais de potssio sensveis ao ATP das clulas
P, pancreticas aumentando, assim, a secreo de insulina.
Um resumo das diferentes famlias de canais inicos e suas fun
es dado adiante (p. 50).

ENZIMAS

Inibio da reao

Inibidor

normal

v
Falso
substrato

~"\

r O

Produo de
metablito anmalo
Produo de
frmaco ativo

Pr-frmaco

L
D

TRANSPORTADORES

9
Transporte
normal

1s

'

Enzimas
Vrios frmacos so direcionados para as enzimas (Fig. 3.1C),
como exemplificado na Tabela 3.1. Frequentemente, a molcula
do frmaco um substrato anlogo que age como um inibidor
competitivo da enzima (p. ex., o captopril, agindo sobre a enzi
ma conversora de angiotensina; Cap. 19); em outros casos, a liga
o irreversvel e no-competitiva (p. ex., a aspirina, agindo na
ciclooxigenase; Cap. 14). A imunofilina, qual se liga ciclosporina (ver anteriormente), apresenta atividade enzimtica de
isomerase que catalisa a isomerizao cis-trans dos resduos de
prolina em protenas, uma reao que importante ao possibili
tar que as protenas expressadas se dobrem corretamente. A ini
bio desta atividade enzimtica um dos mecanismos pelo qual
a ciclosporina causa imunossupresso. Os frmacos podem tam
bm agir comofalsos substratos, onde a molcula do frmaco
sofre transformaes qumicas, dando origem a um produto an
malo que perturba a via metablica normal. Um exemplo o fr
maco antineoplsico fluoruracila, que substitui a uracila como
intermedirio na biossntese das purinas, mas no pode ser con
vertido em timidilato, bloqueando, assim, a sntese do DNA e
impedindo a diviso celular (Cap. 5 1).
Deve ser mencionado, tambm, que os frmacos podem exi
gir degradao enzimtica para convert-los, de uma forma inativa, apr-droga (oupr-frmaco,Cap. 8), para a forma ativa. Os

Inibidor

Falso
substrato
Agonista/substrato normal

Q Antagonista/inibidor

Transporte
bloqueado

Acmulo de
composto anmalo
@ Produto anmalo

O Pr-frmaco

Fig. 3.1 Tipos de alvos para a ao de frmacos.

exemplos so dados na Tabela 8.3. Alm disto, como discutido no

Captulo 53, a toxicidade do frmaco frequentemente o resulta
do da converso enzimtica da molcula do frmaco para um
metablito reativo. No que concerne ao primria do frmaco,
isto um efeito colateral indesejvel, mas de enorme importn
cia prtica.

Molculas transportadoras
1

Os canais inicos e as propriedades eltricas que eles conferem s

clulas esto envolvidos em todas as caractersticas humanas que nos
distinguem das "pedras do campo". (Armstrong C M 2003
Voltage-gated K channels http://www.stke.org.)

O transporte de ions e pequenas molculas orgnicas atravs das

membranas celulares geralmente requer uma protena carrega
dora, visto que as espcies permanentes so, em geral, muito pola
res (i. e., insuficientemente lipossolveis) para penetrar nas

25

SEO 1

S PRINCPIOS GERAIS

Tabela 3.1 Alguns exemplos de alvos para a ao de frmacos3

Tipo de alvo

Captulo(s) para consulta

Efetores

Receptores
Receptor nicotnico da ACh

Agonistas
Acetilcolina
Nicotina

Antagonistas
Tubocurarina
a-Bungarotoxina

10

-adrenoceptor

Noradrenalina
Isoprenalina

Propranolol

11

Histamina (receptor H,)

Histamina

Mepiramina

18

Opiide (receptor (i)

Morfina

Naloxona

41

Dopamina (receptor D2)

Dopamina
Bromocriptina

Clorpromazina

35e38

Receptor de estrgeno

Etinilestradiol

Tamoxifeno

30

Trastuzumabe

55

Receptor do fator de crescimento epidrmico

Bloqueadores

Moduladores

Anestsicos locais
Tetrodotoxina

Veratridina

44

Canais de sdio dos tbulos renais

Amilorida

Aldosterona

24

Canais de clcio controlados por voltagem

Ctions divalentes (p. ex., Cd2t)

Diidropiridinas
Opiides

18 e 19
41

Canais de potssio sensveis ao ATP

ATP

Sulfonilurias

26

Canais de cloreto controlados por GABA

Picrotoxina

Benzodiazepnicos

33

Canais inicos
Canais de sdio controlados por voltagem

Enzimas

Inibidores

Acetilcolinesterase

Neostigmina

Falsos substratos
10
-

Ciclooxigenase

Aspirina

14

Enzima conversora da angiotensina

Captopril

19

HMG-CoAredutase

Sinvastatina

20

MonoaminaoxidaseA

Iproniazida

39

FosfodiesterasetipoV

Sildenafila

30

Diidrofolato redutase

Trimetoprima

46
14 e 51

47

Metotrexato
Timidinaquinase

Aciclovir

Protease do HIV

Saquinavir

Carregadores
Transportador de noradrenalina

Inibidores
Antidepressivos tricclicos
Cocana

47

Falsos substratos

39

Anfetamina
Metildopa

11 e53
11 e 42
19

Carregador de cidos fracos (tbulo renal)

Probenecida

24

Co-transportador Na+/K+/2CI" (ala de Henle)

Diurticos de ala

24

Bomba de prtons (mucosa gstrica)

Omeprazol

25

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Tabela 3.1 (cont.) Alguns exemplos de alvos para a ao de frmacos3

Tipo de alvo

Efetores

Captulo(s) para consulta

Outros
Imunofilinas

Ciclosporina

Tacrolimo

17
17

Colchicina
Taxol

17
50

Tubulins

HMG-CoA, 3-hidroxi-3-metilglutaril-coenzima A.
aCitam-se exemplos representativos, longe de ser uma lista completa. Outros alvos bioqumicos para frmacos usados em quimioterapia so discutidos nos Captulos 44-51 .

membranas lipdicas por si mesmas. Existem muitos exemplos

de tais carregadores (Fig. 3.1 D), incluindo aqueles responsveis
pelo transporte de glicose e aminocidos para dentro das clulas,
pelo transporte de ions e muitas molculas orgnicas pelo tbulo
renal, pelo transporte de Na+ e Ca2" para fora das clulas e pela
captao dos precursores de neurotransmissores (como a colina)
ou dos prprios neurotransmissores (como noradrenalina, 5hidroxitriptamina [5-HT], glutamato e peptdeos) pelos termi
nais nervosos. Os transportadores de aminas pertencem a uma
famlia bem definida estruturalmente, distinta dos receptores
correspondentes. Na maior parte dos casos, o transporte de mol
culas orgnicas est associado ao transporte de ons (geralmente
Na+), ambos na mesma direo (simporte) ou na direo oposta
i antiporte), como discutido no Captulo 24. As protenas trans
portadoras incorporam um stio de reconhecimento que as tor
nam especficas para uma espcie particular a ser transportada, e
estes stios de reconhecimento podem tambm ser alvos para fr
macos cujo efeito bloquear o sistema de transporte. Alguns
exemplos so dados na Tabela 3. 1 .

HMMMH

PROTENAS receptoras

SOLAMENTO E CLONAGEM DE RECEPTORES

Nos anos 1970, a farmacologia entrou em umanova fase quando
receptores, que at ento tinham sido entidades tericas,
; mearam a emergir como realidades bioqumicas em conse_ -ncia do desenvolvimento de tcnicas de marcao (Cap. 2),
- _e tomou possvel extrair e purificar o materialdo receptor. Este
todo foi usado com sucesso primeiramente no receptor nico- :co da acetilcolina (Cap. 7), onde foram aproveitadas duas
._~osidades naturais. A primeira foi que os rgos eltricos de
-rios peixes, como as raias ( Torpedo sp.) e enguias eltricas
r ectrophorus sp.), consistem em tecido muscular modificado
r - _ue a membrana sensvel, a acetilcolina, extremamente
- _-.iante, e esses rgos contm uma quantidade de receptores
_ :_;etilcolina muito maior que qualquer outro tecido. A segun:oi que o veneno das serpentes da famlia da cobra contm
reptdeos que se ligam com uma especificidade muito alta
receptores nicotnicos da acetilcolina. Estas substncias,
: - hecidas como a-toxinas, podem ser marcadas e usadas para
- : - ar o contedo do receptor em tecidos e extratos de tecidos.
conhecida a a-bungarotoxina, o componente principal

do veneno da krait listrada da Malsia (Bungarus multicinctus).2

O tratamento do tecido muscular ou eltrico com detergentes no
inicos torna solvel o receptor protico ligado membrana, e
pode ento ser purificado pela tcnica da cromatografia por afi
nidade. Mtodos similares tm sido atualmente utilizados para
purificar muitos receptores de hormnios e neurotransmissores,
assim como canais inicos, protenas transportadoras e outros
tipos de molculas-alvo.
Uma vez isoladas e purificadas as protenas receptoras, foi poss
vel analisar a sequncia de aminocidos de um pequeno trecho, per
mitindo que a sequncia de bases do RNAm fosse deduzida e que um
DNA completo fosse isolado, por mtodos de clonagem convencio
nais, comeando a partir de uma biblioteca de DNAc obtida de um
tecido-fonte rico no receptor de interesse. Os primeiros clones de
receptor foram obtidos dessa maneira, mas, mais tarde, a clonagem
por expresso e estratgias de clonagem baseadas na homologia de
sequncias, que no requerem isolamento e purificao prvios da
protena receptora, foram amplamente usadas. Assim, atualmente
algumas centenas de receptores de todas as quatro famlias estrutu
rais (ver adiante) foram clonados. Ligantes endgenos para muitas
destas molculas "receptor-smiles", identificadas por clonagem
gnica, so at agora desconhecidos, e tais molculas so descritas
como "receptores rfos".3 A identificao de ligantes para estes pre
sumidos receptores , via de regra, difcil. No entanto, existem exem
plos (p. ex., o receptor canabinide; Cap. 15) onde ligantes importan
tes foram vinculados a receptores at ento rfos, sendo provvel
que este grupo de receptores abandonados ainda revele muitos mais
receptores de significncia fisiolgica e teraputica.

Muitas informaes foram obtidas pela introduo,em linhagens

celulares, do DNA clonado que codifica receptores individuais,
produzindo, assim, clulas capazes de expressar os receptores
aliengenos em forma funcional. Tais clulas manipuladas per
mitem um controle muito mais preciso dos receptores expressos
do que seria possvel com clulas naturais ou tecidos intactos, e a
tcnica amplamente utilizada para estudar as caractersticas de
ligao e farmacolgicas dos receptores clonados.
2
A natureza teve o bom senso de manter esses peixes e serpentes
fortemente armados bem afastados. Ironicamente, a B. multicinctus
hoje uma espcie oficialmente em risco de extino, ameaada pela
procura de seu veneno pelos cientistas. A evoluo para a sobrevivncia
pode ir longe demais.

3Um termo singularmente dickensiano que parece inapropriadamente

condescendente, porque podemos assumir que estes receptores
desempenham papis definidos na sinalizao fisiolgica sua
"orfandade" reflete nossa ignorncia, no seu status.

27

SEO 1

3? PRINCPIOS GERAIS

r
1. Canais inicos
controlados por ligantes
(receptores ionotrpicos)

lons

in
Hiperpolarizao ou
despolarizao

3. Receptores
ligados a
quinases

2. Receptores acoplados
protena G

(metabotrpicos)

4. Receptores nucleares

lons

-ou
G

Alterao da
excitabilidade

-G-

ou

NCLEO

Segundos mensageiros

Fosforilao de
protena

Transcrio
de gene

Transcrio de gene
Liberao de CaJi

Fosforilao
de protena

Outro

Sntese de protena

Sntese de protena

Efeitos celulares

Efeitos celulares

\
Efeitos celulares

Efeitos celulares

........
v
----Escala de tempo

Milissegundos
Exemplos

Receptor nicotnico
daACh

Segundos

Horas

Horas

Receptores
de citocinas

Receptor de
estrgenos

Receptor
muscarnico
daACh

Fig. 3.2 Tipos de relao entre receptor e efetor. ACh, acetilcolina; E,enzima; G, protena G; R, receptor.

A clonagem de receptores revelou muitas variantes molecula

res (subtipos) dos receptores conhecidos, que no eram evidentes
nos estudos farmacolgicos. Isto produziu certa confuso taxonmica, mas a longo prazo a caracterizao molecular dos recepto
res essencial. Barnard, uma das maiores figuras em clonagem de
receptores, no se desanimou com a proliferao de subtipos
moleculares, entre os receptores que os farmacologistas pensa
ramj ter entendido. ElecitouToms de Aquino: "Modelos e sm
bolos tm seu final, paraque o rito mais novo esteja aqui". O mais
novo rito, Barnard afirmou com convico, era a biologia mole
cular. A anlise dos genomas humanos e de outros mamferos
sugere que muitas centenas de genes receptor-smiles esto pre
sentes, dos quais somente uma minoria at agora tem uma identi
dade farmacolgica. Agora que a maior parte dos genes foi clara
mente identificada, e o inventrio molecular completo estabeleci
do, a nfase voltou-se para a caracterizao farmacolgica dos
receptores e para a determinao das suas funes fisiolgicas.

TIPOS DE RECEPTOR
Os receptores evocam muitos tipos diferentes de efeitos celula
res. Alguns deles so muito rpidos, como aqueles envolvidos na

transmisso sinptica, operando dentro de milissegundos,

enquanto outros efeitos mediados por receptor, como os produzi
dos pelo hormnio da tireide ou por vrios hormnios esterides, ocorrem dentro de algumas horas ou dias. Existem tambm
muitos exemplos de escalas de tempo intermedirias as catecolaminas, por exemplo, geralmente agem em questo de segun
dos, enquanto muitos peptdeos levammais tempo para produzir

28

seus efeitos. De forma no surpreendente, muitos tipos diferen

tes de vnculos entre a ocupao do receptor e a subsequente res
posta esto envolvidos. Baseados na estrutura molecular e na
natureza desse vnculo (o mecanismo de transduo),

podemos
distinguir quatro tipos de receptores, ou superfamlias (Figs. 3.2
e 3.3 e Tabela 3.2).

Tipo 1: canais inicos controlados por ligantes (tambm

conhecidos como receptores ionotrpicos).4 So protenas
da membrana com estrutura similar a outros canais inicos, e
incorporam um stio de ligao ao ligante (receptor), geral
mente no domnio extracelular. Tipicamente, estes so os
receptores nos quais os neurotransmissores rpidos agem.
Exemplos incluem o receptor nicotnico da acetilcolina
(nAChR; Cap. 10); o receptor GABAa (Cap. 33); e receptores
de glutamato dos tipos NMDA,AMPAe cainato (Cap. 33).
Tipo 2: receptores acoplados protena G (GPCRs, G-protein-coupled receptors). So tambm conhecidos como
receptores metabotrpicos ou receptores que atravessam
7 vezes a membrana (heptaelicoidais). So receptores de
membrana que esto acoplados a sistemas efetores intracelu
lares por uma protena G (ver adiante). Eles constituem a

4Aqui, enfocando os receptores, consideramos os canais inicos

controlados por ligantes como exemplo de uma famlia de receptores.
Outros tipos de canais inicos so descritos mais adiante (p. 48).
Muitosdeles so tambm alvos de frmacos, embora no sejam
receptores no sentido estrito.

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Domnio de ligao

Tipo 1
Canais inicos
controlados

por ligantes
(receptores
ionotrpicos)

x4ou5

Revestimento
do canal

B
Tipo 2
Receptores
acoplados
protena G
(receptores
metabotrpicos)

Fig. 3.3 Estrutura geral de quatro

famlias de receptores. Os segmentos
retangulares representam regies hidrofbicas
a-helicoidais da protena compreendendo
aproximadamente 20 aminocidos, que
formam os domnios transmembrana dos
receptores. HTipo 1: canais inicos
controlados por ligantes. Muitos canais inicos
controlados por ligantes compreendem quatro
ou cinco subunidades do tipo mostrado, e o
complexo inteiro contm 16-20 segmentos
transmembrana circundando um canal inico
central. Outros tipos estruturais so
mostrados na Figura 3.16. 0 Tipo 2:
Receptores acoplados protena G. S Tipo
3: receptores ligados a quinases. A maior parte
dos receptores de fatores de crescimento
incorpora o domnio de ligao ao ligante e o
domnio enzimtico (quinase) na mesma
molcula, como aqui mostrado, enquanto os
receptores de citocinas no possuem um
domnio de quinase intracelular mas se
relacionam com molculas de quinases
citoslicas. Outras_variantes estruturais
tambm existem. IBJ Tipo 4: receptores
nucleares que controlam a transcrio
de genes.

