PRACTICA N 3

TCNICAS DE CONCENTRACIN
I.
COMPETENCIAS
El alumno realiza correctamente un mtodo de concentracin
sedimentacin y conoce los principios generales de estos mtodos.

por

II.
ASPECTOS DE BIOSEGURIDAD
Todos los alumnos debern los equipos de proteccin personal (guantes,
barbijo, mandil)
III.
GENERALIDALES
Los mtodos de concentracin tienen como finalidad, el aumentar el nmero
de parsitos en el volumen de materia fecal que se examina, mediante
procedimientos de sedimentacin o flotacin. Estos mtodos deben realizarse
de rutina en el examen coproparasitolgico En el material concentrado se
encuentran ms parsitos que en el resto de la materia fecal. Todos los
trofozoitos son destruidos por ambos procedimientos, excepto cuando estn
conservadas en MIF (Mertiolate, Iodo, Formol).
A continuacin, se
describirn brevemente los mtodos ms tiles:
a) Tcnica de Ritchie o de centrifugacin con formol ter*. - Procedimiento
ms usado para concentrar quistes de protozoos, huevos y larvas de helmintos
ya que todas sedimentan, estn en buenas condiciones de preservacin y son
ms abundantes El mtodo es el siguiente:
Si la materia fecal es dura, agregue solucin isotnica y mezcle
hasta que quede lquida, en cantidad aproximada de 10 ml.
Pase por una gasa doble y hmeda, aproximadamente 10 ml de
la materia fecal lquida, a un tubo cnico de centrfuga de 15 ml y
centrifugue a 1500 2000 rpm por 2 minutos.
Decante el sobrenadante (siempre sobre un desinfectante que puede
ser formol concentrado o leja).
Diluya el sedimento en solucin salina, centrifugue como antes y
decante. Realizar la misma operacin hasta que el sobrenadante
est lmpido.
Agregue al sedimento aproximadamente 10ml de formol al 10%, mezcle
bien y deje reposar por 5 min. En este paso se mata y preserva a los
protozoarios, larvas y la mayora de los huevos de helmintos.
Agregue 3 ml de ter, tape el tubo y mezcle fuertemente durante
30 segundos. Destape cuidadosamente ya que al salir el vapor de ter
puede salpicar restos fecales. Este paso extrae las grasas de las
heces y reduce el volumen.
Centrifugue a 1500 rpm por 2 min.

Se forman 4 capas distribuidas

as: un sedimento pequeo que contiene los huevos, quistes, etc.; una
capa de formol salino; un anillo con restos de materias fecales y el
ter en la superficie.
Con un palillo afloje de las paredes del tubo el anillo con restos
de materias fecales y cuidadosamente decante (en desinfectante,
puede ser formol o lavandina) las tres capas superiores.
Mezcle el sedimento con la pequea cantidad de lquido que baja por
las paredes del tubo y haga preparaciones en fresco y con lugol, para
ver al microscopio.
*DEBIDO A SU TOXICIDAD ESTAS TECNICAS NO SE REALIZARN EN
CLASES
Mtodos de Concentracin por flotacin
a) Tcnica de Faust o de flotacin con ZnSO4.Este es un mtodo en el cual la materia fecal se diluye en un lquido de alta
densidad y los parsitos, que proporcionalmente son ms livianos, van a la
superficie. Para esta tcnica se utiliza sulfato de zinc al 33 %, con
densidad
1.18 o 1.20 (esta ltima es preferible cuando se examinan muestras fecales
tratadas con formol. Es importante notar que con este mtodo no se obtienen
con facilidad los huevos operculados ni los infrtiles de Ascaris. Adems, la
alta densidad causa distorsin de otros huevos frgiles como los de
Hymenolepys nana. Por estas razones, es recomendable si se utiliza un solo
procedimiento de concentracin, ste sea la tcnica de sedimentacin con
formol ter.
La tcnica utilizada es la siguiente:
Una cantidad de aproximadamente 1 gr de materia fecal se diluye en 10 ml de
agua y se filtra por gasa doble o cudruple. Se centrfuga a 2500 rpm durante
un minuto.
Se descarta el lquido sobrenadante. Si la muestra es muy grasosa se repite
el centrifugado cambiando de agua y mezclando nuevamente.
Se mezcla el sedimento con una pequea cantidad de sulfato de zinc
(densidad 1.18) unos 3 a 4ml y se centrifuga a 2500 rpm durante un minuto,
sin frenar la centrfuga.
Se coloca el tubo cuidadosamente en una gradilla y se recoge el

sobrenadante con un asa de platino o una pipeta y se lleva al portaobjetos.

Tambin puede elevarse el nivel del lquido hasta formar un menisco,
aadiendo sulfato de zinc por las paredes del tubo, para no alterar la pelcula
superficial. En este caso se coloca un cubre-objetos sobre el menisco y se
deja en esta posicin durante 10 minutos, de modo que en su cara inferior
quede adherida la gota que contiene huevos, larvas y quistes.
Las preparaciones se montan en lugol y solucin salina y se llevan al
microscopio para buscar parsitos. Como los huevos y quistes de parsitos
que flotan a la superficie de la solucin vuelven a descender al cabo de una
hora, se deben hacer las preparaciones en poeta-objetos, tan pronto como
termine la concentracin. El contacto prolongado con el sulfato de zinc, puede
deformar los quistes y dificultar su identificacin, por lo tanto, estas
preparaciones deben ser examinadas lo antes posible. Esta tcnica es mejor
para quistes de protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El xito
depende de la exactitud en la densidad del sulfato de zinc. Cuando la materia
fecal est fijada en formol al 5 10%, debe usarse el sulfato de zinc con
densidad de 1,20
Nota. - Tener cuidado de no rebalsar la cubeta porque en este caso se
pierden muchos huevos, en estas circunstancias es necesario repetir la
operacin.
IV.
MATERIALES
- Porta objetos
- Tubos cnicos
- Pipetas plsticas
Reactivos
-

Solucin fisiolgica
Solucin de lugol

Equipos
-

Microscopios
Centrfuga

V.
PROCEDIMIENTO
1. Registrar los datos del paciente y las caractersticas macroscpicas
de la muestra fecal
2. Realizar una de las tcnicas de concentracin antes nombradas
3. Realizar el montaje del material obtenido y observar al microscopio
4. Reporte los resultados
5. Dibuje lo observado y realizado.