Domnio de
acopla
mento
protena G

Domnio de ligao

Tipo 3
Receptores
ligados
a quinases

Domnio

cataltico

Tipo 4
Receptores

Domnio de ligao

nucleares

Domnio de ligao
ao DNA ("dedos
de zinco")

maior famlia,5 e incluem receptores para vrios hormnios e

transmissores lentos, por exemplo, o receptor muscarnico da
acetilcolina (mAChR; Cap. 10), receptores adrenrgicos
Cap. 11) e receptores de quimiocinas (Cap. 16).
Tipo 3: receptores ligados a quinases e correlatos.Este um
grande e heterogneo grupo de receptores de membrana res
pondendo principalmente a mediadores proticos. Apresen
tam um domnio extracelular de ligao de ligante conectado

Existem provavelmente mais de 1.000 GPCRs no homem,

apreendendo a grosso modo 3% do genoma. Acredita-se que cerca
- 1metadedeles sejam receptores de odor, envolvidos nas sensaes de
~_:o e paladar, sendo os demais receptores para mediadores
: - 1~genos conhecidos ou desconhecidos o suficiente para manter
:> rarmacologistas ocupados ainda por um bom tempo.

Domnios de ligao

a um domnio intracelular por uma hlice nica transmembra

na. Em muitos casos, o domnio intracelular de natureza
enzimtica (com atividade protena quinase ou guanilil-ciclase). Os receptores do tipo 3 incluem aqueles para a insulina e
para vrias citocinas e fatores de crescimento (Caps. 16 e 26);
o receptor para o fator natriurtico atrial (ANF, Caps. 18 e 19)
o principalexemplo do tipo da guanilil-ciclase. Os dois tipos
so muito semelhantes estruturalmente, embora seus meca

nismos de transduo sejam diferentes.

Tipo 4: receptores nucleares. So receptores que regulam a
transcrio gnica. O termo receptores nucleares um tanto
falho, pois alguns esto, na realidade, localizados no citosol e
migram para o compartimento nuclear, quando um ligante
est presente. Compreendem receptores para hormnios esterides (Cap. 28), hormnio da tireide (Cap. 29) e outros
agentes como o cido retinico e a vitamina D.

29

SEO 1

B PRINCPIOS GERAIS

Tabela 3.2 Os quatro tipos principais de receptores

Tipo 1: canais inicos
controlados por ligantes

Tipo 2: receptores acoplados

protena G

Tipo 3: receptores ligados

aquinases

Tipo 4: receptores
nucleares

Localizao

Membrana

Membrana

Membrana

Intracelular

Efetor

Canal inico

Canal ou enzima

Protenas quinases

Transcrio gnica

Acoplamento

Direto

Protena G

Direto

Via DNA

Exemplos

Receptor nicotnico da
acetilcolina, receptor GABAa

Receptor muscarnico da
acetilcolina, adrenoceptores

Insulina, fatores de crescimento,

receptores de citocinas

Receptores de

Organizao oligomrica de
subunidades circundando um
poro central

Estrutura dimrica ou monomrica

compreendendo sete hlices

Hlice transmembrana nica

ligando o domnio extracelular do
receptor ao domnio da quinase

Estrutura monomrica
com domnios de
ligao ao receptor e
domnios de ligao ao
DNA separados

Estrutura

transmembrana

intracelular

ESTRUTURA MOLECULAR DOS RECEPTORES

A organizao molecular de membros tpicos de cada uma dessas
quatro superfamlias de receptores mostrada na Figura 3.3.
Embora receptores individuais mostrem uma considervel varia
o da sequncia em regies particulares e os comprimentos dos
principais domnios intracelulares e extracelulares tambm
variem entre membros da mesma famlia, os modelos estruturais
gerais e as vias de transduo de sinal associadas so muito con
sistentes. A percepo de que apenas quatro superfamlias de
receptores fornecem uma slida base para interpretar o comple
xo conjunto de informaes sobre os efeitos de uma grande pro
poro dos frmacos at agora estudada foi um dos mais anima
dores desenvolvimentos na farmacologia moderna.

Heterogeneidade e subtipos de receptores

Considerando uma dada famlia de receptores, geralmente ocor
rem muitasvariedades moleculares, ou subtipos, com uma arquitetura similar, mascom diferenas significativas em suas sequn
cias, e frequentemente em suas propriedades farmacolgicas.6
Os receptores nicotnicos de acetilcolina so tpicos neste aspec
to; subtipos distintos ocorrem em diferentes regies do encfalo,
e estes diferem do receptor do msculo. Algumas das diferenas
farmacolgicas conhecidas (p. ex., sensibilidade a agentes blo
queadores) entre os receptores de acetilcolina do msculo e do
encfalo se correlacionam com diferenas especficas na sequn
cia; no entanto, at onde sabemos, todos os receptores nicotni
cos da acetilcolina respondem ao mesmo mediador fisiolgico e
produzem o mesmo tipo de resposta sinptica. Assim, a razo de
tantas variantes terem surgido ainda um enigma.
Boa parte das variaes na sequncia que levam diversidade dos
receptores aparece no nvel genmico, isto , diferentes genes do
origem a subtipos distintos de receptor. Uma variao adicional
decorre de um splicing alternativo do RNAm, que significa que um
nico gene pode dar origem a mais de uma isoforma de receptor.
Depois da traduo do DNA genmico, o RNAm normalmente con
tm regies no codificantes (introns) que so removidas pelo spli-

6Os receptores para 5-HT (Cap. 12) so atualmente os campees de

diversidade, com 14 subtipos clonados.

30

esterides

cing do RNAm antes de a mensagem ser traduzida em protena.

Dependendo da localizao dos stios de splicing, o mesmo pode
resultar na incluso ou deleo de uma ou mais regies codificantcs
do RNAm, dando origem a formas longas ou curtas da protena. Isto
uma importante fonte de variao, particularmente para os GPCRs
(Kilpatrick et ai, 1 999), que produz receptores com caractersticas de
ligao diferentes e diferentes mecanismos de transduo de sinal,
embora sua relevncia farmacolgica ainda esteja por ser esclareci
da. Outro processo que podeproduzir receptores diferentes, mas vin
dos do mesmo gene, a edio do RNAm, que envolve a substituio
anmala de uma base no RNAm por outra, de onde surge uma peque
na variao na sequncia de aminocidos do receptor.

Esta heterogeneidade molecular uma caracterstica de todos os

tipos de receptores na verdade das protenas funcionais em
geral. Novos subtipos e isformas de receptores esto continua
mente sendo descobertos, e atualizaes regulares do catlogo
so disponibilizadas (Alexander et ai. , 2004; IUPHAR Receptor
Database and Channel Compendium). Os problemas da classifi
cao, nomenclatura e taxonomia resultantes deste acmulo de
dados foram mencionados anteriormente (p. 28). Do ponto de
vista farmacolgico, onde nosso propsito entender frmacos
individuais e seus efeitos em organismos vivos, bem como
desenvolver frmacos melhores que os existentes, importante
que mantenhamos a farmacologia molecular em foco. O "novo
rito" provou-se revelador de muitas maneiras, masa grande com
plexidade de comportamentos das molculas significa que temos
um longo caminho antes de alcanar a utopia reducionista que a
biologia molecular promete. Quando chegarmos l, este livrovai
ser muito menor. Por enquanto, tentamos selecionar os princpios
gerais, sem nos perdermos em um aprofundamento excessivo
nos detalhes.
Descreveremos a seguir as caractersticas de cada uma das
quatro superfamlias de receptores.

TIPO 1:CANAIS INICOS

CONTROLADOS POR LIGANTES
ESTRUTURA MOLECULAR
Estas molculas tm traos estruturais em comum com outros
canais inicos, descritos na p. 50 (Ashcroft, 2000). O receptor
nicotnico da acetilcolina (Fig. 3.3A), o primeiro a ser clonado,

COMO AGEM OS FARMACOS: AGENTES MOLECULARES

foi estudado detalhadamente (Karlin, 1993). Ele composto de
quatro tipos diferentes de subunidades, chamadas a, (3, ye , cada
uma com um Mrde 40-58 kDa. As quatro subunidades mostram
uma marcante homologia na sequncia, e a anlise do perfil de
hidrofobicidade, que determina quais as sees da cadeia com
maior probabilidade de formar a-hlices que atravessam a membrana, sugere que elas esto inseridas na membrana como mos:rado na Figura 3.4. A estrutura pentamrica (cc2, p, y, 8) possui
dois stios de ligao para a acetilcolina, cada um na interface
entre uma das duas subunidades a e sua vizinha. Ambos devem
.igar-se a molculas de acetilcolina para que o receptor seja ati
rado. Este receptor suficientemente grande para ser visto em
eletromicrografia, e a Figura 3.4 mostra sua estrutura, com base
principalmente em estudos de difrao eletrnica de alta resolu
o (Unwin 1993, 1995; Miyazawa <?//., 2003). Cada subunidade atravessa a membrana quatro vezes, de modo que o canal com
preende no mnimo 20 hlices que atravessam a membrana cir
cundando um poro central.
Os dois stios de ligao da acetilcolina so dispostos nas pores
extracelulares das duas subunidades a. Uma das hlices transmembrana (M2) de cada uma das cinco subunidades forma o revestimento
do canal inico (Fig. 3.4). As cinco hlices M2 que formam o poro so
deformadas para dentro, a meiocaminho da espessura da membrana,
formando uma constrio. Quando as molculas de acetilcolina se
ligam, as subunidades a. rotacionam, fazendo com que os segmentos
M2 abaulados se afastem uns dos outros, promovendo assim a aber
tura do canal (Miyazawa et ai, 2003).

para seletivo para anions (tpico de receptores para transmissores ini

bitrios, tais como GABA). Outras mutaes afetam propriedades
como o mecanismo de comporta e a dessensibilizao de canais con
trolados por ligantes.
Receptores para alguns outros transmissores rpidos, como o recep
tor GABAA(Cap. 33), o receptor 5-HT3 (Cap. 12) e o receptor de glicina (Cap. 33), so organizados no mesmo padro, e alguns mostram
considervel homologia de sequncia com o receptor nicotnico da
acetilcolina; o nmero de subunidades que formam um receptor fun
cional varia um pouco, mas geralmente so quatro ou cinco. No
entanto, outros canais inicos controlados por ligantes tm uma
arquitetura um pouco diferente, na qual o poro constitudo com
alas, emvez de hlices transmembrana (p. 50), emcomum com mui
tos outros canais inicos (no controlados por ligantes). Os recepto
res de ATP do tipo P2x (Cap. 12) e os receptores de glutamato (Cap.
33), cujas estruturas aparecem na Figura 3.18, so deste tipo.

MECANISMO DE COMPORTA

O uso de mutagnese direcionada ao stio, que permite que pequenas

regies ou resduos nicos da sequncia de aminocidos sejam alte
rados, mostrou (Galzi & Changeux, 1994) que uma mutao de um
resduo crtico na hlice M2 modifica o canal, passando de seletivo
para ctions (portanto excitatrio no contexto da funo sinptica)

Os receptores deste tipo controlam os eventos sinpticos mais

rpidos do sistema nervoso, no qual um neurotransmissor age na
membrana ps-sinptica de um nervo ou clula muscular e
aumenta de modo transitrio sua permeabilidade pra certos
ons. A maior parte dos neurotransmissores excitatrios, como a
acetilcolina najuno neuromuscular (Cap. 10) ou o glutamato
no sistema nervoso central (Cap. 33), causa aumento na permea
bilidade ao Na+ e K+. Este efeito resulta em uma corrente de
entrada devida principalmente ao Na+, que despolariza a clula e
aumenta a probabilidade de gerao de um potencial de ao. A
ao do transmissor alcana um pico em uma frao de milissegundo, e geralmente decai dentro de poucos milissegundos. A
velocidade abrupta desta resposta significa que o acoplamento

Porode -0,7 nm de dimetro

6 nm

-xterior

Membrana

3 nm

Crtosol

2 nm

.1
a-Hlices formando a comporta
Fig. 3.4 Estruturado receptor nicotnico da acetilcolina (um tpico canal inico controlado por ligantes) em viso lateral ( esquerda) e transversal
a :-eita). As cinco subunidades do receptor (a2, p, y, 8) formam um agregado circundando um poro transmembrana central, cujo revestimento formado
:t os segmentos helicoidais M2de cada subunidade. Estes segmentos contm um predomnio de aminocidos carregados negativamente, o que torna o poro
s r eivo para ctions. Existem dois stios de ligao para acetilcolina na poro extracelular do receptor, na interface entre a subunidade a e as subunidades
:centes. Quando ocorre a ligao com a acetilcolina, as a-hlices entortadas ou se endireitam ou giram ese afastam, abrindo assim o poro do canal

Baseado em Unwin 1993, 1995).

SEO 1

9 PRINCPIOS GERAIS

entre o receptor e o canal inico direto, e a estrutura molecular

do complexo receptor-canal (ver anteriormente) est de acordo
com isto. Em contraste com outras famlias de receptores (ver
adiante), no h etapas bioqumicas intermedirias envolvidas
no processo de transduo.

cia (geralmente na forma de um espectro em que a potncia do rudo

do sinal posta em grfico como uma funo da frequncia) pode-se
calcular a durao mdia na qual um nico canal se mantm aberto
(tempo mdio de abertura). No caso da acetilcolina agindo na placa
terminal, a condutncia do canal de cerca de 20 picosiemens (pS),
que equivalente a um influxo de cerca de 107 ons por segundo atra
vs de um nico canal sob condies fisiolgicas normais, e o tempo
mdio de abertura de 1 -2 milissegundos. A magnitude da condutn
cia de um nico canal confirma que a permeao ocorre por um poro
fsico atravs da membrana, porque o fluxo de ons muito grande
para ser compatvel com um mecanismo transportador. A condutn
cia do canal produzida por diferentes agonistas similares acetilcoli
na a mesma, enquanto o tempo de vida mdio do canal varia.

Uma descoberta inesperada feita por Katz e Miledi em 1972 tor

nou possvel, pela primeira vez, estudar as propriedades de canais

controlados por ligantes individualmente pelo uso da anlise de

rudo. Estudando a ao daacetilcolinana placa terminal motora, eles
observaram que pequenas flutuaes aleatrias do potencialde mem
brana se superpunham despolarizao estvel produzida pela acetilcolina (Fig. 3.5). Estas flutuaes surgem porque, na presena de
um agonista, existe um equilbrio dinmico entre os canais inicos
abertos e fechados. Noestado de equilbrio, a taxa de abertura equili
bra a taxa de fechamento, mas de momento a momento o nmero de
canais abertos apresenta flutuaes aleatrias em torno da mdia.
Pela medida da amplitude destas flutuaes, a condutncia de um
canal inico nico pode ser calculada, e pela medida de sua freqiin-

O esquema simples mostrado na Figura 2.1 um modelo til do

mecanismo de comporta de um canal inico. A conformao R*,
representando o estado aberto do canal inico, supostamente a
mesma para todos os agonistas, explicando a observao de que a
condutncia do canal no varia. Cineticamente, o tempo mdio de
abertura determinado principalmente pela constante de velocidade
de fechamento, a,e esta variade um frmaco para outro. Como expli
cado no Captulo 2, um agonista de alta eficcia que ativa uma gran
de proporo de receptores por ele ocupados caracterizado por (3/a
1, enquanto que para um frmaco de baixa eficcia, p/a tem um
valor menor.
v

ACh

A tcnica de registros de patch clamp, desenvolvida por Neher e

Sakmann, permite que a diminuta corrente que flui atravs de um
nico canal inico seja medida diretamente (Fig. 3.6), e os resultados
confirmam plenamente a interpretao das propriedades do canal
baseada na anlise de rudo. Esta tcnica proporciona umaviso, nica
na biologia, do comportamento fisiolgico de molculas de protena
individuais em tempo real, e deu muitas novas percepes sobre as
reaes de comporta e as caractersticas de permeabilidade tanto dos
canais controlados por ligantes como dos canais controlados por vol
tagem (p. 49). O registro de um nico canal mostrou que muitos ago
nistas fazem canais individuais se abrirem em um ou mais dos vrios
nveis distintos de condutncia. No caso dos canais ativados por glutamato, parece que agonistas diferentes produzem diferentes confor
maes do receptor em associao com diferentes condutncias do
canal (Jin et al., 2003). A dessensibilizao dos canais inicos contro
lados por ligantes tambm envolve umou mais estados conformacio-

1nA
i

Controle

100 ms

Frequncia
de corte
42,5 HZ

10,-21-

10,-22-

10-23-

K jWV~
-1

10

I1

"M

100

Frequncia (Hz)

Fig. 3.5 Rudo induzido pela acetilcolina na placa

terminal motora da r. HRegistros da corrente da membrana
gravada em alto ganho sob clampeamento de voltagem (voltage clamp).
0 registro do rudo na parte superior foi gravado durante a aplicao da
acetilcolina (ACh) com uma micropipeta. O registro na parte inferior foi
obtido na ausncia de ACh; a falha no meio do rudo foi causada pela
liberao espontnea de uma certa quantidade de ACh do nervo motor.
0 componente estvel (DC) do sinal de ACh foi removido pela filtragem
eletrnica, deixando o sinal do rudo de alta frequncia. Espectro de
potncia do rudo induzido por ACh gravado em um experimento
semelhante ao mostrado anteriormente. 0 espectro calculado pela
anlise de Fourier e ajustado a uma curva terica (Lorentziana) que
corresponde ao comportamento esperado de uma nica populao de
canais, cujo tempo de vida varia aleatoriamente. A frequncia de corte
(,cut-off) (na qual a potncia metade do seu valor limitante de baixa
frequncia) permite que seja calculado o tempo devida mdia do canal.
(De: (A) Anderson C R, Stevens C F 1973 J Physiol 235: 655; (B)
Ogden D C et al. 1981 Nature 289: 596.)

32

P\'f

ita'j

k
3 pA

10 ms

Fig. 3.6 Canais inicos individuais operados por

acetilcolina na placa terminal motora de r, registrados
pela tcnica de clampeamento de voltagem {patch
clamp). Apipeta, que foi aplicada firmemente superfcie da
membrana, continha 10 (amol/LACh. As deflexes para baixo mostram
as correntes fluindo pelos canais inicos individuais na pequena rea de
membrana sob a ponta da pipeta. Em direo ao final do registro, dois
canais podem ser vistos abrindo-se simultaneamente. A condutncia e o
tempo mdio devida destes canais esto bem de acordo com as
estimativas indiretas da anlise de rudo (Fig. 3.5). (Cortesia de D
ColquhouneDCOgden.)

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

nais induzidos por agonistas adicionais. Estes achados impem algu
ma reviso do esboo simples da Figura 2.1, no qual representado,
somente umnico estado de abertura, R*,e so umexemplo da manei
ra pela qual o comportamento real dos receptores faz nossos modelos
tericos parecerem um tanto ultrapassados.

TIPO 2: RECEPTORES ACOPLADOS

PROTENA G
A grande famlia dos GPCR engloba muito dos receptores que
so familiares aos farmacologistas, como o mAChRs, adrenoceptores, receptores de dopamina, receptores 5-HT, receptores
opiides, receptores para muitos peptdeos, receptores de purinas e muitos outros, incluindo os quimiorreceptores envolvidos
no olfato e na deteco de feromnios e tambm muitos recepto
res "rfos" (Pierce et al., 2002). Para a maioria deles, os estudos
farmacolgicos quantitativos realizados com diferentes agonis
tas e antagonistas revelaram a existncia de vrios subtipos.
Muitos GPCRs foram clonados, revelando um padro notavel
mente coerente de sua estrutura molecular.
Muitos neurotransmissores, com exceo dos peptdeos,
podem interagir tanto com os GPCRs quanto com os canais con
trolados por ligantes, permitindo que a mesma molcula produ
za uma ampla variedade de efeitos. Por outro lado, os hormnios
peptdeos individuais geralmente agem quer sobre os GPCRs
quer sobre os receptores ligados a quinases (ver adiante), porm
raramente sobre ambos, e uma escolha semelhante se aplica a
vrios ligantes que atuam sobre os receptores nucleares.7
O genoma humano inclui genes que codificam cerca de 400
GPCRs (excluindo os receptores de odor; Bem-Shlomo et al.,
2003). GPCRs constituem a classe nica mais comum de alvos
para frmacos teraputicos, e acredita-se que vrios alvos pro
missores para tais frmacos ainda devem ser identificados. Para
uma breve reviso, ver Hill (2006).

ESTRUTURA MOLECULAR
O primeiro GPCR a ser totalmente caracterizado foi o receptor (3adrenrgico (Cap. 11) que foi clonado em 1986. Subsequen
temente, a biologia molecular alcanou muito rapidamente a far
macologia, e a maioria dos receptores que foram identificados
por suas propriedades farmacolgicas est agora clonada. O que
parecia ser revolucionrio em 1986, agora considerado lugar
comum, e atualmente qualquer aspirante a receptor tem que ser
clonado antes de ser levado a srio.
Os receptores acoplados protena G consistem em uma
inica cadeia polipeptdica de at 1.100 resduos cuja anatomia
cerai apresentada na Figura 3.3B. Sua estrutura caracterstica
.empreende sete a-hlices transmembrana, semelhantes quelas
cos canais inicos discutidos anteriormente, comum domnio N.erminal extracelular de tamanho varivel e um domnio C-terrninalintracelular. Os GPCRs so divididos em trs famlias dis::ntas (Schwartz, 1 996). Existe uma considervel homologia de
- rquncia entre os membros de uma famlia, ao passo que no h
cenhuma homologia entre diferentes famlias. Eles compartinam a mesma estrutura de sete hlices (hepta-helicoidal), porm

Entretanto os exemplos de promiscuidade esto aumentando. Os

- rmnios esterides, normalmente fiis aos receptores nucleares,
--.eragem ocasionalmente com canais inicos e outros alvos
kenstein et al, 2000) e alguns eicosanides agem nos receptores
- :"eares bem como nos GPCRs. A natureza tem a mente muito aberta,
~ r-ora tais exemplos sejam responsveis por deixar os farmacologistas
ecidos e os estudantes em desespero.

Canais inicos regulados por ligantes

So chamados s vezes de receptores ionotrpi-

cos.
Esto envolvidos principalmente na transmisso sinptica

rpida.
Existem vrias famlias estruturais, sendo a mais comum a
organizao heteromrica de quatro ou cinco subunida
des, com hlices transmembrana dispostas em torno de
um canal central aquoso.
A ligao do ligante e a abertura do canal ocorrem em uma
escala de tempo de milissegundos.
Os exemplos incluem os receptores nicotnicos da
acetilcolina, do GABA tipo A(GABAa), e da
5-hidroxitriptamina tipo 3 (5-HT3).

diferem em outros aspectos, principalmente no comprimento da

extremidade N-terminal extracelular e na localizao do dom
nio de ligao do agonista (Tabela 3.3). A famlia A de longe a
maior, compreendendo a maioria dos receptores paraNnonoaminas, neuropeptdeos e quimiocinas. Afamlia B inclui receptores
para alguns outros peptdeos, como a calcitonina e o glucagon
(Cap. 14). A famlia C a menor; seus principais membros so os
receptores metabotrpicos para glutamato e GABA (Cap. 33) e
os receptores sensveis ao Ca2+(Cap. 31).8
A compreenso da funo deste tipo de receptor deve muito
ao estudo de uma protena estreitamente relacionada, a rodopsina, que responsvel pela transduo nos bastonetes retinianos.
Esta protena abundante na retina, e seu estudo muito mais
fcil do que o das protenas receptoras (que no so abundantes);
construda em um plano idntico ao mostrado na Figura 3.3 e
tambm produz uma resposta no bastonete (hiperpolarizao,
associada inibio da condutncia ao Na+) atravs de um meca
nismo envolvendo uma protena G (ver adiante). A diferena
mais bvia que a resposta produzida por um fton, e no por
uma molcula de agonista. Com efeito, a rodopsina pode ser con
siderada uma protena que incorpora sua prpria molcula de
agonista, chamada retinal, que sofre isomerizao da forma trans
(inativa) para a forma eis (ativa) quando absorve um fton.
Experimentos de mutagnese direcionada dirigida a stios
mostram que a terceira ala citoplasmtica longa a regio da
molcula que se acopla protena G pois a deleo ou a modifi
cao desta poro resulta em receptores que at se ligam a ligan
tes, mas que so incapazes de se associar s protenas G oude pro
duzir respostas. Em geral, um determinado subtipo de receptor
acopla-se seletivamente a uma protena G em particular, e trocan
do partes da ala citoplasmtica entre diferentes receptores alte
ra sua seletividade pela protena G.
Para pequenas molculas, como a noradrenalina, o domnio
da ligao ao ligante est inserido na fenda entre os segmentos

sO receptor sensor de Ca2+ (Conigrave et al., 2000) um GPCR

incomum que ativado no pelos mediadores convencionais, mas sim
pelo Ca2+ extracelular, na faixa de 1 a 10 mM uma afinidade
extremamente baixa, em comparao com outros agonistas de GPCRs.
Esse receptor expresso em clulas da glndula paratireide e tem por
funo regular a concentrao de Ca2+ extracelular atravs do controle
da secreo do paratormnio (Cap. 31). Este mecanismo homeosttico
bastante distinto dos mecanismos de regulao do Ca2+ intracelular
discutidos no Captulo 4.

33

SEO 1

S PRINCPIOS GERAIS

Tabela 3.3 Famlias de receptores acoplados protena Ga

Famlia

Receptores0

Caractersticas estruturais

A: famlia da rodopsina

0 maior grupo. Receptores para a maioria dos

neurotransmissores aminados, muitos neuropeptdeos,
purinas, prostanides, canabinides etc.

Cauda extracelular (N terminal) curta.

0 ligante liga-se a hlices transmembrana (aminas)
ou a alas extracelulares (peptdeos).

B: famlia dos receptores de

secretina/glucagon

Receptores para hormnios peptdicos, incluindo

secretina, glucagon, calcitonina.

Cauda extracelular intermediria incorporando o

domnio de ligao ao ligante.

C: famlia do receptor metabotrpico

de glutamato/ sensor de clcio

Grupo pequeno. Receptores metabotrpicos de

glutamato, receptores GABAb, receptores sensveis
ao Ca2t.

ligao ao ligante.

Cauda extracelular longa incorporando o domnio de

aUma quarta famlia distinta inclui muitos receptores para ferormnios, mas nenhum receptor farmacolgico.

6Para listas completas, ver http://www.iuphar-db.org.

a-helicoidais dentro da membrana (Fig. 3.3B), similar ao espao

ocupado pelo retinal na molcula de rodopsina. Os ligantes peptdicos, tais como a substncia P (Cap. 16), ligam-se mais super
ficialmente s alas extracelulares, como mostrado na Figura
3.3B. Atravs de experimentos de mutagnese em stio nico,
possvel mapear o domnio de ligao ao ligante destes recepto
res, com a expectativa de que, em breve, possa ser possvel projetar ligantes sintticos com base no conhecimento da estrutura
do stio receptor um importante marco para a indstria farma
cutica, que tem contado, at agora, principalmente com a estru
tura de mediadores endgenos (como a histamina) ou de alcali
des vegetais (como a morfina) como fonte de inspirao qumi
ca.9 At agora, os GPCRs no podem ser obtidos na forma crista
lina, de modo que a poderosa tcnica de cristalografia de raios X
ainda no pode ser utilizada para definir em detalhes a estrutura
molecular destes receptores. At que chegue este momento, o
planejamento de novos ligantes GPCRs vai permanecer sendo
uma questo de tentativa-e-erro.

MECANISMOS ALTERNATIVOS DE ATIVAO

DOS RECEPTORES
Embora a ativao dos GPCRs seja normalmente a consequncia
da ligao com um agonista, ela tambm pode ocorrer atravs de
outros mecanismos.A rodopsina, mencionada anteriormente, ativada por isomerizao cis-trans do retinal pr-ligado,induzida pela luz.
Outro exemplo dos receptores ativadospor protease (PARs,protease-activated receptors), dos quais quatro j foram identificados
(Vergnolle et al., 2001). Muitas proteases, como a trombina (uma
protease envolvida na cascata da coagulao sangunea, Cap. 21), ativam os PARs removendo a extremidade da cauda N-terminal extracelular do receptor (Fig. 3.7). Os resduos expostos N-terminais ento
se ligam aos domnios do receptor nas alas extracelulares, funcio
nando como um "agonista aprisionado". Receptores deste tipo ocor
rem em vrios tecidos (Ossofskaya & Bunnett, 2004; Vergnolle,
2004) e parecem desempenhar um papel na inflamao e em outras
respostas a leses de tecido, onde proteases teciduais so liberadas.
Um receptor da famlia dos PARs, o PAR-2, ativado por uma pro
tease liberada de mastcitos, e expresso em neurnios sensoriais.

9Muitos compostos importantes nos ltimos anos originaram-se a partir

da triagem de enormes bibliotecas qumicas (Cap. 56). Nenhuma
inspirao necessria, apenas ensaios consistentes, grandes
computadores e uma robtica eficiente.
34

Acredita-se que ele desempenha umpapel na dor da inflamao (Cap.

41). Uma consequncia deste tipo de ativao que o receptor pode
ser ativado somente uma vez, por que a clivagem no pode ser
tida, de onde h necessidade de ressntese contnua da protena recep
tora. A inativao ocorre por dessensibilizao, envolvendo fosforilao (ver adiante), quando o receptor ento internalizado e degra
dado, sendo substitudo por uma protena recm-sintetizada.

rever

Vrios estados patolgicos foram descritos (ver adiante), que esto

associados tanto a mutaes espontneas do receptor que resultam
em uma ativao constitutiva dos receptores quanto produo de
auto-anticorpos dirigidos contra o domnio extracelular dos recepto
res, que mimetizam o efeito dos agonistas.

Protenas G e sua funo

As protenas G englobam uma famlia de protenas residentes na
membrana cuja funo reconhecer os GPCRs ativados e trans
mitir a mensagem para os sistemas efetores que geram uma res
posta celular. Elas representam o nvel de coordenao interme
diria na hierarquia organizacional, intervindo entre os receptores
como diligentes oficiais atentos ao mnimo sinal de seu agente
qumico preferencial e as enzimas efetoras ou canais inicos
a brigada de soldados rasos que executam o trabalho sem precisar
saber qual hormnio autorizou o processo. Elas so as protenas
"de meio-campo", que na realidade foram denominadas protenas
G devido sua interao com os nucleotdeos guanina, GTP e
GDP Para informaes mais detalhadas sobre a estrutura e as fun
es das protenas G, ver as revises de Offermanns (2003) e
Milligan e Kostenis (2006). As protenas G consistem em trs
subunidades: a, P e y (Fig. 3.8). Os nucleotdeos guanina ligamse subunidade a, que tem atividade enzimtica, catalisando a
converso do GTP a GDP. As subunidades p ey permanecem uni
das naforma de um complexo py. Todas as trs subunidades ficam
ancoradas membrana atravs de uma cadeia de cidos graxos
acoplada protena G por meio de uma reao conhecida como
prenilao. As protenas G parecem ser livremente difusveis no
plano da membrana, por conseguinte, um nico conjunto de pro
tenas G em uma clula pode interagir com vrios receptores e efe
tores diferentes, de uma maneira essencialmente promscua. No
estado de "repouso" (Fig. 3.8), a protena G aparece como um trmero aPy no ligado, com o GDP ocupando o stio na subunidade
a. Quando um GPCR ativado por uma molcula agonista, ocor
re uma mudana conformacional envolvendo o domnio citoplasmtico do receptor (Fig. 3.3B), levando-o a adquirir uma alta afi
nidade para apy. A associao de apy com o receptor fora a dis-

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Agonista preso
Clivagem pela trombina

Fragmento
liberado

Fosforilao

INATIVO

DESSENSIBILIZADO

ATIVO

Fig. 3.7 Ativao do receptor de trombina pela clivagem proteoltica do domnio N-terminal extracelular. Ainativao ocorre por fosforila
o. A recuperao requer nova sntese do receptor.

Estado de repouso

Receptor

Receptor ocupado por um agonista

Alvo
1

py

GDP

Inativo

Alvo
2

Alvo

Inativo

Inativo

m
iOj_

o
p
GDP

Alvo

157

Inativo

GTP

Protenas-alvo

GTP hidrolisado

Alvo
1
Ativo

a
GDP

ativadas

Py

Alvo

Alvo

a
GTP

Mjk

t .: $E

py

Alvo
2

Ativo

Fig. 3.8 A funo da protena G. A protena G consiste em trs subunidades (a, p, y) que esto ancoradas membrana atravs de resduos de
:ideos fixos. 0 acoplamento da subunidade aa um receptor ocupado por um agonista promove a troca do GDP ligado pelo GTP intracelular; o complexo
aGTP ento se dissocia do receptor e do complexo (3ye interage com uma protena-alvo (alvo 1, que pode ser uma enzima, como a adenilato ciclase, ou um
sanai inico). 0 complexo py pode ativar tambm uma protena-alvo (alvo2). A atividade GTPase da subunidade a aumenta quando a protena-alvo ligada,
esultando em hidrlise do GTP ligado para GDP, fazendo com que a subunidade a se rena com Py.

: ::ao do GDP ligado e sua substituio por GTP (permuta

3-DP-GTP), o que, por sua vez, causa a dissociao do trmero da
::::ena G liberando as subunidade a-GTPe Py; estas so as for"ativas" da protena G, que se difundem na membrana e
: iem se associar a diversas enzimas e canais inicos, causando
i_:ivao do alvo (Fig. 3.8). Pensava-se originalmente que
ente a subunidade a tinha funo sinalizadora, e o complexo

Py serviria apenas como uma "acompanhante" (chaperona) que

manteria as subunidades a soltas fora do alcance das vrias pro
tenas efetuadoras que, de outro modo, seriam por elas excitadas.
No entanto, os complexos py naverdade tm suas prprias atribui
es, e controlam efetores de modo muito semelhante aos das
subunidades a (Clapham & Neer, 1997). Emgeral, pareceque so
necessrias maiores concentraes de complexo Py do que de

35

SEO 1

!? PRINCPIOS GERAIS

Tabela 3.4 Os principais subtipos de protena G e suas funes'

Receptores associados

Efetores principais

Notas

Gas

Muitos receptores para aminas e outros

(p. ex., catecolaminas, histamina,
serotonina)

Estimula a adenilil-ciclase, aumentando a

formao de AMPc.

Ativadas pela toxina do clera,

que bloqueia a atividade GTPase,
impedindo assim a inativao.

Gai

Igual e tambm receptores para

opiides e canabinides a Gcj

Inibe a adenilil-ciclase, diminuindo a

formao deAMPc.

Bloqueadas pela toxina pertussis,

que impede a dissociao do
complexo apy.

Ga,,

Igual e tambm receptores para

opiides e canabinides a Gcc,

?Efeitos limitados da subunidade a

(os efeitos devem-se principalmente s
subunidades py).

Bloqueada pela toxina pertussis.

Ocorre principalmente no sistema
nervoso.

Gttq

Receptores de aminas, peptdeos

e prostanides

Ativa a fosfolipase C, aumentando a

produo dos segundos mensageiros
inositol trisfofato e diacilglicerol (p. 38)

Subunidades G|3y

Todos os GPCRs

Igual s subunidades Ga (ver anteriormente),

e tambm:
ativam canais de potssio
inibem canais de clcio controlados por
voltagem
ativam as GPCR quinases (p. 40)
ativam a cascata de protenas quinases
ativadas pormitgenos.

Muitas isoformas de G(3y

identificadas, mas as funes
especficas ainda noso conhecidas
Os efeitos mediados por GfSy
provavelmente requerem nveis mais
altos de ativao de GPCR do que os
efeitos mediados por Ga.

Subtipos

Subunidades Ga

GPCR, receptor acoplado protena G (G-protein-coupled receptor).

sEsta tabela lista apenas as isoformas de maior significncia farmacolgica. Muitas outras foram identificadas, e algumas tm funes no olfato, paladar, transduo visual e outras
funes fisiolgicas (Offermanns, 2003).

subunidades a, logo os efeitos mediados por (3y ocorrem a nveis

maiores de ocupao do receptor do que os efeitos mediados por
a. A associao das subunidades a com enzimas-alvo pode cau
sar ativao ou inibio, dependendo de qual protena G esteja
envolvida (Tabela 3.4).
A sinalizao concluda quando a hidrlise de GTP para
GDP ocorre pela atividade de GTPase da subunidade a. O aGDP resultante ento se dissocia do efetor, e se religa com (3y,
completando o ciclo. O que a ligao da subunidade a a uma
molcula efetora faz na verdade aumentar a sua atividade de
GTPase. A magnitude deste aumento diferente para tipos distin
tos de efetor. Por ser a hidrlise de GTP a etapa que abole a capa
cidade da subunidade a de produzir seu efeito, a regulao de sua
atividade de GTPase pela protena efetora significa que a ativa
o do efetor tende a ser autolimitante. O mecanismo resulta em
amplificao porque um nico complexo agonista-receptor pode
ativar vrias molculas de protena G de uma vez, e cada uma
delas pode permanecer associada enzima efetora tempo sufi
ciente para produzir muitas molculas de produto. O produto
(ver adiante) frequentemente um "segundo mensageiro", e
ocorre amplificao adicional antes de a resposta celular final ser
produzida.
De que modo a especificidade alcanada tal que cada tipo de
receptor produza um padro distinto de respostas celulares?
Havendo um conjunto comum de protenas G promscuas que se
ligam aos vrios receptores e sistemas efetores em uma clula,
pode parecer que toda a especificidade seria perdida, mas clara
mente as coisas no so assim. Por exemplo, mAChRs e |3-adrenoceptores, ambos ocorrendo nas clulas musculares cardacas,
produzem efeitos funcionais opostos (Caps. 10 e 1 1). A razo
principal a variao molecular dentro das subunidades a, das

36

quais mais de 20 subtipos foram identificados10 (Wess, 1998;

Tabela 3.4). Quatro classes principais de protena G (Gs, Gj, G0 e
Gt|) so de importncia farmacolgica. Como resumido na
Tabela 3.4, os subtipos mostram seletividade com respeito aos
receptores e aos efetores com os quais eles se acoplam, tendo
domnios de reconhecimento especfico na sua estrutura comple
mentar para domnios de ligao de protena G especficos nas
molculas receptoras e efetoras. A Gs e a Gj produzem, respecti
vamente, estimulao e inibio da enzima adenilil-ciclase (Fig.
3.9). As protenas G podem ser consideradas controladores intramembrana, saltitando entre receptores e efetores, controlando
este microcosmo, mas se comunicando muito pouco com o
mundo exterior.
As subunidades a destas protenas G apresentam diferenas
estruturais. Uma diferena funcional que se mostrou til como
ferramenta experimental para distinguir qual tipo de protena G
est envolvido em diferentes situaes diz respeito ao de duas
toxinas bacterianas: a toxina colrica e a toxina pertussis (Tabela
3.4). Estas toxinas, que so enzimas, catalisam uma reao de
conjugao (ribosilao do ADP) na subunidade a das protenas
G. A toxina colrica age somente na Gs e causa ativao persisten
te. Muitos dos sintomas do clera, como a excreo excessiva de
fluido pelo epitlio gastrintestinal, devem-se ativao descon-

l0Assim como os mais de 20 subtipos conhecidos de Ga, existem seis

de GP e 12 de Gy, formando, teoricamente, cerca de 1.500 variantes do
trmero. Pouco se sabe sobre o papel dos diferentes subtipos a, J3 e y,
mas seria leviano pensar que as variaes so funcionalmente
irrelevantes. Por ora, voc no ficar surpreso (ainda que fique um
pouco confuso) com esse grau de heterogeneidade molecular, j que
esse o caminho da evoluo.

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Receptor
inibitrio
Fig. 3.9 Controle bidirecional de

enzima-alvo como a adenilato

ciclase, por Gs e G|. A heterogeneidade
:as protenas G permite que receptores
:-'erentes exeram efeitos opostos em uma
_-na

Enzima-

Receptor

estimulatrio

mm

~esma enzima-alvo.

ida da adenilato ciclase. A toxina pertussis bloqueia especifia Gj e a Gpor impedimento da dissociao do trmero
protena G.
.

_~ente

-.VOS DAS PROTENAS G

:- alvos principais das protenas G, atravs dos quais os GPCRs

. r.irolam diferentes aspectos da funo celular (Milligan, 1995;

T- .ilermann et al., 1996; Nahorski, 2006; Tabela 3.4), so:

adenilil-ciclase:enzima responsvel pela formao de AMPc

- 'sfolipcise C:enzimaresponsvel pela formao de fosfato de
nositol e diacilglicerol (DAG)
anais inicos: particularmente os canais de clcio e de potssio
Rho A/Rhu quinase: um sistema que controla a atividade das
muitas vias de sinalizao que controlam o crescimento e a
proliferao celular, a contrao da musculatura lisa etc.
.

Sistema adenilil-ciclase/AMPc
A

acoberta por Sutherland e seus colegas do papel do AMPc

5 "-adenosina-monofosfato cclico) como um mediador intraalar derrubou com um s golpe as barreiras que existiam entre

Receptores acoplados protena G

So denominados algumas vezes receptores
metabotrpicos.
As estruturas compreendem sete a-hlices que
atravessam a membrana, frequentemente ligadas,
formando estruturas dimricas.
Uma das alas intracelulares maior do que as outras e
interage com a protena G.
A protena G uma protena de membrana que
compreende trs subunidades (a, p, y) com a subunidade
a possuindo atividade GTPase.
Quando o trmero se liga a um receptor ocupado por um
agonista, a subunidade a se dissocia e ento fica livre
para ativar um efetor (uma enzima de membrana ou canal
lnico). Em alguns casos, a subunidade py a espcie
ativadora.
A ativao do efetor termina quando ocorre a hidrlise da
molcula de GTP ligada, o que permite que a subunidade
a se recombine com (3y.
Existem vrios tipos de protena G, que interagem com
diferentes receptores e controlam diferentes efetores.
Exemplos incluem o receptor muscarnico da acetilcolina,
adrenoceptores, receptores de neuropeptdeos e de
quimiocinas, e receptores ativados por protease.

a bioqumica e a farmacologia, e introduziu o conceito de segun

dos mensageiros na transduo do sinal. O AMPc um nucleotdeo sintetizado no interior da clula a partir do ATP, pela ao de
uma enzima ligada membrana, a adenilil-ciclase. Ele produ
zido continuamente e inativado por hidrlise a 5'-AMP, atravs
da ao de uma famlia de enzimas conhecidas comofosfodiesterases (PDEs, phosphodiesterases). Muitos frmacos, hormnios
e neurotransmissores diferentes agem nos GPCRs e produzem
seus efeitos aumentando ou diminuindo a atividade cataltica da
adenilil-ciclase, e assim elevando ou diminuindo a concentrao
de AMPc dentro da clula. Existem vrias isoformas molecula
res da enzima, algumas das quaisrespondem seletivamenteGas
ou GaSimonds, 1999).
O AMP cclico regula muitos aspectos da funo celular,
incluindo, por exemplo, enzimas envolvidas no metabolismo
energtico, diviso e diferenciao celular, transporte de ons,
canais inicos e as protenas contrteis no msculo liso. Estes
efeitos variados so, no entanto, todos efetuados por um meca
nismo comum, ou seja, a ativao de protenas quinases pelo
AMPc. As protenas quinases regulam a funo de muitas prote
nas celulares diferentes pelo controle da fosforilao protica (p.
43). A Figura 3.10 mostra como a produo aumentada de AMPc
em resposta ativao do [3-adrenoceptor afeta as enzimas envol
vidas no metabolismo do glicognio e da gordura no fgado e nas
clulas adiposas e musculares. O resultado uma resposta coor
denada, na qual a energia armazenada em forma de glicognio e
gordura se torna disponvel em forma de glicose para suprir a

contrao muscular.
Outros exemplos de regulao pelas protenas quinases
dependentes de AMPc incluem a atividade aumentada de canais
de clcio ativados por voltagem nas clulas do msculo carda
co (Cap. 18). A fosforilao destes canais aumenta a quantidade
de Ca2+ que entra na clula durante o potencial de ao, e aumen
ta, por conseguinte, a fora da contrao do corao.
No msculo liso, a protena quinase dependente de AMPc
fosforila (e assim inativa) outra enzima, a quinase da miosina de
cadeia leve, que necessria para a contrao. Isto explica o
relaxamento do msculo liso produzido por muitos frmacos
que aumentam a produo de AMPc no msculo liso (Cap. 19).
Como mencionado anteriormente, os receptores ligados Gj,
mais do que Gs inibem a adenilil-ciclase, e assim reduzem a for
mao deAMPc. Os exemplos incluem certos tipos de mAChR (p.
ex.,o receptor M2do msculo cardaco; Cap. 10), a2-adrenoceptoresno msculo liso (Cap. 11) e os receptores opiides (Cap. 4 1). A
adenilil-ciclase pode ser ativada diretamente por certos agentes,
incluindo a forscoli nae ons fluoreto, agentes que so usados expe
rimentalmente para estudar o papel do sistema AMPc.
O AMP cclico hidrolisado dentro das clulas pelas fosfodiesterases (PDEs), uma importante e ubqua famlia de enzi
mas (Beavo, 1995, para reviso). Existem muitos subtipos de
PDE, dos quais alguns (p. ex., PDE3 e PDE4) so seletivos para
AMPc, enquanto outros (p. ex., PDE5) so seletivos para GMPc.
A maior parte deles moderadamente inibida por frmacos

37

SEO 1

S PRINCPIOS GERAIS

Aumento da liplise

Lipase (inativa)

ATP
ADP
Lipase (ativa)

Protena quinase

ATP

K,

(inativa)

AC

Protena quinase
(ativa)
...

Reduo da sntese de glicognio

Glicognio
sintase (ativa)

1
- AMPc
-

-ATP

ADP
Glicognio sintase
(inativa)

Agonista

Aumento da quebra de glicognio

Fosforilase
quinase (inativa)

ATP
ADP

Fosforilase b

v-,

Fosforilase
quinase (ativa)

(inativa)

ATP
Glicognio
ADP

Fosforilase a

ATP

(ativa)

ADP
Glicose-1-fosfato

Fig. 3.10 Regulao do metabolismo energtico pelo AMPc. AC, adenilato ciclase.

como as metilxantinas (p. ex. teofilina e cafena; Caps. 23 e 42).

O rolipram (usado no tratamento da asma, Cap. 23) seletivo
para PDE4 expressa nas clulas inflamatrias; milrinona (usada
no tratamento da insuficincia cardaca. Cap. 1 8) seletivo para
PDE4, a qual expressa no msculo cardaco; a sildenafila (mais
conhecida como Viagra, Cap. 30) seletiva para PDE5,e conse
quentemente refora os efeitos vasodilatadores do NO e de fr
macos que liberam NO, cujos efeitos so mediados pelo GMPc
(Cap. 17). A similaridade entre algumas aes destes frmacos
com as das catecolaminas, provavelmente reflete sua proprieda
de comum que a de aumentar a concentrao intracelular de
AMPc. Esto em desenvolvimento inibidores seletivos das
vrias PDEs, principalmente para o tratamento de doenas car
diovasculares e respiratrias (Caps. 19 e 23).

O sistema fosfolipase C/fosfatos de inositol

O sistema fosfoinositdeo, um importante sistema intracelular de
segundos mensageiros, foi descoberto na dcada de 1950 por
Hokin e Hokin, que estavam interessados principalmente no
mecanismo de secreo de sais pelas glndulas nasais das aves
marinhas. Eles constataram que a secreo era acompanhada de
um aumento da renovao de uma classe menor de fosfolipdeos

38

de membrana, conhecidos comofosfoinositdeos (coletivamente

designados por Pis; Fig. 3.11). Posteriormente, Michell e
Berridge descobriram que muitos hormnios que produzem
aumento na concentrao intracelular de Ca+2 livre (incluindo,
por exemplo, agonistas muscarnicos e agonistas de a-adrenoceptores em ao no msculo liso e nas glndulas salivares, e a
vasopressina que atua sobre as clulas hepticas) tambm
aumentam a renovao de PI. Posteriormente,foi descoberto que
um membro em particular da famlia PI, isto , o fosfatidilinositol, (4,5) difosfato (PIP2), que possui grupos adicionais de fosfa
to ligados ao anel inositol, desempenha um papel-chave. O PIP2
o substrato de uma enzima ligada membrana, fosfolipase C(3
(PLC|3), que efetua sua clivagem em DAG e inositol (1,4,5) trifosfato (IP3; Fig. 3.12), os quais atuam como segundos mensa
geiros, conforme discutido maisadiante. A ativao da PLC(3 por
vrios agonistas mediada atravs de uma protena G (Gq, Tabela
3.4). Aps a clivagem do PIP2, o status quo restabelecido, como
mostra a Figura 3. 12, sendo o DAGfosforilado para formar cido
fosfatdico (PA), enquanto o IP3 desfosforilado e, a seguir, reacoplado ao PA, para formar PIP2mais uma vez." O ltio, um

"Abreviaes alternativas para estes mediadores so Ptdlns (PI), Ptdlns

(4,5)-P2 (PIP2), Ins ( 1,4,5)-P3 (IP3) e Ins ( 1,2,4.5)-P4 (IP4).

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

>>
O
CL
O

>

0
CL
O
CQ

3
X
O

0)

CD

_Q
Cl

CL

o>

13

O'
O

DAG

PA

pip

ativadas tambm por steres de forbol (compostos altamente

irritantes produzidos por certas plantas, que promovem a forma
o de tumores) que tm sido extremamente teis no estudo das
funes da PKC. Um dos subtipos ativado pelo mediador lipdico, cido araquidnico (Cap. 13) produzidopela ao da fosfo
lipase A2 sobre os fosfolipdeos da membrana, de modo que pode
ocorrer tambm a ativao da PKC por agonistas que ativam
aquela enzima. As vrias isoformas da PKC, como as tirosinas
quinases, discutidas adiante (p. 43), agem em muitas protenas
funcionais diferentes, como canais inicos, receptores, enzimas
(incluindo outras quinases) e protenas do citoesqueleto. As qui
nases, em geral, exercem uma funo central na transduo de
sinal, e regulam muitos aspectos diferentes da funo celular. A
conexo DAG-PKC fornece um mecanismo pelo qual os GPCRs
podem mobilizai" esse exrcito de agentes controladores.

Canais inicos como alvos das protenas G

1(1>4,5)P3

Fig. 3.11 Estrutura do fosfatidilinositol difosfato

(PIPJ, mostrando stios de clivagem por diferentes
fosfolipases para produzir mediadores ativos. Aclivagem
pela fosfolipase A2 (PLA2) produz cido araquidnico. Aclivagem pela
fosfolipase C (PLC) produz inositol trisfofato (1(1 , 4, 5)P3) e diacilglicerol
(DAG). PA, cido fosfatidico; PLD, fosfolipase D.

agente usado em psiquiatria (Cap. 39), bloqueia esta via de reci

clagem (Fig. 3.12).

Fosfatos de inositol e clcio intracelular

O inositol (1,4,5) trisfofato um mediador hidrossolvel que
liberado no citosol e age em um receptor especfico o receptor
IP3 que um canal de clcio controlado por ligante presente na
membrana do retculo endoplasmtico. A funo principal do
IP3, descrita em mais detalhes no Captulo 4, controlar a libera
o de Ca2+ das reservas intracelulares. Como muitos efeitos de
frmacos e hormnios envolvem o Ca2+ intracelular, esta via
particularmente importante. O IP3 convertido dentro da clula
para o (1,3,4,5) tetrafosfato, IP4, por uma quinase especfica. A
funo exata do IP4 ainda incerta (Irvine, 2001 ), mas existem
evidncias de que est tambm envolvido na sinalizao de Ca2+.
Uma possibilidade facilitar a entrada de Ca2+ pela membrana
plasmtica, evitando, assim, a depleo das reservas intracelula
res como resultado da ao do 1P3.

Diacilglicerol e protena quinase C

O diacilglicerol produzido, assim como o IP, sempre que ocor
re a hidrlise de PI induzida por receptores. O principal efeito do
DAG ativar uma protena quinase ligada membrana, protena
quinase C (PKC), que catalisa a fosforilao de vrias protenas
intracelulares (Nishizuka, 1988; Walaas & Greengard, 1991). O
DAG, diferentemente dos fosfatos de inositol, altamente lipof:ico e se mantm na membrana. Liga-se a um stio especfico na
molcula da PKC,que migra do citosol para a membrana da clu
la na presena de DAG tornando-se ento ativada. Existem 10
diferentes subtipos de PKC em mamferos, que tm distribuies
celulares distintas e fosforilam diferentes protenas. A maior
oarte ativada por DAG e por nveis intracelulares elevados de
Ca2+, ambos produzidos pela ativao de GPCRs. As PKCs so

Os receptores acoplados protena G podem controlar a funo

de canais inicos diretamente por mecanismos que no envol
vem segundos mensageiros como AMPc ou fosfatos de inositol.
Isto foi demonstrado pelaprimeira vez no msculo cardaco, mas
agora parece que a interao direta entre a protena G e os canais
pode ser muito geral (Wickham & Clapham, 1995). Os primeirds
exemplos vieram de estudos de canais de potssio. No msculo
cardaco, por exemplo, os mAChRs sabidamente aumentam a
permeabilidade ao K" (hiperpolarizando assim as clulas e ini
bindo a atividade eltrica; Cap. 1 8). Mecanismos semelhantes
operam nos neurnios, onde muitos frmacos inibidores, como
os analgsicos opiides, reduzem a excitabilidade abrindo os
canais de potssio (Cap. 41). Estas aes so produzidas por interaes diretas entre a subunidade py da G0 e o canal, sem o envol
vimento de segundos mensageiros.

Sistema Rho/Rho quinase

Estavia de transduo de sinal recentemente descoberta (Bishop &
Hall, 2000) ativada por certos GPCRs (e tambm por mecanismo
no-GPCR), que se acoplam a protenas G do tipo GI2/i3- A subunida
de a livre da protena G interage com o fatorde troca do nucleotdeo
guanosina, que facilita a permuta GDP-GTP em outra GTPase, Rho.
A Rho-GDP, que a forma de repouso, inativa, mas quando a permu
ta GDP-GTP acontece, a Rho ativada, e por sua vez ativa a Rho qui
nase. A Rho quinase fosforila muitos substratos proticos e controla
uma ampla variedade de funes celulares, incluindo a contrao e a
proliferao do msculo liso, a angiognese e a remodelao sinptica. Devido sua ao aumentando a vasoconstrio da artria pulmo
nar induzida por hipoxia, a ativao da Rho quinase considerada
importante na patognese da hipertenso pulmonar (Cap. 19).
Inibidores especficos daRho quinaseesto em desenvolvimento para
uma grande gama de indicaes clnicas uma rea para se observar.

As principais funes postuladas dos GPCRs no controle de enzi

mas e canais inicos so resumidas 11a Figura 3.13.

Dessensibilizao
Como descrito no Captulo 2, a dessensibilizao uma caracte
rstica detodos os GPCRs,e os mecanismos subjacentes foram exten
samente estudados. Dois processos principais esto envolvidos
(Koenig & Edwardson, 1997; Krupnik & Benovic, 1998;Ferguson,
2001):

fosforilao do receptor
internalizao do receptor (endocitose).
A sequncia dos GPCRs inclui certos resduos (serina e treonina),
principalmente na cauda citoplasmticaC-terminal, que pode serfosforilada por quinases como a protena quinase A (PKA), PKC e
GPCR-quinases (GRKs) especficas ligadas membrana.

39

SEO 1

5? PRINCPIOS GERAIS

Receptor

Quinases

Fosfolipase C

Acido fosfatdico

DAG
Quinase
Ativao da
protena quinase C

OH

Inositol
Fosfatases

1 -fosfatase

>-

Liberao de Ca2

intracelular

Inositol

l(1,4,5)P3
Inibida

pelo Li+
? Entrada de Ca2+
atravs da membrana

>f

1(1,3,4)P3

_y

l(1,3,4,5)P4

Fig. 3.12 O ciclo do fosfatidilinositol (PI). A ativao da fosfolipase C mediada por receptor resulta na clivagem dofosfatidilinositol difosfato
(PIP2), formando diacilglicerol (DAG) (que ativa a protena quinase C) e inositol trisfofato (IP3) (que libera Ca2+ intracelular). No se sabe ao certo a funo do
inositol tetrafosfato (IP4), que formado a partir do IP3 e de outros fosfatos de inositol, mas ele pode facilitar a entrada de Ca2t atravs da membrana
plasmtica. 0 IP3 inativado por desfosforilao em inositol. O DAG convertido em cido fosfatdico, e estes dois produtos so usados para regenerar o PI

eoPIP2.

A fosforilao efetuada pela PKA e PKC, que so ativadas por mui

GPCRs, geralmente resulta em bloqueio do acoplamento entre o
receptor ativado e a protena G, com consequente reduo do efeito
agonista. Estas quinases no so muito seletivas, de modo que outros
receptores, alm daqueles para o agonista dessensibilizante, tambm
so afetados. Este efeito, atravs do qual um agonista pode dessensibilizar outros receptores, conhecido como dessensibilizao heterloga e, em geral, pouco intenso e de curta durao (Fig. 3. 1 4).

ALGUNS PROGRESSOS RECENTES

A fosforilao pelas GRKs (Krupnick & Benovic, 1998; Fig. 3. 14)

especfica em maior ou menor grau para determinados receptores, e
afeta principalmente receptores em seu estado ativado (i.e.,com ago
nista ligado), resultando em dessensibilizao homloga. Os res
duos que as GRKs fosforilam so diferentes daqueles que so alvos
de outras quinases, e o receptor fosforilado serve como um stio de
ligao para arrestinas, que so protenas intracelulares que blo
queiam a interao comas protenas G e tambm direcionam o recep
tor para endocitose, produzindo uma dessensibilizao mais profun
da e de maior durao. A primeira GRK identificadafoi a quinase do
P-adrenoceptor, BARK; mas vrias outras foram descobertas desde
ento, e este tipo de dessensibilizao parece ocorrer com a maioria
dos GPCRs.

Dimerizao do GPCR

tos

40

T Nosso conhecimento da biologia do GPCR est em rpida expan

so. A seguir descrevemos alguns progressos recentes que podem ter
aplicaes importantes para a farmacologia no futuro (ver reviso de
Pierce elal., 2002). Aqueles que desejam saber apenas a histria bsi
ca da funo do GPCR podem pular esta seo sem problemas.

A viso convencional da existncia e funo dos GPCRs como

protenas monomricas (em contraste com os canais inicos, que
geralmente formam complexos multimricos; p. 50) foi abalada pelo
trabalho realizado com o receptor GABAb. Existem dois subtipos
deste GPCR, codificados por genes diferentes, e o receptor funcional
consiste em um heterodmero dos dois. Hoje em dia parece que pro
vavelmente a maioria, se no todos os GPCRs, existem como oligmeros (Angers et ai,2002). Dentro da famlia de receptores opiides
(Cap. 41), foram encontrados dmeros estveis e funcionais dos
receptores k e 8, cujas propriedades farmacolgicas so distintas
daquelas apresentadas por qualquer das molculas originrias.
Tambm foi descoberta uma maior diversidade de combinaes do

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Protenas G

Receptores

Enzimasalvo

Segundos
mensageiros

Guanilato
ciclase

Adenilato
ciclase

Fosfolipase C

DAG

AMPc

GMPc

t [Ca;
Protenas
quinases

Efetores

-v AA

Eicosanides
Liberados

Enzimas, protenas
de transporte etc.

como
hormnios
locais

PKC

PKA

PKG

Protenas
contrteis

Canais

inicos

Fig. 3.13 Controle dos sistemas efetores celulares pela protena G e segundos mensageiros. AA, cido araquidnico; DAG,
iiacilglicerol; IP3, inositol trisfofato.

GPCR, como, por exemplo, entre receptores de dopamina (D2) e

somatostatina, nos quais ambos os ligantes agem com potncia
aumentada. Divagando um pouco mais no campo da pesquisa de atri
buies funcionais, o receptor de dopamina D5 pode acoplar-se diretamente a um canal inico controlado por ligante, o receptor de
GAB Aa, inibindo a funo deste ltimo sem a interveno de nenhu
ma protena G (Liu et ai,2000). Estas interaes foram estudadas at
agora principalmente em linhagens celulares desenvolvidas por
engenharia gentica, e sua importncia em clulas nativas incerta.
Existem, no entanto, evidncias (AbdAlla et al., 2001) de que ocor
rem complexos dimricos funcionais entre receptores de angiotensina (AT,) e bradicinina (B2) em plaquetas humanas e mostram maior
?ansibilidade angiotensina do que a receptores de AT "puros". Em
mulheres grvidas com hipertenso (toxemia pr-eclmptica), o
r. mero desses dmeros aumenta devido expresso aumentada de
receptores B2, resultando paradoxalmente em aumento de sen-ibilidade ao vasoconstritora da angiotensina. Este o primeiro
exemplo do papel da dimerizao em uma doena humana.

E muito cedo para dizer que impacto vai ter na farmacologia conven
cional e na teraputica esta versatilidade recm-descoberta dos
GPCRs em conectar-se com outros receptores para formar combina
es funcionais, mas pode ser considervel.

Receptores constitutivamente ativos

Os receptores acoplados protena G podem tambm estar ativos
.rnstitutivmente (i. e., espontaneamente) na ausncia de qualquer
agonista (Cap. 2, reviso por Costa & Cotecchia, 2005). Isto foi
:;monstrado primeiramente para o p-adrenoceptor (Cap. 11), onde
mutaes na terceira ala intracelular, ou simplesmente superexpres- 1:do receptor, resultam na ativao constitutivado mesmo. Existem

atualmente muitos exemplos de GPCRs nativos que mostram atividade constitutiva quando expressos in vitro (Teitler et al., 2002). O
receptor de histamina H3 tambm mostra atividade constitutiva in
vivo , e isto pode ser um fenmeno muito geral. Isto significa que os
agonistas inversos, que suprimem esta atividade basal, podem exer
cer efeitos distintos aos dos agonistas neutros, que bloqueiam os efei
tos do agonista sem afetar a atividade basal.

Especificidade do agonista
Pensava-se que a conexo entre um determinado GPCR e uma
dada via de transduo de sinal dependesse principalmente da estru
tura do receptor, especialmente na regio da terceira ala intracelular,
que confere especificidade a uma certa protena G, a partir do que o
restante da via de transduo de sinal prosseguisse. Isto significaria
que, consoante o modelo de dois estados, discutido no Captulo 2,
todos os agonistas com ao em um receptor em particular estabiliza
riam o mesmo estado ativado (R*) e deveriam ativar a mesma via de
transduo de sinal, produzindo o mesmo tipo de resposta celular.
Atualmente est claro que esta viso uma supersimplificao. Em
muitos casos, por exemplo dos agonistas que agem em receptores
opiides, ou agonistas inversos no -adrenoceptor, os efeitos celula
res so qualitativamente diferentes com diferentes ligantes, levando
a crer na existncia de mais de um provavelmente muitos esta
dos R* (s vezes chamado trfego de agonista ou agonismo proteiforme, Kenakin, 2002). O quo genrico istovai se mostrar ainda no
est claro, mas pode ter profundas implicaes de fato herticas a
muitos farmacologistas, que esto acostumados a pensar sobre ago
nistas, em termos de sua afinidade e eficcia e nada mais. Caso se
comprovem, estes fatos abriro uma nova dimenso para a maneira
de entender a eficcia e a especificidade dos frmacos.

"5 PRINCPIOS GERAIS

SEO 1

s subunidades Ga. Elas aumentam consideravelmente a atividade

GTPase do complexo GTP-Ga ativado, acelerando assim a hidrlise
do GTP e inativando o complexo. Elas, portanto, exercem um efeito
inibitrio sobre a sinalizao de protenas G, mecanismo este que se
acredita ter uma funo regulatria em diversas situaes. As prote
nas RAMPe RGS so dois exemplos (Pierce etal, 2002) onde as interaes protena-protena influenciam de diferentes maneiras o com
portamento farmacolgico dos receptores.

Agonista

Receptor

Receptor
ativado

Ativao da PKA,
PKC etc.

Receptor
fosforilado

Fosforilao
do receptor
(inespecfica)

Sinalizao independente das protenas G

Ao usarmos a expresso "receptores acoplados protena G" para
descrever a classe de receptores caracterizada por sua estrutura hepta-helicoidal. estamos seguindo dogmas de textos convencionais,
mas negligenciando o fato de que as protenas G no so o nico vn
culo entre GPCRs e os vrios sistemas efetores que eles regulam. O
exemplo de conexo direta entre GPCRs e canais inicos foi mencio
nado anteriormente. Existem tambm muitos exemplos nos quais as
vrias "protenas adaptadoras" que conectam receptores do tipo tirosina quinase aos seus efetores (ver adiante) podem tambm interagir
com GPCRs (Brzostowski & Kimmel, 200 1), fazendo com que os
mesmos sistemas efetores sejam regulados por receptores de ambos
os tipos. Nesse contexto, as quinases especficas do receptor que
esto envolvidas na dessensibilizao (ver anteriormente) podem
tambm contribuir para a transduo do sinal, pois a fosforilao da
regio C-terminal do GPCR produz um stio de reconhecimcnto"para
molculas da via de transduo de sinal, de forma anloga ao funcio
namento de receptores ligados a quinases (ver a seguir; reviso por
Bockaert & Pin. 1999).

...etc.

O
Complexo arrestina-recepto

Arrestina

/ \
Perdado
acoplamento
protena G

Endocitose

HOMLOGA

Reduo do
acoplamen
to prote
na G

Em resumo, o simples dogma que sustenta nosso atual entendi

mento dos GPCRs, isto ,

HETERLOGA

um gene GPCR uma protena GPCR

um GPCR funcional uma protena G uma resposta
Fig. 3.14 Dessensibilizao de receptores acoplados
protena G (GPCRs). A dessensibilizao homloga
(agonista-especfica) envolve a fosforilao do receptor ativado por uma
quinase especfica (GPCR quinase, GRK). 0 receptor fosforilado (P-R)
em seguida se liga arrestina.. o que causa a perda da sua capacidade
de se associar a uma protena G, e a seguir endocitose, que remove o
receptor da membrana. A dessensibilizao heterloga (cruzada) ocorre
como consequncia da fosforilao de um tipo de receptor, devido
ativao de quinases por outro receptor.
PKAe PKC, protenas quinases Ae C, respectivamente.

J
Protenas RAMP e RGS
T As protenas modificadoras da atividade dos receptores (RAMP.
receptor activity-modifyingproteins) constituem uma famlia de pro
tenas de membrana que se associam aos GPCRs e alteram suas carac
tersticas funcionais. Foram descobertas em 1998, quando se verifi
cou que o receptor funcionalmente ativo de um neuropeptdeo, o peptcleo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) (Cap. 1 3) consiste
em um complexo formado por um GPCR chamado receptor seme
lhante ao receptor de calcitonina (CRLR, calcitonin receptor-like
receptor) que em si no possui atividade, e outra protena de mem
brana (RAMP1). Surpreendentemente, o CRLR quando acoplado a
outra RAMP (RAMP2) demonstrou uma farmacologia bem diferen
te, sendo ativado por outro peptdeo, a adrenomedulina. Em outras
palavras, a especificidade ao agonista conferida pela RAMP asso
ciada, assim como pelo prprio GPCR. Ainda no se sabe se este tipo
de modulao ocorre com outras famlias de GPCR.

42

Protenas reguladoras da sinalizao de protenas G (RGS, regulators

of G-protein signalling) (ver reviso por Hollinger & Hepler, 2002)
constituem uma ampla e diversificada famlia de protenas celulares,
que possuem uma sequncia conservada que se liga especificamente

comea a mostrar sinais de desgaste. Em particular:

um gene, atravs de splicing alternativo, edio de RNA etc.,

pode dar origem a mais de uma protena de receptor
uma protena GPCR pode associar-se a outras, ou a outras pro
tenas como as RAMPs, e dar origem a mais de um tipo de
receptor funcional
diferentes agonistas podem afetar o receptor de diferentes
maneiras e produzir respostas qualitativamente diferentes
a via de transduo de sinal no requer impreterivelmente uma
protena G. e demonstra interaes com receptores ligados
tirosina quinase (ver adiante).

Receptores acoplados protena G so molculas evidentemen

te versteis e aventureiras ao redor das quais gira muito da farma

cologia moderna,e ningum deve imaginar que tenhamos chega

do ao fim da histria.

TIPO 3: RECEPTORES LIGADOS A

QUINASES E RECEPTORES CORRELATOS
Estes receptores de membrana so bastante diferentes dos canais
controlados por ligantes e dos GPCRs, tanto em estrutura como
em funo. Eles medeiam as aes de uma ampla variedade de
protenas mediadoras, incluindo fatores de crescimento e citocinas (Cap. 1 6), e hormnios como a insulina (Cap. 26) e a leptina
(Cap. 27), cujos efeitos so exercidos principalmente ao nvel de
transcrio gnica. A maioria destes receptores constituda de
grandes protenas que consistem em uma cadeia nica de at
1 .000 resduos, com uma nica regio transmembrana helicoi
dal, associada a um grande domnio extracelular de ligao ao
ligante, e um domnio intracelular de tamanho e funes varia-

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Efetores controlados por protenas G

Duas vias-chave so controladas por receptores

atravs de protenas G. Ambas podem ser ativadas ou ini
bidas por ligantes farmacolgicos, dependendo da natureza do
receptor e da protena G.
Adenilato ciclase/AMPc:
a adenilato ciclase catalisa a formao do mensageiro
intracelular AMPc
o AMPc ativa vrias protenas quinases que controlam
a funo celular de muitas maneiras diferentes, por
meio de fosforilao de vrias enzimas,
transportadores e outras protenas.
Fosfolipase C/trisfofato de inositol (IP3)/diacilglicerol
(DAG):
catalisa a formao de dois mensageiros intracelulares,
IP3 e DAG, a partir de fosfolipdeos de membrana
o IP3 atua de forma a aumentar o Ca2+ citoslico livre,
liberando Ca2+ de compartimentos intracelulares
o aumento do Ca2+ livre inicia vrios eventos, incluindo
contrao, secreo, ativao de enzimas e
hiperpolarizao de membranas
o DAG ativa a protena quinase C, que controla muitas
funes celulares atravs da fosforilao de vrias
protenas.
As protenas G ligadas a receptores controlam
tambm:
fosfolipase A2 (e, portanto, a formao de cido
araquidnico e eicosanides)
canais inicos (p. ex. , canais de potssio e clcio, afetando
assim a excitabilidade da membrana, liberao de
transmissores, contratilidade etc.)

dos. A estrutura bsica mostrada na Figura3.3C, porm existem

muitas variantes (ver adiante). Mais de 1 00 receptores desse tipo
foram clonados e existem muitas variaes estruturais. Para
maiores detalhes veja a reviso por Barbacid ( 1996), Ihle ( 1995)
e Schenk & Snaar-Jakelska (1999). Eles tm um papel importan
te no controle da diviso, crescimento e diferenciao celulares,
assim como na inflamao, reparao tecidual, apoptose e res
postas imunolgicas,discutido mais adiante nos Captulos 5 e 13.
Os principais tipos so os seguintes:

Receptores tirosina quinase (RTKs). Estes receptores tm a

estrutura bsica mostrada na Figura 3. 1 5A. incorporando uma
poro tirosina quinase na regio intracelular. Esto includos
receptores para muitos fatores de crescimento, como o fator de
crescimento epidrmico e o fator de crescimento neuronal, e
tambm o grupo de receptores Toll-smiles, que reconhecem
lipopolissacardeos bacterianos, tem importante participao
na reao do organismo infeco (Cap. 1 3 e reviso por Cook
et al.,2004). O receptor de insulina (Cap. 26) tambm perten
ce classe dos RTKs, apesar de possuir uma estrutura dimrica mais complexa.
Serina/treonina quinases. Esta pequena classe similar aos
RTKs em estrutura, porm fosforilam resduos de serina e/ou
treonina em vez de tirosina. O principal exemplo o receptor
para o fator de transformao de crescimento (TGF, transforming growth factor).
Receptores de citocinas. Estes receptores (Fig. 3. 15B ) care
cem de atividade enzimtica intrnseca. Quando ocupados

eles se associam a (e ativam) uma tirosina quinase citoslica,

como a Jak (a quinase Janus) ou outras quinases. Os ligantes
para esses receptores incluem citocinas como interferonas e
fatores estimulantes de colnia envolvidos nas respostas imu

nolgicas.
Receptores associados guanilil-ciclase. Estes so similares
em estrutura aos RTKs, porm a poro enzimtica guanililciclase e eles exercem seus efeitos estimulando a formao de
GMPc. O principal exemplo o receptor para ANF (Cap. 18).

MECANISMOS DA FOSFORILAAO
PROTEICA E DA CASCATA DAS QUINASES
Um dos mais importantes princpios surgindo de estudos recen
tes (Cohen, 2002) o de que a fosforilao de protenas um

mecanismo-chave para controlar a funo de protenas (p. ex.,

enzimas, canais inicos, receptores, protenas de transporte)
envolvidas na regulao de processos celulares. Fosforilao e
desfosforilao so realizadas por quinases efosfatases,respec
tivamente enzimas das quais algumas centenas de subtipos
esto representadas no genoma humano que por sua vez esto
elas mesmas sujeitas regulao, dependendo de seu estado de
as
fosforilao. Muitos esforos esto sendo feitos para
complexas interaes entre as molculas sinalizadoras envolvi
das em efeitos de frmacos eem processos fisiopatolgicos como
oncognese, neurodegenerao, inflamao e muitos outros.
Podemos aqui apresentar apenas alguns poucos aspectos farma
cologicamente relevantes daquilo que se tornou um tema de
enormes propores.
Em muitos casos, a ligao do ligante ao receptor leva dimerizao. A associao dos dois domnios de quinase intracelula
res permite que ocorra uma autofosforilao mtua de resduos
de tirosina intracelulares. Os resduos de tirosina fosforilados
servem ento como stios de ancoragem de alta afinidade para
outras protenas intracelulares, que constituem o prximo passo
na cascata de transduo de sinal. Um importante grupo de tais
protenas "adaptadoras" conhecido como protenas de domnio
SH2 (referindo-se homologia Src, pois esse domnio foi identi
ficado pela primeira vez no produto do oncogene Src). Essas pro
tenas possuem uma sequncia altamente conservada de cerca de
100 aminocidos, formando um stio de reconhecimento para os
resduos de fosfotirosina do receptor. Protenas de domnio SH2
individuais, muitas das quais j so conhecidas, ligam-se seletivamente a determinados receptores, de modo que o padro de
eventos desencadeados por fatores de crescimento particulares
altamente especfico. O mecanismo resumido na Figura 3.15.
O que ocorre quando a protena de domnio SH2 se liga ao
receptor fosforilado varia enormemente de acordo com o receptor
que est envolvido; muitas protenas de domnio SF12 so enzi
mas, como protenas quinases ou fosfolipases. Alguns fatores de
crescimento ativam um subgrupo especfico de fosfolipase C
(PLCy) e, desse modo, causam quebra de fosfolipdeos, formao
de IP3 e liberao de Ca2+ (ver anteriormente). Outras protenas
contendo domnio SH2 realizam o acoplamento de protenas con
tendo fosfotirosinas com vrias outras protenas funcionais,
inclusive muitas que esto envolvidas no controle da diviso e
diferenciao celulares. O resultado final ativar ou inibir, via
fosforilao, diversos fatores de transcrio que migram para o
ncleo e suprimem ou induzem a expresso de determinados
genes. Para maiores detalhes veja Pawson (2002). Ofator nuclear
kappa B (NFkB) um fator de transcrio que tem um papelchave nas respostas inflamatrias (Cap. 13; Karin et ai, 2004).
Ele est normalmente presente no citoplasma, complexado com
um inibidor (IkB). A fosforilao do IkB ocorre quando uma qui-

manear

43

SEO 1

3 PRINCPIOS GERAIS

Fator de

Mudana de
conformao

crescimento

Dimerizao

Autofosforilao
da tirosina

Domnio

Fosforilao
de Grb2

Ativao de Ras
Troca GDP/GTP

do receptor

a-hlice
transmembrana

MEMBRANA

Domnio
tirosina quinase

Ativaao
Resduo
de tirosina

Fosforilao
Mek

Ligao da protena de
domnio SH2(Grb2)

Fosforilao
Map-quinase

Fosforilao

Vrios fatores de
transcrio

NCLEO

Transcrio genica

Citocina
/
/

\
\

'

Alterao
conformacional
Ligao de Jak

J|||

Fosforilao do receptor
+ Jak

O. J}.
MEMBRANA

Ligao e

fosforilao da
protena de
domnio SH2 (Stat)

Dimerizao de ; %

P#i Sta

NCLEO

Transcrio gnica

44

Fig. 3.15 Mecanismos de transduo dos receptores acoplados a quinases. A primeira etapa que ocorre aps a ligao do agonista
a dimerizao, que leva autofosforilao do dominio intracelular de cada receptor. Protenas com domnio SH2 ento ligam-se ao receptor fosforilado, e so,
elas prprias, tambm fosforiladas. Duas vias bem caracterizadas so mostradas: HAvia do fator de crescimento (Ras/Raf/prote na ativada por mitgeno
[MAP] quinase) (ver tambm Cap. 5);0A via das citocinas (Jak/Stat) (ver tambm Cap. 13). Vrias outras vias existem, e estas cascatas de fosforilao
interagem com componentes dos sistemas de protenas G.

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Receptores ligados a quinases

Receptores para diversos fatores de crescimento

incorporam a tirosina quinase em seu domnio
intracelular.
Receptores de citocinas possuem um domnio intracelular
que liga e ativa quinases citoslicas quando o receptor
ocupado.
Todos os receptores compartilham uma arquitetura
comum, que consiste em um grande domnio extracelular
de ligao ao ligante, conectado ao domnio intracelular
atravs de uma nica hlice transmembrana.
Atransduo de sinais geralmente envolve a dimerizao
de receptores, seguida de autofosforilao de resduos de
tirosina. Os resduos de fosfotirosina atuam como
aceptores dos domnios SH2 de vrias protenas
intracelulares, permitindo dessa maneira o controle de
muitas funes celulares.
Esto envolvidos principalmente em eventos que
controlam o crescimento e a diferenciao celulares, e
atuam indiretamente por regulao da transcrio gnica.
Duas vias importantes so:
Avia Ras/Raf/protena ativada pormitgenos (MAP)
quinase, que importante na diviso, crescimento e
diferenciaes celulares.
Avia Jak/Stat, ativada por muitas citocinas, a qual
controla a sntese e a liberao de muitos mediadores

inflamatrios.
Alguns poucos receptores de hormnios (p. ex., fator
natriurtico atrial) possuem uma arquitetura similar e esto
ligados guanilato ciclase.

- .ise especfica (IKK) ativada em resposta a vrias citocinas

zfiamatrias e agonistas de GPCR. Isto resulta na dissociao do
. -plexo IkB-NFkB, e na migrao deste ltimo para o ncleo,
ele ativa uma grande variedade de genes pr-inflamatrios.
Duas vias bem definidas de transduo de sinal esto resumidas na
Figura 3.15. A via Ras/Raf (Fig. 3.15A) medeia o efeito de muitos
ratores de crescimento e mitgenos. Ras, que um produto protooncogene, funciona como uma protena G e transmite o sinal (atravs
iapermuta GDP/GTP) a partir da protena de domnio SH2,Grb, que
fosforilada pela RTK. A ativao de Ras por sua vez ativa Raf, que
a primeira de uma sequncia de trs serina/treonina quinases, em
jue cada uma fosforila, e ativa, a prxima da sequncia. A ltima
ielas, a quinase da protena ativada por mitgeno (MAP, mitogen-Ctivated protein), fosforila um ou mais fatores de transcrio que
iriciam a expresso gnica, resultando em diversificados tipos de resrosta celular, incluindo a diviso celular. Essa cascata da MAP qui:.:se de trs etapas faz parte de muitas vias sinalizadoras intracelula
res i Garrington & Johnson, 1999) envolvidas em uma ampla gama de
rrocessos mrbidos, inclusive tumores malignos, inflamao, neuroiegenerao, aterosclerosee muitos outros. As quinases formam uma
;rande famlia, com diferentes subtipos servindo para funes espe:ricas. Acredita-se que elas representem um alvo importante para
-:uros agentes teraputicos. Muitos cnceres esto associados a
- utaes nos genes que codificam protenas envolvidas nessacascau.levando ativao da mesma na ausncia do sinaldo fator de trans.::o (Caps. 5 e 51). Para maiores detalhes, veja as revises de
irshall (1996), Schenk& Snaar-Jakelska (1999) e Chang & Karin

2001).

V ma segunda via, a via Jak/Stat (Fig. 3.15B) est envolvida nas res>:as a muitas citocinas. Ocorre a dimerizao desses receptores

quando a citocina se liga, e isso atrai uma unidade tirosina quinase

citoslica (Jak) para se associar e ento fosforilar o dmero do recep
tor. As Jaks pertencem a uma famlia de protenas, da qual diferentes
membros possuem especificidade para diferentes receptores de cito
cinas. Entre os alvos para a fosforilao pela Jak est uma famlia de
fatores de transcrio (Stats). Estes so protenas de domnio SH2 que
se ligam aos grupamentos fosfotirosina no complexo receptor-Jak,
sendo elas prprias fosforiladas. A Stat assim ativada migra para o
ncleo e ativa a expresso gnica (Ihle, 1995).
Trabalhos recentes sobre as vias de transduo de sinal produziram
uma desnorteante profuso de detalhes moleculares, frequentemente
expressos em um jargo que tende a desencorajar os mais tmidos.
Entretanto a perseverana ser recompensada, pois no restam dvi
das de que novos frmacos importantes surgiro, particularmente nas
reas da inflamao, imunologia e cncer, tendo essas protenas
como alvo (Cohen, 2002). Um recente avano no tratamento da leu
cemia mielide crnica foi conseguido com a introduo do primei
ro inibidor especfico de quinase, o imatinibe, um frmaco que inibe
uma tirosina quinase especfica envolvida na patognese da doena
(Cap. 51).

A forma ligada membranada guanilil-ciclase, a enzima respon

svel pela formao do segundo mensageiro GMPc em resposta
ligao de peptdeos como o peptdeo natriurtico atrial (Cps.
16 e 18), lembra a famlia das tirosinas quinases, e ativada de
maneira similar por dimerizao, quando se liga ao agonista (Lu
cas et ai, 2000).
A Figura 3.16 ilustra o papel central das protenas quinases
nas vias de transduo de sinal, de modo muito simplificado e
esquemtico. Muitas, se no todas as protenas envolvidas,
incluindo os receptores e as prprias quinases, so substratos
para quinases, portanto, h muitos mecanismos dqfeedback e
interaes cruzadas entre as vrias vias de sinalizao. Tendo em
vista que existem mais de 500 protenas quinases, e um nmero
igualmente alto de receptores e outras molculas sinalizadoras, a
rede de interaes pode parecer espantosamente complexa.
Dissecar seus detalhes tornou-se um tema principal na biologia
celular. Para os farmacologistas, a idia de uma conexo simples
entre receptor e resposta, que guiou o pensamento atravs do
sculo XX, est, sem dvida, desmoronando, apesar de ainda fal
tar algum tempo para que as complexidades das vias sinalizado
ras sejam incorporadas, formando um novo modo de pensar
sobre a aco dos frmacos.

TIPO 4: RECEPTORES NUCLEARES

O quarto tipo de receptores a ser considerado pertence kfamlia
dos receptores nucleares. Na dcada de 1980 estava claro que
receptores para hormnios esterides, tais como estrgenos e glicocorticides, estavam presentes no citoplasma das clulas e
eram translocados para o ncleo aps a ligao com seu ligante
esteride. Descobriu-se tambm que outros hormnios, como o
hormnio tireoidiano T3 (Cap. 29) e as vitaminas lipossolveis D
e A (cido retinico) e seus derivados que regulam o crescimen
to e o desenvolvimento, atuam de maneira similar. Dados do seqenciamento do genoma e de protenas revelaram uma ntima
relao entre esses receptores, o que levou ao reconhecimento de
que eram membros de uma famlia muito maior de protenas cor
relatas. A famlia de receptores nucleares (nome pelo qual ficou
conhecida), assim como os receptores para glicocorticides e
para o cido retinico, que tinham seus ligantes bem caracteriza
dos, inclua tambm uma grande quantidade de receptores rfos
receptores que no possuem nenhum ligante bem definido
conhecido. O primeiro destes a ser descrito, na dcada de 1990,
foi o RXR, um receptor clonado com base na sua semelhana com

45

SECAO 1

3 PRINCPIOS GERAIS

GPCRs

AMPc

Receptores
ligados GC

DAG

Ca2*

PKC

CaM
quinases

GMPc

Autofosforilao

PKA

GRKs

Receptores liga
dos a quinases

PKG

CASCATA DAS QUINASES

PROTEINAS-ALVO

Enzimas

Receptores

Canais
inicos

Transportadores

Fatores de
transcrio

Protenas
contrteis

Mecanismos
de secreo

_______
___
__
RESPOSTAS

Respostas
fisiolgicas

Respostas
imunolgicas

Apoptose

Transformao
maligna

Crescimento

Diferenciao

Fig. 3.16 Papel central das cascatas de quinases na transduo de sinal. As cascatas de quinases (p. ex., aquelas mostradas na Fig.
3.15) so ativadas por GPCRs, seja diretamente ou por meio de diferentes segundos mensageiros, por receptores que geram GMPc, ou por receptores
acoplados a quinases. As cascatas das quinases regulam diversas protenas-alvo, que por sua vez produzem uma grande variedade de efeitos de curto e
longo prazos. CaM-quinase, quinase dependente de Ca27calmodulina; DAG, diacilglicerol; GC, guaniiato ciclase; GRK, GPCR quinase; IP3, inositol trisfofato;
PKA, protena quinase dependente deAMPc: PKC, protena quinase C; PKG, protena quinase dependente de GMPc.

__

o receptor de vitamina A, e que mais tarde se mostrou capaz de

ligar o derivado da vitamina A, o cido 9-m-retinico. Embora
no para todos, ao longo dos anos seguintes identificaram-se os
ligantes para muitos desses receptores. Contudo, alguns autores
continuam a usar a terminologia "receptor rfo" mesmo quan
do um ligante j tenha sido identificado ou "adotado" (como no

Fosforilao de protenas na
transduo de sinais

Muitos eventos mediados por receptores envolvem a

fosforilao de protenas, que controla as propriedades
funcionais e de ligao de protenas intracelulares.
As tirosinas quinases ligadas a receptores, as tirosinas
quinases ativadas por nucleotdeos cclicos e as serina/
treonina quinases intracelulares constituem um
mecanismode "cascata de quinases" que leva
amplificao dos eventos mediados por receptores.
Existem muitas quinases com diferentes especificidades
de substrato, proporcionando a especificidade observada
nas vias ativadas por diferentes hormnios.
A dessensibilizao de receptores ligados protena G
ocorre em resultado de fosforilao por quinases
especficas de receptores, causando a no-funcionalidade
e a internalizao do receptor.
Existe uma grande famlia defosfatases que atuam
revertendo os efeitos das quinases.

46

caso do receptor RXR). Hoje em dia j est claro que existem

pelo menos 48 membros da famlia dos receptores nucleares no
genoma humano, e embora isto represente de fato uma pequena
proporo do total (menos de 1 0% do nmero total de GPCR), os
receptores nucleares so alvos importantes para frmacos e tm
um papel vital na sinalizao endcrina, assim como na regula
o metablica.
Hoje em dia conveniente tratar a famlia inteira de recepto
res nucleares comofeitores de transcrio ativados por ligantes,
que transduzem os sinais atravs de modificaes da transcrio
gnica. Diferentemente dos receptores descritos nas sees
anteriores deste captulo, os receptores nucleares noesto inse
ridos em membranas, mas sim presentes na fase solvel da clu
la. Alguns, como os receptores para esterides, ganham mobili
dade na presena de seus ligantes e podem translocar-se do cito
plasma para o ncleo, enquanto outros, como o RXR, provavel
mente residemde preferncia dentro do compartimento nuclear.
Muitos receptores nucleares aluam como sensores de lipdeos e
esto intimamente envolvidos na regulao do metabolismo
lipdico dentro da clula. Dessa forma, constituem vnculos cru
ciais entre nossos status diettico e metablico, e a expresso de
genes que regulam o metabolismo e a disposio de lipdeos.
Farmacologicamente, toda esla famlia de receptores nucleares
muito importante; eles podem reconhecer um grupo extraordi
nariamente diversificado de substncias. Eles regulam muitas
enzimas do metabolismo de frmacos e transportadores, e so
responsveis pelos efeitos biolgicos de aproximadamente 10%
do total de frmacos prescritos. Existem tambm muitas doen
as associadas ao mau funcionamento do sistema de receptores
nucleares, entre elas inflamao, cncer, diabetes, doenas car-

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

_
. asculares, obesidade e distrbios na reproduo (Murphy &
H : ier. 2000; Kersten et ai, 2000).
*

:ONSIDERAES ESTRUTURAIS
De modo geral, os receptores nucleares compartilham caractersti:as estruturais similares, compreendendo quatro mdulos (Fig. 3.17 e
Sourguet et ai,2000, para maiores detalhes). O domnio N-terminal
:que apresenta maior heterogeneidade. Ele abriga o stio AF/ (funo
ie ativao 1) que se liga de maneira ligante-independente a outros
fatores detranscrio especficos da clula, e modifica aligao ou ati-

idadedo prprio receptor. O splicing alternativo dos genes pode dar

origem a diversas isoformas do receptor, cada uma com regies N-ter-iinais ligeiramente diferentes. O domnio central do receptor alta
mente conservado e consiste na estrutura responsvel pelo reconheci
mento e ligao ao DNA. No mbito molecular, ele contm duas alas
ricas em dedosde zinco, que so alas ricas em cistena (ou cistina/his::dina)em sua cadeia de aminocidos e que so mantidas em uma con
formao especfica por ons de zinco. A funo principal dessa por
to da molcula reconhecer e ligar-se aos elementos responsivos a

hormnios localizados nos genes, que so sensveis regulao

por esta famlia de receptores, mas ela tambm tem um papel na
regulao da dimerizao do receptor.

Uma regio de dobradia altamente flexvel na molcula permi

te sua dimerizao com outros receptores nucleares, e tambm a
capacidade de ligao ao DNA em inmeras configuraes. Por
ltimo, o domnio C-terminal contm o mdulo de ligao ao
ligante, e especfico para cada classe de receptor. Uma regio
AF2 altamente conservada importante para a ativao depen
dente de ligante. Tambm localizados prximo regio C-termi
nal esto sequncias que contm sinais de localizao nucleares
e outros que podem, no caso de alguns receptores, ligar-se a pro
tenas de choque trmico acessrias e outras.

CLASSIFICAO DOS RECEPTORES

NUCLEARES

A superfamlia dos receptores nucleares consiste em duas

principais classes junto com uma terceira que comparti-

A
Dedo de zinco mdulo 2

Dedo de zinco mdulo 1

Rp /

(%RX
AF2

AF1

N-terminal
Regio co-ativadora

deAF1

Domnio central de ligao ao

DNA com "dedos de zinco"

Regio de
dobradia

Domnio de ligao ao ligante

Regio co-ativadora de AF2
Ligao de HSP

Tipos de receptores nucleares

&

TR

GR

GR

I
CLASSE I

CLASSE HBRIDA

presentes no citoplasma
operam como homodmeros
ligantes principalmente

RXR RXR

PPAR RXR

RXR

'

CLASSE II

principalmente endcrinos
operam como heterodmeros

de RXR

Extenso
C-terminal

presentes no ncleo
operam como heterodmeros (exceto RXR)

ligantes principalmente lipdios

afinidade

baixa

endcrinos
alta afinidade
p.ex.,GR, MR, ER, PR

p. ex., TR, VDR

p. ex., PPAR, LXR, FXR, RXR

Fi g. 3. 17 Receptores nucleares. E Estrutura de um receptor nuclear, mostrando seus diferentes domnios. A estrutura parcial dos "dedos de
r - x' mostrada acima usando o cdigo de letras nicas dos aminocidos. Os resduos em amarelo entram em contato com o DNA. Hl As duas classes
:- - :oais de receptores nucleares.
Er -eceptordeestrgenos; FXR, receptor farneside; GR, receptor de glicocorticides; LXR, receptor de oxiesterol heptico; MR, receptor de mineralocorticides;
:--.= -eceptorativadorde proliferao de peroxissomos; PR, receptor de prolactina; RXR, receptor retinide; TR, receptor tireoidiano; VDR, receptor de vitamina D.

SEO 1

9 PRINCPIOS GERAIS

lha de algumas caractersticas de ambas (Fig. 3.17 e Novac &

Henzel, 2004, para maiores detalhes). A Classe Iconsiste, em sua
maior parte, em receptores para os hormnios esterides,
incluindo os receptores para glicocorticides e mineralocorticides (GR e MR, respectivamente), bem como os receptores para
estrgeno, progesterona e andrgeno (ER, PR e AR, respectiva
mente). Na ausncia de seus ligantes, estes receptores ficam pre
dominantemente localizados no citoplasma, em complexos com
a protena de choque trmico e outras protenas e possivelmente
ligados de forma reversvel ao citoesqueleto ou outras estruturas.
Aps a difuso (ou possivelmente transporte) de seus ligantes
para dentro da clula e sua ligao com alta afinidade, estes
receptores geralmente formam homodmeros e so translocados
para o ncleo, onde podem transativar ou transreprimir genes
atravs de ligao com elementos responsivos a hormnios
"positivos" ou "negativos" (Cap. 28). Um grande nmero de
genes pode ser regulado, dessa maneira, por um nico ligante. Por
exemplo, estima-se que o GR ativado, por si s, possa regular at
1% do genoma, seja direta ou indiretamente. Receptores de
Classe Igeralmente reconhecem hormnios que agem em modo
dq feedback negativo, assim controlando eventos biolgicos
(Cap. 28 para mais discusses sobre este assunto).
Os receptores nucleares de Classe II funcionam de uma
maneira um pouco diferente. Seus ligantes so geralmente lip
deos j presentes em certa quantidade dentro da clula. Este
grupo inclui o receptor ativador de proliferao do peroxissomo
(.PPAR) que reconhece cidos graxos; o receptor de oxiesterol
heptico (LXR) que reconhece e atua como um sensor de coleste
rol, o receptor defarneside (cido biliar) (FXR), um receptor
xenobitico (SXR; em roedores, o PXR) que reconhece muitas
substncias estranhas ao organismo, incluindo frmacos tera
puticos, e o receptor de androstano constitutivo (CAR), que no
s reconhece o esteride androstano, mas tambm alguns frma
cos como o fenobarbital (Cap. 40). Estes ltimos receptores so
comparveis a guardas de segurana de um aeroporto, que aler
tam o esquadro antibombas quando bagagens suspeitas so
encontradas. Eles induzem enzimas que metabolizam drogas
como o CYP3A (que responsvel por metabolizar cerca de 60%
de todos os frmacos de prescrio; Cap. 8 e Synold et al., 2001)
e tambm se ligam a algumas prostaglandinas e frmacos no
esterides, bem como as tiazolidinadionas hipoglicemiantes
(Cap. 26) e os fbratos (Cap. 20). Diferentemente dos receptores
da classe I, esses receptores quase sempre operam como heterodmeros juntamente com o receptor retinide (RXR). Eles ten
dem a mediar efeitos defeedback positivos (p. ex., a ocupao do
receptor amplifica, emvez de inibir um evento biolgico em par
ticular). Quando receptores monomricos de classe IIse ligam ao
RXR, dois tipos de heterodmeros podem ser formados: um heterodmero no-permissivo, que pode ser ativado apenas pelo
ligante RXR, e o heterodmero permissivo, que pode ser ativado
tanto pelo cido retinico quanto por seu ligante parceiro.
Um terceiro grupo de receptores nucleares , na verdade, um
subgrupo da classe II,j que formam heterodmeros obrigatoria
mente com RXR; mas, em vez de detectarem lipdeos, eles tam
bm possuem um papel na sinalizao endcrina. O grupo inclui
o receptor do hormnio da tireide (TR ), o receptor da vitamina
D (VDR) e o receptor do cido retinico (RAR).

CONTROLE DA TRANSCRIO GNICA

48

T Os elementos da resposta hormonal so sequncias curtas (quatro

ou cinco pares de bases) do DNA s quais os receptores nucleares se
ligam a fim de modificar a transcrio gnica. Eles esto geralmente
presentes simetricamente em pares de meios stios, embora possam

ser arranjados em conjuntos de diferentes formas (p. ex., repeties

simples ou repeties invertidas). Cada receptor nuclear exibe uma
preferncia por uma sequncia consenso particular, mas por causa da
homologia da famlia, existe uma grande similaridade entre essas
sequncias.
No ncleo, o receptor ligado a um ligante recruta mais protenas,
incluindo co-ativadores ou co-repressores a fim de modificar a
expresso gnica atravs de seus domnios AF1 e AF2. Alguns desses
co-ativadores so enzimas envolvidas na remodelao da cromatina,
tais como a histona acetilase que, juntamente com outras enzimas,
regula o desdobramento do DNA para facilitar o acesso de enzimas
polimerases e, por esse meio, a transcrio do gene. Complexos de
co-repressores so recrutados por alguns receptores e envolvem a
histona desacetilase e outros fatores que fazem com que a cromatina
fique firmemente compactada em sua conformao, evitando ativao adicionalda transcrio. Na ausncia do ligante, alguns recepto
res de classe II, tais como TR e VDR, ficam construtivamente liga
dos aesses complexos repressores no ncleo, "silenciando", assim, o
gene. O complexo se dissocia quando o ligantese une, permitindo que
um complexo ativador se ligue. O caso do CAR particularmente
interessante; assim como alguns tipos de protenas G descritas ante
riormente neste captulo, o CAR tambm forma um complexo constitutivamente ativo, que desfeito quando se liga ao seu ligante.

A discusso aqui deve ser tomada apenas como um guia geral da

ao desta famlia de receptores nucleares, j que muitos outros
tipos de interao tambm foram descobertos. Por exemplo,
alguns membros podem exercer aes no-genmicas pela inte
rao direta com fatores no citosol, ou podem ser covalentemente modificados por fosforilao ou interaes protena-protena
com outros fatores de transcrio e ter assim sua funo alterada
(Falkenstein et al., 2000). Alm disso, existem boas evidncias
da existncia de receptores de membrana distintos e outros tipos
de receptores que podem ligar-se a alguns hormnios esterides,
como os estrgenos (Walters & Nemere, 2004). Esta complexa
redede receptores e suas interaes nucleares e citoslicas opera
como um delicado mecanismo regulador dos lipdeos sangu
neos, bem como transdutor dos efeitos de hormnios que vm de
tecidos distantes. Muitoainda resta a ser esclarecido acerca desta
interessante e complexa famlia de protenas receptoras.

CANAIS IONICOS COMO ALVOS DE

FRMACOS
Nsj discutimos canais inicos regulados por ligantes como um
dos quatro principais tipos de receptores de frmacos. Existem
muitos outros tipos de canais inicos que representam importan
tes alvos de frmacos, embora eles no sejam sempre classifica
dos como "receptores" por no serem alvos imediatos de neuro-

transmissores rpidos.12
A seguir, analisaremos a estrutura e a funo de canais ini
cos em nvel molecular; seu papel como reguladores da funo
celular descrito no Captulo 4.
Os ons so incapazes de penetrar na bicamada lipdica da
membrana celular, e s podem atravess-la com a ajuda de pro-

l2Na verdade, a distino entre canais controlados por ligante e outros

canais inicos arbitrria. Ao agruparmos canais controlados por
ligantes com outros tipos de receptor neste livro, estamos respeitando a
tradio histrica estabelecida por Langley e outros, que foram os
primeiros a definir receptores no contexto da ao da acetilcolina na
juno neuromuscular. No futuro, o avano da biologia molecular pode
forar-nos a reconsiderar esta questo semntica, mas por ora no h
por que no mantermos a tradio farmacolgica.

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

Receptores nucleares

Uma famlia de 48 receptores solveis que podem

detectar lipdeos e sinais hormonais, e modular a
transcrio gnica.
Duas categorias principais:
Aqueles que esto presentes no citoplasma formam
homodmeros na presena de seu ligante e migram at
o ncleo. Seus ligantes so principalmente de natureza
endcrina (p. ex., hormnios esterides).
Aqueles que esto em geral constitutivamente presentes
no ncleo e formam heterodmeros com o receptor
retinide X. Seus ligantes so geralmente lipdeos
(p. ex., os cidos graxos).
Um terceiro subgrupo transduz principalmente sinais
endcrinos, mas funcionam como heterodmeros com
o receptor retinide X (p. ex., o hormnio da tireide).
Os complexos receptores-ligantes iniciam mudanas na
transcrio gnica ao se ligarem a elementos da resposta
hormonal em promotores de genes e recrutarem fatores de
co-ativao ou co-represso.
Afamlia de receptores responsvel pela farmacologia de
aproximadamente 10% de todos os frmacos de prescrio
e pela farmacocintica de aproximadamente 60% deles.

tenas transmembrana na forma de canais ou transportadores. O

conceito de canais inicos foi desenvolvido h mais de 50 anos,
com base em estudos eletrofisiolgicos sobre o mecanismo de
excitao da membrana (ver adiante). A eletrofisiologia, particu.armente a tcnica de clampeamento de voltagem ( voltage
damp) (Cap. 4) ainda uma ferramenta essencial para o estudo
ias propriedades fisiolgicas e farmacolgicas de canais inicos.
Desde meados de 1980, quando os primeiros canais inicos
:":ram clonados por Numa, no Japo, uma colaborao altamen:e produtiva entre eletrofisiologistas e biologistas moleculares
revelou muitos detalhes sobre a estrutura e o funcionamento des-as complexas molculas. A utilizao de registro "em placa selaaa" {patch clamp), que permite o estudo do comportamento de
canais individuais em tempo real, vem sendo particularmente
aliosa na distino de canais com base em sua condutncia e
caractersticas de controle. Relatos de Hille (2001), Ashcroft
2000) e Catterall (2000) do maiores informaes.
Canais inicos consistem em molculas proticas organiza
das para formar poros contendo gua que atravessam a membra
na e podem mudar seu estado entre aberto e fechado. A taxa de
ransferncia e a direo do movimento de ons atravs do poro
-o determinadas pelo gradiente eletroqumico para o on em
cuesto, o que funo de sua concentrao nos dois lados da
embrana, e do potencial da membrana. Canais inicos so
:aracterizados por:

K+, ou no seletivos e permeveis a todos os trs. Os canais de

nions so principalmente permeveis a Cl-, embora existam
tambm outros tipos. O efeito da modulao dos canais inicos
sobre a funo celular discutido no Captulo 4.

MECANISMO DE COMPORTA
Canais controlados por voltagem
Estes canais se abrem quando a membrana celular despolari
zada. Eles formam um grupo muito importante, visto que cons
tituem a base do mecanismo de excitabilidade da membrana
(Cap. 4). Os canais mais importantes neste grupo so canais
seletivos para sdio, potssio ou clcio.
Via de regra, a abertura (ativao) do canal, induzida pela
despolarizao da membrana, de curta durao, mesmo quan
do a despolarizao mantida. Isto se deve ao fato de que, em
alguns canais, a ativao inicial seguida de um processo mais
lento de inativao.
O papel dos canais controlados por voltagem na gerao de
potenciais de ao e no controle de outras funes celulares
descrito no Captulo 4.
v

Canais controlados por ligantes

Estes (ver anteriormente) so ativados pela ligao de um ligan
te qumico a um stio na molcula do canal. Neurotransmissores
rpidos, tais como glutamato, acetilcolina, GABA e ATP (Caps.
10, 12 e 33), agem dessa maneira, ligando-se a stios no exterior
da membrana. O receptor vanilide TRPV 1 medeia o efeito de
produo de dor da capsaicina em nervos sensitivos (Cap. 41 ).
Alguns canais controlados por ligantes na membrana plasm
tica respondem a sinais intracelulares e no a sinais extracelulares; os mais importantes so os seguintes:
Canais de potssio ativados por clcio, que ocorrem na maio
ria das clulas, e se abrem, hiperpolarizando desse modo a
clula, quando o [Ca2+]j aumenta.
Canais de potssio sensveis a ATP, que se abrem quando a
concentrao intracelular de ATP cai por falta de nutrientes na
clula. Estes canais, que so bastante distintos daqueles que
medeiam os efeitos excitatrios do ATP extracelular, ocorrem
em muitas clulas musculares e nervosas, e tambm em clu
las secretoras de insulina (Cap. 26), onde so parte do meca
nismo que vincula a secreo de insulina concentrao san
gunea de glicose.

Outros exemplos de canais que respondem a ligantes intracelula

res incluem os canais de potssio sensveis ao cido araquidnico e canais de clcio sensveis ao DAG, cujas funes ainda no
esto bem esclarecidas.

Canais de liberao de clcio

sua seletividade por espcies particulares de ons, determina

da pelo tamanho do poro e a natureza de seu revestimento
as propriedades de controle (i. ., a natureza do estmulo que
controla a transio entre os estados aberto e fechado do
canal)
sua arquitetura molecular

SELETIVIDADE
- canais geralmente so seletivos para ctions ou nions.
ctions-seletivos podem ser seletivos para Na+, Ca2+ ou

7_-.ais

Esto presentes no retculo endoplasmtico ou sarcoplasmtico,

e no na membrana plasmtica. Os principais, receptores de IP3
e de rianodina (Cap. 4), so uma classe especial de canais de cl
cio controlados por ligantes que controlam a liberao de Ca:+ de

reservas intracelulares.

Canais de clcio operados pelas reservas de

Ca2+
Quando as reservas intracelulares de Ca2+ esto esgotadas, canais
na membrana plasmtica abrem-se para permitir sua entrada. O
mecanismo atravs do qual esta operao feita no est bem

SEO 1

5 PRINCPIOS GERAIS

elucidado (Barrit, 1999), mas os canais de clcio operados pelas

reservas (store-operated calcium channels, SOCs) so importan
tes no mecanismo de ao de muitos GPCRs que provocam a
liberao de Ca2+. A abertura de SOCs permite que a lCa2"]i per
manea elevada mesmo quando as reservas esto se esgotando, e
tambm propicia uma via atravs da qual as reservas podem ser
repostas (Cap. 4).

ARQUITETURA MOLECULAR
Canais inicos so molculas grandes e elaboradas. Seus padres
estruturais caractersticos foram revelados medida que foi se acu
mulandoconhecimento a respeito de sua sequncia e estrutura, desde
meados da dcada de 1980, quando o primeiro canal controlado por
ligante (o receptor nicotnico de acetilcolina) e o primeiro canal de
sdio controlado por voltagem foram clonados. Os principais subti
pos estruturais so mostrados na Figura 3.18. Todos consistem em
vrios domnios (geralmente quatro), que so similares ou idnticos

TPICOS

uns aos outros, organizados tanto em uma disposio oligomrica de

subunidades separadas quanto como uma grande protena. Cada
subunidade ou domnio contm um feixe de duas a seis hlices transmembrana. A maioriados canais operados por ligantes tem sua estru
tura bsica mostrada na Figura 3. 1 8A, que consiste em um arranjo
pentamrico de subunidades no-idnticas, cada uma formada por
quatro hlices transmembrana, das quais uma o segmento M2
de cada subunidade, reveste o poro. A grande regio N-terminal

extracelular contm a regio de ligao do ligante.Algumas excees

a este plano estrutural simples para canais operados por ligantes sur
giram recentemente. Elas incluem (Fig. 3. 18) o receptor NMDA de
glutamato (Cap. 33), o receptor P2x de purina (Cap. 12) e o recep
tor vanilide (um canal que responde no s a produtos qumicos da
classe dos vanilides, mas tambm a calor e protons; Cap. 41).
Nestes, como em muitos outros tipos de canal, a parte da molcula
que forma o poro consiste em uma ala em grampo a ala do poro
(P) entre duas das hlices.
Os canais controlados por voltagem geralmente incluem uma hlice
transmembrana que contmaminocidos bsicos (/. e., positivamen

TIPO NMDA

te
CANAIS
CONTROLADOS
POR LIGANTES
(4-5 subunidades)

Exemplos: nAChR, GABAa

Exemplo: NMDA

5-HT3, IP3R, RyR

6T1P

2T1P

4T2P

Exemplos: Canais de K* con

trolados por voltagem,
canais TRP

Exemplos: Canais de K+ retifi"

cadores de entrada, P2XR,
ASIC, ENac, degenerinas

Exemplo: Canais de K
em repouso

CANAIS DE
POTSSIO
(4 subunidades)

CANAIS DE SODIO
E CLCIO
CONTROLADOS
POR VOLTAGEM

Fig. 3.18 Arquitetura molecular dos canais inicos. Os retngulos vermelhos e azuis representam as a hlices que atravessam a membrana.
Os grampos azuis so domnios em ala do poro (P), presentes em muitos canais, sendo os retngulos azuis as regies formadoras dos poros das a hlices
que atravessam a membrana. Os retngulos listrados representam as regies sensoras de voltagem dos canais controlados por voltagem. 0 smbolo verde
representa a partcula inativadora dos canais de sdio controlados por voltagem. A nomenclatura do canal de potssio est baseada no nmero de hlices
transmembrana (T) e das alas formadoras de poro (P) em cada subunidade. Maiores informaes sobre canais inicos so dadas no Captulo 4.
5-HT3, receptor da 5-hidroxitriptamina do tipo 3; ASIC, canal inico sensor de cidos; ENaC, canal de sdio epitelial; GABAa, receptor GABA do tipo A; IP3R,
receptor do inositol trisfofato; nAChR, receptor nicotnico da acetilcolina; P2XR, receptor de purina P2X; RyR, receptor da rianodina.

COMO AGEM OS FRMACOS: AGENTES MOLECULARES

te carregados) em abundncia. Quando a membrana despolarizada,
de forma que o interior da clula se torna menos negativo, esta regio
o sensor de voltagem move-se levemente em direo superf
cie externa da membrana, o que tem o efeito de abrir o canal. Muitos
canais controlados por voltagem tambm mostram inativao, o que
acontece quando um apndice intracelular da protena de canal se
move para obliterar o canal pelo ladode dentro. Os canais de sdio e
clcio controlados por voltagem so notveis na medida em que toda
sua estrutura com quatro domnios de seis hlices consiste em uma
nica e enorme protena, estando os domnios unidos por alas intra
celulares de tamanhos variveis. Os canais de potssio compreendem
a classe mais numerosa e heterognea.'3 Os canais de potssio con
trolados por voltagem lembram os canais de sdio, exceto por serem
constitudos de quatro subunidades em vez de uma nica cadeia
longa.Aclasse dos canais de potssio, conhecidos como "canais retificadores de entrada", graas s suas propriedades biofsicas, possui
a estrutura de duas hlices mostrada na Figura 3.18C, enquanto
outros so classificados como canais com "domnio de dois poros",
pois cada subunidade contm duas alas P.

ALTERAO DO
MECANISMO DE
COMPORTA

jfugantes deGPCFy

BLOQUEIO
DO CANAL

Tetrodotoxina
Saxitoxina
Conotoxinas

BLOQUEIO DA

INATIVAO
Veratridina
Batracotoxina
Toxinas de escorpio
DDT, piretrides
Segundos

mensageiros

BLOQUEIO DO

Os vrios padres arquitetnicos mostrados naFigura3. 18 so apenas

alguns da enorme diversidade moleculardos canais inicos. Em todos
os casos, as subunidades individuais se apresentam em diversas varie
dades moleculares, e estas podem unir-se em diferentes combinaes
para formar canais funcionais na forma de hetero-oligmeros (distin
tos de homo-oligmeros, constitudos de subunidades idnticas).
Alm disso, as estruturas descritas que formam o canal esto habitual
mente associadas a outras protenas de membrana, o que afeta signifi
cativamente suas propriedades funcionais. Por exemplo, o canal de
potssio controlado por ATP associa-se ao receptor de sulfonilurias
(SUR ), e atravs desta ligao que vrios frmacos (incluindo agen
tes antidiabticos da classe das sulfonilurias. Cap. 26) regulam o
canal (Ashcroft & Gribble, 2000). Um bom progresso tem sido alcan
ado na compreenso da relao entre a estrutura molecular e o fun
cionamento do canal inico, porm ainda temos apenas uma com
preenso fragmentada do papel fisiolgico de muitos desses canais.
Muitos frmacos importantes exercem seus efeitos influenciando o
funcionamento do canal, seja direta ou indiretamente.

FARMACOLOGIA DOS CANAIS IONICOS

Muitos frmacos e mediadores fisiolgicos descritos neste livro
exercem seus efeitos atravs da alterao do comportamento de
canais inicos. Delineamos aqui os mecanismos gerais, como foi
exemplificado pela farmacologia dos canais controlados por volta
gem (Fig. 3. 19). provvel que a farmacologia dos canais inicos
seja uma fonte frtil de futuras novas drogas (Clare et ai., 2000).
A regulao e a permeao dos canais inicos controlados por
voltagem e controlados por ligantes so moduladas por muitos fatores, incluindo os seguintes:

Ligantes que se ligam diretamente a vrios stios na protena do

canal. Estes incluem muitos neurotransmissores e tambm vrios
outros frmacos e toxinas que agem de diferentes maneiras, por
exemplo atravs de bloqueio do canal ou afetando o mecanismo de
comporta, facilitando ou inibindo a abertura do canal.
Mediadores efrmacos que agem demodo indireto,principalmen
te por ativao de GPCRs. Esta ltima produz seus efeitos princi
palmente afetando o estado de fosforilao de aminocidos indivi
duais localizados na regio intracelular da protenado canal. Como
foi descrito anteriormente, esta modulao envolve a produo de

segundos mensageiros que ativam as protenas quinases. A abertu

ra do canal pode ser facilitada ou inibida, dependendo de quais
resduos so fosforilados. dessa maneira que frmacos como os
opiides (Cap. 41) e agonistas do -adrenoceptor (Cap. 1 1 ) afetam

"O genoma humano codifica mais de 70 subtipos diferentes de canais

ie potssio o que significa ou um pesadelo ou uma oportunidade de
?uro para o farmacologista, dependendo da perspectiva de cada um.

CANAL

Fosforilao

Anestsicos locais
Frmacos antiepilpticos
(p. ex., fenitona)

Frmacos antiarrtmicos
(p. ex., disopiramida)

Fig. 3.19 Domnios de ligao de frmacos dos canais

de sdio controlados por voltagem (Cap. 44).
A multiplicidade, os diferentes stios de ligao e os efeitos parecem ser
tpicos para muitos canais inicos. DDT, diclorodifeniltricloroetano
(dicofano, um inseticida bem conhecido); GPCR, receptor acoplado
protena G; PKA, protena quinase A; PKC, protena quinase C.

o funcionamento dos canais de clcio e potssio, produzindo uma

ampla gama de efeitos celulares.
Sinais intracelulares, particularmente Ca2* e nucleotdeos como
ATPeGTP {Cap. 4). Muitos canais inicos possuem stios de liga
o para estes mediadores intracelulares. A [Ca2+]i aumentadaabre
certos tipos de canais de potssio e inativa os canais de clcio con
trolados por voltagem. Como foi descrito no Captulo 4, a [Ca2+Jj
ela prpria afetada pela funo dos canais inicos e dos GPCRs.
Frmacos daclasse da sulfoniluria (Cap. 26) agem seletivamente
nos canais de potssio controlados por ATP.

A Figura 3. 1 9 resume os principais stios e mecanismos atravs dos

quais os frmacos afetam os canais de sdio controlados por volta
gem, um exemplo tpico deste tipo de alvo de frmacos.

CONTROLE DA EXPRESSO DE
RECEPTORES
As protenas receptoras so sintetizadas pelas clulas que as
expressam, e o nvel de expresso em si controlado pelas vias
descritas anteriormente, por eventos mediados por receptores.
No podemos mais pensar em receptores como os elementos
fixos dos sistemas de controle celular, respondendo a mudanas
na concentrao de ligantes e iniciando alteraes nos compo
nentes da via de transduo do sinal cies prprios esto sujei
tos regulao. A regulao a curto prazo da funo do receptor
geralmente ocorre atravs de dessensibilizao, como discutido
anteriormente. A regulao a longo prazo ocorre atravs de
aumento ou diminuio da expresso do receptor. Exemplos
deste tipo de controle (ver reviso por Donaldson et a!., 1997)

51

SEO 1

55 PRINCPIOS GERAIS

incluem a proliferao de vrios receptores ps-sinpticos aps

desnervao (Cap. 9), a regulao positiva ( up-regulation) de
vrios receptores acoplados protena G e receptores de citocinas em resposta inflamao (Cap. 13) e a induo de receptores
de fatores de crescimento por certos vrus tumorais (Cap. 5). O
tratamento com frmacos a longo prazo invariavelmente induz
respostas adaptativas que, particularmente com drogas que agem
no sistema nervoso central, frequentemente constituem a base
para a eficcia teraputica. Podem manifestar-se por um incio
muito lento do efeito teraputico (p. ex., com frmacos antidepressivos; Cap. 39), ou pelo desenvolvimento de dependncia
droga (Cap. 43). Embora os detalhes ainda no estejam claros,
mais provvel que estej am envolvidas mudanas na expresso do
receptor, secundariamente ao imediata da droga um tipo
de "farmacologia secundria", cuja importncia s recentemen
te est se tornando mais clara. Os mesmos princpios se aplicam
a outros alvos de drogas alm dos receptores (canais inicos,
enzimas, transportadores etc.), onde mudanas adaptativas na
expresso e funcionamento seguem a administrao a longo
prazo de um frmaco, resultando, por exemplo, na resistncia a
certas drogas antineoplsicas (Cap. 51).

RECEPTORES E DOENAS
Acrescente compreenso da funo dos receptores em termos mole
culares revelou vrias doenas diretamente ligadas ao mau funcio
namento do receptor. Os principais mecanismos envolvidos so:

auto-anticorpos direcionados contra protenas receptoras

mutaes em genes que codificam receptores e protenas
envolvidas na transduo do sinal.

Um exemplo do primeiro mecanismo a miastenia gravis (Cap.

10), uma doena da juno neuromuscular devida a auto-anti
corpos que inativam receptores nicotnicos da acetilcolina.
Auto-anticorpos tambm podem mimetizar o efeito de agonistas, como em muitos casos de hipersecreo da tireide, causa
da pela ativao de receptores de tirotropina. Anticorpos ativadores tambm foram descobertos em pacientes com hipertenso
grave (a-adrenoceptores), cardiomiopatia (|3-adrenoceptores) e
certas formas de epilepsia e distrbio neurodegenerativo (recep
tores de glutamato).
Mutaes herdadas de genes que codificam GPCRs respon
dem por vrios estados patolgicos (Spiegel & Weinstein,
2004). Receptores mutados dos hormnios vasopressina e adrenocorticotrfico (Caps. 24 e 28) podem resultar em resistncia a
esses hormnios. Mutaes em receptores podem acarretar ati
vao dos mecanismos efetores na ausncia do agonista. Um
deles envolve o receptor para tirotropina, produzindo secreo
contnua de hormnio da tireide; outro envolve o receptor para
o hormnio luteinizante, provocando puberdade precoce.
Polimorfismos do adrenoceptor so comuns em seres humanos,
e estudos recentes sugerem que certas mutaes do (-adreno
ceptor, embora no sejam causadores de doena diretamente,
esto associados reduo da eficcia dos agonistas do p-lrenoceptor no tratamento da asma (Cap. 23) e a um mau progns
tico em pacientes com insuficincia cardaca (Cap. 18). Mu
taes em protenas G tambm podem causar doenas (Farfel et
ai, 1999; Spiegel & Weinstein, 2004). Por exemplo, mutaes
dc uma subunidade Ga particular causa uma forma de hipoparatireoidismo, enquanto mutaes de uma subunidade G(3 provo
cam hipertenso.
Muitos cnceres esto associados a mutaes dos genes que
codificam receptores de fatores de crescimento, quinases e outras
protenas envolvidas na transduo de sinal (Cap.5).

REFERENCIAS E LEITURA ADICIONAL

Referncias gerais
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(Reviso geral excelente)
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(Aprimoramento do trabalho de 1993, que
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53